一.解释概念(20分,每个4分)
卫星DNA 复制体逆转座子反式激活因子衰减子与衰减作用
三、问答题(50分)
1. 说出双链DNA复制起始有关的五种重要的酶或蛋白并简述它们的功能。(15分)
2. 简述增强子的特点和性质及作用机制。(10分)
3. 简述真核RNA聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始(15分)
4. DNA限制性内切酶EcoRI是人们熟悉的常用内切酶,它是在大肠杆菌
(E.coli)R株中发现的,它被广泛用于分子克隆操作和DNA分析。pUC质粒是常用克隆载体之一,它的多克隆位点上有EcoRI、BamHI、KpnI、HindIII等酶切点。假如要你把一段由EcoRI切割产生的外源DN**段克隆到pUC质粒中,并把重组质粒转化大肠杆菌R株来扩增,已知条件是所用的R菌株中只有EcoRI一种限制性内切酶,你设计如何做才能确保成功?为什么?(10分)
武汉大学2002分子生物学
三.问答:
1.简述(或绘图说明)真核细胞RNA聚合酶II转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程(15分)
2.简述(或绘图说明)色氨酸操纵子弱化的机制(15分)
3.在讨论基因家庭时经常提到胚胎、胎儿和成体形成的蛋白质,这些述语是指什么现象?可用什么术语来描述这一类基因家族(5分)
4. 你正在进行Southern blot分析,并刚刚完成凝胶电泳部分,下一步是将胶浸泡在NaOH溶液中使DNA变性为单链,为了节约时间,你跳过这一步,直接把DNA 从胶上转到硝酸纤维素膜上,你将标记好的探针与膜杂交,却发现放射自显影结果是一片空白,哪里错了呢?(5分)
一、下列名词翻译成中文，并简要解释
1、Domains and motifs
2、Alternative splicing
3、Reporter genes
4、The PCR cycle
5、Restriction mapping
6、Multiple cloning sites
7、DNA libraries
8、Proteomics
9、Replicon
10、Semi-conservative replication
二、简答题(共5题,每题8分,共40分)
1、请列举三种以上蛋白质纯化技术,并说明不同纯化技术的简单原理。
2、简述DNA损伤与DNA突变之间的区别与相互关系。
3、简述密码的简并性(degeneracy)和同义密码子(synonymous codon)及其在生物学上的重要性。
4、简述原核生物转录起始与转录终止过程中所涉及的主要蛋白质和核酸结构及其具体作用。
5、简述cDNA文库的构建过程。
三、论述题(共5题,1-4题每题15分,第5题10分,共70分)
1、人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？
2、什么是操纵子(operon)？试说明色氨酸操纵子(Trp operon)在原核基因表达调控中的调控机制和重要作用。
3、请简要解释顺式作用元件与反式作用因子,并举二例加以说明它们的相互作用方式。
4、试说明真核细胞与原核细胞在基因转录、翻译及DNA的空间结构方面存在的主要差异,表现在哪些方面？
5、限制性核酸内切酶有哪几种类型？哪一种类型的限制酶最适合于基因工程,为什么？请简要说明其理由。
一、名词翻译与解释
1、synonymous codons
2、RNA editing
3、Spliceosome
4、Microarray
5、Plaque hybridization
6、Open reading frame
7、Ribozyme
8、RFLP
9、Site specific recombination
10、RNA interference
二、简答题(共5小题,每小题10分,共50分)
1、简述真核生物 rRNA基因,tRNA 基因和mRNA基因的转录机制。
2、原核生物和真核生物中存在哪些类型的转座子？其转座机制有那些？
3、简述真核生物 DNA复制中,端粒复制与染色体其他部分DNA复制的异同和生物学意义。
4、原核生物的蛋白质合成可分为哪些阶段？简述各阶段的主要事件。
5、列举4种可用来检测,鉴定转基因动,植物的分子生物学技术和方法,简述选择这些技术的理由。
三、论述题
1、试述环境因素对DNA的损伤以及生物体中存在的DNA损伤修复系统。如果DNA损伤没有被修复会造成什么后果？
2、试比较真核生物RNA聚合酶Ⅱ识别的启动子与原核生物RNA聚合酶所识别的启动子的结构特点,各结构单元的功能是什么？为什么原核生物一种RNA聚合酶能识别不同结构基因？
3、在进行基因工程时,载体是携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具,请问一个载体应具有哪些基本特性和结构特点？
4、人类基因组计划基本完成表明：人类基因组约有3×109 bp（而大肠杆菌的基因组约为4.6 ×106 bp),其中仅有百分之一的基因组DNA直接编码蛋白质,约有百分之二十四的基因组DNA为内含子,而百分七十五的基因组DNA为其他非编码序列。试从(1)传代中遗传信息的保持；(2)基因表达调空的角度来论述人类基因组如此排列的可能生物学意义。
武汉大学2005年分子生物学
一、名解(4/10)
1、Ubiquitin
2、ribosomal binding site
3、siRNA miRNA
4、proteome
5、DNA foot printing
6、single nucleotide polymorphism
7、chromosome walking
8、haplotype
9、zoo blot
10、transcription unit
二、简答(5/10)
1、简述真核细胞rRNA 、tRNA和mRNA转录使用的聚合酶及各 RNA前体(precursor)加工的基本过程？
2、研究表明蛋白质组比基因组更复杂，蛋白质组中存在的蛋白质数目比基因组中存在的基因数目要多许多，这是如何造成的，你如何解释这种现象？
3、简述原核与真核细胞染色体结构的差别
4、在分子生物学研究中经常用各种载体进行研究工作，试问有哪些不同大小类型的载体,各自的主要特点是什么？
5、简述DNA损伤修复的机制,在什么情况下DNA损伤会引起DNA突变？
三、论述4/15
1、蛋白质与核酸的相互作用存在于基因表达的各个水平上,请分别举例说明在基因复制RNA 转录和蛋白质翻译过程中二者的相互作用。
2、一个真核细胞的蛋白质编码基因有哪些结构元件(或组建)组成(包括各种调控元件)？请画图表示,并说名各元件的功能与作用？
3、请设计一组试验来 (1)克隆一个你所感兴趣的人类基因 (2)并对基因产物大量表达与纯化 (3)然后研究该基因的生物学功能
4、生命科学的研究已进入后基因组时代,试从“分子生物学”的角度来谈谈你对后基因组时代的认识,并预测后基因组时代里“分子生物学”发展的未来
一、名解4*10
1、DNA Microarray
2、Spliceosome
3、Cosmid vector
4、Proteasome
5、Zinc finger domain
6、DNase I hypersensitivity
7、Insulator
8、Post-transcriptional gene silencing
9、Reverse transcription PCR
10、Missense mutation
二、简答题 10*5
1、简述microRNA 的基因调控功能与机制。
2、简述染色体端粒复制的问题,人正常细胞和癌细胞的端粒复制有何不同？
3、真核生物基因组中含有几种类型的DNA序列？你如何设计实验来证明？
4、简述RNA编辑(RNA editing)的机制及其对基因表达的影响。
5、下面的DNA序列中含有一个假象基因,编码仅5个氨基酸。请写出这些氨基酸的密码子以及终止密码子,并指出RNA转录的模版是哪条链？启动子在该序列左侧还是右侧？5-TCATGCTAGACACGTAATAGCATATGGGA-3 3-AGTACGATCTGTGCATTATCGTATACCCT-5
三、论述题15*4
1、论述一个真核基因产生有功能的蛋白质需要经过哪些分子生物学工程(event)？列出每个过程发生的细胞位置和参与的主要酶和蛋白因子。
2、有哪几种类型的遗传重组?其重组的特点如何？
3、DNA的甲基化在遗传信息的传递、DNA复制和DNA损伤修复等过程中有什么重要意义？请举例说明。
4、假如你进入实验室开始研究一个小鼠DNA结合蛋白的生物学功能: (1)、请设计实验确定其编码基因在小鼠细胞内的表达水平？ (2)、请设计实验确定该蛋白的那个结构域具有DNA 结合功能？ (3)、如何确定该蛋白在小鼠体内(in vivo)的生物学功能？
一、名词翻译与解释(共10小题 ,每小题4分 ,共40分)
1、Transcriptome
2、Translesion replication
3、Riboswitch
4、Synonymous mutation
5、Tandem gene cluster
6、Frameshift
7、Nucleosome positioning
8、Non-autonomous transposon
9、Holliday junction 10、Polymerase switching
二、简答题(共5小题 ,每小题10分 ,共50分)
1、试从DNA和RNA结构的不同解释为什么DNA被广泛作为遗传信息的承载者？RNA在细胞内行使哪些功能？
2、什么是蛋白质组?什么是蛋白质组学?如何理解高等生物细胞中一个基因组可以产生多少个蛋白质组？
3、什么是解旋酶(helicase)？请设计实验并画设计图证明一个DNA解旋酶是具有3’→5’还是5’→3’解旋活性？
4、论述原核生物基因表达调控的主要策略,并举例进行详细说明？
5、核糖体是蛋白质合成的主要机器。请问原核生物有哪些亚基和分子组成?核糖体在蛋白质翻译过程中有哪些功能位点？起什么作用？
三、论述题(共4小题 ,每题15分 ,共60分)
1、在真核生物中,成熟的mRNA序列往往与基因组DNA序列之间存在许多差异,有些序列甚至在基因组DNA上根本没有相应的互补序列。另外，同一种基因的DNA常常会转录出多种mRNA。请解释并说明产生这些现象的机制及其意义。
2、真核细胞mRNA的Ⅱ型RNA聚合酶转录,需要Ⅱ型启动子和转录因子TFⅡA ,TFⅡB ,TFⅡ
D ,TFⅡ
E 和TFⅡH等。(1)请设计实验证明这些转录因子和RNA聚合酶Ⅱ结合到启动子的顺序；(2)请设计实验证明TFⅡD复合体可以单独准确结合到启动子TATA box上；(3)TFⅡD 复合体包括哪些蛋白质？如果你有其中一个蛋白质的抗体,并知道其他几个蛋白质的大小,请设计实验验证TFⅡD复合体的组分。
3、DNA复制具有很高的准确性(accuracy)或保真度(fidelity), 出错率低于1010 分之一。请解释: (1)DNA复制过程中和复制后有哪些机制保证复制的准确性? (2)为什么RNA聚合酶的保真度比DNA复制低? (3)DNA复制的错误或突变对生物本身有何意义?
4、两位美国科学家Fire博士和Mello博士在分子生物学研究领域做出了重大贡献,并因此获得了2006年度的诺贝尔生理与医学奖。试论述其获奖成果中发现的重要分子生物学机制以及对分子生物学研究的重要影响。
武汉大学2008年分子生物学
一、名词翻译与解释(共10小题 ,每小题4分 ,共40分)
1、Missence mutation
2、Group I intron
3、Polysome
4、Non-Watson-Crick base pairing
5、Tandem mass spectrometry
6、Shine-Dalgarno sequence
7、tmRNA
8、allostery activation
9、Blue-white screening
10、Attenuator
二、简答题(共5小题 ,每小题10分 ,共50分)
1、请描述两个经典实验证明遗传物质是DNA而不是蛋白质。
2、翻译过程中需要哪四种组分?它们的功能是什么？
3、在遗传物质复制、转录和翻译过程中如何确保其准确性？
4、真核细胞转录和加工中哪些过程是相偶联的？它们是如何偶联的？
5、酵母双杂交技术是利用其什么特点建立起来的?在科学研究中有什么作用？
三、论述题(共4小题 ,每题15分 ,共60分)
1、在真核生物转录中,有哪三种序列构成核心启动子?请说明Ⅱ型启动子中有哪些因子构成起始复合替,除了这些还有哪些是构成复合体所必须的?它们各有什么功能？
2、人的基因组大概有2.5~3万个基因,但它们构成的生物体蛋白质种类却有20多万种。人的基因组是怎样以有限的基因形成如此多的蛋白质的？
3、有一研究生想使他所感兴趣的一大肠杆菌的基因严格受碳源控制,在葡萄糖供应时,该基因不表达,当供应乳糖时,该基因大量表达？你如何帮助他实现这种想法？依据是什么？
4、miRNA在癌细胞中有的高水平表达,有的低水平表达。请解释什么是miRNA？并推测上面两种类型的miRNA各有什么生物学功能?有一种miRNA-21在癌细胞中高水平表达,请设计实验得到该miRNA的生物学功能。
一、名词翻译与解释
1、Regulatory gene
2、Real-time PCR
3、Nick translation
4、Generic promoter
5、Histone code
6、Proteomics
7、Gene targeting
8、Single nucleotide polymorphism
9、Alternative mRNA processing
10、Replicon
二、简答题
1、什么是DNA损伤？生物体DNA损伤与哪些因素有关？生物细胞有哪些机制来处理DNA损伤，并进行DNA损伤修复？
2、表观（epigenetic）遗传修饰包括哪些内容？并举一例说明其在基因的表达调控和染色体重塑等方面有哪些重要作用？
3、反式作用因子是直接或间接地识别或结合在各类顺式作用元件上参与调控靶基因转录效率的蛋白质，试问反式作用因子的DNA结合结构域有哪几种类型？特点如何？
4、PCR的原理是什么？在PCR反应中是否循环次数越多所合成的产物数量也越多？为什么？
5、增强子和绝缘子在基因表达调控中的作用和特点有哪些？
三、论述题
1、论述转座子的类别、结构和转座机制及在基因表达与分子进化中的作用。
2、在进行遗传重组和基因克隆与表达的研究中，对分子克隆的载体与宿主系统的选择有非常重要的作用。请论述各主要载体系统的特点及其宿主系统。
3、从转录后水平上进行比较，论述原核生物和真核生物RNA加工的异同点。
4、什么是HapMap计划、ENCODE计划、Jim计划、Proteome计划？这些计划与人类基因组计划有何联系？这些计划对分子生物学的发展和生命活动的分子机制有什么影响和意义？
一、名解（4*10=40）
1、epigenttic change
2、peptide mass fingerprinting
3、RNA splicing
4、house keeping gene
5、frame-shift mutation
6、DNA binding domain
7、Shine-Dlagarno sequence
8、Gel retardation
9、chromatin immunoprecipitation
10、Rho-dependent transcription termination
二、简答（5*10=50）
1、什么是CPG岛？一段DNA序列中的CPG岛高度甲基化的含义是什么？
2、说出5种RNA的名称及其功能。
3、什么是enhancer？它有哪些特点？
4、真枋生物DNA与原核生物DNA复制有哪些差异？
5、简述突变类型及其遗传效应。
三、论述题（3*20=60）
1、请描述乳糖操纵子的调控机制。
2、某科学家发现一种新的野生植物，准备对该植物开展分子生物学研究，请设计实验制备该植物的cDNA文库。
3、2009年三名美国科学家获诺贝尔生理或医学奖，请分析他们为什么获奖，解释他们对分子生物学的贡献。并用他们的发现解释克隆的多莉羊早衰死亡的一个原因。
2011年分子生物学真题
一、科学名词解释及翻译
1、Chromatin remodeling
2、Internal ribosome entry site
3、Alternative splicing
4、Non-autonomous transposon
5、Shine-Dalgarno sequence
6、Realtime PCR
7、Ribozyme
8、SOS response
9、Telomerase
10、Suppressor mutation
二、简答题
1、简述色氨酸操纵子的调控机制。
2、DNA在复制过程中如何保持准确性？
3、分别阐述克隆载体和表达载体（各5种）及其特点和用途。
4、什么是RNA editing？它的机制是什么？
5、什么是染色体步移？它的作用是什么？
三、论述题
1、真核生物转录调控因子的类型和特点？阐述根据一种转录调控因子的特点建立的分子生物学技术的及其应用。
2、真核生物和原核生物的基因组的特点及差异？已知某基因的cDNA（长14Kb），如何用实验证明该生物基因还有内含子？如何确定内含子在全长中的比例？如何用实验确定某未知基因的功能？
3、每种基因a是诱导表达基因，在分子B（小分子化合物）的作用下可以诱导表达。已知该基因的序列，该基因上启动子的序列。已知某调控元件的序列为ACGTCG，基因c表达的蛋白C可以结合在该调控元件上，试用三种证明该调控元件可以诱导基因a表达。
武汉大学2012年分子生物学真题
一、专业术语翻译与解释
1、base flipping
2、RNase P
3、Histone chaperones
4、Viral-like retrotransposon
5、paracodon
6、trans-splicing
7、sliding clamp
8、initial transcribing complex
二、简答题
1、简述保证tRNA和mRNA正确配对的三种机制。
2、简述DNA复制中RNA引物的去除所需要的酶及其作用。
3、简述核糖开关的结构及其作用机制。
4、简述真核生物抑制子的作用方式。
5、简述细菌RNA聚合酶的校正机制。
三、论述题
1、从分子水平和感染条件解释λ噬菌体溶原生长途径的建立过程。
2、在你的课题研究中，你发现真核生物的A蛋白可以上调B蛋白的表达，对此你很感兴趣，请详述你将通过哪些实验进行下一步研究。
3、阻遏作用一般只能使转录效率降低70倍，为什么在色氨酸高浓度和低浓度下可以发现大肠杆菌色氨酸操纵子的表达水平相差约600倍？
2013年攻读硕士研究生入学考试试题
一、名词解释（共10小题，每题4分，共40分）
1. Ribozyme
2. Missense Mutation
3. Insulator
4. RNA trans-splicing
5. Nucleotide excision repair
6. Transposon
7. Dam methylase
8. Spliceosome
9. Core promotor
10. SNP
二、简答题（共5小题，每题10分，共50分）
1.真核生物mRNA的5’帽子结构有何生物学功能？其缺失会造成什么后果？
2.某一基因开放阅读框中的一个碱基突变会对该基因编码产物产生什么影响？
3.请简述真核生物的mRNA和原核生物的mRNA有何不同。
4.请简述Ⅰ型内含子剪切的过程.
5.请简述Western blot 的原理和步骤。
三、论述题（共3小题，每题20分，共60分）
1. 研究基因功能通常是降低或升高基因表达水平，请简要说出三种相关研究方法及原理。
2. mRNA和蛋白质的降解是一个有序的过程，其中microRNA和泛素起了非常重要的作用，请简述microRNA的概念、产生过程、作用机制，或者泛素的概念和蛋白质泛素化的过程。
3. 某实验需将1kb的cDNA片段插入某氨苄青霉素抗性的表达载体，在片段两边各有一个EcoRI 位点，靠近5’端300bp的地方有一EcoRV位点，载体多克隆位点从5’依次为BamHI、HindIIII、EcoRI、EcoRV、XhoI位点，实验设计步骤如下：
（1）用EcoRI处理载体，然后用碱性磷酸酶处理。
（2）用EcoRI处理片段，然后与步骤（1）中的载体混合，加入DNA连接酶，在适当的条件下使cDNA片段与载体连接。
（3）连接产物转化到大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的LB平板上生长，除此之外，还设了以下对照：
对照1：在含有抗生素的平板上涂布未被转化的大肠杆菌感受态细胞。
对照2：用未被酶切处理的载体转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。对照3：用EcoRI处理的载体，不用碱性磷酸酶处理，不加cDNA片段，然后加连接酶做连接反应，并转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。
对照4：除了用碱性磷酸酶处理外，其他同对照3.
2014年分子考研真题
一.名词解释
complement DNA
RNAsplicing
Gel filtration chromatography
gene
snRNP
OKAZIKIN sequence
operon
enhancesome
一.简答题
1.从分子角度谈谈为什么DNA比RNA更广泛地用作遗传信息的携带者
2.试说明中介蛋白在转录调控中的作用原理
3.以下是DNA的电泳条带，说明DNA有哪三种拓扑异构构型？设计实验验证该结果。
4.翻译过程需要哪些组分？各自的功能分别是什么
三.论述题
1.CTD是RNA POL2的末端结构，说明其结构特点。它在转录各过程的作用是什么？
2.试从产生过程，作用机制和生物学功能几个方面比较miRNA和siRNA的异同点3蛋白质A可以上调蛋白质B的表达水平，说明蛋白A可能在哪些水平发挥作用并设计实验证明。
一、植物组织培养：狭义指对植物体组织或由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养直至生成完整植株。广义：无菌操作分离植物体一部分(即外植体)接种到培养基，在人工条件下培养直至生成完整植株。生物技术中的一个基本技术。 MS：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其营养丰富，养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 愈伤组织愈伤组织callus在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。 cDNA文库：包含细胞全部的mRNA信息的反转录所得到的cDNA的集合体。 胚状体：是指植物在离体培养条件下，非合子细胞经过胚胎发生和发育的过程形成的胚状结构，又称体细胞胚。 体细胞杂交：体细胞杂交又称体细胞融合，指将两个GT不同的体细胞融合成一个体细胞的过程。融合形成的杂种细胞，兼有两个细胞的染色体。 分子标记：是指在分子水平上DNA序列的差异所能够明确显示遗传多态性的一类遗传标记。 基因工程原称遗传工程，亦称重组DNA技术，是指采用分子生物学手段，将不同来源的基因，按照人类的愿望，在体外进行重组，然后将重组的基因导人受体细胞，使原有生物产生新的遗传特性，获得新品种，生产新产品的技术科学。 细胞培养指动物、植物和微生物细胞在体外无菌条件下的保存和生长。过程：①取材和除菌；②培养基的配制；③接种与培养。 生物反应器是适用于林木细胞规模化培养的装置。 生物技术biotechmlogy：也称生物工程，是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的。 外植体explant：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。 植物细胞的全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。 再分化：脱分化的分生细胞（愈伤组织）在一定的条件下，重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株的过程。 器官发生organogenesis：亦称器官形成，一般指脊椎动物个体发育中，由器官原基进而演变为器官的过程。各种器官形成的时间有早有晚，通过器官发生阶段，各种器官经过形态发生和组织分化，逐渐获得了特定的形态并执行一定的生理功能 体细胞胚胎发生：单细胞或一群细胞被诱导，不断再生非合子胚，并萌发形成完整植株的过程。 PCR：聚合酶链式反应是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。Recombinant DNA重组DNA：是指采用分子生物学手段，将不同来源的基因，按照人类的愿望，在体外进行重组，然后将重组的基因导人受体细胞，使原有生物产生新的遗传特性，获得新品种，生产新产品的技术科学。 细胞融合：两个或多个细胞相互接触后，其细胞膜发生分子重排，导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程称为细胞融合。 悬浮培养：悬浮培养是细胞培养的基本方法，不仅为研究细胞的生长和分化提供了一个
一.解释概念(20分,每个4分) 卫星DNA 复制体逆转座子反式激活因子衰减子与衰减作用 三、问答题(50分) 1. 说出双链DNA复制起始有关的五种重要的酶或蛋白并简述它们的功能。(15分) 2. 简述增强子的特点和性质及作用机制。(10分) 3. 简述真核RNA聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始(15分) 4. DNA限制性内切酶EcoRI是人们熟悉的常用内切酶,它是在大肠杆菌 (E.coli)R株中发现的,它被广泛用于分子克隆操作和DNA分析。pUC质粒是常用克隆载体之一,它的多克隆位点上有EcoRI、BamHI、KpnI、HindIII等酶切点。假如要你把一段由EcoRI切割产生的外源DN**段克隆到pUC质粒中,并把重组质粒转化大肠杆菌R株来扩增,已知条件是所用的R菌株中只有EcoRI一种限制性内切酶,你设计如何做才能确保成功?为什么?(10分) 武汉大学2002分子生物学 三.问答: 1.简述(或绘图说明)真核细胞RNA聚合酶II转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程(15分) 2.简述(或绘图说明)色氨酸操纵子弱化的机制(15分) 3.在讨论基因家庭时经常提到胚胎、胎儿和成体形成的蛋白质,这些述语是指什么现象?可用什么术语来描述这一类基因家族(5分) 4. 你正在进行Southern blot分析,并刚刚完成凝胶电泳部分,下一步是将胶浸泡在NaOH溶液中使DNA变性为单链,为了节约时间,你跳过这一步,直接把DNA 从胶上转到硝酸纤维素膜上,你将标记好的探针与膜杂交,却发现放射自显影结果是一片空白,哪里错了呢?(5分)
一、下列名词翻译成中文，并简要解释 1、Domains and motifs 2、Alternative splicing 3、Reporter genes 4、The PCR cycle 5、Restriction mapping 6、Multiple cloning sites 7、DNA libraries 8、Proteomics 9、Replicon 10、Semi-conservative replication 二、简答题(共5题,每题8分,共40分) 1、请列举三种以上蛋白质纯化技术,并说明不同纯化技术的简单原理。 2、简述DNA损伤与DNA突变之间的区别与相互关系。 3、简述密码的简并性(degeneracy)和同义密码子(synonymous codon)及其在生物学上的重要性。 4、简述原核生物转录起始与转录终止过程中所涉及的主要蛋白质和核酸结构及其具体作用。 5、简述cDNA文库的构建过程。 三、论述题(共5题,1-4题每题15分,第5题10分,共70分) 1、人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 2、什么是操纵子(operon)？试说明色氨酸操纵子(Trp operon)在原核基因表达调控中的调控机制和重要作用。 3、请简要解释顺式作用元件与反式作用因子,并举二例加以说明它们的相互作用方式。 4、试说明真核细胞与原核细胞在基因转录、翻译及DNA的空间结构方面存在的主要差异,表现在哪些方面？ 5、限制性核酸内切酶有哪几种类型？哪一种类型的限制酶最适合于基因工程,为什么？请简要说明其理由。
分子生物学：研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学。 C值反常：也称c值谬误，指c值往往与种系进化复杂性不一致的现象，及基因组的大小与遗传复杂性之间没有必然的联系，某些较低等的生物c值却很大。DNA重组技术：又称基因工程。将不同的DNA片段按照预先的设计定向连接起来，在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状的技术。 GU-AG法则：多数细胞核mRNA前体中内含子的5’边界序列为GU，3’边界为AG，因此，GU表示供体衔接点的5’端，AG 表示接纳点的3’端序列，习惯上，把这种保守序列模式称为GU-AG法则。 RNA干涉：是利用双链小RNA高效，特异性降解细胞内同源MRNA，从而阻断体内靶基因的表达，使细胞内出现靶基因缺失表性的方法。 摆动假说：crick为解释反密码子中子某些稀有成分的配对（如I）以及许多氨基酸中有两个以上密码子而提出的假设。编码链/有义链：在DNA双链中，与mRNA 序列（除t/u替换外）和方向相同的那条DNA，又称有义链 模板链：指双链DNA中能够作为模板通过碱基互补原则指导mRNA前体的合成的DNA链，又称反义链 操纵子：原核生物中由一个或多个相关基因以及转录翻译调控原件组成的基因表达单元。 反式作用因子：能直接或间接识别或结合在各类顺式作用元件中核心序列上参与调控靶基因转录效率的pro。 基因定点突变：向靶DNA片段中引入所需的变化，包括碱基的添加，删除，或改变基因家族：在基因组进化中，一个基因通过基因重复发生了两个或更多的拷贝，这些基因即构成一个基因家族，是具有显著相似性的一组基因，编码相似的蛋白质产物 基因敲除技术：针对一个序列已知打包功能未知的基因，从DNA水平上设计实验，彻底破坏该基因的功能或消除其表达机制，从而推测该基因的生物学功能 基因组DNA文库：某一生物体全部或部分基因的集合，将某个生物的基因组DNA 或cDNA片段与适当的载体体外重组后，转化宿主细胞，所谓的菌落或噬菌体的集合即为…… 基因治疗：是将具有治疗价值的基因即“治疗基因“装配于带有在人体细胞中表达所必备元件的载体中，导入人体细胞，通过靶基因的表达来治疗遗传疾病 聚合酶链反应：指通过模拟体内DNA复制方式在体外选择性的将DNA某个特定区域扩增出来的 魔斑核苷酸：在应急反应过程中，由大量GTP合成的ppGpp和pppGpp，它们的主要作用可能是影响RNA聚合酶与启动子结合的专一性，诱发应急反应，帮助细菌度过难关 弱化子：原核生物操纵子中能明显减弱甚至终止转录作用的一段核苷酸序列 同工tRNA：几个代表AA，能够被一个特殊的氨酰—tRNA合成酶识别的Trna 顺式作用元件：存在于基因旁侧序列中能影响基因表达的序列，包括启动子，增强子等，本身不编码任何pro，仅提供一个作用位点，与反式作用因子相互作用参与基因表达调控 原位杂交技术：用标记的核苷酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织，细胞及染色体水平上对核苷酸进行定位和相对定量研究的手段 转座/移位：遗传信息从一个基因座转移至另一个基因座的现象，由可移问位因子介导的遗传物质的重排 管家基因：维持细胞正常生长发育的必需基因，所以细胞中均需表达的一类基因转座子：是存在染色体上的可自主复制和移位的基本单位，参与转座子易位及DNA 链整合的酶称为转座酶 原癌基因：正常细胞中与病毒癌基因具有显著同源性的基因，本身没有致癌作用，但是经过致癌因子的催化下激活成为致 癌基因，使正常细胞向恶性转化。 SP序列：mRNA中用于结合原核生物核糖 体的序列 无义突变：在蛋白质的结构基因中，一个 核苷酸的改变可能是代表某个AA的密码 子变成终止密码子（UAG UGA UAA），使 pro合成提前终止，合成无功能或无意义 的多肽，这称— 错义突变：由于结构基因中某个核苷酸的 变化使一种AA的密码子变成另外一种AA 的密码 指导RNA：与已正确编码的RNA序列互补 的一小段RNA，被用来作为向未经编辑的 RNA中插入碱基的模板。 上游启动子元件：将TATA区上游的保守 序列称为— 启动子：与基因表达启动相关的顺式作用 原件，是结构基因的重要成分。它是一段 位于转录起始位点5’端上游区大约 100~200bp以内的具有独立功能的DNA序 列，能活化RNA聚合酶，使之与模板DNA 准确地相结合并具有转录起始的特异性。 细菌转化：是一种细菌菌株由于捕获了来 自供体菌株的DNA而导致性状特征发生 遗传改变的过程，提供转化DNA的菌株叫 做供体菌株，接受转化DNA的菌株被称作 受体菌株。 实时定量PCR技术：利用带荧光检测的 PCR仪对整个PCR过程中扩增DNA的累积 速率绘制动态变化图。 基因工程：在体外将核算分子插入病毒， 质粒或其他载体分子，构成遗传物质的新 组合，使之进入新的宿主细胞内并获得持 续稳定增殖能力和表达。 应答原件：能与某个（类）专一蛋白因子 结合，从而控制基因特异表达的DNA上游 序列。 增强子：是指能使与它连锁的基因转录频 率明显增加的DNA序列（1.5分）。它可 以在启动子的上游，也可以在启动子的下 游，绝大多数增强子具有组织特异性（1.0 分）。 分子伴侣：是结合其他不稳定蛋白质并稳 定其构象的一类蛋白质（1.0分）。通过 与部分折叠的多肽协调性地结合与释放， 分子伴侣促进了包括蛋白质折叠、寡聚体 装配、亚细胞定位和蛋白质降 负调控：阻遏蛋白结合在操作子位点，阻 止基因的表达。没有调节蛋白时操纵元内 结构基因是表达的，而加入调节蛋白后结 构基因的表达活性被关闭，这种调节称为 负调节。 应急因子：是指与核糖体相结合的蛋白质 RelA，当空载的tRNA进入A位时，它催 化GTP形成pppGpp或催化GDP形成 ppGpp。 信号肽：在蛋白质合成过程中N端有 15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质 的跨膜。 密码的简并性:由一种以上密码子编码同 一个氨基酸的现象称为密码的简并性 移码突变(frame-shift mutation)：在 mRNA中，若插入或删去一个核苷酸，就 会使读码发错误，称为移码，由于移码而 造成的突变、称移码突变 简答题 1原核生物与真核生物基因组的不同？ 答：原核基因组：常仅由一条环状双链DNA 分子组成，结构简单；基因组中只有一个复 制起点；具有操纵子结构，转录的RNA为多 顺反子；有重叠基因（1、基因内基因 2、部 分重叠基因 3、一个碱基重叠）;无内含子； 编码pro的DNA在基因组中所占比例较大； 结构基因为单贝 真核基因组：真核基因组庞大，一般都远 大于原核生物；真核基因组存在大量的重复 序列；真核基因组的大部分为非编码序列， 占整个基因组序列的90%以上；真核基因组的 转录产物为单顺反子；真核生物为断裂基因、 有内含子结构；真核基因组存在大量的顺式 作用原件；真核基因组中存在大量的DNA多 态性；真核基因组具有端粒结构。 2比较RNA转录与DNA复制的异同？ 答：相同：都以DNA链作为模板；合成方向 均为5’—3’；聚合反应均是通过核苷酸之间 形成的3’，5’—磷酸二酯建使核苷酸链延长 不同：复制转录 模板：两条链均复制；模板链转录（不对称 转录） 原料：dNDP ; NTP 酶：DNA聚合酶；RNA聚合酶 产物：子代双链DNA；mRNA,tENA,rRNA 配对：A---T ,G---C; A—U,T---A,G---C 引物：RNA引物；无 试比较转录与复制的区别。： 1，目的不同，所使用的酶、原料及其它辅助 因子不同，转录是合成RNA，复制是合成DNA； 2，方式不同：转录是不对称的，只在双链DNA 的一条链上进行，只以DNA的一条链为模板， 复制为半不连续的，分别以DNA的两条链为 模板，在DNA的两条链上进行；3，复制需要 引物，转录不需要引物；,4复制过程存在校 正机制，转录过程则没有；5转录产物需要加 工，复制产物不需要加工；6复制与转录都经 历起始、延长、终止阶段，都以DNA为模板， 新链按碱基互补原则，5'→3’方向合成。 3、 RNA转录的基本过程？ 转录的基本过程包括：模板识别、转录起始、 转录的延伸和终止。 模板识别：RNA聚合酶与启动子DNA双链相互 作用并与之结合； 转录起始：RNA聚合酶结合在启动子上以后， 是启动子附近的DNA双链解旋并解链，形成 转录泡以促使底物核糖核苷酸与模板DNA的 碱基配对，当RNA链上第一个核苷酸键产生 标志着转录的起始，一旦RNA聚合酶成功地 合成9个以上核苷酸并离开启动子区，转录 就进入正常的延伸阶段。 转录的延伸：RNA聚合酶释放因子离开启动子 后，核心酶沿模板DNA链移动并使新生成RNA 链不断伸长，在解链区形成RNA—DNA杂合物。 转录终止：当RNA链延伸到转录终止位点时， RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯建，DNA— RNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双 链状态，DNA聚合酶和RNA链都从模板上释放 出来，转录终止。 4.DNA复制的过程和机制? 答：分三个阶段：即复制的起始、延伸、终 止。 复制的起始：DNA解旋解链，形成复制叉，引 发体组装，然后在引发酶的催化下以DNA链 为模板合成一段短的RNA引物。 延伸：DNA链的延伸由DNA聚合酶催化以亲代 DNA链为模板引发体移动，从5’—>3’方向 聚合子代DNA链，前导键的合成以5’—>3’ 方向随着亲本双链体的解开而连续进行复 制，后随链在合成过程中，一段亲本DNA单 恋首先暴露出来，然后以与复制叉移动相反 方向，按5’—>3’方向合成一系列冈崎片段。 终止：当子链延伸到终止位点时，DNA复制终 止，切除RNA引物，填充缺口，在DNA连接 酶的催化下将相邻的DNA片段连接起来形成 完整的DNA长链。 5、真核生物与原核生物在翻译的起始过程中 有哪些区别？ 答：真核生物的起始tRNA是met-tRNA met 原核是fmet-tRNA fmet； 真核生物核糖体小亚基识别mRNA的帽子结 构，而原核生物通过与mRNA的SD序列结合； 真核生物小亚基先与met-tRNAmet结合再与 mRNA结合，而原核生物小亚基先与mRNA结合 再与fmet-tRNAfmet结合；真核生物有较多 的起始因子参与，且核糖体较大为80S，而原 核生物有较少的起始因子参与，且核糖体较 小为70S 6.简述蛋白质生物合成过程。，以大肠杆菌为 例： (1)氨基酸的活化：游离的氨基酸必须经过活 化以获得能量才能参与蛋白质合成，由氨酰 -tRNA合成酶催化，消耗1分子ATP，形成氨 酰-tRNA。 (2)肽链合成的起始：由起始因子参与，mRNA 与30S小亚基、50S大亚基及起始甲酰甲硫氨 酰-tRNA(fMet-tRNAt)形成70S起始复合物， 整个过程需GTP水解提供能 (3)肽链的延长：起始复合物形成后肽链即开 始延长。首先氨酰-tRNA结合到核糖体的A 位，然后，由肽酰转移酶催化与P位的起始 氨基酸或肽酰基形成肽键，tRNA f 或空载tRNA 仍留在P位．最后核糖体沿mRNA5’→3’方 向移动一个密码子距离，A位上的延长一个氨 基酸单位的肽酰-tRNA转移到P位，全部过程 需延伸因子EF-Tu、EF-Ts，能量由GTP提供 (4)肽链合成终止，当核糖体移至终止密码 UAA、UAG或UGA时，终止因子RF-1、RF-2 识别终止密码，并使肽酰转移酶活性转为水 解作用，将P位肽酰-tRNA水解，释放肽链， 合成终止。 7.试比较真核生物与原核生物mRNA转录的主 要区别。 答：转录单元：原核生物常为多顺反子转录， 真核生物常为单顺反子转录。酶：RNA聚合酶 核心酶加p因子，原核生物为RNA聚合酶Ⅱ 聚合酶加转录因子。转录产物：真核生物不 需加工与翻译相偶联真核生物需加工与翻译 分开。转录过程：无核小体的结局和组装的 过程，原核生物有核小体的结局和组成的过 程。转录终止“原核生物两种方式分别是依 赖P因子的终止和不依赖P因子的终止，真 核生物转录的终止加尾修饰同步进行。反应 部位：原核生物在类核，真核生物在核内。 8.比较原核和真核生物mRNA的区别？ 答：（1）、原核生物mRNA5’端无帽子结构，3’ 端没有或只少较短的polyA结构，真核生物 5’端存在帽子结构，3’端具有polyA尾巴. （2）、许多原核生物mRNA可能以多顺反子形 式存在，而真核生物几乎都是单顺反子(3)原 核生物mRNA的半衰期短，转录与翻译是紧密 相连的，两个过程不仅发生在同一细胞间里， 而且几乎是同步进行的，真核生物mRNA的录 翻译是发生在不同空间和时间范畴内的。(4) 原核生物以AUG作为起始密码有时以GUG， UUG作为起始密码，真核几乎永远以AUG作为 起始密码。 9.乳糖操纵子调控机理 答：是大肠杆菌中控制半乳糖苷酶诱导合成 的操纵子。包括调控元件P（启动子）和O（操 纵基因）阻遏子（I），以及结构基因lacZ（编 码半乳糖苷酶）、lacY（编码通透酶）和lacA （编码硫代半乳糖苷转乙酰基酶）。转录时 RNA聚合酶首先与启动子结合，通过操纵区向 右转录，转录从O区中间开始，按Z→Y→A 方向进行，每次转录出来的一条mRNA上都带 有这3个基因，转录的调控是在启动区和操 纵区进行的。 1、无乳糖时，调节基因lacI编码阻遏蛋白， 与操纵子基因O结合后抑制结构基因转录， 不产生代谢乳糖的酶。 2、只有乳糖存在时，乳糖可以与lac阻遏蛋 白结合，而使阻遏蛋白不与操纵基因结合， 诱导结构基因转录，代谢乳糖的酶产生以代 谢乳糖。 3、葡萄糖和乳糖同时存在时，葡萄糖的降解 产物能降低cAMP的含量，影响CAP与启动基 因结合，抑制结构基因转录，抑制代谢乳糖 的酶产生。 10、色氨酸操纵子及机制？ 答：负责色氨酸的生物合成，当培养基中有 足够的色氨酸时，这个操纵子自动关闭，缺 乏时操纵子打开，trp基因表达，色氨酸或与 其代谢有关的某种物质在阻遏过程中起作 用。由于trp体系参与生物合成而不是降解， 它不受葡萄糖或cAMP-CAP的调控。 弱化作用：当色氨酸达到一定浓度、但还没 有高到能够活化R使其起阻遏作用的程度时， 产生色氨酸合成酶类的量已经明显降低，而 且产生的酶量与色氨酸的浓度呈负相关。先 导序列起到随色氨酸浓度升高降低转录的作 用，这段序列就称为衰减子或弱化子。在trp 操纵元中，对结构基因的转录阻遏蛋白的负 调控起到粗调的作用，而衰减子起到细调的 作用。 11.原核生物和真核生物复制的差异？ 答：原核真核 复制起点：一般为单复制起点；一般为多复 制起点 主要的酶：DNA聚合酶Ⅲ；DNA聚合酶& 单链复制叉复制速度：快；慢 复制的延伸：无核小体的解聚及诚信组装； 有核小体…… 终止：两个复制叉相遇终止复制（环形DNA）； 端粒酶复制末端完成复制（线性DNA） 12原核细胞和真核细胞在合成蛋白质的 起始过程有什么区别。 ．(1)起始因子不同：原核为IF-1，IF-2， IF-2，真核起始因子达十几种。 (2)起始氨酰-tRNA不同：原核为 fMet-tRNA f ，真核Met-tRNAi (3)核糖体不同：原核为70S核粒体， 可分为30S和50S两种亚基，真核为80S 核糖体，分40S和60S两种亚基
（生物科技行业）考研武汉大学分子生物学名词
ModificationofDNAorRNA(DNA或RNA修饰)：在最初合成聚核苷酸链之后核苷酸上所做的任何改变。 Modifiedbases(修饰碱基)：除通常在DNA(T、C、G、A)和RNA(U、C、G、A)四种碱基以外的碱基，通常是在核酸合成后发生改变。Molecularchaperone(分子伴侣)：协助壹些蛋白质装配或者恰当折叠所需的蛋白质，但这种蛋白质且不是靶复合物的成分。 MonocistronicmRNA(单顺反子mRNA)：编码壹个蛋白质的mRNA。Monolayer(单细胞层)：指真核细胞在培养基上生长，只能形成壹个细胞深度的壹层。 Morphogen(形态发生因子)：诱导特别细胞型以依赖其浓度形式发育的因子。MPF(促成熟因子)：是二聚体激酶，包括p34催化亚基和周期蛋白调控亚基，其激活能引发有丝分裂进行。 MtDNA：线粒体DNA。 MTOC：见微管组织中心。 Multicopyplasmids(多拷贝质粒)：以大于壹个拷贝出当下细菌中的质粒。Multiforkedchromosome(多叉染色体)：在细菌中，有壹个之上复制叉，因为在第壹个复制循环结束之前第二个就已开始。 Multimericprotein(多亚基蛋白质)：由壹个之上亚基组成的蛋白质。
Mutagens(诱变剂)：通过诱导DNA上的突变增加突变率的物质。 Mutation(突变)：指基因组DNA序列上的任何改变。Mutationfrequency(突变频率)：在种群中某个突变被发现的频率。Mutationrate(突变率)：某个突变发生的速率，通常用每个基因每代出现的次数表示。 Myeloma(骨髓瘤细胞)：起源淋于巴细胞的壹个肿瘤细胞株，通常产生壹种免疫球蛋白质。 N Negativecomplementation(负互补)：当等位基因间互补允许多亚基蛋白质中突变亚基抑制野生型亚基的活性时发生。 Negativeregulators(负调控物)：通过关闭转录或者翻译来行使功能。Negativesupercoiling(负超螺旋)：双链DNA在空间以双螺旋链旋转方向相反的方向形成的扭曲。 Neutralsubstitution(中性置换)：蛋白质中不改变活性氨基酸的变化。 Nick(切口)：指双链DNA中壹条链上俩个相邻核苷酸间缺少磷酸二脂键。Nicktranslation(切口平移)：指大肠杆菌中DNA聚合酶I能够将切口作为壹个起点，将双链DNA中的壹条链分解且用新物质重新合成新链代之。可用来在体外
1.分子生物学的定义。 2.简述分子生物学的主要研究内容 广义：是研究蛋白质及核酸等生物大分子特定的空间结构及结构的运动变化与其生物学功能关系的科学。从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 狭义：主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调节控制等过程 分子生物学的主要研究内容 生物大分子本质：一切生物体中的各类有机大分子都是由完全相同的单体，如蛋白质分子中的20种氨基酸、DNA及RNA中的8种碱基所组合而成的。 生物大分子结构功能(结构分子生物学) DNA重组技术(基因工程) 基因表达调控(核酸生物学) 基因组学 ?2章DNA双螺旋模型是哪年、由谁提出的?简述其基本内容。 ?1953 DNA的双螺旋结构有哪几种不同形式，各有何特点？细胞内最常见的是哪一类构象？ ?B-DNA构象： 相对湿度为92%时，DNA钠盐纤维为B-DNA构象。在天然情况下，绝大多数DNA 以B构象存在。最常见 ?A-DNA构象： 当相对湿度改变（75%以下）或由钠盐变为钾盐、铯盐，DNA的结构可成为A构象。它是B-DNA螺旋拧得更紧的状态。DNA-RNA杂交分子、RNA-RNA双链分子均采取A构象。
?Z-DNA构象： 在一定的条件下（如高盐浓度），DNA可能出现Z构象。Z-DNA是左手双螺旋，磷酸核糖骨架呈Z字性走向。不存在大沟，小沟窄而深，并具有更多的负电荷密度。Z-DNA的存在与基因的表达调控有关 第四节DNA的变性和复性 简述DNA的C-值、C-值矛盾（C Value paradox）；核小体、断裂基因 C-值是一种生物的单倍体基因组DNA的总量 ?C-值矛盾（C-value paradox)： 形态学的复杂程度（物种的生物复杂性）与C-值大小的不一致，称为C值矛盾（C-值悖理） 核小体(nucleosome)定义：用于包装染色质的结构单位，是由DNA链缠绕一个组蛋白核心构成的 简述真核生物染色体上组蛋白的种类，组蛋白修饰的种类及其生物学意义 组蛋白：H1 H2A H2B H3 H4 如甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化及ADP核糖基化等。修饰作用只发生在细胞周期的特定时间和组蛋白的特定位点上。 H3、H4的修饰作用较普遍。 所有这些修饰作用都有一个共同的特点，即降低组蛋白所携带的正电荷。这些组蛋白修饰的意义：一是改变染色体的结构，直接影响转录活性；二是核小体表面发生改变，使其他调控蛋白易于和染色质相互接触，从而间接影响转录活性 、
考试复习重点资料（最新版） 资料见第二页 封 面 第1页
分子生物复习题及答案 一、填空题 1．病毒ΦX174及M13的遗传物质都是单链DNA。 2．AIDS病毒的遗传物质是单链RNA。 3．X射线分析证明一个完整的DNA螺旋延伸长度为3.4nm。 4．氢键负责维持A-T间（或G-C间）的亲和力 5．天然存在的DNA分子形式为右手B型螺旋。 二、选择题（单选或多选） 1．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是：肺炎球菌在老鼠体内的毒性和T2噬菌体感染大肠杆菌。这两个实验中主要的论点证据是（C）。 A．从被感染的生物体内重新分离得到DNA作为疾病的致病剂 B．DNA突变导致毒性丧失 C．生物体吸收的外源DNA（而并非蛋白质）改变了其遗传潜能 D．DNA是不能在生物体间转移的，因此它一定是一种非常保守的分子E．真核心生物、原核生物、病毒的DNA能相互混合并彼此替代 2．1953年Watson和Crick提出（A）。
A．多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋 B．DNA的复制是半保留的，常常形成亲本-子代双螺旋杂合链 C．三个连续的核苷酸代表一个遗传密码 D．遗传物质通常是DNA而非RNA E．分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变 3．DNA双螺旋的解链或变性打断了互补碱基间的氢键，并因此改变了它们的光吸收特性。以下哪些是对DNA的解链温度的正确描述？（C、D）A．哺乳动物DNA约为45℃，因此发烧时体温高于42℃是十分危险的B．依赖于A-T含量，因为A-T含量越高则双链分开所需要的能量越少 C．是双链DNA中两条单链分开过程中温度变化范围的中间值 D．可通过碱基在260nm的特征吸收峰的改变来确定 E．就是单链发生断裂（磷酸二酯键断裂）时的温度 4．DNA的变性（A、C、E）。 A．包括双螺旋的解链B．可以由低温产生 C．是可逆的D．是磷酸二酯键的断裂 E．包括氢键的断裂
1.什么是转座? 转座因子在一个DNA分子内部或者两个DNA之间不同位置 间的移动。 2.病毒基因组有哪些特点?答：不同病毒基因组大小相差较大；不同病 毒基因组可以是不同结构的核酸；除逆转录病毒外，为单倍体基因组；病毒基因组有的是连续的，有的分节段；有的基因有内含子；病毒基因组大部分为编码序列；功能相关基因转录为多顺反子mRNA有基因重叠现象。 3.原核生物基因组有哪些特点?答：基因组由一条环状双链DNA组成； 只有一个复制起始点；大多数结构基因组成操纵子结构；结构基因无重叠现象；无内含子，转录后不需要剪接；基因组中编码区大于非编码区；重复基因少，结构基因一般为单拷贝；有编码同工酶的等基因；基因组中存在可移动的DNA序列；非编码区主要是调控序列。 4.真核生物基因组有哪些特点?答：每一种真核生物都有一定的染色 体数目；远大于原核基因组，结构复杂，基因数庞大；真核生物基因转录为单顺反子；有大量重复序列；真核基因为断裂基因；非编码序列多于编码序列；功能相关基因构成各种基因家族。 5.基因重叠有什么意义?答：利用有限的核酸储存更多的遗传信息，提 高自身在进化过程中的适应能力。 6.质粒有哪些特性? 答：在宿主细胞内可自主复制；细胞分裂时恒定地 传给子代；所携带的遗传信息能赋予宿主特定的遗传性状；质粒可以转移。 7.什么是顺式作用元件? 答：基因中能影响基因表达，但不编码RNA 和蛋白质的DNA序列。顺式作用元件主要包括启动子、增强子、负调控元件等。 8.简述原核基因表达的特点。答：(1)只有一种RNA聚合酶。(2)原核 生物的基因表达以操纵子为基本单位。(3)转录和翻译是偶联进行的。(4)mR
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。
除了5’ 3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA重组技术）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（ hnRNA在转变为mRNA 的过程中经过剪接，）、
2002年 三、问答： 1、简述（或绘图说明）真核细胞RNA聚合酶II转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程（15分） 2、简述（或绘图说明）色氨酸操纵子弱化的机制（15分） 3、在讨论基因家庭时经常提到胚胎、胎儿和成体形成的蛋白质，这些述语是指什么现象？可用什么术语来描述这一类基因家族（5分） 4、你正在进行Southern blot分析，并刚刚完成凝胶电泳部分，下一步是将胶浸泡在NaOH溶液中使DNA变性为单链，为了节约时间，你跳过这一步，直接把DNA从胶上转到硝酸纤维素膜上，你将标记好的探针与膜杂交，却发现放射自显影结果是一片空白，哪里错了呢？（5分） 2001年 三、问答题（50分） 1．说出双链DNA复制起始有关的五种重要的酶或蛋白并简述它们的功能。（15分） 2．简述增强子的特点和性质及作用机制。（10分） 3．简述真核RNA聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始（15分） 4． DNA限制性内切酶EcoRI是人们熟悉的常用内切酶，它是在大肠杆菌（E.coli）R株中发现的，它被广泛用于分子克隆操作和DNA分析。pUC质粒是常用克隆载体之一，它的多克隆位点上有EcoRI、BamHI、KpnI、HindIII等酶切点。假如要你把一段由EcoRI切割产生的外源DNA片段克隆到pUC质粒中，并把重组质粒转化大肠杆菌R株来扩增，已知条件是所用的R菌株中只有EcoRI一种限制性内切酶，你设计如何做才能确保成功？为什么？（10分）
2003年分子生物学 一。下列名词翻译成中文，并简要解释4*10 1.Domains and motifs 2. Alternative splicing 3.Reporter genes 4. The PCR cycle 5.Restriction mapping 6.Multiple cloning sites 7.DNA libraries 8.Proteomics 9.Replicon 10. semi-conservative replication 二。简答题8*5 总计40分 1. 请列举三种以上的蛋白质纯化技术，并说明不同技术的简单原理。 2. 说说DNA损伤与DNA突变之间的区别和相互关系。 3. 简述密码的简并性（degeneracy）和同义密码子（synonymous codon）及其在生物上的重要性。 4. 简述原核生物转录起始与转录终止过程中涉及到的主要蛋白质和核酸结构及其具体作用。 5. 简述cDNA文库的构建过程。 三。问答题（1-4每题15，5题10，总计70） 1. 人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 2. 什么是操纵子（operon）?试说明色氨酸操纵子（Trp operon）在原核基因表达调控中的调控机制和重要作用。 3. 简要解释顺式作用元件与反式作用因子，并举二例说明他们的相互作用方式。 4. 试说明真核细胞与原核细胞在基因转录，翻译及DNA的空间结构方面存在的主要差异，表现在哪些方面？ 5. 限制性核酸内切酶有哪几种类型？哪一种类型的限制酶最适合于基因工程，为什么？请简要说明理由。 2004年武汉大学硕士研究生入学考试分子生物学试卷 一名词翻译与解释 1synonymous codons 2RNA editing 3Spliceosome 4Microarray 5Plaque hybridization 6Open reading frame 7Ribozyme 8RFLP
1↓参与复制所需要的酶和蛋白因子有哪些。 2↓ (1) RNA 指导的DNA 聚合酶活性； (2) DNA 指导的DNA 聚合酶活性； (3) RNase H 的活性是指它能够从5→'3'和3→'5'两个方向水解DNA-RNA 杂合分子中的RNA 。 ↓转录与复制的区别。 (1)转录只合成与模板互补的单链（不对称转录）。 (2)转录得到的链是由NTP 组成的，而不是dNTP 。 (3)RNA 聚合酶不需要引物，可以从头起始转录。 (4)RNA 产物不与模板保持互补状态。相反，RNA 聚合酶在NTP 添加处的几个核苷酸之后，便将正在延长的链从模板上置换下来。这一置换对于同步进行的翻译至关重要，同时也使得一个基因可以同时转录成多条RNA 。 (5)转录的精确度（10-4）不如复制（10-7），因为它缺乏广泛的校正机制。 ↓简述转录延长特点。 ① 核心酶负责RNA 链延长反应； ② RNA 链从5'-端向3' -端延长，新的核苷酸都是加到3'-OH 上； ③ 对DNA 模板链的阅读方向是3'-端向5'-端，合成的RNA 链与之呈反向互补，即酶是沿着模板链的3'向5'方向或沿着编码链的5'向3'方向前进的； ④ 合成区域存在着动态变化的8 bp 的RNA-DNA 杂合双链； ⑤ 模板DNA 的双螺旋结构随着核心酶的移动发生解链和再复合的动态变化。 ↓简述细菌的转录终止机制 称为终止子（terminator ）的序列引发RNA 聚合酶从DNA 上脱离并释放已合成的RNA 链。细菌有两种类型的终止子。 Rho 非依赖型终止子或称固有终止子，通过其转录产物形成的发夹结构而终止转录。 Rho 依赖型终止子需要一个称为Rho 的蛋白质来诱发终止反应。 ↓逆转录酶和逆转录过程； 逆转录酶：能催化以RNA 模板合成双链DNA 的酶，全称依赖RNA 的DNA 聚合酶； 逆转录过程：分三步：首先是逆转录酶以病毒基因组RNA 为模板，催化d ＮTP 聚合生成DNA 互补链，产物是RNA/DNA 杂化双链；然后，杂化双链中的RNA 被逆转录酶中有RNase 活性的组分水解，被感染细胞内的Rnase Ｈ（Ｈ＝Ｈybrid ）也可水解RNA 链。RNA 分解后剩下的单链DNA 再用做模板，由逆转录酶催化合成第二条DNA 互补链。 ↓原核生物的转录过程； 一、转录起始需要RNA 聚合酶全酶;1. RNA 聚合酶全酶(α2ββ'σ)与模板结合，形成闭合转录复合体；2. DNA 双链局部解开，形成开放转录复合体；3. 在RNA 聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物： 二、 RNA pol 核心酶独立延长RNA 链;1. σ亚基脱落，RNA –pol 聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA 模板前移；2. 在核心酶作用下，NTP 不断聚合，RNA 链不断延长。 三、原核生物转录延长与蛋白质的翻译同时进行; 四、原核生物转录终止分为依赖ρ(Rho)因子与非依赖ρ因子两大类;转录终止指RNA 聚合酶在DNA 模板上停顿下来不再前进，转录产物RNA 链从转录复合物上脱落下来。 ↓真核生物的转录终止； 真核生物的转录终止和加尾修饰同时进行. 真核生物转录终止，和转录后修饰密切相关。转录不是在poly A 的位置上终止，而是超出数百个乃至上千个核苷酸后才停顿。在读码框架的下游，常有一组共同序列AATAAA ，再下游还有相当多的GT 序列。这些序列称为转录终止的修饰点。 ↓试述转录因子的分类及其作用特点。 一、通用转录因子，是RNA 聚合酶结合启动子所必需的一组蛋白因子，决定三种RNA(mRNA 、tRNA 及rRNA)转录的类别。 二、特异转录因子，为个别基因转录所必需，决定该基因的时间、空间特异性表达。 ↓细胞内信号转导分子种类。 （1）第二信使：在细胞内传递信息的小分子物质，如：Ca2+、DAG 、IP3、Cer 、cAMP 、 cGMP 、花生四烯酸及其代谢产物等。环核苷酸是重要的细胞内第二信使。 特点：①分子的浓度或分布在细胞外信号作用下发生迅速改变； ②类似物可模拟细胞外信号的作用； ③阻断该分子的变化可阻断细胞对外源信号的反应。 ④作为别位效应剂在细胞内有特定的靶蛋白分子。 （2）许多酶可通过其催化的反应而传递信号，作为信号转导分子的酶主要有两大类。 ①催化小分子信使生成和转化的酶，如腺苷酸环化酶、鸟苷酸环化酶、磷脂酶C 、 磷脂酶D （PLD ）等 ②蛋白激酶，作为信号转导分子的蛋白激酶主要是蛋白酪氨酸激酶和蛋白丝/苏氨酸 激酶。 ↓Ca2+在信息传递中如何发挥作用? 一、Ca 2+能与胞浆内的PKC 结合聚集至质膜，在DAG 和膜磷脂共同诱导下，PKC 被激活。 二、可激活钙离子／钙调蛋白依赖的蛋白激酶(Ca 2 ／ CaM-PK)。 三、可与细胞内其它钙结合蛋白结合，直接导致其构象改变，而表达其信息效应。 ↓试述cAMP 信息传递途径。 cAMP －PKA 途径-活化：①信号分子与受体结合，引起受体构象变化②受体活化G 蛋白（结合GTP ，α与βγ解离）③活化后的G 蛋白激活腺苷酸环化酶（AC ）④AC 催化ATP 生成cAMP ⑤cAMP 活化PKA （依赖cAMP 的蛋白激酶）⑥PKA 使目标蛋白磷酸化，调节代谢酶的活性或调节基因的表达 cAMP －PKA 途径-失活：信息分子与受体解离，受体失活→G 蛋白失活（GTP 被水解成GDP ，αβγ亚基重新聚合）→AC 失活→cAMP 被磷酸二酯酶水解→PKA 失活。 ↓IP3、DG 在信号转导中的作用； 由PIP2水解产生的IP3是水溶性的小分子物质，离开细胞膜后能在细胞质内很快地扩散， IP3与内质网膜上的特异Ca2+-通道结合后，就能使内质网腔里的Ca2+释放到细胞质，而且释放的Ca2+具有正反馈效应，即释出的Ca2+结合到Ca2+通道，再促进Ca2+释放。 DG 的重要作用是激活蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)，PKC 是一类Ca2+依赖的蛋白激酶，能使选择性的靶蛋白的丝氨酸/苏氨酸残基磷酸化。因IP3作用升高的细胞质内Ca2+能使PKC 从细胞质转移到细胞膜胞质面。在Ca2+，DG 和细胞膜磷脂成分中的磷脂酰丝氨酸的共同作用下激活PKC 。哺乳动物中脑细胞的PKC 浓度最高，其作用是使神经细胞的离子通道蛋白磷酸化，从而改变神经细胞膜的兴奋性。在许多细胞中，PKC 能通过激活磷酸化级联反应，最后使一些转录因子磷酸化并激活，从而调控相关基因的表达。 ↓酵母双杂交原理 酵母双杂交系统的建立得力于对真核细胞调控转录起始过程的认识。研究发现，许多真核生物的转录激活因子都是由两个可以分开的、功能上相互独立的结构域组成的。例如，酵母的转录激活因子GAL4，在N 端有一个由147个氨基酸组成的DNA 结合域(BD)，C 端有一个由113个氨基酸组成的转录激活域(AD)。GAL4分子的DNA 结合域可以和上游激活序列(UAS)结合，而转录激活域则能激活UAS 下游的基因进行转录。但是，单独的DNA 结合域不能激活基因转录，单独的转录激活域也不能激活UAS 的下游基因，它们之间只有通过某种方式结合在一起才具有完整的转录激活因子的功能。 ↓翻译机器的组成及其作用。 翻译机器由4种基本成分组成：mRNA 、tRNA 、氨基酰-tRNA 合成酶和核糖体。 在遗传信息传递中，翻译远比DNA 到RNA 的转录复杂，因为mRNA 不可能直接作为模板指导多肽链的合成。 (1)mRNA 的蛋白编码区由称为密码子的三核苷酸单位组成，密码子决定氨基酸的顺序。 (2)tRNA 介导氨基酸与密码子的相互作用。 (3)氨基酰-tRNA 合成酶使氨基酸与tRNA 结合起来。 (4)核糖体协调mRNA 与tRNA 的识别，并催化肽键的合成。 ↓叙述使翻译生成的新生多肽链成为有功能的蛋白质所需要经过的加工步骤。 加工步骤包括：化学修饰、折叠、亚基聚合等，其中最重要的是折叠。蛋白质合成后经靶向运输到达细胞的特异空间。 （1） 氨基酸残基的化学修饰：个别氨基酸可进行甲基化和乙酰化修饰；蛋白质糖 基化是一种复杂的化学修饰； 某些蛋白质加入异戊二烯基团；结合蛋白质加入辅基； 大多数蛋白质有二硫键的形成。 （2）肽链的折叠是按等级进行的： ① 在数毫秒内二级结构即沿多肽链形成。蛋白形成紧密但未折叠的结构，将其疏水基团置于内部，与水隔离； ② 其后的数秒或数分钟内，二级结构相互作用，通常经过一系列中间体构象，三级结构逐渐成形。 ③ 多肽链通过非极性残基间疏水作用的介导，自动折叠成一个称之为“熔球”的紧密结构。 ↓遗传密码的特点； 1.方向性:翻译时遗传密码的阅读方向是5'→3'，即读码从mRNA 的起始密码子AUG 开始，按5'→3'的方向逐一阅读，直至终止密码子。 2.连续性:编码蛋白质氨基酸序列的各个三联体密码连续阅读，密码子及密码子的各碱基之间既无间隔也无交叉。 3.简并性:一种氨基酸可具有2个或2个以上的密码子为其编码。这一特性称为遗传密码的简并性。 4.摆动性:反密码子与密码子之间的配对有时并不严格遵守常见的碱基配对规律，这种现象称为摆动配对; 5.通用性:从简单的病毒到高等的人类，几乎使用同一套遗传密码，因此，遗传密码表中的这套“通用密码”基本上适用于生物界的所有物种，具有通用性。 ↓试述（乳糖）操纵子的组成和功能。 大肠杆菌乳糖操纵子含Z 、Y 、A 三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵元件O ，一个启动子P 和一个调节基因I （是调节基因，编码产生阻遏蛋白）。 ↓试述乳糖操纵子的负性、正性调节机制。 一、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I 基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O 处，抑制RNA 聚合酶与启动子结合，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。 二、CAP 的正性调节：lac 启动子是弱启动子，在启动子上游有CAP 结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP 浓度升高，与CAP 结合，使CAP 发生变构，CAP 结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP 结合位点，激活RNA 聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。 ↓以乳糖操纵子例，说明细菌基因表达的调控原理； 1、乳糖操纵子（lac operon ）的组成：大肠杆菌乳糖操纵子含Z 、Y 、A 三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、透酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵元件O ，一个启动子P 和一个调节基因I （是调节基因，编码产生阻遏蛋白）。 2、阻遏蛋白的负性调节：没有乳糖存在时，I 基因编码的阻遏蛋白结合于操纵序列O 处，抑制RNA 聚合酶与启动子结合，乳糖操纵子处于阻遏状态，不能合成分解乳糖的三种酶；有乳糖存在时，乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白变构，不能结合于操纵序列，乳糖操纵子被诱导开放合成分解乳糖的三种酶。所以，乳糖操纵子的这种调控机制为可诱导的负调控。 3、CAP 的正性调节：lac 启动子是弱启动子，在启动子上游有CAP 结合位点，当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以乳糖为碳源的环境时，cAMP 浓度升高，与CAP 结合，使CAP 发生变构，CAP 结合于乳糖操纵子启动序列附近的CAP 结合位点，激活RNA 聚合酶活性，促进结构基因转录，调节蛋白结合于操纵子后促进结构基因的转录，对乳糖操纵子实行正调控，加速合成分解乳糖的三种酶。 4、协调调节：乳糖操纵子中的I 基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP 的正调控两种机制，互相协调、互相制约。 ↓当培养基中葡萄糖和乳糖共同存在时，细菌先利用哪一种糖？为什么? 1）乳糖操纵子由启动子、操作基因和编码β-半乳糖苷酶、通透酶和乙酰基转移酶的结构基因组成(这三个酶参与乳糖代谢)。若葡萄糖和乳糖共同存在时，细菌首先利用葡萄糖。 2）当葡萄糖存在时，其代谢产物使得cAMP 的浓度降低，使CAP 处于失活状态(其不能单独结合于CAP 位点)，RNA 聚合酶不能结合于乳糖操纵子上，使得三个酶的基因不能转录，从而细菌也不能利用乳糖。葡萄糖对Lac 操纵子的阻遏作用称为分解代谢阻遏。