①
雄激素受体与核受体辅助抑制因子的关系
廖国庆3,汤恢焕,吕新生
(中南大学湘雅医院外科,长沙410008)
[摘要] 目的:探讨雄激素受体(AR )与核受体辅助抑制因子(SMRT )是否能相互作用及其作用部位。方法:重
组构建AR ,SMRT 基因或其基因片段的质粒,体外转录,合成35S 标记融合蛋白,采用转染试验及哺乳动物细胞双杂交实验(transient transfection ,mammalian two 2hybrid test ),GST 沉淀试验(GST pull 2down assay ),间接免疫荧光观察
(indirect immunofluorescence staining )的方法,观察AR 与SMRT 的关系。结果:AR 具有内在的转录抑制活性,可与SMRT 直接作用,其作用部位:在AR 分子上位于配体结合区(LBD ),而DNA 结合区能增强这种作用;在SMRT 分子
上则位于羧基端核受体作用区(IDs ),在这个区域的L XXXIXXXI/L 功能基团突变后将会影响AR 与SMRT 的结合。结论:AR 通过其LBD 区与SMRT 分子中的ID2相互作用。
[关键词] 受体; 雄激素; SMRT ; 相互作用
[中图分类号] Q781 [文献标识码] A [文章编号] 167227347(2004)022*******
Androgen receptor and SMRT
L IAO Guo 2qing 3,TAN G Hui 2huan ,L U ??
Xin 2sheng
(Depart ment of S urgery ,Xiangya Hospital ,Cent ral South U niversity ,Changsha 410008,Chi na )
Abstract : Objective To explore the interaction between androgen receptor (AR )and silencing
mediator for retinoid and thyroid hormone receptor (SMR T )and their interaction site.Methods We recombined and constructed AR ,SMR T gene and gene fragments ,in vitro translated 35S fusion proteins to investigate the relationship between AR and SMR T using transient transfection ,mammalian two 2hy 2brid test ,GST pull 2down assay ,and indirect immunofluorescence staining.R esults AR possessed an intrinsic transcriptional repression activity and AR interacted directly with SMR T.One interactive sur 2face on AR was mapped to the ligand 2binding domain (LBD ),and the presence of DNA binding domain enhanced this interaction.The binding surface on SMR T was mapped to the carboxyl 2terminal nuclear receptor interacting domain (ID ),and mutation of the L XXXIXXXI/L corepressor motif within this do 2main interferred with the interaction.Conclusion LBD domain on the AR can interact with ID2motif on the SMR T.
K ey w ords : receptor ; androgen ; SMR T ; interaction
[J Cent South Univ (Med Sci ),2004,29(2):0157206]
AR (androgen receptor )是核受体的成员之一,它不但与男性成熟有关,而且在前列腺癌进展中有重要作用[1]。SMR T (silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptor )是核受体辅助抑制因子,目前大量研究结果表明,SMR T 对许多核受体的活性,如ER ,PR ,等具有抑制作用,对平衡体内激素的消涨具有重要作用[2,3]。但AR 与SMR T 的关系如何,目前研究不多。本研究旨在探讨AR 能否与SMR T 作用及其作用部位。1 材料与方法
1.1 质粒和试剂 AR cDNA ,G al4D BD 与AR 的融
合基因片段(G 42AR A/B ,G 42AR DE ,G 42AR )分别由Dr.Chang (R ochester 大学医学中心,R ochester ,NY )和Dr.Lirim Shemshedini (T oled o 大学,T oled o ,Ohio )惠赠。G 4s 2AR ,G 42AR 是由本实验室构建,用全长人类AR cDNA 插入到pCMX 2G al Xho1和Asp718位点之间,PCR 扩增,由此构建1～500,1～660,501～660,501～919,和661～919AR 各片段,并插入到pCMX 2HA 载体
中,构建重组新的AR 及AR 片段质粒。人类SMR T e [4]
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51①收稿日期:2003211220 作者简介:廖国庆(19622),男,湖南衡东人,博士,副教授,主要从事肿瘤外科的基础和临床研究。3通讯作
者,E 2mail :liaoguoqing @https://www.doczj.com/doc/b410646828.html,
中南大学学报(医学版)
J Cent South Univ (Med Sci )
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及GS T2cSMR T,GS T2SMR T2ID1和GS T2SMR T2ID2基因是作者在美国麻州大学的实验室克隆并已报道[5]。用定向位点突变方法进行G ST2SMRT ID1和ID2点突变。用于点突变的寡核甘酸序列:I D1m t5′2G C A2 C A T C AG TG AG G C CG C C AC AC AG G ACT AC AC C23′和5′2G G T2 G T AG T C CTG TG G CG G C CT C ACTG A TG TG C23′;I D2m t5′C A TG G G G CTG G AG G C CG C AG CT AG A A AG G C ACT C A TG23′和5′2C A TG AG TG C CTTT CT AG CTG CG G C CT C C AG C C C C A TG2 3′。
雄激素激动剂DHT(dihydrotestosterone)和雄激素拮抗剂flutamide(F)购于Sigma公司。人肾293细胞购于A TCC公司。
1.2 转染试验及哺乳动物细胞双杂交实验 转染前一天,人肾293细胞种植在122孔的培养皿中(10000细胞/孔)[10%CSFBS(G ibco)无酚红DM EM]。混合AR表达载体,内对照载体pCMX2βG al,luceferase报告基因,以及空载体p GEM(平衡),体积为30μl,并加入1倍体积的0.5mol CaCl2和2倍体积的2×BBS[50mmol N,N2bis(22hydrox2 yethyl)222amminoethanesulfomic acid(B ES;Cal2 biochem),280mmol NaCl,1.5mmol Na2HPO4,p H 6.95]。室温下静置10min后;加入到培养细胞中; 5%CO2培养箱培养12h,室温下磷酸缓冲液(PBS)洗2次,更换新的培养基,用或不用配体处理,继续培养24～48h后,进行luciferase和β2galactosidase 测定[6]。luciferase活性用ML X微量滴定板加入100μl测试液(100mmol KPO4,5mmol A TP,10 mmol MgCl2)和100μl luciferase底物溶液(10mmol D2luciferin溶于100mmol KPO4,p H7.8)。luciferase 的活性用β2galactosidase活性来校正。
1.3 GST沉淀试验 5μg GST融合蛋白与5μl 体外合成并用35S2标记的AR蛋白混合,振动,在4℃孵育过夜(孵育缓冲液20mmol HEPES,pH7.7,75 mmol K Cl,0.1mmol EDT A,
2.5mmol MgCl2,0.05% Nonidet P240,1mmol dithiothreitol,和1μg/ml小牛血清蛋白),然后用孵育液洗5遍,3000r/min离心收集沉淀珠子,再用SDS样本缓冲液洗出结合之蛋白, SDS2SPA G电泳,放射自显影,观察结果。
1.4 间接免疫荧光观察 将Hela细胞种植于有coverslips122孔培养皿中,24h后进行转染,转染全长人类SMR T或带有HA2标记物的全长AR或AR 片段。SMR T和AR用抗2SMR T的鼠抗单克隆抗体(Grp5,G ene Tex)和抗2HA的兔抗多克隆抗体(Medical&Biological Lab)孵育,然后与结合有Flu2 orescein(绿色)或rhodamine(红色)荧光物的第2抗抗体孵育。细胞核用DAPI染色。免疫染色方法同文献[7]。简而言之,用PBS洗细胞2次,用methanol/accetone(1:1)在冰上固定1min,然后用1抗体和2抗体孵育,而细胞核用DAPI(4′,62diamidi2 no222phenylindole dihydrochloride hydrate)(Sigma)染色,prolong antifade试剂盒(分子探针)封片,倒置荧光显微镜(Axiovert200,Z eiss)观察,其图象用CCD 照相机(Axiocam)和Axiovision软件(Z eiss)处理和记录。
2 结 果
2.1 AR与SMR T的相互作用 G4及G4s融合蛋白分子构件示意图如图1A所示。G42AR融合蛋白调节G al4依赖的MH1002tk2luciferase报告基因的能力如图1B所示,G4s2AR和G42AR显示有5.2和
3.5倍的抑制作用,而G42ARA/B表现出强烈的活性;而G42ARDE和G42ARE也显示出2.5和4倍的抑制作用。
根据AR可抑制G al42DBD基础活性的能力,推测AR与核受体辅助抑制因子如SMR T和N2CoR 之间可能存在某种关系,本文结果发现G42AR融合蛋白能与VP2cSMR T融合蛋白相互作用。共转染G42AR和VP2cSMR T[含病毒VP16激活区域,融合SMR T2C端的核受体作用区(IDs)]后,与G42AR 或VP相比,VP2cSMA T能增强G42AR活性2.2倍,同样,VP2cSMA T能增强G42ARA/B的活性4倍, G42AR DE7倍,和G42ARE8.5倍(图1C)。而VP2 cSMR T对G4没有影响(结果未显示)。然而DHT 处理前后上述结果几乎没有变化。
2.2 体外试验中AR与SMR T的相互作用 为确定在细胞内表现的AR与SMR T的相互作用是否是通过蛋白2蛋白形式作用,笔者进行了体外的GST 沉淀试验。一系列的缺失突变构建了不同AR及AR片断(图2A)。35S2AR明显能与cSMR T和SM2 R T2ID2相互作用(图2B),但不能与GST和SMR T2 ID1作用(图2C)。AR的配体对其无影响(图2D)。
进一步分析AR各种片段与cSMR T2ID1,SM2 R T2ID2,以及ID功能基团点突变体相互作用的结果,发现GST2cSMR T与AR片段的1～660结合较弱,与501～919最强,661～919中等,(图2E)。AR 1～500既不能与GST2cSMR T)(图2E)相结合,也不能与GST2SMR T2ID1或ID2(图2F)结合;同样,不管有无DHT的存在,AR DBD(501～660)也不能与SMR T2ID1,ID2结合(图2G)。而SMR T2ID2能与仅含LBD AR661～919区段结合(图2H)。SMR T2
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ID2的结合在AR 2DBD 的介入下(AR501～919)明显增强(图2I ),且不受DHT 的影响,这与AR 全长与cSMR T 结合的结果一致(图2D )。尽管分开的AR A/B 和DBD 与SMR T 不能结合,但AR1～660(含有AR A/B 和DBD )却显示与SMR T 2ID2能够结合(图2K )。同理,GT 2AR (含有G alDBD )显示能
与SMR T 相互结合(图1C )。2.3 AR 和SMR T 分子亚细胞水平的位置重叠 Hela 细胞中共转染AR (HA 标志)和全长SMR T (SMR Te ),通过双重荧光染色来观察在亚细胞水平这两种蛋白分子位置关系。由于AR 没有配体存在
时不稳定,因此转染在含有正常牛血清情况下进行。结果显示90%的细胞中,AR 与SMR T 均有表达,且SMR T 斑点的大小明显缩小或成微小斑点或是不定形状(图3,A 行)。另在10%的转染细胞中AR 和SMR T 其颗粒同时变得弥散(图3,B 行)。共转染SMR T 和AR501～919,661～919,及AR1～660片
段,结果显示AR501～919和AR661～919其颗粒也与SMR T 颗粒发生重叠(图3,C ,D 行)。而AR1～660氨基酸片段显示颗粒弥散,表现AR1～660能瓦解SMR T 颗粒(图3,E 行)
。
图1 AR 调节转录活性及SMRT 的相互作用 A :GAL4DBD 2AR 和VP 2cSMRT 融合蛋白结构示意图。G4s (氨基酸1～74)是G al4DBD 缺失
75～147的变异体。AR 分子的功能区:A/B ,位于AR 分子的氨基端,它含有AF 21功能区;C ,DNA 结合区域;D ,绞链区;E ,配体结合区,含有AF 22功能区。VP 2cSMRT 是VP16转录激活功能区与SMRT C 2羧基端的最后422个氨基酸(在此区域中含有2个核受体作用区)融合形成的融合蛋白的分子序列。B :哺乳动物细胞双杂交实验显示G42AR 融合蛋白的转录活性。全长AR 分子,D/E 和E 区段具有较强的转录抑制活性。而A/B 区段本身具有转录激活功能。C :哺乳动物细胞双杂交实验示有无DHT (100nmol )的存在,AR 均能与SMRT 相互作用。其中VP 2cSMRT 与全长AR 作用较弱,而与ARA/B ,D/E 和E 区段作用较强。DHT 对这些作用无影响。Fig.1 Transcriptional regulation by AR and its interaction with SMRT A :Schematics of the G al4DBD (G4)2AR and VP 2cSMRT fusionproteins.
G4s (amino acids 1～74)contains the minimal G al4DBD.AR domains are depicted as A/B ,the N 2terminal domain that contains the AF 21func 2tion.C represents the DNA 2binding domain ;D represents the hinge region ;and E represents the ligand 2binding domain that contains the AF 22function.VP 2cSMRT contains the transactivation domain of VP16fused to the C 2terminal last 422amino acids of SMRT that contains two nu 2clear receptor 2interacting domains.B :Mammalian one 2hybrid assay showing transcriptional activity of G42AR fusion proteins.The full 2length
AR ,the D/E ,and E domains contain moderate transcriptional repression activity.A/B domain contains constitutive transcriptional activation function.C :Mammalian two 2hybrid assay showing interactions of AR with SMRT in the absence or presence of DHT (100nmol ).VP 2cSMRT interacts weakly with the full 2length AR but strongly with the AR A/B ,D/E ,and E domains.DHT has no effect on these interactions.
9
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图2 SMRT 与AR 的作用区域 A :AR 缺失突变及与SMRT 结合有关区域示意图。B :SMRT 突变及与AR 作用的相关区域示意图。数字
代表起始氨基酸的位置。
Δ指示第2352残基以下缺失46个氨基酸。ID1和ID2突变体是由定向点突变产生。C :GST 沉淀试验显示GST 2cSMRT ,SMRT 2ID1,和SMRT 2ID2与35S 标记的全长AR 蛋白分子(35S 2AR )的相互作用的结果。D :GST 沉淀试验显示AR 的激动剂
或拮抗剂在AR 与GST 2cSMRT 结合的影响。S 代表溶剂(20%DMSO ,80%乙醇);D 代表100nmol dihydrotestosterone (DHT );F 代表1μmol flutmide 。E :GST 沉淀试验显示AR 各种片段与GST 2cSMRT 相互作用的结果。F ～K:GST 沉淀试验显示AR 各种片段与GST 2SM 2
RT 2ID1(ID1)和GST 2SMRT 2ID2(ID2)的相互作用。Wt 为野生型;mt 为突变体。
Fig.2 Interacting domains between SMRT and AR A :Schematics of AR deletion mutants and their relative binding to SMRT.B :Schematics of
SMRT mutants and their relative interactions with AR.Numbers indicate starting and ending amino acids based on the human SMRTe sequence.
Δindicates an internal deletion of 46amino acids following residue 2352.The ID1and ID2mutants (mt )were generated by site 2directed muta 2
genesis.C :GST pull 2down assay showing interactions of GST 2cSMRT ,SMRT 2ID1,and SMRT 2ID2with 35S labeled full 2length AR (35S 2AR ).AR binds to SMRT 2ID2but not SMRTID1.D :GST pull 2down assay showing the effect of androgens on binding of AR to GST 2cSMRT.S rep 2resents solvent (20%dimethyl sulfoxide ,80%ethanol );D :100nmol dihydrotestosterone ;F represents 1μmol flutamide.E represents interac 2tions of various AR fragments with GST 2cSMRT in the GST pull 2down assay.F ～K:Interactions of various AR fragments with GST 2SMRT 2ID1(ID1)and GST 2SMRT 2ID2(ID2)domains in the GST pull 2down assay.wt represents wild type ;mt represents mutant.
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图3 免疫荧光双重染色结果 在Hela细胞中共表达AR或AR片段和SMRT,两者的表达颗粒明显重叠Fig.3 Immunofluorescence colocalization of AR and SMRT in Hela
3 讨 论
本研究中,结果显示AR可与SMR T结合,这种结合系通过SMR T2ID2和AR DE区段完成,且AR 与SMR T的结合不受配体的影响。
用G al42DBD融合蛋白分析显示,AR含一定的转录抑制活性,这种抑制活性的区域是AR分子的E 区域(图1B)。笔者发现AR2N端A/B区含有相当强的转录激活功能,这种活性在完整的AR分子中不能表现,G42AR融合蛋白抑制基础转录活性的能力与AR能与抑制因子SMR T相互作用相一致。哺乳动物细胞双杂交实验中提示SMR T能与AR A/B 和E区段相作用。体内的实验结果进一步被体外GST沉淀试验证实,表明SMR T能通过SMR T2ID2直接与AR相互作用。而SMR T2ID1与AR没有亲合力。ID1和ID2有共同的L XXXIXXXI/L序列[1,8～11],介导SMR T或N2COR与核受体相结合。有趣的是,当L XXXIXXXI/L辅助抑制功能基团突变后,SMR T2AR相互作用则被抑制,提示SMR T与AR的结合机制可能与其他的核受体相似[1,9]。
本组资料表明,在AR蛋白分子上有两个位点与SMR T相结合,其确切机制有待阐明。与SMR T 相结合的最强片段是AR的羧基端501～2919区,此片段中含有DNA结合区(DBD)和配体结合区(LBD),由于LBD能单独与SMR T相结合,而DBD 却不能。故推测LBD正是SMR T的结合部位,DBD 区的存在有助于稳定LBD构型,以与SMR T更好地结合。或者说在DBD区段存在与SMR T微弱的结合能力,此部位可协同LBD与SMR T结合。同理, AR DBD也能稳定A/B区的构型,而使之具有与SMR T结合的能力。与Smith等[13]的报道相反的是,在GST沉淀试验中,不论是用cSMR T或SM2 RT2ID2均显示AR A/B与SMR T不能结合,然而SMR T却很容易与AR LBD相结合,提示LBD是SMR T结合的良好部位。似乎LBD和报道的A/B 结合部位均需要SMR T2ID2区域中L XXXIXXXI/L 功能基团的结构完整,暗示SMR T结合到AR LBD 或A/B区的机制相关。由于ID1和ID2辅助抑制
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雄激素受体与核受体辅助抑制因子的关系 廖国庆,等
基团的基因序列相似,被AR分子辨认ID1或ID2核甘酸序列的机制目前不清楚。
与RAR和TR不同[2,5,6],RAR和TR与SM2 R T的结合需要激素的存在或RR,ER需有拮抗剂的存在[12～14]。在体外结合试验中,全长AR分子与SMR T的结合不受配体存在与否的影响(图2D)。与哺乳动物细胞双杂交实验中AR501～919片段与SMR T能强烈地结合以及不受配体的影响的结果相一致。有报道指出[15],相当数量的细胞含有胞浆型的SMR T染色,暗示SMR T可能与AR的信息传导有关,在配体的作用下,胞浆中AR的转化过程在SMR T的帮助下,能使AR以无活性的状态稳定在胞核或胞浆中。
无配体作用的AR分子在Hela细胞中主要分布在细胞核中,而在COS21细胞中主要在细胞浆。存在激素时,AR转移到核中,并以微小颗粒分布[16～18]。本实验数据显示在Hela细胞中共表达AR和SMR T,两者的表达颗粒明显重叠(图3),故在体内AR和SMR T有关。与RAR聚集到SMR T 颗粒不同[15],AR的作用可能是分散SMR T颗粒,这是由于有AR存在时,转染有SMR T的细胞中其颗粒表现为微小弥散型。有可能AR可以使SMR T移位到在核内AR分子的位置。此结果与文献报道一致[19],即Ch IP(chromatin immunoprecipitation)实验结果证实,在AR拮抗剂的存在下,正常的AR基因靶向启动子上有SMR T分子的存在。很可能在拮抗剂的存在下,AR结合到AR的反应片段时,由于缺乏辅助激动因子,AR吸引SMR T结合到AR基因的靶向启动子上。相反,在AR激动剂的存在下, SMR T能与辅助激动因子竟争,仅在SMR T过度表达时,SMR T结合到有配体存在的AR分子上。
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(本文编辑 陈丽文)
261中南大学学报(医学版),2004,29(2)
雄激素及受体与卵巢癌的相关研究 发表时间：2018-02-04T11:59:23.493Z 来源：《医师在线》2017年11月上第21期作者：郑威 [导读] 约70%患者确诊时已为晚期（FIGO分期 III期和IV期），且复发后治疗效果差，5年生存率仅为30％-40%，死亡率居妇科恶性肿瘤首位[1]。 （南京市溧水区人民医院东南大学附属中大医院溧水分院，江苏南京 211200） 摘要：卵巢癌是最常见的妇科恶性肿瘤之一，约70%患者确诊时已为晚期（FIGO分期 III期和IV期）。目前关于卵巢癌的发病机制尚不十分清楚。卵巢癌是性激素敏感性肿瘤。研究表明，雄激素与卵巢癌的发生发展及预后密切相关。雄激素以依赖或非依赖AR信号通路的方式促进人卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移，提示或可将AR作为卵巢癌的治疗靶点。综述雄激素及其受体与卵巢癌的关系及抗雄激素治疗现状。 关键词：雄激素；雄激素受体，卵巢癌 卵巢癌(ovarian cancer，OC)是严重威胁妇女生命的最常见的妇科恶性肿瘤之一，由于其发病隐匿和缺乏有效的早期诊断方法，约70%患者确诊时已为晚期（FIGO分期 III期和IV期），且复发后治疗效果差，5年生存率仅为30％-40%，死亡率居妇科恶性肿瘤首位[1]。 目前关于卵巢癌的发病机制尚不十分清楚，涉及持续排卵、炎症反应、促性腺激素、雄激素/孕激素等多个假说。而大量流行病学、遗传学及生物学等研究表明，内分泌因素在卵巢癌的发生发展中起关键作用。雄激素的过度刺激能够促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、促进细胞侵袭和转移，增加卵巢癌的发生风险[2]。而抑制雄激素的生物合成、代谢，利用雄激素受体拮抗剂，作为治疗雄激素及其受体相关肿瘤，在临床上已得到广泛关注与研究。 因此，本文将回顾雄激素受体及抗雄激素治疗与卵巢肿瘤的研究成果，以期对其应用于临床，指导治疗方案的选择提供理论依据。 一、雄激素受体 雄激素主要通过与雄激素受体（androgen receptors，AR）相结合而发挥其调节细胞生长和分化等重要作用。AR是类固醇激素受体，属于核受体(nuclear receptor，NR)超家族成员的一种配体依赖型的反式转录调节蛋白。在多种人体正常组织及病变组织中均可检测到AR的表达。AR包含AR-α和AR-β2种受体亚型，以及DNA 结合域（DNA binding domain，DBD）、配体结合域（ligand binding domain，LBD）、铰链区域（HD）和核定位区域（nuclear localization domain，NLD）4个结构域。 通常情况下，AR存在于细胞质中与多种细胞因子，如热休克蛋白（heat shock proteins，HSP）相结合，以稳定的复合物形式存在。除了与雄激素结合发挥转录因子的作用，在某些病理条件下，被雄激素激活的AR还可与胞质中特定的蛋白分子相互作用，调节相关信号通路中一系列下游蛋白的表达，继而导致细胞功能的改变。此外，细胞质中多种蛋白激酶可通过磷酸化直接激活AR，调控靶基因的表达，而此过程并不依赖于AR与雄激素的结合而实现。 二、雄激素受体与卵巢癌 研究表明，卵巢癌是性激素敏感性肿瘤，具有降低雄激素水平特点的治疗方案，如使用口服避孕药，输卵管结扎和子宫切除术等，均能够降低卵巢癌的发生风险。而具有高雄激素水平特点的疾病，如多囊卵巢综合征 (polycystic ovarian syndrome，PCOS)患者，发生卵巢癌的风险增加。此外，卵巢癌多见于绝经后，此时卵巢类固醇激素平衡由雌激素转向雄激素，也提示了雄激素与卵巢癌的相关性。 基因分析表明，编码AR基因中CAG重复序列的多态性影响AR活性。随着CAG重复序列编码的谷氨酰胺数量的增加，AR的反式激活能力下降。而根据一系列关于CAG重复序列多态性与卵巢癌发生风险的大样本研究表明，含较长CAG重复序列的AR似乎能够降低罹患卵巢癌的风险。 三、抗雄激素治疗与卵巢癌 多种体内外研究均表明，雄激素以依赖或非依赖AR信号通路的方式促进人卵巢癌细胞的增殖、侵袭和转移，提示在靶向治疗中，或许可以将AR作为卵巢癌的治疗靶点。目前，激素疗法在乳腺癌、子宫内膜癌临床治疗中已得到广泛应用。临床上最为常见的AR拮抗剂，多为非甾体类药物，与甾体类AR拮抗药物相比，因其抗雄激素的活性较好，且无甾体类药物的激素样副作用得到广泛研究。 然而，迄今为止，只有有限数量的临床试验评估了抗雄激素治疗在卵巢癌中的疗效。如研究表明，采用具有抗雄激素作用的非类固醇类药物氟他胺（flutamide），对于已行铂类为基础的一线化疗患者进行治疗，并没有取得理想的治疗效果，甚至部分患者的病情有所进展，且氟他胺具有严重的肝毒性，部分患者出现恶心、呕吐等药物不良反应[3]。总而言之，AR拮抗剂作为卵巢癌可行的治疗方案尚未得到验证，而卵巢作为一种内分泌器官，抗雄激素疗法在卵巢癌中的应用值得研究和期待。明确卵巢癌的组织及病理学类型、肿瘤的进展阶段及AR的表达情况，结合特殊的分子标记物，使抗雄激素有效治疗卵巢癌成为可能。 综上所述，雄激素及受体在卵巢癌的发生发展中发挥重要作用，同时可作为卵巢癌患者预后的预测指标。由于卵巢癌的组织来源不同、病理类型不同，因而雄激素受体表达情况不同，且对抗雄激素疗法的反应不同。因此，需要进一步的研究来评估雄激素受体及抗雄激素在临床中的诊断及治疗价值，以期对其应用于临床诊断和治疗卵巢癌提供更为可靠的理论依据。 参考文献： [1] Syrios, J., S. Banerjee, and S.B. Kaye, Advanced epithelial ovarian cancer: from standard chemotherapy to promising molecular pathway targets--where are we now? Anticancer Res, 2014. 34(5): p. 2069-77. [2] Siegel, R., et al., Cancer statistics, 2011: the impact of eliminating socioeconomic and racial disparities on premature cancer deaths. CA Cancer J Clin, 2011. 61(4): p. 212-36. [3] Lukanova, A. and R. Kaaks, Endogenous hormones and ovarian cancer: epidemiology and current hypotheses. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2005. 14(1): p. 98-107.
目录 中文摘要 (Ⅰ) Abstract (Ⅲ) 缩略语/符号说明 (Ⅵ) 前言 (1) 研究现状、成果 (1) 研究目的、方法 (4) 对象和方法 (5) 结果 (26) 讨论 (35) 结论 (40) 参考文献 (41) 发表论文和参加科研情况说明 (47) 综述 (48) 转录因子GATA2的研究进展 (48) 综述参考文献 (57) 致谢 (65) 个人简历 (66) V
缩略语/符号说明 英文缩写英文全称中文全称 AR Androgen receptor 雄激素受体 ADPC Androgen-dependent prostate cancer 激素依赖性前列腺癌BCA bicinchoninic acid 2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠Bp Base pair 碱基对 BPH benign prostatic hyperplasia 良性前列腺增生 BSA Bovine serum albuminc 牛血清白蛋白 CO-IP Co-Immunoprecipitation 免疫共沉淀 ChIP chromatin immunoprecipitation 染色质免疫共沉淀 CRPC castration-resistant prostate cancer 去势抵抗性前列腺癌DMSO Dimethyl sulphoxide 二甲基亚砜 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 DEPC Diethyl pyrocarbonate 二乙基焦磷酸酯 ECL electrochemiluminescence 化学发光试剂 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 FBS Fetal bovine serum 胎牛血清 GAPDH Glyceraldehyde-4-phosphate 甘油醛-3-磷酸脱氢酶dehydrogenase LB Luria Bertanimin LB培养基 mRNA Message RNA 信使RNA OD Optical density 光密度 PAGE Polyacrylamide electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳PBS Phosphate buffer saline 焦磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链反应 PMSF Phenylmethylsulfonyl fluoride 苯甲基磺酰氟 VI
第十三章组织胺H2受体拮抗剂的分析 消化道溃疡疾病是一种常见病、多发病，直接原因是胃酸、胃蛋白酶分泌过多，超过了胃自身分泌的粘液对胃的保护能力，含有胃酸、胃蛋白酶的胃液使胃壁消溶损伤而引起溃疡。在1964年H 2 受体拮抗剂出现以前，对消化道溃疡很少有满意的治疗方法，所用的药物大多是中和胃酸的无机物和保护胃粘膜的凝胶 剂。H 2受体拮抗剂能特异性地阻断胃壁细胞的H 2 受体，拮抗组胺或组胺受体激动 剂所致的胃酸分泌，缓解或在一定程度上治愈消化道溃疡疾病。H 2 受体拮抗剂的 化学结构特点是以甲硫乙胺的侧链取代H 1 受体拮抗剂的乙基胺链，常用的药物可分为咪唑类、呋喃类、噻唑类和哌啶甲苯类。咪唑类如西咪替丁（Cimetidine）、依烃替丁（Etintidine）、奥美替丁（Oxmetidine）,呋喃类如雷尼替丁（Ranitidine），噻唑类如法莫替丁（Famotidine）、尼扎替丁（Nizatidine），哌啶甲苯类如罗沙替丁（Roxatidine）等。本章以西咪替丁、雷尼替丁、法莫替 丁为例，介绍H 2 受体拮抗剂的结构与性质、体内过程和测定方法。 第一节代表药物 一、西咪替丁 西咪替丁分子式C 10H 16 N 6 S，分子量252.34，为白色或类白色结晶性粉末；几 乎无臭，味苦。在甲醇中易溶，乙醇中溶解，异丙醇中略溶，水中微溶，稀盐酸中易溶。其盐酸溶液（0.9 →1000）在218nm处的吸收系数（E1% 1cm ）为751-797。熔点：139℃~144℃。 西咪替丁的化学稳定性良好。在室温干燥密闭状态下，5年内未见分解；加热至100℃持续48小时仍是稳定状态。紫外线对西咪替丁无催化分解作用。用3%的过氧化氢处理西咪替丁，可生成西咪替丁的硫氧化物。 C H3 N H N CH2SCH2CH2NH CNHCH3
盐皮质激素受体拮抗剂的研究进展 夏俊锋 龚开政 张振刚 （扬州大学附属医院心内科，江苏 扬州 225000） 〔关键词〕盐皮质激素受体拮抗剂；临床药物试验；靶器官保护 〔中图分类号〕Ｒ972〔文献标识码〕A 〔文章编号〕1005-9202（2019）03-0724-04；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2019.03.068 基金项目：国家自然科学基金（81770262）；江苏省科技厅社会发展 重点研发项目（BE2015663） 通信作者：龚开政（1978-），男，博士，主任医师，主要从事心力衰竭 研究。 第一作者：夏俊锋（1987-），男，硕士，住院医师，主要从事心力衰竭 研究。 盐皮质激素（MC ）受体（MＲ）有多重配体，其中包括醛固酮和皮质醇等， 醛固酮是MC 的代表，由球状带分泌， 醛固酮可作用于肾远曲小管和集合管上皮细胞， 当进入这两类细胞胞质后，与胞质内受体结合， 形成激素-受体复合物，激素-受体复合物穿过核膜进入核内， 通过基因调节机制，生成醛固酮诱导蛋白， 该蛋白可能是基底侧膜上的钠泵，因而可加速细胞内钠离子被泵出和钾离子被泵入细胞，因此肾素-血管紧张素-醛固酮系统（ＲAAS ）在调节钠和钾的吸 收发挥重要作用。而皮质醇则是糖皮质激素（GC ）的代表，由束状带及网状带分泌，属于类固醇类激素〔1〕 。在正常情况下， 醛固酮起着MＲ激动剂的作用， 而皮质醇则起着拮抗剂的作用〔2〕 ，两者都与MＲ几乎具有同等的结合力〔3〕 。心力衰竭、慢性肾脏病（CKD ）、原发性醛固酮增多症、高血压等疾病与激活状态的MＲ增加水平密切相关。本研究对MＲ拮抗剂（MＲA ）的研究进展进行综述。1 MＲA 治疗心血管疾病 目前临床批准的MＲA 包括螺内酯、坎利酮和 依普利酮。螺内酯和依普利酮都被认为是目前治疗心血管疾病的非常有效的药物。临床经验证明， 在慢性心力衰竭（CHF ）患者中使用血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI ）和地高辛的基础上， 加用螺内酯可明显降低病死率， 并且对左心室心肌纤维化，血流动力学及临床症状均有改善。CHF 患者单用螺内酯 效果较差， 但与ACEI 类合用时可降低血管紧张素Ⅱ及醛固酮水平，在减少患者的病死率的同时还可 以降低室性心律失常的发生率， 效果更佳，因此建议在已经接受了ACEI 和β受体阻滞剂的心力衰竭管 理中加用MＲA ，这三类药被称为治疗射血分数降低 心力衰竭（HFＲEF ）的 “金三角”〔4〕 。2 传统的类固醇类MＲA 第一代MＲA 代表药是螺内酯，当血钠降低和 血钾升高时均能促进醛固酮的分泌， 与血钾仅升高0.1mmol /L 就能刺激醛固酮分泌不同的是，血钠显 著降低（10%）时才能发生上述变化〔1〕 。螺内酯作 为醛固酮的竞争性拮抗剂， 是因为其本身及其代谢产物坎利酮的分子结构与醛固酮相似， 因此其利尿作用与血醛固酮浓度相关， 仅在体内有醛固酮时才能发挥其利尿作用， 切除肾上腺的动物实验也证实了这一点， 如果切除动物肾上腺则利尿作用消失〔5〕 ， 同时需要注意的是该药能拮抗雄激素受体（AＲ），导致男性阳痿，性功能障碍，女性男性化。这一副作用会限制患者的长期服用， 停止服药后上述副作用会消失〔1〕 。第二代MＲA 依普利酮是选择性醛固酮受体拮抗剂， 它克服了螺内酯的副作用，因此副作用较少， 具有广阔的临床使用前景，另一方面依普利酮抗醛固酮活性的效果是螺内酯的2倍 〔5〕 。第 一项螺内酯随机评估研究（ＲALES ）发现， 螺内酯组较安慰剂组高钾血症的发病率稍高一些〔6〕 。服用螺内酯尤其对重度心力衰竭和左室射血分数降低的患者有益处。第二项是依普利酮对急性心肌梗死后心力衰竭的疗效和生存影响的研究（EPHESUS ），该试验对象是陈旧性心肌梗死后左心室收缩功能障碍 和心力衰竭的患者， 结果发现依普利酮治疗组患者心血管死亡率和心血管并发症的风险降低13%， 血钾水平较高（＞5.5mEq /L ）时依普利酮组占21%，安慰剂组占15%，但该试验的结论是依普利酮并不 会导致高钾血症〔7〕 。另一项依普利酮对轻度症状心力衰竭患者住院和生存影响的研究（EMPHASIS-HF ）同样发现，依普利酮对该类患者有益处，受益人群更为广泛， 与未服用该药的患者相比，服用该药患者的心血管死亡率降低24%， 并且因心力衰竭产生的住院率减少42%， 但依普利酮组发生高钾血症却·427·中国老年学杂志2019年2月第39卷
四、名词解释 1.阈剂量 11.停药反应 21.药理效应 2.极量 22.不良反应 3.受体脱敏 13.选择性作用 23.药源性疾病 4.受体增敏 14.受体拮抗剂 24.安全范围 5.效能 15.受体激动剂 25.受体 6.亲和力 16.受体部分激动剂 26.配体 7.后遗效应 17.兴奋作用 27.量反应 8.毒性反应 18.竞争性拮抗药 28.质反应 9.副作用 19.非竞争性拮抗药 29.常用量 10.量效关系 20.药物作用 30.特异质反应 1、阈剂量：刚引起药理效应的剂量。 2、极量：国家药典规定对某些药物允许使用的最高剂量。 3、受体脱敏：是指长期使用激动药，或受体周围的某种生物活性物质浓度高，组织或细胞对激动药的敏感性和反应性下降的现象。 4、受体增敏：是指长期使用拮抗药，或受体周围的某种生物活性物质浓度低，组织或细胞对激动药的敏感性和反应性升高的现象。 5、效能：药物的最大效应。 6、亲和力：药物与受体结合的能力。其大小与药物受体复合物解离常数的负对数成正比。 7、后遗效应：停药后血药浓度已降至阈浓度以下时残存的药物效应。 8、毒性反应：由于药物剂量过大、用药时间过长而引起的机体损害性反应，一般比较严重。 9、副作用：治疗量时产生与治疗目的无关的作用。 10、量效关系：在一定范围内，药物剂量的大小与学药浓度成正比，也与药物效应成正比。 11、停药反应：突然停药后原有疾病的加剧，如长期服用可乐定，停药次日血压升高。 12、ED50：引起50%动物阳性反应的剂量。 13、选择性作用：多数药物在适当剂量时，只对少数组织或器官发生明显作用，而对其它组织或器官作用很小或无作用的特性。 14、受体拮抗剂：与受体有较强的亲和力而无内在活性的药物。 15、受体激动剂：与受体有较强的亲和力和有内在活性的药物。 16、受体部分激动剂：与受体有较强的亲和力和有较弱内在活性的药物。 17、兴奋作用：机体器官原有的功能水平提高。 18、竞争性拮抗药：与激动药互相竞争相同受体，与受体可逆性结合，从而阻断激动剂作用的药物。 19、非竞争性拮抗药：能不可逆地作用于某些部位而妨碍激动药与受体结合，并拮抗激动药的作用。20、药物作用：药物对机体细胞间的初始作用，是动因。是分子反应机制，有其特异性。 21、药理效应：药物作用的结果，机体反应的表现，对不同脏器有选择性。 22、不良反应：不符合用药目的并给患者带来不适或痛苦的反应。 23、药源性疾病：少数由于药物所致的较严重且较难恢复的不良反应。如肼屈嗪引起的红斑狼疮。 24、安全范围：指ED95与TD5之间的距离。 25、受体：是存在于细胞膜或细胞内的一种能选择性地与相应的递质、激素、自体活性物质或药物等相结合，并产生特定生理效应的大分子物质（主要为糖蛋白或脂蛋白，也可以是核糖或酶的一部分）。 26、配体：能与受体匹配结合的内源性递质、激素、自体活性物质或结构特异性的药物。 27、量反应：指药理效应强弱呈连续性变化，并可用具体数量表示。 28、质反应：有些药理效应不呈量的连续变化，只能用全或无，阳性或阴性表示称之。 29、常用量：大于最小有效量而小于极量的剂量。 30、特异质反应：指少数特异质病人对某些药物特别敏感，其产生作用性质可能与常人不同的损害性反应。 五、名词解释 7.主动转运 13.肝药酶诱导剂 2.肝药酶 8.表现分布容积 14.肝药酶抑制剂 3.生物转化第一相反应 9.生物利用度 15.半衰期 4.生物转化第二相反应 10.首关消除（首过效应） 16.稳态血药浓度（坪值） 5.肝肠循环 11.一级动力学消除（恒比消除） 6.被动转运 12.零级动力学消除（恒量消除） 1.ｐＫa：弱酸性或弱碱性药物解离常数负对数或该药在溶液中50％离子化时的ＰＨ值。
① 雄激素受体与核受体辅助抑制因子的关系 廖国庆3,汤恢焕,吕新生 (中南大学湘雅医院外科,长沙410008) [摘要] 目的:探讨雄激素受体(AR )与核受体辅助抑制因子(SMRT )是否能相互作用及其作用部位。方法:重 组构建AR ,SMRT 基因或其基因片段的质粒,体外转录,合成35S 标记融合蛋白,采用转染试验及哺乳动物细胞双杂交实验(transient transfection ,mammalian two 2hybrid test ),GST 沉淀试验(GST pull 2down assay ),间接免疫荧光观察 (indirect immunofluorescence staining )的方法,观察AR 与SMRT 的关系。结果:AR 具有内在的转录抑制活性,可与SMRT 直接作用,其作用部位:在AR 分子上位于配体结合区(LBD ),而DNA 结合区能增强这种作用;在SMRT 分子 上则位于羧基端核受体作用区(IDs ),在这个区域的L XXXIXXXI/L 功能基团突变后将会影响AR 与SMRT 的结合。结论:AR 通过其LBD 区与SMRT 分子中的ID2相互作用。 [关键词] 受体; 雄激素; SMRT ; 相互作用 [中图分类号] Q781 [文献标识码] A [文章编号] 167227347(2004)022******* Androgen receptor and SMRT L IAO Guo 2qing 3,TAN G Hui 2huan ,L U ?? Xin 2sheng (Depart ment of S urgery ,Xiangya Hospital ,Cent ral South U niversity ,Changsha 410008,Chi na ) Abstract : Objective To explore the interaction between androgen receptor (AR )and silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptor (SMR T )and their interaction site.Methods We recombined and constructed AR ,SMR T gene and gene fragments ,in vitro translated 35S fusion proteins to investigate the relationship between AR and SMR T using transient transfection ,mammalian two 2hy 2brid test ,GST pull 2down assay ,and indirect immunofluorescence staining.R esults AR possessed an intrinsic transcriptional repression activity and AR interacted directly with SMR T.One interactive sur 2face on AR was mapped to the ligand 2binding domain (LBD ),and the presence of DNA binding domain enhanced this interaction.The binding surface on SMR T was mapped to the carboxyl 2terminal nuclear receptor interacting domain (ID ),and mutation of the L XXXIXXXI/L corepressor motif within this do 2main interferred with the interaction.Conclusion LBD domain on the AR can interact with ID2motif on the SMR T. K ey w ords : receptor ; androgen ; SMR T ; interaction [J Cent South Univ (Med Sci ),2004,29(2):0157206] AR (androgen receptor )是核受体的成员之一,它不但与男性成熟有关,而且在前列腺癌进展中有重要作用[1]。SMR T (silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptor )是核受体辅助抑制因子,目前大量研究结果表明,SMR T 对许多核受体的活性,如ER ,PR ,等具有抑制作用,对平衡体内激素的消涨具有重要作用[2,3]。但AR 与SMR T 的关系如何,目前研究不多。本研究旨在探讨AR 能否与SMR T 作用及其作用部位。1 材料与方法 1.1 质粒和试剂 AR cDNA ,G al4D BD 与AR 的融 合基因片段(G 42AR A/B ,G 42AR DE ,G 42AR )分别由Dr.Chang (R ochester 大学医学中心,R ochester ,NY )和Dr.Lirim Shemshedini (T oled o 大学,T oled o ,Ohio )惠赠。G 4s 2AR ,G 42AR 是由本实验室构建,用全长人类AR cDNA 插入到pCMX 2G al Xho1和Asp718位点之间,PCR 扩增,由此构建1～500,1～660,501～660,501～919,和661～919AR 各片段,并插入到pCMX 2HA 载体 中,构建重组新的AR 及AR 片段质粒。人类SMR T e [4] 7 51①收稿日期:2003211220 作者简介:廖国庆(19622),男,湖南衡东人,博士,副教授,主要从事肿瘤外科的基础和临床研究。3通讯作 者,E 2mail :liaoguoqing @https://www.doczj.com/doc/b410646828.html, 中南大学学报(医学版) J Cent South Univ (Med Sci ) 2004,29(2)
四、名词解释 1.阈剂量11.停药反应21.药理效应 2.极量12.ED50 22.不良反应 3.受体脱敏13.选择性作用23.药源性疾病 4.受体增敏14.受体拮抗剂24.安全范围 5.效能15.受体激动剂25.受体 6.亲和力16.受体部分激动剂26.配体 7.后遗效应17.兴奋作用27.量反应 8.毒性反应18.竞争性拮抗药28.质反应 9.副作用19.非竞争性拮抗药29.常用量 10.量效关系20.药物作用30.特异质反应 1、阈剂量：刚引起药理效应的剂量。 2、极量：国家药典规定对某些药物允许使用的最高剂量。 3、受体脱敏：是指长期使用激动药，或受体周围的某种生物活性物质浓度高，组织或细胞对激动药的敏感性和反应性下降的现象。 4、受体增敏：是指长期使用拮抗药，或受体周围的某种生物活性物质浓度低，组织或细胞对激动药的敏感性和反应性升高的现象。 5、效能：药物的最大效应。 6、亲和力：药物与受体结合的能力。其大小与药物受体复合物解离常数的负对数成正比。 7、后遗效应：停药后血药浓度已降至阈浓度以下时残存的药物效应。 8、毒性反应：由于药物剂量过大、用药时间过长而引起的机体损害性反应，一般比较严重。 9、副作用：治疗量时产生与治疗目的无关的作用。 10、量效关系：在一定范围内，药物剂量的大小与学药浓度成正比，也与药物效应成正比。 11、停药反应：突然停药后原有疾病的加剧，如长期服用可乐定，停药次日血压升高。 12、ED50：引起50%动物阳性反应的剂量。 13、选择性作用：多数药物在适当剂量时，只对少数组织或器官发生明显作用，而对其它组织或器官作用很小或无作用的特性。 14、受体拮抗剂：与受体有较强的亲和力而无内在活性的药物。 15、受体激动剂：与受体有较强的亲和力和有内在活性的药物。 16、受体部分激动剂：与受体有较强的亲和力和有较弱内在活性的药物。 17、兴奋作用：机体器官原有的功能水平提高。 18、竞争性拮抗药：与激动药互相竞争相同受体，与受体可逆性结合，从而阻断激动剂作用的药物。 19、非竞争性拮抗药：能不可逆地作用于某些部位而妨碍激动药与受体结合，并拮抗激动药的作用。20、药物作用：药物对机体细胞间的初始作用，是动因。是分子反应机制，有其特异性。 21、药理效应：药物作用的结果，机体反应的表现，对不同脏器有选择性。 22、不良反应：不符合用药目的并给患者带来不适或痛苦的反应。 23、药源性疾病：少数由于药物所致的较严重且较难恢复的不良反应。如肼屈嗪引起的红斑狼疮。 24、安全范围：指ED95与TD5之间的距离。 25、受体：是存在于细胞膜或细胞内的一种能选择性地与相应的递质、激素、自体活性物质或药物等相结合，并产生特定生理效应的大分子物质（主要为糖蛋白或脂蛋白，也可以是核糖或酶的一部分）。 26、配体：能与受体匹配结合的内源性递质、激素、自体活性物质或结构特异性的药物。 27、量反应：指药理效应强弱呈连续性变化，并可用具体数量表示。 28、质反应：有些药理效应不呈量的连续变化，只能用全或无，阳性或阴性表示称之。 29、常用量：大于最小有效量而小于极量的剂量。 30、特异质反应：指少数特异质病人对某些药物特别敏感，其产生作用性质可能与常人不同的损害性反应。 五、名词解释 1.pKa 7.主动转运13.肝药酶诱导剂 2.肝药酶8.表现分布容积14.肝药酶抑制剂 3.生物转化第一相反应9.生物利用度15.半衰期
H2受体拮抗剂 [主要品种] 已知壁细胞表面有三种组胺受体:即乙酰胆碱受体,胃泌素受体和H2受体.用于阻断H2受体,抑制胃酸分泌的药物就称为组胺H2受体阻滞剂,也称为H2阻断剂或H2拮抗剂咪唑类：西咪替丁、奥美替丁 呋喃类：雷尼替丁 噻唑类：法莫替丁、尼扎替丁（和雷尼替丁相似） 哌啶甲苯醚类：罗沙替丁、兰替丁 1976年英国西咪替丁、1983年雷尼替丁、1986法莫替丁、1988年尼扎替丁、乙溴替丁具有抗HP胃粘膜保护H2拮抗的功能对嗜酒抽烟患者、拉夫替坦临床实验促进细胞再生。[适应症] 适用于治疗胃酸分泌增加的疾病，如胃、十二指肠手术溃疡，糜烂性胃炎，部分反流性食管炎，胃酸过多所致的胃痛、烧心、反酸。对那些与胃酸分泌增加无关的疾病如部分功能性消化不良、胆汁反流性胃炎、萎缩性胃炎、胃癌、胃肠痉挛、胃肠道寄生虫病没有十分显著的疗效。适用于症状轻、非急性期的疾病。 [药理特点] 雷尼替丁抑酸作用为西咪替丁的5-8倍，法莫替丁为西咪替丁的20-50倍。西咪替丁溃疡停药后半年复发率为24%，一年复发率85%。雷尼替丁治疗十二指肠溃疡需4-8周，胃溃疡需8-12周，突然停药后胃酸分泌会很快恢复原来水平，推荐递减法：由每天2次，减为每天1次，一周后改为隔日1次，逐渐停药。法莫替丁可以治疗溃疡伴出血。 [不良反应] H2受体拮抗剂常见腹泻、头痛、嗜睡、疲劳、肌痛、便秘、一过性转氨酶升高、间质性肾炎大多可逆等，西咪替丁还具有抗雄激素作用会出现男性乳房发育、男性性功能障碍、精子计数减少、溢乳，多出现在用药1个月后。中毒反应主要表现在中枢神经系统如头昏、疲乏、口干、心动过缓、腹泻、肌痛，西咪替丁为著。 [H2受体拮抗剂用法] 传统的给药方法是一日剂量分次给药，如西咪替丁200毫克，每天四次或400毫克，每天二次；雷尼替丁150毫克，每天二次；法莫替丁20毫克，每天二次。 近年来的研究结果表明，组胺的基础分泌以夜间为主，并且夜间胃液酸度在消化性溃疡，特别是十二指肠溃疡发病机制中起重要作用。白天的胃酸分泌与乙酰胆碱、胃泌素相关，且排出量不但与溃疡的形成无关，而且还具有以下显著的生理性作用：维持正常的消化过程，特别是蛋白质的消化，因为胃蛋白酶原转变为胃蛋白酶只有在足够酸的环境中才能实现；一定的胃酸酸度与钙和铁的吸收有重要关系；白天正常的胃酸分泌可保持胃内无菌环境，避免念珠菌使溃疡愈合延缓、幽门螺杆菌感染引起部分患者溃疡病的过早复发、胃酸持久抑制引起一些患者腹泻。因此，有学者推荐，H2受体拮抗剂睡前一日剂量一次给药，即西咪替丁800毫克，雷尼替丁300毫克，法莫替丁40毫克。还有的用法为西咪替丁口服0.2g，每日3次，睡前0.4g口服。说明书中雷尼替丁和法莫替丁一日2次，睡前晨起用（餐后）。西咪替丁有效血药浓度4h，口服后15-60分起效，静脉30分起效，静滴0.2-0.6g稀释于250-500的液体中，滴速1-4mg/kg/h。静脉注射稀释至20ml，每6h一次，每次0.2g，每次静脉注射2-3分，静注时观测血压及心跳，西咪替丁全天用量不超过2g。 [特殊人群] 本类药通过肝肾代谢，肝肾功能不全者慎用，严重肾功能不全者禁用。西咪替丁（法莫替丁）可透过血脑屏障和胎盘屏障，在乳汁中的浓度大于血药浓度，可引起胎儿和婴儿肝功能障碍，孕妇及哺乳期妇女禁用，儿童慎用，西咪替丁急性胰腺炎不宜用，用药期间禁止用
药物：指用于治疗、预防和诊断疾病的化学物质。 药理学：是研究药物与机体或病原体相互作用的规律和原理的一门学科。 药效动力学：是研究药物对机体的作用及作用机制的学科，以阐明药物防治疾病的规律。药代动力学：是研究机体对药物处置的动态变化的学科。包括药物在机体内的吸收、分布、生物转化（代谢）及排泄过程，特别是血药浓度随时间变化的规律。 一般药理学研究：指对新药主要药效作用以外的广泛药理作用研究。主要是研究药物对精神、神经系统，心血管系统，呼吸系统以及其他系统的作用等。 安慰剂：是不含活性药物但又暗示某种效应的制剂（如在外形、颜色、味道等方面与某种活性药物或受试药物相同） 药物作用：指药物与机体组织间的原发作用 药物效应：药物原发作用所引起的机体器官原有功能的改变。 兴奋：凡能使机体生理、生化功能加强的作用称为.. 抑制：凡能引起功能活动减弱的作用 受体：一类介导细胞信号转导的功能蛋白质，能识别周围环境中的某些微量化学物质，首先与之结合，并通过中介的信息放大系统，触发后续的生理反应或药理反应。 配体：能与受体特异性结合的物质 副作用：指用于治疗量药物后出现的与治疗无关的不适反应 慢性毒性：指长期用药而逐渐发生的毒性作用 二重感染：长期使用四环素类等广谱性抗生素后，由于敏感菌株被抑制，而使肠道内菌群间的相对平衡被破坏，一些不敏感的细菌大量繁殖，而引起的继发性感染 后遗效应：停药后血药浓度虽已降至最低有效浓度以下，但仍残存的生物效应 部分激动剂：与受体有亲和力，但内在活性低的药物。 竞争性拮抗剂：与受体有亲和力但没有内在活性，且激动剂相互竞争相同的受体 极量：产生疗效的最大治疗量 药物的效能：指药物引起的最大效应 效价：指产生相同效应时所需要剂量或浓度大小，与药物的作用强度成反比 治疗指数：是LD50与ED50的比值，该指数越大表示药物越安全 首关效应：指口服药物在胃肠道吸收后，首先进入肝门静脉系统，某些药物在通过肠黏膜及肝脏时，部分可被代谢灭活而进入体循环的药量减少，药效降低 表观分布容积：当药物在体内分布达到动态平衡时，体内药量与血药浓度的比值称... 消除半衰期：血药浓度降低一半所需要的时间 个体差异：在相同用药情况下，不同个体对药物的反应有所不同 快速耐受性：在短时间内连续用药数次后，立即产生的耐受性 交叉耐受性：机体对某些产生耐受性后，对另一药的敏感也降低 特异质：少数病人对某些药物出现极敏感或极不敏感的反应，或出现与通常性质不同的反应躯体依赖性：反复用药后造成身体适应状态产生欣快感，一旦中断用药，可出现强烈的戒断综合症，称为 精神依赖性：用药后产生愉快满足的感觉，使用药者在精神上渴望周期性或连续用药，以达到舒适感 药物相互作用：两种或多种药物合用或先后序贯应用，而引起药物作用和效应的变化，称.. 协同作用：合并用药作用增加总称... 拮抗作用：合并用药效应减弱，两药合用的效应小于它们分别作用的总和 胆碱受体：能与ACh结合的受体。可分为M、N两种亚型 肾上腺素受体：能与去甲肾上腺素或肾上腺素结合的受体称为...，分为α、β两种亚型
醛固酮受体拮抗剂的临床应用 1. 醛固酮的合成 醛固酮是体内重要的盐皮质类固醇激素，组成肾素-血管紧张素-醛固酮系统（RAAS）。主要由肾上腺皮质球状带细胞合成，醛固酮合酶利用11脱氧皮质酮合成醛固酮。近期发现独立存在于心血管系统和脑中的醛固酮形成系统。首先，发现心血管局部有肾素mRNA的表达，并不受全身RAAS影响，尤其是心血管细胞内分布的血管紧张素受体l（ATl）与肾脏细胞中的并不属同一类型。随后，在血管内皮细胞内和平滑肌细胞内找到了醛固酮合成酶编码基因（CYPH份），并发现了血管平滑肌细胞内的醛固酮受体。除了RAAS系统的影响外，醛固酮的产生还受到很多因素的调节，如血钾、促肾上腺皮质激素、一氧化氮、内皮素、氧自由基和肾上腺髓质素等，因此血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素受体拮抗剂（ARB）均不能完全阻断醛固酮的产生，这一现象也被称为“醛固酮逃逸”。 2. 醛固酮在心力衰竭过程中作用 醛固酮的经典作用是与肾脏远曲小管和集合管细胞中醛固酮受体结合，引起保钠排钾和水钠储留。在心血管系统，MR主要分布在心肌细胞和大血管的内皮细胞中。MR被醛固酮激活后，在细胞核内形成了MR-MR的二聚体，二聚体和DNA上的激素反应元件（HRE）相结合，诱导目标基因的转录，进而产生一系列生理反应。 2.1.钠水储留。 2.2.醛固酮可以促进胶原合成，局部胶原沉积，包绕心肌纤维，从而对心脏的舒张和收缩功能产生不利影响。 AngII具有较强的致心肌纤维化作用，它可以通过AT1受体的介导直接作用于心脏成纤维细胞，引起胶原合成的增加。血浆醛固酮可作用于血管紧张素II（AngII）受体，使AngII 效应增强，激活三磷酸肌醇（IPIII）途径，使c-fos, c-jun基因表达，胶原生成增多，导致心肌纤维化。同时，在心肌纤维化过程中，醛固酮与肾素-血管紧张素有相互协同的作用：一方面AngII可以通过作用于AT1受体刺激醛固酮合成，另一方面醛固酮又可以增加组织血管紧张素转换酶ACE活性，使AngII进一步增加，后者进一步增加醛固酮合成。同时，醛固酮尚可使AT1受体上调，增加组织对AngII的结合，使AngII的生物学效应增强。 2.3.醛固酮引起的细胞因子和酶类的变化。 慢性醛固酮增多可增加氧化酶还原酶（NADPH）的表达，促进超氧负离子的产生，超
前列腺癌治疗药物-雄激素受体（AR）抑制剂 寇芮 前列腺癌(Postate cancer, PCa)是一种常见的男性恶性肿瘤，在全球范围内的发病率仅次于肺癌，排在所有男性恶性肿瘤第二位，居发达国家死亡率为癌症总死亡率的第三位[1]。中国前列腺癌发病率逐年递增，预计到2020年前列腺癌将会成为我国男性癌症死亡的第三大疾病[2]。 引起前列腺癌的危险因素尚未明确，但是其中一些已经被确认。最重要的因素之一是遗传。如果一个直系亲属（兄弟或父亲）患有前列腺癌，其本人患前列腺癌的危险性会增加1倍。2个或2个以上直系亲属患前列腺癌，相对危险性会增至5~11倍。流行病学研究发现有前列腺癌阳性家族史的患者比那些无家族史患者的确诊年龄大约早6~7年[3]。前列腺癌患病人群中一部分亚人群（大约9%）为“真实遗传性前列腺癌”，指的是3个或3个以上亲属患病或至少2个为早期发病（55岁以前）。外源性因素会影响从所谓的潜伏型前列腺癌到临床型前列腺癌的进程。这些因素的确认仍然在讨论中，但高动物脂肪饮食是一个重要的危险因素。其他危险因素包括维生素E、硒、木脂素类、异黄酮的低摄入。阳光暴露与前列腺癌发病率呈负相关，阳光可增加维生素D的水平，可能是前列腺癌的保护因子[4]。在前列腺癌低发的亚洲地区，绿茶的饮用量相对较高，绿茶可能为前列腺癌的预防因子[5]。 前列腺癌发病早期是对雄激素依赖性的，其前期治疗主要采用雄激素去除疗法（Androgen deprivation therapy，ADT），包括手术去势法和药物去势法。大多数前列腺癌患者早期对雄激素去势治疗（ADT）效果良好，病情得到缓解，但ADT不能治愈前列腺癌，经过14～30个月的中位治疗时间后，几乎所有患者病变都将逐渐发展为去势抵抗性前列腺癌(Castration Resistant Prostate Cancer，CRPC)，当病情复发进展到CRPC后患者对ADT不再敏感，其中位生存期小于20个月[6]。 目前治疗CRPC的药物主要有雄激素合成抑制剂或雄激素受体拮抗剂。 阿比特龙（abiraterone，Zytiga）具有选择和不可逆性抑制细胞色素P450（CYP 450）17,20 裂解酶，通过抑制肿瘤细胞雄激素合成的关键酶CYP17来降低肿瘤细胞内雄激素浓度，治疗CRPC。2011年4月阿比特龙治疗晚期前列腺癌获美国