伊犁河谷小麦良种繁育基地建设项目
糖耐量测定
在第8次免疫后即10.3号，测定给药组和对照组小鼠的葡萄糖耐量情况。每组取6只小鼠，每只小鼠的血糖值在本组平均血糖值附近。小鼠禁食不禁水16h 后，每只小鼠腹腔注射剂量为2g/Kg的葡萄糖溶液。葡萄糖溶液的浓度为400mg/mL，体重20g的小鼠注射剂量为0.1mL。注射葡萄糖后0min，15min，30min，60min，120min采用尾静脉取血的方式测定小鼠的血糖值。并在注射完葡萄糖后15min 时取血，测定血清胰岛素水平。
血清胰岛素水平检测
血清胰岛素水平的测定采用ELISA方法。样本为糖耐量实验中腹腔注射葡萄糖15min时的各组小鼠血清。具体的实验步骤按照试剂盒说明书进行，大致的操作流程如下：1、每孔加入50μL标准品，或者5倍稀释的血清。2、每孔加入100μL 酶标二抗，保鲜膜缠绕后37℃孵育60min。3、Wash solution满孔洗板4次。4、每孔加入50μL底物A 和50μL底物B，轻轻混匀，37℃避光孵育15min。5、每孔加入50μL终止液（2mol/L H2SO4）（颜色由蓝变黄）6、15min内在450nm波长处测定OD值。7、通过标准曲线计算样品insulin水平。
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大鼠二型糖尿病造模方法 Prepared on 22 November 2020
大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
糖尿病动物模型 转载请注明来自丁香园 发布日期: 2006-07-10 19:22 文章来源: 丁香园 关键词: 糖尿病糖尿病动物模型 2.7 db/db小鼠 db/db小鼠糖尿病发病系瘦素受体突变所致，呈常染色体隐性遗传。该鼠在10～14日龄时就出现多食、高胰岛素血症，但4周龄时血糖仍维持正常，随后该鼠体重逐渐增加，出现高血糖。2～3月龄时尽管胰岛素水平为正常时的6～10倍，但血糖水平可达22～33mmol/L；约3～6月龄时胰岛素水平逐渐下降至低于正常水平，该期小鼠体重明显下降，并出现酮症，组织学显示显著的β细胞坏死，如缺乏胰岛素治疗，该小鼠存活不超过10月。db/db小鼠另一个特点为：其血清胰高糖素的水平较正常对照升高2倍以上[22.23]。db/db小鼠是适用于研究2型糖尿病发病机制的动物模型。 2.8 ob/ob小鼠 ob/ob小鼠为2型糖尿病动物模型,属常染色体隐性遗传。ob/ob小鼠糖尿病发病是由于ob基因突变，造成其编码的蛋白leptin缺乏,引起肝脂肪生成和肝糖原异生显著增加，高血糖又刺激胰岛素分泌，引起胰岛素抵抗，刺激脂肪的形成，ob/ob小鼠体重可达90克之多。ob/ob小鼠症状的轻重取决于遗传背景，纯合体动物表现为肥胖，明显的高血糖及高胰岛素血症，而ob/ob/6J小鼠胰岛素水平可达正常小鼠的10～50倍，但其血糖常只有轻度的升高。组织学显示ob/ob小鼠胰岛β细胞显著增生、肥大，而胰岛A细胞、D细胞及PP细胞数量明显减少[24.25]。 2.9 KK鼠 KK小鼠是日本学者培育的一种轻度肥胖型2型糖尿病动物，后与C57BL/6J小鼠杂交，并进行近亲繁殖，得到Toronto－KK（T－KK）小鼠。将黄色肥胖基因(即Ay)转至KK小鼠，得KKAy鼠，与KK小鼠相比，KKAy鼠有明显的肥胖和糖尿病症状。KK小鼠有明显的多食，从5周龄起,血糖、血胰岛素水平逐步升高，至5月龄时体重可达50克，非空腹血糖常低于17mmol/L，非空腹血胰岛素可达1200ug/mL，1岁龄时，多食、高血糖、高胰岛素血症、肥胖及肝脏对胰岛素的敏感性可自发恢复正常，但糖尿病KK小鼠生命常明显缩短。此外，KK小鼠空腹胰高糖素水平升高，且不受葡萄糖抑制。组织学显示B细胞有脱颗粒和糖原浸润,随后出现胰岛肥大和肝脂肪化和脂肪组织增多[26.27]。 【其他DM动物模型】 1.激素性DM动物模型：注射垂体前叶提取物、生长素、肾上腺皮质激素、甲状腺素或胰高血糖素均可直接或间接产生DM。 2.病毒性DM动物模型：利用脑-心肌炎病毒（EMC－M病毒）和柯萨基病毒等使某些种属的小鼠胰岛β细胞脱颗粒、坏死，导致胰岛β细胞破坏，产生类似的1型DM。 3.免疫性DM动物模型：静脉注射抗胰岛素抗体或用同种或异种胰岛素的弗氏佐剂复合物及抗血清免疫;或用同种或异种胰腺+弗氏佐剂免疫动物均可在数小时后产生一过性高血糖。其机制是内源性胰岛素与输入的抗体结合导致内源性胰岛素降低而致DM。 4.下丘脑性DM动物模型：用电凝法或注射硫代葡萄糖金损伤丘脑下部腹内侧核（VMH）饱中枢，可使成熟动物产生过度摄食、肥胖，直至产生DM。
发育生物学课程设计 北方民族大学 小鼠糖尿病模型实验设计方案 姓名：徐飞 学号：20103465 生物技术102班
小鼠糖尿病模型实验设计方案 徐飞 （北方民族大学生物科学与技术学院，生物技术，20103465） 【摘要】糖尿病是一种常见的具有遗传倾向的葡萄糖代谢和内分泌障碍,是由于绝对性或相对性胰岛素分泌不足引起的,近半个世纪来,糖尿病患病率和死亡率有明显上升趋势,在我国已成为继心血管疾病、肿瘤之后列第三位的常见病、多发病和慢性非传染性疾病。【关键词】糖尿病；动物模型；实验设计 【Abstract】Diabetes mellitus is a common genetic glucose metabolic and endocrinal disturbance caused by insulindeficiency absolutely or relatively. In the last half century, diabetes has the increasing rates of morbidity and mortality, and has become the third common, frequently occurring and chronic noninfectious disease after cardiovascular disease and cancer. 【key words】Diabetes; Models, animal; Experimental design 引言 糖尿病(diabetesmellitus,DM)属中医学“消渴”范畴,是以多饮、多食、多尿、身体消瘦,或尿浊、尿有甜味为特征的疾病。现代医学认为,糖尿病是一种由多种病因引起的慢性代谢性疾病,是由于体内胰岛素缺乏,或拮抗胰岛素的激素增高,或胰岛素在靶细胞内不能发挥正常生理作用而引起葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的综合征。为探清糖尿病病因,建立理想的DM动物模型是十分必要的,动物模型也可以筛选降糖药物,可以为中医药治疗糖尿病提供实验依据。 动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制。而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便，更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。 糖尿病模型的建立方法很多,如手术法、药物法、自发性DM、转基因动物法等。国外多
V .. . .. 发育生物学课程设计 北方民族大学 小鼠糖尿病模型实验设计方案
姓名：徐飞 学号：20103465 生物技术102班
小鼠糖尿病模型实验设计方案 徐飞 （北方民族大学生物科学与技术学院，生物技术，20103465）【摘要】糖尿病是一种常见的具有遗传倾向的葡萄糖代谢和内分泌障碍,是由于绝对性或相对性胰岛素分泌不足引起的,近半个世纪来,糖尿病患病率和死亡率有明显上升趋势,在我国已成为继心血管疾病、肿瘤之后列第三位的常见病、多发病和慢性非传染性疾病。【关键词】糖尿病；动物模型；实验设计 【Abstract】Diabetes mellitus is a common genetic glucose metabolic and endocrinal disturbance caused by insulindeficiency absolutely or relatively. In the last half century, diabetes has the increasing rates of morbidity and mortality, and has become the third common, frequently occurring and chronic noninfectious disease after cardiovascular disease and cancer. 【key words】Diabetes; Models, animal; Experimental design 引言 糖尿病(diabetesmellitus,DM)属中医学“消渴”范畴,是以多饮、多食、多尿、身体消瘦,或尿浊、尿有甜味为特征的疾病。现代医学认为,糖尿病是一种由多种病因引起的慢性代谢性疾病,是由于体内胰岛素缺乏,或拮抗胰岛素的激素增高,或胰岛素在靶细胞内不能发挥正常生理作用而引起葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的综合征。为探清糖尿病病因,建立理想的DM动物模型是十分必要的,动物模型也可以筛选降糖药物,可以为中医药治疗糖尿病提供实验依据。 动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学（包括新药筛选）研究。人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的
辅助降血糖作用检验方法 1动物实验 1.1动物选择 选用健康成年动物，常用小鼠（25±2g）或大鼠（180±20g），单一性别，大鼠每组8-12只、小鼠每组10-15只。 1.2材料 1.2.1试剂 四氧嘧啶（或链脲霉素）小鼠35-50mg/kg.bw.iv（100-160mg/kg.bw.ip）、大鼠50-80mg/kg.bw.iv （200-250mg/kg.bw.ip）用新鲜配制。 血溏测定试纸或试剂盒。 1.2.2仪器 血糖仪、全自动生化仪、721-B型分光光度计。 1.3剂量分组及受试样品给予时间 设1个溶剂对照组和3个受试样品剂量组，根据人体每日每公斤体重推荐摄入量，小鼠扩大10倍作为其中一个剂量组（大鼠扩大5倍），根据受试样品的具体情况另设两个剂量组。受试样品给予时间原则上不少于30天，也可根据实验需要自行设定期限。 1.4实验方法 1.4.1降低空腹血糖实验 1.4.1.1高血糖模型动物 1.4.1.1.1原理 四氧嘧啶（或链脲霉素）是一种β细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛β细胞，造成胰岛素分泌低下引起实验性糖尿病。 1.4.1.1.2造型 动物禁食24小时后，给予四氧嘧啶造型，5-7天后禁食3-5小时，测血糖，血糖值10-25mmol/L为高血糖模型成功动物。 1.4.1.1.3操作步骤 选高血糖模型动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个模型对照组和3个剂量组（组间差不大于1.1mmol/L）。剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30天，测空腹血糖值（禁食同实验前），比较各组动物血糖值及血糖降低的绝对值（即实验前后血糖的差值）。 1.4.1.2正常动物 选健康成年动物按禁食3-5小时的血糖水平分组，随机选1个对照组和1个受试样品组（高剂量）。余操作同1.4.1.1.3。 1.4.2糖耐量实验 高血糖模型动物禁食3-5小时，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶
葡萄糖耐受实验（GTT） 试剂和仪器：葡萄糖（Cat: G6125, Sigma-Aldrich），生理盐水（0.85% NaCl），血糖仪(GLUCOCARD II Series Test Meter, ARKRAY)和血糖试纸(GLUCOCARD Test Strip II, ARKRAY)。注意事项：小鼠葡萄糖耐受实验的葡萄糖使用量一般为1.5g或者2g每公斤体重（1.5 or 2 g/kg），根据具体的实验要求配置合适的浓度的葡萄糖溶液。如葡萄糖使用量是2g/kg，则用生理盐水（saline）配置20%的葡萄糖溶液。操作步骤： 1．小鼠准备：每组实验（如不同基因型或给药组）小鼠数量不得少于6只，对照组必须是同年龄、同性别的小鼠。于实验前一天下午5点将小鼠换入干净的笼子禁食，禁食16小时，至次日上午9点。禁食期间，小鼠保持正常的饮水； 2．次日上午九点，开始葡萄糖耐受实验。称取每只小鼠的体重，并用标记笔在小鼠尾巴的根部标记序号，以便在实验过程中能快速的辨认所测小鼠； 3．空腹基础血糖的测定：将小鼠从笼子中取出，轻放于铁网格之上，用剪刀剪去小鼠尾巴末端约1-2mm，轻轻挤压小鼠尾巴，让血液富集成一滴，用血糖仪测定空腹血糖，测定值认定为0min的血糖值。操作尽量轻柔，使小鼠不至于过度惊吓； 4．让小鼠适应30min之后，开始准备腹腔注射葡萄糖（IP GTT）或灌胃葡萄糖(OGTT)。 5．IP GTT：将小鼠轻轻抓起，按照标准的腹腔注射操作用1ml注射器给小鼠注射葡萄糖溶液。注射的体积根据小鼠的体重决定，每g体重注射0.01ml。从注射完毕一刻起，开始计时； OGTT：将小鼠轻轻抓起，按照标准灌胃操作用1ml注射器连接灌胃针给于小鼠葡萄糖溶液。灌胃的体积根据小鼠的体重决定，每g体重灌胃0.01ml。从灌胃完毕一刻起，开始计时。 一般情况下，每只小鼠的操作间隔在1min，这样可以准确的按照所规定时间完成对每只小鼠的血糖测定。 6．在15min，30min，60min，90min，120min按照步骤3的操作测定每只小鼠各个时间点的血糖值； 7．实验完毕后，将每笼小鼠补充上饲料。用Excel软件分析实验结果。