5’ 丙型肝炎病毒（HCV ）调查报告 丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV ）感染所致，主要由血液/体液传播。据世界卫生组织 估计，全球有1.7亿人感染HCV 。在我国健康人群抗 HCV 阳性率为0.7%~3.1%，约3800 万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素， 机体免疫往往难以有效清除病毒， 致使约50%~80%HCV 感染者发展为慢性肝炎， 其中20%~30%将发展成肝硬化。肝硬化患 者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。 一、基因组特征： 丙型肝炎病毒呈球形颗粒，直径约为 50nm ，有一脂质包膜。基因组为单链正链 RNA ， 链长月9.5kb 。整个基因组只有一个 ORF ，编码一条由3010~3033个氨基酸组成的聚蛋白 前体，该蛋白前体在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶作用下， 裂解为病毒的结构蛋白和非结构蛋 白。（如图所示） 苷酸组成，形成4个二级结构域，为病毒复制和翻译所必需。此区是整个基因组中最保守 的区域，所以常常选择该区域的基因序列作为基因扩增的靶序列， 这样可以检测出目前已知 的所有HCV 基因型。3端UTR 包括3个结构域：靠近5'端为基因型特异的多变区 （不同基 因型之 间的核苷酸序列差异较大； 相同基因型之间核苷酸序列比较保守） ；居中部分为一个 多聚U 区域（poly U ），含有50~62个核苷酸，对病毒 RNA 复制至关重要，但不同基因型 的HCV 的多聚U 区域长度不等；3端尾部为高度保守的发夹样结构，称为 X-tail 。通过定 点突变破坏这一结构会导致 RNA 病毒复制的显著降低，说明该区域对 RNA 病毒有效复制 同样重要。5端和3端UTR 之间是一个 ORF 并且分成9个区域：核心区宀E1区宀NS1/E2 区T NS2区T NS3区T NS4a 区宀NS4b 区宀NS5a 区宀NS5b 区。其中 NS5b 区域在不同 型HCV 中同源性较低，可作为 HCV 分型依据。 I □泵闵组图进 Map of HCV genome- ：| NG C El EV MSI NS2 NS3 NS4 N55 NC 2522 657? Q3 tJ-iOl - ^-116 poly( A)? 聞 1 L92 3H-I I --------- 托构IX- —I ----------- 非结构区 --------------- nr 在HCV 基因组中，5'端有一个长度和序列非常稳定的非编码区（ UTR ），由341个核
丙型肝炎病毒核心抗原检测的临床价值 目的探讨血清中丙型肝炎病毒核心抗原（HCV-cAg）检测的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验检测HCV-cAg；采用化学发光方法检测HCV-Ab；采用实时荧光定量PCR方法检测HCV-RNA。结果137例HCV-Ab阳性标本中HCV-RNA与HCV-cAg检测两种方法通过Kappa检验得出的结论一致性较好（P ＜0.001，Kappa=0.893）；HCV-RNA和HCV-cAg阳性检出率分别为40.15%和37.96%，采用配对卡方检验，差异无统计学意义（χ2=0.571，P>0.05）。55例HCV-RNA阳性标本中HCV-RNA拷贝数对数值与HCV-cAgOD均值之间有良好的正相关性（r=0.882，P＜0.05）。结论HCV-cAg检测操作简便，能够缩短诊断丙肝病毒感染的时间，其水平一定程度上能反应丙型肝炎患者体内HCV复制程度，具有较好的临床实用价值。 标签：丙型肝炎病毒抗体；丙型肝炎病毒-RNA；丙型肝炎病毒核心抗原 丙型肝炎病毒（HCV）是丙型病毒性肝炎的病原体，主要经血液传播，是目前引起输血后肝炎最常见和最严重的病原体。丙型肝炎能引起急性和慢性肝炎，其感染慢性化占75%～85%，且慢性丙型肝炎与肝硬化和原发性肝癌关系密切[1]。我国丙型病毒性肝炎的报告病例数呈现出逐年上升的趋势，严重威胁人民的生命健康。由于目前尚无针对HCV的有效疫苗可供临床使用，因此对于丙肝感染的及早检出并通过一系列有效措施阻断其在易感人群间的传播就显得尤为重要。近年来，陆续出现了一些关于HCV核心抗原（HCV-cAg）可以缩短丙肝感染检测窗口期，提高感染检出率的报道[2-3]。本文通过检测丙型肝炎病毒抗体（HCV-Ab）阳性患者血清中HCV-cAg、HCV-RNA来探讨HCV-cAg检测在临床的应用价值。 1 资料与方法 1.1一般资料137例HCV-Ab阳性血清标本来自我院2014年1月～2015年5月门诊和住院患者，其中男性76例，女性61例，年龄16～68岁，平均39.7岁。所有标本均空腹抽取静脉血离心分离血清，经HCV-Ab检测阳性，选取S/CO>3.0标本，于-20℃冰箱保存备测。 1.2 仪器与试剂HCV-cAg酶免试剂盒购自湖南康润药物有限公司，仪器为意大利亚特斯全自动酶免分析仪；HCV-RNA试剂购自中山大学达安基因股份有限公司，仪器为厦门安普利公司荧光定量PCR检测仪；HCV-Ab试剂为雅培公司原装试剂，仪器为雅培i2000化学发光仪。 1.3检测方法HCV-cAg采用ELISA方法；HCV-RNA采用實时荧光定量PCR 方法；HCV-Ab采用化学发光方法检测。 1.4统计学方法采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率（%）表示，比较采用配对χ2检验；采用Pearson进行相关分析。P＜0.05为差
丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒（胶体金法） 【检验目的】 定性测定人血清（浆）中的HCV抗体，用于临床术前的初筛查检测。 【实验原理】 丙型肝炎病毒抗体诊断试剂（胶体金法）采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体（anti-IgG Ab），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原（Core、NS3、NS4、NS5）和人IgG抗体。检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Atenti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色游离金标鼠抗人IgG 抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。 【样本要求】 1、采集静脉血样本必须在无菌条件下操作，并避免样品溶血。 2、如果血清和血浆样品收集后 7天内检测，样品须放在0-4C保存；大于7天必须-20C—下冷冻保存。 3、常规抗凝剂不影响实验结果。 4、溶血、粘稠及高指标本不适于本试剂。含特殊物质的标本可能会导致检测结果不稳定， 在检测前须清除。 5、在标本中加0.1%NaN3不影响实验结果。 【试验方法】 测试条： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金试纸条从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴（10卩）样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。 4、随即滴加2滴样本稀释液（约100^）1。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 测试卡： 1、将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。 2、将胶体金测试卡从包装盒中取出，打开铝箔包装袋，平置于台面上。 3、用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到测试卡上的 S孔。 4、随即滴加2滴（约100 ^）1样本稀释液到测试卡上的 D孔。 5、加样后，阳性标本可在1~15分钟内检出，建议15分钟后在最终观察并记录实验结果。 【结果判断】 阳性：试纸条/试卡在检测区和对照区位置出现两条紫红色条带。 阴性：试纸条/试卡只在对照线位置出现一条紫红色条带。 失效：对照区（C）未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质 损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试纸条/试卡重新测试。
丙肝没有“病毒携带者”一说 乙肝有病毒携带者的说法，但丙肝并没有。 丙肝病毒一旦感染，成人的慢性化率可以高达50%到80%，而成人感染乙肝慢性化率只有5%。针对丙肝的治疗，一旦抗体是阳性，接下来丙肝病毒核酸检测也是阳性的话，无论转氨酶高低，这个病人就一定要接受治疗。这个和乙肝治疗是有本质不同的。乙肝病毒核酸检测是阳性，但如果转氨酶正常，就有可能是乙肝病毒携带者，可以不治疗。 丙肝诊断有三个指标 做丙肝诊断有三个指标。第一个是丙肝抗体，如果抗体是阳性，就要检查第二个指标，丙型肝炎病毒核糖核酸。如果核酸是阴性，也不必治疗了。这里有个现实问题，基层医院没有检测核酸的条件，只能检测一个抗体，这就涉及第三个指标——转氨酶水平。如果一个病人丙肝抗体是阳性，没有条件检测核酸，在排除其他肝炎的情况下，转氨酶显示异常，也建议治疗。 不论处于哪个病程，都要积极治疗 丙型肝炎有一个“三部曲”，就是丙型肝炎，肝硬化，肝癌。因为丙肝更为沉默，一旦表现出来可能就到肝硬化、肝癌了。不论处于哪个
病程，丙型肝炎即便是在代偿期的肝硬化病人，采用目前治疗指南推荐的药物并适当延长疗程，疗效也会很好。 尽可能早发现早治疗，目前新型直接抗病毒仿制药已被国际认可，有效性和安全性也已得到证实，患者通过正规渠道获得这些最新药物，且疗程明显缩短，只需要12到24周，就可以治愈丙肝。 小贴士 生活中如何保护肝脏？ 1、饮酒适量：喝酒伤肝，酒精引起的肝脏疾病（包括脂肪肝、肝硬化、肝炎等）发病率达4.36%。 2、均衡膳食：营养过剩者、营养不良者、缺少运动，都容易得脂肪肝。 3、不滥用药物：日常生活中遇到头痛脑热，大家都喜欢自己备用一些消炎药或是“败火”药。但几乎所有药物都有正反两方面作用，包括中药，绝大多数药物都要经过肝脏代谢。 4、正常作息，适度运动：每天要保证7小时睡眠时间，建议10点以前入睡为宜。高强度的工作是以人体高负荷运转为代价。所以，工作时“节奏不要太快，压力不要太重，责任不要太大”。 5、保持好心情：“怒伤肝”，心情不好，首先伤到的就是你的肝脏。
丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 说明书 【产品名称】 通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法） 【包装规格】 条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。 【预期用途】 本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。 丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。 【检验原理】 本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。 检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。然后，混合物再毛细效应下向上层析。如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。 【主要组成成分】 丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维； 缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠； 25ul吸管 检测记录表 各组份的包装数量如下： 说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。
脊髓灰质炎 1 致病病原体：脊髓灰质炎病毒引起的急性消化道传染病。 2 传染源：隐性感染者、脊髓灰质炎病人。 3 潜伏期：3-35天，一般5-14天。 4 传播途径：粪-口途径，水源、食物污染、手、用具。 5 主要症状：可先有发热、乏力、食欲不振、恶心、呕吐等消化道症状，也可有头痛、咽痛、流涕、咳嗽等上呼吸道症状，一般发热1-4天；之后出现中枢系统症状，肌肉疼痛、多汗、尿潴留、麻痹、瘫痪。 6脊髓灰质炎的危害：可遗留肌肉麻痹瘫痪，不及时治疗病死率极高。 7易感人群：14岁以下儿童及未免疫接种40岁以下成人。感染后产生持久免疫力。 8隔离治疗：发病第一周呼吸道隔离，第二周期至40天消化道隔离；无特异治疗方法，主要为对症及康复治疗。 9 预防：1）管理传染源：早发现、早诊断、早报告、早隔离、早治疗，病人住院隔离治疗；2）切断传播途径：加强水源、饮食、粪便管理，人群养成良好的公共卫生和个人卫生习惯。2）免疫接种：常规免疫（婴儿于生后2、3、4月龄各口服1剂三价脊髓灰质炎减毒活疫苗，1.5岁复服1剂，4岁加强免疫1剂）。强化免疫（5-7岁以下人群春季两轮脊灰疫苗接种，高危人群查漏补种）。 病毒性甲型肝炎（甲肝） 1 致病病原体：由甲型肝炎病毒引起的急性消化道传染病。 2 传染源：隐性感染者、潜伏期末期和急性期病人。 3 潜伏期：15-45天，平均30天。 4 传播途径：粪-口途径，水源、食物污染
5 主要症状：发热、乏力、食欲不振、恶心、呕吐、肝区胀痛、皮肤巩膜黄染、茶色尿。 6甲肝的危害：肝功能严重受损的急性和亚急性肝炎、肝性脑病、肝肾综合征、脑水肿、脑疝，不及时治疗病死率极高。 7易感人群：6个月以上的人群未接种疫苗及未感染甲肝病毒者普遍易感。感染后产生持久免疫力。 8隔离治疗：自发病起4周；治疗应用干扰素等抗病毒药物，加强营养支持治疗促进肝细胞修复和再生。 9 预防：1）管理传染源：早发现、早诊断、早报告、早隔离、早治疗，病人住院隔离治疗；2）切断传播途径：加强水源、饮食、粪便管理，人群养成良好的公共卫生和个人卫生习惯。2）免疫接种：对重点人群接种甲型肝炎灭活疫苗，8周左右产生有效抗体，维持3年以上，随后抗体滴度逐年下降，5-10年或在流行期间应加强注射。年龄大于1岁儿童和集体生活的大学生均应接种。甲肝疫苗可与乙肝疫苗联合应用，但接种部位不同。 感染性腹泻 1 致病病原体：感染性腹泻是指除霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒以外的由多种病原体（包括病毒、细菌、寄生虫）引起的腹泻为主要表现的一类肠道传染病。 2 传染源：病人、带菌者、病畜及带菌动物。 3 潜伏期：短，副溶血弧菌6-20小时，大肠杆菌2-20小时，沙门菌属4-24小时，大肠杆菌3-4天，最长8天。 4 传播途径：粪-口途径，水源、食物污染、手、苍蝇等。 5 主要症状：腹泻，大便大于3次/日，可有发热、恶心、呕吐、腹痛及全身不适。
丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV）感染所致，主要由血液/体液传播。据世界卫生组织估计，全球有亿人感染HCV。在我国健康人群抗HCV阳性率为%~%，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使约 50%~80%HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%~30%将发展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。 一、基因组特征： 丙型肝炎病毒呈球形颗粒，直径约为50nm，有一脂质包膜。基因组为单链正链RNA，链长月。整个基因组只有一个ORF，编码一条由3010~3033个氨基酸组成的聚蛋白前体，该蛋白前体在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶作用下，裂解为病毒的结构蛋白和非结构蛋白。（如图所示） 在HCV基因组中，5’端有一个长度和序列非常稳定的非编码区（UTR），由341个核苷酸组成，形成4个二级结构域，为病毒复制和翻译所必需。此区是整个基因组中最保守的区域，所以常常选择该区域的基因序列作为基因扩增的靶序列，这样可以检测出目前已知的所有HCV基因型。3’端UTR包括3个结构域：靠近5’端为基因型特异的多变区（不同基因型之间的核苷酸序列差异较大；相同基因型之间核苷酸序列比较保守）；居中部分为一个多聚U区域（poly U），含有50~62个核苷酸，对病毒RNA复制至关重要，但不同基因型的HCV的多聚U区域长度不等；3’端尾部为高度保守的发夹样结构，称为X-tail。通过定点突变破坏这一结构会导致RNA病毒复制的显著降低，说明该区域对RNA病毒有效复制同样重要。5’端和3’端UTR之间是一个ORF并且分成9个区域：核心区→E1区→NS1/E2区→NS2区→NS3区→NS4a区→NS4b区→NS5a区→NS5b区。其中NS5b区域在不同型HCV中同源性较低，可作为HCV分型依据。 二、分类 急性丙型肝炎——成人急性丙型肝炎病情相对较轻，多数为急性无黄疸型肝炎，ALT升高为主，少数为急性黄疸型肝炎，黄疸为轻度或中度升高。可出现恶心，食欲下降，全身无力，尿黄眼黄等表现。单纯丙肝病毒感染极少引起肝功能衰竭。在自然状态下，其中仅有15%的患者能够自发清除HCV达到痊愈，在不进行抗病毒治疗干预的情况下，85%的患者则发
丙型病毒性肝炎诊断标准（WS213-2008） 1范围 本标准规定了丙型病毒性肝炎的诊断依据、诊断原则、诊断和鉴别诊断。 本标准适用于全国各级各类医疗卫生机构及其工作人员对丙型病毒性肝炎的诊断、报告。 2缩略语 HCV:丙型病毒性肝炎病毒 抗-HCV：抗丙型病毒性肝炎病毒抗体 HCV RNA:丙型病毒性肝炎病毒核糖核酸 RT-PCR:逆转录聚合酶链反应 EI.ISA:酶联免疫吸附试验 EIA:酶免疫检测 ALT:丙氨酸氨基转移酶 AST:门冬氨酸氨基转移酶 B超：腹部超声显像 CT:计算机断层扫描 MRI:磁共振成像 3诊断依据 3.1流行病学史
3.1.1曾接受过血液、血液制品或其他人体组织、细胞成分治疗，或器官移植。 3.1.2有血液透析史、不洁注射史，或其他消毒不严格的有创检查、治疗史，有静脉注射毒品史。 3.1.3职业供血者，特别是接受过成分血单采回输者。 3.1.4与HCV感染者有性接触史，或HCV感染者（母亲）所生的婴儿。 3.2临床表现 3.2.1急性丙型病毒性肝炎 3.2.1.1病程在6个月以内，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.1.2可有轻度肝肿大、部分患者可出现脾肿大；少数患者可伴低热或出现黄疽。 3.2.1.3部分患者可有关节疼痛等肝外表现。 3.2.1.4部分患者可无明显症状和体征。 3.2.2慢性丙型病毒性肝炎 3.2.2.1病程超过6个月，全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.2.2部分患者可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及轻度肝、脾肿大。 3.2.2.3部分患者可无明显症状和体征。
3.2.3丙型病毒性肝炎肝硬化 3.2.3.1可有全身乏力、食欲减退、恶心和右季肋部疼痛或不适等。 3.2.3.2可有肝病面容、肝掌、蜘蛛痣及腹壁或食管、胃底静脉曲张及脾脏肿大和脾功能亢进。 3.2.3.3失代偿期患者可有腹水、肝性脑病及消化道出血史。 3.3实验室检查 3.3.1急性丙型病毒性肝炎有血清ALT、AST升高，部分病例可有血清胆红素升高。部分慢性丙型病毒性肝炎和丙型病毒性肝炎肝硬化患者亦可有ALT、AST升高。 3.3.2血清抗-HCV阳性。 3.3.3血清HCV RNA阳性。 3.4组织病理学检查 3.4.1急性丙型病毒性肝炎 可有小叶内及汇管区炎症等多种病变，其组织学特征包括：a)单核细胞增多症样病变，即单个核细胞浸润于肝窦中，形成串珠状； b)肝细胞大泡性脂肪变性； c)胆管损伤伴汇管区大量淋巴细胞浸润，甚至有淋巴滤泡形成； d)常见界面性炎症。
甲型病毒性肝炎诊断标准甲型病毒性肝炎（简称甲肝）是由甲型肝炎病毒（HAV）引起的常见消化道传染病。本病主要经粪口传染，不但终年散发，同时还常出现季节性或食物源性的暴发性流行，从而危害人民健康。是我国乙类法定传染病之一。 1、诊断依据 1.1.流行病学史 发病前2周~7周内有吃不洁食物史或饮不洁生水或与甲肝急性病人有密切接触史；或当地出现甲型肝炎爆发或流行，或有甲型肝炎流行区旅行史。 1.2.临床表现 1.2.1.发热、乏力和纳差、恶心、呕吐或者腹胀、便秘等消化道症状；肝脏肿大，伴有触痛或叩痛。 1.2.2.有巩膜、皮肤黄染并排除其他疾病所致黄疸者。 1.3.实验室检查 1.3.1.血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）明显升高。 1.3. 2.血清总胆红素（TBIL）大于正常上限数值一倍以上和（或）尿胆红素阳性。 1.3.3.血清学检测：抗-HAV IgM阳性或抗-HAV IgG双份血清呈4倍升高。 2、诊断原则 根据流行病学、临床症状、体征、实验室检查等进行综合分析和
诊断。因为甲型肝炎的临床表现与其他急性病毒性肝炎极其相似，确诊依赖于特异性的血清学检查。 3.诊断标准 甲型肝炎分为急性无黄疸型和急性黄疸型。 3．1.急性无黄疸型肝炎 3．1．1流行病学：发病前2周~7周内有吃不洁食物史或饮不洁生水或与甲肝急性病人有密切接触史；或当地出现甲型肝炎爆发或流行，或有甲型肝炎流行区旅行史。 3．1．2.症状：近1周左右出现的无其他原因可解释的发热、乏力和纳差、恶心、呕吐或者腹胀、便秘等消化道症状。 3.1.3.体征：肝脏肿大，伴有触痛或叩痛。 3．1.4肝功能检查：谷丙转氨酶（ALT）明显异常，血清总胆红素（TBIL）大于正常上限数值一倍以上和（或）尿胆红素阳性。 3．1．5HAV标志检测：血清抗HAV－IgM阳性或抗HAV－IgG 双份血清呈4倍升高者 疑似病例：3．1．2＋3．1．4。 确诊病例：疑似病例加3．1．5。 3．1．2急性黄疸型肝炎 凡符合急性无黄疸型肝炎诊断条件，且血清胆红素大于17μmO1／L，尿胆红素阳性，或临床上有巩膜、皮肤黄疸并排除其他疾病所致黄疸者可确诊。 3．2淤胆型肝炎
电化学检测丙型肝炎病毒，基于特定的脱氧核糖核酸裂解的核酸内切酶酶切位点 刘淑娜,胡耀娟,金娟,张辉,蔡成鑫 2009年1月13号在英国剑桥被收录, 于2009年2月12日被接受，2009年3月2号在网络上作为一个先进的文章被首次出版 DOI: 10.1039/b900690g 基于特定的脱氧核糖核酸裂解的核酸内切酶酶切位点, 我们已经开发出一种新的电化学方法定性和定量检测丙型肝炎病毒（丙型肝炎病毒） 丙型肝炎病毒（丙型肝炎病毒），一个单链核糖核酸病毒,含有约10的10000个碱基，被认为是慢性肝炎的一个主要病原体和导致肝硬化和肝癌的进一步肝纤维化。监测血清或血浆中丙型肝炎病毒核糖核酸用于诊断或确认感染和评估病人对治疗的反应. 已经有了相当大的兴趣发展可靠和简单的方法检测和量化丙型肝炎病毒，这些方法已经参与各种核酸扩增方法，电化学表面等离子体共振，一个压电基因传感器和一个基于荧光检测的传感器和电化学检测等（用过氧化物酶标记的DNA探针和在过氧化氢存在下靠过氧化氢酶减少碘的电化学检测）。不管怎样，所有这些方法被认为是费时费力的，并且需要复杂和昂贵的仪器。 蛋白核酸反应在生命过程中扮演重要的角色，比如DNA复制，转录，重组，损伤，修复。限制性内切酶是一个被研究的很好的DNA结合蛋白分类，并且在发展现代分子生物中成为一个重要工具。然而，就我们最好的知识而言，没有关于裂解内切酶的DNA分析报告，我们已经开发出一种新的方法定性和定量检测丙型肝炎病毒，基于特定的脱氧核糖核酸裂解的核酸内切酶酶切位点。这个发达的方法表现出缓和优势性能，良好的特异性和选择性，并有能力进行实时监测。 丙型肝炎病毒的检测使用合成寡核苷酸如图1所示。硫堇标记探针的DNA在金电极表面上自组装并且与目标CDNA杂化,, 这是一个与丙型肝炎病毒有关的21-mer寡核苷酸。这个检测是基于在变化的硫堇伏安信号前，消化后的BamHI核酸内切酶,它是一个特殊的分子量约为22千道尔顿的核酸内切酶。17 BamHI位识别全双对称序列50-GGATCC-30和催化裂解双链之间鸟嘌呤的Mg2 +存在。在BamHI被消化后，DNA混合在一个特定的点被裂开并且硫堇的电化学信号减少或消失，减少的范围与在不断变化中的目的基因的浓度有关，形成了目的基因的定量检测。 21个碱基序列的HCV RNA（基地位置：8245-8265）逆转录成互补DNA（基因）。碱基序列的合成寡核苷酸是如下：硫堇标记的探针（S1）：50-SH-TGG CGT ATG GGA TCC ATA CCC-硫堇-30，目标基因 （S2）50GGGTAT CAT ACG的GGA TCCCCA-30，和两碱基错配的cDNA（S3）：50GGGTAT CAT ACG CGT TCC CCA-30。固定的S1被浸渍清洗的金电极浸泡（2毫米的直径，CH仪器）在20ml的S1溶液（1毫摩尔）在41C（步骤a，图1），并孵育48小时。然后用Tris-HCl修饰电极彻底漂洗缓冲液（pH7.6）和水依次除去弱吸附S1。杂化在371C的S1-固定化的金电极浸渍在2毫升的Tris-HC缓冲液（pH值7.6）中含有的cDNA（S2）中，或两碱基错配的cDNA（S3为2小时（步骤b中，图1）中被管理。BamHI切割位点被孵育DNA杂交在改进的TrisHCl（pH值7.6）金电极中进行修饰的金电极含有 20 BamHI， 10mM氯化镁，和50mM NaCl，在 37 度中放置3小时（步骤c中，图。 1），治疗后，电极被清洗并转移入醋酸缓冲液中（（0.1M，pH值为5）去记录电化学响应。 虽然单扫描方波伏安法（SWV）和差示脉冲伏安法（DPV）通常是两种方法用于记录响应的DNA生物传感器的循环伏安法在这项工作中，使用由于这相互作用的探针分子与模式DNA可以得到的循环伏安法分析峰电位和电流。阳极和阴极峰也可以通过使用循环伏安法同时进行研究。S1-改性的金电极上的循环伏
丙型肝炎病毒的生物危害评估报告丙型肝炎病毒的传播与致病丙型肝炎的传染源主要为急性临床型和无症状的亚临床病人，慢性病人和病毒携带者。一般病人发病前12 天，其血液即有感染性，并可带毒12 年以上。HCV 主要血源传播，国外30-90% 输血后肝炎为丙型肝炎，我国输血后肝炎中丙型肝炎占1/3 。此外还可通过其他方式如母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。输入含HCV 或HCV-RNA的血浆或血液制品，一般经 6-7 周潜伏期例急性发病，临床表现全身无力，胃纳差，肝区不适，1/3 病人有黄疸，ALT升 高，抗HCV 抗体阳性。临床丙型肝炎病人50%可发展为慢性肝炎，甚至部分病人会导致肝硬及肝细胞癌。其余约半数病人为自限性，可自动康复。丙型肝炎发病机理仍未十分清楚，当HCV 在肝细胞内复制引起肝细胞结构和功能改变或干扰肝细胞蛋白合成，可造成肝细胞变性坏死，表明HCV 直接损害肝脏，导致发病起一定作用。但多数学者认为细胞免疫病理反应可能起重要作用，发现丙型肝炎与乙型肝炎一样，其组织浸润细胞以 CD3+为主，细胞 毒T 细胞（TC）特异攻击HCV 感染的靶细胞，可引起肝细胞损伤。临床观察资料表明，人感染HCV 后所产生的保护性免疫力很差，能再感染不同，甚至部分病人会导致肝硬化及肝 细胞癌。其余约半数病人为自限性，可自动康复。 结核杆菌通常指结核分枝杆菌和牛分枝杆菌，其中结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis ）是引起人类结核病的主要病原体。 结核分枝杆菌的主要传染途径是经呼吸道传播，由排菌的肺结核病人在咳嗽、喷嚏或大声说话时随呼吸道分泌物排出到空气中，或排菌的肺结核病人随地吐痰通过再生气溶胶（尘埃），携带结核杆菌，飞扬在空气中，被健康的人吸入后发生感染和发病，因此排菌的肺结核患者（尤其是痰涂片阳性未经治疗者）是结核病的主要传染源。一般结核病患者痰中结核杆菌越多，传播的危险性越大。患者排出的飞沫在1-10 微米者，在空气中漂浮时间长，传染性越大。患者病变和症状越严重，传染性也越大。周围人群与患者接触越密切者，受感染的机会越多。与患者同处于空气不流通的室内的密切接触者，受感染的可能性增大。未受结核感染的人是结核病易感人群，由于结核病是人畜共患病，哺乳类动物如牛、鹿、猴、猪、猫、狗等也都可以患结核病。感染结核杆菌后，终身都有可能发病，发病时间因人而异，一般2 个月～20 年才发病。典型肺结核起病缓慢，病程较长，有低热、倦怠、食欲不振、咳嗽及少量咯血。但多数患者病 灶轻微，无显著症状。（1）症状①全身症状表现为午后低热、乏力、食欲不振、消瘦、盗汗等。②呼吸系统症状通常为干咳或带少量黏液痰；继发感染时，痰呈粘液脓性。约1/3 患者有不同程度咯血，咯血后常有低热。大咯血时可发生失血性休克，偶因血块阻塞大气道引起窒息。病灶炎症累及壁层胸膜时，相应胸壁有刺痛，一般多不剧烈，随呼吸及咳嗽而加重。若并发气胸或大量胸腔积液，呼吸困难症状尤为严重。（2）体征早期病灶小或位 于肺组织深部，多无异常体征。若病变范围较大，患侧肺部呼吸运动减弱，叩诊呈浊音，听诊时呼吸音减低，或为支气管肺泡呼吸音。因肺结核好发于肺上叶尖后段及下叶背段，故锁骨上下、肩胛区叩诊略浊，咳嗽后偶可闻及湿啰音，对诊断有参考意义。肺部病变发生广泛纤维化或胸膜粘连增厚时，患侧胸廓常呈下陷、肋间隙变窄、气管移位与叩浊，对侧可有代偿性肺气肿征。 二、结核杆菌的生物学特性从分类学上看结核杆菌属于裂殖菌纲、放线菌目、分枝杆菌科、分枝杆菌属。结核分枝杆菌正常典型的形态是直或稍弯曲、两端钝圆的杆菌，菌体长1-4 纳米，宽0.3-0.6 纳米，无芽胞、无荚膜、无鞭毛，生长发育期间有分枝生长倾向。镜下常呈单个散在或呈“人、 V、T、Y”形排列，菌体多时细菌扭集一起呈绳索状、束状或丛状。此外结核杆菌菌体还具有多形态特征，受不良生长条件的影响可分别表现为杆菌型（基本形态）、滤过型、颗粒型 和球菌型（L型）4 种不同的类型。 分枝杆菌生长缓慢，在人工培养基内繁殖一代约需15-20 小时，一般需2-4 周或更长时间始见菌落生长，甚至有极少数生长极为缓慢者需8 周以上才开始有菌落生长。它为专性需氧菌，生长的温度范围是35-40℃，
丙肝试题 科室：姓名：得分： 一、单项选择题（每小题5分，共10题，计50分。） 1、肝炎病毒的传播途径不包括 A、粪-口途径 B、血液传播 C、接触传播 D、呼吸道传播 E、垂直传播 2、关于丙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒的描述，不正确的一项是 A、均为RNA型病毒 B、均需要依赖乙型肝炎病毒完成其病毒复制 C、均主要为经输血注射途径传播 D、均可有慢性携带者 E、均可导致慢性肝炎、肝硬化 3、能通过输血和血制品传播的是 A、HBV B、HCV C、两者均是 D、两者均否 4、下列哪一项不是丙型肝炎的传播途径: A、输血或血制品途径 B、粪口途径 C、注射途径 D、母婴传播 E、日常生活密切接触途径 5、对急性重型肝炎诊断价值最小的是: A、谷丙转氨酶＞10OOU/L B、肝性脑病 C、深度黄疸 D、肝脏迅速缩小 E、腹水、鼓肠 6、检测抗HCV最常用的检测方法是: A、酶联免疫吸附试验 B、间接免疫荧光试验 C、重组免疫印迹试验 D、放射免疫试验 E、间接血凝免疫试验 7、慢性病毒性肝炎的病程一般超过: A、2周 B、1个月 C、2个月 D、4个月 E、6个月 8、有关丙型肝炎下列哪项是正确的: A、HCV只能通过输血传播 B、血清抗HCV是有保护性抗体 C、丙型肝炎临床表现与乙型肝炎相似，但黄疽发生率较乙型肝炎高 D、慢性丙型肝炎的发生率很高 E、急性丙型肝炎时不应使用干扰素抗病毒治疗
9、男，23岁，畏寒发热、全身乏力、食欲减退1周人院。体查:皮肤、巩膜黄染，肝右肋下1cm，脾未扪及，血象:白细胞5.2×109/L，中性粒细胞0.48，淋巴细胞0.52，血色素130g/L，血清总胆红素124.8μmol/L，1min胆红素70.4μmol/L,ALT 420U/L,AKP 6.4U/L，诊断应考虑: A、溶血性黄疸 B、急性黄疸型肝炎 C、淤胆型肝炎 D、急性重型肝炎 E、慢性肝炎 10、男，42岁，17年前发现HBsAg阳性，近20余天来觉乏力，食欲减退，近1周出现皮肤 黄染。体查：重病容，精神委靡，皮肤、巩膜深度黄染，无肝掌、蜘蛛痣，有腹胀，肝脾末扪及，腹水征阳性，ALT 8OU/L，白蛋白30g/L，球蛋白35g/L，总胆红素600μmol/L，凝血酶原活动度24％，诊断应考虑: A、急性重型肝炎 B、亚急性重型肝炎 C、慢性重型肝炎 D、急性黄疸型肝炎 E、慢性肝炎重度 二、判断题：（每小题5分，共10题，计50分。） 1、只要HCV-Ab阳性就需要抗病毒治疗。（） 2、ALT正常时，尽管HCV-RNA阳性也不需要治疗。（） 3、丙肝肝硬化失代偿期是干扰素抗病毒治疗的绝对禁忌症。（） 4、EVR是指治疗12周时HCV-RNA阴转或降低＞2log。（） 5、SVR是指治疗结束至少随访24周检测HCV-RNA阴性或低于检测下限。（） 6、RVR是指治疗4周时HCV-RNA阴转。（） 7、丙型肝炎的标准治疗方案是干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗。（） 8、只要HCV-Ab阳性就可以诊断丙型肝炎。（） 9、HCV急性感染后的慢性化率明显高于HBV感染。（） 10、丙型肝炎抗病毒治疗疗程主要依据基因型的不同。（） 11、 12、 13、 14、（专业文档是经验性极强的领域，无法思考和涵盖全面，素材和资料部分来自网络， 供参考。可复制、编制，期待你的好评与关注）
丙型肝炎（HC）简介 1974年，人们发现输血后肝炎并非由HAV和HBV感染所致，因此许多学者做了大量的研究，但直到1989年美国Chiron公司Choo等率采用分子生物学技术成功地将HCV cDNA克隆成功，才使HC研究取得突破性进展。HCV是第一个利用分子生物学技术发现的病毒。 一、HCV病毒分子结构 HCV为一单股、正链RNA病毒，其链长度为10000个核苷酸。该链可分为正5`末端、3`末端及位于两个末端之间的病毒编码开读框架（open reading frame, ORF）三部分。 链的5`末端，约有324到241核苷酸组成的区域，有时可形成小的末端发夹样的次级结构，含一个短的直接重复顺序。目前推测其在病毒复制过程中有重要的负调节作用。 3`末端由27－55个核苷酸组成，（不同的分离株，该区的核苷酸长度不一）。 在5`末端与3`末端之间，由9400年核苷酸组成一个大而连续的开读框架。编码3010或3011个氨基酸组成的一个大病毒多肽。从病毒编码框架的上游（5`端）到（3`端），编码不同蛋白质的基因依次为：核衣壳蛋的基因，包膜蛋的基因及非结构蛋的1~5基因。 5`末端里有高度的保守性，其在病毒的复制和保持病毒的性状方面起重要作用。3`末端在病毒的复制过程中可能也起一定的调节作用。单一的ORF称病毒多蛋白前体（Precursor polyprotein）这一大的病毒蛋白前体，但宿主基因和病毒基因编码的蛋白酸的一系列酶切修饰，形成不同大小和功能不一的病毒蛋白。这些病毒蛋白目前主要分两大类：（1）结构蛋白，位于5`末端，包括核心蛋白（C）、包膜蛋白（E1、E2/NS1），是参与组成病毒颗粒的蛋白质；（2）非结构蛋白，又称功能蛋白，包括NS2－NS5，是参与病毒复制和具有其他功能的蛋白质。HCV基因存在显著的变异，这一变异导致HCV不同的分离株间核苷酸序列和氨基酸序列存在不同程度的差别，以此将HCV分为若干个亚型。 应用HCV各型特异性CDNA探针，作印迹杂交分析，发现HCV基因型各地区不同。在美国主要为原型（即PT型Prot-otypt）占70%，而K1与K2型较少（10%），在日本K1型占77.7%，K2a占16.5%、K2b占5%，而PT型则甚少见。我国HCV基因型初步分析结果与日本相似，K1型占40.3%，K2a占20.9%，而K2bH占13.43%，K1型较多见，
甲型肝炎病毒微生物学研究及其检验 发表时间：2017-02-15T10:55:44.967Z 来源：《系统医学》2016年17期作者：毛艳虹 [导读] 让甲型肝炎病毒患者及早康复，让其他健康人群免受甲型肝炎病毒的威胁。提高全国人民的身体健康水平。 云南昆钢医院 650302 【摘要】甲型肝炎作为一种人类常见疾病，时时困扰着我们的生活，其传播途径广，影响范围大，因此必须做好甲型肝炎病毒微生物学的研究工作，从本质上减少甲型肝炎的发病率。本文从甲型肝炎病毒的概念出发，分别讲述了关于甲型肝炎病原学的研究工作进展及其对治疗甲型肝炎的意义和目前在检测方面出现的疑惑和问题。最后提出了甲型肝炎病毒的防治方法和原则，希望可以为进行甲型肝炎病毒研究的同行提供一些依据和参考。 【关键词】甲型肝炎；概念；检测；问题；原则 【中图分类号】R512.61 【文献标识码】A 【文章编号】2096-0867（2016）17-227-01 引言 在一个人进入职场之前，每个人都必须进行甲型肝炎病毒检测，因为其携带者数量多，其自身传播途径多，范围广，会给他人带来一定的生活困扰。因此必须做好甲型肝炎病毒的检测和防治工作，只有这样才能够减少发病率，提高治疗水平，让甲型肝炎病毒患者及早康复，让其他健康人群免受甲型肝炎病毒的威胁。提高全国人民的身体健康水平。 1甲型肝炎病毒概念 甲型肝炎病毒属于可以引发肝炎的病原体。它是由1973年Feinslone 首先用免疫电镜技术在急性期患者的粪便中发现甲型肝炎病毒。属微小RNA病毒科，新型肠道病毒72型。人类感染HAV后，大多表现为亚临床或隐性感染，仅少数人表现为急性甲型肝炎。甲型肝炎病毒的形状是一个球形，体质均匀，病毒颗粒对称布置，有的病毒颗粒是实心的，有的病毒颗粒是空心的。经过研究发现，病毒颗粒是否是实心与其发展状况相关，实心的病毒颗粒是发展成熟的病毒，空心的病毒是发展不完善，没有携带RNA的病毒，是没有传染性的。其为单螺旋结构，具有七千多个核苷酸组成。其存活率很高，基本不受外部环境的干扰。在室温情况下可以存活一个星期的样子，在干粪中大约可以存活1个月的样子，它的传播途径主要是通过粪便和口。 2病原学检测及临床意义 急性甲型肝炎是很难查出来的，无论是从已经得此病的患者还是做肝功能检查途径都很难将它与其他的肝炎相区别，因此我们必须花费更多的精力去检测急性甲型肝炎病毒的病原体，这是迫在敏捷的任务和职责。 在病原体检测项目方面主要两个内容，一个是抗HAV IgM，另一个则是抗HAV IgG。HAV IgM此项检测在携带者身上出现的较早，也是刚发病不久的标志，在早期的检测中属于操作最简单但是可靠性最高的检测项目。在发病的几天后就会发生变化，会呈现出阳性，一般的持续时间为两个月到四个半月之间，有的持续时间较长，有可能持续六个月的时间。在检测时多用的是酶联免疫吸附试验。HAV IgG检测项目出现的迟一些，但是其发展速度很快，在两到三个月的时间就可以达到它的最大值，如果出现了此项目，说明该患者已经得病有一段时间了，并且可能一生都摆脱不了它的困扰。 3存在问题 在检测过程中采用酶联免疫检测法检测抗-C-100有一定的缺陷，最明显的是抗-C-100在四个月到六个月的时间里才会明显，这对于急性甲型肝炎病毒的检测来说是不利的。并且它不是简单的抗体，而是lgG 抗体。此方法受到了广大的质疑，认为其检测结果不精确。此检测方法只是针对抗体呈现阳性，而有的时候抗体会出现假阳性，因此，此方法检测受到质疑。由于HCV它的核心抗体出现的较早，因此现在用此种检测方法检测HCV，经过大量的临床试验发现其准确度相对较高，值得推广。 4防治原则 其预防工作主要是平时要养成好的生活习惯，注意在饮食方面的安全卫生，不要认为不干不净吃了没病。注意饮用清洁的水源，要注意个人卫生，饭前便后要洗手，政府应该出台相应的政策做好粪便的管理工作。注射丙种球蛋白及胎盘球蛋白是一种一劳永逸的预防措施，只要注射一次，就可以避免甲型肝炎病毒的感染。甲型肝炎病毒主要是通过粪便和口传播的，平时吃的海鲜是主要的传播途径，还有一些集体机构传染性较大，比如说学校和部队等。多数出现甲型肝炎病毒的患者早期会出现恶心、头痛、胃寒、发热、全身乏力、食欲不振、厌油腻和尿色逐渐加深渐呈浓茶色等。在治疗过程中，加药物辅助，不可以喝酒和吸烟，尽早睡觉，多在床上休息，直到病情有所缓和。血清总胆红素在17.1umol/L以下，ALT在正常值2倍以下时可以出院，但出院后仍应休息1-3月，恢复工作后应定期复查半年-1年。结语 甲型肝炎病毒是一种常见的人类疾病，会给患者的生活、工作和学习带来影响，因此必须做好甲型肝炎病毒的研究和检测工作。针对甲型肝炎病毒的特殊性，研究者花费了大量的精力和时间，取得了一定的成绩，但是在研究过程中也出现了些疑惑和问题，而解决了问题之后，其治疗措施和检测项目变得更加精确。我们个人在生活中也应该注意防止被传染，平时多注意饮食安全，发现发病早期症状尽早去医院检查和治疗。相信在大家的共同努力下，一定可以攻破甲型肝炎病毒这个难关。 参考文献 [1]单学伦.甲型肝炎的研究进展[J];现代医学;1980年03期 [2]郭元吉;甲型流感病毒在我国动物中分布的初步调查[J];中国医学科学院学报;1981年04期. [3]刘庚起,龚新昌,朱既明,任贵方,范瑞莲,阮薇琴;甲型流感病毒H1和H2之间的抗原关系(摘要)[J];中国医学科学院学报;1980年02期. [4]王宗战.胃灌洗治疗上消化道出血[J];山东医学高等专科学校学报;1980年01期.
丙型肝炎病毒（HCV）调查报告 丙型肝炎由丙型肝炎病毒（HCV）感染所致，主要由血液/体液传播。据世界卫生组织估计，全球有1.7亿人感染HCV。在我国健康人群抗HCV阳性率为 0.7%~3.1%，约3800万人。由于病毒生物学特点和宿主免疫功能等多方面因素，机体免疫往往难以有效清除病毒，致使约50%~80%HCV感染者发展为慢性肝炎，其中20%~30%将发展成肝硬化。肝硬化患者中每年有1%~4%发展成为肝细胞癌症。 一、基因组特征： 丙型肝炎病毒呈球形颗粒，直径约为50nm，有一脂质包膜。基因组为单链正链RNA，链长月9.5kb。整个基因组只有一个ORF，编码一条由3010~3033个氨基酸组成的聚蛋白前体，该蛋白前体在病毒蛋白酶和宿主信号肽酶作用下，裂解为病毒的结构蛋白和非结构蛋白。（如图所示） 在HCV基因组中，5’端有一个长度和序列非常稳定的非编码区（UTR），由341个核苷酸组成，形成4个二级结构域，为病毒复制和翻译所必需。此区是整个基因组中最保守的区域，所以常常选择该区域的基因序列作为基因扩增的靶序列，这样可以检测出目前已知的所有HCV基因型。3’端UTR包括3个结构域：靠近5’端为基因型特异的多变区（不同基因型之间的核苷酸序列差异较大；相同基因型之间核苷酸序列比较保守）；居中部分为一个多聚U区域（poly U），含有50~62个核苷酸，对病毒RNA复制至关重要，但不同基因型的HCV的多聚U 区域长度不等；3’端尾部为高度保守的发夹样结构，称为X-tail。通过定点突变破坏这一结构会导致RNA病毒复制的显著降低，说明该区域对RNA病毒有效复制同样重要。5’端和3’端UTR之间是一个ORF并且分成9个区域：核心区→E1区→NS1/E2区→NS2区→NS3区→NS4a区→NS4b区→NS5a区→NS5b区。其中NS5b 区域在不同型HCV中同源性较低，可作为HCV分型依据。