实验三盐酸副玫瑰苯胺比色法测大气中的二氧化硫 一﹑实验目的 1．学习大气采样机使用方法。 2．掌握盐酸副玫瑰苯胺比色法测大气中二氧化硫的方法。 二﹑实验原理 二氧化硫被四氯汞钾吸收后，生成稳定的二氯亚硫酸盐络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用，生成紫红色络合物，比色测定。 主要干扰物质为：氮氧化物、臭氧、锰、铁、铬等。加入氨基磺酸铵可消除氮氧化物的干扰；采样后放置一段时间可使臭氧自行分解；加入磷酸和乙二胺四乙酸二纳盐，可以消除或减少某些重金属的干扰，如在用10 mL吸收液时，60 μg铁﹑10 μg锰﹑10 μg铬﹑10 μg铜﹑22 μg钒没有明显干扰；环境大气中的微量氨﹑硫化物及醛类不干扰。 三﹑实验仪器 1．吸收管：多孔玻板吸收管﹑小型冲击式吸收管或大型气泡式吸收管，用于30 min~60 min采样；125 mL多孔玻板吸收瓶或125mL洗气瓶，用于24 hr采样。 2．大气采样器：流量范围0~1L/min。 3．721分光光度计。 四﹑试剂 所用水为除去氧化剂的重蒸水。 1．0.04 mol/L四氯汞钾吸收液：称取10.9 g氯化汞(HgCl2)，6.0 g氯化钾(KCl)和0.066 g乙二胺四乙酸二纳盐(Na-EDTA)，溶于水中，稀释至1 L。此溶液pH约为4，在酸度计上用0.01 mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至5.2左右。此试剂可以稳定6个月。 2．0.6%的氨基磺酸铵溶液：称取0.6g氨基磺酸铵(H2NSO3NH4)溶于水中，稀释至100 mL，用时现配。 3．0.2%甲醛溶液：量取1.4 mL 36~38%甲醛，溶于水中，稀释至250 mL，与冰箱中保存，可稳定一个半月。 10．二氧化硫标准溶液：称取0.200 g亚硫酸钠(Na2SO3)及0.010 g乙二胺四乙酸二钠盐，溶于200 mL新煮沸但已冷却的水中，轻轻摇匀。 将上述溶液取5mL稀释至1000mL，即可得每毫升含2.0 μg二氧化硫的标准溶液。此溶液储于冰箱中，一周内浓度不变。 12．0.016%对品红使用液：称取0.20g对品红，溶解于100mL浓度为1.0mol/L的盐酸中，可得0.2%对品红溶液。然后吸取20.00 mL 0.2%对品红储备液于250 mL容量瓶中，加25 mL 3 mol/L的磷酸溶液，用水稀释至刻线，至少放置24 hr方可使用。此溶液稳定9个月以上。
细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)使用说明 货号：G2410 有效期：6个月。 产品组成： 产品名称规格保存 试剂(A):CO清除液2×50ml4℃避光 试剂(B):DAB 孵育液B1:DAB染色液45ml-20℃避光B2:DAB增强剂5ml RT B3:DAB反应液100μl RT 按B1:B2:B3=9000:1000:3混合，即为DAB孵育液，即配即用。 试剂(C):苏木素染色液50ml4℃避光 试剂(D):CO对照液1ml RT 产品说明： 细胞色素氧化酶(Cytochrome Oxidase，CO)被认为是线粒体膜固有的酶，在含有大量线粒体的细胞(如心肌、肾小管上皮以及胃壁细胞、肝细胞)内都具有高度活性。此酶活性往往作为细胞内氧化代谢的指标，亦作为线粒体的标志酶之一。 细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)染色原理是细胞色素氧化酶催化3,3-二氨基联苯胺(DAB)使其侧链的氨基氧化，进行反复的氧化性聚合和氧化性环化形成不溶性的棕色Phenazine 聚合物。此酶对固定剂敏感，故须用新鲜切片。 自备材料： 1、恒温培养箱
2、光学显微镜 操作步骤(仅供参考)： 1、冰冻切片，厚6μm，不固定。 2、滴加CO清除液于切片上，铺满整个样品表面。 3、切片入DAB孵育液中，37℃避光孵育45～60min。 4、移去切片上的染色液，滴加CO清除液于切片上，铺满整个样品表面。 5、蒸馏水稍洗3～5s。 6、(可选)滴加苏木素染色液浅染细胞核3～5min。 7、流水冲洗10min。常规脱蜡透明，中性树胶封固。 染色结果： CO酶活性部位棕色 心肌、肾小管上皮内颗粒(线粒体)蓝色 阴性对照(可选)：取新鲜配制好的DAB孵育液，按DAB孵育液:CO对照液=50:1的比例混合，即为CO对照工作液。相同切片入CO对照工作液，室温孵育30～60min，其余同上，呈阴性反应。 注意事项： 1、本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。 2、CO孵育液孵育时间因组织而异，心肌、肾孵育约20～30min，肝脏约50～60min，甲状腺滤泡上皮约2h。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
1 。称取TMB １７．２mg(固体），加ＤＭＳＯ１ml 溶解，然后加醋酸钠缓冲液（０．１ｍｏｌ／ｌ，ｐＨ５．５）６６ml，此为底物A 底物B ,取双蒸水100ml，加３０％H2O2１７微升 使用时A：B 液等体积混匀即可． 称取TMB 20mg(固体），先用无水乙醇10ml 溶解，充分振荡（试剂瓶要干净，干燥），加双蒸水定容到100 ml，此为底物A 底物B ,取1水柠檬酸 2.1g，无水Na2HPO4 2.82g，0.75%的过氧化氢尿素0.64ml，双蒸水定容至100ml(无须调PH值，应在4.5-5.0范围。 使用时A：B 各取5ml 混匀，可用于一块96孔板显色。 过氧化氢脲比H2O2稳定，不必如H2O2现用现配，都起供氢体的作用。 2 TMB(10mg/5ml无水l乙醇) 0.5ml 底物缓冲液10ml 0.75%过氧化氢32ul 底物缓冲液: 0.2M磷酸氢二钠25.7ml 0.1M柠檬酸24.3ml 加蒸馏水50ml TMB使用液： TMB （10mg/5ml，无水乙醇）0.5ml 底物缓冲液10ml 0.75% H2O2 32 Ul 3. TMB加入2.5ml无水酒精中,可加热至37℃～40℃直到TMB完全溶解。 将TMB配成1%浓度，4 ℃保存半年以内使用。 使用前，用pH5.0磷酸—柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml（1mgTMB）1%TMB液，再按每毫升TMB加入30% H2O21ul混匀后立即使用。 2NH2SO4终止后，450nm测定OD值。 4. HRP的底物： A液：0.02%H2O2 ；用0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠，PH4.5～5.0稀释。 B液：TMB-HCl：0.4‰；用50mM柠檬酸钠，浓HCl调PH值为2.8的溶液溶解。 A液，B液各50ul使用。可使用起来显色比较缓慢，OD值较PIERCE的底物稍偏低一点。 5. 1、TMB粉末，溶于N，N－二甲基甲酰胺，配成10mg/mL。 2、底物缓冲液：0.2Mol/LNa2HPO4 25.7mL 0.1Mol/L柠檬酸24.3mL 水50mL 3、H2O2 用时10mg/mL TMB 165uL 底物缓冲液11mL
目录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备 2.2 静脉采血 2.3 抗凝剂 2.4 标本处理 3. 试剂 3.1 试剂 3.2 校准血清 3.3 试剂与校准血清的稳定性 4. 仪器 5. 操作 6. 计算 7. 操作性能 7.1 精密度 7.2 准确度 7.3 灵敏度 7.4 可报告范围 7.5 特异性 7.6 干扰 8. 参考值 9. 临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理 在碱性条件下，样品中的镁离子与二甲苯胺兰生成有色络合物，此产物在546nm波长有最大吸收，其吸收强度与血清中镁的含量成正比，再通过与同样处理的标准镁比较，经计算可求出血清镁的含量
2．标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。。 2.3 抗凝剂： 血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。 3．试剂 3.1 试剂： 本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司Mg试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下： 3.2 校准血清： 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的±2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
甲醛缓冲溶液吸收—副玫瑰苯胺分光光度法 1.原理 二氧化硫被甲醛缓冲溶液吸收后，生成稳定的羟基甲磺酸加成倾化合物。在样品溶液中加入氢氧化钠使加成化合物分解，释放出的二氧化硫与盐酸副玫瑰苯胺、甲醛作用，生成紫红色化合物，根据颜色深浅，用分光光度计在577nm处进行测定。 本方法的主要干扰物为氮氧化物、臭氧及某些重金属元素。加入氨磺酸钠可消除氮氧化物的干扰；采样后放置一段时间可使臭氧自行分解；加入磷酸及环己二胺四乙酸二钠盐可以消除或减少某些金属离子的干扰。在10ml样品中存在50ugCa、Mg、Fe、Ni、Mn、Cu等离子及5ug二价锰离子时不干扰测定。 本方法适宜测定浓度范围为0.003～1.07mg/m3。最低检出限为0.2ug/10ml。当用10ml吸收液采气样10L时，最低检出浓度为0.02mg/m3；当用50 ml吸收液，24h采气样300L取出10ml样品测定时，最低检出尝试为0.03mg/m3。 2.仪器 ①空气采样器：用于短时间采样的空气采样器，流量范围0~1L/min；用于24h连续采样的空气采样器应具有恒温、恒流、计时、自动控制仪器开关的功能，流量范围0.2~0.3L/min。各类采样器均应定期在采样前进行气密性检查和流量校准。吸收瓶的阻力和吸收效率应满足相应的技术要求。 ②分光光度计：可见光波长范围380~780nm。 ③多孔玻板吸收管：10ml的多孔玻板吸收管用于短时间采样；50ml的多孔玻板吸收管用于24h连续采样。 ④恒温水浴器：广口冷藏瓶内放置圆形比色管架，插一支长约150nm，0~40℃的酒精温度计，其误差应不大于0.5℃. ⑤具塞比色管：10ml。 3.试剂 ?试验用蒸馏水及其制备：水质应符合实验室用水质量二级水（或三级水）
实验三PAS反应与联苯胺反应 一：实验目的： 掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。 二：实验原理： 1、高碘酸—希夫试剂反应简称PAS（Periodic Acid Schiff reaction）反应。组织内的多糖等都用PAS法来显示。其化学基础是利用过氧酸的氧化作用打开C—C键，将CH2OH—CH2OH变成CHO—CHO。同样，对CH2OH—CHO，CH2OH—COOH，CH2OH—CH2NH2等物质均有氧化作用而放出醛基，这种新生的醛基和无色品红作用形成紫红色化合物（见图1）。颜色的深浅与糖类的多少有关。 2、细胞内的过氧化物酶能把许多胺类化合物氧化为有色化合物（见图2），用联苯胺处理样本，细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为兰色的苯胺蓝，进而变为棕色产物，因而可以根据颜色反应来判断过氧化物酶的有无或多少。 三：实验材料与试剂 1.材料：土豆块茎、洋葱根尖或鳞茎表皮。 2.器具：显微镜、载波片、单面刀片、培养皿、镊子、染色钵、盖玻片、吸水纸。 3.试剂： （1）过碘酸酒精溶液： 过碘酸（高碘酸）0.4g 95%酒精35ml 0.2 mol/L醋酸钠5ml （即17.2g醋酸钠溶于1000ml 蒸馏水） 蒸馏水10ml 该液需保存于冰箱，包黑纸，如变黄则失效。 （2）Shiff试剂（详见指导书P75页） （3）0.1%钼酸铵溶液：称取0.1 g钼酸铵溶于100 ml 0.85%盐水 （4）联苯胺混合液（临用前配制） 联苯胺0.2g 95%乙醇100ml 3%H2022滴 （5）亚硫酸水溶液：取200ml自来水，加10ml10％的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml1mol/L 的HCl，三者于使用前混匀。
https://www.doczj.com/doc/af8108183.html,/techniquezones/66 抗体稀释液和ELISA相关溶液的配制 1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBS NaH2PO4·2H2O 0.39克 Na2HPO4 1.27克 NaCl 0.85克 NaN3 200mg H2O（蒸馏水）至1000ml 2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液pH7.4，PBST NaCl 2.0克 KH2PO4 0.2克 Na2HPO4·12H2O 2.9克 KCl 0.2克 NaN3 0.2克 H2O 至1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml 4°C保存备用 3、包被液（简称CB）pH9.6 Na2CO3 1.59克NaHCO3 2.93克 NaN3 0.2克 H2O 至1000ml 密封盖好，4°C存放备用 4、ELISA底物液（可溶性底物） 磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.0 0.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ml) 24.3ml 0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/1000ml) 25.7ml H2O 50ml 4°C存放备用 5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）
0.05mol/L pH7.6 Tris-HCL Tris 6.05克 HCL(36%) 3.15克（约2.7ml浓HCL） H2O 至1000ml DAB为3′，3′二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色 6、DAB溶液配制：（组化及Western blot 显色） 称DAB30mg，用0.05mol/L pH7.6Trs-HCL缓冲液100ml溶解,如有沉淀，过滤后使用，一般新鲜配制使用。用前加入1%H2O2 1-1.5ml,H2O2浓度为0.01%，混均后使用。 7、3′，3′，5′，5′，-四甲基联苯胺（TMB）溶液配制： 用二甲基甲酰胺（dimethylformamide，DMF)或无水乙醇，将TMB配成1%浓度，4°C保存半年以内使用。使用前，用pH5.0磷酸-柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml(1mg/TMB)1%TMB液，再按每毫升TMB加入30%的H2O2 1ul，混匀后立即使用。2N H2SO4终止后，450nm测定OD值。 8、1%离子琼脂胶配制液 作免疫双相扩散，单相扩散及免疫电泳中使用。 0.05UpH8.6巴比妥钠-HCL缓冲液 巴比妥钠23.8克 1mol/L HCL 34.5ml H2O 2150ml
苯胺类化合物的测定 N-(1-萘基)乙二胺偶氮分光光度法 1 主题内容与适用范围 本方法规定了测定水中苯胺类化合物的N-(1-萘基)乙二胺重氮偶合比色法。本方法适用于地面水、染料、制药等废水中芳香族伯胺类化合物的测定。试料体积为25ml，使用光程为10mm的比色皿，本方法的最低检出浓度为含苯胺0.03mg/L，测定上限浓度为1.6mg/L。 在酸性条件下测定，苯酚含量高于200mg/L时，对本方法有正干扰。 2 原理 苯胺类化合物在酸性条件下(pHl.5—2.0)与亚硝酸盐重氮化，再与N—(1-萘基)乙二胺盐酸盐偶合，生成紫红色染料，进行分光光度法测定，测量波长为545nm。 3 试剂 分析中只使用公认的分析纯试剂和蒸馏水或纯度与之相当的水。 3.1 蒸馏水。 3.2 硫酸氢钾(4KHSO)。 3.3 无水碳酸钠(32CONa)。 3.4 亚硝酸钠(2NaNO)，50g/L：称取5g亚硝酸钠，溶于少量水中，稀释至100ml(应配少量，贮于棕色瓶中，置冰箱内保存)。 3.5 氨基磺酸铵(234NHSONH)，25g/L：称取2.5g氨基硝酸铵，溶于少量水中，稀释至100ml(贮于棕色瓶中，置冰箱内保存)。 3.6 N-(1-萘基)乙二胺盐酸盐，20g/L：称取2gN-(1-萘基)乙二胺盐酸盐，溶于水中，稀释至100ml(详见附录A)。 3.7 硫酸标准溶液，浓度c(1/242SOH)＝0.05mol/L。 3.8 精密pH试纸0.5～5.0。 3.9 苯胺(C6H5NH2)标准贮备液：于25ml容量瓶中加入0.05mol/L硫酸溶液(3.7)10ml，称量(称准至0.0001g)，加入3～5滴苯胺试剂，再称量，用0.05mol/L硫酸溶液(3.7)稀释至标线，摇匀。计算出每毫升溶液中所含苯胺的量，此为贮备液，置冰箱内保存(可用两个月)。 3.10 苯胺标准使用溶液：将标准贮备液(3.9)用0.05mol/L硫酸溶液(3.7)稀释成浓度为1.00ml 溶液含苯胺10.0μg的标准使用溶液(临用时配)。 注：如果苯胺试剂为无色透明液，可直接称量配制。若试剂颜色发黄，应重新蒸馏或标定苯胺含量后使用(详见GB 691《化学试剂苯胺》)。 4 仪器 4.1 分光光度计：能在波长545nm处操作，配有光程为10mm的比色皿。 4.2 25ml具塞刻度试管。 5 采样与样品 5.1 采样 采集500ml水样于硬质玻璃瓶中(保存不得超过24h)，若取样后不能及时进行测定，需置4℃下保存(不得超过两周)。 5.2 试料制备 将水样(5.1)用经水冲洗过的中速滤纸过滤，弃去初滤液20ml，用硫酸氢钾(3.2)或无水碳酸钠(3.3)调节pH值为6，作为试料。 注：若水样颜色深，可用聚已内酰胺粉末脱色(6.4.1)。颜色不深的水样可不脱色，而以样品溶液(不加显色剂)为参比溶液。 6 分析步骤 6.1 校准曲线的绘制 取7个25ml具塞刻度试管(4.2)，分别加入苯胺标准使用溶液(3.10)0.0，0.25，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00ml，各加水(3.1)至10ml。然后按照测定的步骤(6.2)进行操作。
实验项目编号：实验二 实验名称：盐酸副玫瑰苯胺比色法测定食品中的亚硫酸盐 实验学时：4 实验日期：先不写 实验地点：先不写 实验二盐酸副玫瑰苯胺比色法测定食品中的亚硫酸盐 一、实验目的 l．学习盐酸副玫瑰苯胺显色比色法测定食品中亚硫酸盐的实验原理。 2. 掌握实验的操作要点及测定方法。 二、实验原理 二氧化硫被甲醛缓冲溶液吸收后，生成稳定的羟基甲基磺酸，化学反应式如下： 加入氢氧化钠后，与盐酸副玫瑰苯胺作用，生成紫红色化合物，此络合物于波长560nm 处有最大吸收峰，且在一定范围内其颜色的深浅与亚硫酸盐的浓度成正比，可以比色定量。结果以试样中二氧化硫的含量表示。 三、仪器与试剂 1. 仪器 可见分光光度计；25 mL 带塞比色管；恒温水浴槽。 2. 试剂 （1）0.05mol/L EDTA-2Na 溶液：称取1.8612g EDTA-2Na溶于新煮沸后已冷却的水中，定容至100mL。 （2）甲醛吸收贮备液：称取 2.040 g 邻苯二甲酸氢钾和0.372 g 乙二胺四乙酸钠（简称EDTA-2Na）溶于水中，再加入 5.5 mL37％甲醛溶液，用水稀释至100mL。贮于冰箱，可保存一年； （3）甲醛吸收工作液：临用时，将上述吸收贮备液用水稀释100倍； （4）2mol/L 氢氧化钠溶液； （5）0.3%氨基磺酸铵溶液：称取0.3g 氨基磺酸铵，用少量水溶解，加入1 mol/L 氢氧化钠溶液3.0 mL，用水稀释至100 mL；
（6）0.2%盐酸副玫瑰苯胺贮备液：称取0.2g盐酸副玫瑰苯胺，用1mol/L 盐酸溶液溶解并稀释至100 mL，吸取25.00mL上述溶液于100mL容量瓶中，加入30 mL浓磷酸，用水稀释至刻度;； （7）1. 00 mg /mL 二氧化硫贮备液：准确称取0. 1625 gNaHSO3 (SO2的纯度为0.62g/g)于100mL容量瓶中，用0.05mol/L EDTA-2Na 溶液溶解，缓缓摇匀以防充氧，使其溶解并用EDTA-2Na 溶液稀释至刻度。 （8）2.5μg/mL 二氧化硫标准工作液：取贮备液0.5mL于200mL容量中，用甲醛吸收工作液定容至刻度。 四、实验步骤 1. 二氧化硫标准曲线绘制：按照表1加入各种溶液，用1 cm 比色杯，以零管调节零点，于波长560 nm 处测定吸光度，以二氧化硫含量对吸光度绘制标准曲线。 管号0 1 2 3 4 5 样品管二氧化硫标准溶液/mL 0 1 2 3 5 10 甲醛缓冲吸收液/mL 10.0 9 8 7 5 0 氨基磺酸铵/mL 0.5，混匀 氢氧化钠溶液/mL 0.5，混匀 盐酸副玫瑰羟胺/mL 迅速加入1.00，立即加塞混匀，25°C恒温10min 二氧化硫含量/μg0 2.5 5.0 7.5 12.5 25 吸光值（A） 2. 样品处理： 称取经均匀捣碎的样品5-10g(试样量可视含量高低而定)于100mL容量瓶中，加入20mL 甲醛吸收液，超声50min，超声功率240W，超声温度25℃，去离子水定容，取滤液备用。 3. 测定： 吸取0.5~ 10.0mL上述试样处理液于20 mL具塞比色管中, 按标准曲线加入试剂并测定，按国标方法计算公式计算结果。 式中：X—试样中二氧化硫的含量（g/kg）； A—测定用样液中二氧化硫的质量（μg）； m—试样质量（g）； V—测定用样液的体积(mL)。 五、注意事项 1. 实验使用氨磺酸钠是为了消除氮氧化合物（如NO3-等）的干扰； 2. 甲醛法测定二氧化硫的显色反应要求在酸性溶液中进行，因此要将含有标准溶液(样品溶液)、吸收液、氨磺酸钠溶液、氢氧化钠溶液的溶液迅速加入强酸性盐酸副玫瑰苯胺
细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法) 简介： 细胞色素氧化酶(Cytochrome Oxidase ，CO)被认为是线粒体膜固有的酶，在含有大量线粒体的细胞(如心肌、肾小管上皮以及胃壁细胞、肝细胞)内都具有高度活性。细胞色素氧化酶染色液(联苯胺法)染色原理是细胞色素氧化酶催化3,3-二氨基联苯胺(DAB)使其侧链的氨基氧化，进行反复的氧化性聚合和氧化性环化形成不溶性的棕色Phenazine 聚合物。此酶对固定剂敏感，故须用新鲜切片。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 2、 冰冻切片，厚6μm ，不固定。 3、 滴加CO 清除液于切片上，铺满整个样品表面。 4、 切片入DAB 孵育液中37℃避光孵育。 5、 移去切片上的染色液，滴加CO 清除液于切片上，铺满整个样品表面。 6、 蒸馏水稍洗。 7、 (可选)滴加Lea 苏木素染色液浅染细胞核。 8、 流水冲洗。常规脱蜡透明，中性树胶封固。 染色结果： CO 酶活性部位 棕色 心肌、肾小管上皮内颗粒(线粒体) 蓝色 编号 名称 DE0031 4×50ml Storage 试剂(A): CO 清除液 2×50ml 4℃ 避光 试剂(B): DAB 孵育液 B1: DAB 染色液 45ml -20℃ 避光 B2: DAB 增强剂 5ml RT B3: DAB 反应液 100μl RT 按B1:B2:B3=9000:1000:3混合，即为DAB 孵育液，即配即用。 试剂(C): Lea 苏木素染色液 50ml 4℃ 避光 试剂(D): CO 对照液 1ml RT 使用说明书 1份
注意事项： 1、本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。 2、CO孵育液孵育时间因组织而异，心肌、肾孵育约20～30min，肝脏约50～60min， 甲状腺滤泡上皮约2h。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
实验一大气中二氧化硫的测定（盐酸副玫瑰苯胺分光光度法）一、实验目的 1．掌握二氧化硫测定的基本方法； 2．熟练大气采样器和分光光度计的使用。 二、实验原理 大气中的二氧化硫被四氯汞钾溶液吸收后，生成稳定的二氯亚硫酸盐络合物，此络合物再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺发生反应，生成紫红色的络合物，据其颜色深浅，用分光光度法测定。按照所用的盐酸副玫瑰苯胺使用液含磷酸多少，分为两种操作方法。方法一：含磷酸量少，最后溶液的pH值为1.6±0.1；方法二：含磷酸量多，最后溶液的pH值为1.2±0.1，是我国暂选为环境监测系统的标准方法。本实验采用方法二测定。 三、仪器 1.多孔玻板吸收管（用于短时间采样）；多孔玻板吸收瓶（用于24h采样）。 2.空气采样器：流量0—1L/min。 3.分光光度计。 四。、试剂 1.蒸馏水 25℃时电导率小于1.0μΩ/cm。pH值为6.0—7.2。检验方法为在具塞锥形瓶中加500mL蒸馏水，加1mL浓硫酸和0.2mL高锰酸钾溶液（0.316g/L），室温下放置1h，若高锰酸钾不褪色，则蒸馏水符合要求，否则应重新蒸馏（1000mL蒸馏水中加1gKMnO7及1gBa(OH)2,在全玻璃蒸馏器中蒸馏）。 2.甲醛吸收液（甲醛缓冲溶液） (1)环已二胺四乙酸二钠溶液C（CDTA-2Na）=0.050mol/L:称取1.82g反应-1，2-环已二胺四乙酸[（trans-1,2-Cyclohexylenedinitrilo）tetracetic acid简称CDTA]，溶解于1.50mol/LNaOH 溶液6.5mL，用水稀释至100ml。 (2)吸收储备液：量取36%--38%甲醛溶液 5.5mL，加入 2.0g邻苯二甲酸氢钾及0.050mol/LCDTA-2Na20.0mL溶液，用水稀释至100mL,贮于冰箱中，可保存一年。 (3)甲醛吸收液：使用时，将吸收贮备液用水稀释100倍。此溶液每毫升含0.2mg甲醛。 3.0.60%（m/v）氨磺酸钠溶液 称取0.60g氨磺酸（H2NSO3H）,加入1.50mol/L氢氧化钠溶液4.0mL,用水稀释至100mL密
本文经大量试验，采用硫酸联苯胺法测定原盐中的SO42-。试样溶解后，在微酸性溶液中，加入盐酸联苯胺，与SO42-生成硫酸联苯胺： C12H8(NH2)2·2HCl + SO42-= C12H8(NH2)2·H2SO4↓ + 2Cl- 沉淀过滤并溶于热水中后，以酚酞为指示剂，用NaOH标准溶液进行滴定： C12H8(NH2)2·H2SO4+2OH- = C12H8(NH2)2 + SO42- +2H2O 1实验部分 1.1 主要试剂 1.1.1盐酸联苯胺溶液25g·L-1，25g盐酸联苯胺（AR）于瓷研钵中，加10mL 二次去离子水及10mL1:1HCl，小心研至糊状，移入盛有400mL纯水的烧杯中，搅拌溶解，用定性滤纸过滤，滤液用二次去离子水稀释至1000mL，贮于棕色试剂瓶中。 1.1.2 硫酸联苯胺溶液饱和溶液，量取10mL1:1 H2SO4溶液，加入盛有70mL 纯水的烧杯中，加1:1HCl1.0mL，25g·L-1的盐酸联苯胺溶液40mL，搅拌溶解至沉淀析出，静置5min后用定性滤纸过滤，用二次去离子水洗涤沉淀至无酸性反应。沉淀溶于水中至达到饱和，用NaOH溶液中和至呈中性。 1.1.3 其他溶液HCl溶液（1:1）；H2SO4溶液（1:1）；NaOH标准溶液， 0.10mol·L-1；酚酞指示剂，2g·L-1的乙醇溶液。 1.2 分析方法 1.2.1 NaOH标准溶液浓度的标定 准确称取在100~125℃烘干2h的邻苯二甲酸氢钾基准物质0.4~0.5g(准至0.0001 g)于250mL锥形瓶中，加20~30mL水，温热使之溶解，冷却后滴加2~3滴酚酞指示剂，用NaOH溶液滴定至溶液呈微红色，半分钟不褪色，即为终点（平行标定3~5份）。并按下式计算其NaOH标准溶液的浓度C ： 式中：m ——称取邻苯二甲酸氢钾的质量，g ； M ——邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量，g·mol-1 ； V ——滴定时消耗的NaOH标准溶液的体积，mL 1.2.2 试样分析 准确称取粗食盐10~12g(准至0.0001g)于400mL烧杯中，加入100mL二次去离子水溶解（如有泥、沙等杂质时，应予以过滤），加入HCl溶液10.0mL，加入20mL盐酸联苯胺溶液，搅拌后，静置10~15min，过滤，用硫酸联苯胺饱和溶液洗涤烧杯及沉淀至无酸性反应（精密pH试纸）。小心取出滤纸，展开后贴于原烧杯壁，用去离子水将沉淀冲入烧杯中，加入煮沸过的热水100~120mL，置于电炉上低温加热至沸，滴加2~3滴酚酞指示剂，在玻璃棒搅拌下，立即用标定好的NaOH标准溶液滴定至溶液呈微红色，用玻璃棒将滤纸搅碎，投入溶液中，继续用NaOH滴定至微红色，半分钟不褪色，即为终点。 1.2.3 硫酸根含量计算 可按下式计算原盐中SO42-离子的质量分数ω%： 式中：C、V—分别表示NaOH标准溶液的浓度（mol·L-1）和滴定时用去的体积，mL； M——SO42-的摩尔质量，为96g·mol-1 ； ms ——称取样品的质量，g 2 结果与讨论 2.1 测定结果的比较 本文以某盐厂的原盐为试样，分别用重量分析标准法和本法同时测定样品5
余氯测定方法余氯是指水经加氯消毒，接触一定时间后，余留在水中的氯。 余氯有三种形式： ●总余氯：包括HOCl，NH2Cl，NHCl2等。 ●化合余氯：包括NH2Cl，NHCl2及其他氯胺类化合物。 ●游离余氯：包括HOCl及OCl-等。 余氯可用邻联甲苯胺比色法、邻联甲苯胺－亚砷酸盐比色法、N，N-乙基对苯胺-硫酸亚铁胺容量法测定。下面介绍较简单方便的邻联甲苯胺比色法，可测定总余氯及游离余氯。 邻联甲苯胺比色法 一、应用范围 ●本法适用于测定生活饮用水及其水源水的总余氯及游离余氯。 ●水中含有悬浮性物质时干扰测定，可用离心法去除。干扰物质的最高允许含量如下：高 铁：0.2mg/l；四价锰：0.01mg/l；亚硝酸盐： 0.2mg/l。 ●本法最低检测浓度为0.01mg/l余氯。 二、原理 在pH值小于1.8的酸性溶液中，余氯与邻联甲苯胺反应，生成黄色的醌式化合物，用目视法进行比色定量：还可用重铬酸钾－铬酸钾溶液配制的永久性余氯标准溶液进行目视比色。 三、永久性余氯比色溶液的配制 磷酸盐缓冲贮备溶液：将无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）和无水磷酸二氢钾(KH2PO4)置于105℃烘箱内2h，冷却后，分别称取22.86g和46.14g。将此两种试剂共溶于纯水中，并稀释至1000ml。至少静置4天，使其中胶状杂质凝聚沉淀，过滤。 磷酸盐缓冲溶液(pH6.45)：吸取200.0ml磷酸盐缓冲贮备溶液，加纯水稀释至1000ml。 重铬酸钾-铬酸钾溶液：称取0.1550g干燥的重铬酸钾(K2Cr2O 7)及0.4650g铬酸钾(K2CrO4)，溶于磷酸盐缓冲溶液中，并定容至1000ml。此溶液所产生的颜色相当于1mg／L余氯与邻联甲苯
实验报告 课程名称：环境监测实验 指导老师：王凤平 成绩：___________ 实验名称：环境空气二氧化硫的测定--甲醛吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法及空气中颗粒物的测定 实验类型：同组学生姓名： 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得 一、实验目的 1、了解并掌握环境空气二氧化硫的测定--甲醛吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法的原理和操作。 2、了解并掌握空气中颗粒物的测定的原理及方法。 二、实验原理 1、环境空气二氧化硫的测定--甲醛吸收-盐酸副玫瑰苯胺分光光度法： 本标准适用于环境空气中二氧化硫的测定。当用10 ml 吸收液采样30 L 时，本法测定下限为0.007 mg ／m 3；当用50 ml 吸收液连续24 h 采样300 L 时，空气中二氧化硫的测定下限为0.003 mg ／m 3。 测定中主要干扰物为氮氧化物、臭氧及某些重金属元素。样品放置一段时间可使臭氧自动分解；加入氨磺酸钠溶液可消除氮氧化物的干扰；加入CDTA 可以消除或减少某些金属离子的干扰。在10 ml 样品中存在50μg 钙、镁、铁、镍、镉、铜等离子及5μg 二价锰离子时，不干扰测定。 二氧化硫被甲醛缓冲溶液吸收后，生成稳定的羟甲基磺酸加成化合物。在样品溶液中加入氢氧化钠使加成化合物分解，释放出二氧化硫与副玫瑰苯胺、 专业：环境工程 姓名： 学号： 日期： 地点： 装 订 线
甲醛作用，生成紫红色化合物，用分光光度计在577 nm处进行测定。 结果表示 计算空气中二氧化硫的浓度按下式计算： 式中：A——样品溶液的吸光度； A0——试剂空白溶液的吸光度； Bs——校正因子，μg·SO2／12mL／A； Vt——样品溶液总体积，mL； Va——测定时所取样品溶液体积，mL； Vs——换算成标准状况下(0℃，101.325kPa)的采样体积，L。 二氧化硫浓度计算结果应准确到小数点后第三位。 2、空气中颗粒物的测定： 本方法适合于用大流量或中流量总悬浮颗粒物采样器进行空气中总悬浮颗粒物的测定。本方法的检测限为0.001mg/m3。总悬浮颗粒物含量过高或雾天采样使滤膜阻力大于10kPa时，本方法不适用。 通过具有一定切割特征的采样器，以恒速抽取定量体积的空气，空气中粒径小于100μm的悬浮颗粒物被阻留在已恒重的滤膜上。根据采样前后滤膜重量之差及采样体积，计算总悬浮颗粒物的浓度。滤膜经处理后，进行组分分析。 结果计算 总悬浮颗粒物含量
PH1138|过氧化物酶染色液（联苯胺法） Peroxidase Staining Solution Catalog No：PH1138Size：?4×10mL|?4×20mL Store at RT 过氧化物酶(Peroxidase，简称POX或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。 过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH推荐采用的POX染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3,3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX所在部位。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX活性部位呈棕黄色。 试剂组分 Components4×10ml4×20ml Storage 试剂(A):BFA固定液10ml20ml4℃避光 B1:DAB染色液10ml20ml4℃避光 试剂(B):POX孵育液 B2:DAB氧化剂2×100μl4×100μl RT 临用前，按B1:B2=1000:1比例混合，即为POX孵育液，即配即用 试剂(C):WG染色液10ml20ml RT避光 试剂(D):WG Buffer10ml20ml RT Manual1份 有效期12个月 1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA固定液，4℃固定30～60s，稍水洗。 2、滴加配制好的POX孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min，水洗2min。 3、滴加WG染色液，孵育30～60s。 4、直接滴加等量WG buffer，染色10～15min。 5、水洗、晾干、镜检。 染色结果 POX活性部位棕黄色 细胞核蓝色 粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。浆细胞及巨核细胞均为阴性。嗜酸性粒细胞和Auer小体呈强阳性反应。
水中余氯的测定邻联甲苯胺比色法 〈原理〉邻联甲苯胺与水中的余氯作用生成黄色化合物，根据颜色深度与永久性余氯标准色列比色。〈器材〉50ML比色管、六孔比色架 〈试剂〉1、永久性余氯比色溶液的配制 a、磷酸盐缓冲贮备溶液将无水磷酸氢二钠（Na2HPO4）和无水磷酸二氢钾（KH2PO4）置于是105摄氏度烘箱2小时，冷却后分别称取22.86和6.14g,将此两种试剂共溶于蒸馏水中并稀释至于1000ml至少静置4天。使其中胶状杂质凝聚沉淀，过滤； b、磷酸盐缓冲使用溶液吸取200ml磷酸盐缓冲贮备溶液，加蒸馏水稀释至1000ml。此溶ph值为6.45； c、重铬酸钾—铬酸钾溶液称取干燥的0.1550g重铬酸钾及0.4650g铬酸钾溶液于磷酸盐缓冲使用权用溶液中并稀释至1000ml此溶液所产生的颜色相当于1mg/L余氯与邻邦联甲苯胺所产生的颜色； d、0.01—1.0mg/L永久性余氯标准比色管的配制方法按下列表格所列数量吸取重铬酸钾—铬酸钾溶液，分别注入50ml具塞比色管中，用磷酸盐缓冲溶液稀释至50ml 避日光照射，可保存6个月。
2、邻联甲苯胺溶液 称取1g邻联甲苯胺（C14H16N2）、溶于5ml 20%（容积/容积）盐酸中，将其调成糊状，加150-200ml蒸馏水使用权其完全溶解，置于量筒中，补加水至505ml，最后加入20%（V/V）盐酸495ml,放于棕色瓶内，在室温下保存6个月； [操作]A、取50ml比色管1支，先放入2.5ml邻联甲苯胺溶液，再加入水样50ml，混合均匀，水样的温度最好为15-20低于此值可放于温水浴中提高到期5-20； B、置于暗处在5分钟内将其与永久性余氯标准色列进行比色； C、如余氯浓度过高会产生桔黄色；若水样碱度过高而余氯浓度较低时，将产生淡绿色或淡蓝色，此时可多加1ml 邻联甲苯胺溶液可产生正常的淡黄色； D、如水样浑浊或色度较高则应另取3支比色管一管加蒸馏水其它二管加水样（但不加邻邦联甲苯胺溶液）用六孔比色架进行比色；
副玫瑰苯胺提纯及检验方法 A1 试剂 1、正丁醇。 2、冰醋酸。 3、盐酸溶液：c（HCl）= 1mol/L。 4、乙酸-乙酸钠溶液：c（CH3COONa）=1.0mol/L。 称取 13.6g 乙酸钠（CH3COONa·3H2O）溶于水，移入 100ml 容量瓶中，加 5.7ml 冰醋酸，用水稀释至标线，摇匀。此溶液pH 为 4.7。 A2 试剂提纯方法 取正丁醇和 1mol/L 盐酸溶液各 500mL，放入 1000ml 分液漏斗中盖塞振摇 3min，使其互溶达到平衡，静置 15min，待完全分层后，将下层水相（盐酸溶液）和上层有机相（正丁醇）分别转入试剂瓶中备用。称取 0.100g 副玫瑰苯胺放入小烧杯中，加入平衡过的 1mol/L 盐酸溶液 40ml，用玻璃棒搅拌至完全溶解后，转入 250ml 分液漏斗中，再用平衡过
的正丁醇 80ml 分数次洗涤小烧杯，洗液并入分液漏斗中。盖塞，振摇 3min，静止 15min，待完全分层后，将下层水相转入另一个 250ml 分液漏斗中，再加 80mL 平衡过的正丁醇，按上述操作萃取。按此操作每次用 40ml平衡过的正丁醇重复萃取 9～10 次后，将下层水相滤入 50ml 容量瓶中，并用 1mol/L 盐酸溶液稀释至标线，摇匀。此 PRA 贮备液约为 0.20%，呈桔黄色。 A3 副玫瑰苯胺贮备液的检验方法 吸取 1.00ml 副玫瑰苯胺贮备液于 100ml 容量瓶中，用水稀释至标线，摇匀。取稀释液 5.00ml于 50ml 容量瓶中，加 5.00ml 乙酸-乙酸钠溶液用水稀释至标线，摇匀，1h 后测量光谱吸收曲线，在波长 540nm 处有最大吸收峰。
南京森贝伽生物科技有限公司 网址：https://www.doczj.com/doc/af8108183.html,/ 第1页 仅供科研 版本号：171024 过氧化物酶染色液(联苯胺法) 【产品组成】 【保存条件】 4℃,避光 ,6个月 【产品概述】 过氧化物酶(Peroxidase ，简称POX 或MPO)是由微生物或植物所产生的一类能催化很多反应的以过氧化氢为电子受体催化底物氧化的酶氧化还原酶，主要存在于细胞的过氧化物酶体中，以铁卟啉为辅基，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。 过氧化物酶染色液(联苯胺法)是ICSH 推荐采用的POX 染色液，其原理是细胞内的过氧化物酶能将无色的3,3-二氨基联苯胺(DAB)的氢原子传递给过氧化氢，使前者催化成有色染料沉积在细胞质中的POX 所在部位。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片过氧化物酶染色,POX 活性部位呈棕黄色。 【使用方法】 1、血液、骨髓或细胞涂片滴加预冷的BFA 固定液，4℃固定30～60s ，稍水洗。 2、滴加配制好的POX 孵育液，室温(20～25℃)避光孵育10～15min ，水洗2min 。 3、滴加WG 染色液，孵育30～60s 。 4、直接滴加等量WGbuffer ，染色10～15min 。 5、水洗、晾干、镜检。 【染色结果】 粒细胞系除早期原粒细胞阴性外，分化好的原粒细胞以下阶段细胞随细胞成熟而阳性反应增强，衰老中性粒细胞反应程度减弱单核细胞系弱阳性，淋巴细胞系为阴性。浆细胞及巨核细胞均为阴性。嗜酸性粒细胞和Auer 小体呈强阳性反应。 阳性反应强度的判断：
【临床意义】 1、急性粒细胞白血病晚期的原粒细胞呈阳性，颗粒较少且大。 2、急性单核白血病细胞呈阴性或弱阳性，颗粒小且稀疏。 3、单核急性白血病呈阴性或弱阳性。 4、急性早幼粒白血病呈强阳性，某些早幼粒细胞呈阳性，恶性组织细胞呈阴性。 5、急性淋巴细胞白血病呈阴性。 【注意事项】 1、血液或骨髓涂片应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。 2、POX孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。 3、样本在未染色前切勿接触氧化剂类物质，以免细胞内的过氧化物酶被抑制。 4、每次染色时，应采取健康人末梢血或骨髓涂片作为阴性对照。 5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 第2页 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.doczj.com/doc/af8108183.html,/
Elisa 相关试剂的配制 1、抗体或免疫球蛋白稀释液0.01mol/L pH7.2PBS NaH2PO4·2H2O——0.39克；Na2HPO4——1.27克；NaCl——0.85克；NaN3——200 mg；H2O（蒸馏水）至1000ml 2、ELISA洗液及HRP标记抗体稀释液PH7.4，PBST NaCl——2.0克；KH2PO4——0.2克；Na2HPO4·12H2O——2.9克；KCl——0.2克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 吐温（Tween）20 0.5ml； 4°C保存备用 3、包被液（简称CB）pH9.6 Na2CO3——1.59克；NaHCO3——2.93克；NaN3——0.2克；H2O至1000ml 密封盖好，4°C存放备用 4、ELISA底物液（可溶性底物） 磷酸-柠檬酸缓冲液pH5.0 0.1mol/L柠檬酸（21.014克/100ML）——24.3ml；0.2mol/L Na2 HPO4（28.4克/L)——25.7ml；H2O ——50ml； 4°C存放备用 5、DAB底物液（不溶性底物，组化病理等）0.05mol/L pH7.6 tris-HCL Tris——6.05克；HCL(36%)——3.15克（约2.7ml浓HCL）；H2O 至1000ml DAB为3′，3′二氧基联苯胺，不溶性底物，呈棕红色 ELISA试剂配制及实验流程 是酶联接免疫吸附剂测定(( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。以双抗体夹心法举例说明。 试剂配制： (1) 包被缓冲液(PH9.6 +0.2 0.05M碳酸盐缓冲液)： Na2CO3——1.59g ;NaHCO3 ——2.93g ；加蒸馏水至1000ml。（用时稀释成1x，加0.1%BSA） (2)洗涤缓冲液(PH7.4 0.15M PBST)：0.05%Tween-20——0.5ml；加在PBS缓冲液1000ml 中。PBS缓冲液： KH2PO4——0.2g ；Na2PO4·12H2O——2.9g ；NaCl——8g ；KCl——0.2g；加蒸馏水至1000ml。 (3)封闭缓冲液：牛血清白蛋白(BSA)2%——2g ；（或5%脱脂奶粉）加洗涤缓冲液100ml。(4）稀释液：牛血清白蛋白 0.1 % ——0.1g ；加PBS 缓冲液100ml。 (5）底物缓冲液（PH5.0）：0.2M Na2HPO4(无水28.4g/L，带12结晶水71.7g/L) 取25.7ml 0.1M 柠檬酸(无水19.2g/L，带1结晶水21.01g/L)取24.3ml；加蒸馏水至100ml。 (或Na2HPO4·12H2O——1.84g ；柠檬酸·H2O ——0.51g 加蒸馏水至100ml) (6)TMB(四甲基联苯胺)显色液（显蓝色）：TMB(2mg/ml水)——0.05ml；底物缓冲液——0.95ml； 30% H2O2 ——0.001ml ；总体积1ml。 (7) 或配OPD(邻苯二胺)显色液（显黄棕色）（现配避光）：OPD（干粉）——0.004g ；底物缓冲液——10ml ；30% H2O2 ——0.015ml ；总体积——10ml。 (8)终止液(2M H2SO4)：在178.3ml水中，逐滴加入浓硫酸(18M，约98%)21.7ml，边加边摇。操作步骤： 1. 包被：用包被液将抗体（一抗）稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜（或37℃温育2~3小时）。次日，弃去孔内溶 液，用洗涤液冲洗3次，中间振荡。(简称洗涤，下同)。 2. 封闭：加0.3ml封闭液于上述已包被之反应孔中，置37℃温育2小时。然后洗涤3次