实验三十六标准曲线法测定芦丁含量
一、目的要求
1．掌握标准曲线制备的方法。
2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。
二、实验原理
显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量等条件。
显色法的定量方法可采用标准曲线法。
三、仪器与试剂
1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。
2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。
四、实验内容与步骤
1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。
2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的吸光度。
五、注意事项
1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。
2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，以利反应完全。
六、数据处理
1．根据测得的对照品的数据，绘制A—C标准曲线或计算回归方程。
2．根据测得的试样的数据，从标准曲线上读出或由回归方程计算出试样溶液中芦丁的重量(rag)，按下式计算：
参考文献：
黄世德，梁生旺主编. 分析化学实验北京市：中国中医药出版社，2005
综合化学实验论文 槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定 学院化学化工学院 姓名 专业化学 年级2011级 指导老师 2014年4月20日
槐米中芦丁、槲皮素的提取、分离及含量测定（山西大学化学化工学院，山西太原 030006） 摘要：采用碱溶液沉淀法，从槐米中提取芦丁，用稀酸催化水解，得到水解产物槲皮素，并用紫外分光光度法进行定性、定量测定。 关键词：槐米；芦丁；槲皮素；碱溶液沉淀法；紫外光谱 槐米中含有多种黄酮类物质，如芦丁、槲皮素等。其中槲皮素具有广泛的生理和药理活性，它具有抗炎、抗菌、抗病毒、抗癌等作用，槲皮素对恶性肿瘤生长和转移的抑制作用是近年来一个十分活跃的研究课题。 芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutionside），广泛存在于多种植物中。槐米中含量最高达12~16%。芦丁为维生素P类药物，有助于保持毛细血管的正常弹性和调节毛细管壁的渗透作用，临床上用于治疗高血压的辅助药物和毛细管性止血药。此外，对放射性伤害所引起的出血症也有一定的治疗作用。 芦丁为淡黄色针状结晶，含3分子结晶水，其熔点为174-178℃，不含水的芦丁熔点188℃。芦丁在沸水的溶解度相当大（1:200），而在冷水中的溶解度很小（1:10000），溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100），热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯，不溶于苯、氯仿、乙醇及石油醚等溶剂，芦丁分子结构中含有酚羟基，呈弱碱性，易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出，所以可用水煮沸的方法提取。 Rutin Quercetin 芦丁中的苷键属于缩醛结构，易为稀酸催化水解，水解产物主要有苷元槲皮素（quercetin）、鼠李糖和葡萄糖。槲皮素，即芸香苷元，为黄色针晶体，含2分子结晶水的槲皮素熔点313-314℃，不含结晶水的槲皮素熔点316℃，溶于
实验一、啤酒花中芦丁的高效液相色谱法测定 1..实验目的 了解与掌握高效液相色谱法（HPLC）分析原理与基本操作方法。 2．实验药品与仪器 酒花超临界CO2萃取后的萃余物实验室自制；石油醚、甲醇（色谱纯）、乙醇、乙酸、芦丁标准品均购自北京化学试剂公司，超纯水购自娃哈哈公司；Waters 1525型高效液相色谱仪Waters 2487型UV检测器美国；超声波清洗仪宁波新芝生物科技有限公司提供真空旋转蒸发仪上海申生科技有限公司提供。 3.实验方法 3.1.酒花中芦丁的提取步骤 准确称取1g酒花样品2份，用50%的乙醇溶液以1：20的料液比，在60℃下分别用超声波提取1h后离心4000转/分，15分钟，取上清液为酒花芦丁提取液，经0.45μm滤膜过滤后，用于HPLC分析。 3.2. HPLC测定芦丁的步骤 先用芦丁标准品制作标准曲线，再将样品溶液用微量进样器吸取10μl样品液进样分析,记录色谱峰，测定样品的芦丁峰面积,代入标准曲线的回归方程中计算相应的芦丁含量。 HPLC测定条件：C18柱(4.6mm×250mm)，流动相：甲醇-水-冰乙酸(40∶60∶2，V/V)；流速：1.0ml/min；柱温：室温，进样量：10μl；检测波长：280nm；灵敏度：0.05AUFS。 芦丁标准曲线制备方法：取芦丁标准品适量，用甲醇制成10ppm，20 ppm，40 ppm，60 ppm，80 ppm，100 ppm系列标准品溶液，分别进样，记录峰面积，
以芦丁标准品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制芦丁标准曲线（计算回归方程为：Y=8.20×103X-4.77×103，相关系数为r=0.997981）。 芦丁的定性与定量分析：芦丁的定性分析根据芦丁标准品的保留时间确定，定量分析由芦丁标准品的标准曲线方法计算。芦丁含量结果表示为mg/g酒花4. 实验结果 4.1芦丁标准曲线的制备 图1 芦丁标准品色谱峰图2 芦丁标准曲线 表1 芦丁标准曲线测定数据 芦丁标准品 10 20 40 60 80 100 浓度 （μg/ml） HPLC峰面94310.0 147600.0 308800.0 479500.0 679900.0 803400.0
228 第12卷 第5期 2010 年 5 月 辽宁中医药大学学报 JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM Vol. 12 No. 5 May，2010 桑叶为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥 叶，味苦甘、寒，归肺、肝经，具有疏散风热、清肺润燥、清肝明目之功能，用于风热感冒、肺热燥咳、头晕头痛、目赤昏花等症。在《中华人民共和国药典》 2005版中[1] ， 桑叶中芦丁的含量测定采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作重复性差，对实验设备要求相对较高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。 1 仪器 试剂和药材 1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC-10A，日本）， KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。 1.2 试剂 甲醇、乙腈均为色谱纯，其他试剂为分析纯。 1.3 药材 桑叶经辽宁中医药大学植物教研室王冰教授鉴定为桑科桑属植物桑Morus alba L.的干燥叶。 2 实验方法 2.1 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相，检测波长为358nm，流速： 1mL·min -1 。理论塔板数按芦丁计算应不低于3000。芦丁与相邻成分色谱峰的分离度应不小于1.5。见图 1~2。图1 芦丁对照品溶液HPLC 色谱图 图2 桑叶供试品溶液HPLC 色谱图 2.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品 10.32mg，置100mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL 含0.1032mg 的溶液，作为芦丁对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 精密称定桑叶1g, 置25mL 容量瓶中，甲醇超声提取30min，放冷，加甲醇至刻 HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量 周美环1，赵书楷1，陈 淼2，张东方3 （1.沈阳东北大药房连锁店，辽宁 沈阳 110023；2.神威药业有限公司，辽宁 沈阳 110003；3.中国医科大学药学院，辽宁 沈阳 110001） 收稿日期：2009-10-05 作者简介：周美环（1975-），女，辽宁大连人，工程师，学士，主要从事药品质量管理。通讯作者：张东方（1975-），男，辽宁朝阳人，副教授，博士，研究方向：中药复方研究及新药开发。E-mail: syzdf@https://www.doczj.com/doc/ae10012111.html,。 摘 要：目的：在《中华人民共和国药典》中，桑叶中芦丁的含量测定方法采用的是HPLC 法梯度洗脱，其操作 重复性差，对实验设备要求高，旨在建立以等度洗脱，采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量。方法：采用HPLC 法，以甲醇-乙腈-醋酸-水（15：10：2.6：72.4）为流动相等度洗脱，以建立芦丁的含量测定方法。结果：采用HPLC 法测定桑叶中芦丁的含量稳定性良好，精密度良好，重复性良好，加样回收率良好，芦丁含量为0.46%~0.49%。结论：采用HPLC 等度洗脱测定桑叶中的芦丁方法可行。 关键词：桑叶；HPLC；芦丁 中图分类号：R927.2 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2010) 05- 0228- 02 Content of Rutin from Follium Mori is Determined by HPLC ZHOU Mei-huan 1, ZHAO Shu-kai 1, CHEN Miao 2, ZHANG Dong-fang 3 （1.Shenyang North-East Drug Store Chain, Shenyang 110023, Liaoning, China; 2.Shenwei Pharmaceutical Company, Shenyang 110003, Liaoning, China; 3. College of Pharmaceutical Science, China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China） Abstract： Objective : Content of rutin from Follium Mori is determined by HPLC in China Ph.，but gradient elution is difficult to repeat and equipment is not public. Methods : HPLC was used to determined content of rutin from Follium Mori, and its mobile phase is methanol-acetonitrile-acetic acid -water（15：10：2.6：72.4）. Results : Stability, Precision, repetition of HPLC all were better .Content of rutin was 0.46%~0.49%. Conclusion : The content determination of rutin from Follium Mori are feasible. Key words：Follium mori; HPLC; rutin DOI ：10.13194/j.jlunivtcm.2010.05.230.zhoumh.097
题目: 槐米中芦丁的提取及含量测定
目录 摘要 (3) 关键词 (3) 前言 (3) 1 槐米的简介 (3) 2 芦丁的简介 (4) 1 实验材料、仪器与试剂 (5) 1.1 实验材料 (5) 1.1 实验仪器 (5) 1.2 实验试剂 (5) 2 实验原理及实验条件 (5) 2.1 实验相关原理 (5) 2.2 实验条件的选择 (7) 3实验方法和结果 (7) 3.1芦丁的提取 (7) 3.2芦丁的精制 (7) 3.3芦丁的鉴定 (7) 3.3.1呈色反应 (7) 3.3.2薄层色谱检识 (8) 3.4芦丁的含量测定 (8) 3.4.1对照品溶液的配制 (8) 3.4.2标准曲线的制备 (9) 3.4.3样品测定 (10) 3.4.4样品稳定性试验 (10) 3.4.5加样回收率实验 (10) 4 讨论与小节 (11) 5 参考文献 (11) 6综述 (12)
槐米中芦丁的提取及含量测定 摘要：目的：测定槐米中芦丁的含量，掌握芦丁的提取工艺。方法：采用碱提酸沉法获得芦丁粗提物，利用多次碱提酸沉法获得较纯的芦丁，再通过显色实验以及薄层色谱鉴定槐米提取液中的芦丁，并通过标准曲线法测定提取物中芦丁的含量。结果：吸光度与标准溶液的浓度呈良好的线性关系，回归方程为A=30.1081C+0.0184,采样率为96％，没有太大的区别。结论：该方法易于操作，实验原理比较简单，薄层色谱与分光光度相结合实现了槐米提取液中芦丁的鉴定与含量测定。 关键词：槐米芦丁碱提酸沉法含量测定 Abstract:Objective: to determine the content of luding in acacia and the extraction process of luding.Methods: alkali, acid sinking method to obtain crude extract rutin using multiple alkali acid sinking method to obtain a more pure rutin, again through the color experiment and TLC identification of rutin in the sophora japonica extract, and through the standard curve method for determining the content of rutin in extracts.Results: the concentration of standard solution and absorbance had good linear relationship, the regression equation A = 30.1081 + 0.0184 C, R = 0.9997, the sampling rate is 96%, not much difference.Conclusion: this method, easy to operate, the experiment principle is simple, thin layer chromatography combined with a spectrophotomet Key Words：Sophora japonica rutin alkali extraction and acid precipitation content determination
-/ 黄酮标准曲线绘制的实验报告 1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于、0.3mg/ml、0.15mg/ml、0.0mg/ml容量瓶中，并定容至刻度线。得到10mL -/ 、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.45mg/ml0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行2。R 与A 的线性回归方程以及相关系数线性拟合,得c序号浓度（ug/ml）吸光度
黄酮标准曲线绘制的实验报告记录
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黄酮标准曲线绘制的实验报告 1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量 李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000） 摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。方法采用Zorbox SBC18 色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。 结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。结论本法结果 准确，重复性良较好，方法简便可行。 关键词：芦丁；槲皮素；HPLC Determinaition of Rutin and Its Quermination by HPLC LI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China） ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid. KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC 芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。它具有降低毛细血管的异常通透性和脆性的作用。主要用于防治高血压病的辅 助治疗。同时，它又是合成曲克芦丁的主要原料。现行卫生部药品标准采用紫外分 光光度法测芦丁含量，用纸层析法测槲皮素的含量，方法复杂，操作费事，并且槲 皮素无法定量，而用HPLC法操作简便，结果准确。
超声波提取法对苦荞茶中芦丁提取量的实验研究 一、实验仪器和材料 超声波发生器（型号：生产厂家：）减压蒸馏装置（型号：生产厂家：）紫外分光光度计（型号：生产厂家：）恒温干燥器 100ml烧杯5个 50ml烧杯5个100ml容量瓶6个 25ml容量瓶6个电子天平 芦丁标准样苦荞样品500g（生产商：甘洛县彝家山寨农牧科技有限公司芦丁含量1.32% ）无水乙醇2000ml 亚硝酸钠100ml 硝酸铝100ml 氢氧化钠200ml（均为分析纯）蒸馏水 二、待测样品的制备 将苦荞在4O～45℃恒温干燥箱中干燥 4～5 h，粉碎，过250um筛。称取1．000 g苦荞，用一定浓度乙醇浸泡3 h，超声波提取一定的时间，减压过滤，收集滤液至100 mL容量瓶并定容至100 mL，作供试液。 三、对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的芦丁对照品10mg，置100ml容量瓶中，用60%乙醇溶解定容至刻度，摇匀，即得。 四、线性关系的考察 精密量取对照品溶液0,1.0，2.0,3.0,4.0，5.0，6.0ml，置25ml容量瓶中，加蒸馏水至6ml，加5％亚硝酸钠1ml，摇匀，静置6分钟，加10％硝酸铝1ml，摇匀，静置6分钟，加4％氢氧化钠10ml，加蒸馏水至刻度，静置15分钟，用紫外分光光度计测定吸收度，检测波长510nm。以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，求回归方程、相关系数r。 五、样品含量测定 准确吸取供试品液10．0mL于50 mL容量瓶中，按照芦丁标准曲线计算样品中的芦丁含量。具体计算方式如下： 1．000 g苦荞中芦丁质量(mg)： M=C(mg／mL)25 mLO．5lO0 mL 1.000g苦荞中芦丁提取率(％)： W(%)=
2. 1样品制备:自头翁汤加减复方以甘草、自头翁、秦皮、南山碴、粉葛根、车前子、黄连、蕾香、地榆、自芍=1 :3:2:4:3:2:115:3:3:2配制。弄成碎末，加水两次煎熬后提取，浓缩，添加乙醇致含醇量为65 07o .离心去掉沉淀后蒸I-，添加甲醇溶解，离心，取上清液加甲醇定容到原药材量1:1a 2. 2参照品溶液制备:取芦丁参照品12毫克，精密称取，置于SOmI瓶中，加70%乙醇溶解并稀释到刻度，得质量浓度为0. 24mg/ml的芦丁参照 品溶液。 2. 3紫外一可见分光光度法扫描与标准曲线制备 2. 3. 1可见分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液1. 00m1,2. OOmI,3. 00m1,4. OOmI, 5. OOmI, 6. OOmI分别置25 ml容量瓶中，均加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的A1(N03) 3溶液1.00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml.再加水到刻度，摇匀，放置15分钟。以相应试剂为空自，在400一800 nm 范围内进行光谱扫描，得510 nm处为可见最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在510 nm下测定吸光度，得回归方程A=0. 00988 C + 0. 00523 . r = 0. 9997 a芦丁浓度在9. 6一57. 6 mg/L范围线性关系佳。 2.3.2紫外分光光度法:精密称定芦丁参照品溶液0. 10m1,0. 20m1,0.40m1,0. 60m1,0. 80m1,1. OOmI于5 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。以甲醇作为空自试剂参照，在400 - 800 nm范围内进行光谱扫描，得359nm处为紫外最人吸收峰。以空自试剂为参照，将6个标准品溶液分别在359 nm下测定吸光度，得回归方程A = 0. 02503 C + 0. 02367 . r = 0. 9995 a芦丁浓度在4. 8 -48mg/L范围线性关系佳。 2. 4紫外一可见分光光度法测定中药复方总黄酮含量 2. 4. 1可见分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，加甲醇到刻度，再取1. SOmI置于25 ml容量瓶中，加水到6. OOmI，加5%的N aN 02溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加10%的Al (N03) 3溶液1. 00 ml，摇匀，放置6分钟，加4%的N a011溶液10. 00 ml，再加水到刻度，摇匀，放置巧分钟。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 2. 4. 2紫外分光光度法:精密称定复方样品1. OOmI置于10 ml容量瓶中，再取1. SOmI 置于25 ml容量瓶中，均加甲醇到刻度，摇匀。平行测定吸光度3次，仪器自动计算样品总黄酮含量。 3.结果 比较可见分光光度法与紫外分光光度法测定全方与缺药的黄酮含 量，如表1所示。结果表明，可见分光光度法测定的中药复方总黄酮含量
实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量 一、实验目的 1 ．理解反相色谱的原理和应用。 2 ．掌握外标定量方法。 二、实验原理 芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。 高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。 三、实验试剂、仪器及设备 仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。 样品:桑叶、芦丁标准品。 试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。 四、实验内容 1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μ g) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。 2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。 3. 色谱测定 用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定
实验一芦丁的提取及水解制备槲皮素 一、实验目的和要求 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 通过测定芦丁和槲皮素含量巩固色谱仪使用方法。 二、实验原理 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。芦丁有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁在酸性条件下可水解得到槲皮素。 利用芦丁易溶于碱性水，难溶于酸性水，可用碱性水提取，再调至酸性，黄酮苷（芦丁）即可沉淀析出。提取过程中为了防止芦丁氧化可加入焦亚硫酸钠抗氧化，并加入硼砂保护邻二酚羟基不被破坏。得到粗芦丁后利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质重结晶进行精制。 三、仪器和试剂 1实验设备与仪器 烧瓶，温度计，布氏漏斗，抽滤瓶，循环真空泵，恒温加热及磁力搅拌装置，试管，量筒，烧杯，干燥箱，冷凝管，HPLC 2实验材料与试剂 槐花米，硼砂，焦亚硫酸钠，氧化钙，无水乙醇，甲醇，硫酸，盐酸，醋酸，精确pH试纸， 四、实验内容 1 芦丁的提取 （1）将80g苦荞米，500mL（pH8-9）澄清石灰水，1.2g硼砂，2.4g焦亚硫酸钠一起置于1000mL 圆底烧瓶中，65℃搅拌提取55min，注意添加蒸馏水及烧瓶中颜色的变化（深棕黄色），趁热过滤。 （2）滤下的苦荞米再次加入400mL澄清石灰水，0.9g硼砂和1.8g焦亚硫酸钠，65℃搅拌提取50min，趁热过滤。 （3）合并两次滤液，用浓HCl调pH至4，置于冰箱中。 2 芦丁的精制 （1）粗芦丁沉淀过滤后干燥，取2g加入400mL蒸馏水，煮沸至芦丁全部溶解，趁热过滤，滤液置冰箱中冷却即可析出结晶，抽滤得芦丁精制品。
黄酮标准曲线绘制的实验报告1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、0.45mg/ml、0.6mg/ml、
0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。 序号浓度（ug/ml）吸光度 1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 4 5 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表1-1：芦丁标准曲线测定数据 图1-2：芦丁标准曲线 根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓度数据（以芦丁为参比）,三次结果取平均值。经换算后得样品中总黄酮含量。 /( V *W) 样品总黄酮含量(mg/g)=X*n*V 1 式中：X—测出的浓度，mg/ mL;（直接代入，不用换算。） n—稀释倍数，量纲为1; —样液总体积，mL; V I V—测定时取样体积，mL; W—样品质量，g。 2.总分含量的测定 2.1 实验仪器 ALZO4型电子分析天平:上海梅特勒一托利多仪器有限公司;
新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称： 新乡医学院化学教研室年月日
实验分光光度法测定芦丁的含量 一、实验目的 1．掌握比色分析的一般操作方法； 2．学习分光光度计的使用方法。 二、实验原理 分光光度法定量分析分为单组分定量分析，多组分定量分析，本实验是单组分定量分析，单组分定量分析方法包括吸光系数法、校正曲线法、对照法等，分析中最常用的是校正曲线法。校正曲线法：先配制一系列不同浓度的标准溶液，然后在选定的分析条件下测定吸光度，然后以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图，得到一条通过原点的直线，这条直线称为校正曲线，在相同的测定条件下，测得样品溶液的吸光度，通过校正曲线就可以求出样品的浓度了。 本实验通过校正曲线法测定芦丁的含量，芦丁溶液的颜色较浅。不能直接用分光光度法进行测定，那么，需要用显色剂将其变为有颜色的溶液，芦丁与Al3+在亚硝酸钠碱性溶液中生成红色配合物，该红色配合物最大吸收波长在510nm，所以可以在510nm测定吸光度。 三、仪器与试剂 721型分光光度计，容量瓶；芦丁标准品，60%乙醇，亚硝酸钠溶液（1:20），硝酸铝溶液（1:10）， 1 mol?L-1氢氧化钠。 四、实验步骤 1．标准溶液的制备 取120℃真空干燥至恒重的芦丁标准品约50mg精密称定，置于50mL容量瓶中，加60%乙醇适量，水浴上微热，使溶解，放冷后用60%乙醇稀释至刻度，摇匀。 2．绘制标准曲线 精密吸取标准溶液0.00，1.00，2.00，3.00，4.00及5.00mL，分别置于50mL容量瓶中，各加60%乙醇使成5.0mL，各精密加入亚硝酸钠溶液（1:20）0.5mL，摇匀，放置6分钟后，加硝酸铝溶（1:10)1.5mL，摇匀，放置6分钟，加1 mol?L-1氢氧化钠试液4mL，蒸馏水稀释至刻度，摇匀，放置15分钟。在510nm 波长下测定各溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。 3．样品测定
实验三十六标准曲线法测定芦丁含量 一、目的要求 1．掌握标准曲线制备的方法。 2．掌握标准曲线法测定药物成分的方法。 二、实验原理 显色反应需要具备良好的重现性与灵敏性，因此必须控制反应的条件，主要是溶剂种类、试剂用量、溶液酸碱度、反应时间和显色时问等。芦丁为黄酮苷，能与 Al3+生成黄色配合物，在NaNO2的碱性溶液中呈红色，在510nm波长处有最大吸收。据此显色反应用光度法测定芦丁含量，应注意控制反应时间、显色时间以及试剂用量等条件。 显色法的定量方法可采用标准曲线法。 三、仪器与试剂 1．仪器紫外-可见分光光度计；量瓶、移液管、吸量管。 2．试剂亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠，乙醇(均为分析纯)，5％亚硝酸钠溶液，10％硝酸铝溶液，1mol／L氢氧化钠溶液，30％乙醇溶液，芦丁对照品，芦丁(原料药)。 四、实验内容与步骤 1．对照品溶液的制备精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品100mg，置100mL量瓶中，加甲醇70mL，置水浴上微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密吸取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水芦丁0．1mg)。 2．标准曲线的制备精密量取对照品溶液(o．1mg／ml)o．0mL、1．0mL、2．0mL、3．0mL、4．0mL、5．0mL，分别置于10mL量瓶中，各加30％乙醇使成5．0mL，各精密加入5％亚硝酸钠溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各精密加入10％硝酸铝溶液0．3mL，充分摇匀，放置6分钟。各加1lmol／L氢氧化钠溶液4．0mL，用蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀，放置15分钟，用分光光度计，在510nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。 3．试样测定精密量取芦丁试样溶液(0．1mg／ml)3.0mL，置10mL量瓶中，按标准曲线制备项下自“各加30％乙醇使成5．0ml。“起依法操作直至测定出样品的吸光度。 五、注意事项 1．加入各种试剂的顺序应按操作方法进行。 2．本显色反应为配位反应，反应速度较慢，故每加入一种试剂后应充分振摇，以利反应完全。
黄酮标准曲线绘制的实验报告 1.总黄酮的测定 1.1 实验仪器 电子天平AR2140; 紫外可见分光光度计UV2754; 型数控超声波清洗器KQ3200DB; 超级恒温槽; Rotavapor R200 旋转蒸发仪 ; FD21C250 冷冻干燥机2 1.2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成10 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成1mol/L） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成60%乙醇 50%乙醇） DPPH·（2，2-diphenyl-1-picrylhydrazyl，二苯代苦味肼基自由基） Vc（Ascrobic acid，维生素 C，抗坏血酸） 没食子酸对照品：基准纯。 大青叶子采摘于大学东坡湖畔 1.3实验步骤： 1.3.1准备工作及波长的确定 样品60℃烘干粉碎机粉碎，过20目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。 1.3.2参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取120 ℃干燥至恒重的芦丁标准样品37.5mg置于100mL烧杯中,用60%乙醇溶解后定容至25mL 容量瓶中,摇匀，即可得1.5mg/mL的芦丁标准溶液。 1.3.3标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL ,分别置于10mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到0.0mg/ml、0.15mg/ml、0.3mg/ml、
0.45mg/ml、0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的标准品溶液，分别取1ml到试管中各加5 %亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min 后,分别在510nm 处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,2011）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A 为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A 的线性回归方程以及相关系数R2。 序号浓度（ug/ml）吸光度 1 0 0 2 15 0.180 3 30 0.349 4 4 5 0.546 5 60 0.727 6 75 0.884 7 90 1.063 表1-1：芦丁标准曲线测定数据 图1-2：芦丁标准曲线 1.3.5样品的测试 根据查阅文献总黄酮在波长为510nm处吸收值最大。取黄酮提取液，取提液2ml至10ml的比色管中用60%的乙醇定容至刻度线则稀释5倍。取稀释好的溶液4份1ml置入10ml的比色管中，其中一份用60%的乙醇定容，作为参比溶液。其余各份各加5%亚硝酸钠溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加10%硝酸铝溶液0.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol 氢氧化钠溶液4mL ,再用60%乙醇溶液稀释至刻度,放置15min后,分别在510nm处测定其吸光度。代入标准曲线回归方程可得浓
A.1芦丁含量的测定 A.1.1 试剂和溶液 a) 甲醇:色谱级 b) 1%的冰醋酸溶液 c) 芦丁标准品 A.1.2 仪器和设备 高效液相色谱仪，带紫外检测器。 A.1.3 参考色谱条件 a) 色谱柱：C18柱，或其他等效的色谱柱。 b) 流动相：甲醇：1%冰醋酸溶液=32：68，用 0.45μm 滤膜过滤后备用。 c) 进样量：10μL 。 d) 检测波长：257nm 。 A.1.4 分析步骤 A.1.4.1 标准品的制备 精密称取在120℃减压干燥至恒重的芦丁对照品适量，加甲醇制成每1mL 含0.1mg 的溶液。 A.1.4.2 试样液的制备 精密称定样品10mg ，置100mL 容量瓶中，加适量的甲醇，超声溶解30分钟，冷却后用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤后上样。 A.1.4.3 测定 分别精密吸取标准品溶液和试样液各10μL ，注入液相色谱中，记录色谱图。重复进样两次。 A.1.5 结果计算 根据供试品与标准品的峰面积与浓度的比值，计算试样中含芦丁的百分含量。 P C A C A ???11 …………………………（A.1） 式中： C 1——标准品的浓度，mg/mL ； A ——试样的峰面积值，mV ； C ——试样的浓度，mg/mL ； A 1——标准品的峰面积值，mV ； P ——标准品的百分含量。
1、色谱柱：C 柱； 18 2、检测波长：350nm； 3、流速：1.0 mL/min； 4、流动相 先配制0.5%磷酸水； A：50 mL乙腈加入磷酸水至1 L； 进样：10μl 称样量：取25mg标准品用80%甲醇溶解定容至50ml，微孔滤膜过滤后取滤液进样。
黄酮标准曲线绘制的实验报告 总黄酮的测定 实验仪器电子天平 AR214; 紫外可见分光光度计 UV2754; 型数控超声波清洗器KQ32DB; 超级恒温槽 ; Rotavapor R2 旋转蒸发仪 ; FD21C25冷冻干燥机2 试剂及药品 芦丁标准品 硝酸铝国产分析纯（配成 5 %） 亚硝酸钠国产分析纯（配成 1 %） 氢氧化钠国产分析纯配成（配成 1 mol/L ） 95%乙醇，无水乙醇国产分析纯（配成 6%乙醇 5%乙醇） DPPH（ 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl ，二苯代苦味肼基自由基） Vc （Ascrobic acid ，维生素C,抗坏血酸）没食子酸对照品基准纯。 大青叶子采摘于海南大学东坡湖畔 实验步骤 准备工作及波长的确定 样品6C烘干粉碎机粉碎，过2目筛，装入试剂瓶中备用。根据查阅文献总黄酮在波长为51nm处吸收值最大。 参照品芦丁标准溶液的制备 精密称取12 C干燥至恒重的芦丁标准样品 35mg置于1mL烧杯中，用 6%乙醇溶解后定容至25mL容量瓶中，摇匀，即可得5mg/mL的芦丁标准溶液。 标准品的测量及绘制标准曲线 精密吸取芦丁标准溶液 .、、、、、、mL ,分别置于
1mL 容量瓶中，并定容至刻度线。得到 .mg/ml、.15mg/ml、.3mg/ml、 .45mg/ml、.6mg/ml、.75mg/ml、.9mg/ml 的标准品溶液，分别取 1ml 至U试管中各加5 %亚硝酸钠溶液.3mL摇匀,放置6min ,加1%硝酸铝溶液.3mL 摇匀,放置6min ,加1mol /L氢氧化钠溶液4mL ,再用6%S醇溶液稀释至刻度，放置15min 后,分别在51nm处测定其吸光度（Tai,Cai&Dai,211 ）。（以试剂空白做参比） 以吸光度A为纵坐标,浓度c为横坐标,绘制标准曲线。用最小二乘法进行线性拟合,得c与A的线性回归方程以及相关系数氏。 序号 浓度（ug/ml） 吸光度 1 2 15 .18 3 3 .349 4 45 .546 5 6