黑龙江东方学院
食品化学综合设计实验实验题目：不同方法测定苹果中单宁的含量
姓名曹智
学号10202201
专业食品科学与工程
班级2010-2/2
指导教师姚晶
学部食品与环境工程
实验设计2012年6月8日
实验题目果蔬中单宁含量的测定
摘要
单宁是多酚中高度聚合的化合物，广泛存在于自然界中，主要应用于日化、食品、医药、制革等领域。简要介绍了植物单宁的性质、生理活性及应用，综述了单宁含量的经典测定方法以及现代测定方法，并对其发展前景进行了展望
化学本质：鞣质是高分子多酚衍生物
性质：
1.有涩味、易氧化
2.易与金属离子反应生成褐黑色物质
3.重金属离子与鞣质生成不溶性盐
4.易溶于水、丙酮、乙醇等，不溶于烃类、氯仿、无水乙醚
关键词：
1.涩味
2.氧化
3.金属离子
4.吸光值
目录
摘要 (1)
1前言 (3)
1.1实验目的 (3)
1.2实验原理 (3)
2材料与方法 (4)
2.1实验材料 (4)
2.1.1实验原料 (4)
2.1.2实验试剂 (4)
2.2实验设备 (5)
2.3实验方法 (6)
2.3.1络合滴定法 (6)
2.3.2分光光度法 (6)
2.3.3高锰酸钾滴定法 (7)
3结果与讨论 (8)
3.1络合滴定法 (8)
3.2分光光度法 (9)
3.3高锰酸钾滴定法 (9)
结论 (11)
参考文献 (12)
致谢 (13)
实验题目果蔬中单宁含量的测定）
1 前言
1.1 实验目的
了解单宁性质及熟练掌握单宁含量的测定方法
1.2 实验原理
方法一：EDTA络合滴定法
本方法操作简便，实验条件容易控制，适合于单宁含量较少的植物样品的测定，测定相对误差一般不超过2%。
根据单宁可与重金属离子形成络合物沉淀的性质，在样品提取液中加入过量的标准醋酸锌溶液，待反应完全后，再用EDTA标准溶液滴定剩余的醋酸锌，根据EDTA标准溶液的消耗量，可计算出样品中单宁的含量
方法二：分光光度法
分光光度法是通过测定被测物质在特定波长或一定波长范围内光的吸收度，以此对该物质进行定性和定量分析的方法。分光光度法的应用光区包括紫外光区、可见光区、红外光区，其中常用的是紫外光区和可见光区，两者的波长范围分别为200～400 nm 和400～760 nm。分光光度法的基本原理是朗伯- 比尔定律，即当一束平行的单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比。
方法三：高锰酸钾滴定法
作为多酚，单宁是一种强还原剂，极易被氧化剂氧化，还可被活性碳吸附。本测定以高锰酸钾为氧化剂，根据样品中单宁可以被活性碳吸附的特点，测定样品液在用活性碳吸附前后的氧化值之差，计算单宁物质的含量。
2 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 实验原料
成熟的苹果
2.1.2 实验试剂
EDTA络合滴定法
分光光度法
标准单宁酸溶液0.5㎎/ ml 准确称取标准单宁酸50
㎎，溶解后用水稀释至100
ml，用时现配。
氯化铁溶液0.01g/ml 称取1gFeCl3，定容至
100ml。
碳酸钠溶液0.5㎎/ ml 称取50mgNa2CO3，定容至
100ml
高锰酸钾滴定法
2.2 实验设备
EDTA络合滴定法
PB3002-N型精密电子天平美国双杰兄弟(集团)有限公司
HH-4型数显恒温水浴锅上海贝特仪电设备厂
容量瓶研钵
具塞三角瓶（250ml）漏斗
滤纸微量滴定管
.5㎎/ ml分光光度法
Spectrumlab54型可见分光光度计上海棱光技术有限公司
PB3002-N型精密电子天平美国双杰兄弟(集团)有限公司
磁力搅拌器上海贝特仪电设备厂
研钵50 ml，100 ml容量瓶
刻度吸管漏斗
滤纸量筒
烧杯PH计
高锰酸钾滴定法
PB3002-N型精密电子天平美国双杰兄弟(集团)有限公司
HH-4型数显恒温水浴锅上海贝特仪电设备厂
研钵漏斗
三角瓶刻度吸管
量筒25 ml酸式滴定管
容量瓶滤纸
2.3 实验方法
2.3.1 络合滴定法
标准曲线的绘制
取7个50ml容量瓶, 均加入5ml 0.08mol/L醋酸锌及1.4ml浓氨水, 摇动至沉淀完全溶解, 分别加入单宁酸标准液0～20ml, 摇匀, 室温下放置片刻, 加蒸馏水至50ml, 混匀, 过滤, 取滤液5 ml, 加20ml左右蒸馏水, 2.5ml pH10 NH4OH─NH4Cl缓冲液, 3滴0.1%铬黑T溶液(95%乙醇), 以0.005mol/L EDTA溶液滴定, 终点由酒红色变为天蓝色, 记下EDTA滴定体积数。用EDTA滴定的ml数作纵坐标, 单宁mg量作横坐标, 绘制单宁酸标准滴定曲线。
样品的测定
样品粉碎, 过60目筛, 称取粉碎样品1～3g, 放入250ml具塞三角瓶中, 加50ml蒸馏水, 在80℃水浴中提取一小时(并间歇摇动), 取出, 冷却至温, 过滤, 弃去前面数ml滤液, 取滤液10～20 ml, 按制备单宁标准曲线的方法进行测定, 另取同量滤液作空白滴定.。
2.3.2 分光光度法
标准曲线的绘制
①量取40ml 蒸馏水加入50ml 烧杯中,开动搅拌器, 用0.05% Na2CO3 滴定到pH 取为9.95, 记录Na2CO3 的毫升数a。
②取1ml 单宁标准溶液加入50ml 烧杯中, 再加入40ml 蒸馏水, 开动搅拌器, 用0.05%Na2CO3 滴定至pH 值为9. 95, 记录Na2CO3 用量毫升数b。
③准确吸取单宁标准溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml 分别放入50ml 容量瓶中, 各加入40ml 蒸馏水, 依次滴加0.05%Na2CO3 溶液[a+ 单宁mg 数× 2 ( b - a) ]ml, 摇匀后分别加入0.5ml1%FeCl3 溶液, 定容到50ml, 摇匀。三分钟后测定在530nm 处的消光值, 以“ 0”管调零点, 并做出标准曲线。
样液的制备
（1）取10ml 未澄清果汁用蒸水定容到50ml,用干滤纸过滤。吸取样品滤液1ml 放入50ml 烧杯中,加入40ml 蒸馏水, 在搅拌情况下用0.05%Na2CO3 溶液滴定至pH 值为9. 95,记录Na2CO3 毫升数d。
（2 ）在50ml 容量瓶中加入1ml 滤液, 40ml蒸馏水, 滴加dml0.05% Na2CO3 溶液, 混匀后加入0.5mlFeCl3 溶液, 定容至50ml, 摇匀。三分钟后于530nm 处测定消光值, 以” 0”管为空白, 从标准曲线上查出样品相应标准的单宁含量。
2.3.3 高锰酸钾滴定法
称取5g左右样品在研钵中研磨匀浆，用漏斗移入容量瓶定容至100 ml，混匀后用干燥滤纸过滤，保存滤液
吸取样品滤液5.0 ml置于100 ml三角瓶中，加10 ml水和5 ml,2.5 mol/L硫酸，混匀，微热（50℃）5min后用0.01 mol/L高锰酸钾标准溶液滴定至淡粉色维持30s不褪色即为终点，记下消耗的体积V1，重复一次做两个平行样另吸取样品滤液 5.0 ml，于100 ml烧杯中，并加3g活性碳，加热搅拌10min，过滤，用少量的热蒸馏水冲洗残渣，收集的滤液中加 2.5 mol/L硫酸5 ml，同样用0.01 mol/L高锰酸钾标注溶液滴定至终点，记下消耗的体积V2重复一次做两个平行样。
3 结果与讨论
3.1 络合滴定法
表3-1 绘制标准曲线数据
图3-1标准曲线图
记录数据：
结果计算：
单宁含量（mg/100g）C=A/V×(50×100)/m
=0.22/32.5×(50×100)/2.62
=12.92(mg/100g)
3.2 分光光度法
样品中单宁的质量分数X=（C×N)/W×(1/10)
=（2.78×50）/10×(1/10)
=1.39(g/L)
3.3 高锰酸钾滴定法
记录数据：
结果计算：
单宁的含量（mg/100g）＝（V1－V2）×（C×4.16）×100/5×100/W
＝（0.68－0.065）×0.0146×4.16×20×25
＝14.31(mg/100g)
结论
研究了测定单宁含量的不同方法，并且通过对实验结果的分析。得出了如下结论：
（1）相对以上三种方法，分光光度法与EDTA络合滴定法更适合用于测定果蔬中单宁的含量
（2）高锰酸钾法对测定单宁的含量相对误差较大
参考文献
[1] 食品化学实验指导书徐玮、汪东风主编
[2]西部皮革2010年12月32卷第二十三期王全杰、任方萍、高龙
致谢
实验圆满成功
感谢指导教师
感谢组员配合
葡萄酒中苹果酸的测定 原理: 利用MegaQuant TM (专利技术)测定L-苹果酸需要进行三步酶解反应，第一步：在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下，L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸： (1) L-苹果酸+ NAD+(L-MDH)oxaloacetate + NADH + H+ 第二步：加入过剩的L-谷氨酸，在谷草转氨酶的作用下，生成L-天门冬氨酸和2–酮戊二酸 (2) Oxaloacetate + L-glutamate (GOT)L-aspartate + 2-oxoglutarate 第三步：在心肌黄酶的催化作用下，NADH还原碘硝基氯化四氮唑(INT)，生成甲基- INT (3) NADH + INT + H+(diaphorase)NAD+ +甲基-INT 生成的甲基- INT的量取决于L-苹果酸的量，甲基- INT的吸光度值可在505nm下测量。 特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度: 该实验方法是专门用于测定L-苹果酸含量的。 最小可调吸光光度为0.01个吸光单位，样品体积为20uL，此时的L-苹果
酸浓度为7.7 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.02吸光光度，样品体积为20uL，此时的L-苹果酸检测线为15.4 mg/L。 该实验的测量范围为0.15-15ug L-苹果酸(对于20uL样品液中的浓度为0.007-0.75 g/L)，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.01-0.02吸光单位的变化，对于样品体积为20uL，此时的L-苹果酸浓度大约在7.7-15.4 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。 干扰: 红酒中的酚醛树脂会对本试验造成干扰，引起INT的“缓慢反应”（图2），因此在对未稀释的红酒进行测定时，必须首先用聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）净化样品。“缓慢反应”同样也发生在未稀释的白葡萄酒中，按照提供的方法进行测定，其缓慢反应速率非常的慢。 在用MegaQuant TM测定L-苹果酸的时候，对于存在的两种潜在的次要误差原因的认可是非常有必要的： 1.使用PVPP去除了红酒中的大部分酚醛树脂，但是还是存在着“缓慢 反应”，由于用PVPP处理过的葡萄酒（导致潜在的高估白葡萄酒中的L-苹果酸0.00-0.01g/L，或红葡萄酒中的浓度0.00-0.03g/L）其中存在的“缓慢反应”非常的慢，因此可以忽略不计（实验方法A），然而，如果想得到精确的结果，可以通过实验方法B精确计算得到。
钯炭的含量检测方法 稀王水溶液：盐酸∶硝酸∶水= 3∶1∶1 取供试品约5g置于250ml烧杯中，加入50ml盐酸溶液（1∶1）煮沸10分钟清洗其表面。再用水煮沸洗涤三次。将表面处理好的供试品转移到称量瓶内，放入干燥箱，110℃干燥1小时，取出放入干燥器中，放冷至室温。精密称取处理好的供试品1.0g，置于250ml烧杯中，加入20ml稀王水，置于带调压器的电炉上加热至近沸，直至供试品全部溶解，再继续加热，使溶液体积浓缩至约5ml，然后分三次加入浓盐酸（每次4ml），分别蒸至近干，加入14ml 10%氯化钠溶液，蒸至近干，加入200ml 7%（V/V）盐酸溶液，在搅拌下缓慢加入20ml 1%丁二酮肟乙醇溶液。待沉淀完全后，用已在110℃干燥至恒重的四号石英砂芯漏斗抽滤，用7%（V/V）盐酸溶液洗涤至滤液无色，再用水洗涤至滤液呈中性。将石英砂芯漏斗抽干后，置干燥箱内110℃干燥1小时。取出放入干燥器冷却0.5小时称 重，直至恒重。 Pd含量按下式计算： Pd% = [（W1－W0）×0.3161/W]×100% W1为沉淀与四号石英砂芯漏斗恒重的重量，g； W0为四号石英砂芯漏斗恒重的重量，g； W为供试品重，g； 0.3161为丁二酮肟钯对钯的换算系数。 允许差：两次平行测定结果之差应不大于0.1%，取其算术平均值为测定 结果。
仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。 For personal use only in study and research; not for commercial use. Nur für den pers?nlichen für Studien, Forschung, zu kommerziellen Zwecken verwe ndet werden. Pour l 'étude et la recherche uniquement à des fins personnelles; pas à des fins commerciales. толькодля людей, которые используются для обучения, исследований и не должны использоваться в коммерческих целях. 以下无正文
实验二有机酸含量的测定 重点：①碱式滴定管的调零、体积读数，容量瓶、移液管的正确使用；②邻苯二甲酸氢钾及有机酸样品的正确称取（差减法）；③有效数字的取舍及确定。 难点：滴定终点的判断及掌握。 一、实验目的 1.学习强碱滴定弱酸的基本原理及指示剂的选择 2.掌握NaOH的配制和标定方法以及基准物质的选择 二、实验原理 1.大多数有机酸是弱酸，如果某有机酸易溶于水，解离常数Ka>>10-7，用标准碱溶液可直接测其含量，反应产物为强碱弱酸盐。滴定突跃范围在弱碱性内，可选用酚酞指示剂，滴定溶液由无色变为微红色即为终点。根据NaOH标准溶液的浓度c和消耗的体积V计算该有机酸的含量： 2. NaOH标准溶液是采用间接配制法配制的，因此必须用基准物质标定其准确浓度。邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4），它易制得纯品，在空气中不吸水，容易保存，摩尔质量较大，是一种较好的基准物质，标定反应如下： 反应产物为二元弱碱，在水溶液中显微碱性，可选用酚酞作指示剂。 邻苯二甲酸氢钾通常在105-110℃下干燥2h后备用，干燥温度过高，则脱水成为邻苯二甲酸酐。 三、仪器和试剂 邻苯二甲酸氢钾（KHP）分析纯；酚酞2g·L-1乙醇溶液；NaOH分析纯；有机酸试样。 电子天平；细口试剂瓶；容量瓶（100mL）；移液管（25mL）；碱式滴定管；锥形瓶（250mL）。 四、实验内容 1. 0.1mol/L NaOH溶液的配制 在台秤上取约2g固体NaOH(用小烧杯称取),另用大量筒量取500mL去离子水，倒少量水入装有NaOH固体的小烧杯中，搅拌使NaOH溶解后将其倒入试剂瓶中；再将大量筒中剩余的水倒入试剂瓶中，混匀。 2. 0.1mol/L NaOH溶液的标定： 准确称取三份0.5-0.6g邻苯二甲酸氢钾分别于250mL的锥形瓶中，加20-30mL水溶解，加2滴酚酞指示剂，用NaOH溶液滴定至淡粉色即为终点。平行滴定3次，计算NaOH溶液的浓度。 3.有机酸试样的测定： 准确称取有机酸样品3.0-4.0g，置于小烧杯中，加入适量水溶解。然后定量地转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。 用移液管取有机酸溶液25.00mL, 加酚酞指示剂1-2滴，用NaOH标准溶液滴定至溶液呈微红色，30秒不褪色，即为终点。记下NaOH用量，平行测定三份，计算有机酸试样的含量。 五、数据记录及处理
甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、苯乙酸、阿魏酸 甲酸、乙酸、丙酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、酒石酸、草酸、 仪器与设备 waters2695 Alliance SeparationsModule高效液相色谱仪;waters2996 PhatadiodeArray二极管阵列检测器;Heraeus离心机;HORIBApH计。 色谱分析 (1)混标配置。分别准确称取适量上述10种有机酸并用超纯水溶解或稀释,以孔径0. 45μm 的微孔滤膜过滤,转移至50mL容量瓶中,定容,配制浓度为100mg/L的储备液,保存于4℃冰箱中。 (2)标准曲线绘制。有机酸标准液的配置:根据紫外吸收灵敏度,将草酸、酒石酸、苹果酸、甲酸、丙二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸、丙酸按照0. 2∶2. 5∶5∶5∶5∶2. 5∶5∶5∶5∶5的比例配制混标,逐级稀释,配制成A、B、C、D、E五个浓度级别的标准溶液,以绘制标准曲线。其中A级别标准溶液浓度为0. 2; 2. 5, 5, 5, 5, 2. 5, 5, 5, 5, 5(μg/mL);B、C、D分别为上一个级别浓度的5倍稀释,E级为D级的2倍稀释。并将这10中有机酸编号为:OA01-OA10。 (3)色谱条件。反相C18柱CAPCellPAK C18MG 4. 6mm×250mm, 5um, pH范围: 2~10,流动相: 0. 1%H3PO4的去离子水和乙腈(V/V)98∶2;检测器波长: 210nm;流速: 1mL/min;进样量: 20u;l柱温: 35℃; (4)流动相配置。取1mLH3PO4用超纯水稀释至1000mL,经孔径为0. 45μm的微孔滤膜过滤,超声脱气后备用。乙腈(色谱纯)超声脱气备用。
一、单宁 红葡萄酒颜色的稳定很大程度上取决于单宁荷花色素苷发生的缩合反应，由于这种物质的存在，葡萄酒成熟过程中的颜色趋于稳定。单宁也是呈味物质，它与多糖和肽缩合，使酒更为柔和。有氧时缩合为浅黄色，有收敛性;无氧时为棕红色，无收敛性。 1、高锰酸钾氧化法 ①原理：利用酒中的单宁色素和其他非挥发性还原物质，在酸性条件下，能被高锰酸钾所氧化，而酒中的单宁色素又能被活性炭吸附除掉，据此测出酒中单宁色素的含量。 ②试剂 a.0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液：称取3.3g高锰酸钾，溶于100mL水中，缓缓煮沸15min，冷却后用水稀释至1000mL，置于暗处保存一周。以4号玻璃漏斗过滤于干燥的棕色瓶中。 标定：准确称取0.2g（准确至0.0002g）于105～110℃烘至恒重的基准草酸钠置入250mL三角瓶中，加100mL（8+92）硫酸溶液溶解，加热至60～70℃，趁热用高锰酸钾溶液滴定至溶液呈粉红色。同时做空白试验。 计算公式如下： 高锰酸钾浓度（1/5KMnO4，mol/L）=m/((V-V0)*0.06700) 式中m-----草酸钠的质量，g V-----测定时消耗高锰酸钾溶液的体积，mL V0----空白试验消耗高锰酸钾溶液的体积，mL 0.06700-----消耗1mL 1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液相当于草酸钠的质量，g/mmol b.0.05mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）溶液：将0.1mol/L高锰酸钾（1/5KMnO4）标准溶液稀释至原浓度的1/2 c.靛红纸试剂（靛蓝二黄酸钠，靛胭脂）：称取靛红1.5g，溶于50mL硫酸中，用水稀释至1000mL。 d.粉末活性炭 ③测定步骤 用容量瓶取酒样100mL，倾入蒸发皿中，置于沸水浴中，除去挥发物（一般蒸发掉一半溶液即可），然后取下冷却至室温，返回原容量瓶中，洗涤蒸发皿3～4次，将洗涤液并入容量瓶中，定容摇匀，得处理液Ⅰ取上述处理后的酒样50mL于100mL烧杯中，加入2g左右粉末活性炭用玻璃棒搅匀，静置5分钟，过滤。滤液收集于50mL容量瓶中，用水定容至刻度，得处理液Ⅱ。要求滤液无色透明。 吸取10mL处理液Ⅰ，置于1000mL三角瓶中，加入水500mL及10mL靛红指示剂，以0.05mol/L(1/5KMnO4）高锰酸钾标准溶液滴定至金黄色即为终点。记下消耗高锰酸钾标准溶液的毫升数V1。 同样取处理液Ⅱ10mL，同上操作，记下消耗的高锰酸钾标准溶液毫升数V2。 ④计算 单宁含量（以没食子单宁酸计，g/L）=（V1-V2）*c*0.04157*（1/V）*1000 式中：V1-----滴定处理液Ⅰ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; V2-----滴定处理液Ⅱ时高锰酸钾标准溶液的体积，mL; c------高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液的浓度，mol/L; V-----取样量，mL 0.04157-----消耗1mL1mol/L高锰酸钾（1/5 KMnO4）标准溶液相当于没食子单宁酸的质量，g/mmol ⑤讨论 a.本方法测定为单宁色素的含量，也可称为“高锰酸钾氧化值”。 b.活性炭用量随酒样颜色的深浅适量增减 c.滴定速度不要太快（每秒钟一滴），但要连续，间断滴定会影响反应终点。 d.正在发酵的红葡萄酒需经过过滤后再测定，样品太浑浊会影响终点的判定。
学号姓名 实验三食品中总酸的测定（滴定法） 一、实验原理 果汁具有酸性反应，这些反应取决于游离态的酸以及酸式盐存在的数量。总酸度包括未解离酸的浓度和已解离酸的浓度。酸的浓度以摩尔浓度表示时，称为总酸度。含量用滴定法测定。果蔬中含有各种有机酸，主要有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸……。果蔬种类不同，含有机酸的种类和数量也不同，食品中酸的测定是根据酸碱中和的原理，即用标定的氢氧化钠溶液进行滴定。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：西红柿、苹果、果汁等 （二）仪器：碱式滴定管（20mL）、容量瓶（100mL）、移液管（10mL）、烧杯（100mL）、研钵或组织捣碎机、100ml量筒(量酒精)、1%酚酞指示剂、胶头滴管/滴瓶、容量瓶（1000mL）、布氏漏斗+滤纸、天平、三角烧瓶、洗瓶、活性炭（脱色）、和板、蒸馏水。 （三）试剂 1）．0.1mol/L氢氧化钠：称4.0g氢氧化钠定容至1000mL，然后用0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾标定，若浓度太高可酌情稀释。 2）．1%酚酞指示剂：称1.0g酚酞，加入100mL50%的乙醇溶解。 三、操作步骤 1）0.1mol/L NaOH标准溶液的标定：将基准邻苯二甲酸氢钾加入干燥的称量瓶内，于105-110℃烘至恒重，用减量法准确称取邻苯二甲酸氢钾约0.6000克，置于250 mL锥形瓶中，加50 mL无CO2蒸馏水，温热使之溶解，冷却，加酚酞指示剂2-3滴，用欲标定的0.1mol/L NaOH溶液滴定，直到溶液呈粉红色，半分钟不褪色。同时做空白试验。 2）样品的处理与测定：准确称取混合均匀磨碎的样品10.0g（或吸10.0mL样品液），转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度、摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL 三角瓶中，加入1%酚酞2滴，用标定的氢氧化钠滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下氢氧化钠用量，重复三次，取平均值。 四、实验结果 式中：V——样品稀释总体积（mL）V1——滴定时取样液体积V2——消耗氢氧化
谷物中淀粉含量的测定 本方法参考GB/T5009.9-2008《食品中淀粉的测定》的第二法酸水解法。 适用范围：本方法适用于谷物原料中淀粉含量的测定。 原理：试样经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还原性的糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。 方法一 1 试剂和材料 1.1 酒石酸铜甲液：34.639g CuSO4溶于水，加入0.5mL浓H2SO4，稀释到 500mL； 酒石酸铜乙液：173g酒石酸钾钠，加50g NaOH，稀释到500mL； 1.2 氢氧化钠溶液：c(NaOH)=1mol/L； 1.3 硫酸铁溶液：50g/L（称取50g硫酸铁，加入200mL水后，慢慢加入100mL 硫酸，冷后加入稀释至1000mL）； 1.4 高锰酸钾标准滴定溶液：c(1/5KMnO4)=0.1mol/L； 1.5 乙醇溶液：85% v/v； 1.6 HCL：1+1和1+3； 1.7 NaOH溶液：40%； 1.8 乙酸铅溶液：20%； 1.9 硫酸钠：10%。 2 仪器设备 2.1粉碎磨：粉碎样品，使其完全通过孔径0.45mm（40目）筛。 2.2锥形瓶：250mL。
2.3回流冷凝装置：能与250mL锥形瓶瓶口相匹配。 3操作步骤 称取样品(粉碎过40目筛)2.0g～5.0g，准确至0.0002g，置于放有慢速滤纸 的漏斗中，用50mL石油醚分5次洗去样品中脂肪，再用150mL85%乙醇溶液 分数次洗涤残渣，以除去可溶性糖类物质，滤干乙醇溶液，将滤纸连同残渣一 并转移至250mL锥形瓶中。 加100mL水、30mL(1+1)HCl，在沸水浴上回流2h，回流完毕后，立即在 流水中冷却，待样品水解液冷却完全后，加2滴甲基红指示剂，先用NaOH溶 液（400g/L）调至黄色，再用(1+1)的HCl调至水解液刚变红色。若水解液颜色 较深，可用pH试纸测试，使试样水解液的pH值约为7，然后加20mL的乙酸 铅溶液（200g/L），摇匀，放置10min，再加20mL的硫酸钠溶液(100g/L)，以 除去过多的铅。摇匀后，将全部溶液及滤渣转入500mL容量瓶中，用水洗涤锥 形瓶，洗液合并于容量瓶中，定容，摇匀，过滤，弃去初滤液20mL，滤液供 测定用。 吸取25.00mL滤液于三角瓶中，加25mL酒石酸铜甲液，再加25mL酒石 酸铜乙液，在电炉上加热(在3min内煮沸)并煮沸2min，取下过滤，并用60℃ 水洗涤烧杯和沉淀至洗液不呈碱性为止，将漏斗连同滤纸一同放至前面使用过 的烧杯上，向滤纸内加入硫酸铁(50g/L)40mL，使氧化亚铜完全溶解，摇匀溶液，再加25mL水，用玻璃棒搅拌到看不见Cu2O，以0.1mol/l高锰酸钾标准滴定溶 液滴定至呈微红色，10s不褪色为终点。同样条件做空白。 方法二 1 试剂 1.1 碱性酒石酸铜甲液：称取15g硫酸铜(CuS04·5H2O)及0.050g亚甲蓝,加适量 水溶解，再加水稀释至1000mL。
黑龙江东方学院 食品化学综合设计实验 实验题目：不同方法测定苹果中单宁的含量 姓名学号专业班级指导教师学部实验设计 曹智 10202201 食品科学与工程 2010-2/2 姚晶食品与环境工程 2012年6月8日 实验题目果蔬中单宁含量的测定 摘要 单宁是多酚中高度聚合的化合物，广泛存在于自然界中，主要应用于日化、食品、医药、制革等领域。简要介绍了植物单宁的性质、生理活性及应用，综述了单宁含量的经典测定方法以及现代测定方法，并对其发展前景进行了展望化学本质：鞣质是高分子多酚衍生物性质： 1. 有涩味、易氧化 2. 易与金属离子反应生成褐黑色物质 3. 重金属离子与鞣质生成不溶性盐 4. 易溶于水、丙酮、乙醇等，不溶于烃类、氯仿、无水乙醚 关键词： 1. 涩味 2. 氧化 3. 金属离子 4. 吸光值 目录 摘 要 (1)
1 前 言 . ......................................................................................................................................... 3 1.1 实验目 的 .......................................................................................................................... 3 1.2 实 验原理 .......................................................................................................................... 3 2 材料与方 法 . ............................................................................................................................. 4 2.1 实验材料 .. (4) 2.1.1 实验原料 (4) 2.1.2 实验试剂 (4) 2.2 实验设备 .......................................................................................................................... 5 2.3 实验方 法 .......................................................................................................................... 6 2.3.1 络合滴定法 ............................................................................................................... 6 2.3.2 分光光度法 ............................................................................................................... 6 2.3.3 高锰酸钾滴定法 ....................................................................................................... 7 3 结果与讨论 . ............................................................................................................................. 8 3.1 络合滴定 法 ...................................................................................................................... 8 3.2 分光 光度法 ...................................................................................................................... 9 3.3 高锰酸钾滴定法 (9) 结论 .................................................................................................................................... 11 参考文 献 (12) 致谢 .................................................................................................................................... 13 实验题目果蔬中单宁含量的测定）
ODS为反相柱，流动相一般为甲醇、乙腈、水，等极性相对较大的物质，不可以用非极性物质做流动相，梯度洗脱时应从大水相开始，最后过渡到大有机相，实验结束后应用甲醇水或乙腈水冲洗，30-60min，如果实验中用到缓冲盐应用大水相冲洗60min以上，将盐替换出来，最后保存在85-95%的有机相中。 另外，色谱柱使用过程中不能碰撞、弯曲或强烈震动。 当柱子和色谱仪连结时，阀件或管路一定要清洗干净。 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2 ～7.5，硅胶柱pH8时会发生硅胶溶脱，键合型柱p H<2时会发生键合相断裂，流动相尽量不超过色谱柱的p H范围。普通C18柱尽量避免在4 0℃以上的温度下分析。保护柱：最好使用预柱作为保护柱，减少污染物对分析柱的损伤。压力升高通常是需要更换预柱的信号。 安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙 反相柱（reversed phase column）：填料是非极性的，官能团为烷烃，例如：C18(ODS)、C8、C4等。在反相柱中C18（Octadecylsilyl，简称ODS），即十八烷基硅烷键合硅胶填料，这种填料在反相色谱中发挥着极为重要的作用，它可完成高效液相色谱70～80％的分析任务。由于C18(ODS)是长链烷基键合相，有较高的碳含量和更好的疏水性，对各种类型的生物大分子有更强的适应能力，因此在生物化学分析工作中应用的最为广泛，近年来，为适应氨基酸、小肽等生物分子的分析任务，又发展了CH、C3、C4等短链烷基键合相和大孔硅胶（20～40μm）。 色谱柱的分类 1.根据所有的担体材料分为三种： (1)硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。 (2)聚合物型：在广泛的PH值范围内稳定。 (3)羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。 2.根据分离方式分为： (1)正相：SIL--磷脂、NH--糖、维生素E，CN--甾类激素。 (2)反相：ODS(C18)、(C8 CN TMS Pheny1)低分子量化合物。 (3)离子交换等。
检验方法验证方案 目的：证明所采用的检验方法适于相应的检测要求，具有可靠的准确度、精密度。范围：含量的检定方法的前验证 编定依据：《药品生产质量管理规范》1998年修订版及验证管理办法 职责：验证小组人员 目录 1.概述 2.验证目的 3.职责 3.1验证小组 3.2品质部 3.3化验室 4.验证内容 4.1验证的准备工作 4.2适用性验证 4.2.1准确度试验 4.2.2精密度试验 4.3拟订验证周期 4.4验证结果评定与结论 5.附件
1. 概述 对小容量注射剂的含量测定，本公司采用福林酚测定法，该检验方法具有测量准确、精密度高、专属性强、定量准确可靠、方法简便易行的特点，可满足小容量注射剂含量测定的要求。检验方法标准操作规程。用本方法进行转移因子注射液、胸腺肽注射液的含量测定。 2. 验证目的 为确认对转移因子注射液、胸腺肽注射的含量测定的紫外分光光度法，适合相应的检测要求，特制订本验证方案，进行验证。 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证工作小组批准。 验证前，应首先对验证所需的仪器、设备进行验证，对所需仪器、仪表、量具等进行校正。 3. 职责 3.1 验证工作小组 负责验证方案的审批。 负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。 负责验证数据及结果的审核。 负责验证报告的审批。 负责发放验证合格证书。 负责再验证周期的确认。 3.2 品质部 负责验证所需仪器、设备的安装、调试，并做好相应的记录。 负责组织验证所需仪器、设备的验证。 负责仪器、仪表、量具等的校正。 负责拟订检验方法的再验证周期 3.3 化验室 负责验证所需的标准品、样品、试剂、试液等的准备。 负责验证方案指定的试验的实施。 负责收集各项验证、试验记录，并对试验结果进行分析后，报验证工作小组。 4. 验证内容 4.1 验证的准备工作 4.1.1 验证所需文件资料 品质部负责提供验证所需的文件资料，包括该检验方法的标准操作规程。以及负责提供验证所需仪器、设备的验证报告以及仪器、仪表、量具等的校正报告。 检查人：日期：
实验四 柠檬酸含量的测定 实验目的 1．掌握配制和标定NaOH 标准溶液的方法。 2．进一步熟练滴定管的操作方法。 3．掌握柠檬酸含量测定的原理和方法。 主要试剂和仪器 仪器：4F 滴定管；锥形瓶；容量瓶；移液管（25mL ）；烧杯；洗瓶。 试剂：邻苯二甲酸氢钾（基准物质，100-1250C 干燥1小时，然后放入干燥器内冷却后备用）；NaOH 固体；柠檬酸试样；%酚酞乙醇溶液。 实验原理 大多数有机酸是固体弱酸，如果有机酸能溶于水，且解离常数Ka ≥10-7，可称取一定量的试样，溶于水后用NaOH 标准溶液滴定，滴定突跃在弱碱性范围内，常选用酚酞为指示剂，滴定至溶液由无色变为微红色即为终点。根据NaOH 标准溶液的浓度c 和滴定时所消耗的体积V 及称取有机酸的质量，计算有机酸的含量。 n n 1 (H A) (H A)100% 1000 c V M n m ω??=??样 有机酸试样通常有柠檬酸，草酸, 酒石酸, 乙酰水杨酸, 苯甲酸等。滴定产物是强碱弱酸盐,滴定突跃在碱性范围内,可选用酚酞为指示剂。用NaOH 标准溶液滴定至溶液呈粉红色(30s 不褪色)为终点。 实验步骤 1． mol ·L -1 NaOH 溶液的配制及标定
mol·L-1 NaOH溶液的配制同实验一。 准确称取 g邻苯二甲酸氢钾，置于250 mL 锥形瓶中，加入20-30 mL水，微热使其完全溶解。待溶液冷却后，加入2-3 滴%酚酞指示剂，用待标定的NaOH 溶液滴定至溶液呈微红色，半分钟内不褪色，即为终点（如果较长时间微红色慢慢褪去，是由于溶液吸收了空气中的二氧化碳所致），记录所消耗NaOH溶液的体积。平行测定3次。 2.柠檬酸试样含量的测定 用分析天平采用差减法准确称取柠檬酸试样约，置于小烧杯中，加入适量水溶解，定量转入250mL容量瓶中，用水稀至刻度，摇匀。 用25mL移液管移取上述试液于250mL锥形瓶中，加入酚酞指示剂1～2滴，用NaOH标准溶液滴至溶液呈微红色，保持30秒不褪色，即为终点。记下所消耗NaOH溶液体积，计算柠檬酸质量分数。如此平行测定3次，相关数据填入表2中。 实验数据记录及处理 写出有关公式，将实验数据和计算结果填入表1和2。根据记录的实验数据分别计算出NaOH溶液的准确浓度和柠檬酸的质量分数，并计算三次测定结果的相对标准偏差。对标定结果要求相对标准偏差小于%，对测定结果要求相对标准偏差小于%。 表1 邻苯二甲酸氢钾标定氢氧化钠
单宁酶酶活力的检测 1引用文件 2范围 本标准适用于微生物发酵产单宁酶制剂酶活力检测 3.术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1酶活性单位定义 在30℃、pH值为5.0的条件下，每分钟降解没食子酸丙酯（PG）溶液解释放1μmol没食子酸所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 4.原理 酶活力的测定采用保玉心的绕丹宁法，该法以没食子酸丙酯（PG）作为反应的底物，单宁酶分解PG产生的没食子酸可与绕丹宁在碱性条件下形成红色复合物，该复合物在520nm处有最大吸收，据此可通过测定A520的变化量来计算生成的没食子酸的量，从而计算酶活力。 5.试剂和材料 本标准中所有试剂，在没有注明其它要求时，均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的二级水。 5.10.1mol/L的磷酸氢二钠： 准确称取十二水合磷酸氢二钠35.814g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.20.05mol/L的柠檬酸： 准确称取一水合柠檬酸10.507g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.1和5.2两者混匀，互调pH为5.0. 5.30.5mol/l的KOH溶液： 准确称取KOH28.055g，加入800ml水溶解，溶解后定容至1000ml。 5.40.667%（W/V）罗丹宁溶液（甲醇绕丹宁）： 准确称取罗丹宁0.667g，加入80ml甲醇溶解，溶解后用甲醇定容至100ml。 5.5没食子酸标准溶液，浓度为10mmol/l 称取没食子酸0.18813g，加磷酸-柠檬酸缓冲溶液溶解，定容至100ml。 5.6没食子酸丙酯（PG）溶液，浓度为10.0mmol/L
DL －苹果酸检测方法介绍 ——科标检测 OH O OH HO O C 4H 6O 5 科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。 【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。 （2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。 【检查】 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10?～＋0.10?。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10μg，马来酸4μg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸
含量测定方法学验证内容及可接受标准 1．准确度 可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相对标准差（RSD）应不大于2.0%。 2．线性 其主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。 可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2％以内，响应因子的相对标准差应不大于2.0%。 3．精密度 1）重复性 件下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应不大于2.0%。 2）中间精密度 4．专属性 可接受的标准为：空白对照应无干扰，主成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析时，主峰的纯度因子应大于980。 5．检测限
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。 6．定量限 主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。 7．耐用性 方法：分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、 可接受的标准为：主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%。 8、系统适应性 应不大于2.0%，主峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应符合质量标准的规定。 有关物质测定方法学验证内容及可接受标准： 1．准确度 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收率数据的相对标准差（RSD）。该项目的可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%，相对标准差应不大于10%。 2．线性 线性一般通过线性回归方程的形式来表示。具体的验证方法为：在定量限至
第六周实验（第二次） 班级：姓名：学号：实验时间： 一、NaOH的标定 一、实验目的 （1）进一步练习滴定操作。 （2）学习酸碱标准溶液浓度的标定方法。 二、简要原理 NaOH标准溶液是采用间接法配制的，因此必须用基准物质标定其准确浓度。NaOH标准溶液的标定用邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4简写为KHP）为基准物质，酚酞作指示剂。 三、仪器与试剂 0.1mol/L NaOH标准溶液邻苯二甲酸氢钾酚酞指示剂 四、实验步骤 在分析天平上用差减法准确称取邻苯二甲酸氢钾0.4-0.6g三份，分别置于三个已编号的250mL锥形瓶中，加入50mL去离子水，摇动使之溶解。加入2滴酚酞指示剂，用NaOH标准溶液滴定，溶液由无色至微红色半分钟不褪，即为终点。 五、数据记录及处理
五、思考题 1、如何计算称取基准物质邻苯二甲酸氢钾的质量范围？ 答：根据消耗的标准溶液的体积在20---30mL，来计算基准物质的质量范围。的大多，一方面浪费，另一方面,称的太多，消耗的标准溶液的将会超过滴定管的最大体积, 造成误差；消耗的标准溶液的体积太少,测量误差太大。 2、标定NaOH溶液浓度时称量KHC8H4O4需不需要十分准确？溶解时加水量要不要十分准确？为什么？ 答：标定溶液浓度时称量不需要准确测量KHC8H4O4的质量，因为公式中KHC8H4O4的质量是实际称得的质量，称量在0.5000±0.0500范围内都是允许的。 溶解时加水量也不需要十分准确，因为计算需要的是它的质量，与溶解时的加水量无关，所以加水量不需十分准确。 3、用KHP标定NaOH溶液时为什么用酚酞而不用甲基橙作指示剂？ 答：邻苯二甲酸氢钾相当于弱酸，与氢氧化钠反应后生成的产物是邻本二甲酸二钾，若正好中合，则弱酸强碱盐溶液呈碱性；而甲基橙的变色范围是3.1-4.4，变色发生在酸性溶液中，无法指示碱性溶液，也就是无法指示反应的终点。 4、如果用NaOH标准溶液在保存过程中吸收了空气中的CO2,用该标准溶液滴定盐酸,以甲基橙为,对结果有什么影响? 答：1.吸收二氧化碳,溶液中有碳酸钠，果以甲基橙为指示剂,刚开始的颜色是红色,终点是橙色,ph在3.1-4.4之间,盐酸稍过量.这种情况下碳酸钠也会被反应成氯化钠,应该没有影响.如果以酚酞为指示剂,刚开始无色,终点红色,ph在8-10之间,碱过量.这种情况下,碳酸钠会被反应成碳酸氢钠,相当于有一部分氢氧化钠没有参与反应,消耗的氢氧化钠体积变大,结果偏大.首先,从理论上来讲,吸收了空气中的CO2会生成碳酸钠,用该标准溶液滴定盐酸,以甲基橙为指示剂,对结果没有什么影响.因为氢氧化钠之前吸收了二氧化碳,与盐酸反应后又完全释放出来,所以摩尔比是一样的.但是,如果用酚酞作指示剂,结果还是有影响的,结果应该偏高.因为吸性的二氧化碳相当于是吸收了碳酸,在滴定盐酸时,滴到酚酞变色时,二氧化碳不能完全释放出来,碳酸钠只生成了碳酸氢钠,而不会生成氯化钠,所以会造成结果的偏差.而从实际上来讲,如果装氢氧化钠瓶子的密封性很好,氢氧化钠最多也只吸收了瓶内空隙那微量的二氧化碳,对分析结果的影响可以忽略不计了,但如果吸收了外面的二氧化碳,那可想而知,和外面空气接触时,氢氧化钠标液中的水份也不知道挥发了多少,这样一来,结果的准确度就不好说了.
食品安全国家标准 食品添加剂L-苹果酸1 范围 本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的食品添加剂L-苹果酸。 2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 2.1 化学名称 L-羟基丁二酸 2.2 分子式 C4H6O5 2.3 结构式 2.4 相对分子质量 134.09（按2007年国际相对原子质量） 3 技术要求 3.1 感官要求 感官要求应符合表1的规定。 表1 感官要求 3.2 理化指标 理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标
附录A 检验方法 A.1 警示 试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。操作者应采取适当的安全和健康措施。 A.2 一般规定 本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 A.3 鉴别试验 A.3.1 试剂和材料 A.3.1.1 氨水溶液：2+3。 A.3.1.2 对氨基苯磺酸溶液：10 g/L。 A.3.1.3 亚硝酸钠溶液：200 g/L。 A.3.1.4 氢氧化钠溶液：40 g/L。 A.3.2 鉴别方法 A.3.2.1 苹果酸氨盐呈色试验 称取0.5 g试样，精确至0.01 g，置于50 mL试管中，加入10 mL水溶解。用氨水溶液中和至中性，加入1 mL对氨基苯磺酸溶液，在沸水浴中加热5 min。加入5 mL亚硝酸钠溶液，再置于水浴加热3 min 后，加入5 mL氢氧化钠溶液，试验溶液应立即呈红色。 A.3.2.2 旋光特性试验 试验方法同A.5，试样水溶液应呈左旋特性。 A.4 L-苹果酸(C4H6O5)含量的测定 A.4.1 方法提要 以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定试样水溶液，根据氢氧化钠标准滴定溶液的用量，计算以C4H6O5计的总酸含量为L-苹果酸含量。 A.4.2 试剂和材料 A.4.2.1 无二氧化碳的水。 A.4.2.2 氢氧化钠标准滴定溶液：c(NaOH)＝1.0 mol/L。 A.4.2.3 酚酞指示液：10 g/L。 A.4.3 分析步骤 A.4.3.1 称取2.0 g试样，精确至0.000 2 g，加20 mL无二氧化碳的水溶解，加2 滴酚酞指示液，用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，保持30 s不褪色为终点。 A.4.3.2 在测定的同时，按与测定相同的步骤，对不加试样而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。 A.4.4 结果计算
表面活性剂含量测定方法 1.阴离子表面活性剂含量测定（两相滴定） 1.1主要试剂 （1）十六烷基三甲基溴化铵（CTAB），分析纯； （2）十二烷基磺酸钠，分析纯； （3）二氯甲烷（CH2Cl2）、硫酸钠、浓硫酸，百里酚蓝（T.B.）、次甲基蓝（M.B.）分析纯； （4）百里酚蓝（T.B.）贮藏液：称取0.05g百里酚蓝，溶于50ml20%乙醇中，待溶解后过滤，滤液用水稀释至500ml； （5）次甲基蓝（M.B.）贮藏液：称取0.036g次甲基蓝，用蒸馏水溶解合并，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度； （6）混合指示剂：混合225ml百里酚蓝（T.B.）贮藏液和30ml次甲基蓝（M.B.）贮藏液，用水稀释至500ml； （7）酸性硫酸钠溶液：称取100g硫酸钠和12.6ml浓硫酸，用蒸馏水溶解合并，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度； （8）十二烷基磺酸钠标准溶液：称取1.06~1.12g十二烷基磺酸钠（准确至0.0001g），用蒸馏水溶解，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度， 其浓度为C1=取样质量*样品纯度/272.38，单位mol/L； （9）C TAB阳离子表面活性剂标准溶液：称取CTAB0.36~0.37g（准确至 0.0001g），用蒸馏水溶解，转入1L容量瓶中，加水稀释至刻度，其 准确浓度C2可用十二烷基磺酸钠标准溶液标定； 1.2实验原理 阴离子型表面活性剂的测量，其原理是亚甲基蓝无机酸盐属于阳离子染料，溶于水而不溶于氯仿，但阴离子活性物与亚甲基蓝反应生成的络合物溶于氯仿。用CTAB阳离子表面活性剂标准溶液滴定溶液中的阴离子活性物，当接近终点时，
阳离子表面活性剂与络合物发生复分解反应，释放出亚甲基蓝，蓝色逐渐从氯仿层转移到水层，当氯仿层与水层为同一蓝色时为滴定终点。 1.3 实验步骤 取10ml阴离子表面活性剂溶液于100ml具塞量筒中（或碘量瓶、分液漏斗），加入混合指示剂及酸性硫酸钠各5ml，加水使水相保持在30ml，加入15ml二氯甲烷，摇匀后静置，用浓度为C2的CTAB标准溶液滴定，下相由浅紫灰色变为明亮的黄绿色即为终点，临近终点时上相逐渐变为无色，有助于避免滴定过量。 测定样品的浓度C=CTAB标准溶液体积*C2/10 注意：二氯甲烷具有弱毒性，且易于挥发，滴定过程应在通风橱中进行，操作人员需戴手套。 2.两性离子表面活性剂含量测定 2.1 所需试剂 （1）磷钨酸、盐酸、硝酸、硫酸、硝基苯均为分析纯； （2）乙醇95%； （3）海明1622、二硫化蓝VN-150； （4）十二烷基硫酸钠，分析纯; （5）溴化底米迪鎓； （6）刚果红指示剂； （7）苯并红紫4B指示剂（溶解0.1g苯并红紫4B（特级试剂）于纯水中，稀释至100mL）。 2.2．方法原理 在酸性条件下甜菜碱类两性活性剂和苯并红紫4B络合成盐。这种络盐溶在过量的两性表面活性剂中，即使酸性，在苯并红紫4B的变色范围也不呈酸性色。两性表面活性剂在等电点以下的pH溶液中呈阳离子性，所以同样能与磷钨酸定量反应，并生成络盐沉淀，而使色素不显酸性色。