葡萄酒中苹果酸的测定
原理:
利用MegaQuant TM (专利技术)测定L-苹果酸需要进行三步酶解反应，第一步：在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下，L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸：
(1) L-苹果酸+ NAD+(L-MDH)oxaloacetate + NADH + H+
第二步：加入过剩的L-谷氨酸，在谷草转氨酶的作用下，生成L-天门冬氨酸和2–酮戊二酸
(2) Oxaloacetate + L-glutamate(GOT) L-aspartate + 2-oxoglutarate
第三步：在心肌黄酶的催化作用下，NADH还原碘硝基氯化四氮唑(INT)，生成甲基- INT
(3) NADH + INT + H+(diaphorase)NAD+ +甲基-INT
生成的甲基- INT的量取决于L-苹果酸的量，甲基- INT的吸光度值可在505nm下测量。
特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度:
该实验方法是专门用于测定L-苹果酸含量的。
最小可调吸光光度为0.01个吸光单位，样品体积为20uL，此时的L-苹果酸浓度为7.7 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.02吸光光度，样品体积
为20uL，此时的L-苹果酸检测线为15.4 mg/L。
该实验的测量范围为0.15-15ug L-苹果酸(对于20uL样品液中的浓度为0.007-0.75 g/L)，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.01-0.02吸光单位的变化，对于样品体积为20uL，此时的L-苹果酸浓度大约在7.7-15.4 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。
干扰:
红酒中的酚醛树脂会对本实验造成干扰，引起INT的“缓慢反应”（图2），因此在对未稀释的红酒进行测定时，必须首先用聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）净化样品。“缓慢反应”同样也发生在未稀释的白葡萄酒中，按照提供的方法进行测定，其缓慢反应速率非常的慢。
在用MegaQuant TM测定L-苹果酸的时候，对于存在的两种潜在的次要误差原因的认可是非常有必要的：
1.使用PVPP去除了红酒中的大部分酚醛树脂，但是还是存在着“缓慢
反应”，由于用PVPP处理过的葡萄酒（导致潜在的高估白葡萄酒中的L-苹果酸0.00-0.01g/L，或红葡萄酒中的浓度0.00-0.03g/L）其中存在的“缓慢反应”非常的慢，因此可以忽略不计（实验方法A），然而，如果想得到精确的结果，可以通过实验方法B精确计算得到。
2.推荐使用PVPP药片的测试方法（如每5 mL葡萄酒用1个药片）中，
导致了对样品浓度进行了2 % (v/v)稀释，计算方法中考虑了这一点（请参照用PVPP处理样品方法）
还原性物质能够干扰实验，引起“缓慢反应”，如：亚硫酸亚和抗坏血酸盐，但是仅仅能够对浓度不是很高的葡萄酒样品进行测定，如亚硫酸盐浓度在4 g/L，如果样品中的抗坏血酸盐含量非常高(> 400 mg/L)，则不能进行测定。
向已完成反应的试管中添加L-苹果酸（每20uL添加7.5 ug），通过增加的吸光度值进一步验证其他干扰的影响，利用附带的内部的规范质控可以对干扰物质进行鉴定。通过向样品中添加规范质控做定量回收实验，计算样品在处理和提取时的损失。
安全性:
L-苹果酸测定所使用的试剂没有有毒物质。然而浓缩缓冲液中含有作为防腐剂用的叠氮化钠(0.02 % w/v)，需要按照实验室安全操作规程进行实验。
试剂盒:
MegaQuant TM L-苹果酸含量测定试剂盒可以进行60次的测定实验，并提供有全部的实验方法：
58次测定试剂盒(cat. no. K-LMALR)
瓶1: 双甘氨肽缓冲液(100 mL, 100mM, pH10.0) +L-谷氨酸(100 mM)+叠氮化钠(0.02 % w/v)
稳定性> 2年，4°C保存。
瓶2: 药片（60粒）-含有心肌黄酶, GOT, INT,FAD和NAD+，使用前要先恢复至室温在打开
稳定性> 2年，-20°C。干燥保存。
瓶3: L-苹果酸脱氢酶(1.3 mL, 15,000 U/mL)
稳定性> 2年，4°C保存。
瓶4: L-苹果酸质控规范液(5 mL, 0.375 mg/mL)
稳定性> 2年，4°C保存。
瓶5: 药片（65粒）-含有PVPP
稳定性> 5年，室温保存。
试剂制备:1. 备用试剂盒中的瓶1溶液随时使用。每个实验用量1.5 mL，也可以同等量的蒸馏水稀释，然后每个实验用3 mL。
2. 备用试剂盒中的瓶2随时使用。保存于-20°C下稳定性> 2年。
3. 准备瓶3中的溶液，第一次打开前，需要充分晃动瓶子，不要让酶吸附在橡皮塞上，然后垂直存放好瓶子。每次使用前还需要充分混合其中的内溶物。
4. 备用试剂盒中的瓶4溶液随时使用。使用前恢复到室温，每个实验用量20uL
5. 准备瓶5溶液随时使用。
注意:当您怀疑分光光度计的准确性或怀疑样品中的物质抑制了实验，再使用L-苹果酸规范质控溶液进行测定，通过提供的公式计算L-苹果酸的浓度。
实验需要的设备:
1. 检测仪中提供有特定的测试用试管(平底。16 x 100 mm)，同时我们也提供提取用试管(cat. no. G-MQTB25)
2. 10 mL聚丙烯试管
3. 微量移液器(20 uL).
4. 连续分配器
5. 玻璃刻度移液管及吸球
6. MegaQuant TM测定仪
7. 定时钟
注意:
1.此方法是专门用于测定经过苹果乳酸发酵的葡萄酒，如果葡萄酒中
的L-苹果酸浓度> 0.75 g /L，需要对样品进行稀释。
2.稀释葡萄酒或葡萄汁必须使用纯净水（蒸馏水或高质量的水），如
果使用饮用水，首先需要用D-果糖规范品验证是否适合使用。
3.测试用试管使用前必须清洗干净并烘干。
操作步骤:
去除酚醛树脂:
(对于红酒通常需要进行处理)
1.取5 mL红葡萄酒加入到10 mL的聚丙烯试管中
2.加入1片PVPP药片（瓶5），拧紧试管盖，充分混合5分钟，用Whatman
No. 1 (9 cm)滤纸过滤，收集大约1 mL的滤液，滤液的颜色不能深于浅粉色（一般处理法），然而，具有深颜色的葡萄酒每5 mL需要加入2片PVPP，充分挤压收集滤液1 mL。
3.取20uL滤液进行测定
A. 测试方法A.(简单法–参照图1)
1.取1.5 mL 溶液1( ~ 23°C或更高)和1.5 mL蒸馏水加入到测试管中，或
取3.0 mL用等体积蒸馏水稀释的溶液1（参照试剂配置方法第1点）。
2.用提供的镊子夹取1片药片（瓶2），充分混合1-2分钟至完全溶解。
3.加入20uL葡萄酒样品[经PVPP处理的(未稀释的红/白葡萄酒), 未经
PVPP处理的(未稀释的白葡萄酒)或经稀释的葡萄酒或葡萄汁]，充分振荡混合。
4.大约1分钟后，将试管插入到MegaQuant TM测定仪，按下开关直到屏
幕上显示‘---’（大约2秒钟）。
5.当屏幕上出现“0.00”松开开关（表示A1）
6.取下试管，加入20uL瓶3溶液（L-苹果酸脱氢酶），充分混匀确保全
部全部溶解，同时记录时间。
7.再次将试管插入MegaQuant TM测定仪，5分钟后按下开关直到屏幕上
显示‘1 second’,记录下数值A2。
8.为了确保试剂完全反应完全，在5分钟内每间隔1分钟读取一下数
值，直到每间隔1分钟数值不再变化。（参考图1和图2）
注意:
1.如果数值A2 > 1.00，10倍以上稀释样品，并再次测定，如果数值A2 <
0.10，样品不要进行过分稀释（将100倍稀释改为10倍稀释）。
2.由于INT对光有敏感性（显色剂在药片中），长时间的反应将导致溶
液颜色加深，因此必须按照推荐的操作方法进行测定。
3.在进行实验前，瓶1提前从冰箱中取出，并恢复到室温，如果温度<
23°C，反应过程将很快结束。
4.添加药片到1.5 mL溶液1和1.52 mL蒸馏水中，确保药片全部溶解后测
定的0 吸光度值作为空白对照，然后加入20uL 的L-苹果酸脱氢酶（瓶3），5分钟后测定增加的吸光度值(A2)，微小的吸光度变化(A2)是没有意义的（如由0.00到0.01）。
计算:
ΔA L-苹果酸= 增加的吸光度值(A2)
按照常规ΔA L-苹果酸的数值至少要在0.10个吸光单位，才能获得满意的实验结果。L-苹果酸的含量可以依照下列公式计算（参照图3中的规范曲线）:
未经PVPP处理过的样品中的L-苹果酸浓度
20uL未经稀释的样品
c = 0.771 x ΔA L-苹果酸[g/L]
20uL经稀释的样品
c = 0.771 x 稀释系数xΔA L-苹果酸[g/L]
经PVPP处理过的样品中的L-苹果酸浓度
20uL未经稀释的样品
c = 0.771 x ΔA L-苹果酸x 102/100[g/L]
= 0.786 x ΔA L-苹果酸[g/L]
20uL经稀释的样品
c = 0.786 x 稀释系数x ΔA L-苹果酸[g/L]
注释:
102/100 = 经PVPP处理的葡萄酒的容差
图1. 用分光光度仪测定(25°C,1 cm管径)的MegaQuant TM L-苹果酸随时间的变化。注意:用此方法测定的L-苹果酸浓度比图3中测定的浓度要低，是由于此方法中使用的测试管管径为1 cm，而MegaQuant TM测试管大约为1.3 cm.
测试方法B (对“缓慢反应”的处理)
1.取1.5 mL 溶液1( ~ 23°C或更高)和1.5 mL蒸馏水加入到测试管中，或
取3.0 mL用等体积蒸馏水稀释的溶液1（参照试剂配置方法第1点）。
2.用提供的镊子夹取1片药片（瓶2），充分混合1-2分钟至完全溶解。
3.加入20uL葡萄酒样品经PVPP处理的红葡萄酒，充分振荡混合。
4.大约1分钟后，将试管插入到MegaQuant TM测定仪，按下开关直到屏
幕上显示‘---’（大约2秒钟）。
5.当屏幕上出现“0.00”松开开关（表示A0），同时记录时间。
6.取下试管5分钟，再次插入试管按下开关直到屏幕上显示‘1 second’，
插入试管前不要按压按钮，否则将导致测定仪读取错误,记录下数值A1（经过5分钟由于存在缓慢反应将导致颜色增深）。
7.取下试管，立即加入20uL瓶3溶液（L-苹果酸脱氢酶），充分混匀确
保全部全部溶解，同时记录时间。
8.再次将试管插入MegaQuant TM测定仪，5分钟后按下开关直到屏幕上
显示吸光度,记录下数值A2。
9.为了确保试剂完全反应完全，在5分钟内每间隔1分钟读取一下数
值，直到每间隔1分钟数值变化不超过0.01个吸光单位。（参考图1和图2）
计算:
ΔA L-苹果酸= [(A2-A1) - (A1-A0)]
由于A0数值为0，因此可以简化为：ΔA L-苹果酸= A2 - (2 x A1)
例如（参照图1）: A2 = 0.42；A1 = 0.02
ΔA L-苹果酸= 0.42 - (2 x 0.02) = 0.42 - 0.04 = 0.38
按照常规ΔA L-苹果酸的数值至少要在0.100个吸光单位，才能获得满意的实
验结果。L-苹果酸的含量可以依照下列公式计算（参照图3中的规范曲线）:
经PVPP处理过的样品中的L-苹果酸浓度
20uL未经稀释的样品
c = 0.771 x ΔA L-苹果酸x 102/100[g/L]
= 0.786 x ΔA L-苹果酸[g/L]
20uL经稀释的样品
c = 0.786 x 稀释系数x ΔA L-苹果酸[g/L]
注释:
102/100 = 经PVPP处理的葡萄酒的容差
图2. 用分光光度仪测定(25°C,1 cm管径, 492nm)的MegaQuant TM L-苹果酸随时间的变化。测试样品为用PVPP处理并过滤的不同浓度的红葡萄酒（0-18ug），加入样品后测得A0，经过5分钟反应测定吸光度A1，可计算出“缓慢反应”比率，然后加入L-苹果酸脱氢酶（20uL）继续反应10分钟[5分钟后测定吸光度值A2]，如果使用MegaQuant TM测试仪进行测定，A0的吸光度值为0。
制备样品:
稀释样品.
比色杯中（如：分析20 uL的样品）的L-苹果酸含量必须在1.54-15ug之间，因此样品溶液必须被充分的稀释到浓度在0.007-0.75 g/L之间。
样品处理事例:
(a) 测定葡萄汁和白葡萄酒中的L-苹果酸含量
测定白葡萄酒和葡萄汁中的L-苹果酸含量，样品通常不需要处理，可直接进行测定。如有必要可以进行稀释。
样品处理事例:
(b) 测定红葡萄酒中的L-苹果酸含量
取5 mL红葡萄酒加入到10 mL的聚丙烯试管中，加入1片PVPP药片（瓶5），拧紧试管盖，充分混合5分钟，用Whatman No. 1 (9 cm)滤纸过滤，收集大约1 mL的滤液，滤液的颜色不能深于浅粉色（一般处理法），然而，如果滤液为深红色，还要在进行处理，但需要加入2片PVPP，充分挤压收集滤液1 mL。澄清的或浅粉色的滤液可以直接进行测定。(c) 测定葡萄中的L-苹果酸含量
取200 mL蒸馏水加入到500 mL的量筒中，加入葡萄使体积刚刚超过400 mL，再加入400 mL以上的等体积蒸馏水（如: 总体积为420 mL，需另外加入蒸馏水20 mL），这样就等同于对葡萄进行了2倍稀释，然后充
分均质3分钟，然后用Whatman No. 1（9 cm）滤纸过滤，弃去最初的几mL滤液，收集后来的5-10 mL滤液，稀释后可以直接进行测定。
单个葡萄也可以进行测定，压碎葡萄收集葡萄汁到10 mL的量筒中，然后用等体积的蒸馏水稀释，混合均匀后过滤，收集的提取液稀释后可以直接进行测定。
图3. 用MegaQuant TM测定仪测定的L-苹果酸浓度(ug/每个测定)相对于吸光度的规范曲线（室温。505 nm）
参考文献:
1.McCleary, B.V. and Charnock, S. J. (2005). Reagentcomponents in
tablet form for colorimetric assays of foodand beverage analytes. Patent submitted.
2.Mollering, H. (1985). L-Malate. In Methods of Enzymatic
Analysis(Bergmeyer, H. U., ed.), 3rd ed., Vol.VII, pp. 39-47,
VCHPublishers (UK) Ltd., Cambridge, UK.
验证MegaQuant TM测定仪和L-苹果酸测试的精确性和可靠性:
1.我们可以提供用于MegaQuant TM测定仪校验规范，仪器参数在使用过
程中不应改变。
2.可以通过试剂盒中提供的L-苹果酸质控规范验证MegaQuant TM测定
仪的准确性，将样品替换为L-苹果酸质控规范20uL，按照实验步骤进行测定，可以得到的吸光度(A2-A1)为0.49，如果存在差别，可能是由于移取液体的误差导致的。
MegaQuant TM测定仪使用和维护注意事项
错误信息
仪器面板上可能出现各种不用错误信息，具体错误原因及处理办法如下：
维护与保养
使用干净的测试试管，测试前将试管盖拧紧，以防试剂溅入到仪器中，如果有溢出立即用棉织物擦拭干净，不能用溶解性的或腐蚀性的溶液擦拭仪器。
当显示屏上出现“B”，提示需要更换新的电池，轻轻的拉下仪器后部的电池面板，使用2节1.5V‘AA’碱性电池，如果长时间不使用，需要将仪器内的电池取出。
MegaQuant TM测定仪自售出之日起保修期为1年，意外损坏或由于错误操作和未在指定地点维修导致的损坏不在保修范围之内。如果需要维修请联系我们。
技术规格：
葡萄酒出厂检验方法 一、感官检查与评定 1、外观 在适宜光线（非直射阳光）下，以手持杯底或用手握住玻璃杯柱，举杯齐眉，用眼观察杯中酒的色泽、透明度与澄清程度，有无沉淀及悬浮物；起泡和加气起泡葡萄酒要观察起泡情况，作好详细记录。 2、香气 先在静止状态下多次用鼻嗅香，然后将酒杯捧握手掌之中，使酒微微加温，并摇动酒杯，使杯中酒样分布于杯壁上。慢慢地将酒杯置于鼻孔下方，嗅闻其挥发香气，分辨果香、酒香或有否其他异香，写出评语。 3、滋味 喝入少量样品于口中，尽量均匀分布于味觉区，仔细品尝，有了明确印象后咽下，再体会口感后味，记录口感特征。 4、典型性 根据外观、香气、滋味的特点综合分析，评定其类型、风格及典型性的强弱程度，写出结论意见（或评分）。 二、酒精度 1、密度瓶法 （1）、原理 以蒸馏法去除样品中的不挥发性物质，用密度瓶法测定馏出液的密度。根据馏出液（酒精水溶液）的密度，查附录A（规范性附录），求得20℃时乙醇的体积百分数，％（体积分数），即酒精度。 （2）、仪器 1 ）、分析天平：感量 0.0001 g。 2 ）、全玻璃蒸馏器：500 mL。 3 ）、高精度恒温水浴：20.0±0.1℃。 4 ）、附温度计密度瓶：25或50 mL。 （3）、试样的制备 用一洁净、干燥的 100 mL容量瓶准确量取100mL样品（液温 20℃）于 500 mL蒸馏瓶中，用 50mL水分三次冲洗容量瓶，洗液并入蒸馏瓶中，再加几颗玻璃珠，连接冷凝器，以取样用的原容量瓶作接收器（外加冰浴）。开启冷却水，缓慢加热蒸馏。收集馏出液接近刻度，取下容量瓶，盖塞。于 20 ℃水浴中保温 30 min，补加水至刻度，混匀，备用。 （4）、分析步骤 1）、蒸馏水质量的测定 a) 将密度瓶洗净并干燥，带温度计和侧孔罩称量。重复干燥和称量，直至
葡萄酒中苹果酸的测定 原理: 利用MegaQuant TM (专利技术)测定L-苹果酸需要进行三步酶解反应，第一步：在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下，L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸： (1) L-苹果酸+ NAD+(L-MDH)oxaloacetate + NADH + H+ 第二步：加入过剩的L-谷氨酸，在谷草转氨酶的作用下，生成L-天门冬氨酸和2–酮戊二酸 (2) Oxaloacetate + L-glutamate (GOT)L-aspartate + 2-oxoglutarate 第三步：在心肌黄酶的催化作用下，NADH还原碘硝基氯化四氮唑(INT)，生成甲基- INT (3) NADH + INT + H+(diaphorase)NAD+ +甲基-INT 生成的甲基- INT的量取决于L-苹果酸的量，甲基- INT的吸光度值可在505nm下测量。 特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度: 该实验方法是专门用于测定L-苹果酸含量的。 最小可调吸光光度为0.01个吸光单位，样品体积为20uL，此时的L-苹果
酸浓度为7.7 mg/L。如果最小可调吸光光度为0.02吸光光度，样品体积为20uL，此时的L-苹果酸检测线为15.4 mg/L。 该实验的测量范围为0.15-15ug L-苹果酸(对于20uL样品液中的浓度为0.007-0.75 g/L)，同一样品分别进行两次测定，其吸光度值会有0.01-0.02吸光单位的变化，对于样品体积为20uL，此时的L-苹果酸浓度大约在7.7-15.4 mg/L之间，如果样品是经过稀释的，在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数（F）,如果在样品制备阶段，样品的重量是被称量的，如：10g/L,0.02-0.05g/100g的细微差别能够被分辨。 干扰: 红酒中的酚醛树脂会对本试验造成干扰，引起INT的“缓慢反应”（图2），因此在对未稀释的红酒进行测定时，必须首先用聚乙烯聚吡咯烷酮（PVPP）净化样品。“缓慢反应”同样也发生在未稀释的白葡萄酒中，按照提供的方法进行测定，其缓慢反应速率非常的慢。 在用MegaQuant TM测定L-苹果酸的时候，对于存在的两种潜在的次要误差原因的认可是非常有必要的： 1.使用PVPP去除了红酒中的大部分酚醛树脂，但是还是存在着“缓慢 反应”，由于用PVPP处理过的葡萄酒（导致潜在的高估白葡萄酒中的L-苹果酸0.00-0.01g/L，或红葡萄酒中的浓度0.00-0.03g/L）其中存在的“缓慢反应”非常的慢，因此可以忽略不计（实验方法A），然而，如果想得到精确的结果，可以通过实验方法B精确计算得到。
葡萄酒中总酸测定方法Last revision on 21 December 2020
葡萄酒中总酸测定方法 (1)电位滴定法 1.原理:利用酸碱中和原理，用NaOH标准滴定溶液直接滴定样品中的有机酸，以pH=为电位滴定终点，根据消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，计算试样的总酸含量。 2.试剂和材料 ①NaOH标准滴定溶液[c(NaOH)=L]:按GB/T 601配制与标定，并准确稀释。 ②酚酞指示液(10 g/L):按GB/T 603配制。 3.仪器 ①自动电位滴定仪(或酸度计):精度 pH，附电磁搅拌器。 ②恒温水浴:精度±℃，带振荡装置。 3.分析步骤 ①按仪器使用说明书校正仪器。 ②测定 吸取 mL样品(液温20℃)于100 mL烧杯中，加50 mL水，插人电极，放入一枚转子，置于电磁搅拌器上，开始搅拌，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定。开始时滴定速度可稍快，当样液pH=后，放慢滴定速度，每次滴加半滴溶液直至pH=为其终点，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积。同时做空白试验。 4.结果计算 样品中总酸的含量按式计算。
X=c×(V1?V0)×75 V2 式中: X——样品中总酸的含量(以酒石酸计)，单位为克每升(g/L)； c——氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L)； V0——空白试验消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)； V1——样品滴定时消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升(mL)； V2——吸取样品的体积，单位为毫升(mL)； 75——酒石酸的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔(g/mol)。 所得结果表示至一位小数。 5.精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的3％。 （2）指示剂法 1.原理：用酸碱滴定原理，以酚酞作指示剂，用碱标准溶液滴定，根据碱的用量计算总酸含量。 2.试剂和材料 同电位滴定法试剂和材料。 3.分析步骤 吸取样品 2 mL～5 mL[液温20℃；取样量可根据酒的颜色深浅而增减]，置于250 mL三角瓶中，加人50 mL，水，同时加入2滴酚酞指示液，摇匀后，立即用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至终点，并保持30 s内不变色，记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积（V1）。同时做空白试验。
2012高教社杯全国大学生数学建模竞赛 承诺书 我们仔细阅读了中国大学生数学建模竞赛的竞赛规则. 我们完全明白，在竞赛开始后参赛队员不能以任何方式（包括、电子、网上咨询等）与队外的任何人（包括指导教师）研究、讨论与赛题有关的问题。 我们知道，抄袭别人的成果是违反竞赛规则的, 如果引用别人的成果或其他公开的资料（包括网上查到的资料），必须按照规定的参考文献的表述方式在正文引用处和参考文献中明确列出。 我们重承诺，严格遵守竞赛规则，以保证竞赛的公正、公平性。如有违反竞赛规则的行为，我们将受到严肃处理。 我们授权全国大学生数学建模竞赛组委会，可将我们的论文以任何形式进行公开展示（包括进行网上公示，在书籍、期刊和其他媒体进行正式或非正式发表等）。 我们参赛选择的题号是（从A/B/C/D中选择一项填写）： A （隐去论文作者相关信息） 日期： 2012 年 9 月 10 日赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）：
2012高教社杯全国大学生数学建模竞赛 编号专用页 赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）： 全国统一编号（由赛区组委会送交全国前编号）：全国评阅编号（由全国组委会评阅前进行编号）：
葡萄酒质量的评价 摘要 葡萄酒质量的好坏主要依赖于评酒员的感观评价，由于人为主观因素的影响，对于酒质量的评价总会存在随机差异，为此找到一种简单有效的客观方法来评酒，就显得尤为重要了。本文通过研究酿酒葡萄的好坏与所酿葡萄酒的质量的关系，以及葡萄酒和酿酒葡萄检测的理化指标的关系，以及葡萄酒理化指标与葡萄酒质量的关系，旨在通过客观数据建立数学模型，用客观有效的方法来评价葡萄酒质量。 首先，采用双因子可重复方差分析方法，对红、白葡萄酒评分结果分别进行检验，利用Matlab软件得到样品酒各个分析结果，结合01 -数据分析，发现对于红葡酒有70.3%的评价结果存在显著性差异，对于白葡萄酒只有53%的评价结果存在显著性差异。通过比较可知，两组评酒员对红葡萄酒的评分结果更具有显著性差异，而对于白葡萄酒的评分，评价差异性较为不明显。为了评价两组结果的可信度，借助Alpha模型用克伦巴赫α系数衡量，并结合F检验，得出红葡萄酒第一组评酒员的评价结果可信度更高，而对白葡萄酒的品尝评分，第二组评酒员的评价结果可信度更高。综合来看，主观因素对葡萄酒质量的评价具有不确定性。 结合已分析出的两组品酒师可靠性结果，对葡萄酒的理化指标进行加权平均，最终得出十位品酒师对样品酒的综合评价得分。将每一样品酒的综合得分与其所对应酿酒葡萄的理化指标（一级指标）共同构成一个数据矩阵，采用聚类分析法，利用SPSS软件对葡萄酒样进行分类，根据分类的结果以及各葡萄样品酒综合得分最终将酿酒葡萄分为A（优质）、B（良好）、C（中等）、D（差）四个等级，客观地反映了酿酒葡萄的理化指标与葡萄酒质量之间的联系。 为了分析酿酒葡萄与葡萄酒理化指标之间的联系，采用相关分析法，能有效地反映出两者间的联系，取与葡萄各成分相关性显著的葡萄酒理化指标，与葡萄成分做多元线性回归得出葡萄酒理化指标与酿酒葡萄的拟合方程，从而反映酿酒葡萄与葡萄酒理化指标之间的联系。 由于已经通过回归分析建立了酿酒葡萄和葡萄酒理化指标之间的关系，因此从酿酒葡萄成分对葡萄酒的理化指标的影响，再研究出葡萄酒理化指标与葡萄酒质量的联系，便可作为一个桥梁，反映出葡萄与葡萄酒理化指标对葡萄酒的质量的作用。研究葡萄酒理化指标与葡萄酒质量的联系，需要运用变量间的相关性及Pearson系数法分析葡萄酒的理化指标与葡萄酒质量评价指标的相关性，通过比较选出与葡萄酒评价的一级指标相关性程度大的葡萄酒成分，进行回归分析法，建立酿酒葡萄的理化指标与葡萄酒质量之间的拟合方程，结合各个质量一级指标的权重，从而完成了从葡萄酒成分对葡萄酒质量的客观评价。综合计算结果，与酿酒葡萄分级的结果吻合，所以分析结果较客观。
美国新橡木桶贮存赤霞珠干红葡萄酒W2B5理化指标分析 班级：生工081 学号：080302101 姓名：杨冲 摘要：本实验以美国新橡木桶贮存赤霞珠干红葡萄酒为原料,根据GBT 15038-2006 葡萄酒、果酒通用分析方法测定样品的总酸、挥发酸、酒精度、干浸出物、总浸出量、残糖、单宁、色度、色调、总酚、总SO2、明胶指数、盐酸指数、pH、可溶性固形物。结果显示, 葡萄酒的各项理化指标符合国家新标准中的规定。本文讨论分析了橡木桶对赤霞珠干红葡萄酒储存过程中理化指标的影响。 关键词：赤霞珠；橡木桶；干红葡萄酒；理化指标；分析检测 1 引言 葡萄酒是以新鲜葡萄或葡萄汁为原料，经发酵而成的含有多种营养成分的饮料酒, 是世界公认的对人体有益的健康酒精饮品。葡萄酒具有很高的营养价值和保健作用, 内含一种称为白藜芦醇的物质, 以红葡萄酒中含量最多, 可用于癌症的化学预防。葡萄酒能调节人体新陈代谢, 促进血液循环, 防止胆固醇增加, 同时还有利尿、激发肝功能和防止衰老的作用, 长期适当适量( 每天控制在50mL) 饮用, 可以起到滋补、强身、美容的作用, 可防止坏血病、贫血、眼角膜炎, 降低血脂, 促进消化, 对预防癌 症和医治心脏病大有禆益。 干红葡萄酒中含有人体维持生命活动所需的三大营养素：维他命、糖及蛋白质。葡萄糖是人类维持生命、强身健体不可缺少的营养成分，是人体能量的主要来源。近年来也越来越受广大顾客的青睐。本研究的目的就是通过对赤霞珠干红葡萄酒理化指标的检测，保障酒的质量，并通过检测分析在制作、品种、贮存工具、贮存条件相同的情况下，只有贮存时间不同对酒理化性质的比较分析。 由于橡木桶贮存过的葡萄酒日益得到消费者的认可，橡木桶便越来越受到世界各地的酿酒师的青睐。橡木香气是木桶贮藏的葡萄酒中最常见的香气。经过木桶贮藏，葡萄酒逐渐氧化成熟。新、旧橡木桶也会对葡萄酒产生一定影响，随着贮酒次数的增加，木桶的贮藏效果逐渐减弱。几乎有葡萄酒出产的地方都可以见到赤霞珠的身影，但是它在世界各地区的表现是有所差异的，不同的地区由于气候不同导致葡萄的质量不同。本文研究的是美国新橡木桶贮存赤霞珠干红葡萄酒的理化指标差异。 2 材料与方法 2.1 原料 美国6#新橡木桶贮存2#赤霞珠干红葡萄酒（W2B6）2010年10月—2011年6月的九个样品。 2.2 试剂与仪器 试剂： NaOH 标准液，费林溶液Ⅰ、Ⅱ液，葡萄糖标液，福林-肖卡、福林-丹尼斯(试剂等。 仪器：分析天平，分光光度计， pH计等。
葡萄酒评价指标 区分好坏葡萄酒没有具体的绝对的量化标准，目前权威的葡萄酒评分系统主要是美国著名的葡萄酒评论家罗伯特·帕克，帕克推崇的是葡萄酒100分制评分体系；以及大家俗称的3W1D也是世界葡萄酒评分系统中的权威。 帕克的100分制给葡萄酒的打分范围是50-100，基于以下四个因素：外观，香气，风味，总体质量或潜力。帕克将葡萄酒分成四个档次(从50-100分)，具体的打分体系如下： 96-100 Extraordinary 经典：顶级葡萄酒。 90-95 Outstanding 优秀：具有高级品味特征和口感的葡萄酒。 80-89 Above average 优良：口感纯正、制作优良的葡萄酒。 70-79 Average 一般：略有瑕疵，但口感无尚大碍的葡萄酒。 60-69 Below average 低于一般：不值得推荐 50-59 Unacceptable 次品 一般帕克的评分系统会给每一款酒一个基础的分数（50分）。在50分的基础上，按酒的质量特点加分。 酒的颜色和外观值5分，好的葡萄酒的外观应该澄亮透明（深颜色的酒可以不透明），有光泽，其颜色与酒的名称相符，色泽自然、悦目。 然后，酒香值15分，取决于香气的浓度、复杂度和纯粹感，香气应该是葡萄的果香（比如赤霞珠的黑醋栗香气、黑比诺的樱桃香气、霞多丽的热带水果香气）、发酵的酒香、陈酿的醇香（橡木桶陈酿及瓶内陈酿组成的香气，主要包括花香、果香、辛香料香、动物香、矿物香、动物香、焙烤香等香气类型），这些香气应该平衡、协调、融为一体，香气幽雅，令人愉快； 酒的口感和后味值20分，好的葡萄酒其口感应该是舒畅愉悦的，各种香味应细腻、柔和，酒体丰满完整，有层次感和结构感，果味、单宁、酒精、酸度、甘油、糖分均衡，余味绵长；最后，酒的总体质量水平或者演化进步的潜力，也就是说陈化的潜力，值10分。 3W指WA、WS、WE WA是《葡萄酒倡导家》杂志Wine Advocate journal 即罗伯特·帕克的评分 WS是《葡萄酒观察家》Wine Spectator magazine杂志，该杂志同样为美国最具影响力的杂志之一，同样倡导百分制，基本思路与帕克类似，但《葡萄酒观察家》拥有众多的优秀评酒师，通过蒙瓶试酒，多方面综合结果，所以评分相对较中立。 分数解释 96-100 经典的，绝佳的
快速判断葡萄酒质量的办法 很多因素会导致一瓶葡萄酒变坏，最常见的因素就是软木塞污染（即在装瓶前软木塞受到了污染）和氧化（葡萄酒与氧气接触过多）。其他的因素还有褐化（由高温引起）和再发酵（葡萄酒在瓶中进行二次发酵）。 被软木塞污染的葡萄酒其实是被软木塞中的TCA细菌污染。如果软木塞中的TCA细菌过多，这种细菌就会转移到葡萄酒中，让葡萄酒变质。不过要注意的是，拿软木塞来闻一下并不能判断它是否被TCA污染。虽然闻软木塞这个动作可能看起来比较酷，但是其实这样做并没有什么作用。 氧化是葡萄酒变坏的最大杀手。如果储存不当，葡萄酒就可能会与氧气过多、过久接触。另外，开瓶后的葡萄酒如果不尽快喝完，也会很容易发生氧化。 那么，怎样判断一款葡萄酒到底有没有变坏呢？ 第一招：看 1、如果一款红葡萄酒的颜色比较黯淡，没有光泽，呈不正常的棕色，那它可能已经过度氧化或者受到了其他污染。如果一款白葡萄酒呈很深的黄色，它也可能发生了过度氧化。 2、开瓶前，如果发现软木塞被从瓶中微微推了出来，这意味着葡萄酒可能经历过高温，导致瓶中气体压力升高，把塞子往外挤。 第二招：闻 1、如果一款葡萄酒闻起来像是老太太的旧衣橱的味道，比如发霉、陈腐、湿纸板、湿狗的味道，那它应该是变坏了。 2、如果一款非雪利葡萄酒闻起来却像是雪利葡萄酒的味道，那它很可能已经变坏了。 3、如果一款葡萄酒闻起来像是把煮过的葡萄干放在锅里一两个星期后发出来的味道，那它很可能已经变坏了。煮得过熟的水果的味道或者浓郁的葡萄干的味道都预示着葡萄酒可能已经变坏。 第三招：品 1、如果葡萄酒带有刺激的、醋酸似的或者化学物品似的风味，那说明它已经变坏了。通常在品尝之前，你就可以闻到这样的味道。 2、如果一款葡萄酒的口感比较寡淡、沉闷，缺乏应有的果香，那它可能已经变质了。 3、如果你在一瓶非起泡葡萄酒中发现气泡，这意味着该酒很可能在瓶中发生了二次发酵；当然，不是所有二次发酵都是坏事，有些葡萄酒是经过酿酒师的特别处理而在装瓶后继
学号姓名 实验三食品中总酸的测定（滴定法） 一、实验原理 果汁具有酸性反应，这些反应取决于游离态的酸以及酸式盐存在的数量。总酸度包括未解离酸的浓度和已解离酸的浓度。酸的浓度以摩尔浓度表示时，称为总酸度。含量用滴定法测定。果蔬中含有各种有机酸，主要有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、草酸……。果蔬种类不同，含有机酸的种类和数量也不同，食品中酸的测定是根据酸碱中和的原理，即用标定的氢氧化钠溶液进行滴定。 二、材料、仪器与试剂 （一）材料：西红柿、苹果、果汁等 （二）仪器：碱式滴定管（20mL）、容量瓶（100mL）、移液管（10mL）、烧杯（100mL）、研钵或组织捣碎机、100ml量筒(量酒精)、1%酚酞指示剂、胶头滴管/滴瓶、容量瓶（1000mL）、布氏漏斗+滤纸、天平、三角烧瓶、洗瓶、活性炭（脱色）、和板、蒸馏水。 （三）试剂 1）．0.1mol/L氢氧化钠：称4.0g氢氧化钠定容至1000mL，然后用0.1mol/L邻苯二甲酸氢钾标定，若浓度太高可酌情稀释。 2）．1%酚酞指示剂：称1.0g酚酞，加入100mL50%的乙醇溶解。 三、操作步骤 1）0.1mol/L NaOH标准溶液的标定：将基准邻苯二甲酸氢钾加入干燥的称量瓶内，于105-110℃烘至恒重，用减量法准确称取邻苯二甲酸氢钾约0.6000克，置于250 mL锥形瓶中，加50 mL无CO2蒸馏水，温热使之溶解，冷却，加酚酞指示剂2-3滴，用欲标定的0.1mol/L NaOH溶液滴定，直到溶液呈粉红色，半分钟不褪色。同时做空白试验。 2）样品的处理与测定：准确称取混合均匀磨碎的样品10.0g（或吸10.0mL样品液），转移到100mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度、摇匀。用滤纸过滤，准确吸取滤液20mL放入100mL 三角瓶中，加入1%酚酞2滴，用标定的氢氧化钠滴定至初显粉色在0.5min内不褪色为终点，记下氢氧化钠用量，重复三次，取平均值。 四、实验结果 式中：V——样品稀释总体积（mL）V1——滴定时取样液体积V2——消耗氢氧化
葡萄酒（汁）总酸、葡萄酒挥发酸测定 一、总酸 1. 概念 ① 葡萄酒醪或葡萄酒中所有可滴定酸的总和（可与碱性试剂发生中和反应的酸，也即游离氢离子的总和）； ② 包括挥发性酸（ 醋酸） 和不挥发性酸（ 酒石酸、乳酸等）； ③ 总酸不包括碳酸、亚硫酸及结合态亚硫酸. 2. 表示：OIV 规定以酒石酸计，也可以硫酸计。 3. 目的意义（测量时期） ① 采收前——葡萄浆果成熟度重要指标； ② 酒精发酵前后——决定是否对原料进行改良，促进或防止苹果酸－乳酸发酵，以提高葡萄酒的感官质量，并保证其良好的贮藏性； ③ MLF 后—— ④ 冬季结束时——低温导致酒石沉淀，从而导致总酸降低； ⑤ 葡萄酒成熟过程——若总酸升高，则可能感染微生物病害。 4. 测量原理、方法 ① 原理：酸碱滴定； ② 方法：电位滴定法（以pH 计判断终点，终点pH=8.2） 指示剂法（以酚酞作指示剂） 5. 操作 ① 吸取样品2ml——250ml 三角瓶 ② 加50ml 蒸馏水 ③ 2滴酚酞并摇匀 ④ 氢氧化钠标液滴定至终点（保持30s 不变色），记录体积 (约3 ml ) ⑤ 计算： 6. 注意事项与误差分析 ① 方法误差：滴定终点pH 不是7，等电点应在7.5-8.4间，视酒中酸种类和含量不同，通常以8.2作为滴定终点； ② 样品脱气：总酸不包括碳酸、亚硫酸及结合态亚硫酸，因此在测定前需对样品进行脱气处理； ③ 快至终点时应注意放慢滴定速度，以免过量； ④ 滴定终点判断是难点，可以以酒样的颜色变化来决定（白葡萄酒渐变暗至浊褐色、浅红色；红葡萄酒从浅红——无色——浅红或紫，或浅红——无色——墨绿或紫色），一般来说，第一滴滴下去的局部颜色即为终点过量后的颜色； ⑤ pH 计的标定要准确； ⑥ 指示剂的用量不能太多，也不能太少； ⑦ 定期标定或重新配置氢氧化钠； ⑧ 注意所用蒸馏水的pH 。 葡萄酒分析检验 期末复习参考
承诺书 我们仔细阅读了中国大学生数学建模竞赛的竞赛规则. 我们完全明白，在竞赛开始后参赛队员不能以任何方式（包括电话、电子邮件、网上咨询等）与队外的任何人（包括指导教师）研究、讨论与赛题有关的问题。 我们知道，抄袭别人的成果是违反竞赛规则的, 如果引用别人的成果或其他公开的资料（包括网上查到的资料），必须按照规定的参考文献的表述方式在正文引用处和参考文献中明确列出。 我们郑重承诺，严格遵守竞赛规则，以保证竞赛的公正、公平性。如有违反竞赛规则的行为，我们将受到严肃处理。 我们授权全国大学生数学建模竞赛组委会，可将我们的论文以任何形式进行公开展示（包括进行网上公示，在书籍、期刊和其他媒体进行正式或非正式发表等）。 我们参赛选择的题号是（从A/B/C/D中选择一项填写）： A 我们的参赛报名号为（如果赛区设置报名号的话）： 所属学校（请填写完整的全名）：长江师范学院 参赛队员(打印并签名) ：1. 李蓉 2. 马艳 3. 周成楷 指导教师或指导教师组负责人(打印并签名)：廖江东 日期： 2012 年 9 月 10 日赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）：
编号专用页 赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）： 全国统一编号（由赛区组委会送交全国前编号）：全国评阅编号（由全国组委会评阅前进
葡萄酒质量的评价模型 摘要 本文围绕葡萄酒的质量评价问题进行讨论，主要应用数据的统计原理以及数据的处理方法对酿酒葡萄的分级、葡萄酒和葡萄的理化指标的联系、以及葡萄酒质量评价问题建立了模型，并对模型做了较详细的模型检验，客观地实现了问题的解决。 问题（1），是一个数据统计问题，首先对红、白葡萄酒每类酒的样本数据建立了两独立样本的T检验模型，通过对比T统计量t值与T分布表给出的相伴概率值之间的大小，得出两组数据样本具有显著性差异。对于两数据样本的可信度问题，本文巧妙通过对每类的两个数据样本的均值方差的图像分析和对客观的评价准则考虑，得出结果：第二组评酒员给出的分数更具有可信性。 问题（2），属于多方案排序问题，首先利用问题（1）中的结果得到两组样品的有效性较高的评分数据样本，并借以建立了排序模型。同时本文还应用逼近理想解排序法（TOPSIS法），得出了两类葡萄酒质量的排序，然后通过权重法筛选出氨基酸、糖、蛋白质作为核心理化指标。最后基于“层次分析法”评价模型建立分级评价模型，通过权重算法得到以核心量化指标的贴近度作为分级的标准，确定出了对酿酒葡萄的四个等级：（见表4-15、4-16）。 问题(3)，对附件2中一级指标下的多重数据进行求平均值处理获得该级指标的最优值，建立了多元线性回归模型，首先对酿酒红、白葡萄的30种一级指标进行筛选，筛选出众多核心理化指标的最优值,并采用“逐步回归”的方法，针对多重数据下的多种指标进行分别拟合，从中抽出拟合最好的一组数据和结果进行图像分析，得出整体的酿酒葡萄与葡萄酒的理化指标成正相关的关系。 问题（4），本文基于问题（1）、问题(2)和问题（3）的研究结果，首先针对酿酒葡萄和葡萄酒的理化指标对葡萄酒质量影响问题，建立了多元回归分析模型，并运用逐步回归方法对这里的最优值进行有效而合理的筛选，之后将筛选得到的多个理化指标给与拟合，并对其进行图像分析，得出筛选出来的5个一级指标就可以反映出整体的关系，最后应用这个结果论证出：用葡萄和葡萄酒的理化指标来判断葡萄酒的质量是不全面的。 关键词：葡萄酒的评价 T检验层次分析法多元线性回归分析逐步回归法
(精编)葡萄酒质量的评 价
2012高教社杯全国大学生数学建模竞赛 承诺书 我们仔细阅读了中国大学生数学建模竞赛的竞赛规则. 我们完全明白，在竞赛开始后参赛队员不能以任何方式（包括电话、电子邮件、网上咨询等）与队外的任何人（包括指导教师）研究、讨论与赛题有关的问题。 我们知道，抄袭别人的成果是违反竞赛规则的,如果引用别人的成果或其他公开的资料（包括网上查到的资料），必须按照规定的参考文献的表述方式在正文引用处和参考文献中明确列出。 我们郑重承诺，严格遵守竞赛规则，以保证竞赛的公正、公平性。如有违反竞赛规则的行为，我们将受到严肃处理。 我们授权全国大学生数学建模竞赛组委会，可将我们的论文以任何形式进行公开展示（包括进行网上公示，在书籍、期刊和其他媒体进行正式或非正式发表等）。 我们参赛选择的题号是（从A/B/C/D中选择一项填写）： A （隐去论文作者相关信息） 日期：2012 年9 月10 日 赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）： 2012高教社杯全国大学生数学建模竞赛 编号专用页 赛区评阅编号（由赛区组委会评阅前进行编号）： 赛区评阅记录（可供赛区评阅时使用）： 评
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葡萄酒质量的评价 摘要 葡萄酒质量的好坏主要依赖于评酒员的感观评价，由于人为主观因素的影响，对于酒质量的评价总会存在随机差异，为此找到一种简单有效的客观方法来评酒，就显得尤为重要了。本文通过研究酿酒葡萄的好坏与所酿葡萄酒的质量的关系，以及葡萄酒和酿酒葡萄检测的理化指标的关系，以及葡萄酒理化指标与葡萄酒质量的关系，旨在通过客观数据建立数学模型，用客观有效的方法来评价葡萄酒质量。 首先，采用双因子可重复方差分析方法，对红、白葡萄酒评分结果分别进行检验，利用Matlab软件得到样品酒各个分析结果，结合数据分析，发现对于红葡酒有的评价结果存在显著性差异，对于白葡萄酒只有53%的评价结果存在显著性差异。通过比较可知，两组评酒员对红葡萄酒的评分结果更具有显著性差异，而对于白葡萄酒的评分，评价差异性较为不明显。为了评价两组结果的可信度，借助Alpha模型用克伦巴赫系数衡量，并结合检验，得出红葡萄酒第一组评酒员的评价结果可信度更高，而对白葡萄酒的品尝评分，第二组评酒员的评价结果可信度更高。综合来看，主观因素对葡萄酒质量的评价具有不确定性。 结合已分析出的两组品酒师可靠性结果，对葡萄酒的理化指标进行加权平均，最终得出十位品酒师对样品酒的综合评价得分。将每一样品酒的综合得分与其所对应酿酒葡萄的理化指标（一级指标）共同构成一个数据矩阵，采用聚类分析法，利用SPSS软件对葡萄酒样进行分类，根据分类的结果以及各葡萄样品酒综合得分最终将酿酒葡萄分为A（优质）、B（良好）、C（中等）、D（差）四个等级，客观地反映了酿酒葡萄的理化指标与葡萄酒质量之间的联系。 为了分析酿酒葡萄与葡萄酒理化指标之间的联系，采用相关分析法，能有效地反映
第一章葡萄酒分析检验基础知识 基本内容 （1）葡萄酒的分析检验基础 （2）葡萄酒常规理化指标的国家标准 基本要求 （1）掌握葡萄酒分析检验的一般步骤 （2）熟记葡萄酒理化指标的国家标准要求 教学重点及难点 （1）葡萄酒分析检验的分析步骤 （2）葡萄酒国家标准常规理化指标的要求 第二章葡萄酒主要化学成分及其对葡萄酒质量的影响 基本内容： 葡萄酒主要成分及其对葡萄酒质量的影响基本要求： 了解葡萄酒中主要成分及其对葡萄酒质量的影响教学重点及难点： 葡萄酒中主要化学成分的性质变化 第三章葡萄与葡萄酒实验室 基本内容 （1）葡萄酒分析检验实验室的一般要求及必备的仪器设备 （2）实验器皿、用水、卫生等※ （3）葡萄酒分析检验常用化学试剂配制 基本要求 （1）了解葡萄酒分析常用物品的使用方法以及化学分析药品 （2）掌握葡萄酒分析检验常用试剂的配制方法 教学重点及难点 （1）简易葡萄酒厂实验室的建立 （2）分析检测中主要化学试剂配制及标定 第四章实验室常见仪器设备的使用 基本内容 （1）葡萄酒分析检验常用仪器设备的原理及其操作方法 （2）气相色谱及高效液相色谱分析的一般原理及其仪器的使用 （3）其他最新葡萄酒分析检验仪器 基本要求 （1）了解常用仪器设备原理及其使用方法 （2）掌握色谱分析在葡萄酒分析检验中原理及其使用方法 教学重点及难点 （1）葡萄酒分析常用仪器pH计、分光光度计的原理，操作技术 （2）葡萄酒的色谱分析操作技术。 第五章葡萄酒理化指标的分析方法、原理、标准 基本内容： （1）葡萄酒（汁）可溶性固形物、酒度、比重的测定 （2）葡萄酒（汁）中的糖的测定 （3）葡萄酒（汁）中的醇的测定 （4）葡萄酒（汁）中的酸的测定 （5）葡萄酒（汁）中的酚类的测定
葡萄酒主要理化指标的测定 1 实验目的 通过测定葡萄酒中糖（总糖或还原糖）、酸、花色苷、酒精度、SO2(游离SO2和总SO2)的含量以及酒的色度和色调，掌握葡萄酒主要理化指标的测定方法。 2 方法 总糖和还原糖（直接滴定法） 原理 利用费林溶液与还原糖共沸，生成砖红色氧化亚铜溶液的反应，以次甲基蓝为指示液，以样品或经水解后的样品滴定煮沸的费林溶液，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原为无色，以示终点。根据样品消耗量求得总糖或还原糖含量。 注：反滴法——即先向反应体系中加入一定量的葡萄酒，再用标准葡萄糖溶液滴定反应体系至终点，此时所用糖的体积与标定费林试剂时所用糖体积的差值即为酒中的糖。（一般地，滴定时用待测液进行滴定，但由于干葡萄酒中糖含量较低，滴定至终点所需样液量极大，因此采用反滴法） 试剂和材料 盐酸溶液（1:1） 氢氧化钠溶液（200g/L） 葡萄糖标准液（L） 次甲基蓝指示液 费林溶液（I，II） 测总糖用葡萄酒（25mL葡萄酒，酸水解，调pH至中性，蒸馏水定容至500mL）测还原糖用葡萄酒（50mL葡萄酒，蒸馏水定容至500mL）
分析步骤（见黑板） 结果计算 X=*1000 X:葡萄酒中总糖或还原糖的含量，单位g/L F：费林溶液I、II各5mL相当于葡萄糖的克数，单位g C：葡萄糖标准溶液的浓度，单位g/mL V：消耗标准葡萄糖溶液的体积单位mL V1吸取酒样的体积；V2稀释后的体积；V3吸取V2的体积 =(测总糖用葡萄酒) 总酸（指示剂法） 原理 利用酸碱中和原理，以酚酞做指示剂，用氢氧化钠标准溶液滴定样品中的有机酸，根据氢氧化钠溶液的体积计算葡萄酒中的有机酸含量（以酒石酸计） 试剂和材料 氢氧化钠标准滴定溶液L 酚酞指示液 分析步骤（见黑板） 结果计算 X= X:样品中总酸的含量（以酒石酸计），单位g/L c：氢氧化钠标准滴定溶液的浓度，单位mol/L V0：空白试验消耗氢氧化钠体积，单位mL V1:滴定样品时消耗氢氧化钠体积，单位mL V2：吸取酒样的体积，单位mL 75：酒石酸摩尔质量数，单位g/mol
葡萄酒理化指标的测定 1酒精度的测定 密度计法 依据不同的酒精溶液所对应的比重不同的原理，将葡萄酒中的酒精蒸馏出来，通过用比重计测量其比重，计算出酒精溶液的浓度。 1步骤 用100ml容量瓶准确量取20℃酒样倒入1000ml圆底烧瓶中，再用约100ml 水冲洗容量瓶，洗液一齐倒入圆底烧瓶中，置600W电炉上加热蒸馏（采用蛇形冷凝器）开启冷却水，用原容量瓶接收蒸馏液（以冷却水大小调节蒸馏温度，使蒸馏液的温度不超过25℃）。将蒸馏液摇匀倒入100ml量筒，选用合适的精密酒精计，眼睛平视，读数读弯月面下缘，同时记录下温度，查酒精温度、浓度换算表，得到被测酒样的酒精度。所得结果保留至1位小数。 2结果的允许误差 平行实验测定结果绝对值之差不得超过0.1%（v/v）。 3检验时注意事项 3.1被测样品酒精度在15%（v/v）以上时采用此方法。 3.2酒精计的分度值为0.1或0.2％（v/v），所用酒精计必须经国家认可的计量部门检定。 3.3测定含气葡萄酒时需排气后再取样。排气方法：用低真空连续抽气2分钟。 3.4蒸馏液的温度应控制在20℃±5。 3.5为避免蒸馏过程中乙醇蒸汽的逃逸而影响测定结果的准确性，蒸馏前必须检查蒸馏仪器的接口处是否严密。若出现漏气，必须重新测定。 3.6对于挥发酸含量过高（以醋酸计超过1g/l）或二氧化硫含量过高的样品应根据总酸测定的结果，用1N的氢氧化钠对样品进行中和后再进行蒸馏。 2.还原糖的测定 2.1斐林法 2.1.1步骤 2.1.1.1预备试验 取斐林氏A、B液各5ml，置于250ml三角瓶中，加水50ml，加入酒样5ml，加热至沸腾。在沸腾状态下，用0.25%的葡萄糖溶液滴定至淡蓝色，加2滴1%的次甲基兰指示剂，继续滴定至蓝色完全消失，记录所消耗的葡萄糖溶液的毫升数。 2.1.1.2正式试验 取斐林氏A、B液各5ml，置于250ml三角瓶中，加水50ml，加入酒样5ml。然后加入比预备试验少1ml的0.25%的葡萄糖溶液，加热至沸腾并保持2分钟。加2滴次甲基兰指示剂，在沸腾状态下，在1分钟内用葡萄糖溶液滴定至终点，记录消耗的毫升数，读数至小数点后两位。 2.1.2计算 还原糖（以葡萄糖计，g/L）＝［（S－G×V）/5］×F×1000式中：S－斐林氏A、B液各5ml，相当于葡萄糖的克数； G－葡萄糖溶液的准确浓度，g/mL； V－（两次滴定）耗用葡萄糖溶液的平均体积，mL； 5－取样体积，mL；
葡萄酒的质量和哪些因素有关 1原料 葡萄的质量由品种、栽培气候和栽培工艺共同决定。品种是基础，工艺是辅助，而栽培气候则决定了能否种植出优质的葡萄。那么什么样的气候适合种植葡萄呢？我们可以从雨量、温差、光照几个方面讨论。葡萄是抗旱不抗涝的植物，且根系十分发达，可以深入地底汲水。所以年降雨量在300-500mm比较合适。在葡萄成熟的季节，雨量越少越好，因为过的雨量会滋生病虫害。同时降低光照。葡萄是喜光性植物，如果无法获得充足的光照，葡萄将无法进行充足的光合作用，呈味物质、葡萄花色素、芳香物质等都无法良好的积累。葡萄的含糖量是由昼夜温差决定的，当白天温度较高，葡萄进行光合作用积累的糖分多，晚上温度低葡萄进行呼吸作用消耗的糖分少，所以葡萄的含糖量就会高。同时，在弱呼吸作用的条件下，苹果酸被消耗掉。葡萄将会糖高而酸度适中。 2.生产工艺 白葡萄酒的工艺要点在于低温澄清，而红葡萄酒的工艺要点是皮渣的浸提和皮渣分离。由于白葡萄酒是纯汁发酵，在发酵过程中不存在浸渍作用。而干白葡萄酒的质量，主要由葡萄品种的一类香气和源于酒精发酵的二类香气以及酚类物质的含量所决定。所以，在葡萄品种一定的条件下，葡萄汁的取汁速度及其质量、影响二类香气形成的因素和葡萄汁及葡萄酒的氧化现象即为影响干白葡萄酒质量的重要工艺条件。发酵前的葡萄汁澄清与否，主要影响一类香气和酒精发酵的二类香气及酚类物质的含量。 干红葡萄酒的质量主要决定于酚类物质的种类和含量，必须有能达到红葡萄酒颜色要求的色素，还必须有合适的单宁结构，浓郁复杂的香气同样是红葡萄酒必不可少的质量因素。浸渍作用对红葡萄酒的酿造是必需的，合理的浸渍条件和强度既可以获得满意的颜色，又可以获得丰满柔和的口感。在红葡萄酒酿造中，为了将红葡萄酒皮渣中的优质单宁、花色素、酚类化合物以及芳香物质转移到发酵酒中，需加强对皮渣的浸提。适宜的发酵温度，果胶酶，酿酒单宁的应用和合理的带皮发酵时间等，都具有重要意义。传统浸渍工艺中浸渍与发酵是同时进行
DL －苹果酸检测方法介绍 ——科标检测 OH O OH HO O C 4H 6O 5 科标检测拥有全面的光谱、色谱、质谱、热学、生物培养实验室等国内外最先进的现代分析检测仪器设备，可以根据客户的需求，根据相关标准，制定专业的技术解决方法，提供一站式专业检测服务，以下是根据《中国药典》中苹果酸检测方法介绍： 【性状】本品为白色结晶性粉末；无臭，无 味。 本品在水和乙醇中易溶，在丙酮中微溶。 熔点 本品的熔点（中国药典2005年版二部附录VI C ）为 128℃～132℃。 【鉴别】（1） 取本品约0.5g ，加水10ml 使溶解，用氨水调pH 值至中性，加1%对氨基苯磺酸溶液1ml ，在沸水浴中加热5分钟，加20%亚硝酸钠溶液5ml ，置水浴中加热3分钟，加4%氢氧化钠溶液5ml ，溶液应立即呈红色。 （2）本品的红外光吸收图谱应与DL －苹果酸对照品的图谱一致（中国药典2005年版二部附录Ⅳ C ）。 【检查】 比旋度 取本品，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml 中含0.2g 的溶液，依法测定（中国药典2005年版二部附录VI E ），比旋度为－0.10?～＋0.10?。 有关物质 照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录V D ）测定。 色谱条件与系统适用性试验 用磺酸基阳离子交换树脂为填充剂，以0.005mol/L 硫酸溶液为流动相；检测波长为210nm ；柱温为 37℃；取富马酸、马来酸、DL-苹果酸对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中约含富马酸10μg，马来酸4μg，DL －苹果酸1mg 的溶液，作为系统适用性溶液，精密量取20μl，注入液相色谱仪，理论板数按DL －苹果酸峰计算不低于2000，富马酸和马来酸
一、啤酒酒精度的检测方法 1、方法：蒸馏法分离被测组分的方法 2、实验原理： 用小火将啤酒中的酒精蒸馏出来，收集馏出液。用密度瓶测定馏出液的密度，密度以相同温度下，同体积的溶液和纯水之间的质量比来表示。根据密度-酒精度对照表，可查得酒精含量。 3、实验仪器： 电炉，调压变压器，铁架台，500mL园底烧瓶（锥形瓶），冷凝管，100mL 容量瓶，规格为25mL附有温度计并具有磨口帽小支管的密度瓶4、操作步骤： 4.1 样品处理 （1）在已精确称重至0.05g 的500mL三角烧瓶中，称取 l00.0g除气啤酒，再加50mL水， （2）按上冷凝器，冷凝器下端用一已知重量的100mL容量瓶或量筒接收馏出液。若室温较高，为了防止酒精蒸发，可将容量瓶浸于冷水或冰水中。 （3）开始蒸馏时用文火加热，沸腾后可加强火力，蒸馏至馏出液接近100mL时停止加热。 （4）取下容量瓶，于普通天平上加蒸馏水至馏出液重100.0g，混匀。4.2 馏出液密度的测定 (1)空瓶称重：将密度瓶洗干净后，吹干或低温烘干（可用少量酒精或乙醚洗涤），冷却至室温，精确称重至0.1mg。 (2)称水重：将煮沸30分钟并冷却至15~18℃的蒸馏水装满密度瓶(注意瓶内不要有气饱)。装上温度计。立即浸入 20±0.1℃的恒温水浴中，让瓶内温度计在20℃下保持20分钟，取出密度瓶用滤纸吸去溢出支管外的水，立即盖上小帽，室温下平衡温度后，擦干瓶壁上的水，精确称重。 （3）馏出液称重：倒出蒸馏水，用少量馏出液洗涤后，加入冷却至15~19℃的馏出液，按（2）测得馏出液重量。 （4）密度计算：
馏出液密度=密度瓶和馏出液重—空瓶重蒸馏水重—空瓶重 4.3 查密度和酒精对照表，求得酒精含量。我国部颁标准规定11度啤酒的酒精含量不低于3.2%，12度啤酒的酒精含量不低于3.5％。
食品安全国家标准 食品添加剂L-苹果酸1 范围 本标准适用于以酶工程法、发酵法制得的食品添加剂L-苹果酸。 2 化学名称、分子式、结构式和相对分子质量 2.1 化学名称 L-羟基丁二酸 2.2 分子式 C4H6O5 2.3 结构式 2.4 相对分子质量 134.09（按2007年国际相对原子质量） 3 技术要求 3.1 感官要求 感官要求应符合表1的规定。 表1 感官要求 3.2 理化指标 理化指标应符合表2的规定。
表2 理化指标
附录A 检验方法 A.1 警示 试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。操作者应采取适当的安全和健康措施。 A.2 一般规定 本标准所用试剂和水在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T 6682规定的三级水。试验中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T 601、GB/T 602和GB/T 603的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。 A.3 鉴别试验 A.3.1 试剂和材料 A.3.1.1 氨水溶液：2+3。 A.3.1.2 对氨基苯磺酸溶液：10 g/L。 A.3.1.3 亚硝酸钠溶液：200 g/L。 A.3.1.4 氢氧化钠溶液：40 g/L。 A.3.2 鉴别方法 A.3.2.1 苹果酸氨盐呈色试验 称取0.5 g试样，精确至0.01 g，置于50 mL试管中，加入10 mL水溶解。用氨水溶液中和至中性，加入1 mL对氨基苯磺酸溶液，在沸水浴中加热5 min。加入5 mL亚硝酸钠溶液，再置于水浴加热3 min 后，加入5 mL氢氧化钠溶液，试验溶液应立即呈红色。 A.3.2.2 旋光特性试验 试验方法同A.5，试样水溶液应呈左旋特性。 A.4 L-苹果酸(C4H6O5)含量的测定 A.4.1 方法提要 以酚酞为指示剂，用氢氧化钠标准滴定溶液滴定试样水溶液，根据氢氧化钠标准滴定溶液的用量，计算以C4H6O5计的总酸含量为L-苹果酸含量。 A.4.2 试剂和材料 A.4.2.1 无二氧化碳的水。 A.4.2.2 氢氧化钠标准滴定溶液：c(NaOH)＝1.0 mol/L。 A.4.2.3 酚酞指示液：10 g/L。 A.4.3 分析步骤 A.4.3.1 称取2.0 g试样，精确至0.000 2 g，加20 mL无二氧化碳的水溶解，加2 滴酚酞指示液，用氢氧化钠标准溶液滴定至微红色，保持30 s不褪色为终点。 A.4.3.2 在测定的同时，按与测定相同的步骤，对不加试样而使用相同数量的试剂溶液做空白试验。 A.4.4 结果计算