大鼠生长激素（GH）试剂盒使用方法
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T 1μg/L -40μg/L
使用目的：
本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中生长激素（GH）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠生长激素（GH）水平。用纯化的大鼠生长
激素（GH）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入生长激素（GH），再与HRP 标记的生长激素（GH）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终
的黄色。颜色的深浅和样品中的生长激素（GH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠生长激素（GH）浓度。
试剂盒组成
1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶
2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（64μg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶
4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份
5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张
6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个
标本要求
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能
马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
32μg/L 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
16μg/L 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
8μg/L 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
4μg/L 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2μg/L 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的
OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔第一孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计
算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
ADP含量试剂盒使用说明 产品简介： ADP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定ADP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。 ADP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水 产品内容： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周； 试剂四：ADP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL溶液，配好后-20℃可保存1周； 操作步骤： 一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。
3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。 二、ADP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取ADP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950 W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 三、ADP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离ADP，ADP的保留时间在4min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的ADP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测ADP的峰面积。 ADP含量的计算： 将5mg/ml的ADP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml的ADP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算ADP标准曲线。 注：标准品的稀释倍数要根据样品中ADP浓度确定，样品中ADP的峰面积必须落在不同浓度的ADP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
β-葡萄糖苷酶测定试剂盒使用说明 分光光度法50管/24样货号：BC2560 产品简介： β-GC（EC3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。 β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。 试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 产品内容： 提取液：液体50ml×1瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×2瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入10ml双蒸水，充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存。 试剂二：液体25ml×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体80ml×1瓶，4℃保存。 标准品：液体×1支，取1.5ml EP管加入1ml，5mol/ml的对硝基苯酚溶液。 操作步骤： 一、样品的前处理：
1.细菌或培养细胞： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 2.组织： 按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml 提取液），进行冰浴匀浆。15000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。 3、标准样品的准备：取100μL标准液，加入到400μL试剂三中，得到1mol/ml标准液，十倍稀释到100nmol/ml，倍比稀释：50、25、12.5、6.25nmol/ml，稀释液用试剂二。100、 50、25、12.5、6.25nmol/ml做标准液。 二、测定步骤： 1.分光光度计预热30min以上，调节波长至400nm，蒸馏水调零。 2.加样表 试剂名称（μl）对照管测定管标准管试剂一400 试剂二500500 样本100100 迅速混匀，放入37℃准确水浴30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（盖紧，以防止 水分散失），流水冷却后充分混匀（以保证浓度不变） 试剂一400 充分混匀，8000g，4℃，离心5min，取上清液
小鼠c-fos试剂盒使用方法 检测范围：96T 20pg/ml-480pg/ml 使用目的： 本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中c-fos含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠c-fos水平。用纯化的小鼠c-fos抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入c-fos，再与HRP标记的c-fos抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的c-fos呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠c-fos 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7 终止液6ml×1瓶 2 酶标试剂6ml×1瓶8 标准品（960pg/ml）0.5ml×1瓶 3 酶标包被板12孔×8条9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液6ml×1瓶10 说明书1份 5 显色剂A液6ml×1瓶11 封板膜2张 6 显色剂B液6ml×1/瓶12 密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480pg/ml 5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 240pg/ml 4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 120pg/ml 3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 60pg/ml 2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 30pg/ml 1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。
人Myo-DELISA试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中人Myo-D含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人Myo-D水平。用纯化的人Myo-D抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入Myo-D，再与HRP标记的Myo-D抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的Myo-D 呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人Myo-D浓度。 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后， 离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中 如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒 说明： 细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。 产品组成（50／25次反应）： · Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml） · Binding Buffer 40ml／20 ml · Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml） 保存条件: 2-8℃储存，有效期一年。 注意事项： 1.为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项； 2.试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖 时液体洒落； 3.Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用； 4.此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断； 5.本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。 操作注意要点： 1.整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作； 2.反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰 变；
AMP含量试剂盒使用方法及注意事项等说明 产品简介： AMP广泛存在于动物、植物、、微生物和培养细胞中，是描述细胞能量代谢状态的主要参数。测定AMP含量并且计算能荷，能够反映能量代谢状态。AMP在254nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪、低速离心机、溶剂抽滤装置、针头式过滤器（水系，50个，0.22μm）、滤膜（水系和有机系各1个，0.45μm）、C18柱（4.6×150mm）、可调式移液器、样品瓶（50个，2mL）、甲醇（色谱级，300mL）、甲醇（色谱级，300mL）、蒸馏水产品内容： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂二：液体60mL×1瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂1×1瓶，粉剂2×1瓶，4℃保存；临用前用少量蒸馏水将粉剂1和粉剂2溶解后倒入1000mL容量瓶中，用蒸馏水定容至1000mL，形成流动相缓冲液基质（注：试剂瓶中的粉剂要冲洗干净）,4℃可保存1周； 试剂四：AMP标准品5mg×1支，-20℃保存。临用前加入1mL双蒸水，配成5mg/mL 溶液，配好后-20℃可保存1周； 操作步骤： 一、实验前的准备工作： 1、将双蒸水1000mL、流动相缓冲液基质1000mL和甲醇300mL用0.45μm的滤膜抽滤，以除去溶剂中的杂质，防止堵塞色谱柱。（注：双蒸水和缓冲液基质用水系滤膜抽滤，甲醇用有机系滤膜抽滤）。 2、流动相的配制：将抽滤完毕的流动相缓冲液基质1000mL与甲醇配比为99.9：0.1（v/v），即取999mL缓冲液基质与1mL甲醇混合。
3、将抽滤完毕的甲醇和双蒸水配比成100%的甲醇，10%的甲醇，双蒸水各250mL。将2和3中的溶剂超声30分钟，以脱去溶剂中的气泡，防止堵塞色谱柱。 二、AMP的提取： 1、组织的处理：准确称取组织重量0.1g，加入1mL试剂一，提取AMP，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 2、细胞处理：收集约30mL细胞，离心菌体经干燥后，加入1mL试剂一，超声破壁细胞(950W，30%，15min，工作1s间隔2s)，4000g常温离心15min，取上清液，加入等体积的试剂二，混匀，4000g常温离心15min，取上清，0.22μm水系微孔滤膜过滤后冰上放置，待测。 三、AMP含量测定操作步骤： 1.开启电脑、检测器和泵，安装上色谱柱，打开empower软件，在方法组中设置进样量20μL，流速1mL/min，保留时间10min，检测波长254nm,设置完毕保存方法组。 2.用100%的甲醇、10%的甲醇、双蒸水按甲醇浓度从大到小的顺序洗色谱柱30min。 3.用流动相洗柱子，待基线稳定后开始加样。 4.加入标准品20μL，在10min内可分离AMP，AMP的保留时间在7min左右（柱子不同，保留时间有差异），计算不同浓度的AMP标准品的峰面积。 5.加入样品20μL，在相应保留时间处检测AMP的峰面积。 AMP含量的计算： 将5mg/ml的AMP标准品用双蒸水分别稀释成100μg/ml、80μg/ml、60μg/ml、40μg/ml和20μg/ml 的AMP标准品溶液，以标准品浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标分别计算AMP 标准曲线。 注：标准品的稀释倍数要根据样品中AMP浓度确定，样品中AMP的峰面积必须落在不同浓度的AMP标准品的峰面积之内，该标准品稀释倍数只是一个参考。
Wistar大鼠EAE模型的制备 作者：刘颖刘华辛晋敏马太花梁丽云马存根摘要目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达，探讨山西医科大学动物室的Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法:采用免疫诱导方法制备EAE模型并HE染色，同时用原位杂交法检测EAE 大鼠MCP-1的表达。结果:免疫后12d～17d，发病鼠出现EAE临床症状，HE染色，光镜下可见血管周炎性浸润，MCP-1的表达明显增加。结论:山西医科大学Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。 关键词完全抗原;Wistar大鼠;EAE;MCP-1 多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）是中枢神经系统（CentralNervous System，CNS）的炎性脱髓鞘疾病，多发于20岁～40岁女性，大多数患者的病程为复发和缓解交替，在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。MS病因和发病机制复杂，一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎（ExperimentalAu-toimmune Encephalomyelitis，EAE）的病理变化及发病机制与急性MS极其相似，因此，成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料Wistar大鼠:购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒:购于武汉博士德生物制品公司。
1.2 方法 1.2.1 完全抗原的制备:取液体石蜡40mL，羊毛脂20g混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂（In-complete Freund'sAdjuvant，IFA），分装入10mL小瓶，高压灭菌后4℃冰箱保存。健康350g～450g左右雌性豚鼠用3%戊巴比妥45mg/kg腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下，剪开胸腔、剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注直至肝脏变白;迅速取其脑脊髓，小心剥离脑脊膜后称重，加入等量生理盐水，制成50%（W/V）匀浆。同时融化IFA，1mL IFA加入约10mg的M.bovisBCG即制得CFA。将CFA与GPSCH等体积混合，用注射器反复抽推，制成油包水乳液，制成完全抗原，放置冰上备用。 1.2.2 模型制备:将健康、雌性Wistar大鼠30只，随机分成正常对照组、佐剂组和EAE组，三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原0.4mL/只，百日咳原液0.05mL/只（含5.0×10 9 个菌体）。记免疫当日为零天，每天称重，采用双盲法两人进行临床症状评分，取平均值，临床评分2分为发病动物，临床评分采用通用的五分评分法，即:0分无症状，1分动物尾部肌张力降低，2分动物尾部麻痹+后肢肌张力低，3分尾麻痹+后肢肌张力重度低，4分尾麻痹+四肢麻痹，5分频死状态。发病动物只数/实验动物只数为发病率。免疫后12d～17d，3%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射，至四肢瘫软，无菌状态下，剪开胸腔剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注至肝脏变白;4%多聚甲醛灌流至尾部僵直，解剖迅速取其大脑视交叉前后2mm组织、小脑和脑桥部、脊髓颈腰膨大处，再用4%多聚甲醛固定半小时，做常规石蜡包埋、切
临床骨科杂志 一、发表说明 本团队专注于论文写作与发表服务，擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作、发表300起，具体价格信息联系： 本团队并非任何杂志编辑中心，本中心是专业代发论文的机构，与各个杂志社具有长期良好的合作关系，也就是我们通过我们的特殊渠道将论文送给杂志社我们特定的内部人处理论文，保证较高的上稿率，以解决投稿人投稿后焦急的等待与石沉大海的结局。通过我们可以较为容易达到发表的目地，当然，论文的质量也是重要的基础。 二、期刊简介如下 本杂志是国内外公开发行的骨科专业学术性期刊，国家科技部中国科技论文统计源期刊。面向临床骨科医生、相关学科医生和研究人员，以临床研究为基石，以新技术、新方法、新思想为引导，普及与提高相结合。本刊注重科学性、创新性、实用性，文章内容翔实、图文并茂、格式规范，可读性强。 临床论著 一期病灶清除植骨融合内固定治疗跳跃性胸腰椎结核实验与临床 兔脂肪干细胞直接修复陈旧性全层兔膝关节软骨缺损综述 肩袖损伤修复技术的研究现状方法与应用 锁定钢板固定治疗老年股骨转子间骨折
临床论著 后路寰枢椎椎弓根钉固定融合治疗寰枢椎不稳或脱位方法与应用 重建钢板结合自体植骨治疗粉碎性锁骨骨折临床论著 保留颈后方韧带复合体对颈椎后路单开门椎板成形术椎板开门角度的影响方法与应用 股骨干骨折内固定术后并发急性感染的外科治疗临床论著 不同方法治疗桡骨远端C型骨折的疗效比较方法与应用 腓骨远端爪型钢板治疗外踝骨折的疗效观察临床论著 锁定加压钢板结合植骨术治疗胫骨平台骨折方法与应用 关节镜下带线锚钉紧缩内侧支持带治疗急性髌骨脱位临床论著 股骨近端外侧锁定钢板治疗Russell-TaylorⅡB型股骨转子下骨折方法与应用 腰椎滑脱症的手术治疗体会临床论著 超关节外固定架结合内固定治疗PilonⅢ型骨折方法与应用 带线锚钉修复跟腱断裂实验与临床 组织工程化凝胶诱导股骨头坏死血管化的实验研究方法与应用 空心加压螺钉内固定治疗锁骨骨折综述 脊柱内固定术后切口深部感染诊断与治疗进展方法与应用 微创内固定系统治疗股骨髁间髁上粉碎性骨折投稿须知 投稿须知 临床论著 一期后路病灶清除植骨融合钉棒固定治疗L5～S1结核方法与应用 DVR解剖型接骨板结合注射型人工骨治疗桡骨远端不稳定性骨折临床论著微创经肌间隙入路结合伤椎固定治疗胸腰椎爆裂骨折方法与应用 带线铆钉结合克氏针多轴固定治疗肩锁关节脱位临床论著
de Groot大鼠脑立体定向图谱 参考文献： de Groot J. The rat hypothlamus in stereotaxic coordinates.J Comp Neurol 1959, 113:389-400 使用说明 （一）图谱使用范围 本图谱使用范围主要是下丘脑及其周围结构，也涉及到视前区和中脑上部。选用体重 200-300g英格兰大白鼠的脑，制成冰冻连续切片，片厚50um。在冠状平面，自前而后每隔0.4mm 取一切片，共14张。在矢状平面，中线左侧0.2和1.1mm处各取一切片。全部共16幅平面图。 （二）规定以下各种坐标平面对大鼠下丘脑各结构进行定位 1.水平零平面（H0） 令动物上门齿后缘根部高于两侧颅骨外耳孔中心连线(耳间线)5mm。此时通过上门齿后缘根部所作的水平面（即与定向器框架水平面平行的面)为H0，低于H0者为负值，高于H0者为正值。这样通过耳间线的水平面就比H0平面低5mm，为H-5。按此规定，H0平面正好通过脑的前连合与后连合。 2.冠状零平面（A0） 通过耳间线并与H0平面相垂直的冠状平面为A0。在A0以前的各冠状平面均以正数表示如 A2.8即表示A0以前2.8mm的冠状平面。本图谱所选平面自A2.8到A8.0止。
3.矢状零平面（L0） 通过前囟并与H0 A0两平面均垂直相交的平面称L0。前囟是两侧颅骨、顶骨在正中线的汇合点。前囟位置一般在A0前5.9mm（A5.7-A6.1），H0以上6.3mm(H+6.1-H+6.6)左右。这样，L0就恰好通过矢状缝，而把脑分为左、右对称的两半。本图谱所用L0.2、L1.1两平面分别表示L0外侧0.2mm及1.1mm处的矢状平面。 根据上述各坐标平面，可由图谱查出下丘脑某一结构的坐标读数，并定出其具体空间位置。（三）图谱的表示方法 图谱中核团和脑区的轮廓用虚线表示，纤维束的轮廓用实线表示。各结构的名称用西文缩写。
牛气肿疽(symptoinatic anthrax)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)水平。用纯化的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入牛气肿疽(symptoinatic anthrax)，再与HRP标记的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的牛气肿疽(symptoinatic anthrax)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛气肿疽(symptoinatic anthrax)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：1800pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分
INSTRUCTIONS Warranty: Pierce products are warranted to meet stated product specifications and to conform to label descriptions when used and stored properly. Unless otherwise stated, this warranty is limited to one year from date of sale for products used, handled and stored according to Pierce instructions. Pierce’s sole liability for the product is limited to Number Description 23225BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 500 test tube or 5,000 microplate assays 23227 BCA? Protein Assay Kit , sufficient reagents for 250 test tube or 2,500 microplate assays Kit Contents: BCA? Reagent A , 1,000 ml (in Product No. 23225) or 500 ml (in Product No. 23227), containing sodium carbonate, sodium bicarbonate, bicinchoninic acid and sodium tartrate in 0.1 M sodium hydroxide BCA? Reagent B , 25 ml, containing 4% cupric sulfate Albumin Standard Ampules, 2 mg/ml , 10 x 1 ml ampules, containing bovine serum albumin (BSA)at 2.0 mg/ml in 0.9% saline and 0.05% sodium azide Storage: Upon receipt store at room temperature. Product shipped at ambient temperature. Note: If either Reagent A or Reagent B precipitates upon shipping in cold weather or during long-term storage, dissolve precipitates by gently warming and stirring solution. Discard any kit reagent that shows discoloration or evidence of microbial contamination. Table of Contents Introduction..................................................................................................................................................................................1Preparation of Standards and Working Reagent (required for both assay procedures)................................................................2Test Tube Procedure (Sample to WR ratio = 1:20).....................................................................................................................3Microplate Procedure (Sample to WR ratio = 1:8)......................................................................................................................3Troubleshooting...........................................................................................................................................................................4Related Pierce Products...............................................................................................................................................................5Additional Information................................................................................................................................................................5Cited References..........................................................................................................................................................................6Product References. (6) Introduction The BCA? Protein Assay is a detergent-compatible formulation based on bicinchoninic acid (BCA) for the colorimetric detection and quantitation of total protein. This method combines the well-known reduction of Cu +2 to Cu +1 by protein in an alkaline medium (the biuret reaction) with the highly sensitive and selective colorimetric detection of the cuprous cation (Cu +1) using a unique reagent containing bicinchoninic acid.1 The purple-colored reaction product of this assay is formed by the chelation of two molecules of BCA with one cuprous ion. This water-soluble complex exhibits a strong absorbance at 562 nm that is nearly linear with increasing protein concentrations over a broad working range (20-2,000 μg/ml). The BCA?method is not a true end-point method; that is, the final color continues to develop. However, following incubation, the rate of continued color development is sufficiently slow to allow large numbers of samples to be assayed together. The macromolecular structure of protein, the number of peptide bonds and the presence of four particular amino acids (cysteine, cystine, tryptophan and tyrosine) are reported to be responsible for color formation with BCA.2 Studies with di-,tri- and tetrapeptides suggest that the extent of color formation caused by more than the mere sum of individual color-producing functional groups.2 Accordingly, protein concentrations generally are determined and reported with reference to standards of a common protein such as bovine serum albumin (BSA). A series of dilutions of known concentration are 3747 N. Meridian Road P.O. Box 117 Rockford, IL 61105 BCA? Protein Assay Kit
上海中学生命科学创新实验室建设的实践与思考 一、创新实验室建设理念与目标： 2008年，上海中学获上海市教委批准率先开展“上海中学创新素养培育实验项目”，在“面”上注重整体推进学生的创新素养培育，在“点”上设置科技实验班（以培养学生的科技创新素养为主），力图以“聚焦志趣”为核心，探索出一条创新人才早期培育新路。为匹配“创新素养培育实验项目”，促进学生的志趣聚焦与创新潜能的开发，上海中学建设了包括“生命科学创新实验室”在内的10个创新实验室。 上海中学生命科学创新实验室遵循上海中学创新人才早期培育以“聚焦志趣”为核心的理念，遵循“让每一个学生的潜能得到充分开发”的教学观点，遵循“高立意、高思辨、高互动”的“三高”教学模式，围绕“以德育为核心，创新精神和实践能力为重点”的素质教育要求，着眼于使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，使学生掌握相关的学科思想，具备学科基本素养，锻炼逻辑性思维、批判性思维和创造性思维。 二、创新实验室设备配置和课程设置 1、现代生物化学和分子生物学实验室 现代生物化学和分子生物学实验室 配备了Thermo生物安全柜、苏净超净工 作台、ABI PCR仪、Bio-rad DNA电泳 系统和蛋白质电泳/转移系统、超声细胞 破碎仪、DNA杂交仪、BioTek酶标仪、 Eppendorf 紫外分光光度计等专业设备， 可承担多门基础型课程和拓展型课程的 教学和创新课题的研究工作。 上海中学基础型和拓展型课程注意 发展学生的问题意识、发展性思维和探 索精神，采取“教授与自学相结合、知 识性学习与实践性学习相结合、基础性
学习与研究性学习相结合、母语教学与双语教学相结合”的策略，让学生从被动接受式学习逐渐转变为主动探索式学习。 生命科学学科自20世纪50年代以来发展极其迅速，中学生命科学拓展型课程有必要从学科的前沿性和时代性出发，展示现代生命科学和生物技术发展的成果，使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，激发学生科技创新的热情。基于这一思考，上海中学除了实施上海课程标准外，增设了“走进基因工程”、“话说基因”、“转基因植物栽培”、“现代生物学基础实验”、“人类基因组与生物信息学”等理论与实验相结合的拓展型课程，给予学生必要的知识铺垫，使学生有可能从中发现问题从而进一步探究（表1）。 表1、现代生物化学和分子生物学分层实验课程的设置（部分） 基础实验课程拓展型课程探究性课题 1.目的基因的克隆（PCR） 2.质粒的抽提、纯化、鉴定和 转化 3.DNA指纹图谱（凝胶电泳） 4.DNA杂交 5.RNA的抽提和cDNA的合成 6.血红蛋白凝胶柱层析 7.蔬果中维生素C含量的测定 8.紫外线抑菌作用的研究 9. ABO血型的鉴定 10. 人外周血淋巴细胞培养及染色体观察 1、转基因大豆的鉴别 2、蚕豆微核实验在环境 监测中的应用 3、固氮菌的作用 4、水生生物对水中N、P 的吸附 5、中药对大型水蚤心率 的影响 6、蔬果抑菌作用的探究 7、精油抑菌作用的探究 8、不同奶品中蛋白质含 量的测定 9、影响酶活性的因素 1、大豆耐盐基因的预测与筛选 2、探讨从原球茎直接提取铁皮石斛原药成 分的可能性 3、铁钼离子浓度对光合细菌产氢效率的影 响和产氢废水的筛选 4、栀子果实根茎叶指纹图谱初探及提取工 艺研究 5、黄柏中高纯度小檗碱提取方法的研究 6、再生纸浆的酶法辅助漂白改性 7、水解乳蛋白替代培养基配方研制 8、免疫金试纸法快速检测“瘦肉精”研究 9、转基因黄芪毛状根培养基的替换 10、PCR鉴定鸟类性别 如表1所示，学生在学校开设的基础型实验课程和拓展型课程（含理论课程与实验课程）的基础上，根据其兴趣提出了创新课题，并在课题立项和实施过程中了解科学研究的一般思路，掌握科学思想方法，磨练意志，为其日后的发展打下坚实基础。 原野、刘文嘉辉、史天泽和陈文朴同学在学习了“质壁分离”相关内容后提出：植物细胞在受盐胁迫时在细胞水平上表现出了原生质层和细胞壁分离的现象，那么在分子水平上植物会表现出怎样的响应特征呢？如果四位同学没有学习和实践过“目的基因的克隆和鉴定”等相关知识，估计他们也问不出这个问题，当然也就不存在“大豆耐盐基因的预测与筛选”课题了。（本项目获得第二十五届Intel上海市青少年科技创新大赛一等奖、生命科学杰出项目专项奖、全国青少年科技创新大赛三等奖。） 创新思维不可能一蹴而就，只能慢慢培养。中学时代的每个学生都有着良好的创新潜能，但对创新潜能的激发需要良好的环境和氛围。因此，培养学生的创
人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)水平。用纯化的人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)，再与HRP 标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人上皮中性粒细胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)含量。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存 标准品：18ng/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/