课程名称： 生物化学实验 指导老师： 史影 成绩： 实验名称： 酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度 同组学生姓名： 陈莞尔，潘盛警
Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性 一、实验目的
1.了解酶的专一性。
2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。
3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。 二、基本原理
酶是具有高度专一性的有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶促反应要比无机催化反应快数十倍。
酶催化的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对一种或一类底物其催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，可分成下列几种：
1.相对专一性。一种酶能催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。
2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。
3.立体异构专一性：有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。
本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。用Benedict 试剂检测反应产物。
Benedict 试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化铜沉淀。
Na 2CO 3+ 2H 2O 2NaOH + H 2CO 3 CuSO 4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na 2SO 4
专业：____生物工程 姓名：_____陈传鑫 学号：___3090104963 日期：____2011.3.22_ 地点：_生物实验楼306
实验报告
还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2Cu2O + 2H2O + 糖的氧化产物
（黄色或砖红色）
淀粉和蔗糖无半缩醛基，无还原性，与Benedict试剂无显色反应。淀粉被淀粉酶水解后产生葡萄糖，蔗糖被蔗糖酶水解后产生果糖和葡萄糖，产物都是还原糖，因此能被Benedict 试剂氧化生成砖红色的Cu2O沉淀。
三、实验材料与试剂
1、实验材料
⑴蔗糖酶(样品Ⅳ）；⑵新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；
2、实验试剂
⑴蔗糖酶液
蔗糖酶液(样品Ⅳ）加蒸馏水适当稀释，备用；
⑵唾液淀粉酶液（学生自制）
取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高；
⑶5%蔗糖（A.R.）溶液；
⑷0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；
⑸Benedict试剂；
四、实验器材与仪器
1.漏斗，
2.脱脂棉花；
3.恒温水浴（37℃，100℃）；
4.量筒；
5.试管；
6.烧杯；
7.吸量管。
五、实验内容
酶的专一性实验，按下表操作。
检查试剂淀粉酶的专一性蔗糖酶的专一性编号①②③④⑤⑥⑦⑧⑨
0.5%淀粉
3 3 3
（0.3%NaCl）
溶液(ml)
5%蔗糖溶液
3 3 3
(ml)
蒸馏水
3 3 3
(ml)
唾液淀粉酶液
1 1 1
(ml)
蔗糖酶溶液
1 1 1
(ml)
摇匀，置37℃水浴保温10min
Benedict试剂
2 2 2 2 2 2 2 2 2
(ml)
摇匀，置沸水浴煮2～3min
记录观察结果蓝色蓝色蓝色砖红色蓝色蓝色蓝色黄绿色蓝色
六、结果分析和讨论
结果：⑴①、②、③号试管均呈硫酸铜的蓝色，说明这3支试管内无还原糖，淀粉和蔗糖均未水解；
⑵④号试管呈砖红色说明试管内淀粉被水解，⑤号试管呈蓝色说明试管内蔗糖未水解，⑥号试管呈蓝色说明无还原糖，从这三支试管看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性；
⑶⑧号试管呈黄绿色，说明试管中部分蔗糖被水解，但未水解完全，⑦号试管呈蓝色说明淀粉未水解，⑨号试管呈蓝色说明无还原糖，从这三支试管看出蔗糖酶只对蔗糖的水解有催化作用，对淀粉无催化作用，具有对蔗糖的底物专一性。
七、思考题
1．观察酶专一性实验为什么要设计这3组实验？每组各有何意义？蒸馏水有何用？
答：第一组作为整个实验的空白对照组，检测Benedict试剂对实验结果的颜色有何影响。
第二组作为检测淀粉酶的专一性实验组，第三组作为检测蔗糖酶的专一性的实验组。蒸馏水作为每一个组中的空白对照，与组内其余两组进行对照。
2．将酶液煮沸10min后，重做二、三的操作，观察有何结果？
答：二、三组的实验结果将和一组相同，即每组中3支试管都呈蓝色，因为酶在煮沸过程中已经变性，失去催化活性，故不能催化各自对应底物的水解反应。
3．在此实验中，为什么要用0.5%淀粉(0.3%NaCl)溶液？0.3%NaCl的作用是什么？
答：0.3%NaCl中的Cl-是作为激活剂激活唾液淀粉酶的活性，使实验结果不至于因为唾液淀粉酶的活性不足而导致不同。
Ⅱ. 影响酶活性的因素——激活剂和抑制剂
一、实验目的和要求
1. 了解激活剂和抑制剂对酶促反应速度的影响。
2. 学习检定激活剂和抑制剂影响酶促反应速度的原理和方法。 二、实验基本原理
在酶促反应过程中，酶的活性常收到某些物质的影响，有些物质能使酶的活性增加，称为激活剂；某些物质它们并不引起酶蛋白变性，但能使酶分子上的某些必需基团（主要是指酶活性中心上的一些基团）发生变化，因而引起酶活力下降，甚至丧失，致使酶反应速度降低，称为酶的抑制剂。 酶的激活剂种类：
1、一些简单的无机离子，如Mg2+、Cl-等；
2、一些中等大小的有机分子，如抗坏血酸等也是激活剂，它们对某些含巯基的酶具有激活作用；
3、有些酶的催化作用易受某些抑制剂的影响，因而能除去抑制剂的物质也可称为激活剂，如EDTA 能除去重金属，因而能解除重金属对酶的抑制作用。
4、具有蛋白质性质的大分子物质，这些激活剂是指可对某些无活性的酶原起作用的酶。 酶的抑制剂有许多种：如重金属离子（Ag+、Hg2+、Pb2＋、Cu2＋等）、CO 、氯化物、H2S 、砷化物、氟化物、生物碱、有机磷农药等都是抑制剂。
少量的激活剂或抑制剂就能影响酶的活性，而且常具有特异性。值得注意的是激活剂和抑制剂不是绝对的，各种激活剂对酶的作用是不同的。
本实验利用淀粉被水解的不同阶段产物与碘有不同颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中激活或抑制现象。淀粉经酶促水解为葡萄糖的不同阶段的产物与碘作用的颜色反应如下：
淀粉 紫色糊精 红色糊精
无色糊精 麦芽糖 葡萄糖 显蓝色 显紫色 显红色 不显色 不显色 不显色 （ 碘色） （碘色） （碘色）
I 2
仍为多糖 （无还原性） （有还原性）
本实验中，Cl- 为唾液淀粉酶的激活剂；Cu2+为唾液淀粉酶的抑制剂。利用淀粉酶别水解不同阶段产物与碘有不同的呈色反应，观察唾液淀粉酶的酶促反应中的激活和抑制现象。水解程度通过水解混合物遇碘溶液所呈现的颜色变化判断。
三、实验材料与试剂
1、实验材料
新鲜唾液
2、实验试剂
⑴唾液淀粉酶（学生自制）
取唾液1ml至25ml量筒中，用蒸馏水稀释至25ml，用棉花过滤备用。唾液稀释倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高。
⑵0.1% 淀粉溶液
⑶1.0% 氯化钠溶液
⑷1.0% 硫酸铜溶液
⑸1.0% 硫酸钠溶液
⑹碘化钾-碘液
四、实验器材和仪器
1.试管及试管架
2.量筒
3.漏斗
4.脱脂棉花
5.点滴板
6.吸量管
7.恒温水浴（37℃）
五、实验步骤
试管编号
123 4
试剂处理
0.1%淀粉溶液(ml) 3333
1% 硫酸铜溶液(ml) 1
1% 氯化钠溶液(ml) 1
1% 硫酸钠溶液(ml) 1
蒸馏水(ml) 1
唾液淀粉酶(ml) 1 1 1 1
混匀，37℃恒温水浴，保温10min
碘化钾-碘液（滴） 1 1 1 1
记录观察结果深蓝偏黑红棕色深蓝色深蓝色
注意：⑴找出准确的保温时间，是本实验是实验能否成功的关键步骤之一，唾液淀粉酶液浓度可根据个人情况而定，通过37℃水浴溶保温计时，反应时间最好在8～15min以内，只有确定准确的保温时间才能进行实验。（2）加入酶液后，务必充分摇匀，保证酶与全部淀粉液接触的反应才能得到理想的颜色梯度变化结果。（3）碘化钾–碘液不要过早地加到点滴板上，以免碘液挥发，影响显色效果。
六、结果讨论与分析
结果：①反应时间在17min中时能明显区分各管颜色不同。
②试管1中颜色最深，说明CuSO4可以抑制淀粉酶的活性；试管2中颜色最浅，基本呈碘色，故淀粉酶活性最高，说明NaCl可以激活淀粉酶的活性；试管3、4中颜色基本一致，且深浅居于试管1、2之间，淀粉酶活性一般，说明Na+、SO42-对淀粉酶活性都没有影响。故总体上看，可以得出Cl-是唾液淀粉酶的激活剂，Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂。
③同时，因为各管的结果颜色都偏深，所以使用的唾液淀粉酶样品活性不高，这与区分各管颜色差别需要反应时间较长（17min）相符合。
七、思考题
1. 激活剂可分哪几类？本实验中NaCl、硫酸铜是属于哪种类型？
答：激活剂可分为：简单无机离子、中等大小有机分子、能出去抑制剂的物质、具有蛋白质性质的大分子物质等。NaCl属于简单无机离子；CuSO4属于重金属抑制剂。
2. 本实验中，1，2，3，4管各有何用意？为什么要设计第3管和第4管？
答：1管可观察抑制剂对反应影响的现象，2管可观察激活剂对反应影响的现象，第3管可以将1管中的Na+和2管中的SO42-对反应的影响去除，4管作为空白对照。
3. 抑制剂与变性剂有何不同？试举例说明。
答：抑制剂只改变酶的催化活性，并不使蛋白质变性，其影响是可逆的；变性剂破坏了蛋白质的高级结构，使蛋白质变性，并且多数变性剂的影响是不可逆的。如：Cu2+是唾液淀粉酶的抑制剂，但如果将Cu2+去除淀粉酶的活性又可以变为正常水平。
Ⅲ. 影响酶活性的因素——温度，最适温度测定
一、实验目的和要求
1. 了解温度对酶活力的影响；
2. 学习测定最适温度的原理和方法；
二、实验基本原理
酶的催化反应受温度影响很大，每一种酶所催化的反应，在一定条件下，仅在某一温度范围内表现出最大的活力，即反应速度最大时的温度，这个温度称为该酶促反应的最适温度，高于或低于最适温度时，反应速度逐渐下降。因此，酶促反应与温度的关系，用酶活力对温度作图，通常具有钟罩形曲线特征。
温度与酶活力的关系测定是选择一定的条件，把底物浓度、酶浓度、反应时间、pH等固定在最适状态下，然后在一系列不同温度条件下，进行反应初速度测定，以酶反应初速度对温度作图，可以得一个钟罩形的曲线，即为温度—酶活性曲线，在某温度有一酶活力最大值，这个温度即为最适温度。
实验①利用唾液淀粉酶为试验对象，在0℃～65℃之间选择不同的温度，进行酶活力测定。根据淀粉被唾液淀粉酶水解的程度的不同，遇碘呈现颜色的变化来判断酶活力的大小及最适温度。
实验②采用蔗糖酶为试验对象，在室温至75℃之间选择不同温度进行酶活力测定。蔗糖酶的活力常以其反应产物还原糖（葡萄糖）的生成量来表示。测定还原糖的方法很多，本实验选择3,5–二硝基水扬酸法测定还原糖量。在碱性条件下，3,5–二硝水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成红色氨基化合物，并在一定浓度范围内，还原糖的量与反应溶液所呈棕红色物质颜色的深浅程度成正比。因此，可以用分光光度法测定酶促反应后生成的还原糖量，从而测定蔗糖水解的速度和酶活力。
三、实验材料与试剂
1、实验材料
⑴蔗糖酶液(样品Ⅳ）加蒸馏水适当稀释，备用；⑵新鲜唾液。
2、实验试剂
⑴0.2mol/L醋酸缓冲液（pH4.6）⑵5%蔗糖（A.R.）溶液（W/V）
⑶3,5—二硝基水扬酸（简称DNS）试剂⑷0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）
⑸IK-I2溶液
四、实验器材与仪器
1.试管及试管架， 2．恒温水浴， 3．吸量管, 4．滴管, 5．点滴板，6．分光光度计， 7．制冰机。
五、实验步骤
⑴温度对唾液淀粉酶活力的影响
按下表操作
管 号 试 剂
1 2 3 4 5 0.5%淀粉液（0.3%NaCl ）(ml) 2 2 2 2 2 温度 （℃） 冰浴约0℃
室温
37 50
65
各保温5min
唾液淀粉酶 （ml ）
1
1
1
1
1
将试管内溶液混匀后，置各相应温度，保温10min
IK-I2液 （滴）
1 1 1 1 1 记录颜色变化
蓝色
蓝色
红棕色
橙红色
蓝色
温度-酶活力曲线图 ⑵温度对蔗糖酶活力的影响
编号 条件
0 1 2 3 4 5 反应温度（℃）
室 温 室 温 37 50 65 75 0.2mol/L 醋酸缓冲液（pH4.6）(ml)
1
1
1
1
1
1
颜
色
深浅
温度（℃） 0 70
37 深 浅 50
5%蔗糖溶液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
预热3min
稀释酶液(样品Ⅳ）(ml) (作相应的预温）
H2O
0.5
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 保温反应10 min
3,5–二硝基水杨酸（ml） 1 1 1 1 1 1
混匀后，100℃加热5min
蒸馏水（ml） 5 5 5 5 5 5
A5200 0.341 1.165 1.320 0.668 0.075
六、结果分析讨论
⑴温度对唾液淀粉酶活力的影响
从温度对唾液淀粉酶的活力曲线可以看出，当温度为50℃时颜色最浅，即淀粉水解最完全，唾液淀粉酶的活性最高；在50℃两边唾液淀粉酶的活性都随着温度的改变而降低，故本组实验的唾液淀粉酶的最适温度在50℃左右。
唾液淀粉酶的活性并不是在正常的人体体温37℃时最适，根据激活剂和抑制剂探索中的结果颜色普遍偏深，主要原因认为是本组的唾液淀粉酶样品活性不高，故样品的最适温度较正常情况有所提高，不是37℃而是本次实验测得的50℃。
⑵温度对蔗糖酶活力的影响
由试剂在520nm波长的吸光度对温度作图得到如上图的A520-T曲线。由图线看出蔗糖酶在50℃时活性最高，故蔗糖酶的最适温度为50℃。同时由曲线看出温度高于70℃后酶活性显著下降，这是因为此时酶已经因为高温发生了变性，失去了大部分的催化活性，故催化能力大大减弱。
七、思考题
1．什么是酶的最适温度？有何用途？
答：酶的最适温度是酶促反应在速率最大时的温度。在最适温度下，酶的催化活性最高，此时酶促反应的效率最高，可由此最快的获得产物。
2．酶反应的最适温度是酶特性的物理常数吗？它与哪些因素有关？
答：不是特征常数。它和pH、抑制剂和激活剂存在与否、底物浓度等因素都有关。
3．通过以上几个酶学实验，总结酶有哪些特性？影响酶活性的因素有哪些？在实际应用中应注意哪些问题？
答：酶有底物专一性、高效性、有最适温度等特性。影响酶活性的因素有pH、温度、底物浓度、激活剂和抑制剂。在实际应用中应该注意多种不同的因素对酶活性的总体影响，而不能只看一种或某几种因素的单独影响。
孝感学院生命科学技术学院实验报告 专业：学号：姓名：分数：实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的与要求 掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。 二、实验原理 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。 还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540 nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。 三、实验材料、主要仪器和试剂 1．实验材料小麦面粉(1000 g) 2．主要仪器 （1）具塞玻璃刻度试管：20 mL×11 （2）滤纸（3）烧杯：100 mL×2 （4）三角瓶：100 mL×1 （5）容量瓶：100 mL×3 （6）刻度吸管：1mL×1；2 mL×2； 10 mL×1 （7）恒温水浴锅（8）煤气炉（9）漏斗（10）天平（11）分光光度计 3．试剂 （1）1mg/mL葡萄糖标准液 准确称取80 ℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100 mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100 mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。 （2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂 3,5－二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5 g DNS溶于少量热蒸馏水中，溶解后移入1000 mL 容量瓶中，加入2 mol/L氢氧化钠溶液325 mL，再加入45 g丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL。 （3）碘-碘化钾溶液：称取5 g碘和10 g碘化钾，溶于100 mL蒸馏水中。 （4）酚酞指示剂：称取0.1 g酚酞，溶于250 mL 70%乙醇中。 （5）6 M HCl和6 M NaOH各100 mL。（分别取59.19 mL 37 %浓盐酸和24克NaOH定容至100mL） 四、操作步骤 1. 制作葡萄糖标准曲线 批阅教师：年月日
实验室制取氧气及其性质实验报告 实验者： 实验日期： 一、实验目的： 1、掌握实验室制取氧气的方法 2、掌握氧气的性质 二、实验器材：导气管，试管，集气瓶，酒精灯，水槽，燃烧匙 三、实验药品：氯酸钾，二氧化锰，木炭，硫粉，红磷，铁丝 四、实验原理：2KClO 3 2KCl+3O 2 五、实验步骤： 安装如图组装仪器。 查：检查装置气密性 ，双手握住试管，观察玻璃管内水柱变化。 装：将药品装入试管，在试管口放一小团棉花，装好带导管的软木塞。 定：将试管固定在铁架台，试管夹应夹在离试管口1/3处，试管口应向下。 点：点燃酒精灯，先来回移动，使试管均匀受热，然后将火焰集中在药品处加热。 收：采用排水法收集氧气，理由是氧气不溶于水。收集四瓶氧气。 离：收集满氧气后，先将导管移开水槽。 熄：再用灯帽熄灭酒精灯。 六、氧气性质实验操作： 1、观察氧气的颜色和气味：无色无味，能使带火星的木条复燃。 2、娶一小块木炭，在酒精灯上烧至发红，然后将木炭插入集气瓶内。 观察现象：剧烈燃烧，发出白光，放出热量，说明集气瓶中有纯净的氧气存在。反应完后，向集气瓶中加入澄清石灰水，振荡后，现象为澄清石灰水变浑浊，说明木炭跟氧气反应后产生CO 2。 化学方程式为：C ＋O 2CO 2 3、用细铁丝螺旋绕在燃烧匙是，另一端绕一根火柴，点燃火柴，待火柴燃烧尽时，立即放入留有水，充满氧气的集气瓶中。 观察现象：红热的铁丝剧烈燃烧，火星四射，放出大量热，生成黑色固体。化学方程式为： 3Fe ＋2O 2 Fe 3O 4 4、取少量硫粉在燃烧匙上，在酒精灯上加热，硫粉熔化，迅速将燃烧匙伸进充满氧气的集气瓶中。 S ＋O 2 SO 2 5、取少量磷粉在燃烧匙上，在酒精灯上加热至发红，迅速将燃烧匙伸进充满氧气的集气瓶中。 观察现象：剧烈燃烧，发出明亮光辉，放出热量，生成白烟。化学方程式为： 4P ＋5O 22P 2O 5
一、实验目的： 1、熟悉工作曲线的制作方法及注意事项； 2、掌握3, 5-二硝基水杨酸（DNS）比色定糖的原理和方法； 3、掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法； 4、掌握酶蛋白分离提纯的原理； 5、掌握酶的比活力测定及其计算方法； 6、掌握酶促反应动力学中用双倒数法测定Km的方法； 7、运用正交试验法确定温度、pH值、离子浓度的最适条件。 称量技术： 1、了解电子天平的用途 2、了解电子天平的工作原理 3、掌握电子天平的使用方法 4、掌握电子天平使用前后的注意事项 离心技术： 1、了解离心机的基本原理和用途 2、了解离心机的类型和用途 3、了解离心机的型号和控制版面 4、掌握离心机的使用方法 5、掌握离心机使用的注意事项 层析技术： 1、了解层析技术的基本原理 2、了解层析技术的分类情况 3、了解各种层析技术的原理 4、掌握凝胶层析技术 光谱分析技术： 1、学习掌握紫外可见、荧光、红外光谱分析技术原理 2、了解仪器结构和分类 3、熟练掌握常用仪器的使用方法和注意事项 电泳技术： 1、了解电泳的基本原理 2、了解电泳的类型
3、学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理 4、掌握垂直板电泳的操作技术 5、掌握琼脂糖凝胶电泳的操作技术 6、了解转移电泳的基本原理和操作方法 7、了解双向电泳的基本原理和操作方法 二、实验原理： 1、蔗糖酶的提取： ①酵母菌的基本特征： 单细胞，椭圆形、圆形或柱形。长5-30μm，宽1-5μm。 ②生物材料破碎方法： （1）机械（匀浆）法 ①研钵 ②玻璃或Teflon研棒匀浆器（50mL）Teflon：聚四氟乙烯 先将剪碎的组织置于管中，再套入研杆来回研磨，上下移动，即可将细胞研碎，此法细胞破碎程度比高速组织捣碎机高，适用于少量组织和脏器。 ③高速组织捣碎机（0.5-1L） 将材料配成稀糊状液，放置于筒内约1/3 体积，盖紧筒盖，将调速器先拨至最慢处，开动开关后，逐步加速至所需速度。此法适用于动物内脏组织、植物肉质种子等。 ④高压匀质机（XL） 高压下的细胞通过阀门流出时，细胞内外压力同时降低，但由于细胞膜的作用，胞外压力瞬间降至常压，而胞内压力相比之下降低较慢，从而在细胞内外形成压力差，使细胞膜破裂。 优点：快速，产热小，对蛋白损伤小，破碎效率高。一次破碎效率可达90%以上 （2）超声波处理法 用一定功率的超声波处理细胞悬液，使细胞急剧震荡破裂，此法多适用于微生物材料，常在30 至60Hz 频率下处理10-15 分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。（3）反复冻融法 将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内的水形成冰粒而剩余的细胞液中盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。设备简单、效率不高，时间长，注意蛋白酶！ （4）化学处理法 有些动物细胞可采用十二烷基磺酸钠(SDS)、去氧胆酸钠等细胞膜破坏。
《酶的特性》教学设计 宗健康山东省福山第一中学 一、教材分析 “酶的特性”是《普通高中课程标准生物教科书分子与细胞（必修1）》（人教版）第五单元第一节《降低化学反应活化能的酶》第二课时的内容。本节教材内容包括“酶具有高效性”、“酶具有专一性”、“影响酶活性条件的探究与分析”三大内容。其中“酶具有高效性”的内容，在前一课的“比较过氧化氢在不同条件下的分解”实验中学生已自我构建。有关“酶具有专一性”的内容，隐含着同一种酶对不同底物的作用和不同的酶对同一种底物的作用的内容，对于这一内容，只要引导学生对前一节所学实验就底物和酶进行改变，通过亲自实验及分析，很容易突破。因此，“影响酶活性的条件”的探究实验是本节课的重心所在，而这一内容所包含的实验方案设计、实验操作过程及实验结果分析，既是前面所学的“酶的作用与本质”知识的延续和进一步理解，又是学生以后学习影响光合作用和呼吸作用因素知识与技能的基础，同时又是培养学生生物科学研究素养非常好的内容，对学生学习与研究生命科学的兴趣将产生较大的影响。 二、学情分析 本节课之前，学生学习了第1课时“酶的作用和本质”，结合初中学习的人体内消化酶知识，学生已具备了以下与本节学习相关的知识和技能基础，即对照实验的设计与操作方法、自变量和无关变量的分析与控制方法。然而，对科学探究的一般程序“提出问题→作出假设→设计实验→进行实验→分析结果，得出结论→表达和交流→进一步探究”还缺乏理论性的指导，有关影响酶条件的实验方案设计，特别是细节问题：如底物的选择、指示剂的运用等，对学生而言，要求较高，存在相当大的困难，为此采取学生讨论和教师引导结合的教学设计思路来突破这一困难。三、教学设计思路 酶的特性这一节的教学，是在对酶的作用和本质有了初步认识的基础上，通过实验，对酶的催化作用做进一步的认识。由于本节课内容与生活贴近，实验性强，所以本节课内容适宜进行探究性学习。探究性学习是学生自主获取知识的学习方式，其突出特点是强调学生“亲历”。通过钻研教材，我挖掘了较多的探究内容，对于酶的专一性，课本是以呈现的方式给出，为了使学生从“听和背”中解脱出来，我设计了专一性探究实验。 我的设计思想就是尽可能为学生提供亲身体验“做科学”的机会，使学生通过探究形成自己的观点，而不是全盘接受他人的结论，真正从“听和背”中解脱出来，
生物化学实验报告：蛋白质分子量的测定— —凝胶层析法 实验一蛋白质分子量的测定——凝胶层析法 一、实验目的 1.掌握凝胶层析的基本原理。 2.学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实验技能。二、实验原理 凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。当混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。凝胶是一种不带电的具有三维空间的多孔网状结构、呈珠状颗粒的物质，每个颗粒的细微结构及筛孔的直径均匀一致，像筛子，小的分子可以进入凝胶网孔，而大的分子则排阻于颗粒之外。当含有分子大小不一的蛋白质混合物样品加到用此类凝胶颗粒装填而成的层析柱上时，这些物质即随洗脱液的流动而发生移动。大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，先被洗出层析柱；而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离。若分子大小介于上述完全排阻或完全渗
入凝胶的物质，则居二者之间从柱中流出。总之，各种不同相对分子质量的蛋白质分子，最终于它们被排阻和扩散的程度不同，在凝胶柱中所经过的路程和时间也不同，从而彼此可以分离开来。 将凝胶装在柱后，柱床体积称为“总体积”，以Vt表示。实质上Vt是Vo，Vi与Vg三部分组成，Vo称为“孔隙体积”或“外水体积”，即存在于柱床内凝胶颗粒外面空隙之间的水相体积，相应于一般层析法中柱内流动相的体积；Vi为内体积，即凝胶颗粒内部所含水相的体积。Vg为凝胶本身的体积。洗脱体积与Vo与Vi之间的关系可用下式表示：Ve=Vo+KdVi 式中Ve为洗脱体积，自加入样品时算起，到组分最大浓度出现时所流出的体积；Kd为样品组分在二相间的分配系数，也可以说Kd是分子量不同的溶质在凝胶内部与外部的分配系数。它只与被分离的物质分子的大小和凝胶颗粒孔隙的大小分布有关，而与柱的长度粗细无关，也就是说它对每一物质为常数，与柱的物理条件无关。Kd可通过实验求得，上式可以改写为:Kd=(Ve-Vo)/Vi 上式中Ve为实际测得的洗脱体积；Vo可用不被凝胶滞留的大分子物质的溶液通过实际测量求得；Vi可g×Wr求得。因此，对一层析柱胶床来说，只要通过实际实验得知某一物质的洗脱体积就可算出它的Kd值。
建筑材料与建筑科学的发展有何关系？ 答：首先，建筑材料是建筑工程的物质基础；其二，建筑材料的发展赋予了建筑物以时代的特征和风格；其三，建筑设计理论不断进步和施工技术的革新不但受到建筑材料发展的制约，同时亦受到其发展的推动；其四，建筑材料的正确、节约、合理的使用直接影响到建筑工程的造价和投资。 影响材料强度试验结果的因素有哪些？ 1、材料的组成 2、材料的形状和大小 3、材料的养护温湿度 4、试验时的加载速度 5、材料的龄期（主要是混凝土） 6、试验时的含水状况 天然大理石板材为什么不宜用于室外？ 大理石一般都含有杂质，尤其是含有较多的碳酸盐类矿物，在大气中受硫化物及水气的作用，容易发生腐蚀。腐蚀的主要原因是城市工业所产生的SO2与空气中的水分接触生成亚硫酸、硫酸等所谓酸雨，与大理石中的方解石反应，生成二水硫酸钙（二水石膏），体积膨胀，从而造成大理石表面强度降低、变色掉粉，很快失去光泽，影响其装饰性能。其反应化学方程式为： CaCO3+H2SO4+H2O=CaSO4?2H2O+CO2↑ 在各种颜色的大理石中，暗红色、红色的最不稳定，绿色次之。白色大理石成分单纯，杂质少，性能较稳定，不易变色和风化。所以除少数大理石，如汉白玉、艾叶青等质纯、杂质少、比较稳定耐久的品种可用于室外，绝大多数大理石品种只宜用于室内。 石灰石主要有哪些用途？
一、粉刷墙壁和配臵石灰砂浆和水泥混合砂浆 二、配制灰土和三合土 三、生产无熟料水泥、硅酸盐制品和碳化石灰板 亲水材料与憎水材料各指什么? 亲水材料是指亲水材料是指：：水滴在该材料表面的接触角θ大小来判断θ＜90度，则材料为亲水材料，θ=90度，则为顺水材料。 憎水材料是指：水滴在该材料表面的接触角θ大小来判断，若θ＞90度，表示材料为憎水材料 ：：水滴在该材料表面的接触角θ大小来判断θ＜90度，则材料为亲水材料，θ=90度，则为顺水材料。 憎水材料是指：水滴在该材料表面的接触角θ大小来判断，若θ＞90度，表示材料为憎水材料 水泥的细度是指什么,水泥的细度对水泥的性质有什么影响？ 细度是指水泥颗粒总体的粗细程度。水泥颗粒越细，与水发生反应的表面积越大，因而水化反应速度较快，而且较完全，早期强度也越高，但在空气中硬化收缩性较大，成本也较高。如水泥颗粒过粗则不利于水泥活性的发挥。一般认为水泥颗粒小于40μm（0.04mm）时，才具有较高的活性，大于100μm（0.1mm）活性就很小了。实际上水泥厂生产各种标号的水泥是同一操作方法，但在最后分级时，通过筛分，将细度最小的定为最高级，细度最大的定为最低级。细度3-5的定为42.5，细度5-8的定为32.5，小于3的定为特种水泥。 影响硅酸盐水泥凝结硬化的主要因素？ 矿物组成直接影响水泥水化与凝结硬化，此外还与下列因素有关：
实验一酶的性质研究 酶是生物体内具有催化功能的蛋白质，因此也叫生物催化剂。生物体内存在多种多样的酶，从而使生物体在温和的条件下能够迅速完成复杂的生物化学反应。 酶有的是单纯蛋白质，有的是结合蛋白质。因此，凡是能够引起蛋白质变性的因素，都可以使酶丧失活性，结合蛋白质的非蛋白部分叫做辅酶或辅基。习惯上，将与蛋白质结合的紧而不易分离的非蛋白部分称为辅基，辅基不能通过透析的方法从酶分子中除去；而将与蛋白质结合的不紧而易分离的非蛋白质部分称为辅酶，辅酶可以通过透析的方法从酶分子中除去。目前许多酶已经能够制成结晶。 酶具有高度的专一性（特异性）。温度和pH对酶的活性有显著的影响。能使酶的活性增加的作用称为酶的激活作用，使酶的活性增加的一些物质称为酶激活剂；能使酶的活性减弱的作用称为酶的抑制作用，使酶的活性减弱的一些物质称为酶的抑制剂。激活剂与抑制剂常表现某种程度的特异性。， 物质代谢是生命现象的基本特征。在机体中了解温度对没活性的影不断进行着的同化作用和异化作用，绝大多数都是在酶的影响下进行的。所以，生活机能在某种程度内可以说是由机体内酶类的含量及活性决定的。食品、发酵、制药、制革、造纸、纺织等工业部门以及临床检验等都和酶有密切关系。因此，酶的研究在生物化学理论上及生产实践上都占有极其重要的位置。 温度对酶活性的影响 一目的和要求 通过检验不同温度下唾液淀粉酶的活性，了解温度对酶活性的影响。进一步明确最适温度的概念。 二原理 酶的催化作用受温度的影响很大，一方面与一般化学反应一样，提高温度可以增加酶促反应的速度。通常温度每升高10℃，反应速度就加快一倍左右，通常用温度系数表示，一般情况下的温度系数约等于2，最后反应速度达到最大值。另一方面，酶是一种蛋白质，温度过高可引起蛋白质变性，导致酶的失活。因此，反应速度达到最大值以后，随着温度的升高，反应速度反而逐渐下降，以至完全停止反应。反应速度达到最大值时的温度称为某种酶的最适温度。高于或低于最适温度时，反映速度逐渐降低。大多数动物酶的最适温度为37℃-40℃，植物酶的最适温度为50℃-60℃。但是，一种酶的最适温度不是完全固定的，它与作用时间的长短有关，反应时间增长时，最适温度向数值较低的方向移动。通常测定酶的活性时，，在酶反应的最适温度下进行，测定酶促反应的初速度。为了维持反应过程中温度的恒定，一般利用恒温水浴等恒温装置。 酶对温度的稳定性与其存在的形式有关。大多数酶在干燥的固体状态下比较稳定能在室温下保持数月以至一年，在低温下保存的时间更长，因此，酶制剂一般以冻干粉状在低温下冷冻保存。溶液中的酶，一般不如固体的酶稳定，且易为微生物所污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，溶液状态的酶，在保存时都要加入等体积的甘油，并贮存在4℃冰箱中，酶活性可保持两周至几个月。酶在高温下就更不稳定了。 酶的活性通常是用测定酶作用基质在酶作用前后的变化来进行观察的。
水泥基本性质实验报告 篇一：建筑材料水泥试验报告 建筑材料水泥试验报告 1. 实验目的 1.1.掌握水泥各种技术性质定义 .通过试验进一理解水灰比、掺和料对水泥强度的影响。 1. 2.学会操作水泥强度和与外加剂相容性的实验方法。 1. 3.了解水泥安定性、凝结时间的测试方法。 2. 实验内容 2.1.水泥与外加剂相容性实验 1.实验原理相容性的概念： 对于混凝土外加剂与水泥适应性的定义，普遍认为：依据混凝土外加剂应用技术规范，将经过检验符合标准的某种外加剂掺入按规定可以使用该品种外加剂的水泥中，用该水泥所配制的混凝土或砂浆若能够产生应有的效果，就认为该水泥与这种外加剂是适应的；相反，如果不能产生应有的效果，则该水泥与这种外加剂不适应。 选用PO42.5水泥300g，水87g（水灰比相同），减水剂掺量不同，分别测定水泥净浆流动度(mm)。画出减水剂掺量与净浆流动度之间的关系曲线并进行分析。 2.主要设备水泥净浆搅拌机、水平玻璃板、湿布、截锥圆模、电子称、钢尺等。 3.实验步骤
我们组负责的是减水剂掺量1.8%的水泥的净浆流动度： (1)将截锥圆模置于水平玻璃板上，先用湿布擦拭截锥圆模内壁和玻璃板，然后将湿布覆盖它们的上方。 (2)称量300g水泥，倒入用湿布擦拭过的搅拌锅内。 (3) 称量5.4g减水剂，加入搅拌锅。然后称量87g水，加入搅拌锅，搅拌3min。 (4)将拌好的净浆迅速诸如截锥圆模内，刮平，将截锥圆模按垂直方向迅速提起，30s以后量取相互垂直的两直径，并去它们的平均值作为次胶凝材料净浆的流动度。 其它减水剂掺量的实验步骤类似。 2.2.水泥胶砂强度实验 1.实验原理 选用PO42.5水泥，改变水灰比和粉煤灰的掺量。测定不同龄期的抗压、抗折强度，并对其结果进行分析。其重量比为：水泥:标准砂=1:3。水灰比分别为：0.45、0.50、0.55。粉煤灰掺量（内掺）：10%、20%。水泥用量450g，标准砂用量1350g。 2.实验仪器 电子称、搅拌机、伸臂式胶砂振动台、可拆卸的三联模、水泥电动抗折实验机、压力实验机和抗压夹具等。 3.实验步骤 我们组负责的是10%、28天水泥胶砂强度的测量。胶砂的制备： (1)分别称量粉煤灰45g，水泥405g，标准砂1350g，水
生物化学实验报告册 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入
水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。 实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。 实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。 1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。 2．实验报告的前三部分①实验原理、②实验材料、③实验步骤要求在实验课前预习后撰写，作为实验预习报告的内容。预习时也要考虑并设计好相应实验记录的表格。 3．每项内容的基本要求 实验原理：简明扼要地写出实验的原理，涉及化学反应时用化学反应方程式表示。 实验材料：应包括各种来源的生物样品及试剂和主要仪
说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个） 写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！ 实验四酶的特性实验 一、实验目的 酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。 二、实验内容 本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。 （一）酶的专一性 1、实验原理 本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。用班氏试剂检查糖的还原性。班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。 2、材料、仪器与试剂 (1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液 (2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架； (3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。 3、实验操作 （1）稀释唾液的制备 ①唾液的获取 用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。 ②不同稀释度唾液的制备（用大试管） 本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。 1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验） 表1 唾液淀粉酶稀释度的确定 （2）淀粉酶的专一性 表2 淀粉酶专一性实验 （二）温度对酶活力的影响 1、实验原理 酶的催化作用受温度的影响。在最适温度下，酶的反应速度最高。淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色，糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色，在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水的程度可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。
醇酚的性质实验报告 篇一：实验六酚的性质与鉴定 实验六酚的性质与鉴定 一、实验目的 1、熟悉酚的基本性质； 2、掌握酚的鉴别方法。 二、实验原理 酚的分子中，由于羟基中的氧原子与苯环形成P-π共轭，电子云向苯环偏移，溶于水后可以电离出氢离子，显示弱酸性。 但是苯酚的酸性比碳酸弱。若将苯酚钠与碳酸钠溶液反应，可以析出苯酚。用这种方法可以分离苯酚。 苯酚可以和NaOH反应，但不与NaHCO3反应。 利用醇、酚与NaOH和NaHCO3反应性的不同，可鉴别和分离酚和醇。 苯酚与溴水在常温下可立即反应生成2，4，6-三溴苯酚白色沉淀。反应很灵敏，很稀的苯酚溶液就能与溴水生成沉淀。故此反应可用作苯酚的鉴别和定量测定。
（白色） 酚类可以与FeCl3溶液反应显色，用于鉴别酚类。苯酚可以用于制备酚酞。 棕红色蓝紫色 三、实验器材 仪器：试管、试管架、试管夹、酒精灯、pH试纸 无机试剂： NaOH（5％），饱和溴水， NaHCO3(5％,饱和)，的Na2CO3(5％)， 5％FeCl3 ，HCl(5％)溶液； 有机试剂：苯酚 四、实验步骤 1、酚的溶解性和弱酸性 将0.2 g的苯酚放在试管中，加入3mL水，振荡试管后观察是否溶解。用玻璃棒蘸1滴溶液，以广泛pH试纸测定其酸碱性。然后再加热试管，直到苯酚全部溶解。 将上述溶液分装在3支试管中，冷却后出现浑浊，在其中一支试管中加入2～3滴5％的NaOH溶液，观察是否溶解。再滴加5％的盐酸，有何变化？在另2支试管中分别加入5％
的NaHCO3溶液和5％的Na2CO3溶液，观察是否溶解。 2、酚类与FeCl3溶液的显色反应 在试管中加入1%苯酚0.5mL，再加入1～2滴1% FeCl3溶液，观察和记录各试管中所显示的颜色。 3、与溴水的反应 在1支试管中加入2滴苯酚饱和水溶液，再加2 mL水稀释，在另一只试管中加入2 mL自来水，然后在两只试管中逐滴加入饱和溴水，比较两只试管中的现象。写出反应方程式。 五、思考题 1、如何鉴别醇和酚？ 2、举例说明具有什么结构的化合物能与FeCl3溶液发生显色反应？ 3、为什么苯酚比苯和甲苯容易发生溴代反应？ 篇二：有机化学实验十一醇、酚的鉴定 实验十一醇、酚的鉴定 一．实验目的： 1. 进一步认识醇类的性质; 2比较醇,酚之间的化学
生物化学实验报告 动物营养研究所 树润 2015.10.12 猪血中超氧化物歧化酶（SOD）的分离纯化及活性测定一．实验目地 1.通过实验了解活性物质的分离提取。 2.了解超氧化物歧化酶的基本功能与应用。 二．实验原理 超氧化物歧化酶是一种酸性蛋白，是唯一以自由基为底物 的酶，具有清除自由基的功能酶，在酶分子上共价连接金属辅 基，因此它对热、PH、以及某些理化性质表现出异常的稳定性。 该酶首次从牛红细胞中分离得到，是一种蓝色含铜蛋白，之后， 研究发现该蛋白酶具有催化氧发生歧化反应的能力，因此将其 命名为超氧化物歧化酶1-2。超氧化物歧化酶是一种能专一地清 除超氧离子自由基（O2-）的金属酶，它具有抗衰老、抗辐射、 抗炎抗癌等作用，因而在医药（如关节炎、红斑狼疮等疾病的 治疗3）、化妆品(有防晒抗炎效果4)、食品工业（SOD灵芝菌5 等）等方面具有了广泛的应用前景。 超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体的一种金属酶, 可催化超氧阴离子自由基(O2-)与H+发生歧化反应, 生成H2O2和 O2。SOD催化下述反应：2H++2O2-→H2O2+O2。
超氧化物歧化酶按照它所含金属离子的不同，可分为 Cu-Zn-SOD、Mn-SOD、Fe-SOD等三种。Cu-Zn-SOD为二聚体，呈 蓝绿色；Mn-SOD呈紫红色；Fe-SOD呈黄褐色。 SOD提取、纯化制备方法各异, 常用方法有经典的溶剂沉淀法、盐析法、超滤法和层析法等6-7。本实验采用有机溶剂沉淀法8以新鲜猪血为原料，从中提取SOD并进行纯化。酶活力测定可用以下方法：邻苯三酚自氧化法9、黄嘌呤氧化酶法、NBT光还原法、化学发光法、肾上腺素自氧化法、亚硝酸法等。 该实验SOD酶活性采用邻苯三酚自氧化法测定，酶活性单 位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率 达50%的酶量定义为一个酶单位。 样品中蛋白质含量用考马斯亮蓝G-250法测定。考马斯亮 蓝G-250在游离状态下呈红色，与蛋白质结合呈现蓝色。在一 定围，溶液在595nm波长下的光密度与蛋白质含量成正比，可 用比色法测定，测定围1-1000μg。 三．实验试剂与器材 1.实验试剂 ACD抗凝剂、0.9%Nacl、丙酮、95%乙醇、氯仿、考马斯 亮蓝G-250、50mmol/L pH8.3磷酸缓冲液、10mmol/L EDTA钠盐 溶液、3mmol/L邻苯三酚溶液等 2.实验器材
化学性质实验报告 有机实验报告 糖、氨基酸和蛋白质的鉴定 一、糖的鉴定 糖类化合物：又称碳水化合物，是多羟基醛或多羟基酮及其缩聚物和某些衍生物的总称，一般由碳、氢与氧三种元素所组成。 实验目的： （1）进一步了解糖的化学性质；（2）掌握鉴定糖的方法及其原理。 （一）-萘酚试验（molish)糖类化合物一个比较普遍的定性反应是molish反应。即在浓硫酸存在下，糖与-萘酚(molish试剂）作用生成紫色环。 实验方法 取3支试管，编号，分别加入0.5 ml 0.5%的各待测糖水溶液，滴入2滴molish试剂（ -萘酚的乙醇溶液），摇匀。把试管倾斜450，沿管壁慢慢加入约1ml浓硫酸（切勿摇 动），小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。硫酸在下层,试液在上层样品：葡萄糖、蔗糖及淀粉 解释: 糖被浓硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物，后者进一步与 -萘酚缩合生成紫红色
物质，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫色环。 （二） fehling试验 （1）实验原理 fehling试剂：含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，fehling试剂中需加入酒石酸钾钠，它与cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子。 （2）操作方法 取4支试管，编号，分别加入fehling试剂i和ii 各0.5ml。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。fehling试剂 i：称取3.5 g硫酸铜溶于100 ml蒸馏水中, 得淡蓝色的 fehling试剂 i。 fehling试剂 ii：将17g酒石酸钾钠溶于20ml热水中，然后加入20 ml含 5 g naoh的水溶液，稀释至100 ml得无色透明的 fehling试剂 ii。 样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖 解释: 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 （三） benedict试验
生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：
材料的基本性质实验 一、实验目的 1、掌握材料密度、体积密度和表观密度的定义和测定方法 2、掌握材料吸水率的定义和测定方法 3、掌握材料强度的分类和影响因素 4、了解混凝土试件荷载-挠度曲线的测定方法及用途 二、实验内容 1、测定蒸压灰砂砖、烧结粘土砖和烧结页岩砖的体积密度和质量吸水率。 a测定蒸压灰砂砖、烧结粘土砖和烧结页岩砖的体积密度： 使用设备：案秤（量程6kg，精度50g）；直尺（精度1mm）；干燥箱。 实验步骤：首先，将试件放入105 ℃的干燥箱并干燥至恒重状态，然后冷却至室温并测定质量m；用直尺测量试件的尺寸并计算其体积。对六面体的试件，需在长、宽、高各个方向测定三处，取其平均值并计算体积V。材料的体积密度=m/V； 单位kg/m3。(精确至10 kg/m3) b测定蒸压灰砂砖、烧结粘土砖和烧结页岩砖的质量吸水率： 使用设备：天平；干燥箱。 实验步骤：将试件放入干燥箱在105 ℃的条件下干燥至恒重状态，然后冷却至室温并测定初始质量m0；将试件放入容器并逐次加水，以使得试样中的开放空隙均被水所填充；30分钟后，取出试件，抹去表面水分以使其处于饱和面干状态，称量其质量m1，然后用排水法测出试样的体积V0；使用如下公式计算材料的质量吸水率和体积吸水率(精确至0.01%)： 2、观察承压面状态（环箍效应）对混凝土试件抗压强度和破坏状态的影响： 测定在不同的加荷速率、试件尺寸和承载面状态下对混凝土试件极限抗压强度得影响。 用加载机在0.5MPa/s以及1.0MPa/s两种加载速率，在直接接触和垫胶片两种不同的承压面接触方式上，对100*100*100、150*150*150、100*100*300三种C30混凝土试件进行加载，观察试件的极限强度以及破坏方式，并分析这些变量对实验结果影响的原因，总结加载混凝土试件的规律经验。 3、用Toni 200kN抗折试验机演示混凝土试件荷载-挠度曲线的测定方法 用Toni 200kN抗折试验机演示C30素混凝土、C30轻骨料混凝土、CF30掺入钢纤维的混凝土、C80高强度混凝土进行弯折加载，用计算机绘制不同品质混凝土试件的挠度-荷载曲线，并用日本JSCE - SF4标准分析混凝土的弯曲韧性和弯曲韧性指数，依据混凝土试件挠度-荷载曲线峰值后的面积占曲线总面积的百分比来分析混凝土试样的韧性，并观测强度等级和纤维掺量对混凝土断面形态的影响。 三、实验结果及分析 1、测定蒸压灰砂砖、烧结粘土砖和烧结页岩砖的体积密度和质量吸水率。 a、测定蒸压灰砂砖、烧结粘土砖和烧结页岩砖的体积密度。 实验数据处理：
课程名称： 生物化学实验 指导老师： 史影 成绩： 实验名称： 酶的基本性质实验——底物专一性、激活剂和抑制剂、最适温度 同组学生姓名： 陈莞尔，潘盛警 Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性 一、实验目的 1.了解酶的专一性。 2.掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。 3.学会排除干扰因素，设计酶学实验。 二、基本原理 酶是具有高度专一性的有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶促反应要比无机催化反应快数十倍。 酶催化的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对一种或一类底物其催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，可分成下列几种： 1.相对专一性。一种酶能催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。 2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。 3.立体异构专一性：有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。 本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶对淀粉和蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。用Benedict 试剂检测反应产物。 Benedict 试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化铜沉淀。 Na 2CO 3+ 2H 2O 2NaOH + H 2CO 3 专业：____生物工程 姓名：_____陈传鑫 学号：___3090104963 日期：____2011.3.22_ 地点：_生物实验楼306 实验报告
实验室制取氢气及其性质实验报告 实验者：实验日期： 一、实验目的： 1、掌握实验室制取氢气的方法 2、掌握氢气的性质 二、实验器材：导气管，试管，酒精灯，水槽，启普发生器 三、实验药品：锌粒，稀硫酸，氧化铜 四、实验原理：Zn+H2SO4 H2+ZnSO4 五、实验步骤： 安装如图组装仪器。 查：检查装置气密性，方法是,开启旋塞,向球形漏斗中加水,当水充满容器下部的半球体时关闭旋塞,继续加水,使水上升到球形漏斗中。静置片刻,观察水面是否下降,如下降说明漏气。漏气处可能是容器上气体出口处的橡皮塞、导气管上的旋塞或球形漏斗与容器接触的磨口处。如漏气应塞紧橡皮塞或在磨口处涂一薄层凡士林。 装：锌粒由容器上的气体出口加入,加固体前应在容器的球体中加入一定量的玻璃棉,以防固体掉入半球体中。液体试剂从球形漏斗口注入,注液方法与上述注水方法相同。液体的量以反应时刚刚浸没固体为宜。打开气体出口的活塞，开始反应，收集氢气。 收：采用排水法收集氢气，理由是氢气不溶于水。 离：收集满氢气后，先将导管移开水槽。 六、氢气性质实验操作： 1、氢气的纯度检验：收集一试管氢气，集满氢气的试管用拇指堵住管口，管口朝下，立即移近酒精灯火焰，点燃试管里的氢气。点火后，根据声音判断氢气是否纯净，如果听到的是尖锐的爆鸣声，则表示氢气不纯，必须重新收集进行检验，直至听到“噗”的声音，才表明收集的氢气已经纯净，可以使用。重新收集氢气检验时，应另换一支试管进行操作，若仍使用原试管，要先用拇指堵住试管口一会儿，然后再去收集氢气进行点火验纯。 2、吹泡泡实验：将出气导管上沾上肥皂水，可以观察到不断有泡泡冒出并升空，这说明氢气的密度比空气轻。 3 的烧杯壁上有小水珠出现，并放出热量。反应方程式：2H2 +O 2H2O 4、氢气还原氧化铜：先往试管内加入氧化铜，把氢气导气管伸入试管底部，先通入氢气一段时间（是为了把氧气清除，否则加热后氧化铜会与氧气反应，影响试验）再加热试管，使氢气还原氧化铜，看到黑色氧化铜全部变成红色时，停止加热，继续通入氢气（若先停止通氢气，则收集氢气处的水会倒吸入试管内，使热试管炸裂 化），待试管冷却后，停止通氢气。反应方程式：CuO+H2Cu+H2O 装置如图：
实验一糖类的性质实验 （一）糖类的颜色反应 一、实验目的 1、了解糖类某些颜色反应的原理。 2、学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。 二、颜色反应 （一）α-萘酚反应 1、原理糖在浓无机酸（硫酸、盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后 者能与α-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 莫氏试剂：5％α-萘酚的酒精溶液1500mL.称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100 mL，贮于棕色瓶内。用前配制。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 1％淀粉溶液100 mL ％糠醛溶液100 mL 浓硫酸 500 mL 4、实验操作 取5支试管，分别加入1％葡萄糖溶液、1％果糖溶液、1％蔗糖溶液、1％淀粉溶液、％糠醛溶液各1 mL。再向5支试管中各加入2滴莫氏试剂，充分混合。倾斜试管，小心地沿试管壁加入浓硫酸1 mL，慢慢立起试管，切勿摇动。 观察记录各管颜色。 （二）间苯二酚反应 1、原理 在酸作用下，酮醣脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮醣的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢，只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。实验条件下蔗醣有可能水解而呈阳性反应。 2、器材 试管及试管架，滴管 3、试剂 塞氏试剂：％间苯二酚－盐酸溶液1000 mL，称取间苯二酚0.05 g溶于30 mL 浓盐酸中，再用蒸馏水稀至1000 mL。 1％葡萄糖溶液100 mL 1％果糖溶液100 mL 1％蔗糖溶液100 mL 4、实验操作
试验一 土木工程材料的基本性质试验 试验日期： 试验人： 同组人姓名： 组号： 试验目的： 通过试验掌握材料的密度、表观密度、孔隙率等概念以及材料的强度与材料的孔隙率大小及孔隙特征的关系，验证水对材料力学性能的影响。 预习思考题： 材料的密度、表观密度、孔隙率和软化系数的概念是什么？ 一、密度试验： 密度：材料在绝对密实状态下单位体积所具有的质量。 1. 主要仪器设备： 李氏比重瓶，烧杯，小勺，漏斗，天平（称量1kg ，感量0.01g ）。 2. 方法步骤： （1）试样制备：将试样研碎，通过900孔/cm 2的筛，除去筛余物，放在105～110℃烘箱中烘至恒重，放入干燥器中备用。 （2）在比重瓶中注入水至突颈下部刻线零以上少许，记下初始读数V 1。 （3）用天平称取60～90g 试样，用小勺和漏斗将试样徐徐送入比重瓶中，直至液面上升至20ml 刻度左右。 （4）排除比重瓶中气泡，记下液面刻度V 2；称取剩余的试样质量，算出装入比重瓶内的试样质量m(g)。 （5）计算：密度)/(3cm g V m = ρ （精确至0.01g/cm 3） 式中：m ：装入瓶中试样的质量（g ） v ：装入瓶中试样的体积（cm 3） 3. 记录及结果计算：
注：按规定试验应做两次，两次结果相差不应大于0.02g/㎝3。 二、表观密度试验： 表观密度：材料在自然状态下（包含内部孔隙）单位体积所具有的质量。 1、主要仪器设备 游标卡尺（精度0.1mm ），天平（感重0.1g ），烘箱，干燥器。 2、方法步骤 （1）将试样放置在105～110C ?烘箱中烘至恒重。 （2）用卡尺测量试件尺寸（每边测量三次取平均值），并计算出体积Vo （㎝3） （3）称取试样质量m （g ）。 （4）计算：表观密度)/(3cm g V m o o = ρ（计算至小数点后第二位） 式中：m ：试样质量（g ） v 0：试样体积（㎝3） 3、记录及结果计算： 注：按规定试样表观密度取三块试样的算术平均值作为评定结果。 三、孔隙率计算： 孔隙率：材料中孔隙体积占材料总体积的百分率。 将已经求得的密度ρ及表观密度o ρ代入下式