０引言
太极贴以当归、干姜、冰片、生草乌、生川乌、麻黄、三七、红花、樟脑为原料，经加工而成，具有使用简便、有效、价廉特点，把药物贴敷于机体的相应穴位，使药物刺激穴位、疏通经络而调节机体的功能状态[1]。在临床上用于治疗骨质增生，颈椎病，关节炎，肌肉疼痛，急、慢性扭、挫伤。本文主要对太极贴的家兔多次皮肤刺激试验进行观察[2]，为临床用药安全及相关刺激性研究提供依据。
１材料
1.1受试样品
由某公司提供的太极贴(一种膏贴)。
1.2受试物处理
把原样品剪成2.5cm×2.5cm大小用于试验。
1.3实验动物和饲养环境
普通级日本大耳兔3只，体重2300—2500g，皮肤完好健康，由南昌龙平兔业有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（赣）2009-0001。实验兔饲养在本疾控中心动物实验室，实验动物使用许可证号：SYXK(赣)2007-0001。室温21.6—24.5℃，湿度40.0%～70.0%RH，单笼饲养。
２方法
2.1实验方法
实验前24h把动物背部脊柱两侧被毛剪去，每块面积约3cm×3cm，实验时将受试物2.5cm×2.5cm样品贴在一侧去毛区，另一侧为空白对照，在斑贴后4h，用水清洗，去除残留物。每天斑贴一次,连续斑贴14天，每次斑贴后24h观察结果。
2.2评分与计算
按《消毒技术规范》（2002年版）中皮肤刺激反
太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析
ＲｅｓｕｌｔｓａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｅｒｍａｌＩｒｒｉｔａｔｉｏｎＴｅｓｔｏｆＴａｉＣｈｉＳｔｉｃｋｅｒｓｏｎＲａｂｂｉｔ＇ｓｋｉｎ
肖岗夏芝璐曾立爱谌乐礼蔡宏丁晟
Xiao Gang Xia Zhilu Zeng Liai Shen Yueli Cai Hong Ding Sheng
（江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029）
（Jiangxi Province Center for Disease Control and Prevertion，Jiangxi Nanchang330029）
摘要：目的：对太极贴进行动物多次皮肤刺激试验，为其提供使用前安全性评价。方法：用太极贴斑贴家兔完整皮肤，每天一次，连续斑贴14天，并逐日观察症状表现。结果：太极贴对家兔的刺激评分为2.2分。结论：太极贴对家兔刺激反应强度为中度，有可能对使用者敷用部位产生刺激作用，长期使用可能对使用者身体造成不良影响。
关键词：多次皮肤刺激；家兔
中图分类号：R-332文献标识码：A文章编号：1671-4792（2012）12-0209-02
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Objective：To evaluate the dermal irritation test of Tai Chi stickers to animals'skin，and to provide safety evaluation of pre-application．Methods:The rabbits healthy skin were locally treated with Tai Chi stickers for14days continuously，and their symptoms were observed day by day．Results:The stimulation scores of type3of Tai Chi stickers were2.2．Conclusion:Tai Chi stickers has moderate irritation on rabbits'skin，and long-term use may adversely affect the health of user's body.
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Dermal Irritation Test；Rabbits 太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析
２０９
多次完整皮肤刺激试验 中国科学院广州化学研究所分析测试中心 卿工---189--3394--6343 手和皮肤消毒剂：除按第一类、第二类或第三类消毒剂的要求进行毒理学试验外，还必须进行完整皮肤刺激试验。如果偶尔使用或间隔数日使用的消毒剂，采用一次完整皮肤刺激试验；如果每日使用或连续数日使用的消毒剂，采用多次完整皮肤刺激试验。接触皮肤伤口的消毒剂，还必须增做一次破损皮肤刺激试验；接触创面的消毒剂，应增做眼刺激试验。使用过程中，必需接触皮肤的其它消毒剂，也应增做完整皮肤刺激试验。根据消毒剂的成分，估计可能有致敏作用者，还需增做皮肤变态反应试验。 一、检测项目 多次完整皮肤刺激试验。 二、检测依据 中华人民共和国卫生部. 《消毒技术规范》（2002年版），皮肤刺激试验，多次完整皮肤刺激试验。 三、检测结论 在本试验条件下，*****公司送检的样品（对新西兰兔多次完整皮肤刺激强度为是否具有刺激性。 (本页以下无正文) 四、检测方法 多次完整皮肤刺激试验 （1）试验前动物皮肤准备同2.3.3.3.1 （1）。 （2）次日将受试物[浓度同 2.3.3.3.1 (2)]0.5ml（g）涂在一侧皮肤上，另一侧涂溶剂作为对照，在涂抹后4h，用水或无刺激的适宜溶剂清洗，除去残留物。每天涂抹一次，连续涂抹14d。在每次涂抹后24h观察结果，按表2-11评分。为了便于受试物的涂抹和结果观察，必要时应剪毛。对照区的处理方法同试验区。 2.3.3.4 评价规定 2.3.3.4.1一次皮肤刺激试验 在各个观察时间点，按照表2-11对动物的皮肤红斑与水肿形成情况进行评分，并分别按时间点将3只动物的评分相加，除以动物数，获得不同时间点的皮肤刺激反应积分均值(刺激指数)。取其中最高皮肤刺激指数，按表2-12评定该受试物对动物皮肤刺激强度的级别。 2.3.3.4.2多次皮肤刺激试验
五、急性眼刺激性/腐蚀性试验 Acute Eye Irritation/Corrosion Test 1 范围 本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No 405, Feb. 1987) USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870.2400 , Aug. 1998 ) 3 试验目的 确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。 4 定义 4.1 眼睛刺激性(Eye irritation)：眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。 4.2 眼睛腐蚀性(Eye corrosion)：眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。 5 试验的基本原则 受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。 6试验方法 6.1 受试物 液体受试物一般不需稀释, 可直接使用原液，染毒量为0.1mL。若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，并用水充分湿润, 染毒量应为体积0.1mL或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。 受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。 气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。 6.2 实验动物和饲养环境 首选健康成年白色家兔。至少使用3只家兔。试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。在试验开始前的24h内要对试验动物的两只眼睛进行检查（包括使用荧光素钠检查）。有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用常规饲料，饮水不限制。 6.3 试验步骤 6.3.1 轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1 mL（100mg）滴入(或涂入)结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。另一侧眼睛不处理作自身对照。滴入受试物后24h内不冲洗眼睛。若认为必要，在24h时可进行冲洗。 6.3.2若上述试验结果显示受试物有刺激性，需另选用3只家兔进行冲洗效果试验，即给家
四、皮肤刺激性/腐蚀性试验 Dermal Irritation/Corrosion Test 1 范围 本规范规定了动物皮肤刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No.404, July 1992) USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines (Series 870. 2500, Aug. 1998 ) 3 试验目的 确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。 4 定义 4.1 皮肤刺激性(Dermal irritation)：皮肤涂敷受试物后局部产生的可逆性炎性变化。 4.2 皮肤腐蚀性(Dermal corrosion)：皮肤涂敷受试物后局部引起的不可逆性组织损伤。 5试验的基本原则 将受试物一次(或多次)涂敷于受试动物的皮肤上，在规定的时间间隔内，观察动物皮肤局部刺激作用的程度并进行评分。采用自身对照，以评价受试物对皮肤的刺激作用。急性皮肤刺激性试验观察期限应足以评价该作用的可逆性或不可逆性。 6 试验方法 6.1 受试物 液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。 受试物为强酸或强碱（pH值≤2或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50小于200mg/kg体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为5000mg/kg体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。6.2 实验动物和饲养环境 多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。实验动物至少要用4只， 如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d时间。 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用常规饲料，饮水不限制。 6.3急性皮肤刺激性试验步骤 6.3.1 试验前约24 h ，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约2cm×3cm。
化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范严重眼睛损伤/眼睛刺 激性 GB20594-2006 化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范严重眼睛损伤/眼睛刺 激性 Safety rules for classification，precautionary labeling and precautionary statements of chemicals-Serious eye damage/eye irritation 前言 本标准第4章、第6章、第7章、第8章为强制性的，其余为推荐性的。 本标准与联合国《化学品分类及标记全球协调制度》(GHS)的一致性程度为非等效，其有关技术内容与GHS中一致，在标准文本格式上按GB／T 1.1—2000做了编辑性修改。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC／TC 251)提出并归口。 本标准负责起草单位：江苏出入境检验检疫局。 本标准参加起草单位：安徽出入境检验检疫局、中化化工标准化研究所、山东出入境检验检疫局、中国疾病预防控制中心。 本标准主要起草人：汤礼军、温劲松、吕伯钦、韩德平、张君玺、卞学东、周飞舟。 本标准自2008年1月1日起在生产领域实施；自2008年12月31
日起在流通领域实施，2008年1月1日～12月31日为标准实施过渡期。 化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范严重眼睛损伤/眼睛刺激性 1 范围 本标准规定了化学品引起的严重眼睛损伤/眼睛刺激性的术语和定义、分类、判定流程、类别和警示标签、类别和标签要素的配置及警示性说明的一般规定。 本标准适用于化学品引起的严重眼睛损伤/眼睛刺激性按联合国《化学品分类及标记全球协调制度》的危险性分类、警示标签和警示性说明。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB20593-2006 化学品分类、警示标签和警示性说明安全规 范皮肤腐蚀／刺激 联合国《化学品分类及标记全球协调制度》(GHS) 联合国《关于危险货物运输的建议书规章范本》 3 术语和定义 3.1 严重眼睛损伤 serious eye damage
急性皮肤刺激试验 1 目的 确定化学品对哺乳动物皮肤局部是否有刺激作用及程度，为制定化学品对皮肤的保护措施提供依据。 2 制定依据 《化妆品卫生规范（2007版）》。 3试验方法 3.1受试样品处理 液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液。若受试物为固体，应将其研磨成细粉状，并用水或其它无刺激性溶剂充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。使用其它溶剂，应考虑到该溶剂对受试物皮肤刺激性的影响。需稀释后使用的产品，先进行产品原型的皮肤刺激性/腐蚀性试验，如果试验结果显示中度以上刺激性，可按使用浓度为受试物再进行皮肤刺激性/腐蚀性试验。 受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），可以不再进行皮肤刺激试验。此外，若已知受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50 小于200 mg/kg 体重或在急性经皮毒性试验中受试物剂量为2000 mg/kg 体重仍未出现皮肤刺激性作用，也无需进行急性皮肤刺激性试验。3.2实验动物和饲养环境 多种哺乳动物均可被选为实验动物，首选白色家兔。应使用成年、健康、皮肤无损伤的动物，雌性和雄性均可，但雌性动物应是未孕和未曾产仔的。实验动物至少要用4只，如要澄清某些可疑的反应则需增加实验动物数。实验动物应单笼饲养，试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用常规饲料，饮水不限制。 3.3急性皮肤刺激性试验步骤 3.3.1试验前约24h，将实验动物背部脊柱两侧毛剪掉，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约3cm×3cm。 3.3.2 取受试物约0.5mL（g）直接涂在皮肤上，然后用二层纱布（2.5cm×2.5cm）和一层玻璃纸或类似物覆盖，再用无刺激性胶布和绷带加以固定。另一侧皮肤作为对照。采用封闭试验，敷用时间为4h。对化妆品产品而言，可根据人的实际使用和产品类型，延长或缩短敷用时间。对用后冲洗的化妆品产品，仅采用2h 敷用试验。试验结束后用温水或无刺激性溶剂
附件4 药物刺激性、过敏性和溶血性 研究技术指导原则 一、概述 刺激性、过敏性、溶血性是指药物制剂经皮肤、粘膜、腔道、血管等非口服途径给药，对用药局部产生的毒性（如刺激性和局部过敏性等）和/或对全身产生的毒性（如全身过敏性和溶血性等），为临床前安全性评价的组成部分。 药物的原形及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质（如pH值、渗透压等）均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生，因此药物在临床应用前应研究其制剂在给药部位使用后引起的局部和/或全身毒性，以提示临床应用时可能出现的毒性反应、毒性靶器官、安全范围。 本指导原则适用于中药、天然药物、化学药物。 二、基本原则 （一）试验管理 根据《药品注册管理办法》，药物刺激性、过敏性和溶血性研究必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）。 （二）随机、对照、重复 试验设计应遵循随机、对照、重复的原则。 （三）整体性、综合性原则 应根据受试物特点，充分考虑和结合药学、药效学、其他毒理学及拟临床应用情况等综合评价，体现整体性、综合性的原则。
（四）具体问题具体分析 应在遵循安全性评价普遍规律的基础上，具体问题具体分析，结合受试物的特点，在阐明其研究方法或技术科学、合理的前提下进行规范性试验，对试验结果进行全面分析评价。 三、基本内容 （一）受试物和实验动物 1．受试物 中药、天然药物：受试物应能充分代表临床试验样品或上市药品。应采用工艺路线及关键工艺参数确定后的工艺制备，一般应为中试或中试以上规模的样品，否则应有充分的理由。应注明受试物的名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，由于中药的特殊性，建议现用现配，否则应提供数据支持配制后受试物的质量稳定性及均匀性。试验中所用溶媒和/或辅料应标明名称、标准、批号、规格及生产单位。 化学药物：受试物应采用工艺相对稳定、纯度和杂质含量能反映临床试验拟用样品和/或上市样品质量和安全性的样品。受试物应注明名称、来源、批号、含量（或规格）、保存条件及配制方法等，并附有研制单位的自检报告。试验中所用辅料、溶媒等应标明批号、规格和生产单位，并符合试验要求。 在药品研发的过程中，若受试物的工艺发生可能影响其安全性的变化，应进行相应的安全性研究。 化学药物试验过程中应进行受试物样品分析，并提供样品分析报告。成分基本清楚的中药、天然药物也应进行受试物样品分析。 2．实验动物
皮肤急性毒性试验 一.试验目的观察动物完整皮肤及破损皮肤短期内接触受试物所产生的毒性反应。 二.实验材料 1.动物：选用成年健康家兔(2kg)、白色豚鼠(300g)、白色小型猪(7kg)或大鼠(200g)。家兔 或小型猪每组4只，豚鼠或大鼠每组10只。受试动物应皮肤光滑、无损伤、无皮肤病。 2.受试物：膏剂、液体或粉末。前两者可直接试验，后者需用适宜赋形剂(如羊毛脂、凡士 林等)混匀，以保证受试物与皮肤良好接触。 三试验方法 1 受试动物皮肤制备： ①完整皮肤制备：动物在给药前24h，将背部脊柱两侧去毛，可采用剪、剃或适宜的脱毛剂，如8%Na2S等。去毛范围约相当于体表面积的10%左右，即家兔约150cm2左右，豚鼠、大鼠约40cm2左右，小型猪约300cm2。去毛后24小时检查去毛皮肤是否因去毛而受伤，受伤的皮肤不宜做完好皮肤的毒性试验。 ②破损皮肤准备：按上述方法将受试动物去毛，消毒皮肤后，用消毒手术刀做井字形划破表皮，或用砂布纸摩擦打毛皮肤等，以皮肤出现轻度渗血为度。 2 剂量选择和分组：分对照组和试验组。对照组应设赋形剂组或空白组。试验组分为完整皮肤组和破损皮肤组，各2～3个剂量组。每组动物数为家兔或小型猪4只，大鼠或豚鼠10只，雌雄各半。低剂量组以临床用制剂(含辅料)用量不低于1g或1ml，高剂量组为低剂量组的2～4倍，或各剂量组间间距根据受试物毒性大小和预试结果而定，一般以0.65～0.85为宜。根据中药具体特点，可以提高浓度或增加24小时内用药次数。若用受试物剂量超过有效浓度20倍以上，仍未出现异常反应或死亡，则只设一个高剂量组 3 给药方法及观察时间：试验时，将受试物均匀的涂敷于动物背部脱毛区，破损皮肤则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物，并用无刺激性砂布、胶布或网孔尼龙绷带加以固定。给受试物24小时后，可用温水或适当溶剂去除残留的受试物或赋形剂，每日观察，连续观察7天。给受试物时应注意，若受试物是固体粉末或中药散剂，则需加适量水或赋形剂(如羊毛脂、凡士林、橄榄油等)混匀，以保证受试物与皮肤的良好接触。如受试物时液体，除用纱布固定外，还应在其覆以聚乙烯薄膜，然后再包扎固定，以防止液体挥发。给药后，要防止动物舔食受试物。 4. 观察内容：观察动物全身中毒表现和死亡情况，包括动物体重、皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动等的变化。若有动物死亡则需进行尸检和肉眼观察。当有肉眼可见病变时，则需进行病理学检查。 四结果判断及实验报告 实验结果与对照组比较进行判断。试验报告应详细论述实验方法，列表说明分组、剂量、动物数、每日用药次数、中毒表现及死亡动物数，有死亡动物时，应报告病例解剖学及病理组织学检验报告，并与对照组进行对比评价。
红细胞溶血试验检测化妆品眼刺激性的初步研究目的探讨红细胞溶血试验在化妆品眼刺激性检测中的适用性。方法选用 9种化妆品产品进行眼刺激试验，确定家兔红细胞50%发生溶血时的化妆品浓度 （HD50值）和血红蛋白变性指数（DI，%），计算刺激指数IP= HD50/DI，以IP=HD50/DI值作为评价标准，进行眼刺激性分级。将红细胞溶血试验刺激性分级结果与家兔眼刺激试验（Draize eye test）结果进行分级一致性比较，初步分析体外试验的适用性。结果红细胞溶血试验与动物实验结果比较中，9种样品中有7种结果一致，一致率为77.8%（相关性为0.4962）。结论虽然实验结果说明两者有一定的相关性，但多方面而言，红细胞溶血试验能否真正取代动物实验还有待商榷。 [Abstract] Objective To study the red blood cell hemolysis test on the applicability of the cosmetic eye irritation test. Methods 9 kinds of cosmetic products are chosen as the subjects，and determine the subjects of rabbit red blood cell hemolysis occurs in 50% subjects （HD50）and the initial concentration of hemoglobin denaturation index （DI，%），the calculation of IP=HD50/DI，with IP=HD50/DI value as evaluation standard，make eye irritant grading. Results excitant grading erythrocyte hemolysis test and animal experiment results are compared，and grading consistency preliminary analysis the applicability of the in vitro. Results：Red blood cell hemolysis test and animal experiment result comparison，seven of nine subjects content is consistent，consistent rate was 77.8%（probability=0.4962）.Conclusion Though the experiment results show that both have certain relevance，but many ways，red blood cell hemolysis test failed to truly replace animal testing. [Key words] Cosmetics；Eye irritation trial；Alternative methods；Red blood cell hemolysis test 眼刺激性是指动物的眼睛表面（包括角膜，巩膜及结膜部分）接触到化学物质从而产生炎症反应的过程，这个过程有可逆的，也有不可逆的。化妆品眼刺激性安全评价方法目前多用家兔试验即兔的眼刺激性试验（Draize eye test），该实验方法于1944年建立，目前仍是测定急性眼毒性的国际标准，但由于该试验依靠实验人员肉眼观察评分给出结果，存在一定的主观性；同时实验室与实验室之间的变异性也使该试验存在一定误差。而且近年来从动物保护和动物福利的角度出发，国际上多种替代动物实验的体外实验已经建立并被验证成为检测标准[1-4]。 红细胞溶血试验已经被纳入到欧洲委员会/英国内务府开展的替代家兔眼刺激试验之一，日本（Japanese ministry of health and welfare，MHW）/JCIA也已经在6～9个实验室进行了类似试验，结果显示[1]，红细胞溶血试验的实验室间的重复性较好。尽管它与兔眼刺激性试验中的MAS值的相关性不够强（-0.631），但仍可比较确定的从样品中分辨出强刺激物。
实验三一次给药皮肤刺激实验 一、实验目的 掌握皮肤染毒技术，了解受试物对皮肤是否有刺激或腐蚀作用。 二、实验器材 1、实验动物： 小鼠24只，每组4只 2、材料 共用：剃毛器1把、剪毛剪2把、记号笔1支、透明胶1卷、纯桉叶油素10 mL、50%桉叶油素10 mL、25%桉叶油素10mL、3%吐温80 10mL、清洁温水500 mL 每组：长镊子1支、医用手套2双、、注射器（1 mL）1支、烧杯（50 mL）1个、纱布（1.5 cm×1.5 cm）8张。 三、实验内容与步骤 1、保定：一人用一手抓住小鼠颈部皮肤，另一手抓住小鼠尾部，轻轻按住固定在操作台面上。 2、剃毛：小鼠保定后，一人用电动剃毛剪将小鼠背部脊柱两侧的毛剃净，不可损伤表皮，去毛范围左、右各约2 cm×2 cm。注意需将皮肤绷紧，把剪刀贴紧皮肤剪，但不可用手提起被毛，以免剪破皮肤；依次剪毛，不要乱剪；剪下来的被毛集中在一个装水的烧杯内，勿遗留在和操作台周围。 3、破损皮肤的制备：给药前24 h，用75%酒精消毒小鼠裸露皮肤部位，用消毒针头在剃毛部位做“井”字状划划痕，划破皮肤，以有组织液和血液渗出为度。 3、染毒：吸取1 mL受试物滴于两层灭菌纱布（1.5 cm×1.5 cm）上，将浸有受试物的纱布覆盖在左侧裸露皮肤区域，用透明胶布固定，右侧皮肤以3%吐温80为对照。 4、观察：一次给药4 h后，以温水洗去残留受试物，观察1 h，24 h、48 h、72 h涂抹部位的红斑和水肿等反应。按表1进行皮肤反应评分，以受试动物积分的平均值进行综合评价，将观察结果填入表3中。 5、结果判定：根据24、48和72 h各观察时点最高积分均值，按表2判定皮肤刺激强度。 6、实验分组：见表4 四、注意事项 在实验操作过程中，注意安全，以免被小鼠咬伤，防止小鼠丢失；实验使用的有毒化学药品妥善处理；做好实验观察记录。 五、思考题 皮肤刺激实验与皮肤毒性实验有何区别？
急性毒性试验 动物急性毒性试验研究动物一次或24小时内多次给予受试物后，一定时间内所产生的毒性反应。拟用于人体的药物通常需要进行动物急性毒性试验。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，急性毒性试验处在药物毒理研究的早期阶段，对阐明药物的毒性作用和了解其毒性靶器官具有重要意义。急性毒性试验所获得的信息对长期毒性试验剂量的设计和某些药物Ⅰ期临床试验起始剂量的选择具有重要参考价值，并能提供一些与人类药物过量急性中毒相关的信息。 急性眼睛刺激性／眼睛腐蚀性试验（巴豆油或甲醛） 定义: 眼睛刺激性：指眼球表面接触受试样品后产生的可逆性炎性变化。 眼睛腐蚀性：指眼球表面接触受试样品后引起的不可逆性组织损伤 试验基本原则： 1 受试样品以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照； 2 在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试样品对眼睛的刺激作用。观察时间应能足以评价刺激效应的可逆性和不可逆性。观察时间最少72h，但一般不超过21d； 3 当动物出现严重和持久的痛苦迹象时，以适当的方式将动物处死； 4 强酸或强碱物质如pH≤2或pH≥11.5，由于其可预见的腐蚀特性，不必做本试验； 5 已在皮肤试验中证实具有腐蚀或严重刺激毒性的物质不必进行眼刺激试验，可以推测该物质对眼睛将会引起相似的严重结果； 6 在充分并公认的体外试验结果中确定可能产生刺激性或腐蚀性的物质不必进行体内试验。 目的：检测外来化合物对实验动物眼和粘膜得原发性刺激和腐蚀作用的急性试验，为人类眼和粘膜接触该受试物的潜在危害提供资料。 实验动物：首选成年白色家兔（如果使用其它的哺乳动物做试验，试验者应提供选择的依据【应选择与人类皮肤、粘膜反应比较相近的动物，常用的动物有家兔、豚鼠。动物种属的选择应依据要观察的指标和模型的合理性。通常一个试验类型选择一种动物进行评价。】），体重2～3kg，至少3只（如果受试样品的显著效应是可预见的，可以考虑用一只动物。如果用一只动物试验得出的结果提示受试样品有严重的刺激性和腐蚀性，则不必进行进一步的试验。如果结果相反，则至少需要3只家兔。有时，在增加动物的进一步试验中应该适当的阐明可疑反应。）。试验前动物要在动物实验室环境中至少适应3d时间。试验前24h，要对实验动物的两只眼睛进行常规检查。有眼睛刺激症状、角膜缺陷或结膜损伤的动物不能用于试验。
０引言 太极贴以当归、干姜、冰片、生草乌、生川乌、麻黄、三七、红花、樟脑为原料，经加工而成，具有使用简便、有效、价廉特点，把药物贴敷于机体的相应穴位，使药物刺激穴位、疏通经络而调节机体的功能状态[1]。在临床上用于治疗骨质增生，颈椎病，关节炎，肌肉疼痛，急、慢性扭、挫伤。本文主要对太极贴的家兔多次皮肤刺激试验进行观察[2]，为临床用药安全及相关刺激性研究提供依据。 １材料 1.1受试样品 由某公司提供的太极贴(一种膏贴)。 1.2受试物处理 把原样品剪成2.5cm×2.5cm大小用于试验。 1.3实验动物和饲养环境 普通级日本大耳兔3只，体重2300—2500g，皮肤完好健康，由南昌龙平兔业有限公司提供，实验动物生产许可证号：SCXK（赣）2009-0001。实验兔饲养在本疾控中心动物实验室，实验动物使用许可证号：SYXK(赣)2007-0001。室温21.6—24.5℃，湿度40.0%～70.0%RH，单笼饲养。 ２方法 2.1实验方法 实验前24h把动物背部脊柱两侧被毛剪去，每块面积约3cm×3cm，实验时将受试物2.5cm×2.5cm样品贴在一侧去毛区，另一侧为空白对照，在斑贴后4h，用水清洗，去除残留物。每天斑贴一次,连续斑贴14天，每次斑贴后24h观察结果。 2.2评分与计算 按《消毒技术规范》（2002年版）中皮肤刺激反 太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析 ＲｅｓｕｌｔｓａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＤｅｒｍａｌＩｒｒｉｔａｔｉｏｎＴｅｓｔｏｆＴａｉＣｈｉＳｔｉｃｋｅｒｓｏｎＲａｂｂｉｔ＇ｓｋｉｎ 肖岗夏芝璐曾立爱谌乐礼蔡宏丁晟 Xiao Gang Xia Zhilu Zeng Liai Shen Yueli Cai Hong Ding Sheng （江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029） （Jiangxi Province Center for Disease Control and Prevertion，Jiangxi Nanchang330029） 摘要：目的：对太极贴进行动物多次皮肤刺激试验，为其提供使用前安全性评价。方法：用太极贴斑贴家兔完整皮肤，每天一次，连续斑贴14天，并逐日观察症状表现。结果：太极贴对家兔的刺激评分为2.2分。结论：太极贴对家兔刺激反应强度为中度，有可能对使用者敷用部位产生刺激作用，长期使用可能对使用者身体造成不良影响。 关键词：多次皮肤刺激；家兔 中图分类号：R-332文献标识码：A文章编号：1671-4792（2012）12-0209-02 Ａｂｓｔｒａｃｔ：Objective：To evaluate the dermal irritation test of Tai Chi stickers to animals'skin，and to provide safety evaluation of pre-application．Methods:The rabbits healthy skin were locally treated with Tai Chi stickers for14days continuously，and their symptoms were observed day by day．Results:The stimulation scores of type3of Tai Chi stickers were2.2．Conclusion:Tai Chi stickers has moderate irritation on rabbits'skin，and long-term use may adversely affect the health of user's body. Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Dermal Irritation Test；Rabbits 太极贴对家兔多次皮肤刺激试验的结果和分析 ２０９
编号：第1 页共 3 页 题目：家兔眼刺激试验标准操作规程 编写者：日期：审核者：日期： QAU确认：日期：批准者：日期： 生效日期：取代：ORT-501 1 试验目的: 观察家兔眼睛一次或多次接触受试药后所产生的刺激反应情况和恢复情况，为临床用药提供科学依据。 2 试验前准备: 参照皮肤刺激试验前的准备的标准操作规程（CIT-502）。 3 家兔标记： 参照皮肤刺激试验动物标记的标准操作规程（CIT-503）。 4 笼标记： 参照皮肤刺激试验动物笼标记的标准操作规程（CIT-504）。 5 家兔称重： 参照皮肤刺激试验动物称重标准操作规程（CIT-505）。 6 给药方法 6.1每组用家兔3只以上，采用同体左右侧自身对比法。 6.2 动物试验前检查：试验前24小时内用裂隙灯或放大镜与荧光素染色检查，记录眼结膜血管、角膜透明度及眼分泌物等状况，选用正常者供试。 6.3剂量选择：受试物浓度一般用原液或原膏剂，每只眼睛滴入0.1ml或涂敷0.1g 受试物。 6.4 给受试物及观察： 6.4.1观察方法：使用在整个观察过程中进行荧光素染色检查，将荧光素钠药液滴于角膜，1～5分钟后以灭菌生盐水冲洗，然后检查，如有病变处或异物其周围即出现有一黄绿色的荧光环，以明确定位和诊断。 6.4.2 单次眼刺激试验： 试验时将受试物一次性滴入或涂敷于动物一侧眼睛内，另一侧作为空白（或赋形剂）对照。给受试物后轻合眼睑约10秒。在给药后1、2、4、24、48
编号：第2 页共 3 页 和72小时对眼部进行检查，也可根据受试物的特点适当调整观察时间；。 6.4.3 多次眼刺激试验： 每天给受试物次数与临床用药频率相同，给药期限根据受试物拟用于临床的情况决定。每天给药前以及最后一次给药后1、2、4、24、48和72小时对眼部进行检查，也可根据受试物的特点适当调整观察时间。如果在72小时未见任何刺激症状，试验则可结束。如存在持久性损伤，有必要延长观察期限，但一般不超过21天。 7 结果判定与评价： 7.1 眼刺激反应评分：按表1眼刺激反应分级标准评分。 7.2 眼刺激性评价：按表2进行眼刺激强度的评价。 7.3 除了观察所列出的结膜、角膜和虹膜损伤外，其他所观察到的损伤也应 记录和报告。 表1 眼刺激反应评分 眼刺激反应分值 角膜混浊（以最致密部位为准）： 无混浊0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 1 半透明区易分辨，虹膜模糊不清 2 3 出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小 勉强看清 角膜不透明，由于混浊，虹膜无法辨认 4 虹膜： 正常0 1 皱褶明显加深，充血、肿胀、角膜周围有轻度充 血，瞳孔对光仍有反应 2 出血、肉眼可见坏死、对光无反应（或出现其中 一种反应） 结膜： A.充血（指睑结膜、球结膜部位） 血管正常0 血管充血呈鲜红色 1
中药退黄外洗液皮肤给药刺激性试验 作者：黄仕孙，高桂娥，吴曙粤，曾宪彪，王艳宁，余莉玲 【摘要】目的：观察婴幼儿使用的院内制剂中药退黄外洗液对豚鼠的皮肤刺激性。方法：中药退黄外洗液以29.6 g和7.4 g生药/kg （为临床剂量的40倍和10倍）给豚鼠分别作单次和多次完整皮肤和损伤皮肤刺激性试验，用药后测量豚鼠体重，观察外观体征、行为活动、进食、排泄等一般情况，并作受药部位皮肤组织病理学检查。结果：中药退黄外洗液高、低剂量组单次或多次接触豚鼠，其外观体征、行为活动、体重和皮肤组织病理学检查与空白对照组无显著差异。结论：本品短期内对豚鼠无刺激性，表明临床拟用剂量用于局部或全身皮肤是安全的。 【关键词】中药退黄外洗液；皮肤给药;刺激性试验；豚鼠 ［Abstract］Obtective:To observe the reaction to Chinese herbal jaundice-abating lotion applied on Guinea pigs’skin which was developed by the first people hospital for infant external use.Methods:The healthy skin and the wounded skin of the Guinea pigs were treated with Chinese herbal jaundice-abating lotion with the doses of 29.6 g and 7.4 g raw materials/kg (40 and 10 times that of the practical
五、皮肤变态反应试验操规 目的 确定重复接触化妆品及其原料对哺乳动物是否可引起变态反应及其程度。 范围 本操规用于动物皮肤变态反应试验的基本方法。 本操规适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。 1 依据 中华人民共和国卫生部《化妆品卫生规范第二部分第6章：皮肤变态反应试验》 中华人民共和国国家标准《GB/T16886.10-2005医疗器械生物学评价第10部分：刺激 与迟发型超敏反应试验》。 2 设备与耗材 2,4-二硝基氯代苯，肉桂醛，2-巯基苯并噻唑或对氨基苯酸乙酯，弗氏完全佐剂、无菌水、80%乙醇、丙酮、刮毛器、脱毛膏、EP管外科手套、口罩、手术服、不同规格无菌注射器、一次性无菌纱布等。 3 受试动物 3.1 来源：西安交通大学实验动物中心 3.2 动物种类：白化豚鼠20只：300～500 g，2~3月龄，雌雄兼半，雌鼠无孕。 3.3 饲养条件：全价营养颗粒饲料喂食，自由采食，自由饮水，室温21±2℃，相对湿度40~70% 。 4试验步骤 4.1材料制备 受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。水溶性受试物可用水或用无刺激性表面活性剂作为赋形剂，其它受试物可用 80%乙醇（诱导接触）或丙酮（激发接触）作赋形剂。 4.2试验方法 4.2.1 试验准备 a.取白化豚鼠20只，随机分成2组，对照组（10只），试验组(10只）、。适应环境一周后，正式试验前一天，每只豚鼠背前区备皮4cm×6cm。 b. 无论在诱导阶段或激发阶段均应对动物进行全面观察包括全身反应和局部反应，并作完整记录。
c.试验方法可靠性的检查：实验开始前选两只备用豚鼠，使用4.2.1的局部诱导阶段方法进行预实验确定实验的可行性。 4.2.1 试验过程 （1）试验前约 24h，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为 4cm2~6cm2。 （2）局部诱导阶段 对去毛区域采用75%酒精消毒，覆盖5层约8cm2的滴加适量样品浸提液的擦镜纸，使其贴敷在肩胛骨内侧皮肤上，再依次覆盖3*3cm大小的塑料薄膜、纱布，再用医用无刺激胶带固定使其不脱落封闭固定 6h。。观察记录敷贴后动物异常情况，第 7d 和第 14d 以同样方法重复一次。(对照组按照同样方法进行) (3 )激发阶段 末次诱导后 14d~28d，将约 0.2mL 的受试物涂于豚鼠背部右侧 2cm×2cm去毛区（接触前 24h 脱毛），然后用二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布固定 6h。(对照组按照同样方法进行) （4）动物观察 激发接触后 24h和 48h 观察皮肤反应，按照表1给出的分级标准对每一激发部位和每一观察时间皮肤红斑和水肿反应进行描述和分级，将观察结果填写至表2. 表1变态反应实验皮肤反应评级