红花注射液复合黄芪注射液对大鼠肠缺血再灌注损伤的实验研究
（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）
作者：高永刚，王宏磊，武继军
【摘要】目的观察红花注射液复合黄芪注射液对肠缺血再灌注损伤肠黏膜保护效应。方法采用肠系膜上动脉(SMA)夹闭45 min后松夹方法制备肠缺血再灌注损伤动物模型。将Wistar大鼠随机分为假手术组、单纯肠缺血再灌注组及红花注射液复合黄芪注射液治疗组(注射液治疗组，以下同)。假手术组分离SMA但不夹闭，45 min后取血并活杀动物;其余两组分别松夹形成血流再灌注，缺血再灌注组从尾静脉注射0.15 ml生理盐水，注射液治疗组则从尾静脉给予注射液。于再灌注后0.5，0，2，6，12和24 h取血检测血浆D乳酸水平;活杀动物后取小肠组织行苏木素伊红(HE)染色，光镜下观察组织病理形态学改变;观察两组大鼠肠缺血再灌注损伤后不同时间点的存活率。结果与单纯肠缺血再灌注组各时间点比较，注射液治疗组动物存活率均高于对照组，以24 h最为显著，有统计学意义(P0.05);血浆D乳酸水平于再灌注后1 h则明显低于缺血再灌注组，至24 h仍呈降低趋势(P均0.05);小肠黏膜病理形态学改变较缺血再灌注组轻。结论红
花注射液复合黄芪注射液对肠缺血再灌注损伤有保护作用，其机制可能与红花和黄芪抗自由基作用有关。
【关键词】红花注射液; 黄芪注射液; 肠缺血再灌注损伤; D乳酸在腹部外伤、失血性休克、严重创伤、感染、烧伤等病理状态下,往往存在肠道缺血再灌注损伤和功能障碍,肠屏障功能降低,肠内细菌和毒素通过受损的肠黏膜进入体循环,激活网状内皮系统,引起大量炎症介质和细胞因子释放,造成全身炎症反应综合征(SIRS),甚至发生多器官功能衰竭(MOF)。采取有效措施避免或减少肠道损害有重要作用。本实验中利用大鼠肠系膜上动脉(SMA)夹闭模型,研究全身给予红花注射液复合黄芪注射液对肠道缺血再灌注损伤后肠道的保护作用,探讨其可能的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物模型制作及分组选择健康的Wistar大鼠(提供)150只,平均体质量(220±20)g,适应性饲养5 d,手术前12 h禁食,自由饮水。其中78只动物随机分为假手术组(n=6),单纯肠缺血再灌注组(n=36)以及注射液治疗组(n=36)。根据缺血再灌注的时间,又分成0.5，1，2，6，12和24 h等6组,每组6只。采用SMA夹闭致缺血45 min后松夹复制肠道再灌注模型。经腹腔注射质量分数为3%的戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉后,在无菌条件下开腹,钝性分离SMA根部。假手术组仅分离SMA根部但不夹闭;其余动物用微血管夹夹闭SMA根部,完全阻断血流45 min,然后松夹,恢复肠道血流形成再灌注。肠缺血再灌注组和注射液治疗组分别于SMA夹闭45 min后松夹,即刻从尾静脉注射
生理盐水(0.15 ml)或红花注射液和黄芪注射液(每只黄芪注射液0.6 ml·kg-1合红花注射液1 ml·kg-1混匀注射)进行预处理。取静脉血,离心后分离血浆, 70℃低温保存待测。按设定时间点活杀动物,取距离回盲部上端10 cm以上的肠管,用体积分数为10%的中性甲醛固定,石蜡包埋,4℃保存待用。另72只大鼠予以同等程度肠缺血再灌注损伤处理,观察大鼠存活情况。
1.2 观察指标及方法
1.2.1 观察肠缺血再灌注损伤后大鼠存活情况72只大鼠予以肠缺血再灌注损伤处理后,于再灌注2，6，12，24和48 h各时间点观察大鼠存活情况。
1.2.2 血浆D乳酸检测以改良Brandt方法[1]测定血浆D乳酸浓度。
1.2.3 肠道组织学检查取经10%中性甲醛固定、石蜡包埋的小肠组织切片,苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察小肠组织病理学变化。小肠损伤程度用Haglund等[2]报道的积分法评估。0分为正常绒毛和腺体;1分为部分绒毛顶部上皮轻度受损;2分为上皮下腺体轻度受损;3分为上皮下间隙扩大,毛细血管充血;4分为上皮与固有层中度分离,腺体受损;5分为部分绒毛顶部脱落;6分为绒毛脱落明显,毛细血管扩张;7分为固有层绒毛脱落,腺体受损明显;8分为固有层开始消化分解;9分为出血、溃疡。
1.3 统计学方法χ2检验比较注射液治疗组与肠缺血再灌注组间大鼠存活率的变化。血浆D乳酸浓度检测结果及小肠损伤程度积分
以±s表示,采用完全随机设计资料方差分析,用q检验,P0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肠缺血再灌注后大鼠存活率结果见表1。注射液治疗组各时间点动物存活率均高于肠缺血再灌注组,其中24 h组间比较差异有统计学意义(P0.05)。表1 注射液对肠道缺血再灌注后大鼠存活率的影响
2.2 血浆D乳酸浓度水平变化结果见表2。肠道缺血性损伤可使血浆D乳酸水平明显升高,与缺血前相比,有显著性差异(P0.01)。肠道缺血再灌注损伤后0.5 h时即已出现血浆D乳酸水平明显升高,随时间延长,血浆D乳酸水平逐步升高,于肠缺血再灌注12 h达高峰,以后逐渐下降,24 h已恢复高峰值的1/2以下,但仍然高于缺血前的血浆D乳酸水平。与肠缺血再灌注组比较,注射液治疗组肠缺血再灌注0.5 h时,血浆D乳酸水平比肠缺血再灌注组高,随再灌注时间延长,注射液治疗组血浆D乳酸水平明显降低。两组间比较有显著性差异(P0.05)。提示注射液治疗组有明显减轻肠道再灌注损伤作用。
2.3 肠道组织病理学变化光镜下见假手术组肠道黏膜细胞排列基本整齐,结构完整,无组织坏死、缺失及水肿。肠缺血再灌注组可见小肠黏膜上皮下间隙扩大,腺体受损及毛细血管充血、水肿,再灌注1～2 h肠道组织出现部分肠绒毛脱落、炎细胞浸润,6 h有大量绒毛脱落、糜烂、炎性细胞浸润、肠道组织结构破坏。注射液治疗组各时间点病理损伤较肠缺血再灌注组减轻。各组小肠缺血再灌注损伤程度
积分比较见表3。表2 注射液对肠缺血再灌注后大鼠血浆D乳酸水平的影响表 3 注射液对缺血再灌注损伤大鼠肠黏膜损伤程度的保护作用
3 讨论
实验结果表明,肠道缺血再灌注损伤对消化道局部造成损害,大体标本可见肠道充血、水肿、出血、坏死,肠腔内可见糜烂、出血、溃疡;常规HE染色病理切片可见肠绒毛毛细血管扩张、淤血,肠腺上皮细胞水肿、坏死、脱落。由于肠绒毛缺血坏死、脱落、通透性增加,肠道屏障功能大大降低,表现为肠道细菌特有代谢产物D乳酸进入体循环,使血浆D乳酸水平成倍地升高。D乳酸是肠道内细菌发酵产生的一种物质,哺乳动物组织不产生D乳酸,且缺乏代谢该物质的酶系统,不能代谢该物质。在肠道屏障功能正常时,血浆D乳酸水平极低,只有当肠屏障遭受破坏时,D乳酸透过肠屏障入血,使血浆D乳酸快速升高。因此,血浆D乳酸水平可间接反映肠道屏障功能好坏,可作为肠道损伤指标之一。本结果显示,肠道缺血再灌注损伤后0.5 h,血浆D 乳酸水平即明显升高,再灌注6 h时成倍升高,12 h达到高峰,以后逐步下降恢复。血浆D乳酸水平变化曲线与光镜下所见肠黏膜上皮结构破坏严重程度一致。由于肠道内细菌和毒素可经过受损伤的肠屏障入体循环,刺激网状内皮系统,引起大量炎症介质和细胞因子释放,因此易导致多器官功能障碍综合征(MODS),表现为肠缺血再灌注损伤后,动物存活率明显下降。本组再灌注损伤后12 h动物存活率为53%,24 h降为25%,48 h仅为14%。
研究表明，失血再灌注后产生大量氧自由基导致组织氧化损伤是肠黏膜损伤的重要机制。在缺血期,肠黏膜中丰富的黄嘌呤脱氢酶转化为黄嘌呤氧化酶,腺苷酸分解代谢为次黄嘌呤,细胞ATP耗尽,导致ATP依赖的离子通道调节失效,使K+和Mg2+扩散出细胞,Na+、Ca2+、水进入细胞,引起细胞水肿。再灌注期,氧随着血流的恢复进入缺血组织,在黄嘌呤氧化酶的作用下次黄嘌呤与氧分子作用生成黄嘌呤,最终生成尿酸。在这一过程中释放大量的氧自由基。在生理情况下，氧自由基可通过相互碰撞而猝灭，也可与生物体内一些天然自由基清除剂或抗氧化剂作用，从而终止连锁反应。当机体缺血再灌注过程中，自由基产生过多或酶性保护系统等活性低下、抗氧化作用下降，即可引发脂质过氧化损伤[3]。
红花注射液复合黄芪注射液给予后,早期可一过性加重肠道缺血再灌注损伤,表现为注射液组的血浆D乳酸水平高于对照的肠缺血再灌注组〔(0.465±0.065)mmol/L比(0.332±0.100)mmol/L〕，其机制可能与红花注射液与黄芪注射液的舒血管活性作用有关。红花具有明显扩张外周血管、冠状血管、脑血管和肠血管的作用。由于缺血后再灌注和红花扩血管共同作用,使肠道微血管床大量开放,使氧供剧增,通过肠道富含的黄嘌呤和次黄嘌呤氧化酶系统产生大量的氧自由基,加重肠黏膜损伤。但随着再灌注时间的延长,红花注射液复合黄芪注射液可明显减轻大鼠缺血再灌注损伤,24 h动物存活率上升至47%;而血浆D乳酸水平则明显降低。光镜下肠上皮黏膜组织结构损伤程度减轻。其机制可能与红花注射液复合黄芪注射液清除自由基作用有
关。王海华[4]、张灼等[5]分别应用大鼠离体工作心脏模型研究黄芪注射液、黄芪皂苷对心肌缺血再灌注损伤的影响，结果发现黄芪注射液预处理对大鼠离体心肌再灌注损伤有明显保护作用，与非创伤性肢体缺血预处理的保护作用相似。黄芪皂苷能改善再灌注后心脏血流动力学的变化，且有显著的扩冠作用。两者均能提高心肌组织中 SOD 活性，减少心肌组织中的脂质过氧化物，增强心肌的抗氧化能力、稳定心肌的膜相结构。体内实验研究发现黄芪预处理不仅能够保护细胞中 SOD酶活性和超微结构，而且能诱导心肌细胞热休克蛋白 HSP70的表达，从而减少缺血再灌注心肌损伤[6]。徐持华[7]等研究了红花黄色素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用,实验结果显示,红花黄色素能使各种内源性抗氧化酶(SOD、谷胱甘肽过氧化物酶)不同程度的升高,降低脂质过氧化反应的发生,减少脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的生成,减少缺血心肌自由基生成并阻止自由基损伤。红花注射液复合黄芪注射液对小肠缺血再灌注损伤的保护作用也可能是类似的机理，值得进一步研究。
【参考文献】
[1] Qin Renyi,Zou Shengquan,Wu Zaide,et al.Influence of splanchnic vascular infusion on the content of endotoxins in plasma and the translocation of intestinal bacteria in rats with acute hemorrhage necrosis pancreatitis[J].World J Gastroenterol,2000,6:577.
[2] Haglund U,Osterberg J.Local consequences of reperfusion in gut. In:Pierce A,Robert T.Ischemia reperfusion injury[M].Oxford UK:Blackwell Science,1999：65.
[3] 丘瑞香,贺敬波,蓝军,等.中药复方心脉通胶囊的抗心肌缺血疗效与机制[J].中山大学学报(医学科学版),2001,22(1):57.
[4] 王海华,戚仁斌,殷慧群,等.黄芪预处理对离体心脏再灌注损伤的保护作用[J].中药药理与临床,2001,17(4):21.
[5] 张灼,陈立新,秦腊梅,等.黄芪皂苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤血流动力学和氧自由基的影响[J].中国中医药信息杂志,2000,7(3):7.
[6] 程桂荣,易胜中.黄芪预处理大鼠心肌保护效应的实验研究[J].高血压杂志,2001,9(4):316.
[7] 徐持华,张善峰,马二民.大鼠心肌缺血再灌注损伤与红花黄色素的保护作用[J].中国临床康复,2005,9(43):93
大鼠心肌缺血/再灌注损伤 【实验目的】 1.复制大鼠在体与离体心肌缺血/再灌注损伤模型； 2.观察缺血/再灌注过程中心功能的变化 【实验动物】成年Wistar 大鼠（体重200－300g） 【仪器药品】 电子天平，肾形盘，动物呼吸机，BL-420F记录装置，眼科开睑器，微血管钳，组织镊，眼科镊，组织剪，眼科剪，眼科止血钳，止血钳，动脉夹，眼科缝合针，1号及00缝合线。Langedroff灌流装置。 20%乌拉坦，1ml注射器，5ml 注射器，纱布块 实验1 在体模型 【实验步骤】 1.实验采用体重200-300ｇ健康雄性Wistar大鼠，20%乌拉坦腹腔注射麻醉（0.5ml/100g）； 2.颈胸部备皮及手术，分离气管及右侧颈总动脉 3.气管插管连接呼吸机（呼吸肌参数：潮气量9ml，呼吸比=3:2，呼吸频率55~60） 4.经右侧颈总动脉逆行插管至左心室, 再经BL-420F软件输入计算机,（一通道描记心 电，（右上黄、右下黑、左下红）二通道描记心室内压，三通道描记微分）持续监测心脏左心室内压力及心电的变化情况 5. 沿胸骨左侧剪开2，3肋骨，开睑器开胸暴露心脏；寻找冠状动脉左前降支，穿线备 用; 6.采用结扎5min后再放开5min两次,造成缺血预处置；采用结扎30mim再放开30min 复制缺血/再灌注模型； 思考题： 1.如何判定缺血模型复制成功 2.如何判定有再灌注损伤发生
实验2 离体模型 【实验步骤】 (1) 大鼠称重，腹腔注射20%乌拉坦（0.5ml/100g）麻醉，仰卧固定于鼠板，上腹部及前胸部剪毛。 (2) 舌下/阴茎背静脉注入1%肝素（0.05ml/100g）后，切开胸腹部皮肤，用剪刀横行剪开腹腔，向上剪断隔膜，沿两侧肋骨向上平行剪开，翻起前胸壁，把心脏及胸膈周围的结缔组织拨到一侧，充分暴露心脏。 (3) 用镊子提起心脏根部，暴露出主动脉和肺动脉，在距主动脉起始部0.5cm处用手术剪切断血管，迅速取出心脏至于4℃生理盐水平皿中使之停搏。 (4) 经主动脉将心脏悬挂在灌流装置上，用丝线结扎固定，打开灌流液行逆向灌流，待心脏恢复自主跳动，小心减去心脏周围附着组织。 (5)用眼科剪剪去左心耳，通过左心耳经房室瓣插入左心室一乳胶球囊，球囊连接一个内充生理盐水的导管，导管经三通管和换能器与BL-420F连接。 (6) 在BL-420F仪的监测下，通过向球囊内注入一定量的生理盐水是左心室的舒张末压调整在0~10mmHg之间。 (7)连接心电导线，心尖、右心耳和地线，一通道设置记录， (8) 预灌流10~20分钟，观察心率，二通道记录心室内压、三通道取微分记录±dp/dtmax 等心动指标，同时描记ECG，待上述各指标平衡后开始以下实验。 心肌缺血-再灌注损伤 (1) 心脏用正常灌流液预灌流15分钟后完全停灌40分钟，然后恢复灌流20分钟，观察心脏在正常，停灌初期和再灌期的心功能变化。 (2) 分别收集正常灌流时，再灌流后3分钟时的心脏冠脉流出液1ml，测定其中乳酸脱氢酶的活性。 思考题： 1.如何判定缺血模型复制成功 2.如何判定有再灌注损伤发生
兔急性肠道缺血再灌注损伤模型的建立 【摘要】目的建立小肠急性缺血再灌注损伤模型，确定合适的肠系膜上动脉阻断时间。方法将70只新西兰兔按不同的肠系膜缺血时间（0、15、30、45、60 min）分为A、B、C、D、E共5组，每组14只。每组取8只于恢复血供2 h后留取兔下腔静脉血标本及肠组织，检测血清中丙二醛（MDA）含量的变化，光镜下观察小肠组织形态学变化并对小肠黏膜损伤程度进行评分。另6只兔用于术后24、48、72 h 生存率的观察。结果 A、B、C组的术后生存率均>83.3%。C、D、E 组的MDA含量及肠黏膜损伤评分与A组比较，差异均有显著性（F=12.13、280.24,P<0.01）。结论肠系膜缺血30 min再灌注2 h 是建立兔小肠急性缺血再灌注损伤的合适时间。 【关键词】肠；缺血；再灌注损伤；模型,动物 ［ABSTRACT］Objective To create a model of acute intestinal ischemia reperfusion injury in rabbits so as to determine suitable blocking duration of superior mesenteric arteries (SMA). Methods Seventy rabbits were divided into five groups as groups A, B, C, D, and E, based on the different blocking durations of SMA for 0, 15, 30, 45 and 60 minutes, respectively, with 14 rabbits in each group. Eight of the rabbits in each group were detected for serum levels of MDA 2 h after recovery of blood supply, the changes of histomorphology of small intestine observed light microscopically. The other six
缺血再灌注损伤 一、A型题 1. 缺血再灌注损伤是 A.缺血后恢复血流灌注引起的后果 B.缺血后恢复血流后引起更剧烈的损伤 C.无钙后用含钙溶液灌注引起的组织损伤 D.缺氧后用富含氧溶液灌注引起的组织损伤 E.是缺血的延续 2. 缺血再灌损伤可见于 A.心 B.脑 C.肾 D.肺 E.各种不同组织器官 3. 心脏缺血再灌损伤时不会出现 A.心律紊乱 B.心肌舒缩功能可逆性一时性丧失 C.心肌静息张力降低 D.心室收缩峰压降低 E.心肌收缩带 4. 缺血再灌注损伤的发生机制中最主要的、为人们公认的是 A.无复流现象 B.高能磷酸化物缺乏 C.钙超载 D.氧自由基损伤 E.白细胞作用 5. 钙超载的发生不是因为 A.细胞浆内结合钙转为游离钙 B.细胞内钠↑ C.细胞膜通透性↑ D.肌浆网摄钙功能↓ E.细胞膜钙泵功能障碍 6. 缺血再灌损伤时白细胞的作用不是 A.增加血管通透性引起水肿出血 B.增加吞噬清除坏死组织 C.嵌塞微血管堵塞血流 D.产生自由基损伤组织 E.释放溶酶体酶破坏组织 7. 缺血再灌损伤时O2.- 产生增加的途径有 A.黄嘌呤脱氢酶催化次黄嘌呤氧化 B.脂质过氧化反应 C.白细胞髓过氧化物酶作用 D.儿茶酚胺经单胺氧化酶氧化 E.以上都不是 8. 下列哪个不是自由基 A.H2O2 B.超氧阴离子 C.OH· D.LOO· E.L· 9. 黄嘌呤氧化酶主要存在于 A.巨噬细胞内 B.结缔组织细胞内 C.内皮细胞内 D.白细胞内 E.肌细胞内10．缺血-再灌注损伤发生的原因主要是： A．血管痉挛，组织缺血；B．血管内血栓形成，阻断血流； C．器官在缺血耐受期内恢复血流；D．器官在可逆性损伤期内恢复血流；E．以上都不对。 11．下述何种不会有缺血-再灌注损伤？ A．冠脉搭桥术后；B．体外循环后； C．器官移植后；D．心肌梗塞后； E．心肺复苏后。 12．钙反常损伤程度主要与： A．无钙灌注的时限有关；B．灌注液的温度有关； C．灌注液的PH有关；D．再灌注时钙浓度有关； E．再灌注时的氧分压有关。
第20卷 第4期2005年8月 内蒙古民族大学学报(自然科学版) Journal of Inner Mongolia University for Nationalities Vol.20 No.4 Aug.2005肠缺血再灌注损伤的防治研究进展Ξ 马玉山,罗 力 (内蒙古医学院第一附属医院普外科,内蒙古呼和浩特 010050) 摘 要:本文概述了肠缺血再灌注损伤的可能机理及其预防和治疗措施. 关键词:缺血再灌注损伤;肠 中图分类号:R656.7R364.1 文献标识码:A 文章编号:1671-0185(2005)04-0452-04 The Progress of Prevention and Therapy in Ischemia R eperf usion Injury of Intestine MA Yu-shan,L UO Li (G eneral Surgery Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical College,Hohhot010050,China) Abstract:This review was performed to summarize the possible mechanism and therapy in is2 chemia reperfusion injury of intestine. K ey w ords:Ischemia reperfusion injury;Intestine 肠缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,简称I/R)是外科实践中常见的组织器官损伤之一,在严重感染、创伤、休克、心肺功能不全以及小肠移植的病理演变过程中起重要作用.近年来许多研究表明肠缺血再灌注损伤不仅可以引起消化道局部的组织损害,而且可以导致肠内细菌毒素移位到体循环,引起网状内皮系统发生系列反应,进而导致大量相关介质和细胞因子的释放,甚至发生多系统器官功能不全综合征,因此近年来越来越受到重视,其发生发展机理及防治措施的研究也成为外科领域的重点和难点课题之一. 肠缺血再灌注损伤的病理生理机制尚不清楚,人们先后提出过能量衰竭、氧自由基损伤、钙超载、白细胞黏附与内皮细胞损伤、介质病、细胞因子和细胞凋亡等一系列学说,并针对肠缺血再灌注损伤的可能机制,进行了相应的防治实验研究,并取得了一些进展. 1 抗能量缺乏疗法 组织缺血时,组织细胞内氧的供应减少或中断、细胞的有氧代谢受到抑制、A TP合成急剧下降,加之无氧代谢产生的有毒酸性产物大量累积,导致细胞内酶活性的改变以及维持跨膜离子梯度的能量缺乏,在严重缺血时可使细胞内环境紊乱,甚至细胞死亡,因此在缺血期为缺血组织提供足够的A TP可以阻止无氧代谢及细胞膜内外离子的平衡.史晓峰等〔1〕在大鼠小肠缺血再灌注损伤的实验研究中发现,经肠系膜上动脉间断灌注1、6-二磷酸果糖,可以改善细胞的能量代谢,为细胞提供能量,同时具有稳定细胞生物膜、减少脂质过氧化物和氧自由基生成而起到对肠缺血再灌注损伤的保护作用.除此之外,在缺氧期吸入氧气,也可以明显改善肠缺血再灌注后的组织损害.高压氧能够抑制肠缺血再灌注损伤过程中TNF-α的产生,并能抑制中性粒细胞在肺中的聚集,因而能够减轻肠缺血再灌注的损伤〔2〕.O’Donnel等〔3〕则发现在缺血时的肠腔内持续注入携氧的过氟碳的保护作用,他们在肠缺血再灌注的模型中观察到:在缺血60分 Ξ收稿日期:2004-12-16 作者简介:马玉山(1973-),男,内蒙古通辽市人,内蒙古医学院在读硕士研究生(2003级).
第七章 缺血－再灌注损伤 一、单项选择题（最佳选择题，每小题仅有一个正确答案） １畅缺血－再灌注损伤是（ ）。 Ａ畅缺血后恢复血流灌注引起的后果 Ｂ畅缺血后恢复血流灌注引起的更严重的组织损伤 Ｃ畅无钙后再用含钙溶液灌注引起钙超载 Ｄ畅缺氧后再用富氧液灌注引起的更严重的组织损伤 Ｅ畅是缺血的延续 ２畅缺血－再灌注损伤发生的原因主要是（ ）。 Ａ畅血管痉挛，组织缺血 Ｂ畅血管内血栓形成，阻断血流 Ｃ畅器官在缺血耐受期内恢复血流Ｄ畅器官在可逆性损伤期内恢复血流Ｅ畅以上都不对 ３畅缺血－再灌注损伤可见于（ ）。 Ａ畅心 Ｂ畅脑 Ｃ畅肾 Ｄ畅肺 Ｅ畅各种不同组织器官 ４畅下列说法正确的是（ ）。 Ａ畅所有缺血的组织器官在血流恢复后都会发生缺血－再灌注损伤 Ｂ畅缺血时间越长越容易发生缺血－再灌注损伤 Ｃ畅心、脑较其他器官易发生再灌注损伤 Ｄ畅低温（２５℃）低压灌注可诱发再灌注损伤 Ｅ畅高钙灌注可减轻再灌注损伤 ５畅下列情况中不会引起再灌注损伤的是（ ）。 Ａ畅器官移植 Ｂ畅断肢再植 Ｃ畅冠状动脉溶栓Ｄ畅动－静脉瘘 Ｅ畅心脏直视手术 ６畅钙反常损伤程度主要与（ ）。 Ａ畅无钙灌注的时限有关 Ｂ畅灌注液的温度有关 Ｃ畅灌注液的ｐＨ有关Ｄ畅再灌注时钙浓度有关 Ｅ畅再灌注时的氧分压有关 ７畅心肌缺血－再灌注损伤时，白细胞数目的变化规律为（ ）。 Ａ畅缺血期↓、再灌注期↑ Ｂ畅缺血期↑、再灌注期↑ Ｃ畅缺血期↑、再灌注期↓Ｄ畅缺血期↓、再灌注期↓ Ｅ畅缺血期正常、再灌注期↑ ８畅再灌注时组织内白细胞浸润增加的机制主要是（ ）。 Ａ畅组胺和激肽的作用 Ｂ畅Ｃ３ａ、Ｃ５ａ的作用 Ｃ畅ＬＴＣ４的作用Ｄ畅花生四烯酸代谢产物的作用
抗氧化剂在缺血再灌注损伤中对大鼠肠粘膜的保护作用 目的探讨预先肠道给予抗氧化剂对大鼠肠缺血再灌注损伤小肠粘膜的保护作用。方法使用75只成年雄性SD大鼠，采用生理盐水、维生素C、维生素E 和后两者的组合进行实验干预。依据肠血管供应游离肠管，通过夹闭供应该段肠管的血管进行缺血再灌注造模。在未夹闭、缺血末期及再灌注期每15min取材。分时段取材后进行定量、定性分析。结果与其他组比较，使用维生素E组和维生素E、维生素C联合组呈显着衰减缺血再灌注损伤作用。最后研究表明以上两组与控制组和维生素C组比较，能显著的减少绒毛高度的降低及中性粒细胞的浸润。结论在缺血再灌注实验模型中，维生素E做前期处理能够减弱I/R对大鼠小肠粘膜的损伤，减少绒毛高度的降低、衰减中性粒细胞的浸润。 标签：缺血；再灌注；再灌注损伤；抗氧化剂缺血组织血流量恢复会造成比原先缺血引起更大的损伤，这个过程称为缺血再灌注（I/R）损伤。I/R时，小肠是最容易受损伤的。虽然所涉及的机制尚未完全阐明，但相信，氧化应激的炎症介质发挥重要的作用。由于超氧化物（ROS）参与I/R损伤的发生，多种抗氧化剂都进行过研究，其中就包括维生素C、维生素E。维生素C是一种水溶性、还原性的抗氧化劑，常被用来对抗I/R造成的损伤。维生素E是一种脂溶性抗氧化剂，通过稳定细胞膜的不饱和脂肪酸的来对抗氧化应激反应。因此，维生素E 能减少组织ROS反应，增加组织抵抗膜质过氧化的作用，维生素C、E联合应用有协同效应。本研究的目的是用维生素C、E前期处理实验大鼠，通过空肠的形态标准来评估其对I/R小肠粘膜的积极作用。 1资料与方法 1.1空肠缺血再灌注模型使用75只体重介于224~261g的成年健康雄性SD 大鼠，腹腔注射氯胺酮麻醉后剖腹探查。游离肠系膜动、静脉，长度足够放置血管夹即可。以游离动脉供应的肠段作为取材部位。在未夹闭血管前取材一次（BC）。为了避免其他因素影响小肠绒毛的高度，达到彻底地模型效应，游离肠段3cm左右，并切断所有的侧支循环。夹闭肠管血管1h后，进行第2次取材（BI），后移去血管夹，恢复血流，分别在再灌注15min（RB15）、30min（RB30）、45min （RB45）和60min的（RB60）取材。 1.2实验分组75只大鼠随机分为5组：T组大鼠行剖腹探查并切除选定肠管，不做缺血再灌注损伤模型。对照组行剖腹探查术，并行肠管缺血再灌注造模，预定时间点取材，没有预先处理。C组造模，术前4d通过喂养的方式给予250mg/kg 维生素C。E组也造模，术前4d与C组相同的方式给予60mg/kg维生素E。C+E 组行与对照组相同的手术，并喂养与C组、E组相同计量的两种药物。 1.3损伤的指标用定量分析方法来评估缺血再灌注的损伤。肠管损伤程度用组织切片绒毛的高度、中性粒细胞浸润的程度来评价。为减小误差及偏倚，所有标本由本实验室被双盲的技术人员用Chiu等人提出的分类标准进行评估。使用光学显微镜在10个随机镜头视野统计绒毛的高度分布，单位为毫米（mm）。通
中性粒细胞介导肠道缺血再灌注损伤中的作用 郄文斌屠伟峰 广州军区广州总医院全军临床麻醉中心（广州510010） 严重的创伤、感染、休克均可伴有不同程度肠道血流量减少，导致肠功能障碍，在此基础上随着血供的恢复，组织器官的损伤反而加重，表现为肠道缺血/再灌注(GIR) 损伤。肠道是缺血/再灌注损伤（IRI）最敏感的组织之一[1]。业已证实，肠缺血再灌流是严重创伤、烧伤后全身性炎症反应综合征(SIRS)及多器官功能障碍综合征(MODS)发生、发展的重要诱因[2]。肠道系统不仅仅是体内最大免疫器官，而且是激发和诱生各种炎性介质和细胞因子、介导嗜中性粒细胞（PMN）激活的中心器官“motor”。有实验表明：PMN是引起组织损伤，乃至多器官功能衰竭(MOF)的关键细胞[3,4]。PMN的激活趋化、聚集于靶组织与释放大量炎性介质和细胞因子是导致局部组织损伤和远离脏器损伤发生的主要途径。 一PMN的激活和趋化 正常生理状况时，组织中较少见PMN，而循环系统血液中的循环粒细胞、边缘粒细胞以及储存在骨髓中大量的成熟PMN，在激活因子和趋化因子作用下被激活，继而侵入炎症组织中。肠道缺血再灌注后肠血管可能作为“预激床”，在激活因子（包括细菌、毒素、免疫复合物、补体、氧自由基、白介素类等）作用下激活循环中的PMN。其机理为激活因子通过与PMN细胞膜表面的相应受体结合（如C5a与PMN表面C5a受体结合），将信号传递给GTP结合蛋白，特异性磷酸脂酶激活磷脂酰肌醇，并在此酶的作用下，产生一系列代谢产物，激活蛋白激酶Ｃ，引起细胞内Ca2＋浓度升高，从而激活PMN[3,5]。激活的PMN在趋化因子(包括补体C3a，C5a，IL-8，LPS和激肽释放酶等)和粘附分子的作用下与血管内皮细胞(VEC)粘附并进入组织中。 二PMN对内皮细胞（EC）的粘附和穿越 激活的PMN与血管内皮细胞（VEC）相互作用形成的粘附连锁反应是PMN聚集、活化的关键，是导致组织损伤的先决条件[6,7]。在急性炎症损伤过程中，PMN粘附、穿越VEC向炎症部位游走的分子基础是PMN与VEC表面粘附分子的相互作用[8]。粘附分为再灌注早期PMN与沿着VEC表面慢速滚动的不稳定粘附以及随后的牢固粘附两个阶段。现已知的粘附分子主要有选择素家族、整合素家族和免疫球蛋白超家族。 2.1 选择素家族(Selectin) 选择素家族成员是介导白细胞和EC早期粘附过程的关键粘附分子。此族分子为高度糖基化的单链跨膜糖蛋白，分子量为90～140ku。主要包括L选择素，E选择素和P选择素。L-selectin表达于白细胞(中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞)表面，当白细胞活化后通过蛋白水解方式释放出来,其功能为介导PMN与VEC的粘附以及淋巴细胞向周围淋巴结
第十章缺血－再灌注损伤 一、选择题 【A型题】 1．缺血再灌注损伤最常见于下述哪一器官? A．心肌 B．脑 C．肝 D．肾 E．肠 2．最活泼有力的氧自由基是： A．-? 2 O B．H2O2 C．OH· D．LO· E．LOO· 3．认为再灌注损伤实为缺血的继续和叠加的学说为： A．钙超载 B．自由基损伤 C．无复流现象 D．白细胞作用 E．能量代谢障碍 4．缺血-再灌注性心律失常最常见的类型： A．房性心律失常 B．室性心律失常 C．房室交界部阻滞 D．房室传导阻滞 E．房颤 5．氧反常损伤程度加重，不见于： A．缺氧的时间越长 B．缺氧时的温度越高 C．缺氧时酸中毒程度越重 D．重给氧时氧分压越高 E．再灌注时pH纠正缓慢 6．有关自由基的错误说法是： A．自由基是具有一个不配对电子的原子、原子团和分子的总称 B．-? 2 O是其他活性氧产生的基础 C．OH＾自由基的产生需有过渡金属的存在 D．体内的自由基有害无益 E．自由基的化学性质极为活泼 7．钙反常时细胞内钙超载的重要原因是： A．ATP减少使钙泵功能障碍 B．Na+-Ca2+交换增加 C．电压依赖性钙通道开放增加 D．线粒体膜流动性降低 E．无钙灌流期出现的细胞膜外板与糖被表面的分离 8．导致染色体畸变、核酸碱基改变或DNA断裂的自由基主要为： A．-? 2 O B．OH· C．H2O2 D．LO· E．LOO· 9．缺血一再灌注时细胞内氧自由基生成增加不见于： A．中性粒细胞吞噬活动增强 B．儿茶酚胺增加 C．黄嘌呤氧化酶形成减少 D．细胞内抗氧化酶类活性下降 E．线粒体受损、细胞色素氧化酶系统功能失调 10．自由基对机体的损伤最主要是通过： A．蛋白质交联 B．直接损伤核酸 C．引发葡萄糖交联 D．脂质过氧化引起损伤 E．引起染色体畸变 11．下面哪个不是活性氧? A．NO B．-? 2 O C．OH· D．CO2 E．LOO·
肠缺血再灌注损伤及缺血预适应处理的干预作用 研究背景： 缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury, IRI) 是指各种原因导致组织器官缺血时, 会引起细胞代谢障碍和组织结构出现破坏, 而当血供恢复时, 组织及细胞损伤反而出现加重的现象称为。微血管通透性增加、组织间质水肿、血管调节机制受损及炎症细胞浸润与缺血再灌注所引发的器官功能障碍相关。肠缺血再灌注（intestinal ischemia reperfusion，IIR）损伤是由多种临床情况引起的，如出血性休克、败血症、严重创伤、绞窄性肠梗阻和急性肠系膜缺血等，具有高发病率和死亡率的一种常见临床问题。IIR 会导致不可逆转的组织损伤，血流恢复后通过诱导细胞凋亡、炎症反应及氧化应激又会进一步加重损，严重者还会引起全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS），甚至进一步诱发多器官功能衰竭（multiple organ failure，MOF）。因此，防治肠缺血再灌注损伤是危重病研究领域的重点之一。 缺血预适应（ischemic preconditioning, IPC）是短期缺血应激使机体对随后长时间的缺血再灌注损伤产生明显保护作用的一种适应性机制进行反复的、短暂的、无创伤、无危害的缺血预适应训练，能够激发人体免疫系统的应急机制，产生和释放内源性保护物质（如：腺苷、缓激肽、一氧化氮等，这些物质参与保护心肌和能量代谢）减轻和抵抗随后更长时间因为人体缺血缺氧造成的损伤。故本次研究的目的是探究不同的缺血预处理方法对肠道I / R损伤的可能保护作用。 材料与方法： 1.动物与分组： 中国家兔16只，雌雄各半，随机分为4组，分别为假手术组（只进行开腹手术，辨认肠系膜上动脉，不结扎）；对照组（进行肠系膜上动脉根部夹闭及复灌）；预适应处理A组（先进行缺血预处理，方法为夹闭5min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）；预适应处理B组（先进行缺血预处理，方法为夹闭20min开放5min，循环3次，然后行肠系膜上动脉夹闭及复灌）。 2.模型复制： （1）根据文献[3]方法，复制家兔肠缺血再灌注模型，具体如下 家兔经耳缘静脉注射乌拉坦（0. 005 mL/g）麻醉后，仰卧固定于手术台上。腹部正中线自剑
第十二章缺血-再灌注损伤 一、名词解释 1. 缺血性损伤：因组织血液灌流量减少造成的细胞损伤。 2. 缺血再灌注损伤：指在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象，简称再灌注损伤。 3. 氧反常：组织器官或培养细胞经过定时间的低氧后，再恢复正常氧供应，反而使组织细的损伤更趋严重的现象。 4. 钙反常：用无钙溶液灌流组织器官后，再用含钙溶液壠流,组织细胞损伤反而加重的现象。 5. 自由基: 是在外层电子轨道上含有单个不配对电子的原子、原子团和分子的总称。 6. 氧自由基：指由氧诱发的自由基，例如超氧阴离子( )和羟自由基(0H· )。 7. 活性氧：指一类由氧形成的、化学性质较基态氧活发的含氧物质，包括氧自由基和非自由基含氧物质。 8. 呼吸爆发: 再灌注组织重新获得氧供应的短时间内，微活的中性粒细胞耗氧量显著增加,产生大量氧自由基,又称为氧爆发，这是再灌注时自由基生成的重要途径之一。 9. 膜脂质过氧化: 自由基与膜内多价不饱和脂肪酸作用使之发生过度氧化，造成不饱和脂肪酸/蛋白质比例失调从而使磷脂膜的功能与结构发生改变。 10. 钙超载: 各种原因引起的细胞内钙含量异常增多,并导致细胞结构损伤和功能代谢障碍的现象。 11. 无复流现象: 缺血组织恢复血流后，部分缺血区并不能得到充分血液施流的现象。 12. 再灌注性心律失常: 在心肌再灌注过程中出现的心律失常，以室性心律失常如心动过速和心室颤动最为多见，是造成猝死的重要原因。 13. 心肌顿抑: 遭受短时间可逆性缺血损伤的心肌,在流恢复或基本恢复后一段时间内出现的暂时性收缩功能降低。 二、简答题 1、简述缺血-再灌注时氧自由基生成增多的机制? ①黄嘌呤氧化酶的形成增多，催化次黄嘌岭、黄嘌呤产生氧自由基； ②中性粒细胞聚集及激活，摄入的氧经细胞内NADPH氧化酶和NADH氧化酶催化形成氧自由基； ③线粒体功能受损，氧经单电子还原形成氧自由基； ④儿茶酚胺增加和氧化产生氧自由基。 2、简述缺血与再灌注受损细胞内钙超载的机制？ 缺血-再灌注时的钙超载主要发生再灌注早期，主要是由于钙内流增加，其机制为: ①Na' /Ca''交换反向转运增强:缺血再溜注时细胞内高Na'高H'、PKC激活可直接或间接激话Na' /Ca''交换蛋白反向转运，可将大量Ca''运入胞浆； ②生物膜损伤:细胞膜、线粒体及肌浆网膜损伤，导致膜通透性增加、ATP生成减少和肌浆网Ca''泵失灵，可使钙内流增加和细胞膜、肌浆网Ca''转运功能障碍，促进钙超载的发生。 3、为什么再灌注时纠正酸中毒的速度不宜过快? 再灌注时纠正酸中毒的速度过快，组织间液H'浓度迅速下降，而细胞内H'浓度仍然很高，使细胞内外形成PH梯度差，由于Na'-H'交换，使细胞内Na'增加，后又通过Na' -Ca"交换而使细胞外钙大量内流，造成细胞内钙超载。所以，再灌注时纠正酸中毒的速度不宜过快。4、简述白细胞介导缺血-再灌注时微血管损伤的机制? ①微血管内血液流变学改变:激活的中性粒细胞表达粘附分子，使其流动减慢甚至与内皮细胞发生粘附，极易嵌顿、堵塞微循环血管，易形成无复流；
缺血再灌注损伤 （一）名词解释（1～10） 1．缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury） 2．氧反常（oxygen paradox） 3．钙反常（calcium paradox） 4．pH值反常（pH paradox） 5．自由基（free radical） 6．呼吸爆发（respiratory burst）或氧爆发（oxygen burst） 7．钙超载（calcium overload） 8．无复流现象（no-reflow phenomenon） 9．心肌顿抑（myocardial stunning） 10．氧自由基抑制剂 （二）选择题A型题（1～43） 1．缺血-再灌注损伤发生的原因主要是： A．血管痉挛，组织缺血； B．血管内血栓形成，阻断血流； C．器官在缺血耐受期内恢复血流； D．器官在可逆性损伤期内恢复血流； E．以上都不对。 2．再灌注损伤是指： A．缺血后恢复血流灌注引起的后果； B．缺血后恢复血流灌注引起的组织损伤；C．无钙后再用含钙溶液灌注引起钙超载； D．缺氧后再用富氧液灌注引起的组织损伤；E．以上都不对。 3．下述何种不会有缺血-再灌注损伤？ A．冠脉搭桥术后； B．体外循环后； C．器官移植后； D．心肌梗塞后； E．心肺复苏后。 4．钙反常损伤程度主要与： A．无钙灌注的时限有关； B．灌注液的温度有关； C．灌注液的PH有关； D．再灌注时钙浓度有关； E．再灌注时的氧分压有关。 5．脑缺血-再灌损伤，细胞内第二信使分子的变化为： A．cAMP↓、cGMP↓； B．cAMP↑、cGMP↑； C．cAMP↑、cGMP↓； D．cAMP↓、cGMP↑； E．两者均正常。 6．评价脑再灌注损伤的主要代谢指标为： A．ATP、CP及葡萄糖减少； B．乳酸↑； C．cAMP↑； D．cGMP↓； E．过氧化脂质生成↑。 7．心肌缺血-再灌注损伤时，白细胞数目的变化规律为： A．缺血期↓、再灌注期↑； B．缺血期↑、再灌注期↑； C．缺血期↑、再灌注期↓； D．缺血期↓、再灌注期↓；
脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展 西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科710004 薛荣亮 脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）。 脑缺血再灌注损伤与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。急性局灶性脑缺血引起的缺血中心区死亡以细胞坏死为主，目前认识的比较清楚，即脑缺血后5-7分钟内，细胞能量耗竭，K+通道受阻，膜电位降低，神经末梢释放谷氨酸，通过兴奋谷氨酸受体（包括NMDA 、AMPA和KA 受体）致使细胞膜上的Ca2+通道开放，引起Ca2+超载，高Ca2+可激活NOS，使NO和氧自由基的形成增加，引发脂质过氧化，引起膜结构和DNA的损伤；Ca2+还可活化各种酶类，加剧细胞损伤和能量障碍，引发缺血级联反应，结果细胞水肿、细胞膜破裂，细胞内酶和炎性介质释放，引起细胞坏死。 近年来认识到半暗带区域于再灌注数天后出现了迟发性神经元死亡(DND)，DND常出现在缺血再灌注后2-4日，主要发生在海马、纹状体及皮质区域，DND需要数日时间、有新蛋白质合成的、需要消耗能量的、为无水肿的细胞自杀过程，称之为细胞凋亡(PCD)。脑缺血再灌注损伤既包括急性细胞坏死也包括细胞凋亡，对于DND的确切机制目前仍不清楚，尚需进一步深入研究。 现对脑缺血再灌注损伤机制的研究进展及保护措施简述如下：1．基因活化
脑缺血再灌注损伤后可出现大量基因表达，大约有374种基因出现变化，绝大多数基因与凋亡有关，其中57种基因的蛋白表达是缺血前的 1.7倍，而34种基因的表达量出现下降，均发生在4小时到72小时, 包括蛋白质合成，基因突变，促凋亡基因，抑凋亡基因和损伤反应基因变化等，这些基因的相互作用最终决定了DND的发生。 2．兴奋性氨基酸毒性 兴奋性氨基酸毒性是指EAA受体活化而引起的神经元死亡，是脑缺血性损伤的重要触发物和介导物。EAA可活化胞内信号转导通路，触发缺血后致炎基因表达。CA1区神经细胞分布着大量的EAA受体，而抑制性氨基酸受体分布很小，这就为缺血后的兴奋性毒性提供了基础。另外，CA1区较CA3区对缺血损伤敏感是由于其兴奋性氨基酸受体的类型不同，CA1区以NMDA受体为主，CA3区以KA受体为主，而KA 受体对缺血敏感性较差，可能是造成DND发生的重要原因。 3．自由基及脂质过氧化 脑缺血再灌注期间产生大量自由基。其有害作用可概括为：①作用于多价不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化。②诱导DNA、RNA、多糖和氨基酸等大分子物质交联，交联后的大分子则失去原来的活性或功能降低。③促使多糖分子聚合和降解。自由基可广泛攻击富含不饱和脂肪酸的神经膜与血管，引发脂质过氧化瀑布效应(oxygen burst)，蛋白质变性，多核苷酸链断裂，碱基重新修饰，细胞结构的完整性破坏，膜的通透性、离子转运、膜屏障功能均受到严重影响，从而导致细胞死亡。自由基还能导致EAA释放增加，促使脑缺血后DND发生。 4．热休克蛋白表达紊乱
中华普通外科学文献（电子版）2014年10月第8卷第5期Chin Arch Gen Surg（Electronic Edition），October 2014，Vol.8，No.5 ·370· ·论著·缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的 肝损伤的机制研究 张彬 贺德栋 房祥杰 【摘要】 目的 探讨缺血后处理减轻肠缺血再灌注引起的肝损伤的作用机制，为外科防治 缺血再灌注损伤提供策略。方法 将36只SD大鼠随机分为假手术组（SO组，仅手术显露肠系膜 上动脉）、缺血再灌注组（IR组，阻断肠系膜上动脉60min，再灌注120min）、缺血后处理组（IP组， 阻断肠系膜上动脉60min后行3个循环的灌注30s/阻断30s，再持续灌注117min），每组12只。 建立模型2h后采集各组大鼠动、静脉血及部分小肠、肝组织，检测血肿瘤坏死因子α（TNF-α）、 白细胞介素10（IL-10）、丙氨酸氨基转氨酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，测 定血清及肝组织内丙二醛（MDA）、髓过氧化酶（MPO）水平，光学显微镜下观察小肠及肝脏病 理学改变，免疫组织化学法检测肝脏组织中核因子κB p65（NF-κB p65）和缺氧诱导因子1α （HIF-1α）的表达变化。结果 与SO组比较，IR组小肠、肝脏病理损伤加重，肝组织NF-κBp65和 HIF-1α的表达显著升高，血清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、IL-10、ALT和AST水平升高； 与IR组比较，IP组小肠、肝脏损伤减轻，肝组织NF-κBp65表达下降而HIF-1α的表达显著升高，血 清和肝组织中MDA、MPO水平及血清TNF-α、ALT和AST水平均显著下降，血清IL-10水平增加，差 异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 缺血后处理可以促进抗炎因子的激活，抑制NF-κB信号通 路调控的炎症级联反应，上调HIF-1α的表达，减轻小肠缺血再灌注引起的肝损伤。 【关键词】 缺血后处理；肠缺血再灌注损伤；肝损伤 Mechanism of ischemic postconditioning on alleviating liver injuries after intestinal ischemia reperfusion Zhang Bin, He Dedong, Fang Xiangjie. Department of General Surgery, the First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical University, Weihui 453100, China Corresponding author: Zhang Bin, Email: binbin801215@https://www.doczj.com/doc/9715503201.html, 【Abstract】 Objective To investigate the mechanism of ischemic postconditioning on alleviating liver injury induced by intestinal ischemia reperfusion, and to find the prevention and treatment strategy for ischemic reperfusion injury. Methods A total of thirty-six rats were randomly divided into three groups (n=12 in each group), Sham group(only exposing SMA), IR group(clamping SMA for 60 min，reperfusing 120 min), IP group (clamping SMA for 60 min, and three cycles of 30 seconds reperfusion and 30 seconds ischemia, reperfusing 117 min). Levels of MDA and MPO in serum and liver tissues were measured after reperfusion. Levels of arterial blood TNF-α, IL-10, ALT and AST were also measured. The pathological changes of liver and small intestine were observed, and expressions of NF-κBp65 and HIF-1α protein in liver tissues were detected by immunohistochemistry. Results Compared with the SO group, MDA and MPO levels in serum and liver tissues increased obviously in the IR group. TNF-α, IL-10, AST and ALT were increased significantly. While the intestinal and liver injuries were more serious, expressions of NF-κB p65 and HIF-1α were increased obviously. Compared with the IR group, the intestinal and liver injuries and DOI：10.3877/cma.j.issn.1674-0793.2014.05.008 基金项目：河南省卫生厅科技攻关资助项目（201203071）；河南省科技厅科技攻关资助项目（142102310047）； 河南省教育厅自然科学基金资助项目（14A320075） 作者单位：453100卫辉，新乡医学院第一附属医院普通外一科 通讯作者：张彬，Email：binbin801215@https://www.doczj.com/doc/9715503201.html,
第十章缺血－再灌注损伤
一、选择题 【A型题】 1．缺血再灌注损伤最常见于下述哪一器官? A．心肌 B．脑 C．肝 D．肾 E．肠 2．最活泼有力的氧自由基是：A．-? 2 O B．H2O2 C．OH· D．LO·E．LOO· 3．认为再灌注损伤实为缺血的继续和叠加的学说为： A．钙超载 B．自由基损伤 C．无复流现象 D．白细胞作用 E．能量代谢障碍 4．缺血-再灌注性心律失常最常见的类型： A．房性心律失常 B．室性心律失常 C．房室交界部阻滞 D．房室传导阻滞 E．房颤 5．氧反常损伤程度加重，不见于： A．缺氧的时间越长 B．缺氧时的温度越高 C．缺氧时酸中毒程度越重 D．重给氧时氧分压越高 E．再灌注时pH纠正缓慢6．有关自由基的错误说法是： A．自由基是具有一个不配对电子的原子、原子团和分子的总称 B．-? 2 O是其他活性氧产生的基础 C．OH＾自由基的产生需有过渡金 属的存在 D．体内的自由基有害无益 E．自由基的化学性质极为活泼7．钙反常时细胞内钙超载的重要原因是： A．ATP减少使钙泵功能障碍 B．Na+-Ca2+交换增加 C．电压依赖性钙通道开放增加 D．线粒体膜流动性降低 E．无钙灌流期出现的细胞膜外板与糖被表面的分离 8．导致染色体畸变、核酸碱基改变或DNA断裂的自由基主要为： A．-? 2 O B．OH· C．H2O2 D．LO·E．LOO· 9．缺血一再灌注时细胞内氧自由基生成增加不见于： A．中性粒细胞吞噬活动增强 B．儿茶酚胺增加 C．黄嘌呤氧化酶形成减少 D．细胞内抗氧化酶类活性下降 E．线粒体受损、细胞色素氧化酶系统功能失调 10．自由基对机体的损伤最主要是通过： A．蛋白质交联 B．直接损伤核酸 C．引发葡萄糖交联 D．脂质过氧化引起损伤 E．引起染色体畸变 11．下面哪个不是活性氧?
[论文]缺血再灌注损伤机制及保护综述脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展 西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科 710004 薛荣亮 脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIR)。 脑缺血再灌注损伤与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。急性局灶性脑缺血引起的缺血中心区死亡以细胞坏死为主，目前认识的比较清楚，即 +脑缺血后5-7分钟内，细胞能量耗竭，K通道受阻，膜电位降低，神经末梢释放谷氨酸，通过兴奋谷氨酸受体(包括NMDA 、AMPA和KA 2+2+2+受体)致使细胞膜上的Ca通道开放，引起Ca超载，高Ca可激活NOS，使NO和氧自由基的形成增加，引发脂质过氧化，引起膜结构和 2+DNA的损伤;Ca还可活化各种酶类，加剧细胞损伤和能量障碍，引发缺血级联反应，结果细胞水肿、细胞膜破裂，细胞内酶和炎性介质释放，引起细胞坏死。 近年来认识到半暗带区域于再灌注数天后出现了迟发性神经元死亡(DND)，DND 常出现在缺血再灌注后2-4日，主要发生在海马、纹状体及皮质区域，DND需要数日时间、有新蛋白质合成的、需要消耗能量的、为无水肿的细胞自杀过程，称之为细胞凋亡(PCD)。脑缺血再灌注损伤既包括急性细胞坏死也包括细胞凋亡，对于DND的确切机制目前仍不清楚，尚需进一步深入研究。 现对脑缺血再灌注损伤机制的研究进展及保护措施简述如下: 1(基因活化
脑缺血再灌注损伤后可出现大量基因表达，大约有374种基因出现变化，绝大多数基因与凋亡有关，其中57种基因的蛋白表达是缺血前的 1.7倍，而34种基因的表达量出现下降，均发生在4小时到 72小时, 包括蛋白质合成，基因突变，促凋亡基因，抑凋亡基因和损伤反应基因变化等，这些基因的相互作用最终决定了DND的发生。 2(兴奋性氨基酸毒性 兴奋性氨基酸毒性是指EAA受体活化而引起的神经元死亡，是脑缺血性损伤的重要触发物和介导物。EAA可活化胞内信号转导通路，触发缺血后致炎基因表达。CA1区神经细胞分布着大量的EAA受体，而抑制性氨基酸受体分布很小，这就为缺血后的兴奋性毒性提供了基础。另外，CA1区较CA3区对缺血损伤敏感是由于其兴奋性氨基酸受体的类型不同，CA1区以NMDA受体为主，CA3区以KA受体为主，而KA受体对缺血敏感性较差，可能是造成DND发生的重要原因。 3(自由基及脂质过氧化 脑缺血再灌注期间产生大量自由基。其有害作用可概括为:? 作用于多价不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化。? 诱导DNA、RNA、多糖和氨基酸等大分子物质交联，交联后的大分子则失去原来的活性或功能降低。? 促使多糖分子聚合和降解。自由基可广泛攻击富含不饱和脂肪酸的神经膜与血管，引发脂质过氧化瀑布效应(oxygen burst)，蛋白质变性，多核苷酸链断裂，碱基重新修饰，细胞结构的完整性破坏，膜的通透性、离子转运、膜屏障功能均受到严重影响，从而导致细胞死亡。自由基还能导致EAA释放增加，促使脑缺血后DND发生。 4(热休克蛋白表达紊乱 热休克蛋白是在多种应激原的作用下生成的分子量为7-200KD的蛋白大家族，但研究的较多的是HSP70，有报道称CA1区神经细胞能表达大量的Hsp70mRNA，而
病理生理学缺血再灌注损伤试题及答案 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】
第十章缺血－再灌注损伤
一、选择题 【A型题】 1．缺血再灌注损伤最常见于下述哪一器官 A．心肌 B．脑 C．肝 D．肾 E．肠 2．最活泼有力的氧自由基是： A．-? 2 O B．H2O2 C．OH· D．LO· E．LOO· 3．认为再灌注损伤实为缺血的继续和叠加的学说为： A．钙超载 B．自由基损伤 C．无复流现象 D．白细胞作用 E．能量代谢障碍4．缺血-再灌注性心律失常最常见的类型： A．房性心律失常 B．室性心律失常 C．房室交界部阻滞 D．房室传导阻滞 E．房颤 5．氧反常损伤程度加重，不见于： A．缺氧的时间越长 B．缺氧时的温度越高 C．缺氧时酸中毒程度越重 D．重给氧时氧分压越高 E．再灌注时pH纠正缓慢 6．有关自由基的错误说法是： A．自由基是具有一个不配对电子的原子、原子团和分子的总称 B．-? 2 O是其他活性氧产生的基础
C．OH＾自由基的产生需有过渡金属的存在 D．体内的自由基有害无益 E．自由基的化学性质极为活泼 7．钙反常时细胞内钙超载的重要原因是： A．ATP减少使钙泵功能障碍 B．Na+-Ca2+交换增加 C．电压依赖性钙通道开放增加 D．线粒体膜流动性降低 E．无钙灌流期出现的细胞膜外板与糖被表面的分离 8．导致染色体畸变、核酸碱基改变或DNA断裂的自由基主要为： A．-? 2 O B．OH· C．H 2O 2 D．LO· E．LOO· 9．缺血一再灌注时细胞内氧自由基生成增加不见于： A．中性粒细胞吞噬活动增强 B．儿茶酚胺增加 C．黄嘌呤氧化酶形成减少 D．细胞内抗氧化酶类活性下降 E．线粒体受损、细胞色素氧化酶系统功能失调 10．自由基对机体的损伤最主要是通过： A．蛋白质交联 B．直接损伤核酸 C．引发葡萄糖交联 D．脂质过氧化引起损伤 E．引起染色体畸变 11．下面哪个不是活性氧 A．NO B．-? 2 O C．OH· D．CO 2 E．LOO·