ICS 65.120 B 46
备案号：
DB33
饲料中莱克多巴胺的测定
Determination of ractopamine in feedstuffs
浙江省质量技术监督局发布
前言
本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。
本标准由浙江省农业厅提出并归口。
本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。
本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。
饲料中莱克多巴胺的测定
1 范围
本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。
本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。
酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 14699.1 饲料采样方法
3 试样制备
按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。
第一法酶联免疫法
4 原理与方法
4.1 原理
本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的莱克多巴胺与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与标准品或样品相结合的莱克多巴胺抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。
4.2 方法
采用莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品，按试剂盒的使用说明操作。
5 试剂和溶液
5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。
5.2 PBS缓冲液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩PBS缓冲液。
5.3 工作洗液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗液。
5.4 乙酸乙酯。
5.5 碳酸盐缓冲液：称取4.3g碳酸钠（Na
2CO
3
?10H
2
O），2.9g碳酸氢钠（NaHCO
3
），加水至1000mL，
摇匀，调节pH值至9.5。
5.6 提取液：取10mL甲醇，加90mLPBS缓冲液，摇匀。
5.7 甲醇。
5.8 第二抗体工作液：用第二抗体稀释液2500倍稀释第二抗体。
6 仪器与设备
6.1 微孔板酶标仪(带450nm滤光片)。
6.2 振荡器。
6.3 冷冻离心机。
6.4 微量加样器及配套吸头：20μL, 50μL, 100μL, 200μL 。
6.5 冰箱。
6.6 洗板机。
6.7 生化培养箱。
6.8 氮吹仪。
6.9 分析天平：感量0.01g。
7 测定步骤
7.1 注意事项
不同品牌的试剂盒其操作步骤可能略有差别，具体操作步骤可根据试剂盒使用说明书略作调整。7.2 试样处理
取3g试样于50mL离心管中，加入6mL提取液（5.5），上下手摇数次，加入6mL碳酸盐缓冲液（5.4），再加入8mL乙酸乙酯（5.3），振荡30min；以4000rpm的转速离心5min，移取2.0mL上层有机相至另一新试管中，氮吹至干。加入50μL甲醇（5.6）溶解残余物后，再加入450μL PBS缓冲液（5.1），即为供试溶液，取50μL进行ELISA测定。
7.3 测试程序
7.3.1 根据所测定样品及标准数，计算出所需微孔条数，将微孔条插入微孔架，标准和样品做两个孔的平行重复，记录标准和样品的位置。
7.3.2 加入50μL的标准品和处理好的样品到各自的微孔中，标准和样品做两个平行重复。
7.3.3 加入100μL第一抗体溶液到每一个微孔中，在37℃孵育30分钟后倒出孔中的液体，将微孔架倒置在洗水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体，再加入工作洗液（5.2）250μL，重复操作两遍。最后用吸水纸吸干。
7.3.4 加入150μL稀释的酶标记的第二抗体（5.7）37℃孵育30分钟后倒出孔中的液体，将微孔架倒置在洗水纸上拍打（每轮拍打3次）以保证完全除去孔中的液体，再加入工作洗液（5.2）250μL，重复操作两遍。最后用吸水纸吸干。
7.3.5 加入100μL酶底物液到微孔中，充分混合并在室温孵育5-10min。
7.3.6 加入50μL反应终止液到微孔中，混合后在450nm处测量吸光度值。
8 结果计算
以空白（浓度为0的标准溶液）吸光度值为100%计算，折算出各标准和样品的相对吸光度值。
标准的吸光度值(或样品)
相对吸光度值（%）= ×100
空白的吸光度值
计算出的标准相对吸光度值绘成为一个对应浓度(ng/L)的半对数坐标系统曲线图，校正曲线在200-2000ng/L范围内应当成为线性。相对应每一个样品的浓度(ng/L)可以从校正曲线上读出。
第二法高效液相色谱法
9 方法原理
用2％氨/甲醇溶液提取试样中的莱克多巴胺，经固相萃取柱净化，浓缩后用2％乙酸溶液定容，用高效液相色谱－荧光检测法分离测定。
10 试剂和溶液
10.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。10.2 乙腈：色谱纯。
10.3 甲醇。
10.4 乙腈。
10.5 乙酸乙酯。
10.6 冰醋酸。
10.7 无水硫酸钠。
10.8 戊烷磺酸钠：色谱级。
10.9 正己烷。
10.10 氨水。
10.11 50％乙腈/乙酸乙酯溶液：取250mL乙腈加乙酸乙酯至500mL，混匀。
10.12 50％甲醇/乙酸乙酯溶液：取250mL甲醇加乙酸乙酯至500mL，混匀。
10.13 2％乙酸溶液：取5mL冰醋酸加水至250mL，混匀。
10.14 固相萃取柱1）：每根柱填料量为500mg，柱体积5mL。
10.15 2％氨/甲醇溶液：取20mL氨水加甲醇至1000mL，混匀。
10.16 戊烷磺酸钠溶液：取800mL水，加20mL冰醋酸和0.87g戊烷磺酸钠（C5H11O3SNa?H2O），混匀。
10.17 莱克多巴胺标准溶液
10.17.1 莱克多巴胺贮备液（250μg/mL）
精密称取莱克多巴胺对照品25mg，置100mL容量瓶中，用甲醇（10.2）溶解并定容至刻度，置-20℃冰箱中，可保存3个月。
10.17.2 莱克多巴胺稀释液(5μg/mL)
精密量取1mL莱克多巴胺贮备液（10.16.1），置50mL棕色容量瓶中，用甲醇（10.2）稀释并定容至刻度，为莱克多巴胺工作液。
10.17.3 莱克多巴胺工作溶液
分别准确吸取一定量的标准稀释液（10.16.2），用2％乙酸溶液（10.12）稀释、定容，配制成浓度为0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL的标准溶液。
11 仪器设备
11.1 高效液相色谱仪（配荧光检测器）。
11.2 冷冻离心机能达到5000rpm。
11.3 振荡器。
11.4 离心管50mL，10mL。
11.5 微孔滤膜0.45μm。
11.6 涡旋混合器。
1固相萃取柱的填充料为聚苯乙烯。
11.7 分析天平精度0.0001g。
11.8 旋转蒸发仪。
11.9 鸡心瓶50mL。
11.10 氮吹仪。
12 测定步骤
12.1 试样提取
称取试样3.0g，准确加入2％氨/甲醇溶液（10.14）25mL，涡旋振荡1min，超声振荡10min，5000rpm 离心5min，取上清液10 mL 至鸡心瓶中，50℃旋转蒸干。
12.2 试样净化
用2mL甲醇（10.2）和2mL正己烷（10.8）溶解鸡心瓶中的残余物，重复一次，弃去上层；再加入2mL正己烷（10.8），重复一次，分出甲醇至10mL离心管中，45℃下氮气吹干。用5mL乙酸乙酯（10.4）溶解，加少量无水硫酸钠（10.6），5000rpm离心3min。洗涤液过固相萃取柱（10.13），先经5mL乙酸乙酯润洗）用3mL50％乙腈/乙酸乙酯溶液（10.10）洗涤柱子，然后用5mL50％甲醇/乙酸乙酯溶液（10.11）洗脱收集，氮吹至干。
12.3 定容
用2％乙酸溶液（10.12）定容到1mL，过膜，上机。
12.4 测定
12.4.1 高效液相色谱条件
色谱柱：C18柱，长250mm，内径4.6mm，粒度5μm，或相当者。
保护柱：C18柱，长20mm，内径3.9mm，粒径5μm，或相当者。
流动相：戊烷磺酸钠溶液（10.15）：乙腈（10.1）＝80：20，使用前脱气。
流速：1.0mL/min。
激发波长：226nm。
发射波长：306nm。
进样量：50μL。
12.4.2 上机测定
莱克多巴胺对照溶液和试液分别注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积进行计算。
13 结果计算
试样中莱克多巴胺的含量按下式计算：
n×Ai×Cs×Vs
X＝
As×M
式中：
n——样品稀释倍数；
Ai——样品峰面积；
As——对照溶液峰面积；
Vs——定容体积（mL）；
Cs——对照溶液浓度（μg/ mL）；
M——样品重量（g）；
X——试样中莱克多巴胺的含量（mg/kg）；
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。
14 精密度
14.1 重复性
实验室内平行测定间的相对偏差不大于10％。
14.2 再现性
实验室间测定的相对偏差不大于15％。
第三法气相色谱-质谱法
15 方法原理
试样中莱克多巴胺先用2％氨/甲醇溶液提取，甲醇和正己烷分配脱脂，然后用柱净化，BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+TMCS（三甲基氯硅烷）衍生，最后用GC－MS法进行定性定量分析。
16 仪器与试剂
16.1 气-质联用仪。
16.2 烘箱。
16.3 BSTFA（双三甲基硅基三氟乙酰胺）+1%TMCS （三甲基氯硅烷）。
16.4 莱克多巴胺标准贮备溶液（5mg/mL）：准确称取50mg 莱克多巴胺于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，存放在冰箱中备用。
16.5 莱克多巴胺标准工作溶液：取莱克多巴胺标准贮备溶液，用甲醇稀释至所需浓度。
16.6 甲苯。
16.7 其它仪器，同11。
16.8 其它试剂，同10。
17 测定步骤
17.1 试样提取
同HPLC法12.1。
17.2 试样净化
同HPLC法12.2。
17.3 试样衍生
蒸发剩余物加0.1 mL BSTFA+1%TMCS（16.3），加盖后于旋涡混合器上震荡，在80℃的烘箱中加热1.0 h，氮气吹干，加0.2mL甲苯（16.5）溶解。
取适量的莱克多巴胺标准工作溶液（16.4），氮气吹干，与试样同法进行衍生化。
17.4 色谱条件
色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)，或相当者。
进样口温度：300℃。
柱温程序：初温150℃，保持3 min，然后以10℃／min升至230℃，保持10min，再以20℃／min 升至280℃保持10min。
载气：高纯氦气（99.999%）。
流速：1.0mL/min，不分流进样。
进样量：1.0μL。
17.5 质谱条件
EI源：源温230℃。
电子能量：70eV。
接口温度：280℃。
电子倍增器电压：1506V。
质量扫描范围：30～550U。
选择离子监测方式（SIM）。
监测离子（m/z）：267、250、502，定量离子250。
溶剂延迟：5 min 。
17.6 上机测定
莱克多巴胺对照溶液和试液分别注入气相色谱－质谱联用仪，记录谱图，按外标法以峰面积进行计算。
18 结果计算
结果按下式计算：
X=m1×n/(m×1000)
式中：
X——样品中莱克多巴胺含量（mg/kg）；
m1——质谱测定对应的莱克多巴胺量（ng）；
m——取样量（g）；
n——稀释倍数；
测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留3位有效数字。
19 精密度
19.1 重复性
实验室内平行测定间的相对偏差不大于10％。
19.2 再现性
实验室间测定的相对偏差不大于15％。
快速分析多巴胺和血清素 摘要：随着神经系统实验室检测多巴胺和血清素样品的增多，对检测的时间和灵敏度的要求也不断提高。本文采用了新型电化学检测器CoulochemⅢ进行分析，在6分钟内即可完成检测灵敏度可达4飞摩尔级别，如果降低色谱柱内径到3毫米灵敏度则升至2飞摩尔，方法快速准确，灵敏度高。 关键词：离子色谱ICS-5000，CoulochemⅢ，多巴胺，血清素，脑皮层 1前言 近几年，许多神经系统实验室对影响生物神经系统的生物胺的分析需求逐渐增加。随着检测样品频率的增加，对缩短检测时间的要求也在增加。并且，大脑的很多区域现在都在研究中，比如脑皮层，虽然较之前的大脑区域研究已经减少了影响生物神经系统的化学物质的输出量。因此，一个灵敏的检测方法被开发出来以帮助神经系统学家们在6分钟内快速测定多巴胺和血清素。 一些神经系统学家仅需要检测脑微量透析样品中的多巴胺，但其他人则希望可以有一个速度快，灵敏度高的方法同时测定两种物质。灵敏度经常会是个问题，因为有些脑区域（例如脑皮质）中含有的多巴胺水平很低，有时会要求色谱柱上的灵敏度达到一飞摩尔。 HR-80的标准分析色谱柱和下面写明的流动相可以测定500毫微微克（相当于4飞摩尔）的多巴胺。然而，通过把色谱柱的内径变为3.0毫米内径并增加流速到0.7ml/min，实验的色谱柱的灵敏度可以增加到250毫微微克（相当于2飞摩尔）（见图1） 由于多巴胺可在很低的电压下氧化，检测器的检测条件设置合适可以提供更好的灵敏度和选择性。此外，这种方法可以帮助使人工脑脊液产生的前期产物最小化。但是，如果同时需要检测血清素，电压必须提高到220毫伏左右。 2材料和方法 ICS-5000，包括一个泵一个手动进样器和一个Coulochem Ⅲ检测器。 离子色谱条件： 色谱柱：HR80 x 3 mm I.D； 流动相：按描述； 流速:：0.70 mL/min； 温度：室温； 进样体积:：10 - 20 μL； 检测器和检测条件： 检测器：
莱克多巴胺检测方法 1．分析目标化合物 莱克多巴胺 2、仪器设备 高效液相色谱-质谱仪（LC-MS）。 3、试剂 除下列试剂外，使用附录2所列试剂。 莱克多巴胺：含莱克多巴胺99％以上，熔点为163.9℃～164.6℃。 4．试验溶液的制备 1）肌肉、肝脏、肾脏和其它可食用部分 肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 肝脏、肾脏和其它可食用部分：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 加入20mL乙酸乙酯和1mL4mol／L碳酸钾溶液，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，收集乙酸乙酯层。离心管内残留物中加入20mL乙酸乙酯，振荡5分钟后，按上述同样条件离心分离，合并所得的乙酸乙酯层，40℃以下浓缩，除去乙酸乙酯。残留物中加入30mL乙腈溶解，移入分液漏斗中。加入30mL乙腈饱和正己烷，振荡，弃去正己烷层，重复操作2次。乙腈层在40℃以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL 甲醇溶解，此为试验溶液。 2）脂肪 尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。 加入30mL乙腈和30mL乙腈饱和正己烷，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，乙腈层移入分液漏斗中。离心管内的正己烷层和残留物中加入30mL乙腈，振荡5分钟，按上述同样条件离心分离。合并所得的乙腈层于前面的分液漏斗中，加入30mL 乙腈饱和正己烷。激烈振荡5分钟后，静置，收集乙腈层， 40℃以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。 5．标准曲线的制作 将盐酸莱克多巴胺标准品配制成0.025～0.5mg（以莱克多巴胺计）/L的甲醇溶液数点，分别注入GC-MS中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。 6．定量试验 注入试验溶液于GC-MS中，根据5的标准曲线求出莱克多巴胺的含量。 7．测定条件 LC-MS 柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径2～5μm），内径2.0～6.0mm、100～250 mm 的不锈钢管。 柱温：40℃。 流动相：乙腈：0.05%三氟乙酸（1：4）混合溶液。 主离子(m/z)： ESI+ 302 保持时间标准： 4 ～ 6 分钟 8．定量界 0.01 mg/kg
莱克多巴胺快速检测试剂盒说明书 【原理】 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。 【试剂盒组份】 1、酶标板：8孔/条，12条/板 2、莱克多巴胺标准溶液(1ml/瓶)：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、 0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3、酶标记物…………………………………12ml 4、抗体工作液………………………………7ml 5、显色剂A …………………………………7 ml 6、显色剂B …………………………………7 ml 7、终止液…………………………………7 ml 8、20倍浓缩洗液……………………………50ml 9、使用说明书………………………………1 份 10、封板膜：…………………………………1张 11、封口袋：……………………………………1 个 【试剂盒技术指标】 试剂盒灵敏度：0.1ppb 样本检测下限： 尿样、血清……………………………………0.1ppb 组织……………………………………0.1ppb 饲料……………………………………10ppb 交叉反应率： 化合物名称%交叉反应性 莱克多巴胺 (100) 沙丁胺醇……………………………………<0.01 克伦特罗……………………………………<0.01 卡布特罗……………………………………<0.01 回收率： 尿样、血清……………………………95%±15% 组织………………………………95%±15% 饲料………………………………95%±15% 批间、批内变异系数：CV≤10% 【所需仪器和试剂】 所需仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、 刻度移液管、微量移液器(单道20μl-200μl、 100μl-1000μl、多道250μl) 所需试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、磷酸二氢钾、乙腈、 【样本前处理】 样本处理前须知： （1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 尿样、血清样品的处理 清亮尿样或血清直接测定，如尿样或血清浑浊须过滤或离心10min（15℃，4000r/min）直至清亮，暂不使用样本应冷冻保存，但避免反复冻融。 组织样品（包括肌肉、肝脏和肾脏）前处理（稀释倍数1）1、称2±0.05g组织，加入6ml乙腈-0.1MHCl水溶液(体 积比84:16)。 2、振荡10min,室温4000r/min以上离心10min。 3、取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯， 振荡10min，室温4000r/min 以上离心10min。取全部 上清于50℃氮气或空气吹干。 4、加入1ml三蒸水复溶，取50μl进行分析。 饲料样品的处理（稀释倍数11） 1、称2 克饲料样品，加入2mL 1M盐酸。 2、加入18mL 双蒸去离子水，混匀，涡旋3分钟。在摇 床震动15分钟。 3、在2000rpm下离心20分钟。 4、取出上清液加入1mL 1M 氢氧化钠，用盐酸调整pH值 至7-9 之间。 5、在2000rpm下离心20分钟，取上清液50μl进行检测。【检测程序】 1、复温：使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数 量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自 封袋，保存于2-8℃,不要冷冻； 2、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和 标准品均需做2孔平行； 3、反应：往酶标板微孔中加入标准溶液或试样液50μl/孔， 然后加入莱克多巴胺抗体工作液50μl/孔，用盖板膜封 板，37℃反应40min。 4、洗板：倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打， 去除孔中液体。加入250μl/孔稀释后洗液（将20×浓 缩洗液用蒸馏水稀释,稀释比例：1:19），轻拍，15s后
ICS 65.120 B 46 备案号： DB33 饲料中莱克多巴胺的测定 Determination of ractopamine in feedstuffs 浙江省质量技术监督局发布
前言 本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。 本标准由浙江省农业厅提出并归口。 本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。 本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。
饲料中莱克多巴胺的测定 1 范围 本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。 本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。 酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 3 试样制备 按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。 第一法酶联免疫法 4 原理与方法 4.1 原理 本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的莱克多巴胺与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与标准品或样品相结合的莱克多巴胺抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。 4.2 方法 采用莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品，按试剂盒的使用说明操作。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。 5.2 PBS缓冲液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩PBS缓冲液。 5.3 工作洗液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗液。 5.4 乙酸乙酯。 5.5 碳酸盐缓冲液：称取4.3g碳酸钠（Na 2CO 3 ?10H 2 O），2.9g碳酸氢钠（NaHCO 3 ），加水至1000mL， 摇匀，调节pH值至9.5。
瘦肉精三联检测卡 (盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇联合检测卡说明书 【简介】 瘦肉精是一类人工合成的β-受体激动剂,根据结构差异分为盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇。因该类药物可以提高瘦肉率,减少脂肪沉积和促进动物生长,被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。人食用了饲喂瘦肉精的禽畜产品后,残留的瘦肉精可引起食物中毒,牲畜产品中瘦肉精残留已成为公众关注的社会问题。因此,世界许多国家禁止在饲料中使用瘦肉精。瘦肉精三联快速检测卡可同时测定猪尿中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇,提供生猪饲养时是否使用瘦肉精的依据。 【检测原理】 瘦肉精三联快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快 速检测试剂,可同时检测尿液样品中的盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇三类瘦肉精。具有简单、快速、无需特殊的仪器设备等特点,既可以在实验室进行,也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。由于样本需要量少、简便快速、适用于大量样本的筛查。结果准确,检测盐酸克伦特罗灵敏度为3ppb、莱克多巴胺灵敏度为5ppb、沙丁胺醇的灵敏度为10ppb,准确率大于95%。 【样品处理】 尿液可直接用于检测。若尿样呈浑浊状,需先用滤纸过滤或离心,取清亮部分用于检测。 【操作步骤】 1、从检测卡袋中取出所需的检测卡,放置室温复温,在卡上做好样品编号标记。
2、用一次性取样滴头吸取样品,滴入加样孔,每孔3滴(75ul,在加液过程中勿使液体溢出加样孔。 3、5-10分钟内观察结果,15分钟后的结果无效。 【结果】 对照线(C和检测线(T同时出线,表明尿液样品中 【储存条件】 1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存,忌冷冻。 2、在4-30℃下的环境温度操作。 3、有效期见包装盒侧面。 4、保存期间应避免光照、潮湿和过热。检测卡保质期为12个月。 5、检测线T出现,产品失效。 【结果判断】 泳道1:克伦特罗 泳道2:莱克多巴胺
多巴胺的测定 神经递质多巴胺的测定,采用荧光分光光度法 荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨： 1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZURF-5301PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。。 2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。 （1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。 （2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各50mg，用0.01N盐酸配制成100ml混合标准储存液（500ugml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ugml应用液。 （3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。 （4）正庚烷。 （5）0.1%OPT-10N盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士Fluka产品，临用前用10N盐酸稀释成0.001%OPT-10N盐酸溶液。 （6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。 （7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。 （8）115M，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。 （9）0.33M碳酸氢钠溶液。 （10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。 （11）0.1MEDTA试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节H至7.0。 3、实验方法：
⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。 ⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。 ⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A0.5ml，按下列流程进行操作： ①水相A0.5ml＋115M磷酸盐缓冲液1.5ml＋0.1MEDTA0.4ml＋碘液0.2ml ②混匀、静置3mn＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml ③混匀、静置3mn+5N醋酸0.4ml ④混匀，80℃水浴，冷却 ⑤测NE荧光测度，激发波长为382488 ⑥继续沸水浴20mn，冷却
荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨： 1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZU RF-5301 PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。。 2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。 （1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。 （2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各 50mg，用 0.01N 盐酸配制成 100 ml 混合标准储存液（500ug/ml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ug/ml应用液。（3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。 （4）正庚烷。 （5）0.1% OPT-10N 盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士 Fluka 产品，临用前用 10N 盐酸稀释成0.001% OPT-10N盐酸溶液。 （6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。 （7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。（8） 1/15 M ，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。 （9） 0.33M碳酸氢钠溶液。 （10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。（11）0.1M EDTA 试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节pH至7.0。 3、实验方法： ⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。 ⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。 ⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A 0.5ml，按下列流程进行操作： ①水相A 0.5ml＋1/15M 磷酸盐缓冲液 1.5ml＋0.1M EDTA 0.4ml＋碘液0.2ml ②混匀、静置 3min＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml ③混匀、静置 3min+5N 醋酸 0.4ml ④混匀，80℃水浴，冷却 ⑤测NE荧光测度，激发波长为 382/488 ⑥继续沸水浴 20min，冷却
莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究 莱克多巴胺是“瘦肉精”的替代品，对人体健康有极大的危害。长期以来各种因非法使用β-兴奋剂造成的中毒事件时有发生。目前常用的检测方法有色谱法和免疫分析法。 标签：莱克多巴胺危害检测 1 概述 莱克多巴胺（Ractopamine）与盐酸克伦特罗（俗称“瘦肉精”）一样，属于β-兴奋剂类药物，在我国都是严禁在动物养殖过程中作为饲料添加剂的药物。β兴奋剂有着非常广泛的生理作用，作为兽药，在临床上常被用于治疗支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病[1，2，3]。当莱克多巴胺的使用量为临床使用量的5～10倍时，具有增加胴体蛋白质含量，促进骨骼肌合成，减少脂肪组织，改善肉质的作用[4]，是良好的营养重分配剂和生长促进剂，可以有效提高瘦肉率和饲料使用率。 2 对人体健康的危害 2.1 危害 动物性食品中激素的残留量虽然很低，但其一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒战等症，特别对患有“富贵病”等症的病人及免疫力较低的老人和儿童危害更大，甚至会导致死亡[5]。 莱克多巴胺的毒性作用虽然没有“瘦肉精”强，但是如作为饲料添加剂长期使用，其致癌、致畸、致突变的作用有待深入研究。莱克多巴胺属于激素，会产生肾上腺样作用，会导致过敏反应，可使机体免疫功能下降[6]。同时兽药通过动物的粪便、尿液排泄污染生态环境，也会间接危害人类健康[7]。 2.2 中毒事件 自从1998年香港发生第一起“瘦肉精”中毒事件后，近二十年来，我国因非法添加β-兴奋剂而导致的食物中毒事件屡见不鲜。国外也常有相关的食物中毒事件的报道。目前包括我国在内的许多国家都不允许β-兴奋剂用于食用动物的促生长。我国农业部发布的《关于严禁非法使用兽药的通知》中，明令禁止将β-兴奋剂等药物作为饲料添加剂使用。 由于我国加大了打击非法使用“瘦肉精”的力度，使得畜肉产品中“瘦肉精”的检出率大大降低。与此同时属于同一类药物，具有相同促生长作用的莱克多巴胺的非法使用却日益严重。为了有效控制β-兴奋剂中毒事件的发生，我国政府部门
联合国委员会批准通过了关于莱克多巴胺的国际标准，此类物质属于饲料添加剂，可以提高猪牛肉的瘦肉率。美国食品及药物管理局对于所有的饲料添加成分进行了讨论，并通过了莱克多巴胺产品。共有26个国家（包括澳大利亚、巴西、加拿大、印度尼西亚、墨西哥、菲律宾以及韩国等）批准通过了此类产品。然而，仍有一些国家对其明令禁止，对于很多出口国家关闭了其市场。 7月2日~7日在罗马举行的每年一度的会议中，食品法典委员会接受通过了莱克多巴胺的技术标准，此委员会由联合国粮食农组织（FOA）和世界卫生组织（OIE）共同建立，旨在促进贸易中的食品安全和公平。特别要注意的是，委员会在周二通过了猪牛肉、脂肪、肝脏及肾脏的每日允许摄入量和最大残留水平。此前由于没有相应的国际标准，造成了关于此类产品、相应肉制品和出口产品的困惑和恐慌。来自北卡罗来纳Wilson的全国猪肉生产者委员会（NPPC）主席R.C.Hunt说，NPPC很高兴食品法典委员会通过了这项科学认证的安全产品，委员会应当完善对基准标准的制定以及科学指导。 这不是法典委员会中的国际专家（包括欧盟的科学家）第一次证实莱克多巴胺的安全性。总的来说，这标志这联合国机构第五次考虑设置莱克多巴胺的最高残留限制值。 在2004、2006和2010年， FOA和OIE关于食品添加剂的联合专家委员会证实了饲喂莱克多巴胺的猪、牛及其肉制品对于人类来说是安全的，除此之外，还得到了国际27个认证机构的证实。 NPPC指出，尽管有以上调查结果和美国、巴西、加拿大、哥斯达黎加、墨西哥等除欧洲之外的世界各国的支持，这个标准又一次以超出法典委员会范围的无科学理由被欧盟和俄罗斯否定。当前，欧盟、中国大陆、中国台湾和泰国仍然禁止饲喂莱克多巴胺的猪肉进口产品。 Hunt说，美国猪肉生产商对于一些国家，尤其是俄罗斯，因无科学理由持续反对莱克多巴胺表示失望，俄罗斯在今年准备加入世界贸易组织（WTO），组织要求成员国遵守国际贸易标准，对于俄罗斯在莱克多巴胺上的不妥协，我们很担心其能否遵守WTO的规则。
CEA851Ge96T 多巴胺(DA)检测试剂盒 (酶联免疫吸附试验法) 适用生物：泛物种 使用说明书 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 第12版[预期应用] 本试剂盒运用竞争抑制ELISA法定量测定血清、血浆或其它相关生物液体中多巴胺含量。 [试剂盒内容] 试剂名称数量试剂名称数量 96孔板（预包被）196孔板覆膜4 标准品2标准品稀释液1×20mL 检测溶液A1×120μL检测稀释液A1×12mL 检测溶液B1×120μL检测稀释液B1×12mL TMB底物1×9mL终止液1×6mL 浓洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1 [需自备的设备及试剂] 1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道或多道微量移液器及吸头 3、稀释样品的EP管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2 [试剂盒的储存及有效期] 1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶 液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。检测溶液A需要避光保存。 2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝 箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。 注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
[标本的采集与保存] 1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上 清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。 2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8o C1,000×g离心15分钟， 取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。 3、其它生物标本：请1,000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻 融。 注意： 1、以上标本均需密封保存，4o C保存小于1周，-20o C不超过1个月，-80o C不超过2个月。 2、标本出现溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 3、标本使用前应缓慢均衡至室温，不应加热使之融解。 4、基于大量检测数据，我们推荐使用血清而不是血浆作为样本进行检测。 [试剂准备] 1、使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温（18-25o C），如果该试剂盒在一段时间内不能使用，请仅取出本 次试验所需的酶标条和试剂，并将剩余的酶标条及试剂按指定的条件保存。 2、标准品（冻干品）：每瓶标准品加入标准品稀释液0.5mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时轻轻摇动（避 免起泡），其浓度为1,000pg/mL。准备5个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入600μL的标准品稀释液，如图所示依次三倍稀释成1,000pg/mL,333.33pg/mL,111.11pg/mL,37.04pg/mL,12.35pg/mL，标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 Tube123456 pg/mL1,000333.33111.1137.0412.350 3、检测溶液A及检测溶液B：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或 瓶盖的液体沉积到管底。临用前分别以检测稀释液A或B1:100稀释(如：10μL检测溶液A/990μL检测稀释液A)，充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(50μL/孔)，实际配制时应多配制 0.1-0.2mL。 4、浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。 5、底物溶液：请用灭菌的移液器吸头吸取所需体积的TMB至另一干净容器中使用，容器中剩余的底物应予丢弃， 不要倒回TMB瓶中。 注意： 1、标准品的稀释不能直接在板中进行。 2、标准品请于临用前15分钟内配制。该标准品只能使用一次。
莱克多巴胺（ractopamine）金标快速检测卡 ——（胶体金法）使用说明书 【产品名称】 通用名称：莱克多巴胺金标快速检测卡（胶体金法） 英文名称：ractopamine 汉语拼音：LaiKe DuoBaAn JinBiao KuaiSu JianCeKa 【摘要】 本速测卡专门用于检测动物尿样中的莱克多巴胺的快速筛查，整个检测过程只需要3-5分钟，不需要任何仪器设备，最低检测限为5ng/ml。 【检测原理】 莱克多巴胺（ractopamine）是一种肾上腺受体激动剂，可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。人食用了饲喂莱克多巴胺的禽畜产品后，残留的莱克多巴胺可对消费者的健康构成极大危害。因此，中国政府禁止在饲料中使用莱克多巴胺来增加动物的瘦肉率。 莱克多巴胺快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液中的莱克多巴胺。根据检测卡样品测试线(T)和对照线(C)的有无来判定样品中的莱克多巴胺含量。具有简单快速，无需特殊的仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。由于样本量需要少、 简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，饲料样品灵敏度为10ppb，组织、肉样、肝脏样品灵敏度为5ppb，准确率大于95%。 【试剂盒组成】 1.莱克多巴胺快速检测卡50头份 2.说明书1份 3.PE手套5只 【标本收集】 尿样标本必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。若不能及时送检，尿样标本在2-8℃冷藏可保存24小时。长期保存需冷冻-20℃，忌反复冻融。 【操作步骤】 1、测试前必须将未开封的检测卡和待测样本进行室温平衡。
1. (体重乘以3)mg 加盐水配制至50ml ，多少ml/h 就是多少ug/kg/min. ，一般5ml/h 开始，以后根据血压调速度， 例如：一般早产还有新生儿窒息,新生儿肺炎，多巴胺的浓度在 2 至5Ug ,小剂量可以治 疗小儿支气管肺炎以改善肺部微循环、降低肺微循环阻力，促进炎症吸收消散，疗效可观, 还有早产机理都是一样的! 9. 体重乘3 等于多巴胺的量(毫克) ，稀释成50 毫升， 以多少ml/h 速度泵入就是以多少ug/kg.min 的速度泵入。如：病人体重60 公斤，多巴胺 180mg( 18ml)+32ml生理盐水，配制成50ml，每小时以10ml的速度泵入，就是以10ug/kg.min 的剂量泵入。 10. 新生儿多用小剂量，一般用2.5ug/kg.min 。比如4kg 的体重。100ml GS 中加入多巴胺 4X6=24mg 。 10GS%100 ml +多巴胺24mg速度2.5ml/h。多巴胺的浓度为2.5ug/kg.min,用这种方法更好的调节浓度。速度7 ml /h 的浓度就是7ug/kg.min. 11. 下面是心源性的休克时的治疗! 首要措施是增加心排血量及组织的血液灌流，要分秒必争，尽可能 在休克早期获得充分 治疗，以免贻误病情而发展为不可逆性休克。具体措施: ( 1)镇静、吸氧，保持呼吸道畅通，良好静脉通道至少 2 个。 ( 2 )多巴胺和硝普钠两药同一静脉匀速经输液泵输入，多巴胺用量 为2?10g ? kg -1 ? min -1 ，硝普钠用量为1?6卩g ? kg -1 ? min -1 ，两药比例一般为2:1 (多巴胺用量：硝普钠用量)或1:1，应由小剂量开始，如多巴胺按41 g ? kg -1 ? min -1 及硝普钠按2 i g ? kg -1 ? min -1溶于10%葡萄糖溶液中匀速滴入。在滴入过程中血压上 升不满意时，应适当加大多巴胺用量，遇末梢循环改善不满意时，表现为面色仍苍白、皮肤 紫绀，四肢厥冷未改善应适当加大硝普钠的用量，休克缓解后，两药应逐渐减量至0.5?1 1 g ? kg -1 ? min -1左右，再观察1?2h,病情稳定可以停药。(3)快速洋地黄化，休克症状好转或休克缓解后使用地戈辛快速化量。 (4)激素早期大量使用，地塞米松1?2mg/kg，甲基强的松龙10?30mg/kg。(5)限制静脉速度，禁忌扩容，匀速低张力，无异常丢失只补充生理维持液。 (6)利尿剂的使用:血容量充足前提下，前负荷增加因素。(7)纠正酸中毒， 心源性休克时出现的代谢性酸中毒主要是循环障碍引起，当有效循环恢复后，可自动纠正，当pH小于7.20时，一般采用5%碳酸氢钠1?1.5ml/kg静注1?2次即可。(8)对症处理。 12. 多巴胺的简易方法：个人所需多巴胺用量= 3X体重 将多巴胺加入NS至50ml后用泵维持，如果需要A ug/kg/min,则泵的速度为A ml/h 。 例：一60kg 的病人，需5ml/kg/min (一支多巴胺为2ml：20mg) 计算：患者所需多巴胺的支数为3X60-20= 9 (支) 所需生理盐水50 —2X 9 = 32 ( ml),这样配成了50ml的溶液然后用泵维持5ml/h 即可这个方法是ICU 的老师教的，大家可以验证的。证明：设病人体重为M, 按上述方法将泵维持在 A ml/h 则每小时所用量为3M/50X A (mg)， 按单位换算后为 ( 3M/50X A X 1000)- M- 60= A (ug/kg/min) 6. 100ml == 50ml == 40 ml == 30 ml == 20 ml == 10 ml 6mg 3mg 2.4mg 1.8mg 1.2mg 0.6mg
人多巴胺（DA）试剂盒使用方法 检测范围：96T 5ng/L -120ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中转化生长因子β1(TGF-β1)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人转化生长因子β1(TGF-β1)水平。用纯化的人转化生长因子β1(TGF-β1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入转化生长因子β1(TGF-β1)，再与HRP标记的转化生长因子β1(TGF-β1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的转化生长因子β1(TGF-β1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人转化生长因子β1(TGF-β1)浓度。 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
1. (体重乘以3) mg加盐水配制至50ml，多少ml/h就是多少ug/kg/min., —般5ml/h开 始，以后根据血压调速度， 例如：一般早产还有新生儿窒息，新生儿肺炎，多巴胺的浓度在2至5Ug ,小剂量可以治 疗小儿支气管肺炎以改善肺部微循环、降低肺微循环阻力，促进炎症吸收消散，疗效可观 ， 还有早产机理都是一样的！ 2. 体重乘3等于多巴胺的量(毫克)，稀释成50毫升， 以多少ml/h速度泵入就是以多少ug/kg.min的速度泵入。女口：病人体重60公斤，多巴胺 180mg( 18ml)+32ml生理盐水,配制成50ml，每小时以10ml的速度泵入，就是以10ug/kg.min 的剂量泵入。 3. 新生儿多用小剂量，一般用2.5ug/kg.min。比如4kg的体重。100ml GS中加入多巴胺 4X6=24mg。 10GS%100 ml +多巴胺24mg速度2.5ml/h。多巴胺的浓度为2.5ug/kg.min,用这种方法更好的调节浓度。速度7 ml /h的浓度就是7ug/kg.min. 4. 下面是心源性的休克时的治疗！ 首要措施是增加心排血量及组织的血液灌流，要分秒必争，尽可能在休克早期获得充分治疗，以免贻误病情而发展为不可逆性休克。具体措施:(1)镇静、吸氧，保持呼吸道畅通， 良好静脉通道至少2个。(2)多巴胺和硝普钠两药同一静脉匀速经输液泵输入，多巴胺用量 为2?10g ? kg -1 ? min -1 ，硝普钠用量为1?6卩g ? kg -1 ? min -1 ，两药比例一般为 2:1 (多巴胺用量：硝普钠用量)或1:1，应由小剂量开始，如多巴胺按41 g ? kg -1 ? min -1及硝普钠按2 i g ? kg -1 ? min -1溶于10%葡萄糖溶液中匀速滴入。在滴入过程中血压上 升不满意时，应适当加大多巴胺用量，遇末梢循环改善不满意时，表现为面色仍苍白、皮肤 紫绀，四肢厥冷未改善应适当加大硝普钠的用量，休克缓解后，两药应逐渐减量至0.5?1 1 g ? kg -1 ? min -1左右，再观察1?2h,病情稳定可以停药。(3)快速洋地黄化，休克症状好转或休克缓解后使用地戈辛快速化量。(4)激素早期大量使用，地塞米松1?2mg/kg , 甲基强的松龙10?30mg/kg。(5)限制静脉速度，禁忌扩容，匀速低张力，无异常丢失只补充生理维持液。(6)利尿剂的使用：血容量充足前提下，前负荷增加因素。(7)纠正酸中毒， 心源性休克时出现的代谢性酸中毒主要是循环障碍引起，当有效循环恢复后，可自动纠正，当pH小 于7.20时，一般采用5%碳酸氢钠1?1.5ml/kg静注1?2次即可。(8)对症处理。 5. 多巴胺的简易方法：个人所需多巴胺用量二3X体重 将多巴胺加入NS至50ml后用泵维持，如果需要A ug/kg/min,则泵的速度为A ml/h。 例：一60kg的病人，需5ml/kg/min (一支多巴胺为2ml：20mg 计算：患者所需多巴胺的支数为3X 60- 20= 9 (支) 所需生理盐水50-2X 9 = 32 ( ml),这样配成了50ml的溶液然后用泵维持5ml/h即可这个方法是ICU的老师教的，大家可以验证的。 证明：设病人体重为M,按上述方法将泵维持在A ml/h