人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶联免疫分析（ELISA）
试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的活性。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平。用纯化的人肌酸激酶同工酶MB抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CK-MB，再与HRP标记的CK-MB抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CK-MB呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份
封板膜2片（48）2片（96）
密封袋1个1个
酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存
样本处理及要求：
1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心
20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5.组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90U/L，60U/L，30U/L，15U/L，7.5U/L）。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
（此图仅供参考）
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.92以上。
2.批内与批间应分别小于9%和15%
检测范围：
5U/L-100U/L
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
FOR RESEARCH USE ONLY Human Creatine Kinase MB isoenzyme
Drug Names
Kit.. Generic Name：Human Creatine Kinase MB isoenzyme(CK-MB
CK-MB))ELISA Kit Purpose
This kit allows for the determination of CK-MB in Human serum,Ttissue,and other biological fluids.
Principle of the assay
T he kit assay Human CK-MB level in the sample，use Purified Human CK-MB antibody to coat microtiter plate wells,make solid-phase antibody,then add CK-MB to wells,Combined CK-MB which With HRP labeled,become antibody-antigen-enzyme-antibody complex,after washing Completely,Add TMB substrate solution,TMB substrate becomes blue color At HRP enzyme-catalyzed,reaction is terminated by the addition of a sulphuric acid solution and the color change is measured spectrophotometrically at a wavelength of450nm.The concentration of CK-MB in the samples is then determined by comparing the O.D.of the samples to the standard curve.
Materials provided with the k it
Materials provided with
the kit
48determinations96determinations Storage User manual11
Closure plate membrane22
Sealed bags11
Microelisa stripplate112-8℃Standard：135U/L0.5ml×1bottle0.5ml×1bottle2-8℃
Standard diluent 1.5ml×1bottle 1.5ml×1bottle2-8℃HRP-Conjugate reagent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Sample diluent3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution A3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Chromogen Solution B3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃Stop Solution3ml×1bottle6ml×1bottle2-8℃
wash solution （20ml×20fold）
×1bottle
（20ml×30fold）
×1bottle
2-8℃
Specimen requirements
1.serum
serum--coagulation at room temperature10-20mins，centrifugation20-min at the speed of 2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
2.plasma
plasma--use suited EDTA or citrate plasma as an anticoagulant,mix10-20 mins,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
3.Urine-collect sue a sterile container,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.
remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.The Operation of Hydrothorax and cerebrospinal fluid Reference to it.
4.cell culture supernatant-detect secretory components,collect sue a sterile container,
centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,detect the composition of cells,Dilut cell suspension with PBS（PH7.2-7.4）,Cell concentration reached1million/ml,repeated freeze-thaw cycles,damage cells and release of intracellular components,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.remove supernatant,If precipitation appeared,Centrifugal again.
5.Tissue samples-After cutting samples,check the weight,add PBS（PH7.2-7.4）,Rapidly
frozen with liquid nitrogen,maintain samples at2-8℃after melting,add PBS（PH7.4）,
Homogenized by hand or Grinders,centrifugation20-min at the speed of2000-3000r.p.m.
remove supernatant.
6.extract as soon as possible after Specimen collection,and according to the relevant
literature,and should be experiment as soon as possible after the extraction.If it can’t, specimen can be kept in-20℃to preserve,Avoid repeated freeze-thaw cycles.
7.Can’t detect the sample which contain NaN3,because NaN3inhibits HRP active.
Assay procedure
1.Dilute and add sample to Standard:set10Standard wells on the ELISA plates coated,add Standard100μl to the first and the second well,then add Standard dilution50μl to the first and the second well,mix;take out100μl form the first and the second well then add it to the third and the forth well separately.then add Standard dilution50μl to the third and the forth well,mix;then take out50μl from the third and the forth well discard,add50μl to the fifth and the sixth well,then add Standard dilution50μl to the fifth and the sixth well,mix;take out50μl from the fifth and the sixth well and add to the seventh and the eighth well,then add Standard dilution50μl to the seventh and the eighth well,mix;take out50μl from the seventh and the eighth well and add to the ninth and the tenth well,add Standard dilution50μl to the ninth and the tenth well,mix,take out50μl from the ninth and the tenth well discard(add Sample50μl to each well after Diluting,(density:90U/L，60U/L，30U/L，15U/L，7.5U/L)
2.add sample：Set blank wells separately(blank comparison wells don’t add sample and HRP-Conjugate reagent,other each step operation is same).testing sample well.add Sample dilution40μl to testing sample well,then add testing sample10μl(sample final dilution is 5-fold),add sample to wells,don’t touch the well wall as far as possible,and Gently mix.
3.Incubate:After closing plate with Closure plate membrane,incubate for30min at37℃.
4.Configurate liquid:30-fold(or20-fold)wash solution diluted30-fold(or20-fold)with distilled water and reserve.
5.washing：Uncover Closure plate membrane,discard Liquid,dry by swing,add washing buffer to every well,still for30s then drain,repeat5times,dry by pat.
6.add enzyme：Add HRP-Conjugate reagent50μl to each well,except blank well.
7.incubate：Operation with3.
8.washing：Operation with5.
9.color：Add Chromogen Solution A50ul and Chromogen Solution B to each well,evade the light preservation for15min at37℃
10.Stop the reaction：Add Stop Solution50μl to each well,Stop the reaction(the blue color change to yellow color).
11.assay：take blank well as zero,Read absorbance at450nm after Adding Stop Solution and within15min.
Important notes
1.The kit takes out from the refrigeration environment should be balanced15-30minutes in
the room temperature,ELISA plates coated if has not use up after opened,the plate should be stored in Sealed bag.
2.washing buffer will Crystallization separation,it can be heated the water helps dissolve
when dilute.Washing does not affect the result.
3.add Sample with sampler Each step,And proofread its accuracy frequently,avoids the
experimental error.add sample within5mins,if the number of sample is much, recommend to use Volley.
4.if the testing material content is excessively higher(The sample OD is bigger than the first
standard well),please dilute Sample(n-fold),Please diluente and multiplied by the dilution factor.（×n×5）.
5.Closure plate membrane only limits the disposable use,to avoid cross-contamination.
6.The substrate evade the light preservation.
7.Please according to use instruction strictly,The test result determination must take the
microtiter plate reader as a standard.
8.All samples,washing buffer and each kind of reject should according to infective material
process.
9.Do not mix reagents with those from other lots.
Calculate
Assay range
5U/L -100U/L
Storage and validity
1．Storage ：
2-8℃.
2．validity ：six months.
Take the standard density as the horizontal,the OD value for the vertical ,draw the standard curve on graph paper,Find out the corresponding density according to the sample OD value by the Sample curve,multiplied by the dilution multiple,or calculate the straight line regression equation of the standard curve with the standard density and the OD value ,with the sample OD value in the equation,calculate the sample density,multiplied by the dilution factor,the result is the sample actual density.
This chart for reference only
肌酸激酶同工酶——MB评估 上海仁济医院检验科 肌酸激酶MB同工酶（CK-MB）是由M和B亚基构成的杂化型二聚体，主要存在于心肌细胞的外浆层，是心肌酶谱中最有特异性的酶，从80年代起公认为心肌酶学诊断的“金标准”，应用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊断[1，2]1979年Gerhardt[3]等人首次报道用免疫抑制原理测定CK同工酶，免疫抑制法以其快速、灵敏、定量且可进行自动分析等优点适合常规检测，随着方法与试剂不断改进与完善，1986年国外已有试剂盒供应，但价格昂贵；最近国内研制成功免疫抑制法测CK-MB的试剂盒，本文旨在对该试剂盒的特性作一评估。 材料和方法 一、标本来源 分正常组，AMI组和非AMI组，非常人血清来自体检健康人员，计30例，AMI 组53例，系仁济医院心内科病房已确诊为AMI者，非AMI组系心内科及其它科门诊病人，因胸痛、心率失常等初诊疑拟AMI，后经系列观察和酶学检查证实不是AMI患者，共20例。 血标本留取后及时分离血清检测或将检测血清置于-20度冰箱保存至测定。 二、试剂 1. 免疫抑制法检测CK-MB试剂盒：上海北加生化试剂有限公司产品 （1）R1：含CK-MB抗体的咪唑缓冲液 （羊抗人CK-M多克隆抗体抑制剂>2000U/L，100mmol/L的咪唑缓冲液成 pH6.7内含葡萄糖20mmol/L，醋酸镁10mmol/L，EDTA 2mmol/L）（2）R2(A)：酶干粉。 （AMP 5mmol/L，磷酸肌酸30mmol/L，五磷酸二腺苷10mmol/L，NADP 2mmol/L，V-乙腺半胱氨酸20mmol/L，已糖激酶≥2500U/L，G6PDH≥ 500U/L，ADP 2mmol/L）。
血清肌酸激酶MB同工酶测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 使用CK-M 多克隆抗体对肌酸激酶（CK）中CK-M同工酶的活性进行抑制后，采用德国临床化学会（DGKC）和国际临床化学会（IFCC）推荐的连续监测法测定余下的肌酸激酶（CK）活性。其反应原理如下： ⑴CK-MM 型同工酶 + CK-M抗体→ CK-MM型同工酶的活性被抑制；CK-MB 型同工酶+ CK-M 抗体→ 50%的CK-MB 型同工酶的活性被抑制； ⑵剩余的50%无活性的CK-MB型同工酶 + N-乙酰半胱氨酸→有活性的CK-B型同工酶 CK同工酶 ⑶磷酸肌酸 + ADP 肌酸 + ATP 己糖激酶(HK)
ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖-6-磷酸 (G6P-DH) 葡萄糖-6-磷酸+NADP+6-磷酸葡萄糖酸+NADPH+H+ 式中：ADP为二磷酸腺苷；ATP为三磷酸腺苷；NADP+为氧化型辅酶II；NADPH+H+为还原型辅酶II。 在上述反应中，NADPH+H+ 的生成速率与样本中肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性成正比。通过在波长340nm 处监测吸光度值的上升速率，即可测得样本中肌 酸激酶B 型同工酶（CK-B）的活性。肌酸激酶B 型同工酶（CK-B）活性相当于1/2肌酸激酶MB型同工酶的活性，将所测得的肌酸激酶B型同工酶（CK-B）的活性乘以2，即为肌酸激酶MB 型同工酶（CK-MB）的活性。 3 标本： 3.1 病人准备：无特殊。 3.2 类型：血清或肝素血浆。
3.3 标本存放：稳定性：-20℃保存稳定4周（避光保存）。 活性损失：2～8℃保存24小时或18～22℃保存1小时至少 损失10%。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。血标本应尽快送往化 验室,室温下放置30―45分钟,后离心,放置时间不得超过3h. 血清必须吸出,转移至有盖的试管中. 3.5 标本拒收标准：细菌污染的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司CK-MB试剂盒（沪 食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014） 4.1.1 试剂组成 试剂1（R1）： D-葡萄糖27mmol/L 咪唑缓冲液 60mmol/L 乙酸镁14mmol/L NADP 2.7mmol/L
a-L-岩藻糖苷底物测定AFU酶活的评估 元升生物科技技术研发部 1概述 a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase，AFU)的分类名为a-L-岩藻糖苷酶水解酶(EC3．2．1．51），催化岩藻糖苷键水解，参与含岩藻糖的低聚糖、糖肽、糖蛋白和糖脂的分解代谢。AFU合成于细胞内，定位于溶酶体，是一种酸性水解酶，它的本质是糖蛋白。广泛分布于人体肝、肾、胰、脑和胎盘等组织以及血清、尿液、唾液和泪液中。AFU在人体内呈多形性，在等电聚焦电泳中AFU 可分出5～9条区带，血清中AFU除含有PI为4．68和4．84两种主要成分以外，还可见到5个次要成分。AFU具有3型同工酶，即AFU1、AFU2和AFU3，是由1个位于第一号染色体短臂（1p34）上基因位点的2个等位基因所表达，由于不同人所表达的同工酶类型不同，所以正常人群AFU活性也有所不同，大约有10%左右的正常人血浆AFU呈低活性。测定a-L-岩藻糖苷酶(a-L-Fucosidase,AFU)对诊断原发性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC)具有重要临床意义。它是PHC的特异性标志物,可用于PHC的早期诊断. 2 原理 底物CNP-AFU在血清样本中a-L-岩藻糖苷酶酶作用下，生成产物CPNP，而产物CPNP的生成量与样本中AFU的酶活性成正比，通过测定黄色产物在405nm波长的生成速率，即可计算出样本中AFU的活性。 3 实验方法 3.1 样本瑞安市人民医院临床新鲜血清样品。 3.2 仪器和试剂CNP-AFU元升生物科技生物科技有限公司生产，批号 1213M05QH。进口底物购自美国sigma公司，批号1013C07QH；仪器为日立7080全自动生化分析仪、抗坏血酸、胆红素、人胎盘a-L-岩藻糖苷酶均购自sigma公司，血红蛋白标准品购自上海血液中心。 3.3 试剂配制方法按常法配制，所用原料均为分析纯。 3.4 测定方法HITACHI 7080自动分析仪参数反应类型：Rate-A法；反应温
肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）测定试剂盒（化学发光免疫分析法） 说明书 【产品名称】 通用名称：肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）测定试剂盒（化学发光免疫分析法） 英文名称：Creatine kinase MB（CLIA） 【包装规格】 2×30 人份/盒、2×50 人份/盒、2×100 人份/盒 【预期用途】 用于体外定量测定人体血清或（和）血浆中肌酸激酶同工酶MB 的含量。 肌酸激酶主要催化高能磷酸键从ATP 转移到肌酸，生成磷酸肌酸。肌酸激酶是二聚体酶，包括骨骼肌CK-MM，脑组织CK-BB，心肌CK-MB 和线粒体肌酸激酶等四种同工酶形式。CK-MB 分子量80,000，由两个亚单位组成(每个亚基MW= 40000)：亚单位M 表示肌肉型，亚单位B 表示脑型。CK-MB 主要存在于心肌组织，占CK 总活性的20%，骨骼肌中也有微量分布。 血清中CK-MB 含量对诊断急性心肌梗死、心肌炎等心肌缺血性疾病有重要意义。CK-MB 在心肌损伤早期即可出现于循环血中，于心肌损伤后2-6 小时开始升高，在12-24 小时内达到峰值，之后降至正常水平(36–72 小时)， CK-MB 测值的升降伴随ECG 演变和胸痛病史。CK-MB 含量和时间变化，对评估心肌损伤发病时间、梗死体积 以及再灌注后损伤有重要意义。此外，骨骼肌损伤、横纹肌溶解症及中风等疾病中，也伴随有CK-MB 含量升高。 临床诊断上，CK-MB 经常与肌红蛋白和肌钙蛋白I 联合检测。在心肌损伤相关疾病诊断上，肌钙蛋白I 特异 性强，肌红蛋白和CK-MB 早期敏感性高，三者联合检测可以提高诊断的特异性、敏感性。 【检验原理】 肌酸激酶同工酶MB 测定采用双位点夹心化学发光免疫分析法，其采用的技术原理如下： 第一步：将样本与包被着CK-MB 单克隆抗体的超顺磁性磁微粒（磁珠）以及CK-MB 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物添加到反应管中，经过孵育，样本中的CK-MB 和包被在磁珠上的CK-MB 单克隆抗体结合，同时CK-MB 单克隆抗体-碱性磷酸酶标记物与样本中CK-MB 另一位点结合。反应完成后，磁场吸住磁珠，洗去未结合的物质。 第二步：将化学发光底物（3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷，AMPPD）添加到反应管内，发光底物AMPPD 能有效地被碱性磷酸酶所分解, 脱去一个磷酸根基团，生成不稳定的中间产物，该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光，由光电倍增管对反应所产生的光子数进行测量，所产生的光子数与样本内CK-MB 的浓度成正比。样本内分析物的量由定标曲线来确定。 【主要组成成分】 注：不同批号试剂盒中各组分不能互换。
肌酸激酶与肌酸激酶同工酶的结果解读 摘要：在当前肌钙蛋白在绝大多数县级以上医院普及的情况下，依然有相当多 的基层医院在评价心肌损伤标记物时会选择心肌酶谱。目前这些指标已整合到生 化全套检测中，其中CK-MB在临床诊断中的敏感性和特异性最高，至今仍然可以 作为心肌损害的重要的诊断指标。 关键词：肌酸激酶；同工酶 The results of creatine kinase and creatine kinase were interpreted Xu ying.（Anhui huainan east hospital group xiesan hospital，Anhui Huainan 232052，China） [Abstract] In the current troponin in the vast majority of the popularization of the hospital at or above the county level cases，there are still quite a lot of basic-level hospitals in evaluating myocardial injury markers will choose myocardial enzyme spectrum. At present，these indexes have been integrated into the biointegration test，and the sensitivity and specificity of ck-mb in clinical diagnosis can still be regarded as an important diagnostic index for myocardial damage. [Key words] Creatine kinase；isozyme 20世纪90年代前，肌钙蛋白还未广泛在临床应用，血清心肌酶谱是诊断心肌损伤的一 类重要指标，即使在当前肌钙蛋白在绝大多数县级以上医院普及的情况下，依然有相当多的 基层医院在评价心肌损伤标记物时会选择心肌酶谱，包括肌酸激酶CK及肌酸激酶同工酶CK-MB、乳酸脱氢酶LDH、谷草转氨酶AST和α羟丁酸脱氢酶α-HBDH。目前这些指标已整合到 生化全套检测中，其中CK-MB在临床诊断中的敏感性和特异性最高，至今仍然可以作为心肌 损害的重要的诊断指标。临床也经常能碰到患者拿化验单咨询的情况，护理人员对此应该有 所了解。CK广泛存在于机体组织中，至少有3种主要的同工酶：CK-MM、CK-MB、CK-BB。 CK-MM 主要存在于骨骼肌细胞中；CK-MB主要存在于心肌细胞中；CK-BB主要存在于脑组织中。心肌细胞损伤主要以CK-MB升高为主，总CK也会随之升高。解读CK-MB应该注意： 1药物原因 他汀是最常见的引起CK-MB升高的药物，主要与他汀肌溶解有关，故CK升高水平更为 明显。除此之外，某些麻醉药、镇静药、催眠药、乙醇、秋水仙碱等均可引起CK和CK-MB 升高。 2运动影响 一般生化检查要求检查者前两天尽可能避免剧烈的运动和锻炼，尤其平常比较少参加锻 炼的检查者，即便检查前不很剧烈的活动也可能会引起CK明显升高，同时伴有CK-MB不同 程度的升高。 3发热 尤其是高热可以引起肌肉损伤，所以对于感染发热患者，如果CK轻度升高并不用特别处理。 4手术或挤压创伤 有时手术后1-2个月CK仍然会不同程度升高，这种患者如果因其他原因再次住院，如没 有仔细询问患者近期手术史，往往会因不清楚CK或CK-MB升高的原因而进行很多不必要的 检查。 5年龄因素 14岁以下儿童的CK-MB无论是绝对活性或相对活性，一般要比成人高出2-3倍，由于不 同年龄CK-MB正常值范围不同，建议有怀疑心肌炎的儿童，以肌钙蛋白作为主要血清学参考 指标。另外，妊娠3个月左右CK和CK-MB水平也明显高于正常人。 6其他系统疾病 肿瘤、脑部疾病、甲状腺功能减退、多发性肌炎、横纹肌溶解、低钾血症等病变也会引 起CK和CK-MB增高，其中肿瘤、脑部疾病可引起CK-BB增高，但由于CK-BB不能直接检测，
人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，组织及相关液体样本中肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)的活性。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)水平。用纯化的人肌酸激酶同工酶MB抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入CK-MB，再与HRP标记的CK-MB抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CK-MB呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品：135U/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1.血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2.血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3.尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/ 分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
肌酸激酶同工酶/肌酸激酶大于30%分析 申学红 [摘要] CK主要存在于骨骼肌、心肌和脑组织中，临床上主要用于诊断心肌损伤的疾病，一般情况下CK-MB不超过总CK的5%，但在临床标本中经常发现CK-MB/CK超过30%甚至超过总CK的现象，现分析其原因。 [关键词] 肌酸激酶同工酶；肌酸激酶 肌酸激酶（creatine kinase，CK）是心肌中重要的能量调节酶，[1]广泛存在于细胞浆和线粒体中，和肌酸激酶同工酶作为诊断心肌梗死或心肌坏死的特异性指标，已经广为使用，其特异性和敏感性已经得到公认。如果血清中肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）同时升高，则应考虑心肌梗死的可能性。且肌酸激酶同工酶（CK-MB）不会高于肌酸激酶（CK），但由于测定方法的原因，临床上难免会出现CK-MB/CK大于30%甚至超过总CK 的现象，就会给临床医生和检验人员造成一定的困惑。现总结我院2014年全年的检测结果，并对其原因进行分析。 病历资料 2014年1月至2014年12月来我院检测该项目共1210例，采用上海丰汇FH-400生化全自动分析仪，厦门英科新创的原装试剂，以及配套校准品。其中CK-MB/CK大于30%的有56例，占总数的4.6%；CK-MB超过总CK的有5例，占总数的0.4%。标本均无溶血。且该部分患者经检查后排除了心肌损伤的情况。由此可看出，此种现象在临床并非个例，该现象的出现提醒我们方法学的局限性值得临床参考。 分析 CK广泛分布于全身，在骨骼肌含量最高，其次是心肌和脑，由M和B两类亚基组成CK-MM、CK-MB、CK-BB三种同工酶。[1]骨骼肌里几乎都是CK-MM，胎儿肌肉组织和富含平滑肌的器官如胃肠道、膀胱、子宫也含有一定量的CK，但CK-BB含量相对颇高，脑组织中CK-BB的含量明显高于其他组织；心肌中CK-MB含量较高。 讨论 这种情况大多是由于测定方法所导致的。目前我国常规工作中测定CK-MB主要使用免疫抑制法，其原理是：试剂中加入CK-M抗体，它能完全抑制CK-M亚基的活性，而不影响CK-B亚基的活性，将结果乘以2即为CK-MB的活性。由于健康人和心脏、肌肉疾病患者血清中CK-BB的含量极少甚至没有，一般忽略不计。[2]如果血清中含有的CK-BB较多或者有巨CK出现时，再用免疫抑制法测定CK-MB时，就会出现CK-MB>总CK的现象。究其原因有二。 第一种情况是由于脑损伤、肠坏死、子宫肌损伤、前列腺炎等原因导致被忽略的CK-BB 异常增高[3]，这时测得的B亚基为CK-MB中的B亚基加上CK-BB中的B亚基之和，再乘以2，就可能出现CK-MB/CK大于30%甚至大于总CK活力的情况。这些含CK-BB较多的组织发生病变时，组织中的CK-BB可能会释放入血，使得在测定时把BB亚基误认为是MB 亚基中的B亚基的活性，从而导致CK-MB的活性升高，甚至超过总CK的活性。