一、关于血清使用的几点建议：
1、血清必须贮存-20℃，如存放于4℃，请勿超过两周，对于某些单位一次无法用完一瓶，可在无菌条件下将其40-45ml分装于无菌50ml离心管中(或血清瓶中)，由于血清解冻时体积会增加10％，必须预留此膨胀体积的空间，否则易发生污染或容器冻裂的情形。
2、一般公司所提供的血清一般为100ml和500ml装量，因此建议在使用中宜采取逐步解冻的方法解冻血清：-20℃→4℃冰箱或冷库溶解24小时→室温下全溶后再分装，一般以50 ml无菌离心管中分装40-45ml。使用过程中要特别注意，必须规则地将血清摇晃均匀，小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由-20℃放置至37℃环境下解冻，因为温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而产生沉淀。
3、血清的灭活(heat-inactivation)一般是指56℃，30分钟水浴加热已完全解冻的血清，加热过程中必须规则地摇晃均匀。此处理的目的是使血清中的补体成分(complement)去活化。但是，经过灭活处理的血清会因而造成沉淀的显著增多，且会影响血清的品质。所以，有的公司所生的细胞培养用牛血清不做灭活处理，由客户自行选择。而诊断试剂用血清在除菌过滤前进行过灭活处理。
4、在使用血清的时候，勿将血清留置于37℃太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分会因而受到破坏，影响血清的品质。
5、一般我们在使用过程中是先过滤培养基，再加血清，勿直接过滤血清。
6、血清的沉淀物：
(1)凝絮物：其产生的原因有多种，但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)变形及解冻后血清中存在的纤维蛋白(fibrin)造成，这些凝絮沉淀物不会影响血清本身的品质。除非必须，如果您想减少这些沉淀物，建议可用离心3000rpm，5min去除，或离心后取上清液加入培养基中一起除菌过滤。
(2)显微镜下观察“小黑点”，通常经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为是血清遭受污染(如黑胶虫)，而将血清放置在37℃中欲培养此“微生物”，但37℃环境下，又会使此沉淀物增多，更会误认为微生物的增殖，但以培养细菌的培养基检测，又没有污染。一般而言，此小黑点不会影响细胞的生长。
二、血清质量的决定因素：
1、关于牛种：
血清质量与牛种没有必然的联系，但有其先天条件。
首先，澳大利亚、新西兰的牛源之所以被国际公认为最好，原因是这些国家的牛源是“无污染”的，“无污染”的实际含义是：病毒等外源因子污染较少。至于美国，由于其国内出现了疯牛病，其形象由此受到挑战。这种血清安全性的观念在发达国家认知度较高，而在我国还不够重视。其次，牛所能获得的营养对血清质量有影响。在我国，由于饲养条件的不同，不同地区产的血清质量是有差异的。
2、质量标准件的问题：
我国对人用生物制品生产所用的牛血清制定了国家标准，载于《中国生物制品主要原辅材料质控标准》2000年版，此标准已接近于国外胎牛血清的有关标准。内毒素：国家标准件为不高于10Eu/ml，内控标准件为不高5Eu/ml或10Eu/ml。国家标准之外的质控指标还有：免疫球蛋白、牛腹泻病毒(BVDV)抗体、激素、和牛源安全性验证等。
3、牛血清的命名和选择：
一般公司对细胞培养用牛血清的命名分二类：胎牛血清和小牛血清。对于一般的细胞系，小牛血清可以培养得很好。
三、关于牛血清白蛋白的生产工艺：
牛血清白蛋白的制备方法有Cohn's法、盐析法、热变性法等多种工艺。不同的生产工艺其产品的名称、质量指标、应用领域等各不相同。
其中Cohn's法设备、工艺要求比较高，相对应的生产成本较高，但产品质量较好。牛血清组份V(FrationV)就是由Cohn's法制备的。一般白蛋白纯度96-99%、外观洁白、结晶性状好、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2，再根据不同的应用分成低内毒素、低脂肪酸等等的不产品，主要应用于细胞培养领域的无血清培养基中。盐析法因生产周期长，纯度低和产品聚合体高、稳定性低等缺陷已很少应用。
目前国内应用比较普遍的是热变性法，结合较先进的超滤生产工艺，其工艺要求相对较低，制备成本低，其缺点是目前应用领域比较单一，仅供免疫诊断试剂使用。（
解决血清使用中的常见问题 1、如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损？ 将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2－8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时，请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶，建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2、血清中包含絮状沉淀，它们是什么，怎么处理？ 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性，不会影响产品性质。要除去沉淀，离心血清（400g，1-2分钟）或者简单的让其沉淀在瓶子底部，将血清小心的转移到另一个无菌瓶里（一般不建议采用过滤的方法除去沉淀，因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤）。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以，使用产品时要摇动并加热血清至37℃，沉淀会自然消失。 3、实验室如何选择适合的血清？ 国内一致认为HYCLONE的血清是最好的，但是根据我在北美的经历，国外一般认为GIBCO比HYCLONE好，所以并不是价格决定质量，但是总的来说这两种价格普遍偏贵，一般不是太娇气的细胞，国产的就够用了。此外，由于国内HYCLONE，GIBCO并没有生产线，我们只能从代理商那里买，而代理商又鱼龙混杂，所以买到假货的可能性也很大。所以，我一般会从直销员那里买血清，有的国外生物公司由于刚刚进入中国，知名度不高，但是其实在国外已经做得很不错了，如Wisent等，他们在国内有办事处，我会从那里拿，血清的品质和HYCLONE不相上下，但价格相对优惠很多。 4、如何避免血清中产生沉淀？ 按如下操作可避免沉淀的产生： （1）解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生。（2）血清分装冻存时，须规则摇晃均匀（小心勿造成气泡），使温度与成分均一。（3）勿直接由-20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。 （4）勿将血清置于37℃太久，否则血清会变得浑浊，同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏，从而影响血清的品质。 （5）血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。（6）若必须做血清的热灭活，请遵守56℃，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。
风淋室使用说明书
简介： 感谢您购买本公司更衣风淋室，更衣风淋室是防止污染空气进入洁净区的装置.其原理是利用高速洁净气流吹除进入洁净室人员更衣过程中衣物表面附着的灰尘颗粒。同时，由于洁净室的两扇门是不同时开启的，可以兼起气闸作用，控制外部污染空气进入洁净区。本设备广泛应用于半导体元器件生产工厂、生物实验室、制药厂、食品加工业、电子厂等等一切需要空气净化的场所。 此手册向您介绍更衣风淋室的结构及使用事项。 正视图側视图 风淋各部分名称 1. 顶盖 9. 脚踏板 17. 手动 2. 电路控制板 10. 底盘 18. 照明 3. 正压箱 11. 光电开关 19. 时间显示器 4.高效过滤器 12. 左企身 20. 闭门器 5. 右企身 13. 风嘴 6. 不锈钢门 14.风嘴板 7. 风机 15. 灯盖板 8. 初效过滤器 16. 急停开关
正视图側视 图 技术指标： ［注］：以上仅为部分技术参数。
一操作事项： 准备工作： ●进入风淋室 ●检查急停是否正常（急停按钮上方的指示灯亮时为非正常状态，此 时应点动急停按钮，直至指示灯熄灭）。 ●按照语音提示，站在感应区内。 二进入风淋室:(基本动作程序) ●打开前门进入风淋室,随后关闭前门. ●按照语音提示，站在感应区内。 ●前后门自动锁上. ●风淋(除尘)开始工作.此时指示灯显示为红色。 ●显示器显示除尘时间(图). ●吹淋结束后，此时指示灯显示为绿色，按照语音提示打开后门进入 净化间。 . [注]:风淋室通常为单向使用. 三注意有关紧急事项: ●风淋室正常工作时，严禁外人进入。 注意：风淋工作时，不能用力使劲去推拉门；否则 电锁会被损坏，本公司将不负责保修。
制定日期 风淋室操作规程 文件编号 生效日期 版次 一、目的 本规程用于保证风淋室正确、安全的使用，确保其使用寿命。 二、适用范围 本规程适用于指导本公司风淋室的操作，防止安全事故及对设备进行保养。 三、操作流程 1、风淋步骤 1.1进入车间的人员应在外更衣室穿戴好静电服、静电鞋和无尘帽。 1.2走近风淋室外门，确认风淋室内没有其他人员，风淋室门外部亮起绿色的指示灯“GO ”， 否则不得打开风淋室外门。 1.3打开外门，进入风淋室后并随手关闭外门。 1.4走过风淋室红外感应探头，此时风淋室双门自动上锁，同时风淋室风机启动，开始吹淋。 1.5按设定的时间吹淋完毕后，打开风淋室内门进入车间。 2、风淋参数设定（非设备人员不得擅自更改参数设定） 2.1电源键：控制风淋室的电源，风淋过程中如有特殊情况可按“电源键”结束风淋，并迅速 离开风淋室。 2.2风机键：按该键可执行一次风淋循环。 2.3照明键：控制风淋室内照明灯的开启和关闭。 2.4设置键：按该键结合“+”、“-”键可分别对风淋时间、照明时间、屏保时间、间隔启动 进行时间长度短的设定。 四、注意事项 1、进出门时必须轻拉推门把手，不要将门的开度打开至极限，以免造成门、门锁的损坏。 2、在一门打开状态下决不要用力开另一门。 3、在吹淋状态，不得强制性地将门打开。 4、吹淋结束后请等待2s 以上时间再开门。 批准： 审核： 编制： 红外感 应探头 2.1 2.2 2.3 2.4 绿灯亮起才能进入风淋室。
制定日期 风淋室操作规程文件编号生效日期版次五、保养维护 1、每天由制造部负责对风淋室地板和侧壁进行清洁。对风淋室的照明灯、指示灯的功能进行确认， 发现异常要及时通知设备部检查和维修。 2、当发现风速变小时，按图示1取下初效过滤器检查表面是否发黑，若发黑则应拆下初效空气 过滤器内的无纺布进行清洗或予以调换。每月由设备部检查一次。 3、当调换或清洗无纺布后，仍不能提高风速则说明高效空气过滤器已经堵塞，可按图示2、3取 下高效过滤器进行更换。更换高效空气过滤器时，须拆下喷球板，取出高效过滤器，按照原 有高效过滤器的规格型号更换新的高效空气过滤器。安装时应确认高效过滤器上的箭头标记， 箭头应指向气流的方向，并确保密封良好，防止渗漏。一般情况下，高效过滤器的使用期为 两年。每年由设备部检查一次。 4、每年由设备科对风淋室的电路、控制面板、离心风机等进行功能确认。发生故障要及时维修。 批准：审核：编制：3 2 1
胎牛血清制备 Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT
胎牛血清制备 一、目的: 为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。 二、操作方法： （一）采血 1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。 2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。 3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。 4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。 5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。 （二）离心 将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。 （三）抽血清 取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。 （四）血清过滤
胎牛血清品牌整理 第一类，最高级别，是专门用于干细胞的特级胎牛血清 1、Hyclone的特级胎牛血清 目前，性能最好的血清，还是要说说Hyclone的特级胎牛血清，货号是SH30070.03，它是Hyclone的“招牌菜”。 Hyclone特级胎牛血清（Defined FBS），货号SH30070，是世界上唯一经过40纳米过滤的顶级胎牛血清，极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量≤10EU/ml，血红蛋白含量≤10mg/dl。 此血清可以广泛用于各种细胞培养，包含任何干细胞系的培养。 因为美国那边有疯牛病，无法进口。实际上，40nm的过滤，已经将全部的病毒、支原体处理掉，同时，是用于科研级别的，洁净程度非常高。不让进口，只是我们国家为了保护本国畜牧业的一个手段，针对牛肉方面，而胎牛血清是受到殃及而已。 2、Gibco的特级胎牛血清 稍次一点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是16000-044，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone的SH30070.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，所以渠道特殊。 3.TCB的特级胎牛血清 TCB（Tissue Culture Biologicals）公司作为一家生物行业类的著名供应商，成立于1978年，大部分血清的采集和加工都在加利福尼亚。每一批的原材料都经过严格筛选，所有的产品都在FDA认证的cGMP车间进行！ TCB 公司一贯重视产品质量，为客户提供最优质的血清及相关产品，经过多年的发展，公司产品种类丰富，各种品质的血清和培养基能满足所有实验室的需求。 TCB 公司经过美国食品药品监督管理局（FDA）和美国农业部（USDA）的授权认证。与人相关的产品符合疾控中心（CDC）的相关法规。 TCB是美国农业部（USDA）动植物检疫局（APHIS）兽医处（VS）下属的国家动物进出口中心（NCIE）的检疫认可单位，允许可控原材料、组织、细胞等的进出口贸易！ 4. Bioind特优级胎牛血清 血源来自北美和澳大利亚BioInd公司的生产完全符合GMP的要求，并通过ISO9000:2001 和ISO 13485:2003质量认证。 以安全，稳定，高效为原则的BioInd公司，所有的产品质量均完全符合国际标准。Biological Industries主营细胞培养类产品，BioInd工厂加工的胎牛血清均符合USDA标准及欧洲标准血清。根据美国农业部标准，原始血清均采自未发生疯牛病（BSE）和口蹄疫（FMD）疫情的
胎牛血清制备 一、目的: 为了保障胎牛血清产品质量的均一性和稳定性，制定以下操作方法，以规范胎牛血清生产制备。 二、操作方法： （一）采血 1、挑选出大约8月龄以上的健康妊娠母牛，经剖腹获取小牛。 2、将小牛清洗干净后，侧放在万级洁净房间内的采血台上，固定四肢及头部。 3、用来苏水清洗心脏外部，刮去心脏外部牛毛，露出心脏外部一侧皮肤，用2%碘酒擦拭消毒。 4、在心脏部位切开一道10厘米左右的切口，取出近心血管，先用2%碘酒消毒，再用75%的酒精消毒，用止血钳夹住血管，切开1厘米左右的切口进行插管，插好管后打开血管的止血钳，让牛血顺采血管流入另一个洁净房间内的采血瓶中。 5、采血瓶采血前经干烤灭菌（180℃ 2小时）后，按无菌操作注入10毫升左右经高压灭菌的生理盐水后加塞封口，于采血前半小时放入37℃恒温箱备用。采血前先晃动瓶内生理盐水，使其充分湿润瓶壁后倒出，再进行采血并加塞封口。将采血后的采血瓶放37℃恒温室2小时，再放入4℃冷库 4小时以备离心。 （二）离心 将准备好的采血瓶放入离心套筒调好平衡后，对称放入离心机，按1800转/分钟离心50分钟后，放入4℃冷库备用。 （三）抽血清 取出4℃冷库离心好的采血瓶，注意轻抬轻放，以免将下层血块和血清混层。将经过高压灭菌装有两孔瓶塞的5000ml大瓶的抽气孔
一端的管子接好空气滤器，再接到压缩机抽气口上。打开压缩机，用抽血清孔的管子轻轻抽取采血瓶内的上清液，注意控制好抽管，避免抽到下层血块。将抽好的血清分装，即为粗制胎牛血清，放入-20℃冷库冷藏备用。 （四）血清过滤 1、将-20℃冷库内的粗制血清取出化冻。 2、将化冻后的粗制血清用经过高压灭菌的12层医用脱脂棉纱布进行初滤。 3、把初滤后的血清倒入大罐进行混合。 4、将装好滤芯的滤器做密封性试验和发泡试验合格后，经过高压灭菌，在洁净室内用无菌操作法将滤器按滤柱孔径由大到小的顺序进行组装，并装上压力表。把滤器大孔径一端和蠕动泵出口进行连接。 5、用蠕动泵将大罐内的血清送入滤器进行过滤。 6、将滤出的血清在百级净化操作台上进行分装后，即为精制胎牛血清，送-20℃冷库储存。 三、注意事项： 1、在操作过程中，要经常用75%的酒精对手部进行消毒，同时避免 接触牛血或血清，特别是有伤口的部位，以免感染。 2、在采血插管过程中，插管避免接触到未消毒的部位，尽量深入血 管，使牛血能快速流完为好，并固定好插管，避免脱离动脉血管。 3、在抽血清的过程中，控制好压缩机的压力大小，避免压力过大， 抽到下层的沉淀物。 4、在过滤过程中，控制好压力的大小，避免超过滤柱工作压力。
胎牛血清，小牛血清，新生牛血清之间的区别，保存及用法 1、来源不同： 胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的 胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。组份与比例不同：两者所含的促细胞生长细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同，用途与用法不同：某些细胞必需胎牛血清才能生长，而有些细胞只需小牛血清即可，使用浓度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的浓度在20%。血清保存和使用须注意：血清应保存在-5℃至-20℃，若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时，应先将血清至于2-8℃冰箱，并经常摇匀使之溶解，然后至室温放置使之升温，绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中，如放在37℃解冻，颜色加深，粘稠度也会增加，血清在解冻和热灭活后，应按用量分装并于-20℃保存，避免反复冻融。 2、胎牛血清，小牛血清和新生牛血清三种之间的区别： 这三种血清的成份，总体没有什么明显差别，只是有一些成分与其生存环境有关，如上述有人说的抗体很少等。此外，因生长发育的需要，有些成分在小牛出生后会发生一些变化。不过还没有搞清楚它与其它的血清之间的差别。有一点可以肯定，胎牛血清中的部分功能蛋白与小牛血清中的含量有差别。 3、最为重要的一点是： 胎牛本身生活在一个洁净环境当中，其血清与外界隔绝，只要生产工艺科学规范，其质量肯定要比后两者好。 4、根据牛出生时间和血清采制分离方法分为： （1）胎牛血清：八月龄胎牛心脏穿刺取血; （2）新生牛血清：出生12-24小时新生牛静脉采血;又可细分为：a.高级新生牛血清：采血后静置自然析出的血清;b.标准新生牛血清：c.经离心分离的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清; （3）小牛血清：出生三月龄小牛动脉采血分离血清; 血清是血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展，但仍存在一些问题。
本说明书为标准型设备而编,但对 相关性设备同样适用, 请参考之。。
【1】前言 随着近代工业之进步，半导体精密工业、医药食品工业等之发展也日新月异,外界环境的病源细菌等过敏源也为人们所发觉，此等工业之作业环境需处于自然界未能达到之高洁净空气的空间，花粉、细菌等因人在外活动而附 著于身体上。虽然使用洁净室或生化用无菌室等无尘无菌化设备，可是仍有 一个最大之问题那就是作业人员出入室内时产生之尘埃污染很难去除，因作 业人员是最大之发尘源，这是一般人难于想象的。为解决这问题，就需要装 设喷气除尘设施，以便作业人员通过时借出强力的喷气将附着于衣服上或皮 肤上之尘埃吹开并除去。 PRE FILTER 送风机 4POLE/2POLE 运转 MAIN FILTER ↑↑↑↑前加循环及高处AIR JET 效理压率 过 滤AIR JET NOZZLE AIR SHOWER ROOM ↑ 吹 出 喷气除尘室之净化要素
【2】说明 １．前置过滤网(PRE-FILTER) 将尼龙不织布网材装入铝框内,其除尘效率约为15%(比重法)，以除 去较粗大之尘埃为目的。本过滤网滤材部份可用水洗或真空吸尘器 吸尘方式再生使用。 但请注意:本过滤网用水洗时,请勿搓揉。 ２．主滤网(MAIN FILTER)--HEPA FILTER 采用高性能过滤网,于0.3um以上的粒子,有99.99%以上的过滤效率。 本过滤器之滤材部份非常脆弱，故于阻塞时，只可重新处理。 ３．喷气口(AIR NOZZLE) 将加压之洁净空气经特别设计之喷气口喷出23M／S以上的风速，达 到粒子剥离之效果，并可依需求调整吹气方向，可有效的去除人体衣 服上之较大微粒子尘埃。 ４．送风机 使用高静压送风机,并采2极与4极之变极方式,以供给喷气及循环时 之使用。2极运转时为强力喷气模式，4极运转时仅做空气洁净循环 模式。 【3】结构与规格 尺寸图及配线图请参阅设计附图。 【4】设备之安装 １．本设备装于洁净室入口时,其与洁净室墙板间不可有空隙,尚若有空气泄漏现象时，请以填缝剂修边处理,并请注意设备安装之水平度， 否则影响开门及耐用性。 ２．本设备分有底座及无底座型，有底座型可直接调水平后，用硅胶填补修饰。无底座型需以膨胀螺丝固定后，以硅胶填补修饰之。
牛血清在细胞培养中的作用与质量要求． 牛血清在细胞培养中的作用与质量要求 生物技术已经被世界各国视为一种高技术，在整个科学技术中占据了特殊的显著地位，
特别是生命科 学的发展更离不生物技术，生命科学的发展备受各国的重视。我国在很多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医
药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量又是关键，而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材． 料之一。保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。
一、牛血清在细胞培养基中的主要功能 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，具有极为重要的功能。 1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的
低分子营养物。 2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。 3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和 热原质结合，起到解毒作用。 4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 5.起酸碱度缓冲液作用。 6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。 二、牛血清的主要成份 血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知，但还有一部分尚不清楚，而且血清组成及生理条件和营养条年龄、随供血动物的性别、含量常． 件不同而异。 1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白，
MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项 一、MTT是什么 MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，汉语化学名为 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。（可参考Sigma，货号M5655，Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide）二、MTT法用来做什么 简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT主要有两个用途 1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定； 2．细胞增殖及细胞活性测定。 三、为何MTT可以用来做上述工作 检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。 四、实验所需材料 1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS或生理盐水做溶剂。 市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g 1.1 对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。具休做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。将MTT 完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。 1.2 对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。 注意事项： l 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。 l 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感 l MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内（个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。 l MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套. 2．MTT甲瓒溶解液 2.1 二甲基亚砜DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。
天津市灏洋生物制品科技有限责任公司 血清在细胞培养中的作用和质量要求 现代生物技术包括基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程，这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切的关系，特别是在生物医药领域，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多都是通过细胞培养来实现的，基因工程乙肝疫苗大多是以CHO细胞作为载体；基因工程抗体药物的制备也离不开细胞培养。细胞工程领域更离不开细胞培养技术，杂交瘤单克隆抗体的研究制备完全是通过细胞培养来实现的，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量是关键，而培养基的构成中动物血清对细胞的生长繁殖起着重要作用。在动物血清中牛血清的应用又是最广泛的，所以牛血清的质量好坏直接影响生物制品的质量和安全性，保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。 一、牛血清的主要成分 牛血清是一种成分复杂的混合物，其大部分成分已为人所知，但还有一部分仍不清楚，而且血清的组成及含量通常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而存在差异。牛血清主要成分有以下几类： 1、蛋白质类除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外还有白蛋白、球蛋白、α-巨球蛋白（抑制胰蛋白酶的作用）、胎牛血清中含胎球蛋白（促进细胞附着）、转铁蛋白（能结合铁离子，减少其毒性和被细胞利用）、纤维粘连素（促进细胞附着生长）等； 2、多肽类主要是一些促进细胞生长和分裂的生长因子，最主要的生长因子是血小板生长因子，还有成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等，虽然在血清中含量很少，但对细胞的生长和分裂也起着重要作用； 3、激素类激素对细胞的作用是多方面的。包括： 胰岛素：促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关； 类胰岛素生长因子：能与细胞表达的胰岛素受体结合，从而有胰岛素同样的作用： 促生长激素：促进细胞增殖的效应； 氢化可的松：血清中含有微量该成分，它可能具有促细胞贴附和增殖作用。但有人证明，血清中的氢化可的松，在细胞密度较高时可能有抑制细胞生长和诱导细胞发生分化的作用。 4、其他成分如氨基酸、葡萄糖、微量元素等。在合成培养基中这些成分
细胞培养中的注意事项 1 冷冻管应如何解冻？ 取出冷冻管后，须立即放入37C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。 2 细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？ 除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。 3 可否使用与原先培养条件不同之培养基？ 不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类？ 不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。 5 何谓FBS, FCS, CS, HS ? FBS (fetal bovine serum) 和FCS (fetal calf serum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马血清。 6 培养细胞时应使用5 %或10% CO2？或根本没有影响？ 一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10% CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5 g时，则应使用5%CO2培养细胞。 7 何时须更换培养基？ 视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。 8 培养基中是否须添加抗生素？ 除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。 9附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？ 一般使用之trypsin-EDTA 浓度为0.05% trypsin-0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。 10 悬浮性细胞应如何继代处理？ 一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。 11 欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？ 欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg (约1,000rpm)，5 - 10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。 12 细胞之接种密度为何？ 依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。 13 细胞冷冻培养基之成份为何？ 动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 -95%原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可
辽宁农业职业技术学院毕业论文 系别：生物技术系 专业名称：兽药生产与营销 论文题目：鸡胚成纤维细胞传代 学生姓名：郐永琳 指导教师：裴春生 评阅人： 成绩： 二O一O年六月二十日
评阅人评语： 评阅人签字： 年月日
目录 摘要 (1) 关键词 (1) 前言 (1) 1材料 (1) 1.1仪器 (1) 1.2种蛋 (1) 1.3犊牛血清 (1) 1.4溶液 (1) 2方法 (2) 2.1鸡胚的选择与孵化 (2) 2.2鸡胚原代细胞制备 (2) 2.3细胞传代 (4) 3结果与分析 (4) 4讨论 (4) 4.1温度 (4) 4.2P H (5) 4.3气体 (5) 4.4细胞接种量 (5) 4.5无菌条件 (5) 5结论 (5) 参考文献 (6) 致谢 (6)
鸡胚成纤维细胞传代 摘要：采用10日龄SPF鸡胚，进行消化，制备原代细胞，当细胞长成良好单层时，按1:2比例进行细胞传代，找出鸡胚细胞传代方法和情况。其结果是：按本实验室方法进行鸡胚传代，传至20代以上细胞形态没有发成变化，细胞生长良好。细胞数量大大增加。为病毒的研究和疫苗生产提供条件。 关键词：鸡胚；传代；生长特性 前言 细胞培养的方法是将机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。细胞在培养瓶长成致密单成后，已基本饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须传代（再培养）。也是将细胞保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种操作的必经过程，在这个过程中可以掌握其操作过程又能观察到细胞的生长情况。 1 材料 1.1 仪器 培养箱、培养瓶、玻璃漏斗、吸管、移液管、纱布、水浴锅、手术剪、镊子、培养皿、烧杯、瓶塞、培养盘、蛋托、超净工作台、显微镜、三角烧杯、95%酒精、75%酒精棉、碘酒棉、废液缸等。 1.2 种蛋 SPF种蛋，由北京梅里亚维通实验动物技术有限公司提供。 1.3 犊牛血清 多用胎牛或犊牛血清。由颈动脉无菌放血。采血前先向瓶内加些等渗盐溶液湿润瓶避，采血后置室温或37℃温箱内待血液完全凝固后，有灭菌玻棒将血块自瓶壁分离。随后再置室温或4℃冰箱内一天，即可吸取血清，如有少量红细胞可离心沉淀除去。经滤过除菌分装，置-20℃冻存，使用前56℃水浴中灭活30min。 1.4 溶液 1.4.1 Hank，s液NaCl16g、Na2HPO40.304g、KCl 0.8g、KH2PO40.12g、MgSO40.4g、C6H12O6 2g、CaCl20.28g、酚红2mL、水解乳蛋白10g、加蒸馏水至2000mL高压灭菌116℃30min。 1.4.2 酚红苯酚红1g、NaOH0.12g加蒸馏水至200mL。
血清使用及保存注意事项 血清是细胞培养中最重要的元素之一。因此，我们特别整理了一些实验室里常会遇到的问题，供大家参考： 1. 保存血清最好的方法? 我们建议血清应保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议您无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。 2. 如何解冻血清才不会使产品质量受损? 我们建议您将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 3. 血清解冻后发现有絮状沉淀物出现，该如何处理? 血清中沉淀物的出现有许多种原因，但最普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成，而血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后，也会存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物，并不影响血清本身的质量。 若您欲去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装至无菌离心管内，以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物，因为它可能会阻塞您的过滤膜。 4. 为什么要热灭活血清? 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究，培养ES细胞，昆虫细胞和平滑肌细胞时，推荐使用热灭活血清。 5. 有必要做热灭活吗? 实验显示，经过正确处理的热灭活血清，对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进，或完全没有任何作用，甚至通常因为高温处理影响了血清的质量，而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清，沉淀物的形成会显著的增多，这些沉淀物在倒置显微镜下观察，像是“小黑点”，常常会让研究者误以为是血清遭受污染，而把血清放在37℃环境中，又会使此沉淀物更增多，使
产品说明书全自动风淋室-智能语音风淋门使用说明书本说明书仅供使用者安装和操作。请在安装和使用前仔细阅读此说明书，并妥善保存。 一、概述 风淋室是生物洁净室及洁净厂房的理想配套设备，它可以清除人体和物品表面附着的灰尘，减少带入洁净室的灰尘量。 本公司生产的高科技智能语音风淋室带有语音提示系统，人在吹淋时由自动语音系统提示让人有次序的完成整个吹淋除尘过程，人性化语音提示给人一种亲切感觉，并达到有效的净化效果。 １．输入接点 ａ．供电电源：AC220V ｂ．进出门开关：门磁开关（关门：闭合，开门：断开） ｃ．红外线感应开关：无源接点（无人：断开，有人：闭合） ２．输出接点 ａ．外门电锁：DC12V ≤200mA ｂ．内门电锁：DC12V ≤200mA ｃ．风机：220V AC（交流接触器线圈） ｄ．红外感应器电源：12VDC e．照明：220V AC, <=100W f．电源工作指示灯:220V AC h. 工作指示灯：220V AC 二、面板示意图 三、背面接线图（副板） 四、操作说明 *1．通电 1.1按背面接线图接好线，检查无误后请插上电源220V AC，数码显示原设置 值，如无指示灯亮为初始状态（内外门解锁，等待你的使用。） 1.2 在初次通电时，红外感应头至少2分钟后才能正常工作。
*2．待机 风淋室通电后，风淋系统红外感应头继续检测状态即为“待机状态”。 1. 1系统在待机状态时间5秒内，感应头一感应到有人时立即进行语音提示吹淋工作，当超 过待机时间（5秒）时，系统转为初始状态。 *3．进门（由外 内走）—从非洁净室进入洁净室： 3.1打开外门，内门上电自锁，风淋室照明灯点亮，工作指示灯亮，人走进风淋室，关上外门，语音提示：“你好，请站在感应区内”。系统开始检测是否有人在风淋室，如检测到有人, 系统即转入风淋过程3.2。 3.2内外门自锁，风机起动开始风淋，风淋延时开始倒数10S 。语音提示：“正在工作， 请转动身体360度”，风淋结束后，启动延时，延时结束后，内门解锁，语音提示： “吹淋完毕，请从后门退出”人出内门后，再关上内门。系统返回初始状态，等 待下一次使用。 3.3如系统在3秒内检测风淋室无人时，系统返回待机状态( 红外检测继续工作)。 3.4如有人在风淋室，但不在系统感应区内，系统即转入3.3，当系统一检测到有人 时，系统即转入风淋过程3.2。 3.5如系统正在工作，有人接触按键开关时，语音提示：“正在工作，请不要随便触 摸开关”。 3.6在风淋完成，内外门解锁后，此时可进入或退出风淋室。里面的人在5秒内没有 离开风淋室，系统自动返回初始状态。 *4. 出门（由内 外走）—从洁净室到非洁净室： 关上内门，内外门解锁。系统开始检测是否有人在风淋室。 4.2如检测到有人：可以选择内门出去:打开内门，外门上电自锁,再关上内门。系统
MTT注意事项(转) 实验前应明确的问题 1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。 2.药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。 3. 时间点的设定。在不同时间点的测定OD值，输入excel表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。 4.培养时间。200ul的培养液对于10的4～5次方的增殖期细胞来说，很难维持68h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止，影响结果，我们是在48h换液的。 5.MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。做MTT时，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值的升高。 6.理论未必都是对的。要根据自己的实际情况调整。 7.实验时应设置调零孔，对照孔，加药孔。调零孔加培养基、MTT、二甲基亚砜。对照孔和加药孔都要加细胞、培养液、MTT、二甲基亚砜，不同的是对照孔加溶解药物的介质，而加药组加入不同浓度的药物。 8.避免血清干扰。用含15％胎牛血清培养液培养细胞时，高的血清物质会影响试验孔的光吸收值。由于试验本底增加，会试验敏感性。因此，一般选小于10％胎牛血清的培养液进行。在呈色后，尽量吸净培养孔内残余培养液。 实验步骤贴壁细胞： 1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。 2. 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况 3. 5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。 4.每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。 5.终止培养，小心吸去孔内培养液。 6.每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。 7.同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）悬浮细胞： 1）收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释lg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。每板设对照（加100(储存液100 1640）。 2）置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
风淋室维修 1.当风淋室运用一段时间，如果出现风速很低时，应马上检查风淋室的过滤器能否积尘过多，如是换新的换过滤器。通常1-6个月有必要交换一次，高效过滤器通常是6-12个月交换一次。 2.如果风淋室出现不能自动感应吹淋时，检查风淋室内箱体右下角的光感系统，看光感设备能否设备正确。 如急停键为赤色时，说明风淋室则不会吹淋，只需要从头按下急停键则可正常作业。 3.当风淋室不作业时，首要检查一劣势淋门外箱体的急迫开关能否堵截，如果堵截了，用手悄然一按，往右方旋转一下松手即可。 4. 风淋室风机倒转或许风淋室风速很小时，有必要检查一下 380V三相四线的线路能否接反。如反接了风淋室的线源，轻者会致使风淋室风机不作业或反转风淋室风速减小，重者会烧掉整个风淋室的线路板。 1、定期使用仪器测定设备的各项技术指标，如不符合技术参数要求应及时予以处理。 2、根据实际使用情况，定期将初效空气过滤器中的滤料取下清洗。 3、当发现风速变小时应首先检查初效空气过滤器表面是否发黑，若发黑则说明预过滤器容尘较多，阻力增大，即应拆下初效空气过滤器内的无纺布进行清洗或予以调换。
4、当调换或清洗无纺布后，仍不能提高风速则说明高效空气过滤器已经堵塞，造成阻力增大，则应更换高效空气过滤器。 5、更换高效过滤器时，须拆下喷球板，取出高效过滤器，按照原有高效过滤器的规格型号更换新的高效空气过滤器。安装时应确认高效过滤器上的箭头标记，箭头应指向气流的方向。并确保密封良好，防止渗漏。 6、高效过滤器更换完毕后需确认边框无渗漏现象，并用尘埃粒子计数器进行检测，达到技术指标后方可进行正常工作。 7、定期对电气线路进行检修，如有故障可参照电气原理图进行维修。 8、定期对门进行围护，使电子锁与其锁孔对准，以免锁销卡死。 9、使用温度不得超过50℃，且严禁使用明火。
浅析影响胎牛血清质量的几大因素 市场上的胎牛血清种类繁多，鱼龙混杂，很多科研工作者，特别是刚接触细胞培养的人，难以分辨血清质量的优劣。本人根据十多年来血清生产销售的经验，总结如下： 一、外观 拿到血清，最先接触的是血清外观，对于缺少细胞培养经验的人来说，外观的判断尤为重要 1、颜色 根据血红蛋白含量的不同，胎牛血清可表现出黄色或红色，我国的细胞培养用血清标准是不高于20mg/dl，实际上，血红蛋白含量的高低对血清并无直接影响，这个指标的意义在于能体现出采血过程的严谨规范程度，良好的操作能降低血清的溶血。 国产血清的采血点很分散，大多是由屠户采血后马上离心收集，所以很少会有溶血，表现出明亮的蜡黄色，当然，国产血清也很少有标准意义上的胎牛血清。 进口胎牛血清或多或少总有点溶血，因为真正的胎牛血清凝血功能差，红细胞容易破裂。 总的来说，国产的血清呈现出蜡黄。进口的血清，质量最好的呈现出谈黄、微红色，如Gibco 16000，差点的呈现出橘红色或鲜红色。当然，热灭活血清或保存不当的血清，由于血红蛋白的破坏氧化，会呈现出暗红，甚至咖啡色。 2、沉淀 很多血清客户，会发现进口血清有沉淀，从而怀疑血清的质量问题，这是没有根据的。 血清中的沉淀是由纤维蛋白的凝聚产生，对血清质量没有任何影响，沉淀的产生原因很多，和厂家的加工生产方式密切相关。 国产的血清，大多来自北方，由于价格低廉，保存环境都不好，从采血、冷冻、运输到生产会经过多次冻融，每次冻融过程，就会析出部分纤维蛋白沉淀，这样，血清成品过滤后看起来反而更加的“干净”，很少有沉淀产生。 进口的胎牛血清，过滤分装前很少会反复冻融，生产后的成品也是清澈的，但随着时间的推移，血清中的大量纤维蛋白会析出形成沉淀。当然，进口的新生牛血清，一般牛龄都在2周左右，血清中的各种蛋白含量明显偏高，生产后血清可能会浑浊，甚至有大量沉淀。 当然，购买回来的血清都是冰冻状态，使用时需要融化，融化过程最好在温度较低的状态下慢慢进行，否则沉淀相对较多，虽然沉淀并不直接影响血清的质量，但对细胞的显微观察有一定的阻碍。