2009动物生物化学试题
一、简单题
（一）以下试剂或技术常见于蛋白质研究，请简要说明其用途。
1.Trypsin
2.6mol/HCl
3.MALDI-TOF
4.?-Mercaptoethanol：?-巯基乙醇，可作为保护剂加入到蛋白质的抽提液中，
可防止或延缓巯基氧化作用发生。另外，在SDS-PAGE电泳中，加入巯基乙
醇进行热变性可以使蛋白质分子中的二硫键还原.
5.Coomassie blue：一种染料，
（二）解释以下酶学动力学的概念
6.K cat：催化常数，在单底物反应中，且反应过程只产生一个活性中间产物时，
单位时间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。
7.K m：米氏常数，物理含义是指ES复合物消失速度与形成速度之比，其数值
为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=1/2Vmax时，【S】
=Km
8.V o：酶促反应初速度，指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反
应速度。
9.K i：
10.Optimum pH：最适pH
（三）以下试剂或技术常见于核酸和基因分析，请简要说明其用途
11.DNA chips：DNA芯片
12.Northern blotting：RNA杂交
13.Restriction endonuclease：限制性内切酶，一类能识别双链DNA分子中特定
核苷酸序列，限于切割其序列之间的键的核酸内切酶。
14.EB：溴化乙啶
15.GMSA
二、问答题
1.研究人员观察到，肌肉中70kD的原肌球蛋白（Tropomyosin）的离心沉降速度反而
比65kD的血红蛋白（Hemoglobin）慢，它们的沉降系数分别是2.6s和4.31s。请给
出你对此现象的解释。
沉降系数:单位离心力的作用下颗粒沉降的速度，以Svedberg表示，简称S，单位为秒（s），1S单位等于1x10-13s。沉降速度基本上由分子大小和形状决定。血红
蛋白分子是由四个亚基构成四聚体，
2.你不会不知道Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的经典实验吧？如果复制时全
保留的，那么实验结果会是怎样呢？（图）
实验：大肠杆菌在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长，经过连续培养使所有DNA分子上都标记15N。15N-DNA比普通的14N-DNA的密度大，在氯化铯密度梯
度离心时，这两种DNA分子将形成位置不同的区带。如果将15N标记的大肠杆菌转
移到普通培养基（14N的氮源）培养，经过一代后，所有DNA的密度介于
15N-DNA,14N-DNA之间，形成了一半含14N，一半含15N杂合子。两代后，14N和14N-15N
杂合分子等量出现。在继续培养可以看到14N-DNA分子增多，证明了DNA分子复制
时原来的DNA分子均可被分成两个单位，分别构成子代分子的一半，从而证明了
半保留复制。
若是全保留复制的，15N标记的大肠杆菌转移到普通培养基经一代培养后，子代均为14N-DNA。
3.简述信号肽与信号肽学说
4.依赖cAMP 的蛋白激酶介导了大多数由cAMP产生的生理效应，不仅有瞬时的信号
传递，如肾上腺素引导肌糖原快速分解（几秒钟），还有较长时间的传递（数小时），如引起促生长素抑制素（somatostatin）基因的表达就是其中之一。请简要描述后一种情况可能的生化机制。（图解）
PKA：依赖cAMP蛋白激酶，由两类不同亚基构成的四聚体，R2C2 ，R为调节亚基，C 为催化亚基，全酶没有活性，只有cAMP结合至R亚基时，导致R与C解离，才形成有蛋白激酶活性的C亚基。
cAMP由ATP在腺苷酸环化酶（AC）作用下转变生成，并可被磷酸二酯酶（PDE）分解成5-AMP失活。AC由五部分组成，兴奋性激素受体（Rs）、抑制性激素受体（Ri）、催化亚单位（C），Gs（鸟苷酸调节蛋白）蛋白、Gi蛋白。G蛋白起核心作用，活化受体通过G蛋白偶联到AC，由G引起AC的兴奋或抑制，从而决定cAMP的浓度的升降以制约细胞内各种生理效应。G蛋白由ɑ、?、γ三亚基组成的多聚体，ɑ是功能亚基，有GTP或,GDP的结合位点及受体结合位点并有潜在的GTP酶活性。在激活前以三聚体中的ɑ亚基与GDP结合的方式存在，无活性。一旦配体与相应受体结合后GDP就解离，G蛋白构型改变，GTP结合形成ɑ?γ-GTP，然后再镁离子参与下，ɑ亚基被激活，G蛋白阿迷分解成有活性的ɑ-GTP和?γ二聚体，游离的ɑ-GTP和?γ二聚体参与调节相应的效应酶或离子通道。随后ɑ亚基发挥GTP酶作用，是与之偶联的GTP水解成GDP，重新形成与?γ二聚体高亲和力的ɑ-GDP复合物，重聚形成三聚体失活。
兴奋性激素与Rs结合，形成复合物后引起Gs蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与?γ二聚体解离。然后Gsɑ-GTP与无活性的C单位结合，使之活化，催化ATP生成cAMP。同理抑制性激素与Ri结合，形成复合物后引起Gi蛋白ɑ亚基构象改变，GTP结合到ɑ亚基引起ɑ亚基与?γ二聚体解离。然后Giɑ-GTP与无活性的C单位结合，使之活化，催化ATP生成cAMP。
5.以原核生物为例，请列举有哪些蛋白因子参与了蛋白质的生物合成过程（翻译），
它们有什么功能和共性（原核生物翻译过程图解，核糖体结构图解）
三种起始因子IF1，IF2,IF3 参与起始复合物与70s核糖体的形成。IF3促进70s 亚基的解离，并与30s亚基结合，结合有IF3的30s亚基与mRNA结合，正好是30s 亚基的p位对准起始密码子AUG是起始tRNA进入p位。IF2结合起始tRNA，然后再与30s亚基结合，使起始tRNA进入30s亚基p位，同时结合GTP，50s亚基结合，GTP水解，释放能量改变30s和50s亚基的构象，促进70s核糖体形成，同时释放IF1和IF2，这时A,P位都处于正确构象，A位空着准备肽链延伸。
延伸需要延伸因子EF-Tu和EF-Ts及GTP参与。EF-Tu首先与GTP结合，再与氨基酰-tRNA形成三元复合物，进入A位，进入后GTP水解成GDP，EF-Tu.GDP二元复合物解离下来。此时的EF-Tu不能直接与GTP或氨基酰-tRNA结合，而是EF-Ts置换下GDP,再形成EF-Tu.GTP,从而引入下一个氨基酰-tRNA。然后转肽酶将p位上的甲酰蛋氨酰基转移到A位形成肽键。肽键形成后，EF-G和GTP结合上来，EF-G具有GTP 酶活性将GTP水解，在A位形成的肽基-tRNA转移到P位，同时将P 位上的空载体tRNA逐出核糖体，mRNA向前移动一个密码子。
终止需释放因子促成终止作用，RF1识别UAA,UAG,RF2识别UGA,UAA.RF3能刺
激RF1和RF2的活性，发挥终止作用。释放因子均作用于A位，且需P位被肽基-tRNA
所占据。没有tRNA能识别终止密码子。
6.对于“脂类能否在动物机体中转变成葡萄糖”这个问题，答案不是简单的是与否，
为什么？
2008年动物生物化学试题
一、名词解释
1.Intein
2.Apolipoprotein
3.Telomere：端粒（端粒酶，Telomerase：一种核糖核蛋白酶，是一种特殊的DNA聚
合酶，属于一种反转录酶，是由RNA和蛋白质组份构成，以脱氧核糖核苷酸为产物，
以酶分子中的RNA亚单位中的一段序列为模板，延伸染色体3’端，解决通常DNA
复制时引起的末端隐缩。）
4.SD Sequence：SD序列，mRNA起初密码子AUG上游方向4-13个核苷酸之前有一段
富含嘌呤的序列，其一致序列为AGGAGG，称SD序列，能够与16SrRNA3’端的富
含嘧啶的序列相结合。不同基因的SD序列不完全相同，从而控制单位时间内起始
复合物形成的数目，最终控制翻译产物的数量。
5.G-protein：鸟嘌呤核苷酸（GTP）结合蛋白，以前称鸟甘酸调节蛋白，G蛋白根据
种类不同结构稍有不同，都是有ɑ、?和γ三个亚基组成的多聚体，ɑ亚基时功能亚
基，不同的ɑ亚基构成了不同的G蛋白，其上有GTP或GDP结合位点及受体结合位
点，并有潜在的GTP酶活性
二、问答题
1.除了氧分子本身，还有哪些化学因子对血红蛋白的氧结合能力发生影响？怎样影响
血红蛋白与氧的结合受许多因素的影响，尤其是组织和红细胞重大H+,CO2,BPG 等，并具有一定的生理意义。增加的CO2压力或H+浓度都能降低血红蛋白对氧的亲
和力，使血红蛋白的氧合曲线右移，促进氧的释放，而高浓度的氧可促使血红蛋白
分子释放H+和CO2这种现象称波尔效应。生理效应：当血液流经组织时，组织中较
高的H+和CO2浓度有利于血红蛋白释放更多的氧，并结合起到缓冲血液pH和CO2
运输的双重作用。当血液流经肺部时，由于氧分压增高，促进H+和CO2释放并有利
于血红蛋白与氧结合。BPG由于在血红蛋白分子中形成盐键，是血红蛋白分子构象
稳定，与氧的亲和力下降，氧合曲线右移。BPG是红细胞中大量存在的糖代谢的中
间产物，它能与血红蛋白形成Hb-BPG复合物。当氧与血红蛋白结合时，BPG即被
排出。在肺部由于氧分压较高，BPG的存在不会对血红蛋白结合氧的饱和度产生显
著的影响，在组织中氧分压较低，红细胞中的BPG则有助于氧从血红蛋白中释放出
来。
2.基于RNA新功能，认为也将它看作反式作用因子。你认为与蛋白质反式作用因子有
何不同？
3.某个酶符合米氏动力学。在反应体系中加入抑制剂后，最大反应速度下降了75%，
而Km没有改变。问：这是何种形式的抑制作用？抑制抑制剂浓度为2.0x10-4mol/L,
求Ki。
这是非竞争性抑制作用。速度方程V=Vmax[S]/(1+[I]/Ki)(Km+[S]),没加抑制剂的速度方程V=Vmax[S]/Km+[S]
在非竞争性抑制剂存在条件下，相对活性a=Vi/Vo。抑制强度：
i=1-a=1-1/1+[I]/Ki=75%，得Ki=6.6X10-5mol/L
4.某种类固醇激素提升了细胞cAMP水平，请推测其可能的作用机制。
三、论述题
1.回忆你所学过的生物化学知识，请归纳“核苷酸”的生物学作用。
2.你如何理解“Fats burn in the flame of carbohydrates”这句话的生物化学含义尤指动
物体内
3.“组学”在现代生物学、农业和医学研究中正日益显示出巨大的生命力合应用前景。
举三种组学并介绍它们的研究内容。
基因组学
蛋白组学
糖组学
代谢组学
2007动物生物化学试题
一、名词解释
1.结构域：在蛋白质结构中，一条多肽链上常常存在一些紧密的，相对对立的区域称
结构域（Domain）是在二级结构或超二级结构的基础上形成的特定的区域，参与蛋
白质结构的装配，并与蛋白质的许多功能有密切关系。
2.蛋白质的分子缔合
蛋白质分子常常在各层次上结合，从而成为复杂的，更具功能的分子结构形式。这
种现象为蛋白质分子缔合（Association）。包括亚基缔合，相同分子的缔合，不同分
子缔合，及分子自装配。
3.酶反应的初速度
指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反应速度。
4.生物膜的协调转运系统
在一些哺乳动物细胞中，葡萄糖及中性氨基酸等物质的逆浓度梯度转运，经常伴有Na+顺浓度梯度转运。这种有另一种物质伴随转运称协同转运（cotransport），这种转运系统不直接以ATP为能源，而以间接方式利用ATP。在协调转运中，两种
物质转运方向相同称同向协同转运（symport），相反称反向协同转运（Antiport）。
（Na+-葡萄糖协同转运系统：一个Na+结合在对外开放的载体蛋白上；Na+结合大大
增加了载体对所转运物质的亲和力，促进了葡萄糖分子的结合，载体发生构象改变；
载体向内开放；Na+顺化学梯度进入细胞，进入细胞的Na+被Na+-K+泵泵出，Na+梯
度得以维持；失去Na+后，葡萄糖分子释放进入细胞；失去葡糖糖分子的载体恢复
到原来的构象）
5.干扰RNA
二、问答题
1.现代生物化学认为，蛋白质是一个动态系统，构象运动时蛋白质的重要性质之一。
请解释什么是蛋白质的构象运动。与其功能有什么关系（结合实例说明）
蛋白质分子在执行生物功能时，整体分都是处在主动的不断运动中，这种运动在10-12s至1s以上的一个很宽的时间范围内都存在。蛋白质是一个动态系统，除
了分子中的原子围绕它们的平衡位置的波幅很小的热振动外，其构象运动主要包括
氨基酸残基侧链，肽链片段，结构域或亚基三种水平上的运动，其中最后一种运动
属于大范围的，速度较慢的分子构象运动。蛋白质发挥特定的生物学功能，是由于它具有一个独特的，精巧的空间构象，既能保持相对稳定的结构，又能随不同程度的环境变化发生构象运动。结构的稳定性和可变性是具有生物活性的蛋白质分子发挥功能必要的两个方面。
例如：血红蛋白是由四个亚基构成的四聚体，四聚体与氧开始结合时亲和力远低与肌红蛋白，分子中的ɑ亚基对氧的亲和力比?亚基大，能首先与第一个氧分子结合，这可导致ɑ亚基构象发生变化，并进而是相邻的?亚基构象发生改变，增加了?亚基对氧的亲和力，呈现S形结合曲线，而肌红蛋白仅有一条肽链，没有其他亚基的影响，与氧的亲和力较大，能迅速与氧结合，在很低的氧分压下即接近饱和。
这种变构作用有重要的生理意义：它与氧协同结合，与它的氧输送功能十分适应。
在肺部氧分压较高时，血红蛋白与氧结合迅速接近饱和，在组织氧分压较低时，可迅速释放出近一半的氧，，同样条件下肌红蛋白仅能释放10%的结合氧，因此，血红蛋白比肌红蛋白更有效的运输氧气进入组织中。
2.实验者从动物的组织中提取到了某种酶，并且发现：将酶溶液进行透析或者将酶溶
液加热都会使酶的活性降低甚至丧失，试解释这些现象。
加热由于温度升高使分子内振动增强，破坏维持空间构象的次级键，有时是蛋白质中的二硫键断裂并发生二硫键交换反应，使得酶的活性中心遭到破坏，使活性降低。透析溶液的pH，离子浓度，等不合适可能导致酶分子变性，引起活性降低甚至丧失。
3.有三种物质：丙氨酸、乙酸和丙酸。（1）其中哪些能在动物体内转变成葡萄糖（2）
分别说明其生理意义（3）写出其中一种物质转变成葡萄糖或糖原的大致代谢途径。
丙氨酸，
4.关于核糖体。（1）图示核糖体的功能位点。（2）分别说明他们的作用（3）你怎样
使试验证明核糖体中的核酸与蛋白因子之间存在的相互作用
mRNA结合位点：位于30s亚基头部，在S1蛋白的作用下30s亚基与mRNA，S1蛋白可防止mRNA形成链内碱基对。此位点同时也是IF3的结合位点。
P位点：大部分位于30s亚基，小部分位于50s亚基，能够与起始tRNA复合物结合。
A位点：靠近P位点，主要位于50s亚基上，
转肽酶活性位点：位于P位点与A位点的连接处，靠近tRNA的接受臂，与P位上的氨酰基或肽基转移到A位形成肽键。
5SrRNA位点：在50s亚基上，靠近转肽酶位点，可能与tRNA的进入有关
EF-Tu位点：位于大亚基内，靠近30s亚基，与氨基酰-tRNA结合有关
转位因子EF-G结合位点，在大亚基上靠近与小亚基的界面上，与A位上的肽基-tRNA移到P位有关。
5.可诱导的转录因子的活性可受到一种或多种方式的调节。目前对类固醇激素受体作
为一类重要的可诱导的转录因子有比较深入的认识。简述你所了解的相关知识。
肾上腺分泌的三十多种类固醇，其中最主要的两组是糖皮质激素和盐皮质激素。
糖皮质激素与其受体的相互作用有一定的了解：类固醇激素能经简答扩散穿过细胞膜进入细胞核，在细胞内与其受体结合，当激素与受体结合后，受体蛋白质便转变成活性形式，对非特异DNA结合的亲和力也提高了10倍，因此激素-受体复合物总是位于细胞核内。激活的受体识别其特异共有序列即糖皮质激素应答元件（Glucocorrticoid response element GRE）。GRE总是位于应答糖皮质激素的基因附近的增强子内，当类固醇受体复合物与增强子结合时，激活附近的启动子，是启动
子开始转录。
类固醇激素受体有对立的DNA结合和激素集合结构域。各种类固醇受体DNA 结合域的中心结构很相近，各种受体的N-末端区同源性低，该区含转录所需的另一
些区域。C-末端与激素结合。不同激素受体C-末端区不同，从而决定了不同激素有
不同的活性。如果将糖皮质激素受体C-末端删除，保留的蛋白质具有组成型活性，即不需要类固醇激素就要活性。这表明，类固醇激素的缺乏，其受体的类固醇结合
域阻止受体识别GRE，从而起内在负调控物的作用。加入类固醇激素能消除其抑制
作用，是受体能与GRE结合，激活转录。而雌激素受体的结构域间的关系与此不同。
具有激活活性，不是阻抑活性。每种受体识别的应答元件很保守，这些应答元件有
明显的特点：每个共有序列都含有两个短的重复序列，每个重复序列也可称为半位
点。各种受体的应答元件也可能是反向或者正向重复序列。
受体超家族可分为：糖皮质激素受体（GR），盐皮质激素（Mineralcorticoid）受体（MR）雄激素受体（AR），孕酮受体（PR），它们都以相同亚基组成二聚体，
所识别的元件的半位点有共有序列TGTTCT，半位点反向重复排列，位点间间隔决定
其识别元件的类型。第二类：甲状腺素受体（T3R），维生素D受体（VDR），视黄
酸受体（RAR）及9-顺-视黄酸受体（RXR）。除RXR外由不同两个亚基构成二聚体，所识别的元件的半位点序列是TGACCT，半位点是直接重复排列，识别特异性由半
位点间间隔序列长度决定，1bp对应RXR，2bp对应VDR，3bp对应T3R，4bp对应
RAR。
6.说明Ca2+在细胞信号转导系统中的作用。
2006年试题
一、名词解释
1.Lineweaver-Burk plot
2.Telomerase:端粒酶
3.PrP c
4.Ampholyte
5.Recognition helix：螺旋-转折-螺旋基序，两段螺旋被一个?-转角分开，其中一段为
识别螺旋，直接与暴露在DNA大沟中碱基对接触结合，识别和结合的作用力包括
氢键，离子键，范德华力等。识别螺旋只有几圈，圈数有三种情况，1圈螺旋，与
DNA大沟垂直，2圈螺旋以广泛的角度与DNA大沟结合，3圈螺旋，与DNA大沟平
行。其氨基酸残基可分三类：与DNA碱基接触的残基，主要是极性氨基酸；与DNA
主链磷酸集团接触的残基，大多为碱性氨基酸；与蛋白质其他部分接触的残基，多
为疏水性氨基酸残基。
二、问答题
1.结构分析显示，腺苷酸环化酶与DNA聚合酶有很高的同源性，从它们的催化反应
性质你能提供进一步证据吗？
AC是一种跨膜糖蛋白，其激活或抑制需要GTP和镁离子的存在，由五部分组成，
Rs，Ri，C，Gs，Gi
2.把正在37℃条件下培养细菌转移到25℃培养。你认为细菌质膜中脂肪酸组成将会
发生怎样的变化，请予解释
3.有人向动物注射用生长激素受体的胞外部分制备的抗体，发现也具有生长激素是效
应。为什么？
生长激素受体的胞外部分制备的抗体与动物体中的生长激素能形成抗原抗体复合物，使机体中生长激素水平下降，刺激脑垂体分泌大量的生长激素。
又受哪些因素的影响
热变性一般发生在较窄的温度范围内发生，如以温度对紫外吸收作图，可得一S曲线，称熔解曲线，Tm是熔解曲线的中点，称熔点，熔解温度或转变温度。
离子强度低时，Tm值偏低，熔点范围较窄，离子强度高时，Tm值升高，熔点范围宽。DNA的Tm值一般在70-85度间。
DNA碱基组成的均一性，如果DNA分子组成十分均一，如由两条多聚A-T或多聚G-C组成的双链，其变性过程是同步的Tm范围较窄，表现为一条很陡的熔解曲线，反之，非均一性DNA分子，则Tm值围较宽。
DNA分子中G+C含量，G-C含量高时，稳定，因为G-C间有三个氢键，A-T中只有两个氢键，故G-C含量高的DNA，Tm值也较高，亦较稳定。
去除变性因素后，变性的DNA两条互补链可以重新结合起来，恢复到原来的双螺旋结构，此过程称DNA复性（DNA renaturation）或退火（Aennealing。）在一定条件下复性的速度变化可以用Cot值衡量，表示变性DNA最初浓度（bp，mol/l）,t 为复性时间（秒）。即变性DNA最初浓度与复性时间的乘积。相同的分子越多，复性越容易，Cot值越小。简单序列的DNA分子复性很快，时间短；同一种DNA，当浓度大时，互补序列互相碰撞的机会增多，复性速度也快；DNA片段大时，扩散速度受限制，复性速度变快，加热变性，如果缓慢冷却，两条链可得到特异组合，恢复成双链。
6.有一个8肽序列为Ala-Val-Trp-Arg-Val-Lys-Ser。用胰蛋白酶水解之后，你选择用分子
筛色谱，还是离子交换色谱来分离其水解产物，说明理由，如果用胰凝乳酶水解，其产物用哪种方法分离更好，为什么？
7.举例并简述原核生物通过影响新生mRNA的二级结构调节基因转录的机制
8.在动物（大鼠）的饥饿实验中，观察到三种“燃料”分子（A、B和C）在血浆中的
浓度变化如图所示。它们可能是什么物质？解释它们在动物饥饿状况下的相互关系A酮体，B血糖，C脂肪酸。（P455）
2009动物生物化学试题 一、简单题 （一）以下试剂或技术常见于蛋白质研究，请简要说明其用途。 1.Trypsin 2.6mol/HCl 3.MALDI-TOF 4.?-Mercaptoethanol：?-巯基乙醇，可作为保护剂加入到蛋白质的抽提液中， 可防止或延缓巯基氧化作用发生。另外，在SDS-PAGE电泳中，加入巯基乙 醇进行热变性可以使蛋白质分子中的二硫键还原. 5.Coomassie blue：一种染料， （二）解释以下酶学动力学的概念 6.K cat：催化常数，在单底物反应中，且反应过程只产生一个活性中间产物时， 单位时间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。 7.K m：米氏常数，物理含义是指ES复合物消失速度与形成速度之比，其数值 为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=1/2Vmax时，【S】 =Km 8.V o：酶促反应初速度，指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反 应速度。 9.K i： 10.Optimum pH：最适pH （三）以下试剂或技术常见于核酸和基因分析，请简要说明其用途 11.DNA chips：DNA芯片 12.Northern blotting：RNA杂交 13.Restriction endonuclease：限制性内切酶，一类能识别双链DNA分子中特定 核苷酸序列，限于切割其序列之间的键的核酸内切酶。 14.EB：溴化乙啶 15.GMSA 二、问答题 1.研究人员观察到，肌肉中70kD的原肌球蛋白（Tropomyosin）的离心沉降速度反而 比65kD的血红蛋白（Hemoglobin）慢，它们的沉降系数分别是2.6s和4.31s。请给 出你对此现象的解释。 沉降系数:单位离心力的作用下颗粒沉降的速度，以Svedberg表示，简称S，单位为秒（s），1S单位等于1x10-13s。沉降速度基本上由分子大小和形状决定。血红 蛋白分子是由四个亚基构成四聚体， 2.你不会不知道Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的经典实验吧？如果复制时全 保留的，那么实验结果会是怎样呢？（图） 实验：大肠杆菌在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中生长，经过连续培养使所有DNA分子上都标记15N。15N-DNA比普通的14N-DNA的密度大，在氯化铯密度梯 度离心时，这两种DNA分子将形成位置不同的区带。如果将15N标记的大肠杆菌转 移到普通培养基（14N的氮源）培养，经过一代后，所有DNA的密度介于 15N-DNA,14N-DNA之间，形成了一半含14N，一半含15N杂合子。两代后，14N和14N-15N 杂合分子等量出现。在继续培养可以看到14N-DNA分子增多，证明了DNA分子复制 时原来的DNA分子均可被分成两个单位，分别构成子代分子的一半，从而证明了
南京农业大学2013年生物化学考研试题 一、名词解释32’ 1蛋白质四级结构 2 tRNA 3反竞争抑制 4尿素循环 5 Co Q 6泛素化 7柠檬酸穿梭 8生物氧化 二、酶促反应结构式16’ 1、6-磷酸葡萄糖脱氢酶 2 异柠檬酸脱氢酶 3 烯醇化酶 4脂酰Co A合成酶 三、简答题58’ 1DNA复制所需蛋白质因子（酶）有哪些？其功能作用是什么14’ 2新生肽链转运的两条途径名称是什么，过程？10’ 3转氨基在生物体的作用及辅酶是什么？10’ 4试举出蛋白质脱盐的两种方法及其原理？在用硫酸铵进行蛋白质盐析时注意事项10’ 5葡萄糖最终氧化生成H2O和CO2过程中有几次脱羧，是否来自葡萄糖中，如果是来自几号碳原子，为什么，如果不是，为什么？14’ 四、计算题10’ 有一无蛋白质的DNA和RNA混合样品180ug，其紫外吸收的A260/A280=1.9。已知50ugDNA 的A260=1和40ugRNA的A260=1。 1多少ug DNA的A280=1，多少ug RNA的A280=1？ 2样品中的DNA和RNA的ug 数是多少？ 五、实验题34’ 1某蛋白质酶经SDS电泳得两种成分分子量为80KDa,30KDa，分子量大的仍具有催化活性，而小的不具催化活性，再经β-巯基乙醇处理后分离得两种成分分子量为40KDa,15KDa,两者都不具催化活性，问该蛋白质的结构及结构与功能的关系？12’ 2 有一同学要测水稻叶片中的酶活力，可是他只找到了动物体中这种酶的测量方法，于是他用此方法测定，结果测得的酶活力非常低，试分析可能的原因有哪些？12’ 3写出下列英文缩写的化学物质在生化实验中的作用10’ DTT BSA DEAE-C PITC DEPC
2013年江南大学801生物化学（A卷）考研真题（回忆版） 一、名词解释（5个，每个4分） substrate-level phosphorylation， prosthetic group reverse transcription pentose phosphate pathway 二、判断是非并改错（10个，每个2分） 1，酶的活性中心由一级结构上相邻的氨基酸残基构成 2，只有偶数脂肪酸才能被氧化成为乙酰辅酶A 3，解偶联剂抑制呼吸链中的电子传递4，维生素E不容易被氧化，因此常作为抗氧化剂 5，生物氧化过程一定需要氧气的参与 6，DNA的碱解和酶解，都只能得到5’-核苷酸 7，DNA双链中，一条链的碱基顺序为pGpApCpCpT,则另一条链的碱基顺序为pCpTpGpGpA 8，双缩脲反应是肽和蛋白质特有的反应，因此二肽也有双缩脲反应 9，酶反应时间越长，则所需最适温度越高；酶反应时间越短，所需温度越低。 10，α-淀粉酶和β-淀粉酶的区别在于α-淀粉酶水解α- 1,4糖苷键，而β-淀粉酶水解β-1,4糖苷键
三、简答题（5题，每题10分） 1．直链淀粉和纤维素都是由葡萄糖分子聚合而成，为何物理性质差别如此之大？2，丙二酸是TCA循环中琥珀酸脱氢酶的抑制剂，预测丙二酸是琥珀酸脱氢酶的抑制剂的类型，为什么？加入丙二酸到反应体系后动力学常数和反应速度的变化？如何消除这种影响？ 3．乙醛酸循环是什么？有什么生物学意义？ 4．DNA的复制精确度大于RNA转录的大于蛋白质翻译的（具体是一些数据，记不清楚了），简述DNA复制保持高度忠实性的主要机制。 5．糖酵解的中间产物在其他代谢途径中的应用有哪些？ 四、问答题（4题，每题15分） 1．碱基堆积力在稳定核酸结构中非常重要。 （1）碱基堆积力的化学本质究竟是什么。 （2）嘌呤和嘧啶中哪种碱基堆积力的作用更强，为什么。 （3）在RNA结构中，经常看到结合的金属元素，它们所起的作用是什么。 2．在下列培养基条件下，大肠杆菌中lac操纵子的转录速度是怎么变化的（a）乳糖和葡萄糖（b）葡萄糖（c）乳糖 3．什么是蛋白质变性和蛋白质复性？蛋白质变性后哪些性质会发生改变？ 4．嘌呤和嘧啶核苷酸的合成过程各有什么特点？其中分别有哪些氨基酸的参与？
2017年江南大学801生物化学（含实验）考研真题（回忆版） 一、名词解释 1．protein denaturation 2．isoenzyme 3．substrate level phosphirylation 4．allosteric regulation 5．semiconservative replication 二、判断题 1．酶纯化过程中，要将酶溶液充分搅拌，震荡长时间静置，让其充分溶解，分布均匀。 2．两个核酸样品A和B，如果A的OD260/OD280大于B的OD260/OD280，那么A的纯度大于B的纯度。 3．米氏常数是酶的特征性常数之一，如果一个酶有几种底物，Km值最小的底物一般称为改酶的最适或天然底物。 4．双缩脲反应是多肽和蛋白质特有的反应，所以二肽也有双缩脲反应。 5．糖酵解的第一步是葡萄糖磷酸化为6-磷酸葡萄糖，因此临床上可以用6-磷酸葡萄糖替代葡萄糖进行注射。 6．在沙漠条件下骆驼能量和水分的来源是其驼峰中贮存的大量糖类物质、 7．痛风病人应避免摄入大量嘧啶碱的食物。 8．“操纵子学说”认为酶的诱导和阻遏是在调节基因的产物—阻遏蛋白作用下，通过操纵基因（操纵子）控制机构基因或基因组的转录而发生的。
9．2,4-二硝基苯酚等解偶联剂能够使电子传递和ATP形成两个过程分离，并不影响电子的传递，但却能抑制ATP的生成。 10．蛋白质生物合成中，当mRNA上终止密码出现后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，成为有生物活性的蛋白质分子。 三、简答（5个） 1．分离氨基酸混合物经常使用强酸型阳离子交换树脂，请简述其原理及洗脱方法 2．什么是联合脱氨？主要包括哪两种？简述其中最主要的一个过程。 3．脂肪酸合成的原料乙酰辅酶A的主要来源有哪些？请简述乙酰辅酶A从线粒体转运到细胞溶胶的机制。 4．简述蛋白质生物合成过程。 5．指出下图中腺嘌呤环中相应原子在从头合成时的来源腺嘌呤从头合成元素来源。
江南大学801生物化学2010年硕士研究生入学考试试题及解析 江南大学2010年硕士学位研究生入学考试试题（生物化学） 一、名词解释 1．Ultrafiltration 2．Pentose phosphate pathway 3．Chargaff principal 4．Domain 5．Reverse transcription 6．Hyper chromic effect 二、判断题 1．别构酶总是寡聚酶。 2．肽链就是亚基。 3．单糖α型和β型是对映体。 4．某一基因发生了点突变，则必然导致其编码的蛋白质的氨基酸序列改变! 5．糖酵解是不依赖氧气的代谢，因此有无氧气都不会影响糖酵解途径。 6．与蛋白质一样，DNA的生物功能也是由其高级机构决定。 7．抗体酶是水解抗体的酶的总称。 8．在蛋白质合成中氨酰-t RNA总是进A位。 9．糖酵解是糖异生途径的简单逆行。 10．DNA复制的忠实性由DNA聚合酶3，---5，外切酶的校对来维持。 三简答 1．简述t RNA二级结构的特点及每一部分的功能。 2．简述导致蛋白质变性的主要因素，如何在蛋白质分离纯化中减少其变性的机会。3．柠檬酸循环中并无氧气参加，为什么说它是葡萄糖的有氧分解。 4．简述乙酰CoA羧化酶在脂肪酸合成中的地位和作用。 四问答
1．核酸，蛋白质，脂肪酸，糖原生物合成中延伸机制有何异同？ 2．确定下列反应的辅酶及由那种维生素衍生出来的。 醇转变为醛的反应 依赖ATP的羧化反应 脱羧，转醛基的反应 转甲酰基，甲叉基的反应 转乙酰基或更长的脂酰基的反应 3．抑制剂（判断类型）酶加倍抑制剂加倍抑制剂对Km的影响 4．乳糖操纵子产生酶相关的4个基因分别是什么？为什么能利用乳糖？ 江南大学2010年硕士学位研究生入学考试试题答案（生物化学） 一、名词解释 1．Ultrafiltration：超滤:是一种利用压差的膜分离技术，过滤精度可以达到0.01微米，可滤除水中的铁锈、泥沙、细菌、大分子有机物等有害物质，并保留对人体有益的一些矿物质元素。 2．Pentose phosphate pathway：磷酸戊糖途径，又称己糖支路。葡萄糖在动物组织中降解代谢的重要途径之一。其循环过程中，磷酸己糖先氧化脱羧形成磷酸戊糖及NADPH，磷酸戊糖又可重排转变为多种磷酸糖酯；NADPH则参与脂质等的合成，磷酸戊糖是核糖来源，参与核苷酸等合成。 3．Chargaff principal：碱基互补配对原则，在DNA分子结构中，由于碱基之间的氢键具有固定的数目和DNA两条链之间的距离保持不变，使得碱基配对必须遵循一定的规律，这就是A与T配对，G与C配对，反之亦然。碱基间的这种一一对应的关系叫做碱基互补配对原则。 4．Domain:略 5．Reverse transcription：以RNA为模板，在反转录酶催化下转录为双链DNA的过程6．Hyper chromic effect：增色效应，由于DNA变性引起的光吸收增加称增色效应,也就是变性后DNA 溶液的紫外吸收作用增强的效应。 二、判断题
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南京农业大学生物化学习题册(有答 案) 《生物化学》习题册生物化学与分子生物学系编南京农业大学生命科学学院 0 氨基酸与蛋白质一、填空： 1. 在组成蛋白质的二十种氨基酸中，是亚氨基酸，当它在?-螺旋行进中出现时，可使螺旋。 2. Lys 的?-COOH、?-NH3＋的pK值分别为和，该氨基酸的pI值为，则R基团的pK 值为，它是基团的解离引起的。 3. Glu的pK1(?-COOH)=、pK2(R基团)=、pK3(?-NH3＋)=，该氨基酸的pI值为。 4. 蛋白质在波长为nm的紫外光中有明显的吸收峰，这是、和三种氨基酸残基所引起的。 5. 有一混合蛋白样品，含A、B、C、D四种蛋白质，其pI 分别为、、和，若将此样品液置于的
缓冲液中电泳，向阴极移动的有。 6. 某蛋白质的某一区段含有15个氨基酸残基，这些残基之间均可形成如右图所示的氢键。(1) 该区段具有的二级结构，它的长度为纳米。(2) 该区段的主链中可形成个氢键。 (3) 已知该区段被包埋在整个蛋白质分子的内部，则这一区段很可能含有较多的氨基酸。二、选择题(注意：有些题不止一个正确答案)：1. 下列什么氨基酸溶液不使偏振光发生旋转(A)Ala(B)Gly(C)Leu (D)Ser(E)Val 2. 下列AA中，蛋白质内所没有的是(A)高半胱氨酸 (B)半胱氨酸(C)鸟氨酸(D)胍氨酸 3. 在下列肽链主干原子排列中，哪个符合肽键的结构(A)C－N－N－C (B)C－C－C－N(C)N－C－C－C (D)C－C－N－C(E)C－O－C－N 4. Cys的pK1(?-COOH)为，pK2(?-NH3+)为，pK3(R基团)为，在pH为的缓冲液中，该氨基酸所带电荷为
布丁考研网，在读学长提供高参考价值的复习资料 https://www.doczj.com/doc/9414515110.html, “生物化学 ”课程参考书如下： 参考书目 《生物化学》 杨志敏主编，高等教育出版社，2010年；《生物化学实验》 杨志敏主编，高等教育出版社，2015年。 考试大纲 生物化学发展史中做出重要贡献的人物姓名。 氨基酸分类及三字符表示和理化性质；蛋白质初级和高级结构及功能的关系；蛋白质两性解离及等电点、紫外吸收特征和变性及复性；蛋白质含量和相对分子质量的测定，蛋白质分离纯化的方法与技术（层析、电泳和离心）。 核酸的种类和组成单位；核酸（DNA与RNA）的分子结构；核酸的理化性质、紫外吸收特征与变性及复性；DNA一级结构分析与PCR技术；核酸的分离与纯化方法与技术。 酶的基本概念、分类和命名；酶作用的特点与高效性机制；影响酶促反应速度的主要因素； 酶的活性及其测定；别构酶、共价修饰酶和同工酶；辅酶与维生素；酶的分离纯化。 糖酵解、三羧酸循环、磷酸戊糖途径和糖异生的反应途径及过程中的能量计算。 生物氧化基本概念；电子传递链的组成及有关抑制剂；氧化磷酸化的概念及其机制；穿梭系统。 脂肪的酶促水解；甘油的降解和转化和生物合成；脂肪酸的β-氧化分解和饱和脂肪酸的从头合成及过程中的能量计算；三酰甘油的生物合成和甘油磷脂的代谢。 氨基酸的分解和合成代谢的一般规律；核苷酸的分解和合成代谢的一般规律。 中心法则；原核生物DNA复制及与真核生物DNA复制的差异；逆转录；DNA损伤与修复；RNA的转录及加工。 遗传密码及特点；多肽链的合成体系；原核生物多肽链生物合成过程；原核与真核生物多肽链生物合成的差异；多肽链合成后的折叠、加工与转运。 酶量和活性的调控；乳糖操纵子；色氨酸操纵子。
中国农业科学院 2017年硕士研究生招生考试自命题科目考试大纲 科目代码：801 考试科目：生物化学（含分子生物学） 一、考查目标 要求考生比较系统地理解生物化学及分子生物学的基本概念和基本理论，掌握各类生化物质的结构、性质和功能、代谢的基本途径和调控方式及各途径之间关系，理解基因、基因表达和调控及基因工程的基本理论，关注生物化学和分子生物学研究热点，能综合运用所学的知识分析问题和解决问题。 二、考试形式和试卷结构 1.试卷满分及考试时间 本试卷满分为150分，考试时间为180分钟。 2.答题方式 闭卷、笔试。 3.试卷内容结构 考试内容包括生物化学和分子生物学两部分。其中生物化学的分值约占75%左右，分子生物学约占25%。题型包括填空、名词解释、简答和问答等。 三、考试大纲 1、《生物化学》部分 内容主要包括： 1）生物化学学科发展中重大的历史事件； 2）氨基酸的简写符号、理化性质及化学反应，蛋白质分子结构的概念、形式、特点，蛋白质一级结构测定的步骤，蛋白质的理化性质及分离纯化和纯度鉴定的方法，蛋白质的变性作用，蛋白质结构与功能的关系； 3）核苷酸的组成、结构和性质，核酸的化学组成与类别，DNA和RNA的一、二、三级结构概念和特点，DNA的生物学功能极其证明，RNA的分类和生物学功能，核酸的理化性质，核酸序列测定的原理和方法； 4）酶的概念，酶的命名和分类，酶的结构与酶的活性，酶的作用机制，酶的制备与酶
活力测定，酶促反应动力学（米氏方程的推导），影响酶促反应的因素，别构酶、固定化酶、同工酶、抗体酶、核酶的基本概念和应用； 5）维生素的分类及性质，各种维生素的活性形式、生理功能，辅酶（辅基）的活性基团及催化方式，激素的分类，激素的化学本质，激素的合成与分泌，常见激素(甲状腺素、肾上腺素、胰岛素、胰高血糖素)的结构和功能，激素作用机理； 6）高能磷酸化合物的概念和种类，呼吸链的概念、传递顺序，底物水平磷酸化和氧化磷酸化概念和机理，A TP合成酶结构特点和功能，呼吸电子传递抑制剂、解偶联剂、ATP酶合成抑制剂等的种类、作用方式和对生理代谢的影响； 7）糖酵解的概念、场所、原料、反应步骤及催化酶、限速酶及其调控、ATP消耗和ATP 产生步骤，丙酮酸氧化脱羧的概念、场所、反应过程及催化反应的关键酶及辅酶（辅因子），三羧酸循环的概念、场所、原料、限速酶及其调控、A TP消耗和ATP产生步骤、脱氢和脱羧步骤，磷酸戊糖途径的概念、场所、意义、反应步骤、限速酶及其调控、脱氢和脱羧步骤，糖异生作用的概念、场所、原料、反应步骤及催化酶、限速酶及其调控、A TP消耗步骤，乙醛酸循环的的概念、场所、原料、反应步骤、限速酶及其调控，与代谢过程相关的ATP计算； 8）脂肪分解代谢的场所、限速酶、每个C原子的最终去向，脂肪酸β－氧化的概念、发现过程、场所、代谢过程及能量计算，脂肪酸的生物合成原料、场所、代谢过程、限速酶及其调控，脂肪合成代谢的主要途径，酮体的生成和利用； 9）氨基酸的分解代谢中脱氨方式、C骨架的最终代谢产物，一碳单位的概念、种类、功能基团，氨基酸分解代谢中间产物与生物活性分子，氨基酸生物合成的原料，嘌呤、嘧啶核苷酸的分解代谢的途径与碱基的分解代谢，核苷酸、脱氧核苷酸生物合成的原料及代谢途径，常见辅酶核苷酸的结构和作用； 10）DNA生物合成特点、相关概念及证明，DNA复制的基本过程、有关的酶和蛋白质，真核与原核生物复制的差异，RNA的生物合成（RNA聚合酶、RNA的转录过程和转录后加工），逆转录过程及酶，遗传密码的概念和基本特性，mRNA在蛋白质生物合成中的作用，tRNA、核糖体在蛋白质生物合成中的作用和原理，翻译过程及其运输与修饰； 11）酶合成的诱导及阻遏作用，酶的别构效应、共价调节，反义核酸的调节，糖、脂、氮代谢途径的交叉网络，糖、脂代谢过程的调控及生物体如何来恒定血糖浓度；12）一碳单位代谢和核苷酸（脱氧）合成抑制剂的种类、作用机理和应用，DNA、RNA 和蛋白质生物合成抑制剂的种类、作用机理和应用。
2009 动物生物化学试题 、简单题 （一）以下试剂或技术常见于蛋白质研究，请简要说明其用途。 1. Trypsin 2. 6mol/HCl 3. MALDI-TOF 4. ?-Mercaptoethanol ：?- 巯基乙醇，可作为保护剂加入到蛋白质的抽提液中，可防止 或延缓巯基氧化作用发生。另外，在SDS-PAG电泳中，加入巯基乙 醇进行热变性可以使蛋白质分子中的二硫键还原. 5. Coomassie blue ：一种染料， （二）解释以下酶学动力学的概念 6. K cat ：催化常数，在单底物反应中，且反应过程只产生一个活性中间产物时，单位时 间内每个酶分子或每一活性部位催化的反应次数。 7. Km：米氏常数，物理含义是指ES复合物消失速度与形成速度之比，其数值 为酶促反应达到最大反应速度一半时的底物浓度，即当V=1/2Vmax时，【S】 =Km 8. V o :酶促反应初速度，指在反应初始阶段，底物浓度基本维持不变时的反应速度。 9. K i ： 10. Optimum pH ：最适pH （三）以下试剂或技术常见于核酸和基因分析，请简要说明其用途 11. DNA chips : DNA芯片 12. Northern blotting : RNA杂交 13. Restriction endonuclease :限制性内切酶，一类能识别双链DNA分子中 特定核苷酸序列，限于切割其序列之间的键的核酸内切酶。 14. EB：溴化乙啶 15. GMSA 、问答题 1. 研究人员观察到，肌肉中70kD 的原肌球蛋白（Tropomyosin ）的离心沉降速度反而 比65kD的血红蛋白（Hemoglobin ）慢，它们的沉降系数分别是 2.6s和4.31s。请 给出你对此现象的解释。 沉降系数: 单位离心力的作用下颗粒沉降的速度，以Svedberg 表示，简称S，单位为秒（s），1S单位等于1x10-13s。沉降速度基本上由分子大小和形状决定。血红蛋白分子是由四个亚基构成四聚体， 2. 你不会不知道Meselson和Stahl关于DNA半保留复制的经典实验吧？如果复制时全保留的， 那么实验结果会是怎样呢？（图） 实验:大肠杆菌在以15NH4Cl 为唯一氮源的培养基中生长，经过连续培养使所有DNA分子上都标记15N O15N-DNA比普通的14N-DNA的密度大，在氯化铯密度梯度离心时，这两种DNA 分子将形成位置不同的区带。如果将15N标记的大肠杆菌转移到普 通培养基（14N的氮源）培养，经过一代后，所有DNA的密度介于15N-DNA,14N-DNA 之间，形成了一半含14N,—半含15N杂合子。两代后，14N和14N-15N杂合分子等量出现。在继续培