实验生长谱法测定微生物的营养要求
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摘要
采用生长谱法研究大肠杆菌对不同碳源的利用状况，结果表明大肠杆菌可以利用糖、糖……。
关键词生长谱法碳源大肠杆菌
英文名称
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前言
微生物的生长繁殖需要一定的营养物质，如碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因素等，如果缺少其中一种，或不能利用其中的某一种营养物质，便不能生长。据此，把微生物接种在基本培养基上，把待测营养物质点植于基本培养基上，由于营养物可以在琼脂培养基中扩散，若微生物需要此种营养物质，便可生长出菌落。未点植营养物质的其他各处，则不出现菌落。此种测定微生物营养要求的方法称为生长谱法，生长谱法可以定性，定量地测定微生物对各种营养物质的需要，如碳源、氮源、维生素等。在微生物育种营养缺陷型的鉴定中也常用此法。本实验利用无碳源基础培养基检测大肠杆菌对可利用糖的需求。
1、材料与方法
1．1 菌种
大肠埃希氏菌(Escherichia coli)（本实验室提供）
1．2 基础培养基
（NH
4）
2
SO
4
0.5g，KH
2
PO
4
0.1g，MgSO
4
?7H
2
O 0.05g，琼脂粉2.0g，
蒸馏水100mL，pH（6）自然，105℃灭菌20-25分钟。
糖溶液（所用糖样品为色谱纯）
分别配置：10%葡萄糖 1.0g；10%木糖 1.0g；10%麦芽糖 1.0g；10%蔗糖 1.0g；10%乳糖 1.0g；10%果糖 1.0g。每种碳源用9 mL蒸馏水配制，105℃灭菌20-25分钟。
1．3 试剂：
(NH
4)
2
SO
4
天津市福晨化学试剂厂
KH
2PO
4
天津市福晨化学试剂厂
MgSO
4?7H
2
O［江西华南化工试剂厂·南昌］，琼脂粉［Beijing solarbio science
& Techonology Co.，Ltd］，蒸馏水［实验室］，葡萄糖（Glucose）［天津市福晨化学试剂厂］；木糖［天津市福晨化学试剂厂］；麦芽糖（Maltose）［上海蓝季科技发展有限公司］；蔗糖［中国医药化学采购供应站］；乳糖［天津市福晨化学试剂厂］；果糖（出处：）；无菌1%生理盐水；带玻璃珠无菌水。
1．4 用具：培养皿〔2个〕、1mL移液管〔2支〕、玻璃刮铲〔1支〕、厌氧管〔6支〕、镊子、酒精灯、记号笔、牙签〔2根〕等。
1．5 设备：超净工作台［］，手提式压力蒸汽灭菌锅［上海华线医用核子仪器有限公司］，电子称［豪斯（国际）贸易上海有限公司］
2、方法
2．1 菌悬液的制备：取培养37℃培养24小时的大肠杆菌斜面一支，将3~5mL 无菌水倒入斜面，洗下菌苔，摇床振荡15分钟，制成菌悬液。
2．2 每组取无菌培养皿两套，先用记号笔在平板底面划分六个区，记上欲滴加的各种糖的名称，皿盖注明班级、组别。然后将融化的基础培养基，倾注于无菌培养皿中，每皿约20mL，待凝备用。
2．3 向倒有培养基的培养皿各加入上述菌悬液0.1mL，用无菌玻璃刮铲涂布均匀。
2．4 用镊子将浸泡过各种糖的小圆滤纸片，分别放在平板相应的培养基上，37℃恒温培养箱培养24小时后，观察生长情况。
图1 ××××图
3、结果
2.1 不同碳源利用能力测定
以6种不同糖作为碳源，测定E.coli对其利用情况，以滤纸片周围是否出现生长圈为判断标准。
表1：不同碳源大肠埃希氏菌(Escherichia coli)的生长状况
碳源类型葡萄糖木糖麦芽糖蔗糖乳糖果糖
菌体生长状况菌落颜
色
培养皿1
培养皿2 pH值
培养皿1
培养皿2 菌落数
量
培养皿1
培养皿2
4、结论：实验失败。
5、失败原因：
两个培养基上一个菌落未长，疑是菌种问题，即接入培养基中的菌悬液中含的活菌数目过少。
7、讨论：
培养基的配制（注意：直接用三角瓶溶解原料试剂，或是留下一定蒸馏水清洗用来溶解烧杯）
糖溶液浓度不一致，经过灭菌后的无菌水因蒸发消耗，且各瓶含量不同，六种糖未按水的比例称量，而是统一称量一克加入，各种糖溶液浓度不同，且有些糖溶液浓度过大，不过糖溶液浓度过大所导致的渗透压过大，仅会使滤纸片附近不长菌或是菌落数较少，而离滤纸片较远处的培养基在有适当碳源且糖溶液经扩散降低浓度后，仍会长菌，并不会导致整个培养基上不长菌。
7、参考文献：
[1] 李剑欣,张绪梅,徐填寿.色氨酸的生理生化作用及其应用[J].氨基酸和生物资源, 2005, 27: 58-62.
①《微生物》周德庆
②《嗜鞣管囊酵母(Pachysolen tannophilus 1622)和重组大肠杆菌
(E．coli(pGM-PA))乙醇发酵特性研究》太阳能学报, Acta Energiae Solaris Sinica, 2008年01期
通过对嗜鞣管囊酵母和重组大肠杆菌代谢木糖及混合糖产乙醇研究,阐明两种菌的不同发酵能力。结果表明:重组大肠杆菌在5%木糖培养基中乙醇产率为理论值的100%,在10%木糖的培养基中乙醇产率达到理论值的96%。重组大肠杆菌木糖转化乙醇的能力明显高于嗜鞣管囊酵母,但嗜鞣管囊酵母与重组大肠杆菌相比乙醇耐受度更高(可达8%).且代谢过程中pH降低幅度不大。固定化技术对于提高P.tannophilus 1622乙醇发酵表现作用显著,而对重组大肠杆菌乙醇发酵的产率提高没有明显作用。
③《发酵过程中微生物利用单糖的差异性》中国生物工程杂志, China
Biotechnology, 2009年09期
考察了多种发酵常见微生物对单糖的利用差异(尤其是葡萄糖/果糖利用差异)。并在分子生物学层面,从转运和磷酸化两个角度分析了造成这种差异的原因。通过定位与此相关的特殊操纵子或编码基因,能够帮助实现工业微生物的改造,从而使多种非葡萄糖基生物质能源得到有效利用,对能源模式的转化和可持续发展有着重要意义。
④《遗传学》朱军
⑤实验报告册
附录1
对结果的猜测：
培养基分区中2不长菌，1、3、4、5、6有菌落，3、4、5中的菌落数少于1、6中的菌落数，即大肠杆菌在1、6中生长较好。
木糖C
5H
10
O
5
：戊糖天然D-木糖是以多糖的形态存在于植物中，不能被利用
葡萄糖C
6H
12
O
6
：单糖能利用
乳糖：二糖能利用，后于葡萄糖
果糖：单糖葡萄糖的同分异构体能被利用
麦芽糖：二糖不能被利用
蔗糖：由葡萄糖和果糖通过异头体羟基缩合而形成的非还原性二糖能被利用大肠杆菌利用碳源的顺序：果糖，葡萄糖，蔗糖，乳糖，麦芽糖。
大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖。当培养基中有葡萄糖和乳糖时，细菌优先使用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间的适应，就能利用乳糖。
果糖可以直接成为1，6-二磷酸果糖，从而进入糖酵解过程。果糖实际上比葡萄糖更容易被代谢，因为它可以绕过糖酵解途径的限速酶，6-磷酸果糖激酶-I。
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
论文格式范文模板 导读：范文论文格式范文模板 【篇一：大学学术论文格式范文模板】 一、论文格式要求 (一)需报送全文，文稿请用word录入排版。字数不超过5000字。 (二)应完整扼要，涉及主要观点的图片、曲线和表格不能缺少，正文要有“结论”部分。如稿件内容不清或文章篇幅超长等原因，编辑有权删改。 (三)论文结构请按下列顺序排列： 1.大标题(第一行)：三黑字体，居中排。 2.姓名(第二行)：小三楷字体，居中排。 3.作者单位或通信地址(第三行)：按省名、城市名、邮编顺序排列，用小三楷字体。
4.关键词。需列出4个关键词，小三楷字体。第1个关键词应为二级学科名称。学科分类标准执行国家标准；关键词后请列出作者的中国科协所属全国性学会个人会员的登记号 5.正文。小四号宋体。文中所用计量单位，一律按国际通用标准或国家标准，并用英文书写，如km2，kg等。文中年代、年月日、数字一律用阿拉伯数字表示。 正文中的各级标题、图、表体例见下表： 表；标题体例 标题级别字体字号格式说明 一级标题三号标宋居中题目 二级标题四号黑体左空2字，单占行汉字加顿号，如“一、” 三级标题四号仿宋体左空2字，单占行汉字加括号，如“(一)” 四级标题小四号黑体左空2字，单占行阿拉伯数字加下圆点，如“1.”
五级标题小四号宋体左空2字，右空1字，接排正文阿拉伯数字加括号，如“(1)”允许用于无标题段落 图、表、注释及参考文献体例 内容字体字号格式说明 图题五号宋体排图下，居中，单占行图号按流水排序,如“图1；“图2” 图注小五号宋体排图题下，居中，接排序号按流水排序，如“1.”；“2.” 表题五号黑体排表上，居中，可在斜杠后接排计量单位，组合单位需加括号如“表2几种发动机的最大功率/kW”“表5几种车辆的速度/(km/h)”表序号按流水排序，如“表1”、“表2” 表栏头小五号宋体各栏居中，计量单位格式同上 图文/表文小五号宋体表文首行前空1字，段中可用标点，段后不用标点
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
论文写作范式 （论文写作目标：解决具体问题） 一、基本格式 标题。标题表示写作内容。例如：中信建投公司资产管理产品创新研究 大约写五章到六章，其中第一章和最后一章是只有章、节（条）两级标题，其他章有章、节（条）、目（款）三级标题。 第一章绪论 1.1 选题背景：回答为什么选择该内容作为论文题目。 1.2 研究目标：回答选择该题目要达到什么目的。 1.3 文献综述：以往研究同一题目的文献及相关观点。 1.4 论文结构：论文思路及结构设计。 1.5 论文创新观点：研究结论视为创新观点。 第二章到第四章通过例举一个案例表现作者具有解决具体管理问题的能力。 第二章案例内容。例如：中信建投公司资产管理产品创新现状 第三章问题分析。例如：中信建投资产管理产品创新中的问题和原因 第四章对策建议。例如：中信建投资产管理产品创新的对策 第五章结论 5.1 研究结论 先总体对研究结论进行总结，然后提出5个左右的研究结论，每个结论用标题列出，在结论标题后做一段归纳论述。 5.2 研究局限与展望 写两段，一段是从理论和应用两方面谈研究局限，一段从理论和应用两方面谈研究展望。（这部分不用标题） 二、文字要求 1.标题尽量用短句，即使用单句结构标题，不要使用从句或复句结构标题。 2.标题尽量用较少成分、结构简单的句型（不要使用带所有成分的结构句型。句子所有成分包括主、谓、宾、定、补、状） 3.每章三节（条）左右，每节三目（款）左右 4.节与节、目与目的句型结构一致 5.注意关键词或主题词4个，一般为实词，词与词不能有重复，不能与论文标题有关词完全重复。 三、文字数量及结构安排 除绪论和研究结论章之外，各章之间的文字数量基本相同，各节之间的文字数量基本相同。 四、5.1研究结论部分的写法 五、摘要写法 摘要要写成一篇短文，而不是第一章包含什么内容之类的论文介绍写法。 摘要包含5段，总计2000字左右，不得超过。 一段：选题背景相关内容（300字左右）； 二段：研究目标相关内容（200-300字左右） 三段：研究内容相关文献的观点（300-400字左右） 四段、五段：论文案例研究内容及研究结论（1000字左右）
营养缺陷型菌株的筛选 采用辐射，化学试剂等因素处理细菌，以提高其变异几率，关键步骤是进行营养缺陷型微生物的筛选工作，营养缺陷型是指通过诱变产生的，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的突变株。营养缺陷型的筛选与鉴定涉及下列几种培养基：基本培养基（MM，符号为[-]）是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。完全培养基(CM，符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。补充培养基（SM，符号为[A]或[B]等）是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的合成或半合成培养基。 营养缺陷型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌，而且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。 营养缺陷型的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节。现分述如下： 第一步，诱变剂处理：与上述一般诱变处理相同。
第二步，淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低。通过以下的抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺陷型。 抗生素法有青霉素法和制霉菌素法等数种。青霉素法适用于细菌，青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，杀死正在繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。制霉菌素法则适合于真菌，制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起膜的损伤，也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。在基本培养基中加入抗生素，野生型生长被杀死，营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来。 菌丝过滤法适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。 第三步，检出缺陷型：具体方法很多。用一个培养皿即可检出的，有夹层培养法和限量补充培养法；在不同培养皿上分别进行对照和检出的，有逐个检出法和影印接种法。可根据实验要求和实验室具体条件加以选用。现分别介绍如下：
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
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导论 ............................................................................................ 错误!未定义书签。 一、问题提出 ...................................................................错误!未定义书签。 二、选题价值 ...................................................................错误!未定义书签。 三、文献综述 ...................................................................错误!未定义书签。 四、文章思路 ...................................................................错误!未定义书签。 五、研究方法 ...................................................................错误!未定义书签。 六、创新与不足 ...............................................................错误!未定义书签。第一章我国会计准则国际趋同概述 .......................................... 错误!未定义书签。 一、我国会计准则国际趋同的涵义及特征...................错误!未定义书签。 （一）会计准则国际趋同的含义......................错误!未定义书签。 （二）会计准则国际趋同的特征......................错误!未定义书签。 二、我国会计准则国际趋同的理论基础.......................错误!未定义书签。 （一）会计准则国际趋同的必要性..................错误!未定义书签。 （二）会计准则国际趋同的可行性..................错误!未定义书签。第二章我国新企业会计准则与国际财务报告准则的比较分析错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则与国际财务报告准则体系的差异错误!未定义 书签。 （一）国际财务报告准则的体系构成..............错误!未定义书签。 （二）我国新企业会计准则体系的构成..........错误!未定义书签。 （三）我国新企业会计准则体系与国际财务报告体系的比较和分 析..........................................................................错误!未定义书签。 二、我国新企业会计准则与国际财务报告准则项目涵盖范围的比较错误! 未定义书签。 三、我国会计准则体系与国际财务报告体系下财务会计概念框架的比较 ...........................................................................................错误!未定义书签。 四、我国新企业会计准则与国际财务报告准则差异的主要表现错误!未 定义书签。 （一）公允价值的适用范围不同......................错误!未定义书签。 （二）企业合并的范围和会计处理方法有差异错误!未定义书签。 （三）关联方及其交易的披露范围有区别......错误!未定义书签。 （四）资产减值的相关规定不一致..................错误!未定义书签。 （五）政府补助的会计处理有差距..................错误!未定义书签。 （六）资本与资本保全的处理未规定..............错误!未定义书签。 五、我国新企业会计准则与国际财务报告准则的具体差异错误!未定义 书签。 第三章我国新企业会计准则国际趋同的历程和影响 .............. 错误!未定义书签。 一、我国新企业会计准则国际趋同的历程...................错误!未定义书签。
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素
2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h 3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：
①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用 ③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2. K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有 3 种：球状，杆 状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为 单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆 菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的 1 至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生 位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬， 且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。 3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌 丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许 多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、 假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状 态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和 内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材 普通光学显微镜（Nikon YS-100 ），镜油，镜头纸，擦镜液；
木聚糖降解菌的筛选及分子鉴定 作 者：××× 指导老师：××× 从宝天曼地区采集的腐木中富集、分离出了16株能够降解木聚糖的 6株菌株在摇床180 r/min 、28 ℃的条件下发酵培养48 h M3 。提取菌株M3的基因组进行26S rDNA PCR 初步鉴定菌株M3属于木聚糖降解菌；筛选；分子鉴定；木聚糖酶；酶活 0 引言 纤维素类物质是一类大量存在而又可再生的重要潜在资源，半纤维素占总纤维素的15%~30%，其中主要成分是木聚糖。与纤维素相比，半纤维素更易为微生物所降解和转化。该酶具有广泛的应用前景[2] ， 研究，已有不少研究者对黑曲霉、木霉(Trichoderma sp.)等真菌及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、环状芽孢杆菌(B.circulans)等细菌的木聚糖酶进行了研究。 糖，从中很容易筛选得到高效降解木聚糖的菌株。本研究主要从宝天曼森林腐木中富集、分离、筛选出产木聚糖酶菌株，并分析它们木聚糖酶的酶 活力大小，找出酶活力较高的分离菌株。最后通过分子生物学方法测定分离菌株的26S rDNA 序列并对其进行序列相似性分析和系统发育树分析，初
步鉴定出分离菌株在系统发育上的分类地位。 材料与方法 样品 取自实验室保存的宝天曼地区采集的腐木。 试剂 溴钾酚绿、1%刚果红溶液、1 mol/L NaCl 溶液、柠檬酸缓冲液、DNS 试剂、试剂酵母基因组提取试剂盒、PCR Magic Mix2.0、NL 1、引物NL 4、TAE 缓冲液、琼脂糖凝胶、EB 试剂。 培养基[3] 木聚糖1%、酵母氮基础培养基1%、氯霉素(80 μL/100 mL)； 0.5%2%、80 μL/100 mL ）； 1%、（80 mL ）； 0.3%、麦芽粉0.3%、蛋白胨0.5%、琼脂2%、氯霉μL/100 mL ）； 1.4 菌株筛选[4,5] 1.4.1 富集培养 取7支干净小试管，向每支试管中分装入3～5 mL 富集培养基，于121 ℃高压灭菌锅中灭菌20 min 。用镊子夹取少许实验室保存的7种森林腐木分别放入已灭菌的富集培养基中，于28 ℃温箱中富集培养2～3 d 。 1.4.2 平板分离 对培养后变混浊的富集培养液按照梯度稀释法用无菌水稀释到10-5，在超净工作台中的无菌条件下，准确吸取100 μL 的10-3～10-5不同稀释倍数的菌液涂布于已灭菌的平板培养基上，于28 ℃温箱中倒置培养2～3 d 。 1.4.3 纯化菌种 根据菌落形态特征的比对，找出不同形态的菌株。在无菌条件下，挑取不同形态的单菌落在已灭菌的纯化培养基上进行扇形划线，于28 ℃温箱中倒置培养2～3 d 。按照同样的方法划线2～3次后即可得到纯菌落。 用镊子夹取已灭菌的牙签，将纯化培养基中的纯菌落点蘸到鉴别培养
实验一化学因素对微生物的影响 二、基本原理 常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、有机溶剂（酚、醇、醛等）、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活，重金属盐则是蛋白质沉淀剂，或与代谢产物发生鳌合作用而使之变为无效化合物；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下可抑制细菌生长，染料对细菌的作用具有选择性，革兰氏阳性菌普遍比革兰氏阴性菌对染料更加敏感；表面活性剂能降低溶液表面张力，这类物质作用于微生物细胞膜，改变其透性，同时也能使蛋白质发生变性。 四、操作步骤 l、将已灭菌并冷至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基倒入无菌平血中，水平放置待凝固。 2、用无菌吸管吸取0.2ml培养18h的金黄色葡萄球菌菌液加入到上述平板中，用无菌三角涂棒涂布均匀。 3、将已涂布好的平板底皿划分成4～6等份，每一等份内标明一种消毒剂的名称。 4、用无菌镊子将已灭菌的小圆滤纸片（D5mm）分别浸入装有各种消毒剂溶液的试管中浸湿。 注意取出滤纸片时保证过滤纸片所含消毒剂溶液量基本一致，并在试管内壁沥去多余药液。 无菌操作将滤纸片贴在平板相应区域，平板中间贴上浸有无菌生理盐水的滤纸片作为对照。 5、将上述贴好滤纸片的含菌平板倒置放于37℃温室中，24h后取出观察抑（杀）菌圈的大小。 实验二生物因素对微生物的影响 二、基本原理
生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之间的拮抗现象是普遍存在于自然界的，许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其他微生物的作用，不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用，例如青霉素一般只对革兰氏阳性菌具有抗菌作用，多粘菌素只对革兰氏阴性菌有作用，这类抗生素称为窄谱抗生素；另一些抗生素对多种细菌有作用，例如四环素、土霉素对许多革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有作用，称为广谱抗生素。 本实验利用滤纸条法测定青霉素的抗菌谱，将浸润有青霉素溶液的滤纸条贴在豆芽汁葡萄糖琼脂培养基平板上，再与此滤纸条垂直划线接种试验菌，经培养后，根据抑菌带的长短，即可判断青霉素对不同类型微生物的影响，初步判断其抗菌谱。实验中所用试验菌通常以各种具有代表性的非致病菌来代替人体或动物致病菌，常用的试验菌株参见表2－1，而植物致病菌由于对人畜一般无直接危害，可直接用作试验菌。 四、操作步骤 1、将豆芽汁葡萄糖琼脂培养基溶化后，冷至45℃左右倒平板。 2、无菌操作，用镊子将无菌滤纸条分别浸入过滤除菌的青霉素溶液和氨苄青霉素溶液中润湿，并在容器内壁沥去多余溶液，再将滤纸条按图2－1所示分别贴在两个已凝固的上述平板上。 注意滤纸条形状要规则，滤纸条上含有的溶液量不要太多，而且在贴滤纸条时不要在培养基上拖动滤纸条避免抗生素溶
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
实验1 微生物的分离、培养及计数 实验原理 纯化分离：人为提供适宜的菌落生长的条件（包括营养、温度、Ph等）。用平板划线法，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞菌落。 筛选：转基因大肠杆菌有抗氨苄青霉素基因，所以在含有氨苄青霉素的LB培养基中可以正常繁殖长成菌落。而普通的大肠杆菌没有抗氨苄青霉素基因，咋含有氨苄青霉素的LB培养基中不能繁殖。由此可进行大肠杆菌的筛选。 梯度稀释并计数：通过浓度梯度稀释把液体培养基培养的大肠杆菌稀释到一定浓度，用稀释涂布平板法，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。由此可计数计算大肠杆菌的数量。 实验目的 1.通过制备LB固体培养基，对平板进行划线等，学会使用固体LB 平板。 2.通过用液体培养基，学会对微生物进行扩大培养。 3.通过稀释，学会用计数器对微生物进行计数。
实验材料和药品 待分离的大肠杆菌菌液、高压蒸汽灭菌锅、LB 固体培养基、LB 液体培养基、接种环、玻璃涂布器、培养皿、恒温培养箱、摇床、酒精灯、无菌水、移液枪、EP 管 实验步骤（用简单的流程图表示） 实验数据的记录与分析（如照片、表格等）
稀释倍数104105 大肠杆菌单个菌落个 837799111812数 平均数 浓度×107×107 实验结果与讨论 结果：稀释了105计算出来的结果约为×107ml/cm^3
论文格式 一、纸型、页面设置、版式和用字。 毕业论文一律用国际标准A4型纸(297mmX210mm)打印。 页面分图文区与白边区两部分，所有的文字、图形、其他符号只能出现在图文区内。白边区的尺寸(页边距)为:天头(上)25mm，地脚(下)20mm，订口(左)25mm，翻口(右)20mm。 文字图形一律从左至右横写横排。文字一律通栏编辑。 使用规范的简化汉字。除非必要，不使用繁体字。忌用异体字、复合字及其他不规范的汉字。 二、论文封面 封面由文头、论文标题、作者、学校、年级、学号、指导教师、答辩组成员、答辩日期、申请学位等项目组成。 文头:封面顶部居中，占两行。上一行内容为“河南广播电视大学”用小三号宋体;下一行内容为“汉语言文学专业(本科)毕业论文”，3号宋体加粗。文头上下各空一行。 论文标题:2号黑体加粗，文头下居中，上下各空两行。 论文副题:小2号黑体加粗，紧挨正标题下居中，文字前加破折号。 作者、学校(市级电大)、年级、学号、指导教师、答辩组成员、答辩日期、申请学位等项目名称用3号黑体，内容用3号楷体，在正副标题下适当居中左对齐依次排列。占行格式为: 作者:XXX
学校:XXX 年级:XXX 学号:XXX 指导教师:XXX 职称:XXX 答辩组成员: XXX(主持人) 职称:XXX XXX 职称:XXX …… 答辩日期:X年X月X日 申请学位:学士(不申请可省略此项) 由于论文副题可有可无，学位可申请可不申请，答辩组成员可以是3、5、7人，封面内容占行具有不确定性，为保持封面的整体美观，可对行距做适当调整。 三、论文 论文由论文目录(提纲)和题目、作者姓名、完成日期、摘要、关键词、正文、注释、参考文献、附录等项目组成。 需要列目录的论文，目录要独占一页。“目录”二字用3号黑体，顶部居中;以下列出论文正文的一、二级标题及参考文献、附录等项及其对应页码。用小4号宋体。 论文题目用3号黑体，顶部居中排列，上下各空一行; 作者姓名:题目下方居中，用四号楷体。 完成时间:作者姓名下方居中，字样为“X年X月”，用四号楷体。 摘要:作者姓名下空一行，左起顶头，写明“摘要”字样加粗，
2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军
4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法
关键词：木聚糖降解菌；筛选；分子鉴定；木聚糖酶；酶活 0 引言 纤维素类物质是一类大量存在而又可再生的重要潜在资源，半纤维素占总纤维素的15%~30%，其中主要成分是木聚糖。与纤维素相比，半纤维素更易为微生物所降解和转化[1]。 该酶具有广泛的应用前景[2] ，研究，已有不少研究者对黑曲霉、木霉(Trichoderma sp.)等真菌及短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、环状芽孢杆菌(B.circulans)等细菌的木聚糖酶进行了研究。 糖，从中很容易筛选得到高效降解木聚糖的菌株。本研究主要从宝天曼森林腐木中富集、分离、筛选出产木聚糖酶菌株，并分析它们木聚糖酶的酶
活力大小，找出酶活力较高的分离菌株。最后通过分子生物学方法测定分离菌株的26S rDNA 序列并对其进行序列相似性分析和系统发育树分析，初步鉴定出分离菌株在系统发育上的分类地位。 材料与方法 样品 取自实验室保存的宝天曼地区采集的腐木。 试剂 溴钾酚绿、1%刚果红溶液、1 mol/L NaCl 溶液、柠檬酸缓冲液、DNS 试剂、试剂酵母基因组提取试剂盒、PCR Magic Mix2.0、NL 1、引物NL 4、TAE 缓冲液、琼脂糖凝胶、EB 试剂。 培养基[3] 木聚糖1%、酵母氮基础培养基1%、氯霉素(80 μL/100 mL)； 0.5%2%、80 μL/100 mL ）； 1%、（80 mL ）； 0.3%、麦芽粉0.3%、蛋白胨0.5%、琼脂2%、氯霉μL/100 mL ）； 1.4 菌株筛选[4,5] 1.4.1 富集培养 取7支干净小试管，向每支试管中分装入3～5 mL 富集培养基，于121 ℃高压灭菌锅中灭菌20 min 。用镊子夹取少许实验室保存的7种森林腐木分别放入已灭菌的富集培养基中，于28 ℃温箱中富集培养2～3 d 。 1.4.2 平板分离 对培养后变混浊的富集培养液按照梯度稀释法用无菌水稀释到10-5，在超净工作台中的无菌条件下，准确吸取100 μL 的10-3～10-5不同稀释倍数的菌液涂布于已灭菌的平板培养基上，于28 ℃温箱中倒置培养2～3 d 。 1.4.3 纯化菌种 根据菌落形态特征的比对，找出不同形态的菌株。在无菌条件下，挑取不同形态的单菌落在已灭菌的纯化培养基上进行扇形划线，于28 ℃温箱