一株自养硝化细菌培养条件的优化
摘要：针对前期筛选的自养硝化杆菌（Nitrobacter）菌株y3-2，以实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）测定的菌液终浓度为指标，设计单因素试验和正交试验对其培养基和培养条件进行优化。结果表明，优化的硝化杆菌y3-2的培养基中CaCO3、Na2CO3、NaNO2浓度分别为0.5、1.0、0.5 g/L。最佳培养条件为培养温度28 ℃、pH 8.0、摇床转速200 r/min。优化后硝化杆菌y3-2的发酵周期由优化前的7 d缩短至4 d，菌液终浓度达到4.31×109 CFU/mL。
关键词：硝化杆菌（Nitrobacter）；培养基；培养条件；优化
氮素是水体污染源的主要成分之一，水体的脱氮技术已经成为人们关注与研究的热点[1]。与传统的物理化学脱氮工艺相比，生物脱氮具有成本低、效率高、无二次污染等优势。现今采用最多的生物脱氮工艺为硝化—反硝化工艺，其中的硝化工艺由硝化细菌（Nitrifying bacteria）完成[2]。硝化细菌分为自养型硝化细菌和异养型硝化细菌2类，异养型硝化细菌仅占很少一部分，自养型硝化细菌是生物脱氮过程中起硝化作用的主要菌群，其硝化速率直接影响污水处理系统的硝化效果和生物脱氮效率[3]。硝化过程通常由氨氧化细菌（Ammonia-oxidizing Bacteria，AOB）先将氨氮转化为亚硝酸盐，然后由亚硝酸氧化细菌（Nitrite-oxidizing Bacteria，NOB）将亚硝酸盐转化为硝酸盐[4]。与自养型AOB 一样，自养型NOB具有生长速度慢、自然条件下数量低等特点，这一方面使NOB 的研究较为困难，另一方面也制约了其工业化生产和应用。因此，研究加快NOB 生长速度的培养方法显得尤为重要[5，6]。本研究以一株亚硝酸氧化细菌y3-2[7]为出发菌株，对其培养基和培养条件进行了优化，并采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time quantitative PCR detecting system，qPCR）计数的方法对其菌液浓度进行计数，以期获得能快速培养硝化杆菌y3-2的方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种试验用菌种硝化杆菌y3-2由农业微生物学国家重点实验室发酵工程分室分离纯化保藏，经16 S rDNA鉴定为硝化杆菌属（Nitrobacter）细菌。
1.1.2 优化前培养基及培养条件优化前初始培养基：MgSO4·7H2O 0.12 g/L、NaH2PO4·2H2O 1.16 g/L、K2HPO4·3H2O 0.33 g/L、MnSO4·H2O 0.007 6 g/L、（NH4）6Mo7O24·4H2O 50 μg/L、无水NaCO3 0.5 g/L、NaNO2 1.0 g/L、pH 7.5，121 ℃、30 min灭菌。优化前的培养条件为250 mL三角瓶加入50 mL培养基，200 r/min、30 ℃恒温培养。
1.1.3 试剂亚硝酸盐和硝酸盐定性检测试剂[8]：Griess试剂、盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液、二苯胺—硫酸试剂，细菌基因组DNA提取试剂盒和Real Master
如何快速培养硝化细菌的几种方法 硝化细菌,培养 快速培养硝化细菌的几种方法~ 水族箱过滤器只具备物理过滤和化学过滤的功能，而降解水中毒素的硝化细菌并未繁殖起来，需要在过滤系统开始运转后逐渐进行培养。若想尽快放入观赏鱼，就需要采取措施加快培养硝化细菌的进度。 通常有以下几种快速培养硝化细菌的方法： (1) 利用旧滤材或滤砂移植硝化细菌饲养过观赏鱼的旧水族箱中滤材或底砂上都附着大量的硝化细菌，若能将旧滤材或滤砂移入新设立的水族箱引入菌种，可大大促进硝化细菌繁殖的速度，至少节约一半的培养时间。 (2) 利用污染源刺激硝化细菌的繁殖在引入菌种后，要配合过滤、充气促进水流循环，并在水族箱中放入4～5 个新鲜的去壳蛤蜊或虾，利用肉质腐烂生成的毒素作为硝化细菌的营养，刺激菌种大量繁殖。还可以购买一些小型易养的实验鱼，放入几条，利用它们的排泄废物、食物碎屑提供有机物废料，促进硝化细菌的繁殖。 (3) 添加人造硝化细菌目前市售的人造硝化细菌，有液态、粉末状、干燥孢子化等不同类型，可以满足观赏鱼爱好者迫切尽快饲养的要求。 培养生物过滤系统的要点~ 在进行水族箱生物过滤系统培养时，要掌握以下几个要点：(1)不宜频繁换水大量的换水，容易破坏水族箱中硝化细菌的繁殖，使附着于底砂滤材中的硝化细菌随换水大量散失，同时水质的频繁改变也无法维持硝化细菌繁殖的适宜pH值，因此换水不必过勤，1～2 个月换20％的水即可。 (2)正确清洗滤材经过长期饲养，过滤系统的滤材上会附着大量硝化细菌，但同时也会积累许多杂质污物，需定期清洗。清洗时，用原水族箱的海水将滤材轻轻挤压揉搓，千万不能用自来水冲洗或使用洗涤剂等化学物质。 (3)渐次追加观赏鱼刚设立的新缸要逐渐增加观赏鱼数量，不可一次放入过多，以免大量的残饵和排泄物产生的毒素超过硝化细菌氧化分解的能力，造成水质污染和观赏鱼死亡。
硝化细菌在制革废水氨氮处理中的应用 1 前言 制革废水是一种COD 和氨氮(NH 3-N)质量浓度均较高的废水，目前对其处理多采用废水好氧生化处理技术即活性污泥工艺。由于该废水水质变化较大，硝化反应很容易受到冲击负荷的影响，反应条件受到破坏，导致出水NH 3-N 质量浓度不能够达标。 制革企业是以各种动物皮为原料，添加多种化学品并经过设备处理制得成品皮革的。处理过程产生的氨氮污染主要来自来自皮革本身由有机氮转化而来的氨氮以及加工过程中加入的大量的各种铵盐。制革原料中的动物皮带有许多氨氮，在处理时进入到废水中。原皮中部分动物蛋白质也会在加工过程中分离出来，其在废水中的不断分解会产生较多的氨氨。由于技术、经济的因素，许多制革企业仍使用大量的铵盐。废水中含氨氮的工序有浸水、脱毛、浸灰、脱灰、软化、浸酸、鞣制和中和染色等工序。其中在脱灰软化中使用硫酸铵、氯化铵等；在中和、染色工序还使用碳酸氢铵和液氨；浸酸和鞣制工序废水中的氨氮则来自皮革中铵盐残余物的不断向水中释放。 针对制革废水中的氨氮问题，本试验研究选取污水厂的脱水污泥进行硝化细菌菌种培养，向池中投加实验室自行培养的硝化细菌菌种，然后将培养后的硝化污泥注入SBR 反应池中，以期在较短时间内降解氨氮，探索一种制革废水硝化污泥的培养方法。 2 材料与方法 2.1 试验菌种 试验所用菌种由实验室自行培养，为液体状菌种。 2.2 试验源水与水质 污泥培养阶段所用污水为该厂经生物接触氧化处理后的出水。试验期间，其主要水质指标：COD146-307mg/L ，平均201mg/L ；BOD 558-110mg/L ，平均76mg/L ；氨氮146-205mg/L ，平均184mg/L ；水温20℃-29℃，pH7.14-7.82，平均7.69。 2.3 制革厂污水处理工艺及试验装置 制革厂现有污水处理工艺流程如图1所示。 污泥培养阶段所用污水为经生物接触氧化处理后的出水。试验期间，其主要水质指标：
硝化菌的培养方法 硝化反应影响因素： 1、温度在生物硝化系统中，硝化细菌对温度的变化非常敏感，在5～35℃的范围内，硝化菌能进行正常的生理代谢活动。当废水温度低于15℃时，硝化速率会明显下降，当温度低于10℃时已启动的硝化系统可以勉强维持，硝化速率只有30℃时的硝化硝化速率的25%[1]。尽管温度的升高，生物活性增大，硝化速率也升高，但温度过高将使硝化菌大量死亡，实际运行中要求硝化反应温度低于３８℃[2]。 2、pH值硝化菌对pH值变化非常敏感，最佳pH值是8.0～8.4，在这一最佳pH值条件下，硝化速度，硝化菌最大的比值速度可达最大值。Anthonison认为pH对硝化反应的影响只是表观现象，实际起作用是两个平衡H++NH3 = NH4+和H++NO2-= HNO2中的NH3（FA）和HNO2（FNA），pH通过这两个平衡影响FA和FNA的浓度起作用的。 3、溶解氧氧是硝化反应过程中的电子受体，反应器内溶解氧高低，必将影响硝化反应得进程。在活性污泥法系统中，大多数学者认为溶解氧应该控制在1.5～2.0mg/L内，低于0.5mg/L则硝化作用趋于停止。当前，有许多学者认为在低DO（1.5mg/L）下可出现SND现象。在DO＞2.0mg/L，溶解氧浓度对硝化过程影响可不予考虑。但DO浓度不宜太高，因为溶解氧过高能够导致有机物分解过快，从而使微生物缺乏营养，活性污泥易于老化，结构松散。此外溶解氧过高，过量能耗，在经济上也是不适宜的。 4、生物固体平均停留时间（污泥龄）为了使硝化菌群能够在连续流反应器系统存活，微生物在反应器内的停留时间（θc）N必须大于自养型硝化菌最小的世代时间（θc）minN，否则硝化菌的流失率将大于净增率，将使硝化菌从系统中流失殆尽。一般对（θc）N的取值，至少应为硝化菌最小世代时间的2倍以上，即安全系数应大于2。 5、重金属及有毒物质除了重金属外，对硝化反应产生抑制作用的物质
问题的提出 我国水体富营养化状况 我国是一个湖泊众多的国家，大于1 km2的天然湖泊就有2300多个，湖泊面积为70988 km2，约占全国陆地总面积的％。湖泊总蓄水量为7077多亿m3[1]。调查结果表明：2004年七大水系的412个水质监测断面中，I～III类、Ⅳ～Ⅴ类和劣Ⅴ类水质的断面比例分别为％、％和％，七大水系主要污染指标为氨氮、五日生化需氧量、高锰酸盐指数和石油类[3]。 2004年监测的27个重点湖库中，II类水质的湖库2个，III类水质的湖库5个，Ⅳ类水质的湖库4个，Ⅴ类水质湖库6个，劣Ⅴ类水质湖库10个。其中，“三湖”（分别为太湖、巢湖和滇池）水质因总氮和总磷浓度高而均为劣Ⅴ类。太湖水质与上年比有所改善，但仍处于中度富营养化状态。滇池的草海属于中度富营养化，外海属重度富营养化。巢湖水质属中度富营养化。对于海洋环境，2004年全海域共发现赤潮96次，较上年减少23次。赤潮累计发生面积266630平方公里，较上年增加％，其中，大面积赤潮集中在东海。 目前，水体的富营养化已经成为我国最为突出的环境问题之一。许多大型湖泊，如巢湖、太湖、鄱阳湖、滇池和西湖等，都已经处于富营养或重度富营养化状态。而且一些河流在部分河段也出现了富营养化现象，如黄浦江流域、珠江广州河段等。据统计，我国主要湖泊处于因氮、磷污染而导致富营养化的占统计湖泊的56％[4]。因此，如何治理富营养化的水体，减少其中的营养物质的含量，回复水体的综合功能，已成为当前全球性的环境问题的研究热点[5]。 富营养化水体的微生物治理 针对水体富营养化现象，其水质改善及对策包括三个大的方面：污染源控制对策、水体生态修复对策以及应急除藻对策[6-8]。水体富营养化的关键与核心是生物多样性的破坏，其典型表现就是富营养化水体发生藻类“水华”现象[9]。因此，从保护和恢复生物多样性入手，引入微生物、植物和动物，尤其是关键物种，重建食物链结构，是恢复水体正常的主要手段之一[10-12]。为此经常用到的技术措施包括：以藻控藻，投加细菌微生物[13]、放养鱼类[14]，恢复与构建水生植被[15,16]等。 利用微生物种群的新陈代谢活动对富营养化水体中的有机污染物、氨氮和有机氮等进行去除，尤其是氮污染物的去除，主要需要建立硝化－反硝化体系。而在自然界中，原本存在有专门从事硝化－反硝化过程中的微生物种群。但是由于某些微生物种群，如硝化细菌的代时较长，增殖速率非常低。同时，水体的人为活动的破坏。导致了富营养化水体中硝化－反硝化体系的弱化甚至缺失。故针对富营养化水体，可采用向水体中投加复合微生物菌群，从而增强水体的生物自净化能力，达到控制水体富营养化的目的，该技术被称之为“微生物强化技术”。该技术具有费用低、见效快、无污染和方便安全等特点。 复合微生物种群主要由光合细菌、硝化细菌等组成，再辅之以反硝化细菌。其中，光合细菌通过自身代谢与藻类竞争性争夺营养物质，并可降解、消除藻类代谢分泌于体外的多种物质，削弱藻类的竞争力。一般的光合细菌都有固氮能力，在厌氧光照条件下固氮能力最强。光合细菌与其他细菌的混合培养，能够提高其他细菌的固氮能力。另外，硝化细菌、反
材料与方法 样品 检测用试剂 1、Griess 试剂 溶液I称取磺胺酸0.5g，溶于150mL醋酸溶液(30％)中，保存于棕色瓶中。 溶液II称取α-萘胺0.5g，加入50mL蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％醋酸溶液150mL，保存于棕色瓶中。 格里斯试剂检验亚硝化菌方法：用滴管吸取2滴细菌培养液置于白瓷板上， 依次滴加格里斯试剂Ⅰ、Ⅱ各2滴，出现红色反应说明培养液中含有亚硝酸，有 亚硝酸细菌存在。 2、二苯胺-硫酸试剂（检测菌液中是否存在硝酸盐证明硝化细菌是否存在） 称取二苯胺1g，溶于20mL蒸馏水中，然后徐徐加入浓硫酸lOOmL，保存于棕色瓶中。 由于亚硝基、硝基均能与二苯胺试剂起蓝色显色反应，所以在测定硝基前，必须去除培养液中的亚硝基。采用尿素+浓硫酸去除亚硝基是简单有效的方法，硝化菌检验具体操作步骤：取细菌培养液lml移入干净试管中，向试管中放半药勺的尿素混匀，然后再向试管中滴加10滴浓硫酸，此时可以看到试管中有大量气泡生成，反应很强烈，不断振动试管，使反应充分进行直至没有气泡产生。然后取试管中液体两滴，置于白瓷板上，用格里斯试剂检验是否变红，如果颜色没有变化，再滴加二苯胺试剂，如果变蓝，说明有硝基产生，有硝化菌存在。培养基 1、LB（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 酵母粉 5g 蛋白胨 10g NaCl 10g 蒸馏水 1000ml 灭菌前pH=7.3 2、KM（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 酵母浸提物 0.5g 蛋白胨 0.5g 牛肉膏 0.5g 蒸馏水 1000ml 灭菌前pH=7.3 3、PDA（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 马铃薯(除皮) 200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 水 1000mL 灭菌前pH自然 硝化细菌培养基
硝化细菌的培养及作用 近年来，硝化细菌已逐渐成为水产养殖界的热门话题，它在水产养殖中的重要性开始引起广泛的注意。可以说，迄今为止，在大规模、集约化的水产养殖模式中，如果没有硝化细菌参与其中的净水作用，想获得成功的养殖，是相当困难的。鱼、虾等水产动物吃、喝、排泄、生活、休息都是在水体中进行的，那么，如何管理水体的水质以便适合它的生长、生存、健壮就成了重要的问题。尤其是现代集约化养殖长期累积了大量养殖生物排泄物，所有有机物的排泄物，甚至其尸体，在异养性细菌的作用下，其中的蛋白质及核酸会慢慢分解，产生大量氨等含氮有害物质。氨在亚硝化菌或光合细菌作用下转化成亚硝酸，亚硝酸与一些金属离子结合以后可以形成亚硝酸盐，而亚硝酸盐又可以和胺类物质结合，形成具有强烈致癌作用的亚硝胺。因此，亚硝酸盐常与恶名昭彰的氨相提并论，由于亚硝酸盐长期蓄积中毒，会使鱼、虾等抗病力降低，易招致各种病原菌的侵袭，故常被视为是鱼、虾的致病根源。然而，当亚硝酸在硝化菌的硝化作用下转变成硝酸后，很容易形成硝酸盐，从而成为可以被植物吸收利用的营养物质。所以说，硝化细菌与养殖环境的关系十分密切。 目前市面上宣称具有硝化作用的一些异养菌及真菌，虽然也能将氨氧化成硝酸盐，但通常只能利用有机碳源获取能量，不能利用无机碳源，其对氨的氧化作用十分微弱，反应速率远比自养性硝化细菌慢，不能被视为真正的硝化作用。 硝化作用必须依赖于自养性硝化细菌来完成。养殖池中有丰富的氮源，原本很适于硝化细菌生长，不过由于养殖池中存在大量的异养菌，受到异养性细菌的排斥作用，适合硝化细菌栖息的地方，相对自然环境显然少得多，因此无足够数量的自养性硝化细菌来消费过量的亚硝酸氮，这就是问题所在。 硝化细菌系指利用氨或亚硝酸盐作为主要生存能源，以及能利用二氧化碳作为主要碳源的一类细菌。硝化细菌是古老的细菌之一，其广泛分布于土壤、淡水、海水及污水处理系统中，却在自然界鲜少大量出现，原因在于硝化细菌的分布会受到许多环境因素的影响，如氮源、温度、氧气浓度、渗透压、酸碱度和盐度等等。 硝化细菌分为亚硝化菌与硝化菌，亚硝化菌的主要功能是将氨氮转化为亚硝酸盐；硝化菌的主要功能是将亚硝酸盐转化为硝酸盐。氨氮和亚硝酸盐都是在水产养殖过程中产生的有毒物质且亚硝酸盐还是强烈的治癌物质，因此如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点，由于亚硝化菌的生长速度比较快且光合细菌也具有降解氨氮的作用，因此现代养殖已能成功地将氨氮控制在较低的水平上。而对于亚硝酸盐，由于自然界中的硝化菌生长极慢且还没有发现有其它的任何微生物可代替硝化菌的功能，所以养殖过程中产生的亚硝酸盐就成为阻碍养殖发展的关键因素。在此当中，硝化细菌就起到了关键的作用。
硝化细菌的正确使用与说明 不少鱼友对硝化细菌的认识产生了一定的误解，有的人认为硝化细菌能够分解粪便；有的认为可以净化水质，中和水中的悬浮物，这些认识是不准确的，或者可以说是错误的。那么下面我就谈谈我对硝化细菌的认识，有不正确的地方希望大家给我指正出来。 1、首先先说说分解有机物，这个粗重的体力劳动可不是娇贵的硝化细菌能完成的，他是靠其它净水细菌完成的。在水生态循环系统中，若无其它异营性细菌存在，水中将到处充斥未被细菌分解的有机物，此种自我污染的水族环境一样使鱼儿无法生存其中。因此，它们常被视为是水质自净作用的先锋部队，其重要性并不亚于硝化细菌。这类细菌普遍存在于各种不同环境，它们几乎无所不在，而繁殖速度相当惊人，大部份的异营性净水细菌，在理想的环境只需几十秒钟即可自行增殖一倍，一般只需二十几分钟即能增殖一倍。但要是裸缸饲养，我们就要借助物理循环，把水中的剩饵或粪便吸出。 2、关于净化水质，中和水中悬浮物的问题。鱼友中不少人去买硝化细菌，按照说明每星期按时添加，这样做对吗回答是完全正确加100分。可我要告诉大家的是，你们的做法没错，可你们对硝化细菌的认识产生的错误。因为我们买的这种每星期添加的所谓的硝化细菌其实是光合细菌。 光合细菌，俗称：b菌。光合细菌是一种水中微生物，因具有光合色素，包括细菌叶绿素和类胡萝卜素等，而呈现淡粉红色，光合细菌能在厌氧和光照的条件下，利用化合物中的氢并进行不产生氧的光合作用。 光合细菌可以在某种污染环境下生存，并担负着重要的净化水质的角色。但只有在生存环境和污染物质符合其生理、生态特性时，才会发挥其作用，否则很难获得预期。例如在无光或者有氧环境下，光合细菌就很难发挥效果。 水族箱中若存在光合细菌，它将那些有机质或硫化氢等物质加以吸收利用，而使耗氧的异营性微生物因缺乏营养而转为弱势，因而降低发生有毒分
1.1 问题的提出 1.1.1 我国水体富营养化状况 我国是一个湖泊众多的国家，大于1 km2的天然湖泊就有2300多个，湖泊面积为70988 km2，约占全国陆地总面积的0.8％。湖泊总蓄水量为7077多亿m3[1]。调查结果表明：2004年七大水系的412个水质监测断面中，I～III类、Ⅳ～Ⅴ类和劣Ⅴ类水质的断面比例分别为41.8％、30.3％和27.9％，七大水系主要污染指标为氨氮、五日生化需氧量、高锰酸盐指数和石油类[3]。 2004年监测的27个重点湖库中，II类水质的湖库2个，III类水质的湖库5个，Ⅳ类水质的湖库4个，Ⅴ类水质湖库6个，劣Ⅴ类水质湖库10个。其中，“三湖”（分别为太湖、巢湖和滇池）水质因总氮和总磷浓度高而均为劣Ⅴ类。太湖水质与上年比有所改善，但仍处于中度富营养化状态。滇池的草海属于中度富营养化，外海属重度富营养化。巢湖水质属中度富营养化。对于海洋环境，2004年全海域共发现赤潮96次，较上年减少23次。赤潮累计发生面积266630平方公里，较上年增加83.0％，其中，大面积赤潮集中在东海。 目前，水体的富营养化已经成为我国最为突出的环境问题之一。许多大型湖泊，如巢湖、太湖、鄱阳湖、滇池和西湖等，都已经处于富营养或重度富营养化状态。而且一些河流在部分河段也出现了富营养化现象，如黄浦江流域、珠江广州河段等。据统计，我国主要湖泊处于因氮、磷污染而导致富营养化的占统计湖泊的56％[4]。因此，如何治理富营养化的水体，减少其中的营养物质的含量，回复水体的综合功能，已成为当前全球性的环境问题的研究热点[5]。 1.1.2 富营养化水体的微生物治理 针对水体富营养化现象，其水质改善及对策包括三个大的方面：污染源控制对策、水体生态修复对策以及应急除藻对策[6-8]。水体富营养化的关键与核心是生物多样性的破坏，其典型表现就是富营养化水体发生藻类“水华”现象[9]。因此，从保护和恢复生物多样性入手，引入微生物、植物和动物，尤其是关键物种，重建食物链结构，是恢复水体正常的主要手段之一[10-12]。为此经常用到的技术措施包括：以藻控藻，投加细菌微生物[13]、放养鱼类[14]，恢复与构建水生植被[15,16]等。 利用微生物种群的新陈代谢活动对富营养化水体中的有机污染物、氨氮和有机氮等进行去除，尤其是氮污染物的去除，主要需要建立硝化－反硝化体系。而在自然界中，原本存在有专门从事硝化－反硝化过程中的微生物种群。但是由于某些微生物种群，如硝化细菌的代时较长，增殖速率非常低。同时，水体的人为活动的破坏。导致了富营养化水体中硝化－反硝化体系的弱化甚至缺失。故针对富营养化水体，可采用向水体中投加复合微生物菌群，从而增强水体的生物自净化能力，达到控制水体富营养化的目的，该技术被称之为“微生物强化技术”。该技术具有费用低、见效快、无污染和方便安全等特点。 复合微生物种群主要由光合细菌、硝化细菌等组成，再辅之以反硝化细菌。其中，光合细菌通过自身代谢与藻类竞争性争夺营养物质，并可降解、消除藻类代谢分泌于体外的多种物质，削弱藻类的竞争力。一般的光合细菌都有固氮能力，在厌氧光照条件下固氮能力最
一株自养硝化细菌培养条件的优化 摘要：针对前期筛选的自养硝化杆菌（Nitrobacter）菌株y3-2，以实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）测定的菌液终浓度为指标，设计单因素试验和正交试验对其培养基和培养条件进行优化。结果表明，优化的硝化杆菌y3-2的培养基中CaCO3、Na2CO3、NaNO2浓度分别为0.5、1.0、0.5 g/L。最佳培养条件为培养温度28 ℃、pH 8.0、摇床转速200 r/min。优化后硝化杆菌y3-2的发酵周期由优化前的7 d缩短至4 d，菌液终浓度达到4.31×109 CFU/mL。 关键词：硝化杆菌（Nitrobacter）；培养基；培养条件；优化 氮素是水体污染源的主要成分之一，水体的脱氮技术已经成为人们关注与研究的热点[1]。与传统的物理化学脱氮工艺相比，生物脱氮具有成本低、效率高、无二次污染等优势。现今采用最多的生物脱氮工艺为硝化—反硝化工艺，其中的硝化工艺由硝化细菌（Nitrifying bacteria）完成[2]。硝化细菌分为自养型硝化细菌和异养型硝化细菌2类，异养型硝化细菌仅占很少一部分，自养型硝化细菌是生物脱氮过程中起硝化作用的主要菌群，其硝化速率直接影响污水处理系统的硝化效果和生物脱氮效率[3]。硝化过程通常由氨氧化细菌（Ammonia-oxidizing Bacteria，AOB）先将氨氮转化为亚硝酸盐，然后由亚硝酸氧化细菌（Nitrite-oxidizing Bacteria，NOB）将亚硝酸盐转化为硝酸盐[4]。与自养型AOB 一样，自养型NOB具有生长速度慢、自然条件下数量低等特点，这一方面使NOB 的研究较为困难，另一方面也制约了其工业化生产和应用。因此，研究加快NOB 生长速度的培养方法显得尤为重要[5，6]。本研究以一株亚硝酸氧化细菌y3-2[7]为出发菌株，对其培养基和培养条件进行了优化，并采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time quantitative PCR detecting system，qPCR）计数的方法对其菌液浓度进行计数，以期获得能快速培养硝化杆菌y3-2的方法。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种试验用菌种硝化杆菌y3-2由农业微生物学国家重点实验室发酵工程分室分离纯化保藏，经16 S rDNA鉴定为硝化杆菌属（Nitrobacter）细菌。 1.1.2 优化前培养基及培养条件优化前初始培养基：MgSO4·7H2O 0.12 g/L、NaH2PO4·2H2O 1.16 g/L、K2HPO4·3H2O 0.33 g/L、MnSO4·H2O 0.007 6 g/L、（NH4）6Mo7O24·4H2O 50 μg/L、无水NaCO3 0.5 g/L、NaNO2 1.0 g/L、pH 7.5，121 ℃、30 min灭菌。优化前的培养条件为250 mL三角瓶加入50 mL培养基，200 r/min、30 ℃恒温培养。 1.1.3 试剂亚硝酸盐和硝酸盐定性检测试剂[8]：Griess试剂、盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液、二苯胺—硫酸试剂，细菌基因组DNA提取试剂盒和Real Master
硝化细菌的分离与鉴定 要筛选生长速度快、硝化作用强的硝化细菌用于水产养殖水处理。硝化细菌包括亚硝化 菌和硝化菌两个生理菌群，分别可将水中的氨态氮转化为亚硝酸盐和硝酸盐。实验结果 表明经5周培养，亚硝化菌可使培养液中的氨氮含量下降到60％，硝化菌可使培养液中的亚硝酸盐含量下降到 60％。实验可通过测定培养液中亚硝酸盐的含量变化来测定细菌的氨转化作用或硝化作用。 关键词：硝化菌，亚硝化菌，硝化作用，筛选。 氨氮和亚硝酸盐都是在水产养殖过程中产生的有毒物质，且亚硝酸盐还是强烈的治癌物质，因此如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点。 硝化细菌是一类具有硝化作用的化能自养菌，包括硝化菌和亚硝化菌两个生理菌群，其 主要特性是自养性，生长速率低，好氧性，依附性和产酸性等。可通过NH4+→ NO2- → NO3-这一过程将NH4+转化为NO3-。能有效降低水体中氨氮及亚硝酸氮的含量，对水产养殖业及环境保护具有重要意义。硝化细菌是生物硝化脱氨中起主要作用的微生物，直接 影响硝化效果和生物脱氨的效率。 研究表明，水体中硝化细菌的浓度对生物脱氨具有十分重要的意义，由于大多数硝化细 菌生长缓慢，硝化及脱氨效果欠佳，处理水产养殖污水的效果不是很好。因此筛选出生 长速率高硝化作用强度大的硝化细菌有很大的用途。 本文对硝化细菌的研究主要在富集培养和固定化细胞方面，能够有效提高硝化细菌的产 率和硝化细菌的利用率。通过富集培养的硝化细菌浓度是未经富集培养的12.5～20.0倍，利用细胞固定化技术可使氨氮去除率提高16.5个百分点。国外在硝化细菌的培养方面的研究已有一些专利技术，其中一些已形成工业化生产，但产品价格较昂贵，并且必须 不断向反应器中补充流失的硝化细菌。硝化作用包括两个步骤：氨转化为亚硝酸盐和亚 硝酸盐转化为硝酸盐，这两个步骤分别由亚硝化菌和硝化菌完成，至今还未发现有能将 氨直接转化为硝酸盐的细菌。 氨和亚硝酸分别是亚硝化菌和硝化菌的唯一能源。对于硝化细菌来说生长环境中的温度 对其影响较大，pH值和盐度的影响相对较小。大多数硝化细菌的合适生长温度为10～38
好氧反硝化细菌培养基配制以及实验方法 一、好氧反硝化培养基（液体）醋酸钠/ 0.5 g ; KNO3 / 0.1 g ; K2HPO4 / 0.01 g ;MgCl2/ 0. 02 g ;CaCl2/ 0. 01g ; H2O/ 1 000 ml ;p H 7～7. 5. 好氧反硝化培养基（固体）醋酸钠/ 0.5g ; KNO3/ 0.05g ; Na2HPO4 . 7H2O/ 0. 5 g ;NaNO2/0.01g;MgSO4·7H2O/ 0. 1 g ;琼脂18 g ;p H 7～7. 5. 富集分离：取样品泥样置于上述液体培养基中，经过每天24小时曝气富集10天。之后，取1毫升底泥与10毫升去离子水混合，之后进行107倍稀释，在上述固体培养基上进行平板划线分离。 细菌初筛：将分离得到的细菌接种到上述液体培养基中，然后在30摄氏度环境下进行24小时的摇瓶培养，用紫外分光光度法检测硝态氮含量，重复2次，取 降低最多的样品继续进行平板划线，再重复上述操作，得到单一菌落。（验证 所得菌落是否单一：将所得菌落接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，进行无菌培养，检测菌落是否单一。） 细菌复筛：将初筛得到的单一菌落，进行实际污水测试，测试其实际降解硝态 氮的能力。 二、BTB 初筛培养基：琼脂20 g、KNO3 1 g、 KH2PO41 g、FeCl2·6H2O 0.5 g、CaCl2·7H2O 0.2 g、 MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸钠8.5 g、溴百里酚蓝
(BTB)(1%乙醇溶液)1 mL，用1 mol/L 的NaOH 调节 pH 至7.0～7.3，121 ℃灭菌20 min LB 液体培养基(/L)：KNO3 1 g、KH2PO41 g、 FeCl2·6H2O 0.05 g、CaCl2·7H2O 0.02 g、MgSO4· 7H2O 1 g、琥珀酸钠8.5 g，121 ℃灭菌20 min DM 反硝化培养基(/L)：KNO3 0.72 g、KH2PO41 g、MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸钠2.8 g，121 ℃灭菌 20 min 采用梯度稀释法将污泥样品稀释至适当浓度，取0.1 mL 均匀涂布于BTB 培养基表面，置入恒温培养箱，30 ℃下培养2～3 d 后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株。接种初筛菌株至LB 培养基，在30 ℃、160 r/min 条件下进行液体培养24 h 后，以10%的接种量接种到反硝化培养基(DM 培养基)中，30 ℃、160 r/min 条件下进行摇瓶发酵，间隔一定时间取样。测定发酵液中硝基氮浓度(NO-3-N)和亚硝基氮浓度(NO-2-N)，通过分析其NO3--N 和TIN(NO--N+NO-2 -N)去除率，考察所筛菌株的反硝化性能。NO-3 -N：用紫外分光光度法测定；NO-2 -N：用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法测定[4]。菌体量：光密度法，用721 型分光光度计在600 nm 处测定吸光度值。 微量元素溶液:EDTA(乙二胺四乙酸) 50.0 g , ZnSO4 2.2 g , CaCl2 5.5 g , MnCl2·4H2O 5.06 g , FeSO4
如何快速培养硝化细菌的几种方法硝化细菌, 培养 快速培养硝化细菌的几种方法~ 水族箱过滤器只具备物理过滤和化学过滤的功能，而降解水中毒素的硝化细菌并未繁殖起来，需要在过滤系统开始运转后逐渐进行培养。若想尽快放入观赏鱼，就需要采取措施加快培养硝化细菌的进度。通常有以下几种快速培养硝化细菌的方法： (1)利用旧滤材或滤砂移植硝化细菌饲养过观赏鱼的旧水族箱中滤材或底砂上都附着大量的硝化细菌，若能将旧滤材或滤砂移入新设立的水族箱引入菌种，可大大促进硝化细菌繁殖的速度，至少节约一半的培养时间。 (2)利用污染源刺激硝化细菌的繁殖在引入菌种后，要配合过滤、充气促进水流循环，并在水族箱中放入4～5个新鲜的去壳蛤蜊或虾，利用肉质腐烂生成的毒素作为硝化细菌的营养，刺激菌种大量繁殖。还可以购买一些小型易养的实验鱼，放入几条，利用它们的排泄废物、食物碎屑提供有机物废料，促进硝化细菌的繁殖。 (3)添加人造硝化细菌目前市售的人造硝化细菌，有液态、粉末状、干燥孢子化等不同类型，可以满足观赏鱼爱好者迫切尽快饲养的要求。 ~ 培养生物过滤系统的要点．
在进行水族箱生物过滤系统培养时，要掌握以下几个要点： (1)不宜频繁换水大量的换水，容易破坏水族箱中硝化细菌的繁殖，使附着于底砂滤材中的硝化细菌随换水大量散失，同时水质的频繁改变也无法维持硝化细菌繁殖的适宜pH值，因此换水不必过勤，1～2个月换20％的水即可。 (2)正确清洗滤材经过长期饲养，过滤系统的滤材上会附着大量硝化细菌，但同时也会积累许多杂质污物，需定期清洗。清洗时，用原水族箱的海水将滤材轻轻挤压揉搓，千万不能用自来水冲洗或使用洗涤剂等化学物质。 (3)渐次追加观赏鱼刚设立的新缸要逐渐增加观赏鱼数量，不可一次放入过多，以免大量的残饵和排泄物产生的毒素超过硝化细菌氧化分解的能力，造成水质污染和观赏鱼死亡。 (4)慎用治疗药物观赏鱼生病需要治疗时，最好能隔离治疗。因为预防和治疗鱼病的消毒剂、抗生素等药物，不同程度地对硝化细菌的活力有所影响。即使在原缸中治疗，治疗完毕后，也要及时利用活性炭吸附残留药物或进行换水，以降低药物浓度，并重新添加人工硝化细菌，维持硝化细菌群落的稳定。 家庭如何培养硝化细菌~ 在新鱼缸中放入几只死虾，过几天再捞出，能够很快的培养出硝化细菌。这种方法就是使水质受到污染，水体中充满许多硝化细菌
揭开“硝化细菌”的真实面目 揭开“硝化细菌”的真实面目2016-07-11 Jesus_69 养鱼界一直流传着这样一句话，“养鱼先养水，好水养好鱼”，而 养水的关键就是培养稳定的硝化系统。那么硝化系统到底是什么？硝化细菌到底是什么？下面我们一起来揭开硝化细 菌神秘的面纱。硝化细菌（Nitrifying becteria）生态系统的生产者。它是化能生物，自养需氧型细菌，以二氧化碳为碳源，通过代谢将氨或铵化盐氧化成硝酸盐。简单的几句话，就足以说明硝化细菌的重要性。其实我们所说的硝化细菌包括两种不同的代谢群：亚硝酸菌属和硝酸菌属；这两类菌都是好氧自养菌，属于食物链的生产者。硝化细菌无处不在，空气中、水中、器材上都附着着硝化细菌，只是可能没有适宜的环境导致繁殖缓慢或者死亡，而适宜的环境包括很多，如充足的氧气，阴暗的环境，足够的养料（氨）等等因素。而我们选择合适的过滤设备，合适的过滤器材，要做的就是在同样的空间内，最大化的提供细菌附着的菌床，提供的适宜的环境以便硝化细菌大量的繁殖生长，只要做到以上几点，就可以说是一个好的过滤系统。第一代硝化细菌主要由硝化单细胞菌和硝化杆菌等自养菌组成，生长周期长，其平均繁殖周期在10个小时以上。其产品主要为液体，杂菌较多， 有恶臭味，其实我们经常买的液体硝化细菌很多都是这一阶
段的，俗称“臭水”，“黑水”。第二代硝化细菌实际上是由能降低水体中氨氮的光合细菌组成，因是自然水体的土著菌种，适应性强，其平均繁殖周期在3个小时以上。其产品主要为红色液体，杂菌较多，有腥臭味，这种暂时市面上没有见过。第三代硝化细菌是指由芽孢杆菌纯种发酵后的芽孢休眠体 组成的淡乳色液体，有一定的降低氨氮和净水的能力，芽孢的萌芽需要24小时以上，其平均繁殖周期跟大多数异养菌异养，在30分钟左右。产品为淡乳白色液体，无味或有淡腥味，杂菌很少，这种暂时市面上没有见过。第四代硝化细菌是指由芽孢杆菌和乳酸菌混合发酵后冷冻干燥的粉剂，俗称EM菌，白色的是精制品，菌含量较高，杂质少，而棕褐色为直接干燥的产物，含有培养基等杂志，菌含量相对降低。产品为粉剂、胶囊和片剂，杂菌较少，无味或淡腥味。EM 菌市面上很多很多，都是配合硝化细菌一起使用，其实他也是硝化细菌哦。第五代硝化细菌，也称产酶硝化细菌，是由产酶异养硝化菌、产酶芽孢杆菌、好氧反硝化菌、乳酸菌、放线菌等分别发酵，经微胶囊工艺进行包被后冷冻干燥的粉剂经科学配比而成的。其平均繁殖周期为25分钟左右，产品有白色粉剂、胶囊和片剂，无杂菌，无味。那么有人会问了，我有了合适的过滤设备、过滤器材，那么硝化系统是不是马上就可以建立好呢？那么我们继续深入解剖一下硝化 系统的建立以及稳定。硝化细菌存活的条件。之前也说过，
硝化细菌与反硝化细菌及其在水产养殖业的应用 硝化细菌与反硝化细菌及其在水产养殖业的应用 王玉堂全国水产技术推广总站 近年来，硝化细菌在水产养殖业上应用越来越引起人美注意，从而引发了较为广泛的研究。可以说，迄今为止，在大规模集约化养殖生产中，大都使用硝化细菌来净化水质。因为在集约化的水产养殖系统中，经过长期的大量积累，水生生物排泄物等有机污染物甚至动物的尸体较多，在异养性细菌的分解作用下，其中的蛋白质及核酸会慢慢分解，产生大量的氨氮等对水产养殖动物有毒有害物质。氨在亚硝化细菌或光合细菌作用下转化为亚硝酸盐，亚硝酸与一些金属离子结合形成亚硝酸盐；而亚硝酸盐有可和胺等物质结合，形成具有强烈致癌作用的亚硝酸胺。因此，亚硝酸盐常与氨氮相提并论。由于亚硝酸盐长期蓄积，致使养殖水生动物中毒，导致鱼、虾等抗病能力下降而受到各种病原体的侵袭。但亚硝酸盐在硝化细菌的作用下，可转化为硝酸厚，很容易形成硝酸盐，从而成为可以被植物吸收利用的营养物质。 目前市售的一些据称有硝化作用的异养菌或真菌，虽然也能将氨氮氧化成硝酸盐，但通常只能利用无机碳源，其对氨的氧化作用也有十分微弱，反应速率远比自养性硝化细菌慢，不能被视为真正的硝化细菌。硝化作用必须有全自养性硝化细菌来完成。 养殖池塘中的氨氮原本很适合于硝化细菌的生长，但因养殖池中存在大量的异养菌，受异养菌的排斥作用影响，适合硝化细菌栖息的地方相对于自然环境而言显然少得多，因此，没有足够数量的硝化细菌来消费过来的亚硝酸盐，就是问题所在。 一、硝化细菌及其生物学 1、硝化细菌 硝化细菌是指利用氨或亚硝酸盐作为主要生存能源，以及利用二氧化碳作为主要碳源的一类细菌。硝化细菌是古老的细菌群之一，其分布广泛，土壤、海水、淡水及污水处理系统中都有存在，但在一般环境少有出现，因为其分布会受到很多环境因素的限制，入氨源、温度、氧气浓度、渗透压、酸碱度和盐度等 硝化细菌分为硝化细菌和亚硝化细菌。亚硝化细菌的主要功能是将氨氮转化为亚硝酸盐；而硝化细菌则主要功能是将亚硝酸盐转化为硝酸盐。氨氮和亚硝酸盐都是水产养殖系统中产生的有毒物质，且亚硝酸盐还是强致癌物质。因此，如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点。由于亚硝化细菌的生长速度较快，且光合细菌也具有降解氨氮的作用，因此，现代水产养殖已能成功的将氨氮控制在较低水平上。而对于亚硝酸盐，由于自然界中的硝化细菌生长较慢，且还没有发现其他可替代的任何微生物，所以养殖过程中产生的亚硝酸盐就成为阻碍养殖业发展的关键因素。科学人员经过长期的努力，目前已能通过大量的实验筛选，最终研究出一种新型的纯硝化细菌——硝化宝，他能有效地将亚硝酸盐降低至规定的浓度范围。 2、硝化细菌制剂的生物学特性 生物的生长和繁殖除需要可用于构建自身细胞成分的基本物质外，也需获得能量。硝化细菌是一种化能自养菌，是利用无机物质获得能量的。硝化细菌利用亚硝态氮获得合成反应所需的化学能量，在体内制造糖类；而制造糖类所需的时间相当得长，不像其他异养性细菌从有机物中直接分解及摄取所需要的糖类，因此，硝化细菌的生长和繁殖速度远比一般异养性细
鱼缸硝化细菌的培养（转） 2012/04/03 9:02 一个新的鱼缸就象一个新装修完的房子，里面的有害物质是多多的，我们装修完房子后，都回开窗放2个月等气味散掉再搬进去住，大家都是生命，不要对小鱼们那么无人性好不好，所以新缸的第一个步骤当然就是“养缸”。对我没有说错，不是养水，是养缸，当然我们是要放水去养咯，把缸好好的洗几遍，然后放满一缸水，再狠狠的洒他几包盐下去呀，不要问我洒多少，只要你还舍得，只要还会溶解，继续洒吧，浓盐水会把病菌，异味，还有表面一层不稳定的玻璃胶全部清掉，就这样一缸盐水静静的养一个礼拜以上，当然，如果你的心地很好，你养一个月，你以后的小鱼们会用健康来感谢你的。不经过养缸这个阶段，有时会在你放水下鱼后发现一缸水一直都是乳白色，怎么也清澈不了，不要奇怪，因为有别的细菌在抑制你的宝贝硝化，基本上，已经可以宣告你将养什么死什么！ 养缸结束了，把缸里养缸的水全部清掉。第2步，当然不是下鱼啦，我们接下来是要养水了，说白一点，2个目的，1是要让一缸水老化，2是要培养出硝化。这个时候要先设想好你未来鱼缸的样子，要不要底砂呢？要不要造景呢？还要不要种点草呢？如果你的答案是肯定的，那么，先把造景的硬件洗干净放下去，然后再放满一缸水，把泵开开，不要跟我说你不舍得开，不要跟我说你怕吵，那我还是劝你放弃养鱼了，要不，你养几条泥鳅看也不错哇。从这一刻开始，你的泵将不会停止了，除非换水，停电和它坏掉。硝化依赖你缸里的水流生存，当你的缸里形成了硝化群落，你把水流停止4小时，硝化就会开始死亡，12小时，硝化就大量死亡，24小时，恭喜你，你可以重新培养过硝化了，因为你的缸里已经没剩下什么了。放水开泵3天后，可以开始下几条孔雀或者斑马之类的，我们叫开缸鱼，虽然不是什么好鱼，不过我们也要讲道德，不要一放水就下鱼，让人家去喝新鲜氯水，不然鱼要是会说话，一定会问候你家人的，基本从下开缸鱼开始，我们就算是正式的培养硝化了，这些鱼不用喂，孔雀可以吃水中的浮游颗粒，而且它还会排便便，正好就是硝化初期的食物，这时候你的硝化太少哇，就那一点点便便已经忙死它们了，不需要添加什么瓶装硝化啊什么粉状硝化啊，那些不是好东西，经常有人问，买的硝化臭臭的，还有浑浊颗粒，正不正常啊，我可以很明确的告诉他，你上当了，你买的不是硝化，或者说是假硝化，真正好的硝化是清澈的，无味的，而且包装上肯定有写出厂日期的，超过半年就失效不可再用了。放了开缸鱼，接下来就慢慢养咯，一般养水时间应该在2个礼拜到1个月以上，期间不要开灯，只需要24小时开泵。 这里要理解一下养水的原理了，一般在养水的期间我们主要是要培养硝化菌，硝化分很多种，但它们都有共同的特性，好高氧，厌光。设缸初期，菌类未稳定，这时候下鱼，往往会造成水质越来越差，最后变一缸“牛奶”，非常适合喜欢牛奶的人观赏。所以养缸的时候我们的重点是为硝化服务不是为鱼，为硝化提供最好的环境和条件，这就是我们说的养鱼先养水（菌）。养水期间我们不能开灯，是要让硝化活跃起来，同时，因为这时候水质不稳，最容易生存的生物就是大名鼎鼎的藻，一旦藻在设缸初期爆发，就很容易令缸报废，因为以后你很难再把它清除干净了，开缸阶段是缸里的生物群落争抢地盘的阶段，如果被藻蔓延了，以后可能要用开水煮才能彻底清除了。这时候泵也不能停，要一刻不停的有大水流经过滤材，也是为了让硝化活跃和繁殖，不要说现在缸里什么都没有，
硝化细菌那些事儿（之一）——深入了解硝化细菌2012-11-11 07:48:24 来源：fish3000鱼民村评论：0点击：12372硝化细菌那些事儿（之一）——深入了解硝化细菌作者：鳄鱼先生（fish3000鱼民村）俗话说，养鱼先养水。到底什么是好水呢？随着近年水产养殖技术的发展研究，我们知道了，好水其实就是稳定平衡的微生物群落，它具... 作者：鳄鱼先生（fish3000鱼民村） 俗话说，“养鱼先养水”。到底什么是“好水”呢？随着近年水产养殖技术的发展研究，我们知道了，“好水”其实就是稳定平衡的微生物群落，它具有象大自然一样自我调节功能，可以及时地将水中的有害物质分解掉，让鱼儿健康地生长繁殖。而各种微生物中，作用最大也是最受关注的就是硝化细菌。 那么，硝化细菌到底是什么，有什么重要作用呢？在回答这个问题之前，必须先介绍一下“氮循环”的概念。 我们知道，氮（N）对生物来说是非常重要的化学元素，因为它可以形成生物必不可少的两种有机物：蛋白质和核酸。而自然界的氮主要以氮气（N2）的形式存在于空气中，大多数生物无法直接利用它，只有一些菌类，如蓝、绿藻类，能够吸收N2，合成氮基化合物。这个过程叫氮固定。藻类被其他生物吃掉，这些生物又再被生物链中更高级别的生物吃掉，最后氮化合物在整个生态系统中传播开来。当这些氮化合物被释放（生物死亡，或通过其脱落物、排泄物）时，它们被细菌分解，分解的主要产物是氨，氨易氧化，会被一些细菌氧化为亚硝酸盐，然后被另一些细菌氧化为硝酸盐。硝酸盐可以被植物吸收，再次进入到食物链中。氮变为有机物，并被分解，然后再次形成有机物的过程，就是氮循环。这样，一个完整的氮循环的模式就是： 生物（有机物）——>氨——>亚硝酸盐——>硝酸盐——>生物（有机物）
培养硝化细菌的方法 水族箱安置好后，人们将迫不急待地购鱼饲养，这是注定要失败的作法。因为水族箱内维持清洁，消除有害毒素的消化细菌，要在水族箱过滤器运转后才开始培养繁殖，需要较长的时间才能形成这种稳定平衡的的微生物，一般约需20天～30天，才能获得足够的硝化能力。不然，在硝化细菌培养不足时就养鱼，排泄物、饵渣等腐化分解产生的毒素弥漫于水中，鱼会中毒死亡。要想水族箱能早日放养鱼，就要加速培养硝化细菌。方法如下： 6 i9 |& i0 F/ w- O * @; ~1 r& f) ]2 u8 q2 b1、移置旧过滤砂培养硝化细菌- Q* E5 {2 A" ^. ~; {; K: B - x& D2 m% p+ m5 A 0 r* p; ?0 a+ o. o8 m/ G5 S 在饲养鱼的水族箱里，旧珊瑚砂中接有很多硝化细菌，将这种过滤砂移到新装置的水族箱里，也就是将旧过滤砂里的硝化细菌，移置到新水族箱里，增进新水族箱里硝化细菌 + R& M" j( D3 c6 D* E4 J的繁殖速度，移置的旧砂愈多繁殖愈快。移置旧砂(人们又称种砂)四天后，开始试放少量鱼。待一切正常后，增加入鱼量。 . M1 J/ c# P2 Z4 J& n2 C p & Y6 \1 M7 c. ~9 i2、硝化细菌催生法 : S2 i ^7 ?( X$ {4 H% M% \5 x2 i& h+ T, t t9 u4 S! A5 O( q+ n! `- {旧珊瑚砂移置后，硝化细菌并没有马上繁殖．应利用打气和过滤的引流带动整个水流循环。将新鲜虾肉(去壳)5个，鲜蛤蜊4个剥开外壳后投入水族箱里。四天后捞出丢掉，这时水因虾肉的腐化而呈白浊现象，充满毒素。这些毒素就是硝化细菌的营养，可以刺激硝化细菌繁殖。水里的毒素3日后被硝化细菌所消化，水会澄清，这时可放养少量的鱼，然后逐渐增加鱼数，如果没有移置旧珊瑚砂(种砂)．也可以采用此法，只是时间会稍长几天。. j1 Y6 X' U9 ^( | Q! d 4 O6 g/ U3 U8 s( J: A; O 3、添加活性人造硝化细菌6 P! J# {- c( J$ G: w. _+ i( U - k1 s% ~1 T. C& f/ F$ E- ?' Q* ^+ u 4 b) W' U: g8 z ~8 @; q6 u我们可以在新安置的水族箱里，加放人工培养的菌种如硝化细菌、活菌素等，以便在最短时间内是获得足够的硝化能力。: X1 Z1 J! A) j. C; \8 h 这些产品已商品化，有液状，有粉末状。最近还有将菌- ^& c- w5 O Q. F+ ^ { 种干燥孢子化，包括了菌种发育所需的营养元素．并添加了一些分解酵素以强化分解废物的功能，力求在最短时间内达到最好的效果。采用这些产品后，即放养鱼。 ' M8 \; X+ l( t9 f 4 ^) j$ y" H. F 5 O$ F 0 Q$ l: z$ u! {6 Y0 C' Y如果再能配合移置珊瑚砂和刺激繁殖的催生法，效果会更好。2 w4 D/ b; \- f1 q% a5 c3 n