如何快速培养硝化细菌的几种方法
硝化细菌,培养
快速培养硝化细菌的几种方法~
水族箱过滤器只具备物理过滤和化学过滤的功能，而降解水中毒素的硝化细菌并未繁殖起来，需要在过滤系统开始运转后逐渐进行培养。若想尽快放入观赏鱼，就需要采取措施加快培养硝化细菌的进度。
通常有以下几种快速培养硝化细菌的方法：
(1)利用旧滤材或滤砂移植硝化细菌饲养过观赏鱼的旧水族箱中滤材或底砂上都附着大量的硝化细菌，若能将旧滤材或滤砂移入新设立的水族箱引入菌种，可大大促进硝化细菌繁殖的速度，至少节约一半的培养时间。
(2)利用污染源刺激硝化细菌的繁殖在引入菌种后，要配合过滤、充气促进水流循环，并在水族箱中放入4～5个新鲜的去壳蛤蜊或虾，利用肉质腐烂生成的毒素作为硝化细菌的营养，刺激菌种大量繁殖。还可以购买一些小型易养的实验鱼，放入几条，利用它们的排泄废物、食物碎屑提供有机物废料，促进硝化细菌的繁殖。
(3)添加人造硝化细菌目前市售的人造硝化细菌，有液态、粉末状、干燥孢子化等不同类型，可以满足观赏鱼爱好者迫切尽快饲养的要求。
培养生物过滤系统的要点~
在进行水族箱生物过滤系统培养时，要掌握以下几个要点：(1)不宜频繁换水大量的换水，容易破坏水族箱中硝化细菌的繁殖，使附着于底砂滤材中的硝化细菌随换水大量散失，同时水质的频繁改变也无法维持硝化细菌繁殖的适宜pH值，因此换水不必过勤，1～2个月换20％的水即可。
(2)正确清洗滤材经过长期饲养，过滤系统的滤材上会附着大量硝化细菌，但同时也会积累许多杂质污物，需定期清洗。清洗时，用原水族箱的海水将滤材轻轻挤压揉搓，千万不能用自来水冲洗或使用洗涤剂等化学物质。
(3)渐次追加观赏鱼刚设立的新缸要逐渐增加观赏鱼数量，不可一次放入过多，以免大量的残饵和排泄物产生的毒素超过硝化细菌氧化分解的能力，造成水质污染和观赏鱼死亡。
(4)慎用治疗药物观赏鱼生病需要治疗时，最好能隔离治疗。
因为预防和治疗鱼病的消毒剂、抗生素等药物，不同程度地对硝化细菌的活力有所影响。即使在原缸中治疗，治疗完毕后，也要及时利用活性炭吸附残留药物或进行换水，以降低药物浓度，并重新添加人工硝化细菌，维持硝化细菌群落的稳定。
家庭如何培养硝化细菌~
在新鱼缸中放入几只死虾，过几天再捞出，能够很快的培养出硝化细菌。这种方法就是使水质受到污染，水体中充满许多硝化细菌的食物，使它快速生长繁殖。就是这样培养的，但要注意的是，放的虾仁不用取出，虾仁自己会被细菌费解掉的，等到水混之后，再放消化细菌，几天后你就会发现水变清澈，第一次不要等水太清澈，再放一次虾仁，又会出现虾仁被分解，水混，水清澈的过程，反复几次就好了，要提醒你的是，虾仁量要一次比一次的多，中途不要放活性炭和开蛋白器，最后一次的时候要把水养清澈后在放鱼并且放硝化细菌和开蛋白器2天～3天净化，中途你可以根据情况添加几次硝化细菌，如果你第一次进去量比较大，那你养水的时间养长，同时污染量也要重，最后就是在放虾仁的时候要把壳取掉，只有嫩肉硝化细菌才会分解的快，这样重复了4次，用时1个多月，最后一次放了一大堆虾仁，水变得象牛奶一样浑浊，但1天后就变清，2天后变清澈，这说明已经有大量细菌在工作，只要不超过这堆虾仁的十分之一的污染量就不会死鱼，所以第一次就可以进很多鱼来闯缸。
裸缸建立生态缸的简单步骤~
1、建缸初期有可能引入有机物过多引起初期氨及亚硝酸盐浓度过高，新手在无检测手段的情况下，容易导致闯缸鱼牺牲；
2、操作过程过于复杂，增加不可控因素，新手难以掌握，难以安全实现良好效果；
3、有些步骤可以省略，而且省略后并不影响最终效果。
以100升水的水族箱为例。
一、开缸前的准备：
设备：水族箱(废话)、外滤桶(其它能容纳玻璃环的过滤器也可以)、打氧泵(包括软管及沙头等)、底砂(可以取消)。
药剂：喜瑞去铵及亚硝酸离子液(简称硝化细菌，亚峰商城有售)。
闯缸鱼：廉价的健康的清洁工作鱼、饲料鱼等。
外滤桶的滤材设置(按水流方向)：
1、粗滤棉(两层)，主要作用是进行物理预过滤，如果包在外滤桶的进水口外，则更便于更换；
2、生化棉，主要作用是培养分解有机物的消化细菌，能提高水质澄清度；
3、玻璃环，一般情况下，玻璃环体积要占全缸水体积的3～5%，主要作用是培养硝化细菌，以保证水质无毒性；
4、粗滤棉(一层)，主要作用是物理过滤，打散、吸附细菌的代谢废物。
其它种类的过滤设备可参照上述外滤桶进行设置。
二、开缸过程：
第一天，安装设备——注水——铺砂(5cm左右厚度，或不铺砂)——运转设备——检查是否有漏水之处，以及设备安装是否有问题。
第二天，排水再重新注水(经过曝气处理后的自来水即可)——运转设备(过滤及打氧设备，从此不再关闭)————加入状态健康、体质健壮的闯缸鱼，按说明加入硝化细菌。(其后连续十天，按说明继续补充硝化细菌)
第七天左右，据了解一些高手开缸的经验，此时分解NH3/NH4的亚硝酸菌已经初步建立，但硝酸菌还未能跟上步伐，此时水体内NO2的含量会出现峰
值，闯缸鱼容易出现不适。如果此时闯缸鱼无任何异常，进食活跃，则可在第十天起逐日继续增加闯缸鱼的数量，并逐渐增加投喂量。
一个月后，生化系统就基本稳定下来了，可以考虑加入贵价主力鱼了。
三、日常维护：
定时换水(每周换三分之一到五分之一)，换水周期可逐渐加长，换水量可逐渐减少，以不出现褐藻为限。换入的水如果是自来水，要经过24小时的打气，以去除自来水中的余氯，减少对硝化系统及鱼的伤害。
定量定时喂食，不要让鱼吃得过饱，不要留残饵。
4、注意事项：
a、加入闯缸鱼后，如果出现异常，则尽快换水(部分换水)。
b、过滤及打氧设备尽量不要中断运转。
c、过滤桶中的玻璃环总体积要达到全缸水体积的3～5%；
d、水体含氧量与生物过滤效率相关，在不影响观赏的前提下，可增加打氧。
e、硝化细菌建议选择进口名牌的，国产杂牌的不如不用。(个人意见)
f、过滤系统的物理过滤及生物过滤，仅能保证水质的清澈及无毒性。
对于具体鱼种而言，水温、PH值、硬度都是影响的重要因素。建议参考具体资料，对此进行相应调整。
如果不买硝化细菌还有培养的方法~~~
既然硝化菌那么重要，那该如何培养呢？其实，最简单的方法就是使用他人用过的过滤棉，将其在自己的缸中搓洗，藉著搓洗的动作好让硝化菌顺利附著在新的缸中，或者也可以向他人购买已经使用一阵子的陶瓷环、生化球，摆在自己的过滤槽中。但是如果没有朋友有养鱼，建议可以购买市售的硝化菌液，不过市售的硝化菌液品质参差不齐，有部分信誉良好的公司会贩售真的处於休眠状态的硝化菌，而部分公司则是贩售硝化菌的”营养液”，让您缸中的硝
化菌得以快速的生长，不过这种”营养液”对於新设立的缸是没有多大用处的，购买时请千万注意，建议可以购买知名厂牌的硝化菌，可能较有保障。
硝化菌的培养并非一蹴而就，最需要的是时间的等待，让其顺利在您缸中慢慢建立，并且稳定下来。所以在其建立之前，任何过量的鱼只排泄物或是残饵，都一样会因为硝化菌数量不足，无法完全分解而残害缸中的生物。一般建议，设缸前的八周内不要放鱼，时间过后，可试著放入一条小鱼，或是一个蛤让其在缸中生长，不过此段时间喂食也尽量少，如果此时有水质测试剂可以测试最好，看亚硝酸盐是否为零，如果为零则表示硝化菌已经将具有毒性的亚硝酸盐给分解了。
若是没有测试剂则可以静观其生长，如生长相当顺利，则慢慢的可以添加鱼只进去，逐步培养健全的硝化菌；但是如果蛤或小鱼死亡请不要放鱼，这代表缸中的硝化系统尚未建立完全，连蛤或小鱼的排泄物都无法分解，更不用说是其他大量的观赏鱼了。蛤、小鱼死亡后也不用将其捞出，任其腐烂藉以继续培养硝化菌。此时的硝化菌在缸中，因为有足够的氧气以及废物供其分解，理论上会成长到一定的数量，这需要视您提供的滤材表面积的大小来决定，如果您能提供相当大面积的滤材让硝化菌附著，则应该可以培养相对多数的硝化菌来为您工作。养鱼如果能以足够的大面积来培养硝化菌，理论上所能负载的废物处理量也会更多，也就是过滤面积越大的缸子，理论上能在同一空间里饲养较多的鱼，或者能够使缸中的水质状况更稳定。
关于硝化细菌的培养一些问题~
关于我们鱼缸中的氮循环，主要的过程是鱼只代谢产物形成氨（NH3）和铵基（NH4/NH3-N），由亚硝化细菌分解为亚硝酸（NO2），再由消化细菌分解为硝酸盐（NO3），最后通过水草吸附或者换水完成氮的释放或者NO3的稀释，而以上的处理过程在我们之前的帖子中有过详细的阐述，这里就不多说了。在人体中，大量亚硝酸盐可使人直接中毒，而且硝酸盐在人体内也可被还原为亚硝酸盐。亚硝酸盐与人体血液作用，形成高铁血红蛋白，从而使血液失去携氧功能，使人缺氧中毒。由此推断亚硝酸对鱼体的危害也与人类似。所以我们在亚硝酸含量高的鱼缸中有时会发生鱼体呼吸急促，以及鱼鳔功能失调或者鱼体表面粘膜增多的情况发生。
而我们一般会把过滤大分为两块，一块是物理过滤，一块是生物过滤，顾名思义，物理过滤当然就是指对于固态的可见杂物的过滤，而生物过滤是指通过生化菌群的降解作用，把水中不可见的或者及其细微的杂质以及元素进行分解。这两部分虽然在设计上是独立甚至是分开的，但其实是密不可分的，物理过滤中也有生物过滤，生物过滤中也存在物理过滤。
有时候底滤中真正起作用的只是几块棉：
如果有人问我过滤做多大，当然是越大越好！这一方面是基于人的懒惰心理，否则要说很多很多，一方面说，龙都养了，那几百的滤材就不要太计较了。这句话严格的讲肯定没错的，过滤越大，保险系数越高，也许你的过滤可以养10倍的鱼了。但其实并没有人真正测过缸中硝化细菌的含量具体多少，因为不可测，所以大家对于过滤全是感性认识。因而造成很多单养的鱼缸，做成底滤的话，决大部分都是过剩的，在某些极端的情况，甚至后端的那些陶瓷环都没有起到任何作用。
首先我们要认识到一个问题，硝化细菌的繁殖是靠食物支持的，也就是说，养的鱼越多，代谢废物越多，硝化菌越多，反之就越少。
一般在过滤前端，尤其是过滤棉的部分，虽然大家认为是物理过滤，其实那里才是生化作用最旺盛的地方，那里富含食物，氧气充足，硝化细菌活动旺盛，而到了过滤棉的后面，以及陶瓷环的部分，生化作用反倒减弱了，甚至没有了，尤其对于单养龙的人来说更是如此。所以危言耸听的一句话：也许你花费几千元建造的底滤，真正起作用的只是那价值几元钱的过滤棉（这对混养鱼众多的情况以及老缸的情况除外，因为鱼多和老缸有大量的排泄废物和积累废物，硝化细菌的生长应当可以扩展到陶瓷环部分）。
以下两个现象就是上面说的问题：
现象一：庞大的底滤，陶瓷环没洗，只洗过滤棉，水混了。
解答：这说明缸里的硝化细菌集中在棉上。几种情况，一种因为是新缸，菌群没有建立好，只有表面或者滤棉表面有少量硝化菌，洗棉当然破坏了还在完善中的菌群；二是因为本身养的鱼很少，只有很少的排泄，只能供养少量硝化菌，这些菌，基本的集中生活在最前面几层滤棉上，陶瓷环上基本没有硝化
菌寄生，整个缸体的生化作用几乎完全在前面的过滤棉上完成，于是，洗棉与清洗整个过滤无异。
现象二：两个外桶，只要洗其中某一个（固定的）就混水，洗了其它的桶水还是好好的。
那个只要洗了水就混的桶具有旺盛的硝化菌群，而其它的桶反而是弱势的，这是长期水质生化作用平衡的结果，所以，如果你发现这个规律，那么那个桶不到必须，尽量少洗。
加了硝化细菌，水真的清了：
有些人养鱼，会不停的添加硝化细菌，而市面上很多液态硝化细菌，实际上并没有细菌，只有硝化细菌的食物，也就是我们要处理的废物，当这些废物添加到缸里后，由于食物的旺盛，造成硝化细菌的大量繁殖，硝化过程显著，这时，也许陶瓷环上开始有硝化细菌了。
当把你添加的这些硝化细菌食物（硝化细菌溶液）分解完之后，饥饿的硝化细菌当然对缸里原本鱼生成的亚硝酸也不会放过，这个时候，菌群的数量是极大的大于食物的数量，很快，在争抢食物，生化过程旺盛的短时间内，缸清了。但是当食物消耗殆尽的时候，菌群的数量就会下降了，如果在溶氧不是很好的缸里，水就又开始混浊了。再加硝化细菌，又开始一个上面的过程。加硝化细菌的时候其实就象缸中又多养了好几只鱼一样，于是大家会不停的添加硝化菌，不停的维持着过剩的硝化菌，使自己的缸变清。
该打气的时候还是要打：
打气可以使水变清，为什么，简单的说，就是溶氧量的提高，使得硝化细菌的工作完善，在以上硝化细菌的降解过程大家可以看到，从NH3到NO2到NO3是需要不停的结合氧分子的，如果水中的溶氧不够，虽然含氮废物（硝化细菌的食物）存在，仍然无法保证为好氧的硝化细菌提供足够的氧气进行工作，于是，水还是清不了，打气后水很快就清了。而且打气的行为，可以使鱼在缸体亚硝酸含量高，鱼体携氧能力下降时不至于缺氧。
分析建缸时培养硝化细菌系统（养水）过程~
关于生态养水的文章很多，本文就不重复硝化机制和养水的方法。这里借用国外网站的一个图和数据，来分析建缸时硝化系统的“反应”过程，以便为新手在建缸时有数据可以借鉴，并从中了解到建缸的整个“反应”过程，使新手有一个理性认识，即便碰到问题不至于惊慌失措。例如，当缸水出现浊水，且鱼表现异常状态时，也就不会那么紧张。又比如，有时在建缸期间看到水一下变清，还误以为硝化系统已经完成，而不再换水，疏忽了有害物质的毒性并造成水质下降。
新手可以根据第二篇鱼的表现来判断有害物质的毒性，从而换水或加强过滤或加盐来缓和毒性
第一篇：建立硝化过程（养水）的过程
[红色]代表---氨的浓度
[绿色]代表---亚硝酸盐的浓度
[蓝色]代表---硝酸盐的浓度横作标为养水的天数
黄色区域：毒性(Toxic Levels)
之前之后好多的反应，本文不多讲，主要反应过程是这几项：
亚硝酸菌、硝酸菌、废物---->氨----->亚硝酸盐---->硝酸盐---->水草
鱼排泄物经由异营性细菌分解成氨。氨一形成，亚硝酸菌开始成长。一开始，亚硝酸菌繁殖的速度比氨的形成速度慢，氨升高。到了第八天，氨达到最高浓度。
接下来，由于亚硝酸菌消费氨的速度超过氨的形成速度，氨的浓度逐渐下降，第十四天，氨被逐级减为0，亚硝酸盐经由硝酸菌分解成硝酸盐。亚硝酸盐一形成，硝酸菌开始成长。
一开始，硝酸菌繁殖的速度比亚硝酸盐的形成速度慢，亚硝酸盐升高。到了第十七天，亚硝酸盐达到最高浓度。由于硝酸菌消费亚硝酸盐的速度超过亚硝酸盐的形成速度，亚硝酸盐的浓度逐渐下降，第三十天，亚硝酸盐被逐级减为0。
第三十天，硝化系统的的建立完成了。而硝酸盐从第十七天一直增加，靠换水或水草来消费。
提示：
1.对于氨的毒性，在图上的第一个黄色区域，很容易判断(鼻子不塞就行了)，知道要换部分水。
2.对于亚硝酸盐的毒性，在图上的第二个黄色区域，光看水的颜色和闻水，是不能断定的。要看鱼的表现和鱼鳍鱼尾。鱼有紧迫感，抵抗力稍差，除非浓度过高，才会有表象。所以，当水没有完全养好前，到了这个阶段，记得不能偷懒。尤其第十七天，毒性最强而人们容易疏忽。
3.对于这个图，我们依据走势来换水，可以避免这些有害物质的毒性。
4.如果是绿水的话，是另一回事。
声明：
1.这是在无鱼的情况下，最基本的条件作的数据整理。不适用老滤绵或其他方法。
2.图只是一个参考，科学分析只是一个工具，解决具体的问题靠自己。多上网学习，多请教行内的高手。
第二篇：毒性范围和鱼的表象
氨的含量应为0ppm。
毒性表现：灼伤，黑斑，鳍裂，没有方向地来回走，转小圈，躺在缸底。以下给出几组参考数据：
当pH=7.0时，氨浓度不能超过4ppm；
当pH=7.2时，氨浓度不能超过3ppm；
当pH=7.4时，氨浓度不能超过2ppm；
当pH=7.6时，氨浓度不能超过1ppm；
当pH=7.8时，氨浓度不能超过.75ppm；
当pH=8.0时，氨浓度不能超过.5ppm
通过以上几组数据可以看出，当pH增加，氨毒性的容忍范围减低。
下面给出几组数据用以说明当氨浓度对鱼的影响（仅供参考）：当氨浓度为0 PPM时，鱼鳍舒展，健康，表现正常；
当氨浓度为.5-1 PPM时，鱼表现紧迫感，缩鳍，快速呼吸；当氨浓度为2-3 PPM时，鱼表现紧迫感，缩鳍，快速呼吸，可能细菌感染，甚至死亡率开始增加；
当氨浓度为4-5PPM时，死亡率达到50%；
当氨浓度为6-7 PPM时，死亡率急剧增加。亚硝酸盐的含量应为0ppm。其实，亚硝酸盐比氨还毒，只需含量为. 3 to 5 mg就可以杀死鱼。
毒性表现：缺氧，快速鳃呼吸，游在上层，鳃是褐色而不是草莓红。
硝酸盐：0-40ppm(理想)硝酸盐一般没有毒性，也有容忍的范围。
以金鱼为例：小金鱼最好不超过80-100PPM，安全范围40PPM以下，大金鱼和锦鲤可忍到很大的浓度120PPM。超过这些值，会有紧迫感(stress)，懒散，鱼鳍上红斑或看到红血管。
毒性表现：尾巴上看到红血管，免疫力下降，可以造成鱼体翻转。
要知道，硝化细菌的作用绝对不是单纯的净水！
它是一个水族生态的关键要素！
通常，在刚建立的新缸中并不存在这些有益的细菌。当你把买来的硝化菌倒如水中的时候，细菌开始在里面繁殖，这是一种有益菌，通过它建立一种生物过滤系统，以自然分解水中的底质和有害物质。
当然这需要一段的时间，让这些细菌繁殖，直到它足以处理鱼儿的排泄物。而这些细菌的繁殖速度，草缸要比裸缸相对快得多！裸缸必须有良好的物理过滤，然后通过硝化细菌在滤材中的繁殖，再起到生物过滤的效果！一旦生物过滤建立好了，才真正开始了你的氮循环！
这样一个氮循环的过程有时需要几周，甚至更长的时间，读者可能有这样一种相同的经历：
第一天，放入闯缸鱼，此时氨和亚硝酸盐浓度为0，水是非常清澈的，象水晶般。
第3天，水开始发白，氨的浓度马上升到一个危险水平，硝化细菌开始繁殖生长，鱼只开始窘迫，拒食。
第5天氨的浓度达到高峰，硝化细菌开始把氨转换为亚硝酸盐，鱼出现明显不适，有些鱼可能在这一时间死去。
第8天，氨被转换为了亚硝酸盐，亚硝酸盐浓度上升，鱼的状态开始好转。
第14天，亚硝酸盐的浓度又开始上升到高峰，鱼再次陷入窘境，某些强壮的鱼，可以挺过这一时期！
第20天左右，亚硝酸盐开始下降，氮循环第2阶段开始，鱼只状态好转，水质也开始稳定。第25天亚硝酸盐被转换成硝酸盐。亚硝酸盐的浓度迅速降低。
到第30天，氨和亚硝酸盐已经检测不出，水族箱完成了氮循环，你可以换掉一部分水，然后放入你想要的鱼了！
硝化作用：在“老”水族箱中有上兆的细菌生存着，不同的细菌有着不同的工作和任务，它们会经过许多道程序的氧化作用，将有机营养盐分解或转化成水、二氧化碳以及各种无机盐类。蛋白质会被分解成为胺基酸而转化成无机盐的氨。鱼类会排泄出氨和尿液，而水质中的酵素会将它们分解成铵盐和二氧化碳。部份硝化细菌能借助溶解于水中的氧气将氨转化为亚硝酸盐，这些亚硝酸
盐又被分解为无毒的硝酸盐，这整个过程：阿摩尼亚→亚硝酸盐→硝酸盐→称为“硝化作用”。
硝化细菌的特性：大多数细菌进行细胞分裂生殖约需要20分钟时间，而氧化氨的硝化细菌进行分裂却需要2-3个小时，有的甚至需要20-30小时。因此，当其他种类细菌在大量繁衍时。硝化细菌繁殖的速度会明显地落后，结果造成水质中非氮的有机物质会很快地分解掉，而氮化合物以及氨却分解缓慢。这也是造成一般水族爱好者认为水中的氮化合物是最难分解的物质的原因。如图表，明白地标出硝化细菌的繁殖速度和所需要的时间：刚开始硝化细菌数为1000，至结束时硝化细菌数量已经增加了100000倍，达到了十亿，其繁殖速率是每天增加一倍。或许有爱好者会认为不太客观，但事实就是如此，不过得有一个先决条件，就是水中必须要有充足的养份可以供细菌应用。
一定要耐心等待1-3个星期当新建立的水族箱一切都设置完成时，一般水族爱好者很少有耐性干等1-3个星期，因为水族箱看来一切都很正常：水草茂盛地生长、水质清澈透明，看起来似乎和那些建立已久的“老”水族箱一样，于是就直接将鱼类放养进去，并定时喂食。但经过长久的辛劳经营，鱼类仍然或多或少地生病、感染、死亡……奇怪！为什么会这样呢？仔细推究原因，可以得知：因为在这个新的水族箱环境中根本没有硝化细菌来分解毒素。细菌繁殖的能量来自其他生物的排泄物或尸体，尤其是植物。所以，如果水中没有密植水草，那些细菌，尤其是硝化细菌根本无法在空荡荡的水族箱底部繁衍，以此环境来养鱼，可以说是“间接谋杀”！
硝化细菌制剂的使用知识~
硝化细菌制剂是一种用于控制养殖池水自生氨浓度的处理剂，不仅使用相当方便，而且能发挥立竿见影的效果，故越来越受渔友的欢迎。使用时可直接将该剂散布于池中，不久即能发挥除铵的功效。市售硝化细菌制剂可分为活菌及休眠菌两种，渔友可依自己的需要选购使用。前者是利用细菌的活体制成，在显微镜的观察下，可看到它们的活动情形。后者是利用休眠菌制成，在显微镜的观察中，则无法看到它们具有活动能力。选择活菌的好处是除铵效果迅速，最适用于氨浓度过高的紧急情况。但是因活菌对氧气的要求十分严格，尤其是硝酸菌属的细菌只能在有充份氧气存在下才能生存，正因为如此，要将活
菌保存并制成产品，常有保存上的困难，所以在购买这类产品时，要特别注意它的有效使用期限，如果使用过期产品，就除铵的观点而言，也是没有什么效率的。选择休眠菌的优点是能耐久藏，较不用担心失效的问题，但是因为由休眠菌变成活菌所需的活化时间可能需要数天之久，所以无法使用于紧急状况之处理，仅适用于日常的水质管理。一般言之，休眠菌的保存期限约为1 ~ 2年，使用时仍需注意商品所标明的使用期限，以免过期失效。另外，此种产品仅亚硝酸菌属之细菌能被制成制剂，故使用后可能会有多余的中间物NO2-滞留累积于水中，使亚硝酸的浓度有暂时性突然提高的现象，惟对水质不会有明显之影响。
如何正确使用生化球培养硝化细菌~
生化培养球又称为生化过滤球，它是一种藉由生物化学的方法来除掉氨的一种特殊滤材，不过它并不是依靠滤材本身的作用将氨除去，而是藉由生活于滤材表面的硝化细菌来将氨给氧化掉，使之转化为无毒性的硝酸，以减少有毒物质的堆积，为养殖生物创造一个优良的生长环境。生化培养球具有广大的表面积，且交错网孔构造可在表面达到完全通气效果，更由于生化培养球若彼此互相接获连接在一起，可在过滤系统中形成一个巨大的活动空间让硝化细菌居住及生活，并有利于硝化细菌大量的繁衍。这种产品在使用时，最好与机械式过滤系统结合成一体，不宜单独使用，即可在机械式过滤系统的滤程后面，加设一个「生化培养球箱」，内置生化培养球，仅让滤水由上自动滴流而下，然后再经由滴流过程中的硝化作用，来达到最完美的生物自净作用。如果将生化培养球单独使用，可能无法达到预期的效果，因为若直接把池水引入「生化培养球箱」，水中难免会夹带不少有机废物，由于它们不受硝化细菌所欢迎，若让这些有机废物附着于生化培养球上，则硝化细菌就很难在其表面着床生长。因此应将池水中的有机杂质先行滤除之后，再将滤水引入箱中，才是正确的使用方法。
如何培养硝化细菌提高细菌数量~
在养殖池中存在的有毒物质主要是氨及亚硝酸，这两种有毒的物质可由硝化细菌所消耗，并生成无毒性的硝酸，硝酸又是藻类的最佳氮肥，能被藻类所吸收及同化。因此，在养殖池中绝对不可缺少硝化细菌，如果硝化细菌缺乏，
水中的氨含量将急速增加，使池水内的鱼虾有致死的危险。许多人通常不了解这个问题的重要性，以致于常遭遇到养殖失败的命运。这说明如果您不去了解这个问题的症结所在，并谋求改善的话，既使是有经验的业者，都可能会败在硝化细菌不足的危害之下。从池水的生态观点来说，我们是无法防止氨的产生的，但是却可以设法提高硝化细菌的数量来消耗池水中大量的氨。因为硝化细菌是消耗氨的克星，只要这类细菌的数量足够，它们就会很自然地消耗掉每天自产的氨，使氨不会在水中被大量的累积下来，成为水产养殖的隐形杀手。
至于我们应如何做才能提高硝化细菌的数量呢？从理论的角度而论，为硝化细菌塑造一个理想的繁殖场所是最根本的解决办法。怎么说呢？原来硝化细菌在繁衍过程中，有附着于固定物外表的倾向，若能在池水中安置若干多表面积的固定物供其附着，它就能迅速地附着在这些固定物的表面上，并开始增殖。然而，要在池水中安置固定物通常是不可行的，理由是这种方式可能会阻碍鱼类的活动及不利于捞补。比较可行的处理方式是在过滤系统中安置「生化培养球」，这种产品是专门为硝化细菌提供一个繁衍场所而设计的，它通常是由黑色的塑料骨架所制成，大小约为3 ~ 5公分直径的空心球体，并有很大的表面积可供硝化细菌附着。它的原理是让硝化细菌成为「有壳蜗牛」，增加硝化细菌的生活空间，因此可让硝化细菌依附在这种人造的球体上进行硝化活动，使滤水中的氨及亚硝酸被硝化细菌所消耗。添加硝化细菌制剂也是另一种可行的方法，尤其是在做水质检测发现水中氨浓度偏高时，采用这种方法最有效率。但这种方法只是治标方法，不是治本方法，因为这些制剂在水中被活化成为活菌之后，它们仍然多属「无壳蜗牛」，在池水中无法增殖，甚至因环境不适而逐渐死亡，故必须定期添加才能发挥预期效果。
硝化细菌在制革废水氨氮处理中的应用 1 前言 制革废水是一种COD 和氨氮(NH 3-N)质量浓度均较高的废水，目前对其处理多采用废水好氧生化处理技术即活性污泥工艺。由于该废水水质变化较大，硝化反应很容易受到冲击负荷的影响，反应条件受到破坏，导致出水NH 3-N 质量浓度不能够达标。 制革企业是以各种动物皮为原料，添加多种化学品并经过设备处理制得成品皮革的。处理过程产生的氨氮污染主要来自来自皮革本身由有机氮转化而来的氨氮以及加工过程中加入的大量的各种铵盐。制革原料中的动物皮带有许多氨氮，在处理时进入到废水中。原皮中部分动物蛋白质也会在加工过程中分离出来，其在废水中的不断分解会产生较多的氨氨。由于技术、经济的因素，许多制革企业仍使用大量的铵盐。废水中含氨氮的工序有浸水、脱毛、浸灰、脱灰、软化、浸酸、鞣制和中和染色等工序。其中在脱灰软化中使用硫酸铵、氯化铵等；在中和、染色工序还使用碳酸氢铵和液氨；浸酸和鞣制工序废水中的氨氮则来自皮革中铵盐残余物的不断向水中释放。 针对制革废水中的氨氮问题，本试验研究选取污水厂的脱水污泥进行硝化细菌菌种培养，向池中投加实验室自行培养的硝化细菌菌种，然后将培养后的硝化污泥注入SBR 反应池中，以期在较短时间内降解氨氮，探索一种制革废水硝化污泥的培养方法。 2 材料与方法 2.1 试验菌种 试验所用菌种由实验室自行培养，为液体状菌种。 2.2 试验源水与水质 污泥培养阶段所用污水为该厂经生物接触氧化处理后的出水。试验期间，其主要水质指标：COD146-307mg/L ，平均201mg/L ；BOD 558-110mg/L ，平均76mg/L ；氨氮146-205mg/L ，平均184mg/L ；水温20℃-29℃，pH7.14-7.82，平均7.69。 2.3 制革厂污水处理工艺及试验装置 制革厂现有污水处理工艺流程如图1所示。 污泥培养阶段所用污水为经生物接触氧化处理后的出水。试验期间，其主要水质指标：
如何快速培养硝化细菌的几种方法 硝化细菌,培养 快速培养硝化细菌的几种方法~ 水族箱过滤器只具备物理过滤和化学过滤的功能，而降解水中毒素的硝化细菌并未繁殖起来，需要在过滤系统开始运转后逐渐进行培养。若想尽快放入观赏鱼，就需要采取措施加快培养硝化细菌的进度。 通常有以下几种快速培养硝化细菌的方法： (1) 利用旧滤材或滤砂移植硝化细菌饲养过观赏鱼的旧水族箱中滤材或底砂上都附着大量的硝化细菌，若能将旧滤材或滤砂移入新设立的水族箱引入菌种，可大大促进硝化细菌繁殖的速度，至少节约一半的培养时间。 (2) 利用污染源刺激硝化细菌的繁殖在引入菌种后，要配合过滤、充气促进水流循环，并在水族箱中放入4～5 个新鲜的去壳蛤蜊或虾，利用肉质腐烂生成的毒素作为硝化细菌的营养，刺激菌种大量繁殖。还可以购买一些小型易养的实验鱼，放入几条，利用它们的排泄废物、食物碎屑提供有机物废料，促进硝化细菌的繁殖。 (3) 添加人造硝化细菌目前市售的人造硝化细菌，有液态、粉末状、干燥孢子化等不同类型，可以满足观赏鱼爱好者迫切尽快饲养的要求。 培养生物过滤系统的要点~ 在进行水族箱生物过滤系统培养时，要掌握以下几个要点：(1)不宜频繁换水大量的换水，容易破坏水族箱中硝化细菌的繁殖，使附着于底砂滤材中的硝化细菌随换水大量散失，同时水质的频繁改变也无法维持硝化细菌繁殖的适宜pH值，因此换水不必过勤，1～2 个月换20％的水即可。 (2)正确清洗滤材经过长期饲养，过滤系统的滤材上会附着大量硝化细菌，但同时也会积累许多杂质污物，需定期清洗。清洗时，用原水族箱的海水将滤材轻轻挤压揉搓，千万不能用自来水冲洗或使用洗涤剂等化学物质。 (3)渐次追加观赏鱼刚设立的新缸要逐渐增加观赏鱼数量，不可一次放入过多，以免大量的残饵和排泄物产生的毒素超过硝化细菌氧化分解的能力，造成水质污染和观赏鱼死亡。
硝化菌的培养方法 硝化反应影响因素： 1、温度在生物硝化系统中，硝化细菌对温度的变化非常敏感，在5～35℃的范围内，硝化菌能进行正常的生理代谢活动。当废水温度低于15℃时，硝化速率会明显下降，当温度低于10℃时已启动的硝化系统可以勉强维持，硝化速率只有30℃时的硝化硝化速率的25%[1]。尽管温度的升高，生物活性增大，硝化速率也升高，但温度过高将使硝化菌大量死亡，实际运行中要求硝化反应温度低于３８℃[2]。 2、pH值硝化菌对pH值变化非常敏感，最佳pH值是8.0～8.4，在这一最佳pH值条件下，硝化速度，硝化菌最大的比值速度可达最大值。Anthonison认为pH对硝化反应的影响只是表观现象，实际起作用是两个平衡H++NH3 = NH4+和H++NO2-= HNO2中的NH3（FA）和HNO2（FNA），pH通过这两个平衡影响FA和FNA的浓度起作用的。 3、溶解氧氧是硝化反应过程中的电子受体，反应器内溶解氧高低，必将影响硝化反应得进程。在活性污泥法系统中，大多数学者认为溶解氧应该控制在1.5～2.0mg/L内，低于0.5mg/L则硝化作用趋于停止。当前，有许多学者认为在低DO（1.5mg/L）下可出现SND现象。在DO＞2.0mg/L，溶解氧浓度对硝化过程影响可不予考虑。但DO浓度不宜太高，因为溶解氧过高能够导致有机物分解过快，从而使微生物缺乏营养，活性污泥易于老化，结构松散。此外溶解氧过高，过量能耗，在经济上也是不适宜的。 4、生物固体平均停留时间（污泥龄）为了使硝化菌群能够在连续流反应器系统存活，微生物在反应器内的停留时间（θc）N必须大于自养型硝化菌最小的世代时间（θc）minN，否则硝化菌的流失率将大于净增率，将使硝化菌从系统中流失殆尽。一般对（θc）N的取值，至少应为硝化菌最小世代时间的2倍以上，即安全系数应大于2。 5、重金属及有毒物质除了重金属外，对硝化反应产生抑制作用的物质
材料与方法 样品 检测用试剂 1、Griess 试剂 溶液I称取磺胺酸0.5g，溶于150mL醋酸溶液(30％)中，保存于棕色瓶中。 溶液II称取α-萘胺0.5g，加入50mL蒸馏水中，煮沸后，缓缓加入30％醋酸溶液150mL，保存于棕色瓶中。 格里斯试剂检验亚硝化菌方法：用滴管吸取2滴细菌培养液置于白瓷板上， 依次滴加格里斯试剂Ⅰ、Ⅱ各2滴，出现红色反应说明培养液中含有亚硝酸，有 亚硝酸细菌存在。 2、二苯胺-硫酸试剂（检测菌液中是否存在硝酸盐证明硝化细菌是否存在） 称取二苯胺1g，溶于20mL蒸馏水中，然后徐徐加入浓硫酸lOOmL，保存于棕色瓶中。 由于亚硝基、硝基均能与二苯胺试剂起蓝色显色反应，所以在测定硝基前，必须去除培养液中的亚硝基。采用尿素+浓硫酸去除亚硝基是简单有效的方法，硝化菌检验具体操作步骤：取细菌培养液lml移入干净试管中，向试管中放半药勺的尿素混匀，然后再向试管中滴加10滴浓硫酸，此时可以看到试管中有大量气泡生成，反应很强烈，不断振动试管，使反应充分进行直至没有气泡产生。然后取试管中液体两滴，置于白瓷板上，用格里斯试剂检验是否变红，如果颜色没有变化，再滴加二苯胺试剂，如果变蓝，说明有硝基产生，有硝化菌存在。培养基 1、LB（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 酵母粉 5g 蛋白胨 10g NaCl 10g 蒸馏水 1000ml 灭菌前pH=7.3 2、KM（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 酵母浸提物 0.5g 蛋白胨 0.5g 牛肉膏 0.5g 蒸馏水 1000ml 灭菌前pH=7.3 3、PDA（检验硝化细菌的纯度不生长表纯） 马铃薯(除皮) 200g 蔗糖(或葡萄糖) 20g 水 1000mL 灭菌前pH自然 硝化细菌培养基
问题的提出 我国水体富营养化状况 我国是一个湖泊众多的国家，大于1 km2的天然湖泊就有2300多个，湖泊面积为70988 km2，约占全国陆地总面积的％。湖泊总蓄水量为7077多亿m3[1]。调查结果表明：2004年七大水系的412个水质监测断面中，I～III类、Ⅳ～Ⅴ类和劣Ⅴ类水质的断面比例分别为％、％和％，七大水系主要污染指标为氨氮、五日生化需氧量、高锰酸盐指数和石油类[3]。 2004年监测的27个重点湖库中，II类水质的湖库2个，III类水质的湖库5个，Ⅳ类水质的湖库4个，Ⅴ类水质湖库6个，劣Ⅴ类水质湖库10个。其中，“三湖”（分别为太湖、巢湖和滇池）水质因总氮和总磷浓度高而均为劣Ⅴ类。太湖水质与上年比有所改善，但仍处于中度富营养化状态。滇池的草海属于中度富营养化，外海属重度富营养化。巢湖水质属中度富营养化。对于海洋环境，2004年全海域共发现赤潮96次，较上年减少23次。赤潮累计发生面积266630平方公里，较上年增加％，其中，大面积赤潮集中在东海。 目前，水体的富营养化已经成为我国最为突出的环境问题之一。许多大型湖泊，如巢湖、太湖、鄱阳湖、滇池和西湖等，都已经处于富营养或重度富营养化状态。而且一些河流在部分河段也出现了富营养化现象，如黄浦江流域、珠江广州河段等。据统计，我国主要湖泊处于因氮、磷污染而导致富营养化的占统计湖泊的56％[4]。因此，如何治理富营养化的水体，减少其中的营养物质的含量，回复水体的综合功能，已成为当前全球性的环境问题的研究热点[5]。 富营养化水体的微生物治理 针对水体富营养化现象，其水质改善及对策包括三个大的方面：污染源控制对策、水体生态修复对策以及应急除藻对策[6-8]。水体富营养化的关键与核心是生物多样性的破坏，其典型表现就是富营养化水体发生藻类“水华”现象[9]。因此，从保护和恢复生物多样性入手，引入微生物、植物和动物，尤其是关键物种，重建食物链结构，是恢复水体正常的主要手段之一[10-12]。为此经常用到的技术措施包括：以藻控藻，投加细菌微生物[13]、放养鱼类[14]，恢复与构建水生植被[15,16]等。 利用微生物种群的新陈代谢活动对富营养化水体中的有机污染物、氨氮和有机氮等进行去除，尤其是氮污染物的去除，主要需要建立硝化－反硝化体系。而在自然界中，原本存在有专门从事硝化－反硝化过程中的微生物种群。但是由于某些微生物种群，如硝化细菌的代时较长，增殖速率非常低。同时，水体的人为活动的破坏。导致了富营养化水体中硝化－反硝化体系的弱化甚至缺失。故针对富营养化水体，可采用向水体中投加复合微生物菌群，从而增强水体的生物自净化能力，达到控制水体富营养化的目的，该技术被称之为“微生物强化技术”。该技术具有费用低、见效快、无污染和方便安全等特点。 复合微生物种群主要由光合细菌、硝化细菌等组成，再辅之以反硝化细菌。其中，光合细菌通过自身代谢与藻类竞争性争夺营养物质，并可降解、消除藻类代谢分泌于体外的多种物质，削弱藻类的竞争力。一般的光合细菌都有固氮能力，在厌氧光照条件下固氮能力最强。光合细菌与其他细菌的混合培养，能够提高其他细菌的固氮能力。另外，硝化细菌、反
硝化细菌的培养及作用 近年来，硝化细菌已逐渐成为水产养殖界的热门话题，它在水产养殖中的重要性开始引起广泛的注意。可以说，迄今为止，在大规模、集约化的水产养殖模式中，如果没有硝化细菌参与其中的净水作用，想获得成功的养殖，是相当困难的。鱼、虾等水产动物吃、喝、排泄、生活、休息都是在水体中进行的，那么，如何管理水体的水质以便适合它的生长、生存、健壮就成了重要的问题。尤其是现代集约化养殖长期累积了大量养殖生物排泄物，所有有机物的排泄物，甚至其尸体，在异养性细菌的作用下，其中的蛋白质及核酸会慢慢分解，产生大量氨等含氮有害物质。氨在亚硝化菌或光合细菌作用下转化成亚硝酸，亚硝酸与一些金属离子结合以后可以形成亚硝酸盐，而亚硝酸盐又可以和胺类物质结合，形成具有强烈致癌作用的亚硝胺。因此，亚硝酸盐常与恶名昭彰的氨相提并论，由于亚硝酸盐长期蓄积中毒，会使鱼、虾等抗病力降低，易招致各种病原菌的侵袭，故常被视为是鱼、虾的致病根源。然而，当亚硝酸在硝化菌的硝化作用下转变成硝酸后，很容易形成硝酸盐，从而成为可以被植物吸收利用的营养物质。所以说，硝化细菌与养殖环境的关系十分密切。 目前市面上宣称具有硝化作用的一些异养菌及真菌，虽然也能将氨氧化成硝酸盐，但通常只能利用有机碳源获取能量，不能利用无机碳源，其对氨的氧化作用十分微弱，反应速率远比自养性硝化细菌慢，不能被视为真正的硝化作用。 硝化作用必须依赖于自养性硝化细菌来完成。养殖池中有丰富的氮源，原本很适于硝化细菌生长，不过由于养殖池中存在大量的异养菌，受到异养性细菌的排斥作用，适合硝化细菌栖息的地方，相对自然环境显然少得多，因此无足够数量的自养性硝化细菌来消费过量的亚硝酸氮，这就是问题所在。 硝化细菌系指利用氨或亚硝酸盐作为主要生存能源，以及能利用二氧化碳作为主要碳源的一类细菌。硝化细菌是古老的细菌之一，其广泛分布于土壤、淡水、海水及污水处理系统中，却在自然界鲜少大量出现，原因在于硝化细菌的分布会受到许多环境因素的影响，如氮源、温度、氧气浓度、渗透压、酸碱度和盐度等等。 硝化细菌分为亚硝化菌与硝化菌，亚硝化菌的主要功能是将氨氮转化为亚硝酸盐；硝化菌的主要功能是将亚硝酸盐转化为硝酸盐。氨氮和亚硝酸盐都是在水产养殖过程中产生的有毒物质且亚硝酸盐还是强烈的治癌物质，因此如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点，由于亚硝化菌的生长速度比较快且光合细菌也具有降解氨氮的作用，因此现代养殖已能成功地将氨氮控制在较低的水平上。而对于亚硝酸盐，由于自然界中的硝化菌生长极慢且还没有发现有其它的任何微生物可代替硝化菌的功能，所以养殖过程中产生的亚硝酸盐就成为阻碍养殖发展的关键因素。在此当中，硝化细菌就起到了关键的作用。
1.1 问题的提出 1.1.1 我国水体富营养化状况 我国是一个湖泊众多的国家，大于1 km2的天然湖泊就有2300多个，湖泊面积为70988 km2，约占全国陆地总面积的0.8％。湖泊总蓄水量为7077多亿m3[1]。调查结果表明：2004年七大水系的412个水质监测断面中，I～III类、Ⅳ～Ⅴ类和劣Ⅴ类水质的断面比例分别为41.8％、30.3％和27.9％，七大水系主要污染指标为氨氮、五日生化需氧量、高锰酸盐指数和石油类[3]。 2004年监测的27个重点湖库中，II类水质的湖库2个，III类水质的湖库5个，Ⅳ类水质的湖库4个，Ⅴ类水质湖库6个，劣Ⅴ类水质湖库10个。其中，“三湖”（分别为太湖、巢湖和滇池）水质因总氮和总磷浓度高而均为劣Ⅴ类。太湖水质与上年比有所改善，但仍处于中度富营养化状态。滇池的草海属于中度富营养化，外海属重度富营养化。巢湖水质属中度富营养化。对于海洋环境，2004年全海域共发现赤潮96次，较上年减少23次。赤潮累计发生面积266630平方公里，较上年增加83.0％，其中，大面积赤潮集中在东海。 目前，水体的富营养化已经成为我国最为突出的环境问题之一。许多大型湖泊，如巢湖、太湖、鄱阳湖、滇池和西湖等，都已经处于富营养或重度富营养化状态。而且一些河流在部分河段也出现了富营养化现象，如黄浦江流域、珠江广州河段等。据统计，我国主要湖泊处于因氮、磷污染而导致富营养化的占统计湖泊的56％[4]。因此，如何治理富营养化的水体，减少其中的营养物质的含量，回复水体的综合功能，已成为当前全球性的环境问题的研究热点[5]。 1.1.2 富营养化水体的微生物治理 针对水体富营养化现象，其水质改善及对策包括三个大的方面：污染源控制对策、水体生态修复对策以及应急除藻对策[6-8]。水体富营养化的关键与核心是生物多样性的破坏，其典型表现就是富营养化水体发生藻类“水华”现象[9]。因此，从保护和恢复生物多样性入手，引入微生物、植物和动物，尤其是关键物种，重建食物链结构，是恢复水体正常的主要手段之一[10-12]。为此经常用到的技术措施包括：以藻控藻，投加细菌微生物[13]、放养鱼类[14]，恢复与构建水生植被[15,16]等。 利用微生物种群的新陈代谢活动对富营养化水体中的有机污染物、氨氮和有机氮等进行去除，尤其是氮污染物的去除，主要需要建立硝化－反硝化体系。而在自然界中，原本存在有专门从事硝化－反硝化过程中的微生物种群。但是由于某些微生物种群，如硝化细菌的代时较长，增殖速率非常低。同时，水体的人为活动的破坏。导致了富营养化水体中硝化－反硝化体系的弱化甚至缺失。故针对富营养化水体，可采用向水体中投加复合微生物菌群，从而增强水体的生物自净化能力，达到控制水体富营养化的目的，该技术被称之为“微生物强化技术”。该技术具有费用低、见效快、无污染和方便安全等特点。 复合微生物种群主要由光合细菌、硝化细菌等组成，再辅之以反硝化细菌。其中，光合细菌通过自身代谢与藻类竞争性争夺营养物质，并可降解、消除藻类代谢分泌于体外的多种物质，削弱藻类的竞争力。一般的光合细菌都有固氮能力，在厌氧光照条件下固氮能力最
一株自养硝化细菌培养条件的优化 摘要：针对前期筛选的自养硝化杆菌（Nitrobacter）菌株y3-2，以实时荧光定量核酸扩增检测系统（qPCR）测定的菌液终浓度为指标，设计单因素试验和正交试验对其培养基和培养条件进行优化。结果表明，优化的硝化杆菌y3-2的培养基中CaCO3、Na2CO3、NaNO2浓度分别为0.5、1.0、0.5 g/L。最佳培养条件为培养温度28 ℃、pH 8.0、摇床转速200 r/min。优化后硝化杆菌y3-2的发酵周期由优化前的7 d缩短至4 d，菌液终浓度达到4.31×109 CFU/mL。 关键词：硝化杆菌（Nitrobacter）；培养基；培养条件；优化 氮素是水体污染源的主要成分之一，水体的脱氮技术已经成为人们关注与研究的热点[1]。与传统的物理化学脱氮工艺相比，生物脱氮具有成本低、效率高、无二次污染等优势。现今采用最多的生物脱氮工艺为硝化—反硝化工艺，其中的硝化工艺由硝化细菌（Nitrifying bacteria）完成[2]。硝化细菌分为自养型硝化细菌和异养型硝化细菌2类，异养型硝化细菌仅占很少一部分，自养型硝化细菌是生物脱氮过程中起硝化作用的主要菌群，其硝化速率直接影响污水处理系统的硝化效果和生物脱氮效率[3]。硝化过程通常由氨氧化细菌（Ammonia-oxidizing Bacteria，AOB）先将氨氮转化为亚硝酸盐，然后由亚硝酸氧化细菌（Nitrite-oxidizing Bacteria，NOB）将亚硝酸盐转化为硝酸盐[4]。与自养型AOB 一样，自养型NOB具有生长速度慢、自然条件下数量低等特点，这一方面使NOB 的研究较为困难，另一方面也制约了其工业化生产和应用。因此，研究加快NOB 生长速度的培养方法显得尤为重要[5，6]。本研究以一株亚硝酸氧化细菌y3-2[7]为出发菌株，对其培养基和培养条件进行了优化，并采用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time quantitative PCR detecting system，qPCR）计数的方法对其菌液浓度进行计数，以期获得能快速培养硝化杆菌y3-2的方法。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌种试验用菌种硝化杆菌y3-2由农业微生物学国家重点实验室发酵工程分室分离纯化保藏，经16 S rDNA鉴定为硝化杆菌属（Nitrobacter）细菌。 1.1.2 优化前培养基及培养条件优化前初始培养基：MgSO4·7H2O 0.12 g/L、NaH2PO4·2H2O 1.16 g/L、K2HPO4·3H2O 0.33 g/L、MnSO4·H2O 0.007 6 g/L、（NH4）6Mo7O24·4H2O 50 μg/L、无水NaCO3 0.5 g/L、NaNO2 1.0 g/L、pH 7.5，121 ℃、30 min灭菌。优化前的培养条件为250 mL三角瓶加入50 mL培养基，200 r/min、30 ℃恒温培养。 1.1.3 试剂亚硝酸盐和硝酸盐定性检测试剂[8]：Griess试剂、盐酸溶液、氨基磺酸铵溶液、二苯胺—硫酸试剂，细菌基因组DNA提取试剂盒和Real Master
硝化细菌的分离与鉴定 要筛选生长速度快、硝化作用强的硝化细菌用于水产养殖水处理。硝化细菌包括亚硝化 菌和硝化菌两个生理菌群，分别可将水中的氨态氮转化为亚硝酸盐和硝酸盐。实验结果 表明经5周培养，亚硝化菌可使培养液中的氨氮含量下降到60％，硝化菌可使培养液中的亚硝酸盐含量下降到 60％。实验可通过测定培养液中亚硝酸盐的含量变化来测定细菌的氨转化作用或硝化作用。 关键词：硝化菌，亚硝化菌，硝化作用，筛选。 氨氮和亚硝酸盐都是在水产养殖过程中产生的有毒物质，且亚硝酸盐还是强烈的治癌物质，因此如何降解这两种物质，是科学工作者近年来的工作重点。 硝化细菌是一类具有硝化作用的化能自养菌，包括硝化菌和亚硝化菌两个生理菌群，其 主要特性是自养性，生长速率低，好氧性，依附性和产酸性等。可通过NH4+→ NO2- → NO3-这一过程将NH4+转化为NO3-。能有效降低水体中氨氮及亚硝酸氮的含量，对水产养殖业及环境保护具有重要意义。硝化细菌是生物硝化脱氨中起主要作用的微生物，直接 影响硝化效果和生物脱氨的效率。 研究表明，水体中硝化细菌的浓度对生物脱氨具有十分重要的意义，由于大多数硝化细 菌生长缓慢，硝化及脱氨效果欠佳，处理水产养殖污水的效果不是很好。因此筛选出生 长速率高硝化作用强度大的硝化细菌有很大的用途。 本文对硝化细菌的研究主要在富集培养和固定化细胞方面，能够有效提高硝化细菌的产 率和硝化细菌的利用率。通过富集培养的硝化细菌浓度是未经富集培养的12.5～20.0倍，利用细胞固定化技术可使氨氮去除率提高16.5个百分点。国外在硝化细菌的培养方面的研究已有一些专利技术，其中一些已形成工业化生产，但产品价格较昂贵，并且必须 不断向反应器中补充流失的硝化细菌。硝化作用包括两个步骤：氨转化为亚硝酸盐和亚 硝酸盐转化为硝酸盐，这两个步骤分别由亚硝化菌和硝化菌完成，至今还未发现有能将 氨直接转化为硝酸盐的细菌。 氨和亚硝酸分别是亚硝化菌和硝化菌的唯一能源。对于硝化细菌来说生长环境中的温度 对其影响较大，pH值和盐度的影响相对较小。大多数硝化细菌的合适生长温度为10～38
好氧反硝化细菌培养基配制以及实验方法 一、好氧反硝化培养基（液体）醋酸钠/ 0.5 g ; KNO3 / 0.1 g ; K2HPO4 / 0.01 g ;MgCl2/ 0. 02 g ;CaCl2/ 0. 01g ; H2O/ 1 000 ml ;p H 7～7. 5. 好氧反硝化培养基（固体）醋酸钠/ 0.5g ; KNO3/ 0.05g ; Na2HPO4 . 7H2O/ 0. 5 g ;NaNO2/0.01g;MgSO4·7H2O/ 0. 1 g ;琼脂18 g ;p H 7～7. 5. 富集分离：取样品泥样置于上述液体培养基中，经过每天24小时曝气富集10天。之后，取1毫升底泥与10毫升去离子水混合，之后进行107倍稀释，在上述固体培养基上进行平板划线分离。 细菌初筛：将分离得到的细菌接种到上述液体培养基中，然后在30摄氏度环境下进行24小时的摇瓶培养，用紫外分光光度法检测硝态氮含量，重复2次，取 降低最多的样品继续进行平板划线，再重复上述操作，得到单一菌落。（验证 所得菌落是否单一：将所得菌落接种在牛肉膏蛋白胨培养基上，进行无菌培养，检测菌落是否单一。） 细菌复筛：将初筛得到的单一菌落，进行实际污水测试，测试其实际降解硝态 氮的能力。 二、BTB 初筛培养基：琼脂20 g、KNO3 1 g、 KH2PO41 g、FeCl2·6H2O 0.5 g、CaCl2·7H2O 0.2 g、 MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸钠8.5 g、溴百里酚蓝
(BTB)(1%乙醇溶液)1 mL，用1 mol/L 的NaOH 调节 pH 至7.0～7.3，121 ℃灭菌20 min LB 液体培养基(/L)：KNO3 1 g、KH2PO41 g、 FeCl2·6H2O 0.05 g、CaCl2·7H2O 0.02 g、MgSO4· 7H2O 1 g、琥珀酸钠8.5 g，121 ℃灭菌20 min DM 反硝化培养基(/L)：KNO3 0.72 g、KH2PO41 g、MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸钠2.8 g，121 ℃灭菌 20 min 采用梯度稀释法将污泥样品稀释至适当浓度，取0.1 mL 均匀涂布于BTB 培养基表面，置入恒温培养箱，30 ℃下培养2～3 d 后，用接种环挑取使周围培养基出现蓝色晕圈的单菌落，进行分离纯化即为初筛菌株。接种初筛菌株至LB 培养基，在30 ℃、160 r/min 条件下进行液体培养24 h 后，以10%的接种量接种到反硝化培养基(DM 培养基)中，30 ℃、160 r/min 条件下进行摇瓶发酵，间隔一定时间取样。测定发酵液中硝基氮浓度(NO-3-N)和亚硝基氮浓度(NO-2-N)，通过分析其NO3--N 和TIN(NO--N+NO-2 -N)去除率，考察所筛菌株的反硝化性能。NO-3 -N：用紫外分光光度法测定；NO-2 -N：用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法测定[4]。菌体量：光密度法，用721 型分光光度计在600 nm 处测定吸光度值。 微量元素溶液:EDTA(乙二胺四乙酸) 50.0 g , ZnSO4 2.2 g , CaCl2 5.5 g , MnCl2·4H2O 5.06 g , FeSO4
如何快速培养硝化细菌的几种方法硝化细菌, 培养 快速培养硝化细菌的几种方法~ 水族箱过滤器只具备物理过滤和化学过滤的功能，而降解水中毒素的硝化细菌并未繁殖起来，需要在过滤系统开始运转后逐渐进行培养。若想尽快放入观赏鱼，就需要采取措施加快培养硝化细菌的进度。通常有以下几种快速培养硝化细菌的方法： (1)利用旧滤材或滤砂移植硝化细菌饲养过观赏鱼的旧水族箱中滤材或底砂上都附着大量的硝化细菌，若能将旧滤材或滤砂移入新设立的水族箱引入菌种，可大大促进硝化细菌繁殖的速度，至少节约一半的培养时间。 (2)利用污染源刺激硝化细菌的繁殖在引入菌种后，要配合过滤、充气促进水流循环，并在水族箱中放入4～5个新鲜的去壳蛤蜊或虾，利用肉质腐烂生成的毒素作为硝化细菌的营养，刺激菌种大量繁殖。还可以购买一些小型易养的实验鱼，放入几条，利用它们的排泄废物、食物碎屑提供有机物废料，促进硝化细菌的繁殖。 (3)添加人造硝化细菌目前市售的人造硝化细菌，有液态、粉末状、干燥孢子化等不同类型，可以满足观赏鱼爱好者迫切尽快饲养的要求。 ~ 培养生物过滤系统的要点．
在进行水族箱生物过滤系统培养时，要掌握以下几个要点： (1)不宜频繁换水大量的换水，容易破坏水族箱中硝化细菌的繁殖，使附着于底砂滤材中的硝化细菌随换水大量散失，同时水质的频繁改变也无法维持硝化细菌繁殖的适宜pH值，因此换水不必过勤，1～2个月换20％的水即可。 (2)正确清洗滤材经过长期饲养，过滤系统的滤材上会附着大量硝化细菌，但同时也会积累许多杂质污物，需定期清洗。清洗时，用原水族箱的海水将滤材轻轻挤压揉搓，千万不能用自来水冲洗或使用洗涤剂等化学物质。 (3)渐次追加观赏鱼刚设立的新缸要逐渐增加观赏鱼数量，不可一次放入过多，以免大量的残饵和排泄物产生的毒素超过硝化细菌氧化分解的能力，造成水质污染和观赏鱼死亡。 (4)慎用治疗药物观赏鱼生病需要治疗时，最好能隔离治疗。因为预防和治疗鱼病的消毒剂、抗生素等药物，不同程度地对硝化细菌的活力有所影响。即使在原缸中治疗，治疗完毕后，也要及时利用活性炭吸附残留药物或进行换水，以降低药物浓度，并重新添加人工硝化细菌，维持硝化细菌群落的稳定。 家庭如何培养硝化细菌~ 在新鱼缸中放入几只死虾，过几天再捞出，能够很快的培养出硝化细菌。这种方法就是使水质受到污染，水体中充满许多硝化细菌
揭开“硝化细菌”的真实面目 揭开“硝化细菌”的真实面目2016-07-11 Jesus_69 养鱼界一直流传着这样一句话，“养鱼先养水，好水养好鱼”，而 养水的关键就是培养稳定的硝化系统。那么硝化系统到底是什么？硝化细菌到底是什么？下面我们一起来揭开硝化细 菌神秘的面纱。硝化细菌（Nitrifying becteria）生态系统的生产者。它是化能生物，自养需氧型细菌，以二氧化碳为碳源，通过代谢将氨或铵化盐氧化成硝酸盐。简单的几句话，就足以说明硝化细菌的重要性。其实我们所说的硝化细菌包括两种不同的代谢群：亚硝酸菌属和硝酸菌属；这两类菌都是好氧自养菌，属于食物链的生产者。硝化细菌无处不在，空气中、水中、器材上都附着着硝化细菌，只是可能没有适宜的环境导致繁殖缓慢或者死亡，而适宜的环境包括很多，如充足的氧气，阴暗的环境，足够的养料（氨）等等因素。而我们选择合适的过滤设备，合适的过滤器材，要做的就是在同样的空间内，最大化的提供细菌附着的菌床，提供的适宜的环境以便硝化细菌大量的繁殖生长，只要做到以上几点，就可以说是一个好的过滤系统。第一代硝化细菌主要由硝化单细胞菌和硝化杆菌等自养菌组成，生长周期长，其平均繁殖周期在10个小时以上。其产品主要为液体，杂菌较多， 有恶臭味，其实我们经常买的液体硝化细菌很多都是这一阶
段的，俗称“臭水”，“黑水”。第二代硝化细菌实际上是由能降低水体中氨氮的光合细菌组成，因是自然水体的土著菌种，适应性强，其平均繁殖周期在3个小时以上。其产品主要为红色液体，杂菌较多，有腥臭味，这种暂时市面上没有见过。第三代硝化细菌是指由芽孢杆菌纯种发酵后的芽孢休眠体 组成的淡乳色液体，有一定的降低氨氮和净水的能力，芽孢的萌芽需要24小时以上，其平均繁殖周期跟大多数异养菌异养，在30分钟左右。产品为淡乳白色液体，无味或有淡腥味，杂菌很少，这种暂时市面上没有见过。第四代硝化细菌是指由芽孢杆菌和乳酸菌混合发酵后冷冻干燥的粉剂，俗称EM菌，白色的是精制品，菌含量较高，杂质少，而棕褐色为直接干燥的产物，含有培养基等杂志，菌含量相对降低。产品为粉剂、胶囊和片剂，杂菌较少，无味或淡腥味。EM 菌市面上很多很多，都是配合硝化细菌一起使用，其实他也是硝化细菌哦。第五代硝化细菌，也称产酶硝化细菌，是由产酶异养硝化菌、产酶芽孢杆菌、好氧反硝化菌、乳酸菌、放线菌等分别发酵，经微胶囊工艺进行包被后冷冻干燥的粉剂经科学配比而成的。其平均繁殖周期为25分钟左右，产品有白色粉剂、胶囊和片剂，无杂菌，无味。那么有人会问了，我有了合适的过滤设备、过滤器材，那么硝化系统是不是马上就可以建立好呢？那么我们继续深入解剖一下硝化 系统的建立以及稳定。硝化细菌存活的条件。之前也说过，
鱼缸硝化细菌的培养（转） 2012/04/03 9:02 一个新的鱼缸就象一个新装修完的房子，里面的有害物质是多多的，我们装修完房子后，都回开窗放2个月等气味散掉再搬进去住，大家都是生命，不要对小鱼们那么无人性好不好，所以新缸的第一个步骤当然就是“养缸”。对我没有说错，不是养水，是养缸，当然我们是要放水去养咯，把缸好好的洗几遍，然后放满一缸水，再狠狠的洒他几包盐下去呀，不要问我洒多少，只要你还舍得，只要还会溶解，继续洒吧，浓盐水会把病菌，异味，还有表面一层不稳定的玻璃胶全部清掉，就这样一缸盐水静静的养一个礼拜以上，当然，如果你的心地很好，你养一个月，你以后的小鱼们会用健康来感谢你的。不经过养缸这个阶段，有时会在你放水下鱼后发现一缸水一直都是乳白色，怎么也清澈不了，不要奇怪，因为有别的细菌在抑制你的宝贝硝化，基本上，已经可以宣告你将养什么死什么！ 养缸结束了，把缸里养缸的水全部清掉。第2步，当然不是下鱼啦，我们接下来是要养水了，说白一点，2个目的，1是要让一缸水老化，2是要培养出硝化。这个时候要先设想好你未来鱼缸的样子，要不要底砂呢？要不要造景呢？还要不要种点草呢？如果你的答案是肯定的，那么，先把造景的硬件洗干净放下去，然后再放满一缸水，把泵开开，不要跟我说你不舍得开，不要跟我说你怕吵，那我还是劝你放弃养鱼了，要不，你养几条泥鳅看也不错哇。从这一刻开始，你的泵将不会停止了，除非换水，停电和它坏掉。硝化依赖你缸里的水流生存，当你的缸里形成了硝化群落，你把水流停止4小时，硝化就会开始死亡，12小时，硝化就大量死亡，24小时，恭喜你，你可以重新培养过硝化了，因为你的缸里已经没剩下什么了。放水开泵3天后，可以开始下几条孔雀或者斑马之类的，我们叫开缸鱼，虽然不是什么好鱼，不过我们也要讲道德，不要一放水就下鱼，让人家去喝新鲜氯水，不然鱼要是会说话，一定会问候你家人的，基本从下开缸鱼开始，我们就算是正式的培养硝化了，这些鱼不用喂，孔雀可以吃水中的浮游颗粒，而且它还会排便便，正好就是硝化初期的食物，这时候你的硝化太少哇，就那一点点便便已经忙死它们了，不需要添加什么瓶装硝化啊什么粉状硝化啊，那些不是好东西，经常有人问，买的硝化臭臭的，还有浑浊颗粒，正不正常啊，我可以很明确的告诉他，你上当了，你买的不是硝化，或者说是假硝化，真正好的硝化是清澈的，无味的，而且包装上肯定有写出厂日期的，超过半年就失效不可再用了。放了开缸鱼，接下来就慢慢养咯，一般养水时间应该在2个礼拜到1个月以上，期间不要开灯，只需要24小时开泵。 这里要理解一下养水的原理了，一般在养水的期间我们主要是要培养硝化菌，硝化分很多种，但它们都有共同的特性，好高氧，厌光。设缸初期，菌类未稳定，这时候下鱼，往往会造成水质越来越差，最后变一缸“牛奶”，非常适合喜欢牛奶的人观赏。所以养缸的时候我们的重点是为硝化服务不是为鱼，为硝化提供最好的环境和条件，这就是我们说的养鱼先养水（菌）。养水期间我们不能开灯，是要让硝化活跃起来，同时，因为这时候水质不稳，最容易生存的生物就是大名鼎鼎的藻，一旦藻在设缸初期爆发，就很容易令缸报废，因为以后你很难再把它清除干净了，开缸阶段是缸里的生物群落争抢地盘的阶段，如果被藻蔓延了，以后可能要用开水煮才能彻底清除了。这时候泵也不能停，要一刻不停的有大水流经过滤材，也是为了让硝化活跃和繁殖，不要说现在缸里什么都没有，
培养硝化细菌的方法 水族箱安置好后，人们将迫不急待地购鱼饲养，这是注定要失败的作法。因为水族箱内维持清洁，消除有害毒素的消化细菌，要在水族箱过滤器运转后才开始培养繁殖，需要较长的时间才能形成这种稳定平衡的的微生物，一般约需20天～30天，才能获得足够的硝化能力。不然，在硝化细菌培养不足时就养鱼，排泄物、饵渣等腐化分解产生的毒素弥漫于水中，鱼会中毒死亡。要想水族箱能早日放养鱼，就要加速培养硝化细菌。方法如下： 6 i9 |& i0 F/ w- O * @; ~1 r& f) ]2 u8 q2 b1、移置旧过滤砂培养硝化细菌- Q* E5 {2 A" ^. ~; {; K: B - x& D2 m% p+ m5 A 0 r* p; ?0 a+ o. o8 m/ G5 S 在饲养鱼的水族箱里，旧珊瑚砂中接有很多硝化细菌，将这种过滤砂移到新装置的水族箱里，也就是将旧过滤砂里的硝化细菌，移置到新水族箱里，增进新水族箱里硝化细菌 + R& M" j( D3 c6 D* E4 J的繁殖速度，移置的旧砂愈多繁殖愈快。移置旧砂(人们又称种砂)四天后，开始试放少量鱼。待一切正常后，增加入鱼量。 . M1 J/ c# P2 Z4 J& n2 C p & Y6 \1 M7 c. ~9 i2、硝化细菌催生法 : S2 i ^7 ?( X$ {4 H% M% \5 x2 i& h+ T, t t9 u4 S! A5 O( q+ n! `- {旧珊瑚砂移置后，硝化细菌并没有马上繁殖．应利用打气和过滤的引流带动整个水流循环。将新鲜虾肉(去壳)5个，鲜蛤蜊4个剥开外壳后投入水族箱里。四天后捞出丢掉，这时水因虾肉的腐化而呈白浊现象，充满毒素。这些毒素就是硝化细菌的营养，可以刺激硝化细菌繁殖。水里的毒素3日后被硝化细菌所消化，水会澄清，这时可放养少量的鱼，然后逐渐增加鱼数，如果没有移置旧珊瑚砂(种砂)．也可以采用此法，只是时间会稍长几天。. j1 Y6 X' U9 ^( | Q! d 4 O6 g/ U3 U8 s( J: A; O 3、添加活性人造硝化细菌6 P! J# {- c( J$ G: w. _+ i( U - k1 s% ~1 T. C& f/ F$ E- ?' Q* ^+ u 4 b) W' U: g8 z ~8 @; q6 u我们可以在新安置的水族箱里，加放人工培养的菌种如硝化细菌、活菌素等，以便在最短时间内是获得足够的硝化能力。: X1 Z1 J! A) j. C; \8 h 这些产品已商品化，有液状，有粉末状。最近还有将菌- ^& c- w5 O Q. F+ ^ { 种干燥孢子化，包括了菌种发育所需的营养元素．并添加了一些分解酵素以强化分解废物的功能，力求在最短时间内达到最好的效果。采用这些产品后，即放养鱼。 ' M8 \; X+ l( t9 f 4 ^) j$ y" H. F 5 O$ F 0 Q$ l: z$ u! {6 Y0 C' Y如果再能配合移置珊瑚砂和刺激繁殖的催生法，效果会更好。2 w4 D/ b; \- f1 q% a5 c3 n
硝化细菌的正确使用与说明 不少鱼友对硝化细菌的认识产生了一定的误解，有的人认为硝化细菌能够分解粪便；有的认为可以净化水质，中和水中的悬浮物，这些认识是不准确的，或者可以说是错误的。那么下面我就谈谈我对硝化细菌的认识，有不正确的地方希望大家给我指正出来。 1、首先先说说分解有机物，这个粗重的体力劳动可不是娇贵的硝化细菌能完成的，他是靠其它净水细菌完成的。在水生态循环系统中，若无其它异营性细菌存在，水中将到处充斥未被细菌分解的有机物，此种自我污染的水族环境一样使鱼儿无法生存其中。因此，它们常被视为是水质自净作用的先锋部队，其重要性并不亚于硝化细菌。这类细菌普遍存在于各种不同环境，它们几乎无所不在，而繁殖速度相当惊人，大部份的异营性净水细菌，在理想的环境只需几十秒钟即可自行增殖一倍，一般只需二十几分钟即能增殖一倍。但要是裸缸饲养，我们就要借助物理循环，把水中的剩饵或粪便吸出。 2、关于净化水质，中和水中悬浮物的问题。鱼友中不少人去买硝化细菌，按照说明每星期按时添加，这样做对吗？回答是完全正确加100分。可我要告诉大家的是，你们的做法没错，可你们对硝化细菌的认识产生的错误。因为我们买的这种每星期添加的所谓的硝化细菌其实是光合细菌。 光合细菌，俗称：b菌。光合细菌是一种水中微生物，因具有光合色素，包括细菌叶绿素和类胡萝卜素等，而呈现淡粉红色，光合细菌能在厌氧和光照的条件下，利用化合物中的氢并进行不产生氧的光合作用。 光合细菌可以在某种污染环境下生存，并担负着重要的净化水质的角色。但只有在生存环境和污染物质符合其生理、生态特性时，才会发挥其作用，否则很难获得预期。例如在无光或者有氧环境下，光合细菌就很难发挥效果。 水族箱中若存在光合细菌，它将那些有机质或硫化氢等物质加以吸收利用，而使耗氧的异营性微生物因缺乏营养而转为弱势，因而降低发生有毒分解产物的机会，同时，底质中的水质借以得到净化，而促使养殖的水族生物的健康成长。 目前，水族市场出售的光合细菌，主要是光能异营型红螺菌科（rh odospirilaceae），特别是其中的红假单细胞属（rhodopseudomonas）的种类。这种光合细菌在不同的环境条件下，能以不同的代谢方式，有效地净化水质。需要注意：光合细菌在水质ph8.2-8.6的环境下发挥效果最佳，因而比较适合在海水水族箱中使用。所以这中光合细菌只能起到短暂的效果，因为我们鱼缸里没有他生活的理想环境。除非我们制作一个无氧过滤区还要有照明。 现在步入正题，谈谈大家即熟悉又陌生的硝化细菌 1、说到硝化细菌，我们又要老生常谈了，想要了解硝化细菌就要首先明白什么叫氮循环。 第一步： 鱼类的排泄物和未吃过的食物将会转变为氨（俗称阿摩尼亚）；那是因为在这些东西里需要氧的细菌会令蛋白质分裂。而氨是有毒的。 第二步：