菌体生长曲线绘制
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管接种于500mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震荡培养
3、每隔1h取样2mL，测定OD600，连续监测12h。（OD600数值需稀释至0.5-1区间范围
内进行读数）
4、以时间为横坐标，以诱导OD600值为纵坐标进行生长曲线绘制。得出菌体生长的最大
OD值，以及对数生长期的OD值及生长时间。
菌体诱导时间优化（3个重复）
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管菌（1:100）接种于50mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震
荡培养至对数生长期
3、加入终浓度为1mM的IPTG进行诱导，自诱导后每隔1h取样1mL，连续取样6h
4、分别取样进行SDS-PAGE验证。（100ul浓缩跑胶）
菌体诱导剂浓度优化（3个重复）
1、取菌种50ul接种于4mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震荡培养过夜
2、将过夜培养的试管菌（1:100）接种于50mL Amp LB培养基中，37℃摇床（220rpm）震
荡培养至对数生长期
3、加入终浓度0.1mM、0.5mM、1mM、1.5mM、2mM的IPTG进行诱导培养
4、分别取样进行SDS-PAGE验证。（100ul浓缩跑胶）
原核表达条件优化 影响E.coli中蛋白表达量的因素除载体启动子结构以外，还有质粒拷贝数、质粒稳定性、mRNA结构、密码子的偏爱性和宿主菌的生长状态等因素[58]。由于Vector NTI suitor7.0软件模拟表达，可知mRNA结构和密码子的偏爱性两个影响因素不会造成表达困难，所以本实验的工作主要针对载体拷贝数、载体稳定和宿主菌的生长状态。 本实验中重组表达质粒PrP-pET-32a（+）不稳定的原因可能是PrP对E.coli BL21（DE3）具有细胞毒性。pET-32a（+）来源于pBR-322，pBR-322源于ColE1。ColE1、pBR-322 、pET-32a（+）都失去了分配功能区par。而天然质粒具有功能区par，可以保证质粒在每次细胞周期中准确的进行分离，并均等的分配到子代细胞中去。功能区par对质粒PrP-pET-32a（+）的稳定性是不可缺少的[4]。缺少功能区par的pET-32a （+）质粒在每次细胞周期中随机分配到子代细胞中去，无细胞毒性时约98% E.coli BL21（DE3）会带有质粒（见《pET System Manual》34页）。表达有细胞毒性蛋白的E.coli BL21（DE3）不具有生长优势，而且随细菌培养时间的增加β-内酰氨酶将逐渐释放到溶液中去，破坏溶液中的AMP。【β-内酰氨酶功能强大，细菌培养稀释1000倍以后还能破坏几乎所有的AMP（见《pET System Manual》33页）】。这样本不具有生长优势的表达菌又失去了选择压力，造成大部分新生细菌无质粒，表现为表达困难。本实验证实约60%以上的细菌无质粒。 鉴于以上原因，本实验将融合蛋白Trx-PrP C27-30表达分成两个阶段，前一个阶段为质粒生长阶段，主要保证质粒的稳定性和提高质粒的拷贝数；后一个阶段为融合蛋白表达阶段，待细菌生长达饱和以后，诱导融合蛋白Trx-PrP C27-30的表达。 在温度、AMP浓度、培养基等诸多影响质粒PrP-pET-32a（+）稳定性的因素中，以温度影响最为明显。实验结果显示，37℃条件下约60%以上的细菌无质粒PrP-pET-32a（+），25℃条件下失去质粒PrP-pET-32a（+）的细菌在约10%以内。其他条件不变，AMP浓度在100 ug/ml以上细菌质粒PrP-pET-32a（+）基本稳定。随AMP浓度增加平板上的菌落逐渐变小，表明AMP可抑制细菌生长。不同培养基对
SEO关键词快速排名技巧有哪些 网址是一个公司的门户，也是业务流程转换的一个关键环节，因而提升百度关键词，提升自然排名是每一企业都迫不得已思索和剖析的。那麼，SEO关键字优化排名方法有什么？今日人们就来认识一下。 一、关键字务必考虑到互斥性 关键字的互斥性指的就是说：打比方两个商品设定的关键字她们中间没有关联，就是说相互挤兑的含意，也称为互斥性。举例一下，比如：一个商品企业网站要做两个商品关键字，一个做的是安防设备，另外做防水设备，那么，这两个关键字也不关联，并且有点儿对立面了，因为，安防设备关键是防火安全，而防水设备关键是防潮的。 二、关键字必然要对客户有奉献 关键字对客户有奉献指的就是说：打比方客户在搜索一个关键字的时候，这一关键字还不可以完全满足客户需求的要求，因为，客户搜索的这一关键字的时段，这一关键字还存有着某些潜在性的客户搜索要求没被发掘出来，举例子一下，比如：客户搜索SEO这一关键字，那么，SEO这一关键字它的包含经营规模是较为广的，因此，客户除开搜索SEO这一关键字以外，必然还先掌握和SEO有关的某些物品，打比方SEO专业技能、SEO实例教程、SEO社区论坛等。 三、关键字必然要高度重视公信力 高度重视关键字的公信力指的就是说：你的网址要营造一个自身特有的知名品牌关键字了，并且要不断对这一知名品牌关键字开展实行和营销推广，这也就是说各个领域的商品网址着力打造自身岗位品牌的缘故了。 我们的网址在做SEO提升的时段，打造出网址知名品牌关键字是尤为重要的，倘若你的网址没有与众不同的品牌关键字得话，那么，你网址我觉得和别的的网址同样，也就是说
没有最该客户高度重视或者吸引客户的产品卖点了，简单的说就是说没什么公信力了。因为，无论是网址或者商品的品牌关键字必须具备公信力，要是具有公信力了，一个是可以使客户对你网址产生信任感，另外就是说可以吸引客户点一下。 四、关键字必须要剖析市场竞争度 的剖析关键字的市场竞争度指的就是说：人们在挑选和设定关键字的那时候，必须要剖析自身的资源和提升整体实力，假如自身的资源不足并且提升整体实力较差得话，人们也不应当挑选和设定过多的热搜词，比如：如果你在2014年的那时候为了你的网址挑选并设定了3个指数值都会500左右的热搜词，那么，我也得考虑到等你了2015年的那时候，这种热搜词还会维持这一搜索量，也就是说有客户要求的。
【专题讨论】原核表达条件优化！ 之所以首先介绍Novagen公司的产品是因为用过它的pET系列载 体，感觉很好用。Novagen的母公司是德国默克（Merck）公司，它是国际著名的化学及制药公司总部位于德国的Darmstadt，已有300多年的历史。已在全世界55个主要国家设立了分公司，其中在28个国家建有62个生产基地。 Novagen公司出品的pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。pET系列载体是利用大肠杆菌T7噬菌体转录系统进行表达的载体，其表达原理见下图。 T7噬菌体具有一套专一性非常强的转录体系，利用这一体系中的元件为基础构建的表达系统称为T7表达系统。T7噬菌体基因编码的T7RNA聚合酶选择性的激活T7噬菌体启动子的转录。它是一种高活性的RNA 聚合酶，其合成mRNA的速度比大肠杆菌RNA聚合酶快5倍左右。并可以转录某些不能被大肠杆菌RNA聚合酶有效转录的序列。在细胞中存在T7 RNA聚合酶和T7噬菌体启动子的情形下，大肠杆菌宿主本身基因的转录竞争不过T7噬菌体转录体系，最终受T7噬菌体启动子控制的基因的转录能达到很高的水平。 T7噬菌体启动子的转录完全依赖于T7 RNA聚合酶，因此T7 RNA聚合酶的转录调控模式就决定了表达系统的调控方式。噬菌体DE3是λ噬菌体的衍生株，一段含有lacⅠ，lacUV5启动子和T7 RNA聚合酶基因的 DNA片段倍插入其int基因中，用噬菌体DE3的溶源菌，如BL21(DE3)、 HMS174(DE3)等作为表达载体的宿主菌，调控方式为化学信号诱导型，类似于Lac表达系统。 从开始涉及表达的时候可以根据是否要用基因本身的起始密码子进行选择，Novagen公司仅提供三个载体：pET-21(+)，pET-24(+)和 pET-23(+)。如果你打算利用载体的起始密码子，那么就有许多选择。 根据是否要可溶性表达，选择加有不同标记的载体。一般说来在大肠杆菌中不加标记外源蛋白都会以不溶的包涵体形式表达。为了让外源蛋白融合表达一般说来有三个策略： 1. 与一个高度可溶的多肽联合一起表达，比如：谷胱甘肽S转移酶 （glutathione S transferase, GST）、硫氧还蛋白 （thioredoxin, Trx）和N利用质A（N utilization substance
关键词教你如何优化，得到排名 有很多人说，关键词不在于多，加20来个就可以了。但是对于是新推广产品来说，建议大家尽量加满200个关键词。但这200个词要有比例计划性的添加，把真正有点击量的词放到计划账户里优化。尽量不要添加废词，那些展现量少几天没点击的词，直接删除换上新的关键词。不然这些词会拖累你直通车账户的整体质量得分，所以需要不断地优化关键词，不断筛选优化留下优质关键词。而后面在我们优化关键词期间，是不是会遇到以下这3大问题烦恼？ 1.点击率低。 2.价格过高。 3.质量得分。 4.找价值词。 针对这3大问题，下面给大家详细说说具体优化方向： 1.点击率 关系到一个率丶量的问题，切记不要只看一天的，一天的点击率并不能代表什么东西，我们需要最少一周时间的关键词的点击率来优化。 1）点击率低+相关性差：系统会判断相关性差，一般都是与产品不怎么匹配；加之点击率低，那不是客户希望搜索的产品。对于这类词，建议果断删除。 2）点击率低+质量得分一般：可以看下是精准关键词否，如果不是精准关键词，那么建议果断删除；如果是精准的目标关键词，点击率低可能会是在展现的同一页面你的宝贝和其他宝贝相比没有优势亮点而导致点击率低，所以可以留下观察，提高出价，养质量得分。 3）点击率低+质量得分低：这类词即使能养起来，付出的代价也是很大的，建议果断删除。 4）点击率高+展现少：这类词一般都是精准关键词，是买家想要的，那么提高出价，给它更多展现。 2.关键词价格 1）主关键词价格过高，可以选择以长尾精准关键词为主，竞争过高宽泛词为辅组合关键词。 2）出价过高+展现少。如果价格已经出到高于均价很多了，但是展现量还是很低，一是这个词本身就是搜索量很少的词，如果是很与宝贝很匹配的，把排名靠前，7天还没有点击，删除。二是这个词竞争很大，如果你的产品销量几百上千的已达到质变的话，可以去竞争这些高价关键词，你的宝贝排名靠前，匹配的关键词投资回报率也不会差。但是如果宝贝不优质的话，不建议做这个词。 3）出价高+点击多：如果投入产出比差的，建议可以降低出价争取精准位置不争
从查询结果中就不难看出“返利”这个关键词搜索量很大，而且其长尾词都是品牌返利网。“返利”这个关键词已经很难做上去了，直接来说凭个人网站几乎是不可能的了，从后面的长尾词可以看出都是返利网站的名称。那么通过像正常网站一样通过关键词获得流量变得很不切实际。笔者认为做好返利网站最根本的是获取流量和用户体验。那么具体通过哪些方式获取流量呢?笔者推荐使用以下几种推广方式： 良久没有写文章了，最近一段工夫很多人问我一个成绩“如何坚持关键字波动排名”，确实，这个是很多站流量波动的渠道之一，也是很多关键字自身就在搜索引擎首页的站长们最为关注的事情。我不是什么高手，工夫也无限，不能逐个作答，只能写篇关于本人做站时的阅历给分享给大家看看。 一.域名 针对一个最近衰亡的抢手关键字来讲假如有好点的老域名最好用上老域名，老域名的劣势就不必多说了。团体觉得域名跟关键字相关在谷歌排名还是有一定劣势的以上就是笔者对返利网站推广的一些看法和想法。比如做淘宝客的冤家应该晓得最近几个月衰亡的抢手关键字无非就是“高兴淘宝”“嗨淘网”这2个了。异样笔者的一个网友做了一个淘宝返利网，每个抢手关键字出来时我都会去做实验排名。高兴淘宝我就以https://www.doczj.com/doc/864979794.html,为域名，嗨淘网我就以https://www.doczj.com/doc/864979794.html,为域名，大家应该看的出来，都是跟关键字相关的。另外留意的一点就是假如你手上没有好点的老域名或许不情愿花钱买好点的老域名建议启用一个新的跟关键字相关的域名让用户更快、更方便的使用返利网站[img]http。我普通都是选择的后者，呵呵，至于为什么很复杂。由于你不能够看见今日减肥这个词火就把网址内容做成减肥的、今天看见手机火就改成手机站，这样搜索引擎一定是很恶感的QQ推广QQ群、QQ好友这些都可以让你瞬间获得不错的流量。 二.网站标题、描绘、关键字的写法 而且其长尾词都是品牌返利网这3个地方很关键笔者用站长工具查看了下“返利”关键词及长尾词，我们可以看看排名很好的网站的标题、描绘、关键字的写法就晓得了，很简洁且很有技巧。并不是说在这里呈现的关键字越多越好、标题越长越好，多的话会形成关键字堆砌对搜索引擎不敌对，刚开端没有写好标题而二次修正的话对百度很不敌对，我就吃过一次亏，呵呵。 三.网站首页内容 网站首页内容一定要与你网站标题相吻合。方才说了关键字在标题、描绘、关键字那里不能反复太多但是笔者没有这方面的经验，那我们就可以在网站首页内容反复关键字，只需坚持次要关键字密度在2%-8%之间就最好了。大家可以去看看我的站的写法。再者要想坚持首页快照更新的频率的话那么首页一定要加上一个更新带动器一般都会去点击，也就是一个文章调用栏//www，可以天天更新内容引荐到首页其实都是老生常谈的内容，那么首页就每天都在变化了。比如说刚刚过了“白se--情人节”。 四.网站推行
关键词的优化方案 1、确定关键词：股票入门、炒股技巧、炒股技巧大全、怎么炒股、 炒股方法、股票入门一点通。学习股票入门知识、 最新添加：炒股入门知识、炒股入门与技巧、股票入门基础知识、股票入门知识、股票入门教程，什么是股票、如何炒股、怎么样炒股、涨停板战法、涨停板什么意思、涨停股票能买吗、短线交易秘诀、短线操作技巧、短线炒股技巧、除权除息是什么意思、除权是什么意思、什么叫除权、新股如何申购、 选定关键词在百度收录的相关网页数： 选定关键词在百度自然排名的主要竞争网站： 2、内部优化具体分配：
1 、确定四处一次的分配，title、keywords和description、权重标签里，（例如加粗，）、其他文件的锚文本里；【技术人员】 2、网站的整体构架，（加载速度及网站的整体结构和用户体验度）【技术人员】 3、JS、CSS、图片的优化【技术人员】 4、增加相关栏目，提高百度对网站的整体收录数量【技术人员】 5、站内链接的优化（当出现类似于炒股入门的关键词连接到网站首页）【技术人员】 6、保证网站的更新频率【文章更新负责人】 3、外部优化建议： 1、外链的建设：在一些站外的博客论坛上，发表软文最好是原创，或是伪原创，软文中出现关键词时，应加超链接指向网站首页，软文中最好不要出现网址，同一篇软文发布的网站尽量不要超过3个博客或者论坛。外部链接的文字，以选定的关键字为主，同时也要尽量多样化。应保持每天外部软文发布30篇，20篇软文被百度收录。【负责微博、博客、论坛、百度文库、知道、问答的相关人员】 具体实施方法： 每天发的软文，坚持原创和伪原创，软文中一定要有我们优化的关键词及我们网站的链接！每天至少更新30篇，保证有20篇被收录的！可利用博客搬家工具进行发软文！省时省力！为了让我们收录的更多更快坚持原创
原核表达系统是目前使用最广泛、最完善的重组蛋白表达系统，具有遗传背景清晰、表达周期快、表达量高、成本低等优势，缺点是无法进行蛋白的翻译后修饰，得到具有生物活性蛋白的几率较小。原核表达系统适用于表达原核来源的蛋白或不需要翻译后修饰的真核来源蛋白。 在原核蛋白表达过程中，需要综合考虑表达菌株、质粒载体、表达条件三大因素，以获得最满意的表达效果。下面为大家一一介绍这三大因素的选择和优化。 1. 表达菌株 菌株的选择往往是大家最容易忽视的，大多数人会选择使用自己实验室有的或用过的表达菌株。当蛋白表达效果不佳时，大多会在质粒载体或表达条件上找原因，而不会考虑菌株的选择是否合适。但作为表达宿主，菌株一定会对外源基因表达蛋白产生影响。 图1 大肠杆菌 原核表达系统常用的菌株包括大肠杆菌、芽孢杆菌和链霉菌。其中运用最为广泛的就是大肠杆菌表达系统。以下为大家列出了一些常用的大肠杆菌表达菌株，可根据不同的需求进行选择。
2. 质粒载体 质粒表达载体上的重要元件包括启动子，多克隆位点，终止子，复制子，信号肽，融合标签，筛选标记等。根据载体上这些元件的特性，有多种质粒可供选择。
图2 大肠杆菌表达质粒pET-22b(+)图谱 启动子：根据启动子的强弱考虑，强启动子可以提高蛋白表达量；弱启动子可以降低本底表达、增加可溶表达、表达小量伴侣蛋白等。根据启动子的作用方式考虑，组成型启动子使宿主不停的表达重组蛋白；诱导型启动子使宿主在特定诱导条件下表达重组蛋白。 终止子：终止子的作用在于保护mRNA在核外不被降解，延长mRNA的寿命，以提高重组蛋白表达量。对于T7系统来说，由于T7 RNA聚合酶效率非常高，保证一直有充足的mRNA提供翻译，所以终止子对其影响不大，只有一些自身带有起始密码子的外源基因需要终止子。 复制子：复制子决定质粒载体拷贝数，拷贝数越高，重组蛋白表达量就越高。表达载体通常会选用高拷贝的复制子，但过高的拷贝数会影响质粒稳定性和宿主生长。常用的高拷贝复制子包括pCoE1，pMBI(pUC)等。 融合标签：融合标签是与目的蛋白共同表达的一段多肽。较小的融合标签（如His-tag）一般不影响重组蛋白的结构和功能；较大的融合标签（如GST）可以帮助蛋白表达和折叠，提高蛋白溶解度。N端标签自身带有启动子和宿主偏好密码子，可以提高蛋白表达量，但提前中止的蛋白片段也会一并被纯化；C端标签则可保证只有完整的蛋白得到纯化。标签位置
百度排名优化效果好不好，优化排名的技巧是非常重要的，掌握好的百度优化技巧，优化可以起到事半功倍的作用。 1、网站不可频繁改动或调整 网站在搭建完成之后，就不可对网站频繁地进行改动或是调整，特别是在网站被搜索引擎收录了之后，如果再对网站进行改动的话，尤其是改动网站的首页标题优化关键词，这样就会直接导致网站降权，因此，关键词的百度排名也会跟着下降的。所以，我们网站在建站初期就应该要一次性搞定。 2、网站不能进行关键词堆积 网站设置的优化关键词一定要自然，不能为了优化关键词的排名而进行堆积关键词，这种方法在以前的搜索引擎算法是能起到一定的效果的，但是，在现在的搜索引擎新算法里，这是一种SEO作弊的行为，也就是我们常说的优化过度了，因此，就会导致网站百度关键词排名下降了。 3、网站多更新高质量原创文章 网站一定要多更新高质量的原创文章了，这点在上面的内容也有提及到，因为，网站高质量的原创内容是可以直接影响关键词的优化排名情况的，这里给大家补充说明一点，就是网站在更新高质量原创文章的同时，一定还得注意文章的更新规律，一定要保证定时定量地更新了。 你每天都在上午11点更新3篇文章，就一定要以这个规律来更新，而不能今天更新了文章之后，过了好几天都不更新，等到自己心血来潮的时候在一下子更新10几篇文章，这样做是不行的。 4、网站保证定时做好安全体检 网站一定要保证定时做好安全体检，这样才能保证网站的安全性，以免被黑
客攻击，导致网站被挂马挂黑链，从而，导致网站产生很多垃圾外链，进而，被搜索引擎降权处理，导致关键词百度排名下降的后果。 5、网站外链建设一定要多样化 网站的外链建设一定要多样化，不能太过于单一了，那么，什么是外链建设的多样化呢?所谓的外链建设多样化指的就是不能在同一个外链第三方平台发布外链，而是，可以去一些和我们做的行业相关的第三方外链平台上发布，这样做的好处，就是可以促进网站关键词的优化排名情况，从而，可以有效防止优化关键词排名下降的情况发生了。 森算云已经有多年互联网营销服务经验，平台会实时锁定百度算法更新，进行网站分析、关键词分析、同行竞争分析，并且优化开始后会全程对网站流量数据进行监测分析、策略调整，为客户提供针对性的、高效的优化服务!
SEO优化关键词排名 关键词排名优化即SEO，是Search Engine Optimization英文的缩写。是一种长期总结出的搜索引擎收录和排名规则，对网站进行程序、内容、版块、布局等的调整，使网站更容易被搜索引擎收录，在搜索引擎中相关关键词的排名中占据有利的位置。在国外，SEO已经是比较成熟的行业，而在国内还尚处于起步和发展阶段。 拿百度搜索来说吧，众所周知百度搜索评测网站好坏的算法之一就是网站权重，网站权重是指：搜索引擎给网站(包括网页)赋予一定的权威值，对网站(含网页)权威的评估评价，一个网站权重越高，在搜索引擎所占的份量越大，在搜索引擎排名就越好。 关键词的相关性主要体现在该关键词从其他网页链接到该页面中出现数量的多少。网站外部链接数量多少在百度关键词排名中是一个重要的考量标准。 如何提高关键词排名 1、让搜索引擎给网站带来更多的流量,以此来提升公司的业绩,吸引投资者或者收购者,从而实现网络营销的最佳化,提高网站的曝光率. 2、合理使用关键词排名优化软件，点击关键词排名优化软件是一款能在短期内有效提高指定的词组、短语、句子等关键词排名工具。软件基于搜索引擎用户行为分析研发而成，可用于网站关键词排名优化、提高网站有效流量。点石关键词排名优化软件可以让关键词排名稳定，长期显示在搜索结果首页前几名。但不能所有词都用该软件进行优化，一些难度很低的词，可以用内容结合外链的方法获取较好的排名。 3、通过搜索引擎的访问量来提高企业品牌的知名度和影响力.
4、可以吸引在各搜索引擎上的潜在客户在更容易找到你的网站,并通过了解而与企业进行合作交易,企业从中获得盈利. 5.希望通过搜索引擎向浏览者推介公司的产品,展现出产品的亮点,吸引更多的潜在客户,要想获得这其中的利益,首先当然关键词排名在亮点的位置,有了排名才有流量,有了流量在能提高企业的知名度,企业有了知名度当然就能达到营销的最佳化. 在SEO优化关键词中，关键词的布局一直是影响非常大的，而且两个优化方法相同的网站，其决定排名的高低主要是关键词的布局了。比如同样的一个关键词，一个用首页优化一个用栏目页优化，自然大家都知道首页的权重在网站中是属于最高的，所以其获得的排名自然要比栏目页的要好。所以说，合理的布局关键词可以使关键词更容易获得好排名，在这里笔者给予新手几个布局关键词的技巧，一般来说，首页适合优化竞争度比较大的关键词，栏目页可以适合优化中等竞争的关键词，内容页主要优化长尾关键词。通过这样合理的分配关键词优化页面，一来不会出现大材小用的情况，二来则可以更容易让关键词获得更稳定的排名。所以，布局关键词在网站优化中也是相当重要的，能否在同样的关键词排名下打败对手，自然就需要先合理的布局好关键词了，毕竟拥有结实的基础对自己的后期优化帮助是大大的。中软总公司计算机培训中心同时也是“信息产业部计算机技术培训中心”，是中国成立最早的、具有国际先进水平的计算机培训实体，迄今已有22年的历史。以总部为主体，发展了遍布全国的分中心，开展了面向用户的、各层次、各领域的计算机及信息技术应用培训，共培训各类学员四十余万人次，以其高质量的教学和优质的服务赢得了社会各界的好评。 我们的宣言： 站在我们的肩上，您将看得更远！
优化关键词关于质量得分 什么选款，分析数据什么东西我就不说了，直说直通车的关键词的优化。。。 1..加词。新上宝贝，直通车选词，可以用系统推荐或者魔方下拉框 top20w等等，选词方法我就不说了。刚进去后看看质量得分，低分的可以直接删掉了。留下高分的。然后设置标题，标题也要有吸引人点击的欲望。还有就是图片个人感觉图片最重要。测试图片也不说了，就是两个推广内容，高的就用低的就换。。。推广内容一定要两个 2... 优化。这个是每天必须的。低分的果断删掉，有点击和点击率高的留下，点击率低的直接删掉。大词也删掉，前期把分提起来分。这样子优化下来，1个礼拜能剩30-50个词就差不错了，这些词都是好词。然后就看你直通车账户点击率了，如果点击率达到百分之0.7左右，那么你就可以加大力度啦。我的点击率一般0.7以上.当你的词都10分了你就可以加词进去了，你可以加大词，这时候你会发现加进去的大词也是10分、9分，这时候你就可以低价抢排名，而且你点击率又高，那么你一天一个词引几千流量几千点击完全不是问题。解释下上面的做法吧。很多人添加的词很多，这样点击单价是做的很低。但是一个车能成交的关键词很少，这就是直通车要精准的本质。有些人看到一个计划里面是有100多个词 10分的没点击点击低的都有有。可是又觉得找词很幸苦，词越多成交的机会就越高。所以导致舍不得删词。这样这个计划的分就永远提不上去了。。而且也违背了直通车的精准。。所以要想通点，看开点。根据数据来找到适合自己的词。从200个词里面甚至400 、800个词里面挑选出20-30个有价值的词甚至10个。。这样就每一分钱都花在刀刃上了。不会像一个计划100多个词一样浪费钱了. 最重要的事好管理。如果还有些词觉得有潜力的话，但是点击率不高、质量扥分不高。你可以再另外已计划加上这些词看效果。这样就不会舍不得删词了。 上面说的都是一些经验。并且说到质量得分。其实有时候质量得分不是最重要的。真正的高手是很少会考虑质量得分的。只要你优化的好，点击率高、转化好等等质量得分自然高。。所有有时候不必去纠结质量得分。天天看着分数也没用，分数不会无缘无故的涨上去。。最重要的就是优化、精准。比如我们是卖坐垫的、但是有些买的喜
pET28a-sumo载体原核表达鉴定与条件优化 一、是否表达 从-80℃去除冻存菌，以10ul接种5ml 含Kan+LB培养液的试管中，置摇床中37℃，220rmp复苏12h。再以复苏菌接种到新的试管中，置细菌震荡培养箱37℃培养至OD=0.6（菌液刚开始变浑）加入终浓度至1mMIPTG 37℃诱导过夜，收集菌液。取pet28a-sumo 载体1mM诱导对照，pet28a-sumo未诱导和1mM诱导菌液进行SDS-PAGE鉴定。 如在预期位置出现条带，则进行WB鉴定是否表达。 二、感受态 可以尝试BL21，BL21(DE3)还原型，Rossta对6种稀有密码子优化以及BL21(DE3)ply促可溶表达菌株。 三、IPTG浓度 向试管中加入4ml Kan+培养液，接种20ul测序正确的表达菌。置细菌震荡培养箱37℃培养至OD=0.6（菌液刚开始变浑）。向双份中的其中一份诱导菌和空载体对照菌中加入IPTG至终浓度为0.1,0.25,0.5,0.75和1mM的，37℃诱导过夜。取各梯度进行 SDS-PAGE电泳，取诱导量大的最低稀释度进行下一步诱导。 四、诱导时间 以诱导量大的最低稀释度进行诱导，分别在15℃、30℃及37℃诱导过夜，取样进行SDS-PAGE鉴定。 五、上清or包涵体 取复苏菌100ul加至30ml Kan+LB培养液中培养，以上述条件进行诱导，8000rpml离心15min收集菌体,至冰上以工作6s停9s超声20min,再次以8500rpm离心20min,取上清80ul, 80ulPBS重悬沉淀+20ul 4XSDS-PAGE煮样进行电泳检测。 六、附注操作详细： 取1ml菌液12000rpm离心后3min，用PBS涮洗一次后，取80ulPBS重悬菌体+20ul 4XSDS loadingbuffer煮样10min，12000rpm离心10min取上清上样。 SDS-PAGE电泳：取上层10ul 跑两份SDS-PAGE电泳，80V 20min后换120V继续电泳，直至胶板下沿。取其中一块胶进行考马斯亮蓝染色30-40min。回收染液后加入脱色液，稍微脱色30min，放微波炉加热加速脱色，2min/次。反复几次，直至胶基本脱干净。 WB: 取另一份胶进行转膜，剪取同样大小的0.22um的PVDF膜，放入甲醇侵泡5min。 将剪好的吸水海绵放入1X转膜缓冲液浸湿。按海绵-膜-胶-海绵的顺序放置（视转膜仪而定），赶完气泡后15V转40min。将转好的膜放入配好的5%的脱脂乳37℃2h；再放入1:2000稀释的抗His单克隆抗体孵育过夜，PBST洗4次，5min/次；加入到1:5000稀释好的HRP标记的抗鼠二抗进行室温孵育1h，PBST洗4次，10min/次最后一次用PBS 洗；最后进行ECL显色。
现在传统的企业都做网络营销了，而网络营销最有效的办法就是建立一个网站做竞价推广，这样简单有效也见效快，也有很多企业赚到钱了吧，但也烧了很多钱给百度，也许这些成本对一些财大气粗的大企业来说不算什么，像这个蓬房，每年就送给百度近百万，但一些小公司还是望竞价而兴叹的，今天就来分享一下竞价推广的一些技巧吧，先普及一下一些常识：竞价的排名规则和费用： 百度竞价真正的排名规则：综合排名指数=自身出价* 质量度 关键词每次的点击价格=(下一名出价* 下一名质量度)/关键词质量度+0.01 关键词的点击率：(点击率=点击量/展现量) 百度竞价账户优化其实就是分析上面公式来做的。 下面分别介绍以下几个环节来讲账户优化技巧： 一、推广计划建立技巧 百度推广计划是对推广目标的一个大的分类，主要是是为了方便管理推广关键词和为实现不同的推广目的而推出的。一般结构好的账户，推广计划都清楚明了富有条理，对排名和管理都起到了好处。如何设置推广计划使账户结构优质呢?首先你要考虑下你的产品或服务是什么，围绕你的产品或服务来设立推广计划，比如说你是一个做语言培训的公司，那么推广计划的建立可以是：英语培训、日语培训、法语培训、韩语培训等等;再比如说你是卖帐篷的公司，推广计划可以这样建立：婚庆蓬房、仓储蓬房、会展蓬房、活动蓬房等等;还比如说你的产品对地域有很大的要求，你也可以建立推广计划为：北京地区、上海地区、广州地区、浙江地区等等。也可以分为重点推广词计划，一般推广词计划;方式很多就不一一列举了，总而言之推广计划是围绕推广目的而展开的一个大的类别，用于管理各类别的关键词，使账户结构清晰明了。 曾经看到过有的公司建立推广计划的时候，没有明确的分类，命名错乱，有很多重复的名称，账户结构一直不好，排名始终上不去，浪费了很多的推广费用。 注意：推广计划一旦建立，计划名称就改不了了，除非删除之后重新建立新计划，这样很麻烦，对账户也有所影响，所以在建立推广计划之前一定要考虑清楚再操作。 二、推广单元建立技巧 推广单元是继推广计划之后的另一个大的分类，下面直接管理推广关键词，一个计划里面可以包含很多的推广单元，一个推广单元里面也设置很多关键词。之所以要建立推广单元，是由于推广计划不能一次彻底的把关键词分得很明确，推广单元的再一次归类就使关键词的分类更为明确，进而也使得账户更加清晰化。 推广单元的命名跟推广计划差不多，值得注意的是推广单元一定是包含推广核心关键词的一个集合。
搜索引擎是根据关键词来检索信息的，那么如何选取也就成了企业开展搜索营销的重中之重。关键词的选取实际上就关系着搜索营销的成败，他也是搜索营销的一个起点，如果关键词定位不准确，那么后续工作就有可能劳而无功。下面就总结一下本人在搜索营销过程中的选取关键词的流程。 关键词的来源 作为中小企业我们可以通过样的一些途径获得关键词： 第一，企业自身的产品名称以及别名； 第二，区域加上产品名称，如上海微波治疗仪； 第三，企业的名称； 第四，征询企业人员可能用到的关键词； 第五，可能拼错的关键词； 第六，竞争对手网站中用到的关键词； 第七，问答类关键词，如价格是多少； 第八，分析网站的访问日志； 第九，第九，利用关键词工具，如百度相关搜索，google关键词工具。 关键词的分类 通过第一步我们已经罗列了许多的关键词，但是是不是要将所有的关键词都放上去呢那不是的，我们还得将关键词进行分类，通常作为中来讲，第一类是产品类关键词，第二类是次产品类关键词，例如：公司是做B超机的，那么B超探头就可以放入这一类中，第三类是信息类，如产品的价格，技术资料类，第四类就是相关的长尾类的，比如错写等， 关键词的筛选 在选词的时候要请注意的几个原则，第一就是相关性，也就是与你的网页内容一定要相关，第二是符合用户的搜索习惯，第三，范围要适中，主要根据消费群体而来，第四，要用一定的用户关注定，太过冷门无人搜索的不行。 中小企业的关键字通常是以产品为主，那么根据页面的标题长度，我们通常要根据重要与否在第一类关键字中选取二到五个关键词，作为一级关键词，当然总长度最好是不要超过30。在第二类中也选取二到五个关键字作为二级关键词。依次类推，列出三四级关键词，对于没有选中的关键词全部作为第五级。 特别对于产品关键字，你应该从的角度来设置，有的可能还是熟称。如我是卖竹炭纤维纱线的，正式的分类是“功能纤维”，当然也可以把“纱线”作为我的关键字，但是客户不一定都是很专业的，有的人会用“竹炭纱”或者“竹炭纤维纱”
原核蛋白表达纯化条件优化方案 1，收菌每10ml一EP管，弃上清后-40度冻存。 （一）缓冲液PH的确定： 2，处理镍柱：（流速控制在30d/min, 5ml注射器） 1）用3-5ml去离子水洗柱； 2）1ml硫酸镍挂柱； 3）3-5ml去离子水洗去余镍； 3，取出菌体20管，每4管（40ml）为一组，分为5组。菌体沉淀置于冰浴中解冻，分别用1ml PH6.0,6.5,7.0,7.5,8.0的PBS重悬，分别超声至澄清。离心15000rpm,10min，弃沉淀。 4，纯化： 4）binding buffer 3ml平衡柱子； 5）上样，保留穿透液； 6）洗脱，使用100（or200 mM）咪唑洗2个柱体积； 7）3-5ml去离子水洗柱，再用另一PH缓冲液重复步骤4）-6） 洗柱：先用去离子水洗3-5个柱体积，用EDTA（50mM）洗去NI 3个柱体积，用去离子水洗3-5个柱体积；用NaOH（1M）洗5个柱体积，用去离子水洗3-5个柱体积，用20%乙醇洗3-5个柱体积，封柱于20%乙醇，4度保存； 5，结果用SDS-PAGE检测（配小孔15%胶），变性/非变性对比。找到Trimer含量最高的缓冲液PH，并进行后面的优化。对照/全菌/各PH穿透/各PH样品。 6，该步骤中选定的缓冲PH固化用于以下纯化、透析、ELISA包被、筛选等各个步骤。 （二）咪唑浓度的选择 8，取出新1组，选用上一步骤确定的缓冲液超声； 9，上样后分别使用60/80/100/150/200mM咪唑洗脱，每次2个柱体积， 10，结果用SDS-PAGE检测（配小孔15%胶），变性电泳，选用含量最高的咪唑浓度作为洗脱条件。顺序：对照/全菌/穿透/各浓度咪唑洗脱样品； （三）疏水抑制剂的选择 11，选用第一步确定PH值的缓冲液，取12组； 12，分别在体系中加入咪唑（10/20/40/50mM/L）/脲（<4M/L:1/2/4M/L）/吐温（<1%）/甘油(5%,10%,15%)/tritonX-100(0.1%)/不加；
关键词优化的十六种方式 自己做了“昆明e领域”的网站，刚上线不久，正好借这个机会分享下我对我的“昆明e领域”的SEO优化经验，经过自己以前对SEO的了解，只知道做外链和友情链接以及发表原创文章有助于百度提升权重，但是以前一直没有对关键词优化的经验，经过跟一个专业做SEO优化的朋友请教和探讨，得出关键词是需要做出来的。 首先通过站长工具分析词条的指数来查看该词条是不是有人做，如果没多少人做，但是关键词又是比较好的，那恭喜你，你的机会来了，可以把这些词条做起来了。 关键词优化方式： 一、百度百科以及维基百科去创建词条 前提是没有人创建的词条的情况下，你可以去把这些关键词词条创建起来，这样可以让搜索引擎引起该词条的关注度。 二、通过网站中的堆砌一些关键词方式 1、URL中出现关键词 url链接中包含页面的关键字可以使搜索引擎增加对链接页面以及本页面的关注度，有利于在百度的收录; 2、网页Title中出现关键词 毫无疑问，所有的SEO们都认可Title中出现关键词对于网页排名的好处; 3、常规内容中出现关键词 适当的关键词密度有利于页面在搜索引擎索引中获得好的名次
4、在页面的第一段中出现关键词优化搜索引擎似乎特别关注页面的开头以及页面的底部，似乎在文章开头或者结尾出现关 键词有强调关键词的作用，尤其是在文章的第一段，似乎搜索引擎还在沿用截取的方法获得文章的描述，如果页面没有设定描述的话; 5、在页面的最后一段中出现关键词页面的最后一段明显有助于搜索引擎的索引spider索引，毕竟大部分的站点友情链接是在那个地方，况且copyright 范围也能够加深搜索引擎的影响; 6、Heading 标签比如h1,h2中出现关键词不用多余的解释，h1、h2标签似乎专为搜索引擎设计; 7、站内的链接中出现关键词和站外的链接中出现关键词没有任何区别。 8、导向相关内容的导出链接不要怀疑，页面中的任何链接都会得到搜索引擎的关注; 9、导出链接中出现关键词带链接的关键词由于链接的存在而被加强 10、图片文件名中出现关键词文件名是浏览网址的一部分，这似乎和域名中包含关键词有异曲同工之妙; 11、Alt标签中出现关键词一般情况下图片链接对于搜索引擎的友好程度比不上文字链接，所以html语言才设计了Alt标签; 12、comment中出现关键词虽然作用在不断的减低，但始终是搜索引擎排名的依据之一; 13、合理的频率更新内容似乎没有什么合理的说法，搜索引擎喜欢更新更快的网站，但是请不要更新的速度剧烈的波动;
提升关键词排名重点在哪里？是不是发外链，更新文章就能提高关键词排名？相信大家做了一段时间网站优化后看到排名依然没什么提升都会提出类似这样的问题，外链发得不够多吗？仔细分析，不对！有些网站外链比我的还少排名比我的高呢。为什么会这样呢？优化关键词我们应该注意更多的问题，更多的细节才能获得更好的排名。那么我给大家总结了五个方法，希望对大家提升排名有用： NO1、外链要的是质量不是数量 外链对关键词排名的影响算是至关重要的，尤其是锚链接。但是对于一些朋友狂发外链，或者用软件去发的，根本没有注意外链有没有效果。这样的链接被删除得多，容易造成外链数量忽高忽低，容易被搜索引擎认为是作弊。而且质量不高，与其花精力大量发，还不如想想如何提高外链的质量，当然要去高质量的论坛等地方发帖要求发帖的素质又是比较高的，所以有很多技巧需要学习的，建议大家多去看看这类相关的文章，A5，站长之家上这样的文章很多的。 NO2、站内内链和关键词链接 我们知道蜘蛛爬取是通过链接的，形象的理解一下：外链让蜘蛛爬到我们的网站上，然后通过内链给他建立的一个蜘蛛网，通过这个网爬遍我们整个网站，这样提升网站内容的收录机会，也相当于给其他页面投一票，用来提升网站整体的权重。因此内链的布局也是起着很重要的一步。另外就是内链的锚文本对关键词排名很重要的，有些网站外链不多，但是内链和锚链接布置得很好关键词排名也很不错的。所以在设置内链除了用常用的方法例如：给文章加上“上一篇”，“下一篇”；还有热点文章，相关文章外我们应该为文章内容的关键词添加锚链接。不过这里也需要技巧的添加，不可添加得太多。一般一篇文章2-3个即可。 NO3、友情链接的质量 有的时候我们去和别人交换链接的时候，人家可能会觉得我们的站点不合适拒绝我们，同时我们也会这样做的。这就算友情链接的优劣问题了，谁都想给自己的站点换个优质的链接。因此在交换链接的时候还是要好好考虑下，怎么样的链接才的最合适你的，并不是你一天换了N多就一定好,也不是看PR值。个人觉得换友情链接需要考虑的应该是快照、收录、网站质量。快照更新和收录证明对方的网站权重在百度还是可以的，网站质量衡量有多方面的，如果是垃圾的采集站我建议大家直接放弃。另外就是新站怎么做？很多新手觉得做新站的时候很多人嫌弃自己的站要内容没内容，要权重没权重，要想换到链接很难的。那正因为这样，我们就该更努力的完善自己的网站，一般人现在也知道看网站权重会看你的快照时间和收录数量了，只要你天天原创、天天外链去QQ群，去友情链接发布平台主动找别人，新站换链接也是很快的。 NO4、网站地图和其他 无论是对用户还是对搜索引擎来说我觉得网站地图都是十分必要的，特别是你网站内容比较多，深度比较大的时候，这个就算必须的了。对于搜索引擎我们应该提供siteMap，对于用户我们应该制作网站地图页面，让用户更好的知道网站的结构，容易找到网站的内容，从而提高用户体验。另外就是制作网站的RSS，对搜索引擎来说，一个不断更新内容的网站对搜
第30卷 第6期 广东海洋大学学报 V ol.30 No.6 2010年12月 Journal of Guangdong Ocean University Dec. 2010 收稿日期：2010-06-13 基金项目：国家自然科学基金“红笛鲷仔鱼抗菌免疫基因的克隆及表达时序研究”（40906073） 第一作者：魏世娜（1985－），女，硕士研究生，主要从事水产动物病害防治。Email : weishinazi@https://www.doczj.com/doc/864979794.html, 通讯作者：简纪常，教授，主要从事水产动物免疫学及病害控制。Email : jianjc@https://www.doczj.com/doc/864979794.html, 红笛鲷NCCRP-1基因原核表达条件的优化及纯化 魏世娜，王 蓓，鲁义善，吴灶和，简纪常 （广东海洋大学水产学院，广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室暨广东省高等学校水产经济动物病害控制重点实验室, 广东 湛江 524025） 摘 要：通过克隆编码红笛鲷（Lutjanus sanguineus ）非特异性毒性细胞受体蛋白-1（nonspecific cytotoxic cell receptor protein-1, NCCRP-1）成熟肽基因序列，然后与载体连接构建pET21a-NCCRP 融合蛋白表达载体，将其转入大肠杆菌BL21进行诱导表达并优化条件。SDS-PAGE 分析表明，在异丙基-β-D -硫代半乳糖苷（IPTG ）浓度0.8 mmol/L 、 37 ℃条件下培养3 h 后表达量最大， 分子大小与预期值相符，融合蛋白主要以包涵体形式高效表达，通过HisTrap HP 柱子使其得到进一步纯化；Western blot 分析表明，该融合蛋白可与鼠抗His-tag 单克隆抗体发生特异性结合，说明获得该表达产物。 关键词：红笛鲷；NCCRP -1基因；原核表达；条件优化； 纯化 中图分类号：S942.1 + Q344+.13 文献标志码： A 文章编号：1673-9159（2010）06-0025-06 Purification and Optimization of Prokaryotic Expression of Crimson Snapper (Lutjanus sanguineus ) NCCRP-1 Gene WEI Shi-na, WANG Bei, LU Yi-shan, WU Zao-he, JIAN Ji-chang (Fisheries College of Guangdong Ocean University , Guangdong Provincial Key Laboratory of Pathogenic Biology and Epidemiology for Aquatic Economic Animals & Key Laboratory of Diseases Controlling for Aquatic Economic Animals of Guangdong Higher Education Institutions , Zhanjiang 524025, China ) Abstract ：The cloned mature peptide of Lutjanus sanguineus NCCRP-1 was connected with the expression vector pET-21a to construct fusion protein pET21a-NCCRP. This recombinant was transformed into Es cherichia coli BL21 and mainly expressed in the form of inclusion body. The optimal condition for the expression of this protein was that the cells were induced at 37 ℃, in 0.8 mmol/L of IPTG for 3 hours. The molecular weight of the expressed product was identical to that of expected protein by SDS-PAGE analysis, then purified by HisTrap HP column. The result of Western blot show that the expressed product could be combined with mouse anti-His-tag Mab. The fusion protein which lays the basic could be obtained for the future research on function and applied in fish innate immunity. Key words: Lutjanus sanguineus ；NCCRP-1 gene; conditions optimization; purification 红笛鲷（Lutjanus sanguineus ）又名红鱼，隶属 鲈形目、笛鲷科、笛鲷属，是我国南方沿海的重要 经济鱼类之一。但是随着水产养殖集约化程度的不断提高，鱼类病害所带来的损失愈发严重，严重制约水产养殖业的健康发展，而传统的化学药物的使用会引起病原体抗药性增加和药物残留等问题，因