孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响
发表时间：2011-08-29T11:11:44.513Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：张晓春周燕萍
[导读] 降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。
张晓春周燕萍（宜宾市第二人民医院药剂科四川宜宾 644000）
【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0031-03
【摘要】目的通过胶原酶消化法对大鼠胰腺组织经过短时消化，以获得大量纯度高和功能良好的大鼠胰岛单层细胞，以此为材料研究了孜亚比提片对大鼠胰岛细胞生长和胰岛素释放的影响。方法胰岛细胞分为正常对照组、不同浓度HZT组（20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml）、高糖组、高糖+不同浓度HZT组（20g/ml，40g/ml，80g/ml）、棕榈酸组、棕榈酸+HZT组（80g/ml）、油酸组、油酸+HZT组（80g/ml）。将正常对照组，高糖组（33.3mmol/L），高糖+HZT组（80g/ml）；棕榈酸组(0.25mmol/L)，棕榈酸+HZT组（80g/ml），油酸组
(0.25mmol/L)，油酸+HZT组（80g/ml）分别在37℃,5%CO2分别培养72h和36h，进行葡萄糖负荷试验，放射免疫法检测培养液中胰岛素水平。结果高糖+HZT组（80g/ml），棕榈酸+HZT组（80g/ml）和油酸+HZT组（80g/ml）胰岛素分泌量分别显著高于高糖组，棕榈酸组和油酸组（P<0.01），但均低于正常对照组(P<0.01)。结论降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。
【关键词】胰岛胰岛素细胞培养脂肪酸葡萄糖
本实验对新疆地方中药孜亚比提片模拟在高浓度葡萄糖和高浓度游离脂肪酸环境下对体外原代培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素作用，研究孜亚比提片对胰岛细胞功能的影响，从而为新型抗糖尿病药物研发进行初步探索。
1 材料与方法
1.1材料、试剂及仪器
1.1.1材料一周龄健康Wistar大鼠，购于新疆医科大学动物试验中心。合格证：SCXK（新2010－0001）。
1.1.2主要试剂孜亚比提片（HZT，由新疆医科大学药理教研室提供）、胶原酶Ⅱ型（Collagenase Ⅱ，Gibco公司）、DMEM完全培养基（Gibco公司）、胰岛素放射免疫试剂盒（北京科美东雅）。
1.1.3主要仪器 CO2培养箱、酶标仪、放射免疫γ-计数器等。
1.2方法
1.2.1大鼠胰岛细胞的制备及培养[1] 将一周龄Wistar大鼠, 于75%乙醇浸泡5min，无菌剖腹取出胰脏，于冰冷D-Hank’s液中漂洗，转入青霉素小瓶中，剪成0.1～0.5mm3大小的碎片，用无菌D-Hank’s液反复清洗8～10遍，加入5～10倍体积的无菌Ⅱ型胶原酶消化酶液，37℃水浴振荡消化30min后，将消化液取出移入预先准备好的离心管中，1500转10min离心，取沉淀即为消化下的细胞，加入2mlDMEM培养基，混匀即得细胞悬液，计数,调整细胞浓度为2×105个细胞/ml。
将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，接种18h后，轻轻振荡培养板，利用细胞生长差速法，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，将新培养板中的细胞继续培养48h后，用不含碘乙酸的培养基洗2次，加入培养液继续培养，每隔3d换培养液，获得单层胰岛细胞，备用。
1.2.2孜亚比提片在高浓度葡萄糖环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响[2] 将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含
5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，加入胰蛋白酶短时消化，收集细胞，计数，胎盼蓝染色鉴定胰岛细胞活率，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，高糖组(培养液中含33.3mmol/L葡萄糖)，高糖+孜亚比提片组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)，37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养72h后做胰岛素释放实验。
1.2.3孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含
5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液，并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，棕榈酸组(培养液中含0.25mmol/L棕榈酸)，棕榈酸+孜亚比提片组（80μg/ml），油酸组（培养液中含0.25mmol/L油酸），油酸+孜亚比提片组（培养液中含80μg/ml孜亚比提片），37℃,5%CO2 饱和湿度培养箱中培养36h后做胰岛素释放实验。
1.3统计学处理各项数据以x-±s表示，采用ANOVA中LSD-t检验行多组间均数比较，显著性水平为0.05，使用SPSS13.0统计软件包分析。
2 实验结果
2.1孜亚比提片在高浓度葡萄糖（3
3.3mmol/L）环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，高糖组，以及高糖+三种浓度浓度的HZT组培养基中进行72h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，数据经方差齐性levene检验，低糖刺激时，levene统计量为1.104，sig.=0.384, P>0.05，可认为方差齐。F＝395.642，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义，高糖+HZT(80μg/ml)组与高糖组相比差异显著（P<0.01）。高糖刺激时，levene统计量为1.913，sig.=0.129, P>0.05，可认为方差齐。F＝1056.999，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。这表明，在高浓度葡萄糖环境中，HZT具有保护胰岛细胞免受高糖损伤作用，对胰岛功能具有一定保护作用。
2.2孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸(FFAs)环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，棕榈酸组，油酸组以及棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml）培养基中进行36h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，低糖刺激时，levene统计量为1.370，sig.=0.261, P>0.05，可认为方差齐。F＝72.182，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。高糖刺激时，levene统计量为1.067，sig.=0.406,P>0.05，可认为方差齐。F＝128.782，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别，在高糖刺激下棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml），胰岛素释放量都分别高于棕榈酸组和油酸组，差异显著（P<0.01），但各试验组胰岛素释放量均小于正常对照组（P<0.01）,这表明，在高浓度游离脂肪酸环境下，HZT仍然具有一定保护胰岛细胞免受游离脂肪酸损伤的作用，对胰岛功能具有一定保护作用。
3 讨论
本实验从新疆地方传统治疗糖尿病药有效成分中选取了孜亚比提片作为试验药物，研究了孜亚比提片对体外原代培养大鼠胰岛细胞胰
大鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,无菌取出胰腺,置于4℃Ｈａｎｋｓ液中,用眼科小剪刀将胰腺剪成1ｍｍ3大小的组织块,加入0.5ｇ·Ｌ-1胶原酶,37℃恒温水浴振荡消化15ｍｉｎ,将已消化至细颗粒状组织吸出,并用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化,余下未消化完全的组织加入少量37℃Ｈａｎｋｓ液,用粗口径吸管轻轻吹打,直至大部分组织被消化成细颗粒状,用大量4℃Ｈａｎｋｓ液终止消化。混合前后两部分的消化产物,用Ｈａｎｋｓ液低速离心洗涤3次后,将组织置于含100Ｕ·ｍｌ-1青霉素,100ｍｇ·Ｌ-1链霉素,11.1ｍｍｏｌ·Ｌ-1葡萄糖,10ｍｍｏｌ·Ｌ-1Ｈｅｐｅｓ和7%的胎牛血清的完全ＲＰＭＩ1640培养液中,用150目(108μｍ)尼龙筛网过滤,以除去未被消化的组织和结缔组织。将已分离好的胰岛细胞和细胞团,置于含上述培养液内的培养瓶内培养。24ｈ后,吸出未贴壁的细胞悬液,低速离心以收集细胞,显微镜下计数后,以每孔一定数量胰岛细胞团接种于24孔细胞培养板内,继续培养48ｈ后用于实验。 我分离胰岛细胞后,用DTZ染色,发现溶液中含有许多小颗粒,放入温箱中也未发生变化,镜下观察没有看到文献中所说的红染细胞。我是将100mg双硫腙粉末溶于10mlDMSO中，用滤纸过滤，用时用KRBB缓冲液稀释100倍。胰岛细胞分离是将成年大鼠胰腺用胶原Ⅴ酶消化后，过150目网取滤过液，再过400目网取网上细胞，加入L-DMEM培养。方法是我根据文献稍作改动后实施的。胰岛细胞分离和染色对于我都是第一次做，请高手指点一下。 溶液中如果有紫黑色小颗粒，那就是DTZ，过滤除的不净。没有红染的细胞就是没有胰岛啊。还有，我总觉得150目太密了，很多胰岛都滤不过去吧 大鼠胰岛细胞原代培养 一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中，加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖，溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS（pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。此时组织块边缘模糊，再将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks 悬浮，离心，重复1~2次，再用培养基洗2~3次，用培养基悬浮即得细胞悬液；将消化过的组织块重复消化5~6次至组织块消化完全，重复以上操作，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为2×105个细胞/mL，将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，每孔1mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速，接种15小时后，轻轻振荡培养板，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，可除去部分成纤维细胞。将新培养板中细胞培养48小时后，换新鲜配置的含有2.5ng/mL 的碘乙酸的培养基培养5小时，可除去绝大部分成纤维细胞，而胰岛细胞不受伤害，换不含碘乙酸的培养基洗2次，并换不含碘乙酸的培养基在37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养，每隔3天换培养液，获得单层胰岛细胞， 胰岛细胞移植的研究进展 人类至今已有100多年用移植方法治疗糖尿病的历史，胰岛细胞移植治疗糖尿病存在两个障碍：组织来源不足和免疫排斥反应。 一．胰岛细胞的来源
胰岛的细胞组成及其功能 胰岛能分泌胰岛素与胰高血糖素等激素。人类的胰岛细胞按其染色和形态学特点，主要分为α细胞、β正常胰岛细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞约占胰岛细胞的20%，分泌胰高血糖素；β细胞占胰岛细胞的60%-70%，分泌胰岛素；γ细胞占胰岛细胞的10%，分泌“生长抑素”；PP细胞数量很少，分泌胰多肽。 胰岛素对人体的糖脂肪和蛋白质代谢都有影响，但对于糖代谢的调 节作用尤为明显，胰岛素能够促进血液中的葡萄糖（血糖)进入组织 细胞被储存和利用。缺乏胰岛素时，血糖难以被组织细胞摄取，糖的 贮存和利用都将减少，这时血糖浓度如果过高，就会有一部分从尿液 中排出，形成糖尿。如果是因为胰岛素分泌不足导致，可以通过注射 胰岛素制剂来治疗。 2生物学作用 胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素。 1．对糖代谢的调节：胰岛素促进组织细胞对葡萄糖的摄取和利用， 加速葡萄糖合成为糖原，贮存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促进葡 萄糖转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖水平下降。胰岛素缺 乏时，血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖，引起糖尿病。 2．对脂肪代谢的调节胰岛素促进肝合成脂肪酸，然后转运到脂肪细 胞贮存。在胰岛素的作用下，脂肪细胞也能合成少量的脂肪酸。胰岛 素还促进葡萄糖进入脂肪细胞，除了用于合成脂肪酸外，还可转化为 α-磷酸甘油，脂肪酸与α-磷酸甘油形成甘油三酯，贮存于脂肪细胞
中，同时，胰岛素还抑制脂肪酶的活性，减少脂肪的分解。胰岛素缺乏时，脂肪代谢紊乱，脂肪分解增强，血脂升高，加速脂肪酸在肝 内氧化，生成大量酮体，由于糖氧化过程发生障碍，不能很好处理酮 体，以致引起酮血症与酸中毒。 3．对蛋白质代谢的调节胰岛素促进蛋白质合成过程，其作用可在蛋 白质合成的各个环节上： ①促进氨基酸通过膜的转运进入细胞； ②可使细胞核的复制和转录过程加快，增加DNA和RNA的生成； ③作用于核糖体，加速翻译过程，促进蛋白质合成；另外，胰岛素还 可抑制蛋白质分解和肝糖异生。由于胰岛素能增强蛋白质的合成过 程，所以，它对机体的生长也有促进作用，但胰岛素单独作用时，对 生长的促进作用并不很强，只有与生长素共同作用时，才能发挥明显 的效应。受体。胰岛素受体已纯化成功，并阐明了其化学结构。 3分泌调节 (1)血糖的作用血糖浓度是调节胰岛素分泌的最重要因素，当血糖浓 度升高时，胰岛素分泌明显增加，从而促进血糖降低。当血糖浓度下 降至正常水平时，胰岛素分泌也迅速恢复到基础水平。在持续高血糖 的刺激下，胰岛素的分泌可分为三个阶段：血糖升高5min内，胰岛 素的分泌可增加约10倍，主要来源于B细胞贮存的激素释放，因此持续时间不长，5-10min后胰岛素的分泌便下降50%；血糖升高15min 后，出现胰岛素分泌的第二次增多，在2-3h达高峰，并持续较长的 时间，分泌速率也远大于第一相，这主要是激活了B细胞胰岛素合
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大鼠2型糖尿病模型建立方法讨论 专业：药理班级：六班姓名：刘畅学号：150517 摘要：据国际糖尿病联合会（InternationalDiabetesFederation，IDF）估计，现在全球约%的成年人患有糖尿病。到2035年，该病患者人数预计会上升至亿。在2013年，全球约有亿成年人患有糖尿病，中国的糖尿病患者人数居全球之首，调查统计人数为亿。糖尿病导致约510万人死亡，平均大约每6秒钟就有1人死于糖尿病。2012年1月9日，中国健康教育中心公布的“中国慢病监测及糖尿病专题调查”结果显示，我国18岁及以上居民糖尿病患病率为2。6%，60岁以上老年人患病率高达%。因此，为治疗糖尿病建立简单、稳定、经济的动物模型非常重要。因2型糖尿病患者人数占糖尿病患病人数的90%以上，本文主要综合讨论高糖高脂饲料联合链脲佐菌素大鼠2型糖尿病模型的建立方法和注意事项。得出结果为：使用体重在190g~240g之间的雄性SD大鼠，通过连续两次腹腔注射小剂量链脲佐菌素并辅以去抗氧化剂处理，合理饲养并通过尾静脉采血方法建立的2型糖尿病模型较理想。 关键词：2型糖尿病，SD大鼠模型，链脲佐菌素STZ， 糖尿病（diabetes）是一种以胰岛素分泌缺陷和胰岛素作用不足所致的以高血糖为特征的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合征，基本治疗方案包括饮食治疗、运动治疗、药物治疗、糖尿病监测及糖尿病教育。病因主要有遗传因素、病毒感染、肥胖等，临床表现为“三多一少”即多尿、多饮、多食和体重减轻。长期的高血糖最终会引起很多严重的并发症，包括心脑血管疾病、糖尿病神经病变、糖尿病视网膜病变，糖尿病肾病、糖尿病足、感染、糖尿病酮症酸中毒、高渗性昏迷等[1]。 糖尿病分为1型糖尿病（Type1diabetes）和2型糖尿病 （Type2diabetes）两种，1型患者因自身免疫β细胞破坏所致，每日胰岛素分泌量非常少，空腹基值及糖刺激后峰值均明显低于正常值，表现为绝对分泌不足。2型糖尿病细分为两类：体重正常患者胰岛素分泌量低于正常人，糖刺激后峰值低并且延迟出现；肥胖糖尿病人胰岛素分泌量大于正常人，空腹基值和糖刺激后高峰明显高于正常人，但延迟出现，因此，表现为相对性胰岛素分泌不足且释放反应迟钝。胰岛素分泌不足的原因可能为：遗传因素、自身免疫、胰岛素拮抗。糖尿病患者中约有90%～95%属于2型糖尿病。 2型糖尿病，即非胰岛素依赖型糖尿病（non-insulin-dependentdiabetesmellitus，NIDDM），根据体重可分为肥胖和不出现肥胖两
·临床论著·TyG指数对胰岛素抵抗及胰岛β细胞 功能的双重评估 张琴杨刚毅 【摘要】 目的 在不同糖耐量人群中，比较由空腹血清甘油三酯和血浆葡萄糖所得简易指数 （TyG）与稳态模型所得胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）及胰岛β细胞功能指数（HOMA-β、DI）的 相关性，并分析前者评估胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的灵敏度与特异度。方法总共883例受试 者，其中正常糖耐量者（NGT）269例，新诊断糖调节受损者（IGR）242例，新诊断2型糖尿病患 者（T2DM）372例。均接受75 g口服葡萄糖耐量试验（OGTT），并检测空腹血清胰岛素（FINS）、 血脂谱及其他生化指标。由空腹血清甘油三酯及血浆葡萄糖计算TyG，由空腹血浆葡萄糖及血清胰 岛素计算HOMA-IR、HOMA-β、DI。结果Pearson相关分析显示，TyG与HOMA-IR（r＝0.567， P＜0.01）显著正相关，TyG与HOMA-β（r＝－0.485，P＜0.01）、DI（r＝－0.633，P＜0.01）、 SQRT（HOMA-β）（r＝－0.526，P＜0.01）、LN（DI）（r＝－0.741，P＜0.01）显著负相关。与 HOMA-IR相比，TyG诊断胰岛素抵抗的最佳切点为4.92，ROC曲线上此值对应最高灵敏度（71.5%）、 特异度（79.7%；AUC＋0.803）和最大约登指数（0.512）；与HOMA-β相比，TyG诊断胰岛β细胞 功能缺陷的最佳切点为4.90，ROC曲线上此值对应最高灵敏度（63.6%）、特异度（74.6%；AUC＋0.750） 和最大约登指数（0.383）；与DI相比，TyG诊断胰岛β细胞功能缺陷的最佳切点仍为4.92，ROC 曲线上此值对应最高灵敏度（70.5%）、特异度（86.0%；AUC＋0.856）和最大约登指数（0.565）。 结论TyG可以作为评估空腹状态胰岛素抵抗及胰岛β细胞功能的简易指标。 【关键词】 空腹甘油三酯血糖指数；不同糖耐量人群；胰岛素抵抗；胰岛β细胞功能 TyG index for identifying insulin resistance and islet β cell function Zhang Qin, Yang Gangyi. Department of Endocrinology, The Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University, Chongqing 400010, China Corresponding author: Yang Gangyi, Email:gangyiyang@https://www.doczj.com/doc/8516948736.html, 【Abstract】Objective In different glucose tolerance subjects, to evaluate the correlation, sensitivity and specificity of a simple index(TyG), which was obtained from the product of fasting serum triglyceride and plasma glucose, TyG was compared with homeostasis model assessment for insulin resistance index(HOMA-IR) and beta cell function indices(HOMA-β,DI). Methods In the present study, a total number of 883 subjects(269 normal glucose tolerance individuals, 242 newly diagnosed impaired glucose regulation subjects, 372 newly diagnosed type 2 diabetes mellitus) were included.All subjects completed a standard oral glucose tolerance test.Fasting serum insulin, lipid profiles and other biochemical markers were measured.TyG index was derived from fasting serum triglyceride and plasma glucose. HOMA-IR, HOMA-β and DI were derived from fasting serum insulin and plasma glucose. Results Pearson's correlation analyses showed a positive correlation between TyG and HOMA-IR(r＝0.567, P＜0.01) and negative correlations between TyG and HOMA-β, DI, SQRT(HOMA-β) and LN(DI)(r＝－0.485, r＝－0.633, r＝－0.526, r＝－0.741, respectively; P＜0.01). When compared with HOMA-IR, the ROC scatter plot revealed that the best value of the TyG index for diagnosis of insulin resistance corresponded to 4.92, which showed the highest sensitivity(71.5%) and specificity(79.7%; AUC＋0.803) and the biggest Youden DOI:10.3877/cma.j.issn.1674-0785.2014.02.012 作者单位：400010 重庆医科大学附属第二医院内分泌科 通讯作者：杨刚毅，Email: gangyiyang@https://www.doczj.com/doc/8516948736.html,
大鼠胰岛细胞原代培养方法的改良 中国医科大学附属第一医院内分泌科(沈阳110001) 吴志香* 王玉霞△ 刘国良 摘 要 目的:探讨一种简单易行的大鼠胰岛细胞培养方法,获取尽可能多的高质量胰岛,并寻找进行体外实验研究的最佳时间和条件。方法:运用胶原酶 原位灌注法分离胰腺, F ico ll400纯化胰岛细胞,双硫腙(D T Z)染色鉴定胰岛,运用倒置显微镜观察细胞生活状态, 放免法检测胰岛素分泌考察胰岛功能。结果:每只大鼠可分离438±27个胰岛 胰腺,细胞存活率为92.3±2.3%,GS IS实验中胰岛素释放指数S I为3.25±0.26。结论:本分离纯化方法可获得数量多,质量高的胰岛细胞,为原代胰岛细胞的体外研究提供实验条件。 主题词 细胞培养 胰岛 生理学 胰岛 分离和提纯 大鼠 An i m provem en t m ethod of pr i m ary culture of w istar ra t pancrea tic islets D ep artm en t of Endocrino logy,the F irst A ffiliated Ho sp ital,Ch ina M edical U n iversity (Shenyang 110001)W u Zh ix iang W ang Yux ia L iu Guo liang ABSTRACT O b jective:To study the effects of iso lating and cu ltu ring the rat pancreatic islets in vitro.M ethods:A fter in traductal infu si on of8210m l co ld H ank’s balanced so lu ti on con tain ing1m g m l of type co llagenase,pancreas w ere su rgically p rocu red and digested at37℃fo r15220m in,and stopped digesti on by co ld H ank’s so lu ti on w hen the em u lsi on appeared.T he islets w ere pu rified by discon tinou s F ico ll den sity gradien t(25%,23%,20.5%and11%)cen trifugati on,and the degree of pu rity w as defined as dith izone stain ing.A n i m ati on of islets w as ob served and in su lin secreti on w as detected. R esu lts:438±27islets w ere p rocu red from one rat,and su rvival rate w as92.3±2.3%,Gluco se sti m u lated in su lin secreti on in vitro show ed the m ean value of in su lin in the low2gluco se m edium w as39.74±2.73mM ,w h ile that of h igh2gluco se m edium w as128.94±8.72mM,the S I w as3.25±0.26.Conclu si on:T h is m ethod cou ld ob tain large quan tities and h igh quality islets,w h ich offered better experi m en tal conditi on s fo r cell study. KEY WORD S Cell cu ltu re Istets of langerham s physi o logy Istets of langerham s iso lati on pu rificati on R ats 近年来许多有关糖尿病方面的研究均利用体外培养的胰岛细胞株作为研究对象,然而源自肿瘤细胞系的细胞株毕竟在基因表达功能上与正常细胞有差别,因此,本研究采用了培养的大鼠原代胰岛细胞作为研究对象,以期更接近在体研究的结果,同时又可避免在体研究很难避免的混杂因素。 材料与方法 1 实验材料 实验动物选择两月龄的健康W istar大鼠,体重250±23g,购自中国医科大学实验动物中心。主要试剂有 型胶原酶(co llagenase typ e ,Sigm a);R PM I1640及 *辽宁中医药大学附属第一医院 △中国医科大学附属第四医院DM E M培养基(G I BCO)、胎牛血清(FB S, H yclone)、青霉素、链霉素(华北制药厂)、F ico ll 400(Pharm acia)、H ank’s液,40目不锈钢网, H EPES(Sigm a)、D T Z(Sigm a)、(OA,北京华美)。胰岛素放免药盒(北京原子高科技核技术应用股份有限公司灵敏度:1.5m I U L;精密度:批内Cvv5%,批间Cvb10%) 2 实验方法 2.1胰岛细胞的分离纯化:胰腺的原位灌注:W istar大鼠禁食16h后,10%水合氯醛腹腔麻醉,常规消毒后经腹中线开腹。暴露胆管,寻找胆管穿过胰腺进入十二指肠处,320丝线穿过(暂不结扎),充分暴露胰尾,在肝门胆管分叉处逆行胆管插管,少量推入含冷却的胶原酶(1m g m l)
第一章胰腺的基本结构和功能 胰腺最早是被希腊解剖学家Herophilus (约公元前335-公元前280）发现，并描述为一个独立的器官。数百年后，另一位古希腊解剖学家Ruphos将其命名为希腊语pancreas，其中pan为全部(all)，creas为肉(flesh)的意思。胰腺为人体内仅次于肝脏的第二大腺体，是内外分泌混合腺。外分泌部占腺体的绝大部分，属于消化腺，分泌胰液并经导管排入肠腔，主要对食物起消化作用。内分泌部是散在分布于外分泌部之间的胰岛，分泌胰岛素、胰高血糖素、生长抑素等激素进入血液或淋巴，主要参与糖代谢的调节。 1.1胰的形态和位置 人的胰腺与十二指肠相连，质软、外观为淡红色，形状扁平细长。胰腺长约14～20cm，重量约为80～115g，位置较深，在第1、2腰椎水平横贴于腹后壁。啮齿类动物胰腺为无定形结构，似脂肪组织，不规则，分散在十二指肠、胃底及脾门处，色淡红。而许多低等动物胰腺不形成独立的器官，它们散在分布于其它内胚层来源的器官中。如无脊椎动物就没有独立的胰腺，其外分泌部组织存在于肝内，内分泌细胞则存在于胃肠道上皮内。 人和啮齿类动物的胰腺均可分为头、颈、体、尾4个部分，各部分之间无明显界限。胰头较膨大，被十二指肠“C”形包绕，并向左下方伸出一钩状突起（Processus uncinatus）。在钩状突起凹陷处为胰腺切痕（incisura pancreatis），此处又是肠系膜上动、静脉的通路。胰头后面与胆总管、肝门静脉相邻。胰颈是胰头与胰体之间的狭窄扁薄部分，胃幽门位于其前上方。胰体位于胰颈和胰尾之间，占胰的大部分。胰尾为伸向左上方较细的部分，紧贴脾门。胰腺主导管位于胰的实质内，贯穿胰的全长，它与胆总管汇合成肝胰壶腹，开口于十二指肠大乳头。在胰头上部，位于主导管上方常有一条副胰管，开口于十二指肠小乳头（图1-1）。
罗梅：糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体分布及含量的研究 背景动物实验和临床研究均发现代谢综合征包括糖耐量异常以及 2型糖尿病时胰岛素升高，但是对胰高血糖素的抑制效应减弱或消失。同时，有证据表明胰高血糖素分泌和胰岛素敏感性呈负相关，对胰岛素越不敏感的个体其胰高血糖素水平越高，这提示除了骨骼肌、脂肪和肝脏等胰岛素经典靶组织的外周胰岛素抵抗以外，还可能存在胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。我们最近的研究发现S TZ糖尿病大鼠胰岛α细胞分泌的N P Y含量增加，予以胰岛素治疗不能令其下降，也提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。迄今对胰岛素的外周抵抗已有大量研究，但对胰岛α细胞的胰岛素抵抗国内外未见报道。 目的明确糖尿病时是否存在α细胞对胰岛素的抵抗并探讨α细胞的胰岛素抵抗是否与α细胞上胰岛素受体的改变有关。 方法本研究采用免疫组织化学的双重荧光标记法对正常Wis tar大鼠和大剂量STZ诱导的1型糖尿病大鼠以及高脂饮食加小剂量STZ诱导的肥胖2型糖尿病大鼠胰岛的胰高血糖素、N P Y和胰岛素蛋白质含量进行了测定，同时对α细胞上胰岛素受体的分布和含量进行了初步观察。
结果1.2型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素、N P Y及胰岛素蛋白含量均显著高于对照组，提示胰岛α细胞存在胰岛素抵抗；1型糖尿病大鼠胰岛内胰高血糖素和 NP Y蛋白含量也显著升高，但胰岛素蛋白含量明显低于正常。2.在正常Wistar大鼠和1型糖尿病大鼠、2型糖尿病大鼠胰岛α细胞均有胰岛素受体蛋白表达。 3.大剂量STZ诱发的1型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量比正常Wister大鼠明显减少（下图），受体减少的原因尚不清楚，有待进一步研究。4 .与正常Wister大鼠比较，高脂饮食和小剂量 STZ诱发的2型糖尿病大鼠胰岛α细胞上胰岛素受体的含量也有下降趋势，但无统计学意义，分布无明显变化。 解释1.本研究结果显示 2型糖尿病大鼠胰岛内胰岛素蛋白表达增高的同时，伴有胰高血糖素及 N P Y蛋白和N P Y m R N A表达增高，即高胰岛素不能抑制α细胞胰高血糖素及N P Y的表达，提示胰岛α细胞对胰岛素的抵抗。 2.2型糖尿病大鼠α细胞上胰岛素受体呈减少趋势。 3.α细胞胰岛素抵抗似与α细胞胰岛素受体数目变化无明显关系，是否与胰岛素受体结合能力降低、酪氨酸激酶活性降低或受体后其它环节抵抗有关值得进一步研究。 正常大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400 1型糖尿病大鼠胰岛α细胞胰岛素受体×400
大鼠体外受精技术研究进展 张春燕1, 2，刘丽均2，徐平2，芮荣1* 1南京农业大学动物医学院，南京210095； 2中国科学院上海实验动物中心，上海201615 摘要：目前，体外受精技术在多种哺乳动物已取得成功并获得广泛应用。大鼠由于其本身的特殊性，体外受精及随后的胚胎培养一直比较困难，国内关于大鼠体外受精方面的研究更是少有报道。文章主要从卵母细胞体外培养、精子获能、受精、受精卵体外培养及胚胎移植等方面着手，对国外大鼠体外受精的研究现状作一简要综述。 关键词：大鼠；体外受精；胚胎培养；胚胎移植 体外受精（IVF）是指在体外环境完成精卵结合的过程。体外受精研究的深入开展，不仅加深了人们对受精机制的认识，也为动物繁育、治疗人类不孕症提供了有力的手段。目前，该项技术在小鼠、兔、山羊、猪和牛等动物及人类已日趋成熟，并得到广泛应用；但在国内少有大鼠体外受精的报道。现将该领域的研究现状作一综述，以供参考。 1. 大鼠体外受精研究简史 事实上，大鼠是较早用于体外受精研究的实验动物之一。早在1968年，Toyoda 和Chang 就开始了大鼠体外受精技术的研究，但只能使去除透明带的卵子和精子在体外受精[1]。1973年，Miyamoto和Chang利用从交配雌鼠子宫内收集的精子进行体外受精时发现，子宫内收集的精子可以使透明带完整的卵子受精[2]。从而用实验证明，以前的体外受精之所以不成功，关键是精子在体外培养时没有获能，不具备穿过透明带使卵子受精的能力。1974年，Toyoda 等研制出适合于大鼠精子体外获能的培养液，由此逐步建立起大鼠体外受精技术[3]。 近年来，研究者在精子获能液、胚胎培养液及提高体外受精胚胎质量方面做了大量研究，目的是尽量模拟体内受精和胚胎发育环境，探索大鼠体外受精的最适条件，以提高其胚胎体外生产效率。 2. 研究方法及进展 完整的体外受精技术包括：卵母细胞的体外成熟（IVM）；精子获能；体外受精；早期胚胎培养和移植。而胚胎移植结果仍是鉴定体外受精胚胎质量的最有效证据。 2.1 卵母细胞的来源与体外成熟 2.1.1收集卵巢未成熟卵母细胞 哺乳动物的卵巢上有大量未成熟、处于不同发育阶段的卵母细胞，这部分卵母细胞需经IVM培养后，方可用于体外受精。获得卵巢卵母细胞的方法主要有两种：（1）机械分离法－利用穿刺针将卵巢表面的卵泡刺破，释放出卵母细胞；或是采用切割法，将整个卵巢切碎后收集卵母细胞。穿刺法采卵数量少，切割法获卵数较多，但切割法会产生更多裸卵或造成卵丘细胞损伤。（2）胶原酶消化法－该方法主要用于腔前卵泡卵母细胞的分离。 大鼠大卵泡（直径>350um）卵母细胞的体外培养，通常使用含15％灭活血清的MEM (Eagle’s Minimum Essential Medium)作为培养液，培养12 h后检查成熟发育情况，以生发泡破裂或第一极体排出作为成熟的判断标准。 *通讯作者，Email：rrui@https://www.doczj.com/doc/8516948736.html,。
胰岛是在胰脏腺泡之间的散在的细胞团。 胰岛能分泌胰岛素与胰高血糖素等激素。参考资料：胰岛人类的胰岛细胞按其染色和形态学特点，主要分为A细胞、B细胞、D 细胞及PP细胞。A细胞约占胰胰岛细胞的20%，分泌胰主血糖素（glucagon）；B细胞占胰岛细胞的60%-70%，分泌胰岛素(insulin)；D细胞占胰岛细胞的10%，分泌生成抑素；PP细胞数量很少，分泌胰多肽(pancreatic polyeptide)。一、胰岛素胰岛素是含有51个氨基酸的小分子蛋白质，分子量为6000，胰岛素分子有靠两个二硫键结合的A链（21个氨基酸）与B链（30个氨基酸），如果二硫键被打开则失去活性（图11-21）。B细胞先合成一个大分子的前胰岛素原，以后加工成八十六肽的胰岛素原，再经水解成为胰岛素与连接肽（C 肽）。图11-21 人胰岛素的化学结构胰岛素与C肽共同释入血中，也有少量的胰岛素原进入血液，但其生物活性只有胰岛素的3%-5%，而C肽无胰岛素活性。由于C肽是在胰岛素合成过程产生的，其数量与胰岛素的分泌量有平行关系，因此测定血中C肽含量可反映B 细胞的分泌功能。正常人空腹状态下血清胰岛素浓度为 35-145pmol/L。胰岛素在血中的半衰期只有5min，主要在肝灭活，肌肉与肾等组织也能使胰岛素失活。1965年，我国生化学家首先人工合成了具有高度生物活性的胰岛素，成为人类历史上第一次人工合成生命物质（蛋白质）的创举。（一）胰岛素的生物学作用胰岛素是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素。1．对糖代谢的调节胰岛素促进组织、细胞对葡萄糖的摄取和利用，加速葡萄糖合成为糖原，
贮存于肝和肌肉中，并抑制糖异生，促进葡萄糖转变为脂肪酸，贮存于脂肪组织，导致血糖水平下降。胰岛素缺乏时，血糖浓度升高，如超过肾糖阈，尿中将出现糖，引起糖尿病。2．对脂肪代谢的调节胰岛素促进肝合成脂肪酸，然后转运到脂肪细胞贮存。在胰岛素的作用下，脂肪细胞也能合成少量的脂肪酸。胰岛素还促进葡萄糖进入脂肪细胞，除了用于合成脂肪酸外，还可转化为α-磷酸甘油，脂肪酸与α-磷酸甘油形成甘油三酯，贮存于脂肪细胞中，同时，胰岛素还抑制脂肪酶的活性，减少脂肪的分解。胰岛素缺乏时，出现脂肪代谢紊乱，脂肪分解增强，血脂升高，加速脂肪酸在肝内氧化，生成大量酮体，由于糖氧化过程发和障碍，不能很好处理酮体，以致引起酮血症与酸中毒。3．对蛋白质代谢的调节胰岛素促进蛋白质合成过程，其作用可在蛋白质合成的各个环节上：①促进氨基酸通过膜的转运进入细胞；②可使细胞核的复制和转录过程加快，增加DNA和RNA 的生成；③作用于核糖体，加速翻译过程，促进蛋白质合成；另外，胰岛素还可抑制蛋白质分解和肝糖异生。由于胰岛素能增强蛋白质的合成过程，所以，它对机体的生长也有促进作用，但胰岛素单独作用时，对生长的促进作用并不很强，只有与生长素共同作用时，才能发挥明显的效应。近年的研究表明，几乎体内所有细胞的膜上都有胰岛素受体。胰岛素受体已纯化成功，并阐明了其化学结构。胰岛素受体是由两个α亚单位和两个β亚单位构成的四聚体，α亚单位由719个氨基酸组成，完全裸露在细胞膜外，是受体结合胰岛素的主要部位。α与α亚单位、α与β亚单位之间靠二硫键结合。β亚单位由
孜亚比提片(HZT)对大鼠胰岛细胞功能的影响 发表时间：2011-08-29T11:11:44.513Z 来源：《中外健康文摘》2011年第19期供稿作者：张晓春周燕萍 [导读] 降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。 张晓春周燕萍（宜宾市第二人民医院药剂科四川宜宾 644000） 【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）19-0031-03 【摘要】目的通过胶原酶消化法对大鼠胰腺组织经过短时消化，以获得大量纯度高和功能良好的大鼠胰岛单层细胞，以此为材料研究了孜亚比提片对大鼠胰岛细胞生长和胰岛素释放的影响。方法胰岛细胞分为正常对照组、不同浓度HZT组（20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml）、高糖组、高糖+不同浓度HZT组（20g/ml，40g/ml，80g/ml）、棕榈酸组、棕榈酸+HZT组（80g/ml）、油酸组、油酸+HZT组（80g/ml）。将正常对照组，高糖组（33.3mmol/L），高糖+HZT组（80g/ml）；棕榈酸组(0.25mmol/L)，棕榈酸+HZT组（80g/ml），油酸组 (0.25mmol/L)，油酸+HZT组（80g/ml）分别在37℃,5%CO2分别培养72h和36h，进行葡萄糖负荷试验，放射免疫法检测培养液中胰岛素水平。结果高糖+HZT组（80g/ml），棕榈酸+HZT组（80g/ml）和油酸+HZT组（80g/ml）胰岛素分泌量分别显著高于高糖组，棕榈酸组和油酸组（P<0.01），但均低于正常对照组(P<0.01)。结论降糖孜亚比提片能显著促进胰岛细胞生长和胰岛素分泌，并具有一定保护胰岛细胞功能的作用。 【关键词】胰岛胰岛素细胞培养脂肪酸葡萄糖 本实验对新疆地方中药孜亚比提片模拟在高浓度葡萄糖和高浓度游离脂肪酸环境下对体外原代培养大鼠胰岛细胞分泌胰岛素作用，研究孜亚比提片对胰岛细胞功能的影响，从而为新型抗糖尿病药物研发进行初步探索。 1 材料与方法 1.1材料、试剂及仪器 1.1.1材料一周龄健康Wistar大鼠，购于新疆医科大学动物试验中心。合格证：SCXK（新2010－0001）。 1.1.2主要试剂孜亚比提片（HZT，由新疆医科大学药理教研室提供）、胶原酶Ⅱ型（Collagenase Ⅱ，Gibco公司）、DMEM完全培养基（Gibco公司）、胰岛素放射免疫试剂盒（北京科美东雅）。 1.1.3主要仪器 CO2培养箱、酶标仪、放射免疫γ-计数器等。 1.2方法 1.2.1大鼠胰岛细胞的制备及培养[1] 将一周龄Wistar大鼠, 于75%乙醇浸泡5min，无菌剖腹取出胰脏，于冰冷D-Hank’s液中漂洗，转入青霉素小瓶中，剪成0.1～0.5mm3大小的碎片，用无菌D-Hank’s液反复清洗8～10遍，加入5～10倍体积的无菌Ⅱ型胶原酶消化酶液，37℃水浴振荡消化30min后，将消化液取出移入预先准备好的离心管中，1500转10min离心，取沉淀即为消化下的细胞，加入2mlDMEM培养基，混匀即得细胞悬液，计数,调整细胞浓度为2×105个细胞/ml。 将细胞悬液接种于24孔塑料培养板中，接种18h后，轻轻振荡培养板，利用细胞生长差速法，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，将新培养板中的细胞继续培养48h后，用不含碘乙酸的培养基洗2次，加入培养液继续培养，每隔3d换培养液，获得单层胰岛细胞，备用。 1.2.2孜亚比提片在高浓度葡萄糖环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响[2] 将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含 5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，加入胰蛋白酶短时消化，收集细胞，计数，胎盼蓝染色鉴定胰岛细胞活率，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，高糖组(培养液中含33.3mmol/L葡萄糖)，高糖+孜亚比提片组(20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml)，37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养72h后做胰岛素释放实验。 1.2.3孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响将原代分离细胞在低糖DMEM培养基(培养液中含 5.6mmol/L葡萄糖)中培养7d－11d后形成良好单层胰岛细胞，将胰岛细胞调整为2－5×105个/ml细胞悬液，并分为正常对照组(培养液中含5.6mmol/L葡萄糖)，棕榈酸组(培养液中含0.25mmol/L棕榈酸)，棕榈酸+孜亚比提片组（80μg/ml），油酸组（培养液中含0.25mmol/L油酸），油酸+孜亚比提片组（培养液中含80μg/ml孜亚比提片），37℃,5%CO2 饱和湿度培养箱中培养36h后做胰岛素释放实验。 1.3统计学处理各项数据以x-±s表示，采用ANOVA中LSD-t检验行多组间均数比较，显著性水平为0.05，使用SPSS13.0统计软件包分析。 2 实验结果 2.1孜亚比提片在高浓度葡萄糖（3 3.3mmol/L）环境下对胰岛细胞胰岛素分泌量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，高糖组，以及高糖+三种浓度浓度的HZT组培养基中进行72h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，数据经方差齐性levene检验，低糖刺激时，levene统计量为1.104，sig.=0.384, P>0.05，可认为方差齐。F＝395.642，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义，高糖+HZT(80μg/ml)组与高糖组相比差异显著（P<0.01）。高糖刺激时，levene统计量为1.913，sig.=0.129, P>0.05，可认为方差齐。F＝1056.999，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。这表明，在高浓度葡萄糖环境中，HZT具有保护胰岛细胞免受高糖损伤作用，对胰岛功能具有一定保护作用。 2.2孜亚比提片在高浓度游离脂肪酸(FFAs)环境下对胰岛细胞分泌胰岛素量的影响在胰岛细胞分为正常对照组，棕榈酸组，油酸组以及棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml）培养基中进行36h培养后，葡萄糖负荷实验测定胰岛素释放量，低糖刺激时，levene统计量为1.370，sig.=0.261, P>0.05，可认为方差齐。F＝72.182，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别有显著性意义。高糖刺激时，levene统计量为1.067，sig.=0.406,P>0.05，可认为方差齐。F＝128.782，sig.=0.000,P<0.01,结果表明，各实验组的胰岛素水平的差别，在高糖刺激下棕榈酸+HZT组（80μg/ml）和油酸+HZT组（80μg/ml），胰岛素释放量都分别高于棕榈酸组和油酸组，差异显著（P<0.01），但各试验组胰岛素释放量均小于正常对照组（P<0.01）,这表明，在高浓度游离脂肪酸环境下，HZT仍然具有一定保护胰岛细胞免受游离脂肪酸损伤的作用，对胰岛功能具有一定保护作用。 3 讨论 本实验从新疆地方传统治疗糖尿病药有效成分中选取了孜亚比提片作为试验药物，研究了孜亚比提片对体外原代培养大鼠胰岛细胞胰
鼠类中主要常用实验品种介绍——小鼠 小鼠（mouse），学名：mus musculus,在生物分类学上属脊椎动物门、哺乳动物纲、啮齿目、鼠科、鼷鼠属、小家鼠种。 小鼠品种之一：ICR小鼠 生活习性 生长发育：小鼠在哺乳动物中体型最小，新生仔鼠1.5g左右，45天体重达18g以上。小鼠体重的增长与品系的来源、饲养营养水平、健康状况、环境条件等有密切关系。几个不同品系小鼠的正常生长发育曲线见图 活动规律：小鼠性情温顺，易于捕捉，胆小怕惊，对外来刺激敏感，喜居光线暗淡的环境。习惯于昼伏夜动，其进食、交配、分娩多发生在夜间。一昼夜活动高峰有两次，一次在傍晚后1~2小时内，另一次为黎明前。 采食特性：小鼠门齿生长较快，需常啃咬坚硬食物，有随时采食习惯。 繁殖特性：小鼠成熟早，繁殖力强，寿命1~3年。新生仔鼠周身无毛，通体肉红，两眼不睁，两耳粘贴在皮肤上。一周开始爬行，12天睁眼，雌鼠35~50日龄性成熟，配种一般适宜在65~90日龄，妊娠期19~21天，每胎产仔8~12只。可根据阴道栓的有无来判断小鼠是否发生了交配。 群居特性：小鼠为群居动物，群养时雌雄要分开，雄鼠群体间好斗，群体处于优势者保留胡须，而处于劣势者则掉毛，胡须被拔光。这一现象与因寄生虫性或真菌性皮炎所致的掉毛相区分。 温湿度要求：小鼠对温湿很敏感，一般温度以18~22℃，相对湿度以50％~60％最佳。 常用品系 近交系（inbred strain）: BALB/c小鼠形成了许多亚系，如BALB/cAnN, BALB/cJ，BALB/cCd。BALB/c小鼠基因型为Aabbcc。毛色为白色。其乳腺癌发病率低，但对致癌因子敏感。乳腺肿瘤发生率约为10％~20％。有一定数量的卵巢、肾上腺和肺部肿瘤、白血病的发生。肺癌发病率雌性26％，雄性29％。白血病发病率雌性12％，雄性10％。血压与其他近交系小鼠相比为最高，有自发高血压症。老年小鼠心脏有某些病变，雌雄小鼠常有动脉硬化。几乎全部20月龄的雄性小鼠均有淀粉样变。对鼠伤寒沙门氏菌C`5敏感，对麻疹病毒中度敏感，易患慢性肺炎，对放射线极度敏感。富于网状内皮细胞的器官（如肝、脾）与体重相比，所占比值很大。常用于单克隆抗体和免疫学研究。BALB/c小鼠生产性能好，繁殖期长，一般无相互侵袭习性，比较容易群养。平均寿命：有的记载雄鼠为509天，雌鼠为561天；有的记载雄鼠为648天，雌鼠为816天。平均体重252日龄雄鼠为30 g，雌鼠为28g。 C57BL小鼠基因型为aaBBCC。毛色为黑色。C57BL小鼠对Graffi 白血病因子较敏感。对麻疹病毒敏感。乳腺肿瘤发生率低。网状组织肿瘤自发率，雌鼠少于10％，雄鼠为4％。较老的动物中有垂体腺瘤发生。老年性肾硬化症常见。有些亚系有遗传性的脑积水。C57BL 小鼠对化学致癌物诱导作用敏感性低，但全身经放射线照射后，淋巴瘤发生率达90％~100％。腰椎六个，有许多骨骼方面的变异。亚系C57BL/He和C57BL/An，与其他的C57BL和C58不同，它们有元素Ce的高效肝分解酶。C57BL小鼠适于穴居，非地面生活的小鼠，对逃避侵袭的反应性不敏感。于无特殊病原体（SPF）环境中，在用代乳鼠喂养条件下的平均寿命，雌鼠为580天，雄鼠为645天。 C3H/He小鼠：C3H小鼠是Strong于1920年用Bagg白化雌鼠与DBA雄鼠杂交后经连续全同胞近交而育成。C、CBA、CH1和C121等品系亦出于本杂交组合。1930年自Strong处转到Andervont（An）处。经近交繁殖至35代时，于1941年到Heston（He）处，成为C3H/He。到1975年时，繁殖达135+代。目前C3H/He小鼠已在各地大量使用，形成了许多亚系，如C3H/HeN，C3H/HeJ等。C3H/He 小鼠基因型为AABBcc。毛色为白色。其14月龄小鼠自发肝癌发病率达85％。自发乳腺肿瘤发病率：繁殖雌鼠平均达90％（318日龄雌鼠为100％，234日龄繁殖雌鼠为67％），272日龄繁殖雄鼠为84％。补体活性高。168日龄平均体重：雌鼠为32 g，雄鼠为34g。 封闭群（closed colony），又称远交群（outbred stock）：