生物技术制药实验报告
人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的
表达与纯化
生物与制药工程学院
罗飞
2016年7月2日
目录
第一节引言 (4)
1.1表皮生长因子(EGF)概述 (4)
1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质 (4)
1.3 EGF的生物学效应及应用 (5)
1.4 本实验课程设计的目的与内容 (6)
第二节EGF基因的合成与转化表达 (7)
2.1.实验原理 (7)
2.2实验材料与方法 (8)
2.2.1 试剂材料及试剂 (8)
2.2.2 仪器设备 (8)
2.3 实验方法 (9)
2.3.1 试剂及培养基配制方法 (9)
第三节、实验前的准备 (9)
3.1目的基因hEGF的设计与合成 (9)
3.2载体选择 (11)
3.2.1载体选择主要考虑下述3点： (11)
3.3酶切位点设计 (12)
3.3.1载体的结构 (12)
3.2.2酶切位点设计注意以下 (13)
3.2.3 酶切位点的确定 (13)
3.3 引物设计 (14)
3.3.1 PCR引物设计的基本原则 (14)
3.3.2 引物设计 (15)
第四节、实验篇 (16)
4.1整体实验过程 (16)
4.1.1实验整体流程： (16)
4.1.2 简化后的并行流程 (16)
4.2、小组结果展示 (17)
4.2.1大肠杆菌转化实验结果 (17)
4.2.2 XL10质粒电泳结果显示 (18)
4.2.3 单酶切实验结果显示 (18)
4.2.4 PCR结果显示 (19)
4.2.5 SDS-page 电泳结果展示 (20)
4.3、个人负责实验模块 (20)
4.3.1 提取重组质粒 (20)
4.3.2 电泳检测质粒DNA (21)
4.3.3 双酶切并检测 (21)
4.3.4 EGF基因的PCR扩增验证 (21)
五、小组讨论篇 (23)
5.1 质粒电泳检测讨论 (23)
5.2 酶切条件讨论 (24)
5.3 PCR体系的讨论 (26)
5.4 SDS-page电泳讨论 (28)
六、实验总结 (29)
6.1 理论与技能收获 (29)
6.1.1理论收获 (29)
6.1.2 实验技能的收获 (30)
6.2 科学兴趣的向往 (31)
第一节引言
1.1表皮生长因子(EGF)概述
生长因子在人体中的信号传导部分起着关键的作用，它可通过与细胞表面的蛋白质受体结合，参与细胞的各种生命活动。生长因子可以是维生素，碱基，多肽等。所研究的表皮生长因子，就是一种人机体细胞合成的一种多肽。在生物体内，每个细胞的生长状态不同，在不同组织中的细胞的表皮生长因子参与生长、增值、死亡等过程。
目前，表皮生长因子已得到广泛应用。在许多公司已经开始研发甚至是生产出EGF，多种疾病的诱发原因很多，我们可以用EGF来进行详细的诊断。之后致病的查出原因，给病人减少心理的压力，带来一线生机。在经过强烈的光刺激后，尤其是激光，人们的眼部会有很大的损伤，最严重的就是眼角膜损伤，无法修复。人体在经过紫外线的照射下皮肤的损伤以及高温、蒸气、火等造成的皮肤大面积与原来的不一样的皮肤。对于这些伤害，我们可使用含有可促进人体表皮细胞的新陈代谢EGF的药膏或者是化妆品，使皮肤变得如初。
在最早研究表皮生长因子的时候就只是证明是多肽，还没有命名。是由Cohen在1960年，在提取神经生长因子时，意外发现除此种物质以外的一种多肽[2]。多个科学家对其充满好奇心，在之后的十年内，Savage真正的研究清楚，命名此种多肽为表皮生长因子。
1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质
不同的生物中，表皮生长因子的蛋白一级结构不同。研究表明家族成员一般在多于50个氨基酸，而少于80个氨基酸，与我们所熟悉的胰岛素一样，表皮生长因子是由前体加工成的成熟的多肽，在具有生物活性[4]。如人体中的表皮生长因子是由53个氨基酸组成。
整个hEGF分子由两个结构域组成。残基1～33，形成N一端结构域；34～53为C一端结构域；成熟hEGF的序列位于单链多肽的C一末端附近，由53个氨基酸残基组成，并且其C一端和N一端分别由Arg／Asp ／Arg／His邻接，故
成熟的EGF分子，可以经专一性Arg内肽酶的作用，从前体释放[6]。二级结构上存在着反平行β片层结构是EGF骨架的常见结构，N一端和C一端在整个三维结构中不会发生什么变动，维持此结构的是由三个二硫键[7]（由于6个半胱氨酸的存在），因此分子在一定的条件下生物活性表现“顽强”[8]。我们知道同一种酶在不同的生物中有不同的生物效应，同时不同的酶在不同的生物中会有相同的生物效应，hEGF也会有此种现象。hEGF-β和hEGF-γ是hEGF的两种形式，在分子结构和同源性中相似度高，在蛋白中一级结构中即使是在C末端的某个位置上仅仅只有一个Arg的差别，当它们作用于不同细胞中的同一个受体，在生物体中的作用是一样的[9]。
与许多古细菌中的酶一样如生活在温泉中古细菌，人体表皮生长因子在100℃煮沸达到30 min，仍然能保持结构、活性等稳定性；许多蛋白质在具有强列的催化效率的酶如胰蛋白酶作用下肽链被断掉，而表皮生长因子耐它的消化。EGF在狭小的活性微环境中，由于常见的丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸[11]会提供作用基团，表皮生长因子才能与受体结合反应。多肽具有N端和C端，有的在生物活性中不起作用，有的是至少有一段起作用，据研究表明，表皮生长因子结构的两端在细胞的生长中都很重要。
1.3 EGF的生物学效应及应用
细胞通过在信号传导的过程中有多种方式包括直接或间接的接触。自分泌或旁分泌是hEGF作用的方式，在生物体内它亦可以与其他的因子结合作用于细胞。EGF 生物效应很多，如下所述：
1.来源于人体的不同种组织的上皮细胞为了适应人体的需要，从基因上赋予它很高分裂效率。EGF在其中起着关键性的作用。首先人体的皮肤表层会产生脱皮现象，证明有大量的细胞死亡。同样，皮肤的表面受到伤害在愈合的过程会结痂，新的皮肤又长出来了。EGF在创伤修复中起着功不可没的作用，在肝脏、肠道、角膜、胃等多种组织创伤的恢复的试验研究[12]取得重大的突破，在临床上已经运用于烧伤、烫伤、创伤及外科手术伤口的愈合，使病人的痛苦少一点。
2.眼睛是我们重要的部分，眼睛的部分受到伤害特别是眼角膜，是我们最担心的。在现实生活中，很多病人由于眼角膜的伤害再加上眼角膜的捐献者少之又少无法得到修复。实验研究结果表明，适宜浓度的hEGF滴眼液，能通过刺激角膜上皮细胞及基质成纤维细胞的增生与迁移和促进细胞外基质与胶原纤维增生，使损伤修复速度加快，从而辅助修复角膜[13]。
3. 研究表明，多数肿瘤的发生、发展，与EGF之间存在一定的关系。细胞中存在原癌基因和抑癌基因，癌变可能由于这些基因的突变细胞，使细胞生长不受控制。肿瘤细胞表面的EGF受体属于多聚体受体，多个EGF的表达之后与受体结合，使细胞不停的生长，这样，与胃癌、乳腺瘤、黑色素瘤的恶性程度增加[14]。
4.是药三分毒，我们吃的要中有些药对人的胃刺激很大。实验表明：在人的胃溃疡中受损伤的细胞与保护药硫酸铝相结合，可以使溃疡有较高浓度的内源性EGF表达，从而促进溃疡愈合。
1.4 本实验课程设计的目的与内容
1.实验课程设计目的：
本实验课程设计重在学生自己动手设计实验，老师起辅助指导作用，旨在训练学生对专业综合知识的运用。学生需查阅文献和数据库来设计与理解设计方案，主要考察学生对基因分子克隆、表达、发酵和蛋白分离知识的理解与应用，以培养学生的专业综合知识应用与实验动手操作能力。
2.实验课程设计内容：
以表皮生长因子（EGF）为例，让学生从基因的设计入手，合成出完整的EGF基因，然后表达并纯化出该EGF蛋白。主要内容简述如下：（1）通过NCBI数据库网站设计出完整的EGF基因，并设计出引物；
（2）pET-28a衍生质粒为载体、将EGF基因转化如大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌中，并通过双酶切和PCR挑选验证转化子；
（3）诱导重组大肠杆菌表达hEGF蛋白；
（4）经超声破碎提取、SDS-PAGE电泳检测
（5）采用镍柱纯化，进而获取hEGF蛋白纯品。
第二节EGF基因的合成与转化表达
2.1.实验原理
人源表皮生长因子（hEGF）来源大致有三个方向：一是来源于人体代谢物的提取；二是来源于化学合成；三是来源于基因工程生产技术，这也是近些年来可以大量生产获得hEGF的方法。前两种方式得到的产品都只有很低的纯度，并不能在实际应用中发挥很大的价值。。
目前已知的研究中，hEGF基因在大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和酵母以及动植物等宿主系统中已经成功克隆表达。以pET等衍生质粒为载体、以BL21(DE3)为表达宿主菌的表达系统是发展较成熟的大肠杆菌表达系统之一, 它采用T7 强启动子, 在IPTG 诱导下, 启动外源基因的高转录。pET载体有pET32a（±）和pET28a （±）等系列。下图1为PET28a质粒载体的物理图谱。
2.2实验材料与方法
2.2.1 试剂材料及试剂
琼脂粉、NaCl、蛋白胨、酵母浸粉、1 mol/L NaOH溶液、双蒸水、10 mg/mlKana 母液、PET-28a菌种、E.coli DE3菌种、酒精、含质粒载体的PET-28a菌液、小型质粒快速提取试剂盒（离心柱型）、Goldview、BIOWEST AGAROSE、loading buffer（6×）、Hind ⅢDNA Marker、TAE电泳缓冲液（1×）、0.1 mol/L CaCl2溶液、Zde I酶(10U/μl)及其10× Buffer、Xhol酶(10U/μl)及其Buffer D 10×、GenClean 柱式琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒、5 U/µlTaqDNA聚合酶、PCR缓冲液（10×，含Mgcl2）、dNTP混合物、上游引物、下游引物、无菌双蒸水、1 mol/l 的异丙基硫代半乳糖苷（TPTG）、PBS（1×）、SDS-PAGE蛋白凝胶配制试剂盒：30% Acr-Bis（29:1）、1.5 M Tris-Hcl，pH 8.8、10% SDS、10% 过硫酸铵(AP)溶液、TEMED、1 M Tris-Hcl，pH6 .8；2×上样缓冲液、1× Tris-甘氨酸电泳缓冲液、考马斯亮蓝染色液、脱色液Ⅰ（45% 甲醇：10% 乙酸：45% 蒸馏水）、脱色液Ⅱ（5% 甲醇：7% 乙酸：88% 蒸馏水），双蒸水
2.2.2 仪器设备
试管、量筒、天平、药匙、称量纸、培养皿、高压蒸汽灭菌锅、恒温生化培养箱、涂棒、接种环、酒精灯、pH试纸、记号笔、麻绳、棉花、报纸、镊子、滴管、10 ml移液管、恒温摇床、Eppendorf管、微量移液器、枪头、高速离心机、电泳仪、电泳槽、水平凝胶电泳槽和梳子以及其制胶模块、250 ml锥形瓶、微波炉、凝胶成像系统、分光光度计、制冰机、冰盒、恒温水浴锅、超净工作台、水漂、0.2 mlPCR微量管、双面微量离心管架、PCR仪、紫外检测仪、脱色摇床、台式冷冻离心机、垂直电泳槽及配套的玻璃和密封条、梳子、1.5 ml微量离心管、搪瓷盘
2.3实验方法
2.3.1 试剂及培养基配制方法
1. 卡那霉素母液（10 mg/mL）的配制：称取10 mg卡那霉素溶解于1ml无菌水中，然后采用无菌过滤器过滤后分装于Eppendorf小管中。
2. 培养基的配制
（1）LB培养基：配方(固体培养基加琼脂粉）
含卡
那霉
素
（Ka na）LB 固体培养基：将配好的LB 固体培养基高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Kana 储存液，使终浓度为50µg/ml，摇匀后铺板。
（3）含Kana 的LB液体培养基：每15mL LB液体培养基分装至试管中，高压灭菌后冷却至60℃左右，加入Kana 母液，使终浓度为50µg/ml）
第三节、实验前的准备
3.1目的基因hEGF的设计与合成
（1）目的基因获取
登陆GenBank查询
获得的目的基因片段为：aatagtgactctgaatgtcccctgtcccacgatgggtactgcctccatgatggtgtg tgc
atgtatattgaagcattggacaagtatgcatgcaactgtgttgttggctacatcggg gag
cgatgtcagtaccgagacctgaagtggtgggaactgcgc
3.2载体选择
3.2.1载体选择主要考虑下述3点：
【1】构建DNA重组体的目的，克隆扩增/表达表达，选择合适的克隆载体/表达载体。
【2】载体的类型：
（1）克隆载体的克隆能力－据克隆片段大小（大选大，小选小）。如<10kb选质粒。
（2）表达载体据受体细胞类型－原核/真核/穿梭，E.coli/哺乳类细胞表达载体。（3）对原核表达载体应该注意3点：
①选择合适的启动子及相应的受体菌；
②用于表达真核蛋白质时注意克服4个困难和阅读框错位；
③表达天然蛋白质或融合蛋白作为相应载体的参考。
【3】载体MCS中的酶切位点数与组成方向因载体不同而异，适应目的基因与载体易于链接，不产生阅读框架错位。
选用质粒（最常用）做载体的4点要求：
①选分子量小的质粒，即小载体（1－1.5kb）→不易损坏，在细菌里面拷贝数也多（也有大载体）；
②一般使用松弛型质粒在细菌里扩增不受约束，一般10个以上的拷贝，而严谨型质粒<10个。
③必需具备一个以上的酶切位点，有选择的余地；
④必需有易检测的标记，多是抗生素的抗性基因，不特指多位Ampr（试一试）。无论选用哪种载体，首先都要获得载体分子，然后采用适当的限制酶将载体DNA 进行切割，获得分子，以便于与目的基因片段进行连接。
根据本实验要求和目的：通过基因工程技术，将人表皮生长因子基因通过转化、诱导促使大肠杆菌表达人的表皮生长因子，最终分离纯化得到目的物，因此应该选择表达载体，使最终产物方便提纯的载体如含有His-tag。
3.3酶切位点设计
3.3.1载体的结构
图2-1
图2-2
3.2.2酶切位点设计注意以下
（1）酶切位点的设计要使表达通读
（2）前后位点尽量选用相同的酶切buffer和温度
（3）用于表达，一定要保证读码框的正确，是否加起始密码子终止密码子都要根据载体的情况认真考虑。
（4）两个酶切位点最好远点大概20BP左右，不然不好切不好连酶切位点尽可能选一些效率高的酶，否则你得加一长串的保护碱基
3.2.3酶切位点的确定
经过Blast发现Xho I与Nde I这两个酶切位点在目的基因中都没有；根据网上相关资料Xho I与NdeI具有相同的缓冲溶液都为10xH buffer；具有相同的酶切温度都为37℃；根据图2-1可以看出两个酶切位点相隔70bp ，相隔距离足够远；考
虑到目的产物是利用Ni+亲和层析的方式提取，需要6xHis-tag标签，从图2-2可以看出Xho I酶切位点后紧跟着一个6xHis-tag标签，这个满足后续的分离纯化；选用Xho I与Nde I位于启动子和核糖体结合位点下（rbs），能够保证目的基因被转录出；Nde I的酶切位点为5' CA^TATG 3'，其ATG进转录和翻译对应着起始密码子AUG，可以避免使目的产物发生移码现象，保证了读码框正确性，所以选择了Xho I与Nde I这两个酶切位点，来构建基因表达载体。
3.3 引物设计
3.3.1 PCR引物设计的基本原则
1、引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；
2、引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；
3、引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右，至少要在55-80℃之间，Tm 值曲线以选取72度附近为佳，5'到3’的下降形状也有利于引物与模板的结合；
4、ΔG值（自由能）反应了引物与模板结合的强弱程度，3'端的ΔG值相对要低，且绝对值不要超过9，否则不利于正确引发反应，3'末端双链的ΔG值在0--2kcal/mol时，PCR产量几乎达到百分之百，但在-6时只达到40%，-8时少于20%，-10时接近于0；
5、错配率一般不要超过100，否则会出现非目的条带。但对于某些特定的模板序列，还应结合比较其在正确位点的引发效率。如果两者相差很大，比如在正确位点的引发效率为340以上，而在错误位点的引发效率为110，并且不好找到其他更合适的引物，那么这对引物是可以接受的；
6、Frq曲线为Oligo6软件新引进的一个指标，解释了序列片段存在的重复几率大小，选取引物时，应该用Frq值相对较低的片段；
7、引物二聚体及发卡结构的能量的绝对值一般不要超过4.5，否则容易产生引物二聚体而且会降低引物浓度从而导致PCR不能正常发生；
8、3'端最好不要是连续碱基，GGG或CCC会导致错误的引发，同时3'端最后一个碱基最好不要是A或T，若是，会导致错配；
9、以公式Tm=4*（G+C）+2*（A+T）-5计算Tm值，也就是退火温度。选择较低Tm值的引物的退火温度为反应的退火温度，最好保证每个引物的Tm值相匹配，且在70-75℃范围内；
10、模板与稳定性较小的引物之间的Tm的差异越小，PCR的效率越高。因为解链温度也取决于它的长度，如果期待的产物长度等于或小于500bp，选用端的引物（16-18bp），如果产物长5kb，则用24bp的引物；
11、在DNA测序和PCR中最好用5'末端稳定（GC含量多），而3'端不稳定（AT 含量多）的引物，这种引物的结构可以有效地消除假引发反应；
12、引物和产物之间的Tm值相差别太大，20摄氏度范围内最好。
13、对引物的修饰一般在5'端进行，例如加酶切位点，加酶切位点的同时要根据需要添加保护碱基。
3.3.2 引物设计
(1).利用Primer6.0软件进行引物：验证实验引物
F：5’-AGTGACTCTCAATGTCCC-3’
R: 5’ -TTCCCACCACTTCAGGTCTC-3
其评分为poor，但是该序列只有CDR区，设计引物最好从头开始，不然在PCR 的过程中目的基因会被变短。
所以引物为：
Forward：5’- CGC CATATG AAT AGTGACTCTCAATGTCCC-3’
Reverse: 5’ –CCG CTCGAG CACGAG TTCCCACCACTTCAGGTCTC-3’
第四节、实验篇
4.1整体实验过程
4.1.1实验整体流程：
（1）利用试剂盒进行XL10质粒提取
（2）对XL10的质粒进行电泳检验、双酶切检验和PCR验证
（3）大肠杆菌（DE3）感受态的制备
（4）大肠杆菌DE3的转化
（5）转化结果结果检验
（6）转化菌种IPTG诱导表达
（7）诱导前后SDS-Page电泳鉴定
（8）利用镍柱对蛋白质进行纯化，得到目的产物
4.1.2简化后的并行流程
由于本实验为一个大型实验，时间限制，我们分组进行实验，老师提供了XL10，已经转化好的DE3和空宿主DE3，所以实验可以进行小组分配，多个模块同时进行，加快实验进度。
4.2、小组结果展示
4.2.1大肠杆菌转化实验结果
转化结果成功，在含卡拉的培养基上成功生长
4.2.2 XL10质粒电泳结果显示
跑出的结果为质粒提取成功，条带大小位于5000bp—6000bp 第一个条带为DＬ500，最后一个条带为ＤＬ10000其他均为所提质粒
4.2.3单酶切实验结果显示
从左到右依次为：DL10000，空载体，提取质粒，提取质粒
单酶切成功：提取质粒含有目的基因，而空载体不含有目的基因，都经单酶切后，在电泳中的迁移速度不一样，空载体要大于所提取的质粒。
4.2.4PCR结果显示
从左到右依次为：PCR产物，PCR产物，PCR产物，DL500
PCR条带在maker的150到200条带见
4.2.5 SDS-page电泳结果展示
实验结果失败，分析见小组讨论
4.3、个人负责实验模块
个人主要负责第一个大模块——XL10，从质粒抽取到最终的PCR酶切验证。验证质粒是否提取成功，验证目的基因是否存在与载体上。
4.3.1提取重组质粒
（1）在灭菌后的无菌操作台中，取15ml分装至试管中的、灭菌后的LB液体培养基，加入卡那霉素母液150µL，保证它在培养基中为50µg/mL。
（2）将含目的基因的重组质粒的穿刺菌XL10接种无菌LB培养基（含50µl/mL 卡那霉素），37.C摇床过夜培养（不能超过15h）。
（3）取收取的2ml 的菌液于2mlEp管中，用于提取质粒。
（4）提取质粒，按质粒小量制备试剂盒操作说明书操作。
《生物制药技术》实验指导 实验一金霉素链霉菌培养基的制备 实验目的： 1、学会培养基的配制 2、掌握灭菌方法。 实验原理： 金霉素链霉菌（Streptomyces aureofaciens）亦称“金色链霉菌”，放线菌门(Actinobacteria)，放线菌纲(Actinobacteria)，放线菌目(Actinomycetales)，链霉菌科(Streptomycetaceae)，链霉菌属(Streptomyces)。在固体培养基上产生金色色素，故名。其菌落为草帽型, 菌落直径一般为3～5毫米, 表面较平坦, 中间有隆起。菌落开始为白色，长孢子后变青色。抗菌素工业上用以生产金霉素。 放线菌是一类介于细菌与真菌之间的单细胞微生物。放线菌在土壤中分布最多，大多数生活在含水量较低、有机质丰富和微碱性的土壤中。多数情况下，泥土中散发出的“泥腥味”就是由放线菌中链霉菌产生的土腥素造成的。放线菌大都好氧，属于化能异养，菌丝纤细，分枝，常从一个中心向周围辐射生长。因其生长具辐射状，故名放线菌。放线菌能像真菌那样形成分枝菌丝，并在菌丝末端产生外生的分生孢子，有些种类甚至形成孢子囊，因而曾被误认是真菌。但其菌落较小而致密，不易挑取。不少菌种在医药、农业和工业上广泛应用，可产生抗菌素，现已发现和分离出的由放线菌产生的抗生素多达4 000多种，其中，有50多种抗生素已经广泛地得到应用，如链霉素、红霉素、土霉素、四环素、金霉素、卡那霉素、氯霉素等用于临床治疗人的多种疾病；有些可生产蛋白酶、葡萄糖异构酶；有的用于农业生产，如灭瘟素、井冈霉素、庆丰霉素等。 四环素类抗生素是由链霉菌生产或经半合成制取的一类广谱抗生素。抗菌谱极广，包括革兰氏阳性和阴性菌、立克次体、衣原体、支原体和螺旋体。品种主要包括金霉素、四环素和土霉素。 器材： 1ml移液枪；铝锅；电炉 试剂： NaBr母液（0.1g／ml） KCl母液（0.1g／ml） M-促进剂母液（2.5mg／ml） 实验步骤： 1．种子培养基 种子培养基(g／L)：可溶性淀粉40，黄豆饼粉20，酵母粉5，蛋白胨5，CaCO34，(NH4)2SO4 3，MgSO4·7H2O 0.25，KH2PO4 0.25。 先称取黄豆饼粉20g，单独煮沸10分钟，加入少量凉水降温，4层纱布压榨取汁，与其它称好的各成分混合，定容至1L。 每50ml分装到250ml三角瓶中，每组2瓶。 2．定向发酵培养基
生物技术制药实验报告 人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的 表达与纯化 生物与制药工程学院 罗飞 2016年7月2日
目录 第一节引言 (4) 1.1表皮生长因子(EGF)概述 (4) 1.2 表皮生长因子(EGF)的结构与性质 (4) 1.3 EGF的生物学效应及应用 (5) 1.4 本实验课程设计的目的与内容 (6) 第二节EGF基因的合成与转化表达 (7) 2.1.实验原理 (7) 2.2实验材料与方法 (8) 2.2.1 试剂材料及试剂 (8) 2.2.2 仪器设备 (8) 2.3 实验方法 (9) 2.3.1 试剂及培养基配制方法 (9) 第三节、实验前的准备 (9) 3.1目的基因hEGF的设计与合成 (9) 3.2载体选择 (11) 3.2.1载体选择主要考虑下述3点： (11) 3.3酶切位点设计 (12) 3.3.1载体的结构 (12) 3.2.2酶切位点设计注意以下 (13) 3.2.3 酶切位点的确定 (13) 3.3 引物设计 (14) 3.3.1 PCR引物设计的基本原则 (14) 3.3.2 引物设计 (15) 第四节、实验篇 (16) 4.1整体实验过程 (16) 4.1.1实验整体流程： (16) 4.1.2 简化后的并行流程 (16) 4.2、小组结果展示 (17) 4.2.1大肠杆菌转化实验结果 (17) 4.2.2 XL10质粒电泳结果显示 (18) 4.2.3 单酶切实验结果显示 (18) 4.2.4 PCR结果显示 (19) 4.2.5 SDS-page 电泳结果展示 (20) 4.3、个人负责实验模块 (20) 4.3.1 提取重组质粒 (20)
试验中需要查阅的问题以及答案 1 脱钙：（1）盐酸的理论用量（2）所用盐酸的浓度，及反应时间，并说明其对最终质量有什么影响？ 2 脱乙酰：（1）甲壳质（2）壳聚糖是甲壳质的一种衍生物，它具 有什么特点或特征。《易溶于酸的溶解性，抗菌性，成膜 性，成纤性，吸附剂等等》 （3）用途（4）衍生物？糖性质 （5）工艺参数：氢氧化钠的浓度，时间，浓度，产品质量。 （6）质量指标：《分子量》,《脱乙酰度》 （7）如何制取高脱乙酰度的壳聚糖？ （8）如何获得低分子量的，如壳寡糖？ 3 脱蛋白：（1）如何检验脱蛋白是否完全？ （2）蛋白质如何回收？ 4 脱色：（1）氧化脱色《高锰酸钾，过氧化氢》 (2)如何除掉过量的氧化剂？ 5 废水的处理问题？ 6 （1）在脱乙酰度中，除了用盐酸和氢氧化钠酸碱滴定的方法，还有没有其他方法？ (2) 分子量的测试方法1%的溶液（1%的乙酸），测旋转粘度。
在其过程中不能加热，为什么？ 7 脱钙：怎么检测脱钙完全，如何回收钙？ ㈠ .脱蛋白是否完全的检验的检验 双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成. 双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1 g/mL的水溶液； 双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01 g/mL的水溶液。 双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在。 具体方法是：先将双缩脲试剂A加入组织样液，摇荡均匀（必须营造碱性环境），在加入双缩脲试剂B，摇荡均匀。如果组织里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫红色的化合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。 双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。 双缩脲试剂本是用来检测双缩脲，因蛋白质中也有-CONH-基也可用于检验蛋白质，与蛋白质接触后的颜色呈紫色。 取产品10g，加1mol/L 氢氧化钠溶液回流煮沸2小时，离心。取上层清液加双缩脲试剂，若不显紫红色，可证明本工艺条件脱蛋白符合要求。 ㈡蛋白质的回收 采用100硫酸铝和100硫酸铁还40壳聚糖符合絮凝剂，在烧杯中加入蛋白废水，迅速加入絮凝剂，以300快速搅拌一分钟，再以80中速搅拌五分钟，静置，沉淀。 ㈢如何出掉过量的过氧化氢？ 不能加热，可以用亚硫酸钠或者草酸出去过量的过氧化氢。 ㈣分子量的测试方法1%的溶液（1%的乙酸），测旋转粘度。在其过程中不能加热，为什么？ 加热对粘度有影响，如果加热糖苷键也容易断裂 ㈤脱钙：怎么检测脱钙完全，如何回收钙？ 向蟹壳上滴适量盐酸是否有气泡冒出，如有则没处理完全。 向含有氯化钙的废液中加入碳酸钠，沉淀得生物钙
生物技术制药实验 武汉大学药学院生物技术实验室 湖北?武汉rMA?i ndim ]H wit HI dWwwi *■!电 N* IIK M**-
目录 实验一质粒的小量制备 (2) 实验二质粒电泳鉴定 (4) 实验三感受态细胞的制备和转化 (5) 实验四目的基因的表达及表达产物的初步提取 (8) 实验五蛋白质纯化一盐析沉淀法 (10) 实验六凝胶过滤层析 (14) 实验七蛋白质免疫印迹实验（）16实验八结合物的过碘酸钠交联法 (19)
实验一质粒的小量制备 目的】学会最常用的碱裂解法小量制备质粒的方法。 原理】 根据共价闭合环状质粒与线性在拓扑学上的差异来分离。在12.0~12.5 这个狭窄的范围内，线性双螺旋结构解开而被变性。尽管在这样的条件下共价闭合环状质粒也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入 4.8 的乙酸钾高盐缓冲液使恢复中性时，共价闭合环状质粒复性快，而线性的染色体复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子等发生共沉淀下去而被去除。 器材】超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器， 微量移液器， 1.5 微量离心管，恒温摇床，试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。 试剂】 28a 质粒载体菌, 培养基1000（含10 卡那霉素），葡萄糖溶液（溶液I ），溶液（溶液），溶液（ 4.8 ）（溶液），A，95%乙醇，70%乙醇，（8.0 ）。 实验准备】 1. 配制卡那霉素储存液（无菌水配制10，分装后-20 ° C 保存）。 2. 配制培养基
（胰化蛋白胨10g,酵母提取物5g, 10g加200双蒸水搅拌完全溶解，用约200mL5N 调至7.0 ，加双蒸水至1L，121°C 灭菌20）。 3. 溶液I（50 葡萄糖，25 8.0 ，10 8.0 ）。 溶液I可成批配制，每瓶约100,在高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4C。 溶液（0.2 ，1% ）； 溶液（60 5 ，加冰乙酸调 4.8 ，补双蒸水至100）。 4. 70% 乙醇（-20 ° C保存）。 5. （10 8.0 ，1 ，8.0 ）。 6. 试管洗净并塞上棉塞，1.5 离心管装入灭菌盒，移液器吸头装入相应的吸头盒，高压灭菌（121° C，30 ）。 操作步骤】 1. 在超净工作台中取5 （），加入灭菌的试管中。 2. 取出保存的携带28a 质粒的菌种, 在超净工作台上用接种环移 取少量菌种至 5 无菌的培养液（含10 卡那霉素）中，37° C 摇床中振荡培养20h。 3. 取1 的菌液至1.5 离心管中，12000 离心1，弃上清液（尽 量弃干净），留沉淀备用。 4. 在沉淀中加入预冷的100ml 溶液I ，盖上盖后立即在涡旋混合器上混匀，室温下静置5。须确使细菌沉淀在溶液I中完全分散。 5. 加入200ml溶液，盖紧管口，快速颠倒离心管5次。应确保离
关于生物技术综合实验报告 生物技术综合实验 甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达 学生：学号： 同实验者： 谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。 实验一甘薯叶片RNA提取 一、实验目的 1. 了解真核生物RNA提取的原理； 2. 把握Trizol提取的方式和步骤。 二、实验原理 Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂，在匀浆和裂解进程中，能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。TRIzol 的要紧成份是苯酚。苯酚的要紧作用是裂解细胞，使细胞中
的蛋白，核酸物质解聚取得释放。苯酚虽可有效地变性蛋白质，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。%的8－羟基喹啉能够抑制RNase，与氯仿联合利用可增强抑制作用。异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的蛋白质变性剂，可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失，致使细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离。β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。在氯仿抽提、离心分离后，RNA处于水相中，将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。 三、实验材料 1. 材料 甘薯叶片，品种为徐薯18 2. 试剂 ①无RNA酶灭菌水：加入%的DEPC，处置留宿后高压灭菌； ②Trizol试剂； ③氯仿； ④异丙醇、75％乙醇； ⑤TBE缓冲液； ⑥上样缓冲液
生物技术制药综合实验的探索与实践 生物技术制药是近年来发展迅速的一个领域，它通过利用生物学，化学和工程技术， 开发生产用于预防、诊断和治疗疾病的各种药物。随着生物技术在医药领域的广泛应用， 生物技术制药综合实验成为重要的实践环节，对于培养学生综合应用所学知识和技能具有 重要意义。本文就生物技术制药综合实验的探索与实践进行探讨。 一、实验内容 生物技术制药综合实验是通过综合运用分子生物学、细胞生物学、生物化学和药理学 等学科的知识和技能，进行药物的研发、生产、质量控制和临床应用等方面的实验。实验 内容涵盖了多个方面： 1. 分子克隆实验：通过对目标基因的克隆和表达，构建表达载体、诱导表达所需蛋 白等实验。 2. 重组蛋白的纯化与分析：通过对表达的蛋白进行纯化，然后对其进行质量检测和 功能分析，进行药物的筛选与研发。 3. 细胞培养与基因转染：进行细胞的分离、培养和传代，以及对基因的转染和表达，为药物的生产和活性评价提供实验数据。 4. 药物质量控制与临床评价：对已研发的药物进行质量控制实验，同时进行对相关 细胞和动物模型的实验验证，为临床应用提供科学依据。 以上实验内容不仅覆盖了生物技术制药的研究、生产和质量控制等方面内容，而且涉 及到了实验技术高度地操作和综合实验的应用。生物技术制药综合实验在培养学生实际动 手操作能力和科学研究能力等方面有着重要的作用。 二、实验设计 为了更好地完成生物技术制药综合实验，需要设计合理的实验方案和实验流程。实验 方案的设计要充分考虑到学生实际技能和实验设备条件，结合学生的专业背景和实际需求，确定实验的目的和内容。在实验流程的设计上，要合理安排实验时间和操作步骤，确保实 验的顺利进行。还要充分考虑实验的安全性和环保性，确保实验过程中不会对实验人员和 环境造成危害。还需要对实验过程和实验结果进行详细的记录和分析，及时总结实验经验 和教训，为今后的实验提供参考。 三、实验条件 生物技术制药综合实验需要较为完善的实验条件和设备。需要有足够的实验室场地和 实验室设备，包括分子生物学实验设备、生物化学实验设备、细胞生物学实验设备等。实
生物工程工艺综合性实验报告 院（系）：城市建设学院 专业班级：生物工程1101 学生姓名：马雪文 学号：20111171041 指导教师：李世杰 20 14 年 5 月 26 日至20 14 年 6 月 15 日
发酵工艺综合性实验指导书 一、实验目的 微生物发酵技术是生物工程最核心的技术，微生物发酵按其对 氧的需求可分为好氧微生物发酵，和厌氧微生物发酵。好氧和厌氧发酵有较大的区别，各自对工艺条件、发酵设备有不同的要求。分别掌握好氧和厌氧发酵技术也就比较全面的掌握了工业微生物技术。 本实验分别开出典型的好氧和厌氧发酵实验，训练学生掌握这两种工艺的基本技术、操作程序、分析手段，全面锻炼同学们实际动手能力。巩固和提高微生物净化操作能力、显微观察技术、培养基配制和灭菌技术、无菌取样和细胞量的确定、生长曲线的制作、光谱分析技术、气象色谱分析技术。初步培养同学们工业微生物领域科学研究和技术开发的基本能力。 二、实验原理 红曲霉通过有氧发酵将淀粉质原料转化为次级代谢产物红曲色素。 丙丁梭状芽孢杆菌经厌氧发酵将农副产品转化为丁醇和丙酮。 三、实验内容 1、好氧实验：红曲的发酵实验及其抑菌作用研究 2、厌氧实验：丁醇的发酵实验及其气相色谱检测 四、仪器设备和试剂、消耗品： 1．仪器设备： 电子分析天平 手提式蒸汽灭菌锅、自动控制蒸汽灭菌锅 双孔水浴锅 1000W电炉 5台 生物显微镜、电脑成像生物显微镜 生物培养箱、培养摇床 真空干燥箱 紫外可见分光光度计 离心机 真空泵、真空干燥器
蒸发器 气象色谱仪 2．药品和耗材： 药品：可溶淀粉 1瓶（500克），蛋白胨 1瓶（500克），琼脂，饴糖（麦 芽汁）麦芽1000克，大米粉 5公斤，硝酸钠NaNO 31瓶（500克），磷酸二氢钾KH 2 PO 4 1瓶（500克），磷酸氢二钾K 2HPO 4 1瓶，硫酸镁MgSO 4 ·7H 2 O 1瓶（500克）,硫酸 铵(NH 4) 2 SO 4 1瓶，氯化锰MnCL 2 1瓶，硫酸锰MnSO 4 ·H 2 O 1瓶，碳酸钙CaCO 3 1瓶， 维生素B1(盐酸硫胺素)1小瓶，酵母膏1瓶，乳酸（液态1瓶500克），葡萄糖（分析纯）1瓶，乙醇（分析纯）5瓶(5×500克)，乙醇(色谱纯Aladdin) 2瓶,丁醇（色谱纯Aladdin）2瓶，丙酮（色谱纯Aladdin）2瓶，叔戊醇（色谱纯Aladdin）2瓶 耗材：500ml三角瓶50只， 250ml三角瓶16个，100ml粗口径试管50只，1000ml 烧杯10个，培养皿160套，常规试管160个，200ml烧杯16个，1ml移液枪头5盒，标签纸若干，玻璃真空干燥器大号1个，波美计8只，移液枪（1000ml）2只，玻璃珠2盒，100ml量筒8个，500ml量筒2个，称量纸2盒，不锈钢试剂勺4根， pH 试纸2包，玻璃棒若干，玻璃推棒32根，5ml移液管16只 五、实验方法步骤和具体操作过程 （一）红曲的发酵实验及其抑菌作用研究 红曲是一种具有一定营养和药理作用的纯天然红色素，可赋予肉制品、食品、饮料等鲜艳的色泽及特殊风味，而且具有较好的营养价值和一定的防腐作用，因而被广泛地应用于食品工业。 红曲是由红曲霉经发酵分泌到胞外的一种色素，发酵的主要原料是淀粉类如大米、薯类等。红曲霉发酵合成色素同时对有害菌产生抑制作用。本实验分为两个部分，前一部分为红曲的发酵实验，后一部分为红曲的抑菌试验。 （Ⅰ）红曲的发酵实验 1．菌种 本实验室保藏的红曲霉菌种monascus purpureus。用本实验室自主设计的保藏方法，在短梗霉多糖膜片中封存，置于冰箱中保藏。使用时每取出一片，进行活化，然后作为种子扩大培养。
生物药物分析实验报告 摘要：生物制药就是把生物工程技术应用到药物制造领域的过程,生物药物最主要应用的方法就是基因重组原理.生物药物分析是生物材料中的药物分析,应用于药物的体内与临床研究.生物样品中药物浓度的测定是否准确,不仅关系到临床用药的安全性和有效性,还涉及到新药的药代动力学和生物利用度等体内参数的准确性,所以必须对生物药物分析方法进行质量控制。 关键词：生物药物分析;质量控制 1.分析方法质量控制的必要性 生物制药过程中的药物分析可以理解为是检测制药原料以及制剂总药物及其有关杂质含量的专用手段，其主要作用是控制生物药物从生产制造再到临床应用的总体质量。生物药物分析作为生物药物研发与临床治疗应用的重要组成部分，必须保证生物药物检测的实施质量，国内当前的临床治疗用药相对缺乏安全性以及时效性，为保证我国临床治疗的综合质量，医学领域着力研讨临床用药的安全性及其时效性，生物药物分析在这种背景下应运而生，国内医学领域的专家学者将生物药物分析致力于控制临床用药的安全性及其时效性，因此生物药物分析法是国内生物制药领域中常见到的质量控制手段之一。目前，生物药物分析法正处于试运行状态，各项控制技术尚未成熟，自身的创新研发也存在着较大的进步空间。国内当前的临床用药需要安全性与时效性的支撑，而生物药物分析方法作为检测生物制药原料的基本手段，必须创新自身检测方式，拓宽研发思路，以此为基础，凸显自身对国内临床用药的必要性。 2.须考核的方法和内容 2.1须考核的方法
目前，国家卫生局具备明确规定，新药申报资料、动物及人体药代动力学、生物利用度所应用的分析方法都必须经过严格的考核。现阶段，在国内新药申报资料、动物及人体药代动力学、生物利用度三个方面上最常见到的就是仪器分析法和生物学分析法，其中，仪器分析法具体包括光谱法（比色法、UV发以及荧光法）、色谱法以及联用（HPLC、GC、GCMS），而生物学方法的具体应用有免疫分析法（RIA、ELA、FLA）以及微生物测定法。虽然以上分析方法都是国内较为常见且经常用到的，但是当这些分析方法出现创新改革、完善优化、部分修改以及移植文献时，必须重新获得考核资格并通过考核，才能够再次应用。 2.2须考核的内容 近年来，国际医学领域对生物药物分析方法的研究与讨论从未停止，国外医学专家曾提出将生物药物分析方法初始阶段与试用阶段的质量作出整理归纳，同时将根据整理归纳出的结论对两个阶段提出不同的要求标准。由于试用阶段较为重要，因此专家建议将试用阶段具体分为新药筛选期、临床前研究期以及临床研究期三个环节，并根据各环节针对对象的差异提出不同的要求标准。结合国内外专家学者的相关文献来看，当前对生物药物分析方法的考核内容可以分为三个方面。首先是书面详细报告测定方法，主要包括样品采集、处理与贮存、测定时样品预处理方法、测定操作、仪器及其参数、数据处理与结果计算等，以上多个方面足以体现出书面详细报告测定方法的综合性与全面性；其次需要考核的内容是提供方法思路时对方法质量全面考核结果与数据；最后一点需要考核的内容是分析方法的应用阶段的质控数据。 3.生物药物质量的检定内容及其分析方法控制方式 3．1生物药物的质量检定内容
生药学实验报告 实验报告: 生药学实验 实验目的: 1. 学习并掌握生药学实验的基本操作技术； 2. 理解植物药物的提取原理和方法； 3. 探索生物活性物质提取和鉴定的实验方法。 实验原理: 本实验主要分为两部分：植物药物提取和生物活性物质鉴定。 1. 植物药物提取: 植物药物提取是利用溶剂将植物中有效成分提取出来的过程。常用的提取溶剂有乙醇、醋酸乙酯、氯仿等。提取原理基于溶剂的选择性溶解能力，将植物中的活性成分分离出来。 2. 生物活性物质鉴定: 生物活性物质鉴定是通过实验方法来检测和测定提取物中的活性成分的性质和活性。常用的鉴定方法有色谱法、质谱法、生物效应测定法等。通过这些方法可以确定药物的主要成分和其生物活性。 实验步骤: 1. 植物药物提取: a. 准备植物材料，如中药材； b. 粉碎植物材料，使其更易于提取； c. 选择适当的溶剂，并将粉碎的植物材料浸泡于溶剂中；
d. 采用适当的提取方法（如浸泡法、温泡法、回流法等）进 行提取，提取时间和温度根据实际情况进行调整； e. 过滤提取液，获得提取物。 2. 生物活性物质鉴定: a. 提取物预处理：根据实验要求，对提取物进行必要的处理，如去除杂质、浓缩等； b. 色谱法鉴定：利用色谱技术（如薄层色谱、高效液相色谱等）对提取物进行分离和鉴定； c. 质谱法鉴定：利用质谱技术（如质谱仪）分析和鉴定提取 物中的化合物； d. 生物效应测定法：通过进行生物学实验（如细胞毒性实验、抗菌实验等）来评估提取物的生物活性。 实验结果: 根据实验步骤和鉴定方法，得到了提取物的鉴定结果。可以根据色谱图、质谱图等来确定提取物中的主要成分和其生物活性。 实验结论: 通过本实验，我们掌握了植物药物提取和生物活性物质鉴定的基本方法和技巧。实验结果表明，所提取的植物药物中含有一定的活性成分，并且具有一定的生物活性。 实验总结: 本实验通过实际操作，加深了对生药学的理论知识的理解，提高了实验技能。同时，实验结果也对于植物药物的研究和开发具有一定的参考价值。
生物制药技术实验中的数据分析与报告撰写 生物制药技术实验是现代生物医药领域的重要组成部分，通过实验数据的分析与报告撰写，可以帮助研究者深入了解实验结果，准确评估药物的疗效和安全性。本文将围绕生物制药技术实验中常见的数据分析与报告撰写内容展开讨论，并提供一些实用的指导。 首先，对于数据分析的内容，常见的方法包括描述性统计、实验组间比较、效价计算和生存分析等。在描述性统计中，需要明确实验指标的均值、标准差、最大值、最小值等统计量，以揭示数据的中心趋势和离散程度。实验组间比较主要采用方差分析（ANOVA）或学生t检验，用于判断不同处理组间是否存在显著差异。对于生物制药技术实验中的效价计算常用的方法有ED50、IC50、LD50等，通过剂量-反应曲线拟合，可以准确评估药物的活性和效果。生存分析则用于评估药物对生物体存活率或存活时间的影响，常用的方法包括卡普兰-迈尔曲线和Cox比例风险模型。 其次，数据分析过程中需要选择合适的统计软件进行分析。常见的统计软件包括SPSS、GraphPad Prism、R语言等。这些软件提供了各种常用的统计方法和绘图工具，便于研究者对实验数据进行深入分析。在选择统计软件时，需根据具体实验设计和数据类型进行考虑，选择最适合的软件进行数据分析。 在数据分析的基础上，撰写实验报告是非常关键的一步。实验报告的主要内容包括引言、材料与方法、结果、讨论等部分。在引言部分，需简要介绍实验目的和背景，准确揭示该研究的科学意义和研究问题。材料与方法部分应详细描述实验所用材料、实验设计和操作步骤，以确保实验可重复性。结果部分应呈现实验数据的主要结果，可以通过表格、图表等形式进行展示，同时可以附上统计分析结果，以支撑结果的科学性。讨论部分则对实验结果进行解释和分析，比较实验结果与预期目标，并提出进一步的研究方向和潜在的应用价值。
生物制药技术毕业实习报告汇总5篇 生物制药技术毕业实习报告（篇1） “以质量求生存，以技术求发展”是公司的战略方针。龙汇公司将始终秉承科技服务绿色的发展方向，愿以全新的经营理念，优质环保的产品和良好的商业信誉服务社会，并与各界同仁一起真诚合作，共同发展，共创未来! 实习内容：2-氯-5-氯甲基吡啶的生产工艺 2-氯-5-氯甲基吡啶(简称甲维盐)，商品名procloim(banleptm)。是一种超高效绿色杀虫剂。2-氯-5-氯甲基吡啶是由阿维菌素经化学半合成而得，阿维菌素系列产品在医药、农药、兽药领域广泛应用，被誉为是继青霉素之后的又一次药物革命。而从阿维菌素B 1a出发，经化学改性合成的甲维盐，与母体阿维菌素相比，活性提高了10-1000倍，具有超高效、广谱、近无毒、无残留、不产生抗药性的特点。被业内认定将取代其他杀虫剂成为21世纪杀虫剂主导产品。甲维盐杀虫剂目前世界上工业发达国家已广泛用于粮食、经济作物和蔬菜害虫的防治。甲氨基阿维菌素是通过抑制害虫运动神经内的氨基丁酸传递使害虫几小时内迅速麻痹、拒食、缓慢或不动，且在24-28小时内死亡，是目前最高效的绿色农药。甲氨基阿维菌素的作用方式以胃毒为主兼有触杀作用，对作物无内吸性能，但能有效渗入施用作物表皮组织，因而具有较长残效期。对防治棉铃虫等鳞翅目害虫、螨虫、鞘翅目及同翅目害虫有极高活性，且不易使害虫产生抗药性，与其他农药无交叉抗性，对于其他农药已产生抗性的害虫仍有高效。在土壤中易降解、无残留，不污染环境，在常规剂量范围内对有益昆虫及天敌、人、畜安全，可与大部分农药混用。 生物制药技术毕业实习报告（篇2）
本人对《GMP》、《GSP》、《GAP》和《05版药典》等有一定的了解，熟悉药物的容量分析方法和仪器分析方法;熟悉片剂、胶囊剂、软膏剂等的基本制备过程; 掌握本专业的基本知识和实验操作技能;兴趣广泛，乐于接触新事物使不断丰富自身的认知;有较好的人际交往能力，喜欢交流各方面的观点，从各个角度观看事物;诚实、勤奋、能吃苦耐劳;沉着、稳重;关心集体;积极热衷于参加各种组织活动，曾参加学院举办的“明日医药之星实验操作技能大赛”并获优秀奖;积极于从各方面了解更多医药相关知识以提高自身的认知和素质;责任心和进取心强，进入实社会工作后仍会继续努力学习，不断充实和完善自己。 生物制药技术毕业实习报告（篇3） 首先，我想谈一下实习的意义。作为一名学生，我想学习的目的不在于通过结业考试，而是为了获取知识，获取工作技能，通过实习工作了解到工作的实际需要，使得学习的目的性更明确，得到的效果也相应的更好。 再次，我要总结一下自己在实习期间的体会。在实习期间，通过在生产现场观摩，经过专业人员的讲解，了解了微生物发酵技术在制药、酿酒和作为生物菌肥等方面的在作用。参观实习是对自己在学校学习的补充，这次实习让我对《发酵工程》这门学科有了更深的认识，亲眼看见了发酵的设备，及其整个的生产流程，对这三个企业有了初步的理解，让我对好氧发酵、厌氧液体发酵、厌氧固体发酵等过程中的灭菌、制种、放大、发酵____、检测、生产流程等以及生化药物的提取、精制、冷冻干燥、包装等生物分离工程获得了感性认识，建立了从理论到实际的跨越。也对传统的白酒酿造工艺有了进一步的了解，对酿酒时制曲、原料的选取与处理、配料搅拌及烝酒蒸粮、入窖发酵等工艺过程有了直观的认识。另外还参观了微生物肥料生产的工艺流程，看到了发酵罐的罐体及一些管路，对微生物发酵的用途又多了一份理解。
实验一芦丁的提取精制与鉴定 芦丁（Rutin）亦称芸香苷（Rutinoside），在植物界广泛存在，其中以槐米、荞麦叶、蒲公英和烟叶中含量较多，可作为提取芦丁的原料。 槐花米系豆科植物Sophora japonica 的未开放花蕾，具有调节毛细血管渗透性之作用，临床用作毛细血管止血药，如复方芦丁，也作为高血压的辅助治疗药物。除此之外，还可作为制药原料，用于制造槲皮素（Quercetin）、羧乙基槲皮素、羧乙基芦丁、二羧丙基芦丁、β-乙基吗啡芦丁、6-而乙基氨基芦丁等。 槐花米中芦丁的含量高达12%~16%,另含少量皂苷。芦丁水解后得到槲皮素，皂苷水解后可得到白桦酯醇（Betulin）及槐花二醇（Sophoradiol）。 芦丁为淡黄色细小针状结晶，含三个结晶水，熔点177~178℃。；芦丁溶于热水（1:200），难容于冷水（1:8000）；溶于热甲醇（1:7），冷甲醇（1:100）；热乙醇（1:30），冷乙醇（1:300），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、三氯甲烷、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后又析出。 其结构如下图： 一、实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法 二、实验原理 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水。溶解度：冷水1:10000；热水1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。
（此处更换为自己学校的LOGO） 生物制药技术专业实习实训报告 学院：XXXX 专业：生物制药技术 学号：XXXX 姓名：XXX 指导老师：XXX 202X年X月
目录 公司简介 (2) 实习目的 (3) 实习内容及成果 (5) 存在的问题及解决措施 (7) 实习感悟与体会 (11)
公司简介 一、公司名称 实习单位：XX生物制药有限公司 二、公司规模 XX生物制药有限公司成立于20XX年，总部位于中国XX市，是一家集研发、生产、销售于一体的现代化生物制药企业。公司占地面积约为10000平方米，拥有一支由博士、硕士等高级人才组成的专业研发团队，以及一支经验丰富的生产线操作人员队伍。公司采用先进的生物技术手段，致力于研究和开发具有创新性和竞争力的生物制品，为全球患者提供安全、有效、高质量的药物治疗方案。 三、主营业务 1. 研发与生产：公司主要从事生物制药领域的研发与生产工作，涉及领域包括肿瘤、免疫调节、感染病、代谢病等多个方面。公司拥有多个研发实验室和生产线，分别针对不同的疾病领域进行研发和生产。研发团队不断优化生产工艺，提高产品质量，确保产品的安全性和疗效。 2. 市场推广与销售：公司产品在国内外市场上享有较高的知名度和美誉度。公司积极开拓市场，与多家国内外知名医院、药店建立了良好的合作关系，形成了稳定的销售网络。此外，公司还积极参与国际学术会议和展览，加强与国际同行的交流与合作，提高公司的国际影响力。 3. 技术服务与培训：为了帮助医疗机构提高诊疗水平，公司还提供一系列技术服务，包括临床试验设计、药物注册申报、新药审评等。同时，公司还定期举办各类培训班，邀请业内专家对医务人员进行培训，提高他们的专业技能和服务水平。 四、企业文化 1. 以人为本：公司始终坚持以人为本的发展理念，关注员工的成长与发展。公司为员工提供良好的工作环境和福利待遇，定期组织各类文体活动，丰富员工的业余生活。同时，公司还注重员工的职业发展，为员工提供晋升和发展的机会，激发员工的工作积极性和创新能力。 2. 创新驱动：公司以科技创新为核心，不断提升产品的技术含量和附加值。公司鼓励员工积极参与科研项目，发挥自己的专长和创造力。同时，公司还与多所高校和科研机构建立了紧密的合作关系，共同推进生物医药领域的技术创新。 3. 质量第一：公司始终坚持以质量求生存、以信誉求发展的经营理念。公司严格遵循国家相关法规和标准，对产品的研发、生产、销售等各个环节进行严格把
生物制药实习报告 生物制药实习报告篇一：最新生物制药技术专业实习报告 生物制药技术 专业实习报告 学院： 专业：生物制药技术 学生姓名：杜青道学号：14880121 指导教师：杜晓峰职称：教授 完成时间：2016年5月10日 本范文适合所有生物制药技术专业实习报告，首页不显示页码，正文部分的标题更改之后，在目录上右键-更新域，就会自动更新目录。正文内容根据自己需要修改 目录 一、实习目的 (2) 二、实习时间 (2) 三、实习地点 (2) 四、实习单位 (3) 五、实习主要内容 (3)
六、实习总结 (4) （1）实习体会 (5) （2）实习反思 (6) （3）实习心得 (7) 七、致谢 (8) 一、实习目的 随着时代发展和社会进步，用人单位对生物制药技术专业大学生的要求越来越高，对于即将毕业的生物制药技术专业在校生而言，为了能更好的适应生物制药技术专业严峻的就业形势，毕业后能够尽快的融入到社会，同时能够为自己步入社会打下坚实的基础，参加生物制药技术专业毕业实习是必不可少的阶段。 通过生物制药技术专业毕业实习，能够让我们学到了很多在生物制药技术专业课堂上根本就学不到的知识，提高调查研究、文献检索和搜集资料的能力，提高生物制药技术理论与实际相结合的能力，提高协同合作及组织工作的能力，同时也打开了视野，增长了见识。只有把从书本上学到的生物制药技术专业理论知识应用于实践中，才能真正掌握这门知识。 二、实习时间 201×年02月01日～201×年03月15日 (修改成自己生物制药技术专业实习时间) 三、实习地点 杭州市滨江经济开发区江南大道
(修改成自己生物制药技术专业实习地点) 四、实习单位 杭州市振石教育集团(修改成自己生物制药技术专业实习单位) 此处可以继续添加具体你生物制药技术专业实习单位的详细介绍 五、实习主要内容 我很荣幸进入杭州市振石教育集团(修改成自己生物制药技术专业实习单位)开展毕业实习。为了更好地适应从学生到一个具备完善职业技能的工作人员，实习单位主管领导首先给我们分发生物制药技术专业相关岗位从业相关知识材料进行一些基础知识的自主学习，并安排专门的老同事对岗位所涉及的相关知识进行专项培训。在实习过程，单位安排的了杜老师作为技术指导，杜老师是位非常和蔼亲切的人，他也是生物制药技术专业毕业的，从事生物制药技术领域工作已经有十年。他先带领我们熟悉工作环境和生物制药技术专业岗位的相关业务，之后他亲切的和我们交谈关于实习工作性质以及生物制药技术专业课堂上知识在实际工作中应用容易遇到的问题。杜老师带领我们认识实习单位的其他工作人员，并让我们虚心地向这些辛勤地在生物制药技术专业工作岗位上的前辈学习，在遇到不懂得问题后要积极请教前辈。 在单位实习期间，我从事的生物制药技术专业相关的工作之外，还负责协助人事部部的日常工作，包括制定计划，利用生物制药技术知识处理相关文书。具体实习内容过程如下：
广东药学院 基因工程（跨课程）综合性实验论文 姓名 班级 学号 指导教师 广东药学院 生命科学与生物制药学院生物制药研究所
目录 摘要 (2) 前言 (3) 一、材料与方法 (3) 1.1 材料 (3) 1.1.1 重组蛋白质药物单元的实验材料 (3) 1.1.2重组DNA药物单元的实验材料 (3) 1.2 方法 (4) 1.2.1 重组蛋白质药物单元 (4) 1.2.1.1 工程菌构建（已由老师完成） (4) 1.2.1.2 工程菌表达筛选 (6) 1.2.1.3 制备IL-18工程菌甘油种 (8) 1.2.1.4 GST工程菌生长曲线分析 (8) 1.2.1.5 GST工程菌表达影响因素试验 (8) 1.2.1.6 表达进程分析 (9) 1.2.1.7 凝胶扫描分析 (9) 1.2.1.8 发酵工艺（观摩） (9) 1.2.2 重组DNA药物单元 (9) 1.2.2.1 质粒TCRVα12.2-Vβ7.1-EYFP的大规模制备 (9) 1.2.2.2 TCR质粒-脂质体复合物制备与分析 (10) 1.2.2.3 TCR体外转染活性检测 (11) 1.2.2.4 TCR转染体内试验 (12) 二、结果与讨论 (12) 2.1 重组蛋白质单元结果与讨论 (12) 2.1.1 IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE (12) 2.1.2 GST工程菌生长曲线分析 (14) 2.1.3表达影响因素试验 (15) 2.1.4 表达进程试验 (16) 2.2 重组DNA药物单元结果与讨论 (18) 2.2.1质粒阴离子交换层析纯化 (18) 2.2.2 质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析 (19) 2.2.3 质粒-脂质体复合物制备 (20) 2.2.4 TCR转染基因表达荧光检测 (20) 2.2.5 TCR体外转染活性检测 (21) 2.2.6 TCR转染体内试验 (23) 三、小结 (25) 致谢 (25)
生物制药实习报告 通过制药厂实习，我充分的运用学校中所学习的知识，提高了自身的技能，刚刚毕业的学生与在岗就业许多年的老职员相比，无论是在技能上，还是在经验上都远远逊色于他们，我认为，书本上的知识固然重要，但学校应该让学生多接触一些实践。下面是为大家整理的几篇生物制药实习报告范文，希望对大家有所帮助，仅供参考! 生物制药实习报告1 本人是届__学院的毕业生，专业是生物科学，大学里主要学习了生物学和教育学相关的知识，自己对心理学也很感兴趣，对书法和一些球类都很着迷，自身条件方面觉得自己很有耐心，办事也很细心。自从在中学实习当教师之后，对教师这个职业乃至教育都有了更深层次的理解，我觉得当老师最为重要莫过于一颗爱心了。 一年的实习期马上就要结束了，通过一年的工作和学习，本人积累了丰富的经验，为不断提升自己的专业技能，打下了夯实的基础。通过向同事们请教学习，通过和学生逐步深入的接触，不断的体会到从事教育工作的重要意义，以一颗热爱教育事业的心，把自己的激情倾注于光荣的教育事业。
在这个过程当中，本人不断的提高自己的职业修养，加强自身的师德建设，树立起良好的教师的形象，通过自己的言谈举止，在潜移默化当中，让自己的学生受到教育，让学生懂得自己的责任。不但要提高师德的水平，同时还要让自己的职业道德在教育工作中发挥重要的作用，用自身的道德水平去影响学生。同时在和学生的接触过程中，不断的反思自己工作的得失，注意发现自身存在的不足，针对自己的这些缺点，不断的加强自己的职业道德修养，提高自身素质水平，在将来的工作中，取得更加优异的成绩。 在工作中，本人积极的和同事交流，充分利用自己的时间多去听经验丰富的老教师的课，在听课中不断的向老教师学习请教，提高自身的素养，把教学理论在实际中灵活应用，不断的在工作中积累经验。在这一年的工作当中，和同学的感情是越来越深，工作开展的也是非常顺利，同时在各项活动中取得了不菲的成绩，这是和同学们的努力和其他老师的大力支持和帮助是分不开的。 不要努力成为一个成功的人，要努力成为一个对社会有用的人。我并不是反对不断追求自身幸福的人，相反，我认为的幸福应该是建立在为社会贡献自己力量的基础上的。我学的师范专业，自己又这么热爱它，所以我决定做一名教师，希望我的努力是有意义的。