冰冻切片快速病理诊断30年总结 秦皇岛市肿瘤医院病理科康文喜谢芳芳王小聪李英邮编：066001 术中冰冻切片快速病理诊断是1818年由Pieter de Riemer首先创造发明的，1891年Halsted和Accarty将冰冻切片技术列为正式诊断方法。目前国内外已将此项技术普遍应用于临床，解决手术中的病理诊断问题。并日益受到外科医生和患者的欢迎和肯定。随着冰冻切片技术和临床外科手术的发展，要求做冰冻的病例逐年增多，截止到2012年10月份，本院病理科开展快速冰冻病理诊断30余年，共完成冰冻快速病理诊断1476例，积累了一定的经验和教训，为了更进一步提高冰冻快速病理诊断水平，提高冰冻诊断准确率，降低误诊率，作者将30年来所有冰冻切片快速病理诊断病例进行总结分析如下。 1 材料和方法 1.1 一般资料本组1476例大部分来自本院住院病人，小部分来自其他医院。其中男897例，女579例，年龄最大81岁，最小5个月。 1.2 病变部位乳腺1052例，软组织42例，胃33例，淋巴结33例，骨12例，腹膜9例，睾丸及附睾8例，甲状腺47例，小肠15例，大肠25例，膀胱5例，脊椎5例，阑尾10例，胆道14例，阴茎19例，卵巢53例，脑及脑膜3例，前列腺3例，肝12例，肾26例，脊髓2例，喉2例，子宫42例，精索1例，纵隔1例，腹膜后1例，眼1例。 1.3 方法本组1476例均采用德国进口莱卡冰冻切片机切片，HE染色，普通光学显微镜观察。 1.4 结果1476例中，恶性肿瘤687例，良性肿瘤388例，瘤样病变170例，炎症202例，结核29例，确诊1457例，未能确诊15例，误
诊4例。 2. 讨论 冰冻切片质量差，最初很多著名的病理学家如Ewing、Brewer、Simpson等曾经怀疑冰冻切片的准确性，1960年Cryostat冰冻切片机正式应用于临床后，冰冻切片质量有了很大提高，但和石蜡切片相比仍很逊色，对准确的冰冻病理诊断带来一定困难，尤其对年轻的病理科医生来说难度较大，缺乏经验的病理科医生难以胜任此项工作，下面根据自己个人的经验发表一点看法。 2.1 冰冻切片快速病理诊断的优缺点：冰冻切片快速病理诊断的优点是在手术过程中随时取材，迅速做出准确可靠的病理诊断，同时也减少了病人二次手术的痛苦。缺点是切片厚，细胞大，层次多，易造成错觉。另外冰冻切片诊断要求报告快，没有更多思考讨论余地，一旦报错，将造成严重的无法弥补的后果。 2.2 准确率：本文对1476例冰冻切片进行了统计分析，结果准确率为98.7%，未能确诊率为1.02%，误诊率为0.3%，与国内报道相比准确率相仿，而误诊率低于各家报道。 2.3 未能确诊和误诊的原因：⑴取材不当：恰当准确的取材是正确诊断的必备条件，取材不当就不可能得出正确的病理诊断。当临床切取肿物困难时，所送检的肿物标本不一定是肿物中心组织，很可能是肿物边缘组织，这种组织大部分是肿物周围的正常成分，或仅带有少量肿物，此时应多切几个切面进行观察，在把握不足的情况下可多取几块组织做切片，以防漏诊。⑵切片质量不佳：切片过厚，组织未能展平出现折叠，组织缺损，染色深浅不均等都直接影响诊断结果。
*作者：座殿角* 作品编号48877446331144215458 创作日期：2020年12月20日 实用文库汇编之术中快速冰冻诊断1、什么叫“冰冻切片”？ 冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。与石蜡切片相比，由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度快，是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。冷冻切片的不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。冷冻切片目前最广泛应用于临床手术中的病理诊断，手术医生根据病理诊断结果决定手术范围。 2、什么叫“术中快速冰冻切片病理诊断（快速活检）”？ 手术中快速活体组织病理学检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题请求病理医师快速进行的急会诊，它是一种高技术、高难度、高风险的项目，是临床病理实践中最重要、最难的一项工作。快速活检要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片（或快速石蜡切片）的观察，向手术医师提供的参考性病理诊断意见。与常规石蜡切片的病理诊断相比，快速活检会诊具有更多的局限性和误诊的可能性。有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。因此，应向临床医师说明快速活检的：①局限性、②适用范围、③慎用范围和④不宜应用范围。 3、“快速活检”的适用范围： ①需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤／良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。 ②了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。 ③确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。 ④确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织等。
4、“快速活检”的慎用范围： 涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。 5、“快速活检”的不宜应用范围： ①疑为恶性淋巴瘤。 ②过小的标本（检材长径≤0.2cm者）。 ③术前易于进行常规活检者。 ④脂肪组织、骨组织和钙化组织。 ⑤需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。 ⑥主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。 ⑦已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等）。 6、手术中冰冻病理检查知情同意书 由于冰冻病理检查解释为法规所列的有风险的特殊医疗检查，患者有权知道自己可能面临的情况，有权接受或拒绝检查（可采用其他方法替代）。除手术、麻醉等同意书外，要在术前请患者填写“接受手术中冰冻切片病理检查知情同意书”，这不但是让患者知情，也是再一次提醒医生给患者手术和诊断时要千万小心。这种患者知情，不仅是我国法律要求。许多发达国家中，癌症患者会要求医生告知自己按一般规律可能活多久，以便决定安排人生。有时压力是巨大的，有些患者不愿承受压力，可委托亲属了解情况（您委托的亲属最好是能完全了解您的意愿），并签署“病理知情同意书”。 7、选用“快速活检”的注意事项： ①有关临床医师应于手术前向患者和／或患者授权人说明快速活检的意义和局限性等，取得患者和／或患方的知情和理解。患者和／或患者授权人应在由医院制定的《手术中快速活检患方知情同意书》签署意见和签名。 ②主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交快速活检申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程
病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。 目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。 数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切 片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准 质量缺陷减分满分（分）优质标准 分；不完整：310 1～组织切面完整，内镜咬组织稍不完整：减510分；未达到规定面数：减4 检、
穿刺标本切面数减～分切片薄(3～5μm)，厚薄均10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～分5～3分；厚薄不均匀：减10 匀． 切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减5分 切片无污染10 有污染：减10分 有气泡：减3无气泡（切片与载玻片间分；胶液外溢：减10 3分 ，载玻片间）/盖片与切片、盖片周围无胶液外溢10 透明度好透明度差：减1～3分；组织结构模糊：减5～7分 细胞核与细胞浆染色对10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红(细胞浆)与蓝(比清晰细胞核)对比不清晰：减5分 切片无松散，裱贴位置适10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不当：减5分当10 切片不整洁：减切片整洁，标签端正粘3分；标签粘贴不牢：减3牢，编号清晰分；编号不清晰：减4分 计100 合 注：切片质量分级标准：①甲级片：≥90分（优）；②乙级片：75～89分（良）；③丙分（不合格）59≤；④丁级片：分（基本合格）74～60级片：
全部实验步骤 1 取新鲜组织于4%多聚甲醛固定24小时 2 30%蔗糖脱水48小时以上 3 -250C包埋（冰冻切片机内） 4冰冻切片 冰冻切片步骤 冰冻切片免疫组化染色步骤： 冰冻切片4~8μm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3次。用3%过氧化氢孵育5~10分钟，以消除内源性过氧化物酶的活性。PBS冲洗，5分钟×2次。下接石蜡切片免疫组化染色操作步骤。(见我发的前面的帖子) 你确定你是冰冻切片吗？？？ 冰冻切片不能用热修复啊！！！ 以下是我的步骤： 1 冰冻切片室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。用3％过氧化氢孵育5~10分钟，PBS洗，5分钟×2。 2 5~10％正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃过夜。 3 PBS冲洗，5分钟×3次。 4 滴加滴加第二代生物素标记二抗工作液，37℃或室温孵育30分钟。 PBS冲洗，5分钟×3次。 5 滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37℃或室温孵育10~30分钟。 6 PBS冲洗，5分钟×3次。 7 显色剂显色（DAB）。 8 自来水充分冲洗，复染，封片。 冰冻切片免疫组化染色用的灭活内源性过氧化物酶，最好是用3%H2O2/甲醇溶液，室温20分钟。此配方不易产生脱片。 配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O2 1ml，混匀后使用，每次新鲜配制。 冰冻切片免疫组化染色步骤 冰冻切片4~8mm，室温放置30分钟后，入4℃丙酮固定10分钟，PBS洗，5分钟×3。用3％过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟×2。 下接免疫组化染色操作步骤。
术中快速病理诊断合理使用指征的规定与程序术中冰冻要求病理医师在很短时间内向手术医师提供参考性病理学诊断意见,因此它有一定的局限性，因此应向手术医师及患者说明适用范围、慎用范围、不宜应用的范围、冰冻的流程。 （一）适用范围 1、需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤、良性肿瘤或恶性肿瘤），以决定手术方案的标本。 2、了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。 3、确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。 4、确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管及异位组织。 （二）慎用范围 1、涉及截肢或其他会严重致残的根治性手术切除的标本，需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。 （三）不宜应用范围： 1、疑为恶性淋巴溜。 2、过小的标本（检材长径≤0.2cm）。 3、术前易于进行常规活检者。 4、脂肪组织、骨组织和钙化组织。 5、需要依据核分裂像计数判断良、恶性的软组织肿瘤。 6、主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。
7、已知具有传染性的标本（如结核病、病毒性肝炎、爱滋病等）。 （四）主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交冰冻申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。尽可能不在手术进行过程中临时申请冰冻。 （五）冰冻切片的报告一般在收到标本后30分钟内以文字的形式发出。 对于难以即时诊断的病变，应向手术医师说明情况，告知需等常规石蜡切片进一步明确病理学诊断。 （六）冰冻切片结果与常规石蜡结果不一致时，该例的病理学诊断以石蜡HE片诊断为准。 相关资料与表格： 1、冰冻切片报告单存根； 2、病理科与临床医师沟通记录； 3、临床危急值报告记录；
关于开展术中快速冰冻切片病检的通知 各临床科室： 手术中快速冰冻切片病理检查是一项特殊的临床病理急会诊工作。我院与××医院病理科协作，开展术中快速病理冰冻检查，现将相关事宜通知如下： 1、目的： （1）明确送检标本是否有病变； （2）明确病变的性质（良性或恶性或交界性），确定淋巴结是否转移或邻近脏器有无浸润，以便制定手术方案； （3）了解手术切缘有无癌瘤残留，以决定手术范围。 2、预约： 手术前一天由手术者电话预约，预约电话：﹢﹢﹢﹢﹢（科室座机）或﹢﹢﹢﹢﹢﹢﹢（手机）。 已预约申请的患者，如根据术中实际情况或其它原因不再进行快速冰冻切片病理检查时，临床医师应及时通知病理科撤销预约申请。 3、送检标本注意事项： （1）对需做术中冰冻切片病理检查的标本请勿用生理盐水或流水冲洗，请勿固定，离体后尽快送达病理科。 （2)送检肿物要完整，不得只送检部分，否则病理科有权拒收标本。 （3）对于怀疑乳腺导管内病变的标本，请临床手术医师务必在病变导管开口标记（可系线）；对于乳腺不可触及的影像学检查有异常的病变部位请务必标记（可金属针定位）；对于保乳手术的标本，请务必标记切缘。 （4）对于肿物较小的标本请务必做好标记。 （5）对于肿瘤肉眼可见的种植或转移灶或转移的淋巴结，请与肿瘤一并送检，尤其是卵巢肿瘤。 4、收费： 凡送术中冰冻切片病理检查同时也应做常规病理检查。 冰冻﹢﹢元+常规﹢﹢元=﹢﹢元（一个标本）。 5、送检：由检验科协同司机班送检。 6、流程： 手术者术前填写好术中快速病检同意书——患者或家属签字——处置单上账——术中取出的标本、同意书、已上账的处置单一并送病理科——××分钟左右病理科电话反馈快速冰冻病检结果——×天后病理科反馈常规病检结果。 医务科 二〇××年×月×日
病理切片的结果分析方法 HE染色：又称苏木素-伊红染色法，其中苏木素是Hematoxylin，简称H，伊红是Eosin，简称E，这是是普通光学显微镜观察与鉴别细胞凋亡与细胞坏死的一种染色方法。这种方法适用范围广泛，对组织细胞的各种成分都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色，细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。 检验原理： * 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性(Basophilic)。 * 伊红是酸性染料，粉红色。可以将大多数细胞的细胞质染成红色。被伊红着色的结构本身为碱性，具有嗜酸性(Acidophilic)。 * 不易被苏木素和伊红着色的结构具有嗜中性(Neutrophilic)。 结果：细胞核呈蓝色，细胞质，肌纤维，胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。 Masson三色染色：主要用于胶原纤维和肌纤维的鉴别染色。Masson染色是最为常用的结缔组织染色法，此法多用于观察病变组织中纤维结缔组织的增生和分布，纤维性肿瘤与肌源性肿瘤的鉴别。对酒精性肝硬化/坏死后性肝硬化及各型肝炎导致的小叶汇管区纤维组织增生程度的差别具有重要价值。 Masson染色在肾穿刺活检中可以用于判别在肾小球毛细血管网的系膜氏和上皮下是否存在嗜复红蛋白的沉积，对于肾脏疾病的病理诊断有重要意义。 检验原理： 利用两种或三种阴离子染料混合一起或先后作用完成染色，与阴离子染料分子大小和组织的渗透性有关。根据组织不同的渗透性能，选择分子大小不同的阴离子的染料进行染色，便可把不同组织成份显示出来 结果：细胞核呈黑色，肌纤维呈红色，胶原纤维呈亮绿色。 抗酸染色法: acid－fast staining method 1882年由埃利希（F．Ehrlich）首创并经F．齐尔（ Ziehl）改进而创造出的细菌染色法。其中最具代表性的为对结核菌的齐尔-尼尔森（Ziehl－ Neelsen）染色法和齐尔-加贝特（Ziehl－Gabbet）染色法。用石炭酸复红染色后，用盐酸乙醇分色，再用美蓝进行对比染色，即不再脱色而呈现石炭酸复红的红色。 检验原理： 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。
月 关于普通病理与术中快速冰冻检查诊断不一致的有关规定 1. 由于冰冻切片是将组织速冷后制成切片进行病理学观察，其优点是检查快速，然而组织受冰冻后，可能造成组织和细胞变形，发生人为假象，加上检材有限、切片较厚、染色不良，其质量远较常规石蜡切片为差，大大增加了诊断难度。可能出现术中快速冰冻病理结果与石蜡切片病理结果不一致。 2. 如术中快速冰冻病理不能确诊时，主刀应向家属或委托人交待病情，根据术中情况决定手术方式，或暂不行扩大切除。待术后石蜡切片病理结果报告后再行二次手术。 3. 术后常规病理报告与术中快速冰冻报告良恶性不一致，按《危急值报告制度规定》文件执行。 4. 如果出现快速冰冻病理结果与石蜡切片病理结果或与术后诊断不一致时，相关科室应开展追踪、讨论的程序。 （1）病理科科主任组织科内相关人员进行相关病例的讨论（2周内），分析两者诊断报告不一致的原因和存在问题，主要从以下几方面查找原因并准确记录： ①术中快速冰冻切片送检标本手术医师取材是否准确； ②申请冰冻切片诊断的病例是否符合进行冰冻切片诊断的要求； ③病理取材是否规范，有无遗漏病变； ④病理技术员制片是否优良，有无影响切片诊断的因素； ⑤诊断中是否存在假阴性或假阳性； ⑥有无请高级职称病理医师复诊； ⑦术中病理医师与临床手术医师是否进行信息交流沟通等。 （2）明确存在的问题后，对发生的原因进行讨论分析，提出针对性的改进措施，同时针对相同科室、送检相同部位术中冰冻切片诊断的病例进行复查、追踪，落实改进措施，避免类似情况再次发生。 （3）病理科应与临床科室进行交流，讨论出现诊断结果不一致的原因以及今后需要改进的地方。 （4）出现术中快速冰冻切片检查病理报告与术后病理报告诊断不一致的病例必须每月及时上报医务科，有原因分析和整改措施，追踪落实。 1
内容摘要：作者：张剑虹成日青林媛媛赵秀芳张凡刘军超张九鸿 作者：张剑虹成日青林媛媛赵秀芳张凡刘军超张九鸿 【关键词】冰冻切片; 病理诊断; 准确性 随着临床医学手术水平的不断提高，手术中要求送检冰冻病理切片快速诊断的病例日益增多，临床手术医师对病理报告的依赖性也逐渐增加，快速病理冰冻诊断已成为指导临床手术医师确诊和制订合理手术方案的必需手段之一。然而手术中冰冻切片病理诊断受到很多因素的制约，准确性很难达到与常规石蜡切片相一致的效果。为此我们收集我院病理科近两年的冰冻切片资料1091例，分析探讨冰冻切片诊断价值和准确性及其影响因素，旨在不断提高手术中病理诊断质量，从而降低医疗事故隐患。 1 材料与方法 选取我院2003.1～2005.12月的冰冻切片资料1091例，为防止制成的冰冻切片镜下组织形态发生改变，送检标本要求用干纱布包裹或置于不加任何液体的洁净容器内及时送达病理科，病理医师详细检查大体标本后取肉眼确认病变最明显区域1～2块组织，迅速置全自动恒冷切片机（英国产shandn as 620e型）上制作切片。每个组织块切取两张切片，厚4μm，经酒精固定，he染色，普通光镜（olympus bx51）下观察，并经2～3名医师阅片后集体讨论确诊；如送检组织不合格（凝血块、坏死渗出物等），立即请手术医师第二次取材送检，冰冻残余组织做常规石蜡切片，并与另外多处取材石蜡切片对照分析。 2 结果 1091例冰冻组织分布在12个系统及组织，如女性生殖系统485例，占总例数44.4%，乳腺病变364例，占33.3%，甲状腺58例，占5.3%，消化系统52例，占4.7%等。送检最活跃的科室为妇科、产科，其次为普外科等，见表1。表1 1091例冰冻标本在各系统分布情况石蜡证实良性病变775例，其中771例冰冻符合，冰冻准确率96.9%；石蜡证实恶性病变286例，冰冻报告恶性281例，冰冻准确率97.6%；石蜡证实交界性病变29例，冰冻报告交界性24例，冰冻准确率82.8%。1091例冰冻标本中，与石蜡切片报告相符的为1056例，冰冻切片总的诊断准确率为96.8%，误诊14例，误诊率为0.13%，见表2。表2 1091例冰冻与石蜡切片诊断结果比较 3 讨论 3.1 冰冻切片病理诊断病变的价值冰冻在外科手术中应用广泛，术中冰冻可使外科医生在手术中知晓病变性质（良性、交界性、恶性），从而决定适当的手术方案。自1960年cryostat 冷冻切片机在临床病理应用以来，随着病理技术人员素质的提高和切片设备的更新换代，冷冻切片质量与石蜡切片已相差无几，使病理医师对手术中冰冻切片诊断准确率不断提高。我院近年内投资进口大型衡冷柜式切片机，为冰冻切片的准确性提供了必要的保障。所以目前冰冻切片为临床快速确定诊断和决定手术范围的一个重要依据，主要应用价值体现在：1.决定病变的性质，要求病理医师在最短的时间内确定送检组织是肿瘤或是非肿瘤性病变，如为肿瘤则需再确定良性或恶性，因病变不典型而不能确定良性、恶性病变时，则提一个考虑性或倾向性意见供临床考虑，或待石蜡切片再定。2.确定切除肿瘤的边缘是否残留肿瘤组织。我们遇到最多的是乳腺癌手术实施保乳治疗时的上、下、左、右及基底五个切缘，如切缘发现癌组织，则需扩大切除范围，此时冰冻切片结果对临床手术范围起到了决定性作用。3.辨认组织，如先天性巨结肠须证实手术切缘的肠壁内是否有肌间神经节细胞存在，如未见神经节细胞则须再切肠管,直至查见肌间神经节细胞为止。 4.确定淋巴结有无癌转移，手术医师取
术中快速冰冻诊断 1、什么叫“冰冻切片”？ 冷冻切片是利用物理降温的方法将新鲜的组织标本冷冻使其产生一定的硬度进行切片的技术方法。与石蜡切片相比，由于冷冻切片不需脱水包埋因此制片速度快，是为手术进行中的临床医师提供病理诊断的良好方法。冷冻切片的不足是组织细胞的形态略逊于石蜡切片。冷冻切片目前最广泛应用于临床手术中的病理诊断，手术医生根据病理诊断结果决定手术范围。 2、什么叫“术中快速冰冻切片病理诊断（快速活检）”？ 手术中快速活体组织病理学检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题请求病理医师快速进行的急会诊，它是一种高技术、高难度、高风险的项目，是临床病理实践中最重要、最难的一项工作。快速活检要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片（或快速石蜡切片）的观察，向手术医师提供的参考性病理诊断意见。与常规石蜡切片的病理诊断相比，快速活检会诊具有更多的局限性和误诊的可能性。有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。因此，应向临床医师说明快速活检的：①局限性、②适用范围、③慎用范围和④不宜应用范围。 3、“快速活检”的适用范围： ①需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤／良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。 ②了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。 ③确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。 ④确认切除的组织，例如甲状旁腺、输卵管、输精管及异位组织等。 4、“快速活检”的慎用范围： 涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。 5、“快速活检”的不宜应用范围： ①疑为恶性淋巴瘤。 ②过小的标本（检材长径≤0.2cm者）。 ③术前易于进行常规活检者。 ④脂肪组织、骨组织和钙化组织。 ⑤需要依据核分裂象计数判断良、恶性的软组织肿瘤。 ⑥主要根据肿瘤生物学行为特征而不能依据组织形态判断良、恶性的肿瘤。 ⑦已知具有传染性的标本（例如结核病、病毒性肝炎、艾滋病等）。
数字化病理切片 数字病理切片（digitalslideofpathology）又称虚拟病理切片(vitualslideofpathology)，是一种现代数字系统与传统光学放大装置有机结合的技术。它是将传统的玻璃病理切片通过全自动显微镜或光学放大系统扫描采集得到高分辨数字图像，再应用计算机对得到的图像自动进行高精度多视野无缝隙拼接和处理，获得优质的可视化数据以应用于病理学的各个领域。 一、数字病理切片系统的简介与主要产品 1.数字病理切片系统的简介 数字病理切片系统的应用最早始于1985年，20世纪90年代在美国开始被应用于商业领域,从2000年开始在医学院校逐步取代传统显微镜。此后，美国以及全世界范围内有50%的医学院校都已经或正在筹备引进数字病理切片系统[1]。 数字病理切片系统主要由数字切片扫描装置和数据处理软件构成。首先，利用数字显微镜或放大系统在低倍物镜下对玻璃切片进行逐幅扫描采集成像，显微扫描平台自动按照切片XY轴方向扫描移动，并在Z轴方向自动聚焦。然后，由扫描控制软件在光学放大装置有效放大的基础上利用程控扫描方式采集高分辨数字图像，图像压缩与存储软件将图像自动进行无缝拼接处理，制作生成整张全视野的数字化切片（WholeSlideImage,简称WSI）。再将这些数据存储在一定介质中建立起数字病理切片库。随后就可以利用相应的数字病理切片浏览系统，对一系列可视化数据进行任意比例放大或缩小以及任意方向移动的浏览和分析处理，就好比在操作一台真实的光学显微镜一样。 2.数字病理切片系统的主要产品 目前，已经研发成功并应用成熟的数字病理切片系统产品主要有美国APERIO公司的数字化病理学影像管理分析系统APERIOScanScope-DigitalPathologySolutions,日本滨松公司研发生产的数字切片扫描装置NanoZoomerDigitalPathology，Motic麦克奥迪公司的数字切片扫描系统MoticBA600-4，日本奥林巴斯公司（OLYMPUS）的DotSlide全景智能化扫描数字切片系统，山东易创电子的显微数字切片系统，北京优纳科技有限公司的赛睿
手术中冰冻切片检查规范 一、手术中冰冻切片检查注意事项 (一) 手术中冰冻切片检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题，尤其需要临床医师与病理医师间的密切合作。 (二) 手术中冰冻切片检查要求病理医师在很短时间内，根据对切除标本的巨检和组织块快速冷冻切片的观察，向手术医师提供参考性病理诊断意见，由于组织未得到充分有效的固定、脱水以及切片较厚等等，与石蜡切片病理诊断的准确率有一定的差距，一般仅限于良、恶性的鉴别。与常规石蜡切片的病理诊断相比，手术中冰冻切片检查具有更多的局限性和误诊的可能性，误诊率5%以上。有的病例难以快速诊断，需要等待常规石蜡切片进一步明确诊断。 (三) 有关临床医师应于手术前向患者和／或患者授权人说明手术中冰冻切片检查的意义和局限性等，取得患者和／或患方的知情和理解。患者和／或患者授权人应在由医院制定的《手术中冰冻切片检查知情同意书》签署意见和签名。 (四) 主持手术的临床医师应在手术前一天向病理科递交手术中冰冻切片检查申请单，填写患者的病史，重要的影象学、实验室检查结果和提请病理医师特别关注的问题等。一般不接受电话预约和临时申请手术中冰冻切片检查。 （五）手术中冰冻切片检查的手术标本在切除后应立即送到病理科，并注明手术的部位，重点部位应做标记或加以说明。同时手术
标本应保持新鲜，不要加用固定液或用含水溶液清洗，以免影响制片和诊断。 （六）手术中冰冻切片检查诊断报告一般在手术标本送达病理科后30分钟内做出。并以书面文字形式通知临床手术科室。特殊情况（如标本过大，取材过多，或多个冰冻标本同时送检等），报告时间可以超过30分钟。 （七）工作开展时间：手术中冰冻切片检查的开展时间为周一至周五，周六和周日如有需要可提前预约。 （八）手术医师应在手术后及时填写常规石蜡病理检查申请单到病理科，以便病理科及时发出常规病理报告。 二、手术中冰冻切片检查适用范围 (一) 需要确定病变性质（如肿瘤或非肿瘤／良性肿瘤或恶性肿瘤等），以决定手术方案的标本。 (二) 了解恶性肿瘤的扩散情况，包括肿瘤是否浸润相邻组织、有无区域淋巴结转移等。 (三)确定肿瘤部位的手术切缘有无肿瘤组织残留。 三、手术中冰冻切片检查慎用范围 涉及截肢和其他会严重致残的根治性手术切除的标本。需要此类手术治疗的患者，其病变性质宜于手术前通过常规活检确定。 四、手术中冰冻切片检查不宜应用范围 五、(一)疑为恶性淋巴瘤。 六、(二)过小的标本。
徐州矿务集团总医院 术中冰冻切片检查知情同意书 患者姓名性别年龄病区床号住院号 手术中冰冻切片检查是临床医师在实施手术过程中，就与手术方案有关的疾病诊断问题请求病理医师快速进行的紧急会诊，是将手术中切下的病变组织在冰冻切片机中迅速冻硬后制成切片供显微镜下病理检查，要求病理医师在短时间内，根据对切除标本快速冰冻切片观察后，向手术医师提供参考性病理学诊断意见，以决定下一步治疗的方案。限于医学技术的发展水平，目前冰冻切片的诊断准确率有限。 1. 冰冻切片诊断仅为手术医师提供参考意见，具有局限性，准确率一般在95%左右。2．休积较大的肿瘤发生局灶性恶变时，因冰冻切片时难以全部取材而可能未发现。 3．一些病变单靠冰冻切片难以鉴别良恶性，为防止对患者造成不必要的损伤，病理医师遇到不典型或可疑恶性时会在冰冻报告中提示等待常规石蜡诊断。 4. 冰冻报告不能作为最后诊断，最后诊断必须等待石蜡切片。 5．冰冻报告与常规石蜡切片报告可能不一致，此时以石蜡切片诊断报告为准。手术方案有可能因此发生改变。 6．送检下列标本者请注意:①骨组织、皮肤组织及过小的组织原则上不宜做冰冻切片；②淋巴结病变、依靠核分裂像计数判断良恶性的某些软组织肿瘤(如平滑肌肿瘤)及主要依赖于侵袭或转移才能判断为恶性的肿瘤，一般需做常规石蜡切片确诊；③脑组织含水量多，冰冻切片质量较差，诊断可能有难度。 由于上述原因，当冰冻切片不能达到预期的目的时，需患者及家属谅解。同时患者有权选择快速的术中冰冻切片病理检查，也可选择更精确的常规石蜡切片病理检查。常规检查一般需5天出报告（节假日顺延）。 医师签名：签署日期：20 年月日 医师已经告知我将要进行的检查方法、检查存在的潜在风险、可能存在的其他诊疗方法并且解答了我关于此次检查的相关问题。愿意接受手术中冰冻切片检查。 患者签名： 若患者无法签署，请其授权委托人或法定监护人签名：与患者的关系：
如何做好术中快速冰冻病理切片 发表时间：2011-12-27T11:18:24.860Z 来源：《中外健康文摘》2011年第37期供稿作者：阮顺爱蔡爱英唐雅[导读] 术中快速冰冻染片用的苏木素须是新鲜配制的。 阮顺爱蔡爱英唐雅（福建省莆田市第一医院病理科福建莆田 351100） 【中图分类号】R472【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2011）37-0275-02 病理术中快速冷冻切片的优劣，直接关系到疾病的取舍，对病人至关重要。如何做好术中快速病理冷冻切片，笔者通过较长时间的实践与探索认为除了送检标本要新鲜外还有“三”个直接处理；不同的组织调整不同的冷冻时间；更新冰冻切片机设备及配备切片技术熟练的技术员进行冰冻切片操作等方法，有效提高了冰冻切片质量和诊疗工作质量，从而得到临床医生的充分认可和信任。 1.“三”个直接处理 1.1样本直接放置在冷冻头上，把包埋剂围绕在样本周围。 1.2直接在冷冻台上修整蜡块。 1.3冷冻切片组织平铺贴在玻片上后直接进行文火烘烤，然后再进入固定环节，这样就避免了脱片的危险。 2.有时同一部位有多块小组织须同时进行术中快速病理检查，如电切的前列腺组织，为节约时间，可将多块组织放在同一个冷冻头上，但要注意所有组织要在同一水平面上。 3.根据不同的组织调整不同的冷冻时间。（冰冻机恒温在负22—25度）。如甲状腺、前列腺组织则速冻时间稍短，一般3—5分钟即可，当然若组织块较大，速冻时间相对延长一些。但这些组织若速冻时间过长则切出的片会形成诸多大小不等的空洞而严重影响诊断，当出现空洞时可用拇指按压在组织块上2—3秒，使组织温度回升，再行切片。又如含脂肪较多的乳腺组织、淋巴结组织等则应相对延长速冻时间。一般8—15分钟，尤其是纯脂肪组织和畸胎瘤组织则冰冻时间相对更长。 4.为防止冷冻切片中出现“冰晶”，一般采取急速降温，并进行“快冻”“快切”。 5.冰冻机设备要现代化。俗话说“巧妇难为无米之炊”。若术中快速冷冻切片机设备简陋加上技术操作不过关，将明显影响冰冻切片质量而影响诊断结果。 6.术中快速冰冻染片用的苏木素须是新鲜配制的。 总之，病理学对疾病的确诊与鉴别具有极其重要的价值，但病理形态学本身同样存在着明显的局限性、相似性和模糊性。若切片质量差，势必增加术中快速诊断的风险，所以必须认真做好术中快速冷冻病理切片。 参考文献 [1]郭凤英，秦景.《影响冷冻切片技术的常规问题及处理》，宁夏医学院学报，2001、23.
成武县人民医院 术中快速冰冻切片病理会诊患者知情同意书 1. 术中快速冰冻切片病理检查是一项特殊的临床病理急会诊工作。其主要目的是：（1）明确送检标本是否有病变；（2）明确病变的性质（良性或恶性或交界性），确定淋巴结是否转移或邻近脏器有无浸润，以便制定手术方案；（3）了解手术切缘有无癌瘤残留，以决定手术范围。 2. 冰冻切片是将组织速冷后制成切片进行病理学观察，其优点是检查快速，然而组织受冰冻后，可能造成组织和细胞变形，发生人为假象，加上检材有限、切片较厚、染色不良，其质量远较常规石蜡切片为差，大大增加了诊断难度，故诊断正确性受到一定的限制，其诊断正确率最高仅达95%；同时，还存在误诊及微小病灶漏诊的可能。对此，病员及其家属应予以充分理解。术中冰冻切片检查仅作为临床手术治疗的参考，最终诊断以常规石蜡病理诊断为准。 3. 术中快速冰冻切片诊断单件标本一般30分钟内完成，多件标本依此类推。 4. 如果遇临时停电、停水则无法进行术中快速冰冻切片病理会诊。 5. 对于部分难以作出明确诊断的病例，允许延迟诊断，此时外科医师有权根据病理医师的建议改变手术方式，调整手术范围或等待常规石蜡切片报告出来后进行第二次手术；偶尔亦可术中由病理医师、手术医师及家属三方面取得共识后，确定手术与否及其范围。 6. 对术中冰冻切片病理检查结果与最后常规病理结果不一致，将导致治疗方案及治疗结果的变化，我院不负任何法律责任，但保证将会按医院规定进行追踪与讨论，并将最终结果告知患者或家属。 以上内容提请患者和家属仔细阅读后签字，并有权选择是否做术中冰冻切片检查。 医师签字：年月日 医师已向我详细交待术中冰冻切片病理检查的重要性及其存在一些缺点和限制，我已仔细阅读上述四项条款并理解其含义，决定同意接受术中快速冰冻切片病理检查。对术中冰冻切片病理检查结果与最后常规病理结果不一致，导致治疗方案及治疗结果的变化，愿给予理解，并承诺不以此为由追究病理医师和医院责任，也不以此为由拒付医疗费用。 签字人：联系电话： 签字人与患者关系：
探讨乳腺硬化性腺病应用冰冻切片病理诊断法的诊断效果分析 发表时间：2019-05-20T14:35:13.030Z 来源：《航空军医》2019年3期作者：朱秀民 [导读] 尽管冰冻切片病理诊断的操作便捷，但在乳腺硬化性腺病诊断中的准确度仍有待进一步提高，临床应用应结合症状、影像学检查、实验室检查等进行综合诊断。 （大庆油田总医院 163001） 摘要：目的探究应用冰冻切片病理诊断法诊断乳腺硬化性腺病的诊断效果。方法方便选取2014年10月—2017年10月于该院收治的乳腺硬化性腺病患者68例。纳入的所有患者均进行术中冰冻切片病理诊断，并与术后石蜡切片病理诊断对照，分析冰冻切片病理诊断方法的诊断效果。所有患者均清楚本次研究的目的，并且愿意配合研究过程。结果45例患者冰冻切片表现为腺体旋涡状排列，占百分比为 66.18%，能够通过显微镜清楚地观察到部分腺体被挤扁以及断续的肌上皮，腺上皮呈增生，且存在部分增生组织融合的现象，排列方式为片状，并能够向周围脂肪组织以及间质呈浸润性发展，生长方式为放射状，局部上皮细胞呈条索状；23例患者的冰冻切片表现为大汗腺化生，占百分比为33.82%。与术后石蜡切片病理诊断对照，冰冻切片的诊断准确率60.29%（41/68），误诊率为39.71%（27/68）。结论尽管冰冻切片病理诊断的操作便捷，但在乳腺硬化性腺病诊断中的准确度仍有待进一步提高，临床应用应结合症状、影像学检查、实验室检查等进行综合诊断。 关键词：乳腺硬化性腺病；冰冻切片病理诊断法；诊断效果 [Abstract] Objective To explore the diagnostic effect of frozen section pathological diagnosis in breast sclerosing adenopathy.Methods 68 patients with sclerosing adenosis of breast admitted to our hospital from October 2014 to October 2017 were selected conveniently.All the patients were diagnosed by frozen section pathology during operation，and compared with the pathological diagnosis by paraffin section after operation.The diagnostic effect of frozen section pathological diagnosis method was analyzed.All patients are aware of the purpose of this study and willing to cooperate with the research process.Results The frozen sections of 45 patients showed a spiral arrangement of glands，accounting for 66.18%.Some of the glands were squashed and intermittent myoepithelium was clearly observed under the microscope.The glandular epithelium was proliferated，and there was a fusion of some proliferative tissues.The arrangement was flaky，and it could infiltrate into the surrounding adipose tissue and interstitium.The growth pattern was radiation.In 23 cases，the frozen sections showed metaplasia of sweat glands，accounting for 33.82%.Compared with pathological diagnosis of paraffin section after operation，the diagnostic accuracy of frozen section was 60.29%（41/68），and the misdiagnosis rate was 39.71%（27/68）.Conclusion Although frozen section pathological diagnosis is easy to operate，the accuracy of diagnosis of sclerosing adenopathy of breast still needs to be further improved.Clinical application should be combined with symptoms，imaging examination，laboratory examination and other comprehensive diagnosis. [keywords] sclerosing adenosis of breast；pathological diagnosis of frozen section；diagnostic effect 乳腺硬化性腺病是一种较为常见的乳腺增生性病变，中年女性好发，主要表现为质地较硬的乳房肿块，临床上容易和乳腺癌混淆[1]。目前临床常用石蜡切片病理诊断乳腺硬化性腺病，可提供可靠的诊断依据，但其检查时间长、操作步骤复杂，影响其在临床上的应用[2-3]。而冰冻切片病理诊断可以缩短检查时间，实现快速诊断，但其应用于乳腺硬化性腺病的诊断价值仍需进一步的验证。该研究开展于2014年10月—2017年10月，通过方便选取68例乳腺硬化性腺病患者作为研究对象，探究应用冰冻切片病理诊断法诊断乳腺硬化性腺病的诊断效果，现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 方便选取于该院收治的乳腺硬化性腺病患者68例。纳入患者年龄范围为22～64岁，平均年龄（43.96±3.75）歲；病程最长达8年，最短为4个月，平均病程（2.74±0.78）年；纳入的所有患者均为单侧乳房发病，临床表现为乳房肿块，质地硬，部分患者伴有触摸痛。纳入的所有患者均进行术中冰冻切片病理诊断，并与术后石蜡切片病理诊断方法对照。所有患者均清楚该次研究的目的，并且愿意配合研究过程，研究经该院伦理委员会的批准。 1.2 方法 1.2.1 冰冻切片病理诊断方法取肿块送检。肿块直径≤3 cm时，取一块做冰冻，>3 cm时，取两块做冰冻，冰冻切片后剩余组织用作常规石蜡切片，标本制作过程包括冰冻、切片、固定、染色四步。提前调整好冰冻机温度，使温度尽量恒定地控制在-20℃，将组织块放入冰冻机冷冻。确保标本已经完全冷冻，即肿块冷冻完成后，将标本切成薄片，厚度控制5 μm左右。之后将薄片标本放置在固定液中固定，完成后采用HE染色，染色结束则标本制作完成。将切片置于光学显微镜下，由专业的病理医生观察并给出诊断报告。 1.2.2 石蜡切片病理诊断方法该方法的标本制作方法较冰冻切片病理诊断方法复杂，操作步骤多，包括固定、脱水、包埋、切片、脱蜡、染色。第一步用10%中性福尔马林固定，随后用浓度为70%、80%、95%和100%乙醇溶液逐步对标本进行脱水，并用二甲苯对标本进行透明处理。然后浸蜡、包埋，包埋时应用纯蜡，并等标本上的蜡完全凝固，将包埋后的标本切成薄片，将切片放置在温水中使之自然展开，随后对切片进行烘干、脱蜡、HE染色、冲洗分色和封片处理。至此，标本制作完成，由专业的病理医生进行观察并诊断。 1.3 观察指标 ①冰冻切片检测情况分析。②以石蜡切片病理诊断方法的诊断结果作为标准，将冰冻切片病理诊断结果与石蜡切片病理诊断结果做对比，分析冰冻切片病理诊断方法的诊断效果。诊断效能分析中，诊断准确率=（真阳例数+真阴例数）/总例数×100.00%；误诊率=（假阳例数+假阴例数）/总例数×100.00%。 2 结果 经过实验探究分析可得，45例患者冰冻切片表现为腺体旋涡状排列，占百分比为66.18%，能够通过显微镜清楚地观察到部分腺体被挤扁以及断续的肌上皮，腺上皮呈增生，且存在部分增生组织融合的现象，排列方式为片状，并能够向周围组织脂肪组织以及间质呈浸润性发展，生长方式为放射状，局部上皮细胞呈条索状；23例患者的冰冻切片表现为大汗腺化生，占百分比为33.82%。68例患者石蜡切片病理