第二节放线菌
一、放线菌(actinomycetes)的定义
一类呈菌丝状生长、主要以孢子繁殖和陆生性强的原核生物。
由于它与细菌十分接近，加上至今发现的五六十属放线菌都呈革兰氏染色阳性，因此，也可认为放线菌就是一类呈丝状生长、以孢子繁殖的革兰氏阳性细菌。
放线菌的菌落特征
1、通常为圆形，类似或略大于细菌的菌落，但比真菌菌落小。
2、菌落表面干燥，有皱褶，致密而坚实当孢子丝成熟时，形成大量孢子堆，铺于菌落表面，使菌落呈现颗粒状、粉状、石灰状或绒毛状，并带有不同的颜色。
3、由于大量基内菌丝伸入培养基内，故菌落与培养基结合紧密，不易被接种针挑起。
4、菌落的正反面颜色常常不一致，菌落边缘培养基的平面有变形现象。
放线菌的主要类型：
多腔孢囊放线菌(菌丝进行纵向和横向分裂，直接产生孢子，菌丝形成细胞群或孢子簇) 嗜皮菌属、弗兰克氏菌属
孢囊放线菌属（以孢囊孢子进行繁殖，孢子的分裂与排列方式用于区分不同的属）游动放线菌属、指孢囊菌属、游动单孢菌属、链霉菌属
其他放线菌属
小单孢菌属、高温放线菌属、诺卡氏菌属、拟诺卡氏菌属、
马杜拉放线菌属、放线菌属
放线菌的孢子形态及产生过程
（1）、（2）、（3）、（4）
分布最广、种类最多、形态特征最典型和与人类关系最密切的streplomyces(链霉菌属)
基内菌丝：(substrate mycelium，又称基质菌丝或一级菌丝，形成色淡、较细的具代谢功能的)
气生菌丝：(aerial mycelium，或称二级菌丝，较粗、颜色较深的分枝菌丝)
链霉菌孢子丝的形态多样：有直、波曲、钩状、螺旋状、轮生（包括一级轮生和二级轮生)等多种。
各种链霉菌有不同形态的孢子丝，而且性状较稳定。
分类、鉴定
分布
放线菌一般分布在含水量较低、有机物丰富和呈微碱性的土壤环境中。
具有泥土所特有的“泥腥味”，主要是由放线菌产生的。
据研究，在每克土壤中，放线菌的孢子数一般在l07左右。放线菌与人类的关系极为密切。
经济意义
1、抗生素中有一半以上是放线菌所产生，链霉菌属又占放线菌中的首位（除青霉素和头孢霉素类外）。
2、放线菌是酶类(葡萄糖异构酶，蛋白酶等)和维生素的产生菌。
3、在有固氮能力的非豆科植物根瘤中，内中共生的固氮菌是放线菌。由于放线菌有很强的分解纤维素、石蜡、琼脂、角蛋白和橡胶等复杂有机物的能力，故它们在自然界物质循环和提高土壤肥力等方面有着重要的作用。
危害
极少数的放线菌对人类构成危害，引起的动物放线菌病(皮肤、脑、肺和脚部感染)和诺卡氏菌病(皮肤、肺和足部感染等)，还有少数放线菌能引起植物的疮痂病。
第三节蓝细菌(cyanobacterium)
蓝细菌亦称蓝藻，能进行光合作用的原核微生物。
所含光合色素和电子供体的不同：
产氧光合细菌（蓝细菌、原绿菌）
不产氧的光合细菌（紫色细菌和绿色细菌）
分布：
常常生长在土壤、岩石上，在树皮上也成片生长，亦有许多种类生长在池塘、湖泊和海洋中。
一.蓝细菌的形态
1、个体形态：
单细胞球状、园柱状、丝状或分枝状串生；
2、群体形态：块状，球状，丝状体，肉眼可见。
细胞壁外面常包有一层或多层粘质层（与细胞荚膜相似），粘液把许多单个细胞聚集在一起成为胶团（块状、球状）这些粘液主要成分是果胶，叫胶质鞘膜成鞘。
二、.蓝细菌的菌体结构
蓝细菌的菌体结构与革兰氏阴性细菌细菌相似。
1、细胞壁
有二层：
外层：脂多糖层
内层：肽聚糖层
可能还有粘液层、荚膜、鞘衣
2、细胞膜：壁下面是膜，单层，很少有中间体。
3、原生质及其内含物：
①核是原核；核周围是含有色素的细胞质部分。
②类囊体：含有叶绿素A及辅助色素如藻兰素、别藻兰素、藻红素。由于各种色素比例不同，故呈现出从绿、蓝到红的不同颜色。
③藻胆蛋白体(PBP=Phycobiliprotein)
(类囊体和藻胆蛋白紧密结合)。PBP是光能捕获色素。
蓝色素(藻兰素、异藻兰素)
红色素(藻红素)
④核蛋白体：70S
⑤气泡：保持细胞浮在上层水面
⑥颗粒：多磷酸颗粒、糖原颗粒
三.蓝细菌的生殖和生态
1.能忍受极端的高温干旱和寒冷。
如80℃高温温泉、南极寒带、沙漠、岩石层下裂缝。
2.水生蓝细菌能生长在水中。“水华”或“水花”现象。
3.存在共生现象：地衣，鱼腥藻（蓝细菌生于红萍叶中）。
部分蓝细菌生长缓慢，如寒冷下蓝细菌每年生长0.4-1mm，有100年的地衣。
蓝细菌的细胞有几种特化形式
静息孢子（A）
异形胞（H）
链丝段：蓝细菌的长形细胞链断裂而形成的短片段，具有繁殖功能。
蓝细菌所特有的一种结构和功能都很独特的细构。
异形胞位于细胞链的中间或末端，数目少而不定。
分布:
鱼腥蓝菌属、念珠蓝菌门和单歧蓝菌属
异形胞特征：
厚壁、浅色，在细胞两端常有折光率高的颗粒存在。
异形胞作用：
1、适应于在有氧条件下进行固氮作用（不会因光合作用而产生对固氮酶有严重毒害的分子氧，却能产生对固氮所必需的ATP）
2、异形胞与邻近的营养细胞间有厚壁孔道相连，这些孔道有利于“光合细胞”和“固氮细胞”间的物质交流。
四、蓝细菌的类群
五、其他的光合细菌
紫色硫细菌：
一群含有菌绿素和类胡萝卜素、能进行光合作用、光合内膜多样、以硫化物或硫酸盐作为电子供体、沉积硫的光能自养型细菌。
因含有不同类型的类胡萝卜素，细胞培养液呈紫色、红色、橙褐色、黄褐色，故称为紫色细菌。
第四节几种其它类型的原核生物
一、立克次氏体
立克次氏体是一种只能寄生在真核细胞内的革兰氏阴性原核微生物。
传播途径：
粪便中常有大量立克次氏体存在，当人体受到虱等的叮咬时，它们乘机排粪于皮肤上。在人随便抓瘴之际，虱粪中的立克次氏体便从伤口乘虚而进入血流。
二、支原体
一类无细胞壁的原核生物，也是整个生物界中尚能找到的能独立营养的最小型生物。
首次分离支原体寄主：患传染性胸膜肺炎的病牛中，
PPO，PPLO-------衣原体
与人类的关系：害明显地大于利。
支原体的特点有：
1、支原体在光学显微镜下属勉强可见(直径约为150—300nm，一般为250nm左右)
2、缺乏细胞壁(细胞呈G-，多形，易变，有滤过性，对渗透压敏感，对表面活性剂，以及对抑制细胞壁合成的青霉素、环丝氨酸等抗生素不敏感)
3、菌落小呈特有的“油煎蛋”状(直径一般仅为0.1—1.0mm)
4、以二等分裂方式进行繁殖；
5、能在含血清、酵母膏等营养丰富的人工培养基上独立生长；
6、具有氧化型或发酵型的产能代谢，在好氧或厌氧条件下生长；
7、对能与核糖体结合、抑制蛋白质生物合成的四环
素、红霉素等破坏细胞膜结构的表面活性剂都极为敏感。
三、衣原体
一类在真核细胞内营专性能量寄生的小型革兰氏阴性原核生物。
衣原体与病毒比较：
1、有细胞构造；
2、细胞内同时含有DNA和RNA两种核酸；
3、有革兰氏阴性细菌特征的含肽聚糖的细胞壁；
4、细胞内有核糖体；
5、以二等分裂方式进行繁殖；
6、有不完整的酶系统，尤其缺乏产能代谢的酶系统，因此须进行严格的细胞内寄生；
7、一般对抑制细菌的一些抗生素和药物例如青霉素和磺胺等都很敏感。
衣原体有一个特殊的生活史：
具有感染力的个体称为原体，它是一种不能运动的球状细胞，直径小于0.4um，有坚韧的细菌型细胞壁。
在宿主细胞内，原体逐渐伸长．形成无感染力的个体，称作始体，这是一种薄壁的球状细胞，形体较大。
放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取1、实验目的 1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法 2、了解和掌握种子制备和摇瓶发酵技术和方法 3、了解抗生素发酵的一般规律和代谢调控理论 4、了解小型发酵罐的基本结构 5、熟悉掌握小型发酵罐的使用方法和保养 6.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法； 7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。 8.掌握放线菌次级代谢物的初步纯化及牛津杯实验的基 本原理和操作技术 二、实验原理 ①发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成；供实验室使用的小型发酵罐，其容积可从约lL至数百升或稍大些。一般来说，5L以下是用耐压玻璃制作罐体，5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需要的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。 ②抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有转基因工程菌 培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。 ③放线菌发酵结束后，次级代谢物可能与菌体结合，工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理，释放与菌体结合的次级代谢物，并采用加热发酵液70 ℃，2 min使蛋白凝固，所得酸性滤液，在经碱处理，进一步去除蛋白。 抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检
《环境工程微生物学》 实验报告 实验名称：光学显微镜的操作及细菌的观察专业：环境科学 班级：环科111 学号：1108100056 学生姓名：李喆 指导教师：_____ 钱晓莉__ 实验日期:_______ 2013.4.8__
一、实验名称 光学显微镜的操作及细菌、放线菌和蓝细菌个体形态的观察。 二、实验目的 1、了解普通光学显微镜的构造和原理，掌握显微镜的操作和保养方法。 2、观察、识别几种细菌、放线菌和蓝细菌的个体形态，学会生物图的绘制。 3、学习用压滴法制作标本片。 三、反应原理 1）显微镜的结构如下图： 放大倍数=目镜放大倍数×物镜放大倍数
四、实验仪器及其材料 （1）显微镜、擦镜纸、香柏油或液体石蜡、二甲苯、 （2）示范片：细菌三形、弧状、丝状、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 五、实验步骤 1、显微镜的操作： 1）安放：右手握住镜臂，左手托住镜座，使镜体保持直立。桌面要清洁、平稳，要选择临窗或光线充足的地方。单筒的一般放在左侧，距离桌边3-4厘米处。 2）清洁：检查显微镜是否有毛病，是否清洁，镜身机械部分可用干净软布擦拭。透镜要用擦镜纸擦拭，如有胶或粘污，可用少量二甲苯清洁之。 3）对光：镜筒升至距载物台1-2厘米处，低倍镜对准通光孔。调节光圈和反光镜，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜，反光镜要用双手转动。若使用的为带有光源的显微镜，可省去次步骤，但需要调节光亮度的旋钮 4）安装标本：将玻片放在载物台上，注意有盖玻片的一面一定朝上。用弹簧夹将玻片固定，转动平台移动器的旋钮，使要观察的材料对准通光孔中央。 5）调焦：调焦时，先旋转粗调焦旋钮慢慢降低镜筒，并从侧面
肺放线菌病24例临床及影像学分析并文献复习 发表时间：2013-02-22T11:22:52.793Z 来源：《医药前沿》2012年第34期供稿作者：高万本[导读] 肺放线菌病是一种少见的慢性化脓性肉芽肿性疾病，属肺霉菌感染的一种。 高万本（绵阳市第三人民医院医学影像科四川绵阳 621000） 肺放线菌病是一种少见的慢性化脓性肉芽肿性疾病，属肺霉菌感染的一种。近年来由于抗生素、激素、细胞毒性药物和免疫抑制剂的大量应用，肺放线菌病的发病率有所增加。为探讨肺放线菌病的临床及影像学表现特点及诊断方法，结合我院近年诊治的1例肺放线菌病，以及国内近18年(1989～2006年)文献报道的肺放线菌病23例[1-18]进行综合分析并进行文献复习。 1 临床资料 24例肺放线菌病均径病理证实。其中男15例，女9例，年龄11~87岁，平均年龄49岁。临床表现：24例均有咳嗽、咳痰等呼吸道症状；其中伴胸痛者10例，伴发热者8例，咳痰带血者3例，痰中带黄色颗粒者2例，盗汗者1例。发病部位：病变位于左肺上叶8例，左肺下叶3例，位于右肺上叶6例，右肺中叶3例，右肺下叶2例，双肺均有病变2例。病程1个月～5年不等。影像学表现：12例表现为肺部实质性肿块或球形病灶，边缘有分叶，周围无卫星病灶；1例病变向上经胸廓入口侵犯至颈根部；5例表现为肺部片状阴影伴胸腔积液；3例表现为支气管扩张改变；2例肺部有空洞改变；1例表现为气管及纵隔向患侧移位。临床诊断及治疗：15例术前误诊为肺癌，2例误诊为结核球，4例误诊为肺化脓症，2例镜检确诊为本病，1例术中冰冻切片为恶性，术中行扩大切除，术后病检为放线菌病，术后半年复发，再次行手术扩大切除。20经例手术治疗，4例保守治疗，术后均作病理检查，确诊后给予大剂量青霉素静脉滴注。术中见患肺与胸壁粘连，尤以肿物处明显，肿物大小各不相同，形态各异，无包膜，质地坚硬，并与健肺粘连，浸润生长。标本大体所见：肿物部位成灰白色或灰黄色，实性，挤压有少量脓液溢出。光镜下见病变肺组织类似化脓性肉芽肿样改变，有大量中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞浸润，其间可见大小不等的坏死区，坏死区边缘可见成团粉染的无结构团块，其中大部分成蓝紫色，周围部分排裂成放射状，末端呈球形膨大，PAS染色团块无结构物阳性反应，病变周围的肺组织类似大叶性肺炎肉质性变及纤维化。其中7例光镜观察到硫磺颗粒，2例观察到放线菌丝，3例痰培养见霉菌生长。 2 讨论 肺放线菌病是由以色列放线菌感染所致，致病菌一般寄生于健康人龋齿及扁桃体小窝内，常因吸入口腔分泌物而得病。放线菌从支气管蔓延到肺，先引起支气管肺炎，后形成肉芽肿，并侵入胸膜或胸壁软组织，常形成脓胸或胸壁窦道，如并发其他细菌感染，病变常迁延不愈。肺放线菌病发病部位多变，病程复杂[18]。临床表现以肺部慢性炎性表现多见，偶有咳黄色颗粒者，症状不典型。影像学改变与肺炎、肺脓肿、肺结核、肺癌、支气管扩张相似，易误诊。本组病例除2例诊断正确，其余22例均误诊。据统计[10]，从1971~1988年日本征集到的43例肺放线菌病例中，有30例(占70%)是通过肺病理组织切片检查确诊的。本组有15例(占63%)初始疑为肺癌、肺结核或支气管扩张，治疗后症状和影像学表现均无改善，最后经纤支镜检查、手术肺叶切除、肺病理组织切片检查确诊。说明本病早期确诊困难，误诊率高。误诊原因有[17]：(1)多数临床医生和影像学医生认为放线菌感染较罕见，对其致病性重视不够，对病原菌缺乏认识。(2)在工作中，分离临床标本中的放线菌比较困难，因为正常菌群的拮抗作用，营养竞争，这需要有标准的培养技术，控制合适的生长条件和针对某些菌采用特殊的培养基。(3)使用不适当的检验方法导致检出率下降。由于放线菌培养需要厌氧环境，而目前大多数医院开展的痰培养均是需氧培养，加上培养前用药影响，故痰培养均未能分离出放线菌。(4)临床实验室仍未广泛应用检验放线菌较可靠的现代分类学方法[11]。放线菌并非真菌，而类似细菌，菌种的鉴定不能仅靠形态学，必须结合生化反应。如果标本在使用抗生素治疗前采集，临床上又有高度怀疑放线菌病时，可适当延长厌氧培养时间，以提高阳性培养结果。肺放线菌病可靠的诊断方法是作纤支镜活组织检查，检出放线菌或对咯出物及窦道流出物的涂片检查，找到硫磺颗粒，后者是一种简单易行的方法，但阳性率不高，本组阳性率为27%[17]。胸水中培养出放线菌也可确诊。 参考文献 [1]沙宝康，戴法召.肺放线菌病1例报告[J].内蒙古医学杂志.1989,9 (2):63. [2]张澜,崔忠厚.左下肺放线菌病误诊1例[J].中华胸心血管外科杂志,1995,11(3):118. [3]刁晓源,冯端兴,乐万祥,等.肺放线菌病2例[J].中华结核和呼吸杂志,1995,18(4):238. [4]左万里.肺放线菌病误诊为支气管扩张症1例[J].中国实用内科杂志,1997,17(10):595. [5]王军,王占东,吕建军.肺放线菌病1例[J].河北医科大学学报,1998,19(6):334. [6]全亚群.肺放线菌病误诊为肺肿瘤1例[J].山西医药杂志,1998,27 (6):502. [7]牟小芳,张进川.肺癌合并下呼吸道放线菌病1例[J].中华结核和呼吸杂志,1998,21(7):391. [8]王礼斌,熊健,汤服民.肺放线菌病误诊1例[J].实用医药杂志,1999,12(1):14. [9]张文,田新平,曾小峰,等.肺放线菌病1例[J].中华传染病杂志,1999,17(2):144. [10]王红霞,李敬孚.术后并发脓胸的肺放线菌病的治疗[J].国外医学.呼吸系统分册,1995,15(2):11. [11]阮继生,刘志恒,梁丽糯,等.放线菌研究及应用[M].北京:科学出版社,1990,393. [12]刘国媚,刘平，崔皖芳,等.原发生肺放线菌病临床分析[J].安徽医药,2001,5(1):41-42. [13]卑贵光,刘智明,马洁韬,等.肺放线菌病的CT诊断[J].中华综合医学,2002,3(5):447-448. [14]张光然.肺放线菌病2例误诊分析[J].临床经验荟萃,2002,P(5):25. [15]崔书安,徐宝亮,仲伟英.肺放线菌病1例[J].医学影像学杂志,2002,12(4):257. [16]线胤生,弓显凤.肺放线菌病例[J].中国抗感染化疗杂志,2004,4 (5):308—309. [17]李少文,马琼凤,李庆安.肺放线菌病11例临床分析并文献复习.Journal of postgraduates of Medicine(Medicine Edition),2004;27:32. [18]陈刚,张林,叶宏飞.肺放线菌病的诊断与治疗11例报告[J].中国医科大学学报,2005,34(2):187.
二、放线菌 放线菌由于菌落呈现放射状而名。它是个革兰氏染色阳性的原核生物类群。放线菌是一类呈菌丝状生长、以孢子繁殖和陆生性强的原核微生物。 放线菌与细菌有许多共同特点：（1）都有原核；（2）菌丝直径与细菌相仿。（3）细胞壁主要成分是肽聚糖，大多数是革兰氏阳性菌。（4）核糖体为70S。(5)最适生长PH值与多数细菌的生长PH相近，一般呈微碱性。（6）凡细菌所敏感的抗生素，放线菌也同样敏感。（7）对溶菌酶敏感。 放线菌在自然界分布很广，如土壤、水域、空气、食品、动植物的体表和体内，尤其适宜在含水量较低、有机物丰富的中性或偏碱性土壤中生存。泥土所特有的泥腥味主要是放线菌产生的代谢物引起的。 放线菌突出特征之一是能产生各种抗生素。目前使用的60%以上的抗生素是由放线菌产生的。放线菌与农业的关系也极为密切。如农用链霉素、红霉素、氯霉素、土霉素、金霉素、卡那霉素、庆大霉素、井岗霉素等。 少数防线菌能引起植物病害，如马铃薯和甜菜的疮痂并等。（一）放线菌的形态特征 放线菌的形态多样，有杆状或丝状，大部分放线菌菌体由分枝状丝状物组成，称为菌丝，许多菌丝聚集在一起，形成菌丝体。 单细胞；革兰氏阳性；不能运动；原核。 以链霉菌为例来阐述防线菌的一般形态构造。 链霉菌细胞呈分枝丝状。按菌丝形态和功能分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。
1.基内菌丝： 生长在培养基内部或表面，无横隔，细胞内有多个原核。长度不定，菌丝直径0.5—1微米，颜色较浅。可产生黄、红、紫等各种颜色的水溶性或脂溶性色素，使培养基着色。基内菌丝的主要功能是吸收营养和排泄代谢物。 2.气生菌丝： 基内菌丝长出培养基后伸向空间，并分化出较粗、颜色较深的气生菌丝。气生菌丝的主要功能是分化形成孢子丝。 3.孢子丝： 孢子丝是气生菌丝生长到一定阶段特化形成的丝状物。孢子丝的形态和排列方式多样。有直立、波曲、钩状、螺旋状、丛生、轮生等，其中螺旋状最常见。孢子丝的主要功能是形成孢子，起繁殖作用。孢子丝生长到一定阶段就产生分生孢子。 孢子丝的形态和排列方式如螺旋的数目、疏密、旋转方向等均为种的特征。 分生孢子的形状及具有的色素，如呈灰、白、黄、橙、红、蓝、
第二章《原核微生物》习题 一、名词解释 1．细菌： 2．聚-β-羟丁酸(poly-β-hydroxybutyric acid，PHB ) 3．异染粒(metachromatic granules) 4．羧酶体(carboxysome) 5．芽孢(spore) 6．渗透调节皮层膨胀学说 7．伴孢晶体（parasporal crystal） 8．荚膜（capsule） 9．原核生物： 10．古生菌(archaea) 11．L型细菌 12．鞭毛(flagella) 13．富营养化(eutrophication)： 14．假肽聚糖 15．蓝细菌： 16．支原体。 17．立克次氏体 18．衣原体 二、填空题 1．证明细菌存在细胞壁的主要方法有，，和。 2．细菌细胞壁的主要功能为，，和等。 3．革兰氏阳性细菌细胞壁的主要成分为和，而革兰氏阳性细菌细胞壁的主要成分则是，，和。 4．肽聚糖单体是由和以糖苷键结合的，以及和 3种成分组成的，其中的糖苷键可被水解。 5．G+细菌细胞壁上磷壁酸的主要生理功能为，，和等几种。 6．G-细菌细胞外膜的构成成分为，，和。 7．脂多糖（LPS）是由3种成分组成的，即，和。 8．在LPS的分子中，存在有3种独特糖，它们是，和。 9．用人为方法除尽细胞壁的细菌称为，未除尽细胞壁的细菌称为，因在实验室中发生缺壁突变的细菌称为，而在自然界长期进化中形成的稳定性缺壁细菌则称为。 10．细胞质膜的主要功能有，，，和。 三、选择题 1．G细菌细胞壁的最内层成分是（）。 （1）磷脂；（2）肽聚糖；（3）脂蛋白；（4）LPS 2．G+细菌细胞壁中不含有的成分是（）。 （1）类脂；（2）磷壁酸；（3）肽聚糖；（4）蛋白蛋 3．肽聚糖种类的多样性主要反映在（）结构的多样性上。 （1）肽桥；（2）黏肽；（3）双糖单位；（4）四肽尾 4．磷壁酸是（）细菌细胞壁上的主要成分。 （1）分枝杆菌；（2）古生菌；（3）G+；（4）G-
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化 一、实验目的 1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。 2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。 3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。 4. 学习平板菌落计数法。 二、实验原理 将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。 要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。 表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求 样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度 /℃培养时间/d 土样细菌稀释分离10-5，10-6， 10-7 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2 土样放线菌稀释分离10-3，10-4， 10-5 高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3， 10-4 马丁氏琼脂28～30 3～5 面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5， 10-6 马铃薯葡萄糖28～30 2～3 细菌分离平 板 细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2 三、实验材料 1. 菌源土样 2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。 3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。 4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。 4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。 （一）系列稀释平板法 1. 取土样 选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。盛土的容器应是无菌的。将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。同时取10～15g，称重后经105℃烘干8h，置干燥器中冷却后再次称重，计算含水量。土样采集后应及时分离，凡不能立即分离的样品，应保存在低温、干燥条件下，尽量减少其中菌种的变化。 2. 制备土壤稀释液 称土样1g于盛有99mL无菌水的三角瓶中，充分振荡，此即为10-2浓度的菌悬液。用无菌移液管吸取悬液0.5mL于4.5mL无菌水试管中，用移液管吹吸三次，摇匀，此即为10-3浓度。同样方法，依次稀释到10-7。稀释过程需在无菌室或无菌操作条件下进行。
放线菌学期末作业 1，为什么说放线菌是一类介于细菌和霉菌之间，又更接近于细菌的一类原核微生物？ 答： 放线菌是一种具有丝状分支的单细胞，状态与霉菌相像。所以人们认为放线菌是介于细菌和真菌之间的过渡型。放线菌更接近于细菌，主要是因为： 1，有原始核结构，无核膜和核仁； 2，放线菌虽有发育良好的菌丝体，但大部分无隔，为单细胞； 3，放线菌菌丝比真菌细得多，其直径与细菌相似； 4，细胞壁主要成分为肽聚糖，并含有DAP； 5，游动放线菌的鞭毛与细菌鞭毛类似，无“9+2”结构； 6，放线菌同大部分细菌一样，对酸敏感，在微碱性条件下生长良好；6，放线菌属无性繁殖，同细菌一样，尚未发现其有性世代； 7，对溶菌酶和作用于细菌的抗生素敏感； 8，DNA重组方式与细菌相同； 9，核蛋白体为70S。 2，基内菌丝、气生菌丝和孢子丝在结构上有何区别？它们又有何联系？ 答： 基内菌丝 链霉菌的孢子落在适宜的固体基质表面，在适宜条件下吸收水分，孢子肿胀，萌发出芽，进一步向基质的四周表面和内部伸展，形成基内菌丝，又称初级菌丝或者营养菌丝。 气生菌丝 是基内菌丝长出培养基外并伸向空间的菌丝，又称二级菌丝。 在显微镜下观察时，一般气生菌丝颜色较深，比基内菌丝粗，直径为 1.0～1.4微米，长度相差悬殊，形状直伸或弯曲，可产生色素。 孢子丝 是当气生菌丝发育到一定程度，其顶端分化出的可形成孢子的菌丝，叫孢子丝，又称繁殖菌丝。 孢子成熟后，可从孢子丝中逸出飞散。孢子丝的形状有直形、波曲、钩状、螺旋状，螺旋状的孢子丝较为常见，其螺旋的松紧、大小、螺数和螺旋方向因菌种而
异。孢子丝的着生方式有对生、互生、丛生与轮生（一级轮生和二级轮生）等多种。 基内菌丝→气生菌丝→孢子丝 3.放线菌的那些特征可作为其分类鉴定的重要依据？ 答：色素，菌丝是否有隔，对氧需求，寄生或腐生，基因组成，细胞壁成分，16sRNA。 4.试介绍放线菌在工业、农业、医药、食品等方面的应用。 答： 工业 嗜盐放线菌能产生胞外多糖及其他多聚物，蛋白含量极高(在相同面积的蛋白质产量相当于种植玉米的125倍，养鱼的70倍，养牛的600倍)，酶活性很特殊(在高盐浓度下仍保持高活性)，也产生抗生素、胰岛素、维生素等，因此嗜盐放线菌是一类很有开发价值的资源。例如，嗜盐放线多孢菌可以将甘氨酸转化为甜菜碱，它又是一种重要的高效保护剂。国内外有不少微生物学工作者正在试图从高盐碱环境里找到一种具有较高脱卤酶活性的嗜盐菌菌株，以期能达到高效、彻底消除环境污染物的目的。 农业 放线菌大量存在于土壤中，它们中绝大多数是腐生菌，能将动植物的尸体腐烂、分解，然后转化成有利于植物生长的营养物质。还有弗兰克氏菌，生长在许多非豆科植物的根瘤里，能固定大气中的氮，成为植物能利用的氮肥。 医药 人们常用放线菌产生的链霉素、红霉素这一类抗生素药物治病，使许多病人转危为安。利用放线菌还可以生产维生素B12 、蛋白酶和葡萄糖异构酶等医药用品。食品 低温放线菌进行低温发酵时可生产许多风味食品，并且这种发酵方式可以节约能源和减少中温菌污染。目前发现的几千种抗生素中，有一半以上是由放线菌产生的。它的菌落颜色鲜艳，呈放射状，对人体无害，因此，人们常用它作食品染色剂，既美观，又安全。 5.请介绍放线菌细胞的构造特征。 答： 细胞壁：细胞壁是位于菌体的外层，内侧紧贴细胞膜的一层无色透明，坚韧而有弹性的结构。细胞壁约占细胞干重的10%—25%。主要由肽聚糖组成。 细胞膜：是围绕细胞质外面的双层膜结构。由磷脂(20-30%)和蛋白质(50-70%)组成.基本结构是磷脂双层：疏水的脂肪酸链排列在内，亲水的磷酸基排列在外。蛋白质镶嵌在双层磷脂中，并伸向膜内外两侧。边缘蛋白和整合蛋白（跨膜蛋白）
放线菌抗生素的发酵及目的产物的提取 一、实验目的 1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法 2、了解和掌握种子制备和摇瓶发酵技术和方法 3、了解抗生素发酵的一般规律和代谢调控理论 4、了解小型发酵罐的基本结构 5、熟悉掌握小型发酵罐的使用方法和保养 6.掌握抗生素生物效价测定的原理和方法； 7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关的操作方法。 8.掌握放线菌次级代谢物的初步纯化及牛津杯实验的基本原理和操作技术 二、实验原理 ①发酵罐是进行液体发酵的特殊设备。生产上使用的发酵罐容积大，均用钢板或不锈钢板制成；供实验室使用的小型发酵罐，其容积可从约lL至数百升或稍大些。一般来说，5L以下是用耐压玻璃制作罐体，5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备有控制器和各种电极，可以自动地调控试验所需要的培养条件，是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需的设备。 ②抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现
临床常用的抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的化合物。 ③放线菌发酵结束后，次级代谢物可能与菌体结合，工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理，释放与菌体结合的次级代谢物，并采用加热发酵液70 ℃，2 min使蛋白凝固，所得酸性滤液，在经碱处理，进一步去除蛋白。 抗生素的效价常采用微生物学方法测定，它是利用抗生素对特定的微生物具有抗菌活性的原理来测定抗生素效价的方法，如管碟法。管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法，我国药典也采用此法。管碟法是根据抗生素在琼脂平板培养基中的扩散渗透作用，比较标准品和检品两者对试验菌的抑菌圈大小来测定供试品的效价。管碟法的基本原理是在含有高度敏感性试验菌的琼脂平板上放置小钢管（内径6.0±0.l mm，外径8.0±0.l mm，高10±0. lmm），管内放人标准品和检品的溶液，经16~18小时恒温培养，当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此，当抗生素浓度达到或高于MIC（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的无菌生长的区域，常呈圆形，称为抑菌圈。根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系，比较抗生素标准品与检品的抑菌圈大小，可计算出抗生素的效价。 常用的管碟法有：一剂量法、二剂量法、三剂量法。后二法已经列入药典。二剂量法系将抗生素标准品和供试品各稀释成一定浓度比
放线菌抗生素得发酵及目得产物得提取 一、实验目得 1、熟悉掌握土壤中分离抗生素及培养方法 2、了解与掌握种子制备与摇瓶发酵技术与方法 3、了解抗生素发酵得一般规律与代谢调控理论 ４、了解小型发酵罐得基本结构 ５、熟悉掌握小型发酵罐得使用方法与保养 6。掌握抗生素生物效价测定得原理与方法; 7. 掌握管碟法测定抗生素生物效价相关得操作方法、 8、掌握放线菌次级代谢物得初步纯化及牛津杯实验得基本原理与操作技术 二、实验原理 ①发酵罐就是进行液体发酵得特殊设备。生产上使用得发酵罐容积大,均用钢板或不锈钢板制成;供实验室使用得小型发酵罐,其容积可从约lＬ至数百升或稍大些。一般来说,5L以下就是用耐压玻璃制作罐体,5L以上用不锈钢板或钢板制作罐体。发酵罐配备有控制器与各种电极,可以自动地调控试验所需要得培养条件,就是微生物学、遗传工程、医药工业等科学研究所必需得设备、 ②抗生素(antibｉotics)就是由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生得具有抗病原体或其它活性得一类次级代谢产物,能干扰其她生活细胞发育功能得化学物质。现临床常用得抗生素有转基因工程菌培养液液中提取物以及用化学
方法合成或半合成得化合物。 ③放线菌发酵结束后,次级代谢物可能与菌体结合,工业上常采用草酸或磷酸等酸化剂处理,释放与菌体结合得次级代谢物,并采用加热发酵液７0 ℃,2 min使蛋白凝固,所得酸性滤液,在经碱处理,进一步去除蛋白、 抗生素得效价常采用微生物学方法测定,它就是利用抗生素对特定得微生物具有抗菌活性得原理来测定抗生素效价得方法,如管碟法。管碟法就是目前抗生素效价测定得国际通用方法,我国药典也采用此法。管碟法就是根据抗生素在琼脂平板培养基中得扩散渗透作用,比较标准品与检品两者对试验菌得抑菌圈大小来测定供试品得效价。管碟法得基本原理就是在含有高度敏感性试验菌得琼脂平板上放置小钢管(内径6。０±0、ｌ mm,外径8、0±０。ｌ mm,高10±０。ｌｍｍ),管内放人标准品与检品得溶液,经16～１8小时恒温培养,当抗生素在菌层培养基中扩散时,会形成抗生素浓度由高到低得自然梯度,即扩散中心浓度高而边缘浓度低。因此,当抗生素浓度达到或高于MIＣ(最低抑制浓度)时,试验菌就被抑制而不能繁殖,从而呈现透明得无菌生长得区域,常呈圆形,称为抑菌圈。根据扩散定律得推导,抗生素总量得对数值与抑菌圈直径得平方成线性关系,比较抗生素标准品与检品得抑菌圈大小,可计算出抗生素得效价、 常用得管碟法有:一剂量法、二剂量法、三剂量法。后二法已经列入药典。二剂量法系将抗生素标准品与供试品各稀释成一定浓度比例(2:1或4:１)得两种溶液,在同一平板上比较其抗药活性,再根据
放线菌与诺卡菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体复习题 一、选择题： A型题： 1．下述微生物中哪种不是原核细胞型 A．钩端螺旋体 B.沙眼衣原体 C.衣氏放线菌 D.肺炎支原体 E.白色念珠菌 2．下述哪不是依色列放线菌的特性 A．在组织病灶中可出现硫磺样颗粒 B.可导致口腔内感染 C. 属于真核细胞型 微生物 D.抗生素治疗有效 E.机体对放线菌的免疫主要靠细胞免疫 3．衣氏放线菌感染的最常见部位是 A.肠道 B.中枢神经系统 C.面颈部软组织 D.胸膜 E.泌尿道 4．放线菌在机体组织中形成的菌落是 A.硫磺样颗粒 B.细菌L型 C.荷包蛋样菌落 D.黑色菌落 E.绒毛样菌落 5．放线菌与龋齿和牙周炎有关，能产生粘性很强的物质，种物质是 A. 6-去氧太洛糖 B.荚膜 C.普通菌毛 D.顶端结构 E.鞭毛 6．放线菌生长时，对气体的要求是 A.专性需氧 B.专性厌氧 C.需加30％C02 D.微需氧或厌氧 E.兼性厌氧 7．诺卡菌属引起的感染多为 A.内源性感染 B.蚊虫叮咬感染 C.动物的咬伤 D.外源性感染 E.接触感染 8．诺卡菌广泛存在于 A .口腔 B.土壤 C.皮肤 D.肠道 E.水 9．分离放线菌应使用 A.沙保培养基 B.罗氏培养基 C.碱性蛋白胨水培养基 D.BCYE培养基 E.S-S琼脂 10．下述对放线菌正确的描述为 A.多数可致人类疾病 B.多以分裂方式繁殖、有菌丝 C.形成菌丝及孢子的真核生物 D.必须在活的细胞中才能生长繁殖 E.感染细胞内可形成包涵体 11．放线菌感染的病变部位可见 A.异染颗粒 B.质粒 C.硫磺样颗粒 D.内含颗粒 E.营养颗粒 12．可引起内源性感染，好发部位为颈部和颜面部的病原体是 A.衣原体 B.真菌 C.放线菌 D.支原体 E.立克次体 13．关于放线菌错误的是
第一章：原核生物的形态构造和功能 一，选择题: 1，能产生大量分枝和气生菌丝的放线菌菌落，与培养培养基的结合，往往具有如下特征：A．较松，极易挑取；B。较松，不易挑取； C．较紧，容易挑取；D。较紧，易不挑取； 答：（）2，由于形成放线菌菌落的气生菌丝之间存在以下状况，故菌落表面干燥： A．含有大量的水；B。含有少量的水； C．一般不存在毛细管水；D。以上答案都不对。 答：（）3，与细菌相比，放线菌菌落的特征是： A．光滑，湿润，较大，透明，易挑取；B。光滑，干燥，较大，不透明，不易挑取； B．湿润，较小，皱褶，透明，不易挑取；D。干燥，紧密，较小，不透明，不易挑取； 答：（）4，细菌细胞膜是一个重要的代谢中心，因此，细菌细胞： A．可以没有细胞壁，绝不能没有细胞膜；B。既不能无壁也不能无膜； C．可以无膜但不能无壁；D。以上答案都不对。 答：（）5，为在光学显微镜下能见到细菌荚膜，通常使用以下某种物质对其进行负染色： A。孔雀绿；B。结晶紫—碘液；C。硝酸银；D。碳酸墨水（或中国墨） 答：（）6，创立医学上外科消毒术的著名学者是： A．巴斯德；B。科赫；C。弗莱明；D。李斯特； 答：（）7，工业发酵生产抗生素时，放线菌主要借助哪种方式以产生新的菌丝体： A．有性孢子；B。无性孢子； C．菌丝体断裂；D。有性接合； 答：（）8，电子显微镜观察研究表明：放线菌分生孢子的形成可通过两条途径实现： A．细胞膜内陷和细胞壁，细胞膜同时内陷；B。细胞膜内陷和细胞壁内陷； C．细胞质凝聚和细胞壁内陷；D。细胞质凝聚和细胞壁，细胞膜同时内陷； 答：（）9，在分类学上，各菌株DNA 的同源性在70%以上时，其分类水平应属于： A．色较浅，直径较粗；B。色较浅，直径较细； C．色较深，直径较细；D。色较深，直径较粗； 答：（）10．原核微生物主要有6类，它们是： A．细菌，放线菌，蓝细菌，立克次氏体，衣原体和螺旋体； B．细菌，放线菌，蓝细菌，粘菌，立克次氏体和衣原体： C．细菌，放线菌，蓝细菌，粘细菌，支原体和立克次氏体； B。细菌，放线菌，蓝细菌，立克次氏体，支原体和衣原体； 答：（）
注意：由于实验内容较多，所以我们只要把蓝色字体部分写在实验报告上即可，黑体字部分自己看一下。由于11-13周为教学质量检查周，督导随时可能来查，所以预习报告还是要写。 细菌、酵母菌、放线菌和真菌接种方法和形态观察 一、微生物的接种技术 1 目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2 基本原理 将微生物培养物或含有微生物的样品在无菌条件下移植到培养基上的操作技术称为接种。接种的关键是严格进行无菌操作。常用的接种方法有斜面接种、液体接种、穿刺接种、平板接种和固体接种等。 3 实验材料 3.1 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、啤酒酵母、玫瑰暗黄链球菌、曲霉、荨麻青霉的斜面培养物 3.2 培养基：营养琼脂培养基、马铃薯葡萄糖琼脂培养基及高氏1号培养基的斜面和平板3.3 试剂：5ml无菌生理盐水试管 3.4 仪器与其他用品 酒精灯、记号笔、试管、橡胶塞、试管架、接种环、培养皿、超净台等。 4 操作步骤 4.1 斜面接种法 斜面接种法主要用于传代活化、纯化培养、鉴定或保存菌种。通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，液体培养基中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在外侧，接种管在内侧，斜面向上管口对齐，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。 右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍。 用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出。 接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。不同种类微生物的接种方式各异，具体如下： （1）细菌和放线菌由斜面培养基底部自下而上来回做“Z”形密集划线，勿划破培养基。（2）真菌菌落为局限性生长的曲霉、青霉等采用上下涂布法接种。菌落为扩散性生长的根霉、毛霉等采用点植法接种。 4.1.6塞管塞和接种环灭菌 接种完毕，将接种环抽出，灼烧管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放
放线菌酮, 环己酰亚胺。通过干扰蛋白质合成过程中的移位步骤而阻碍翻译过程。常用来抑制生物体外真核细胞的蛋白质合成，通过将放线菌酮去除可以很快地取消它的作用。 推荐用DMSO溶解cycloheximide，配制成100毫克/毫升。具体要根据实验要求。 after transfection and after 5 hr ofcycloheximide (50 ug/ml) treatment following 16 hr of expression 拼音:fangxianjuntong 英文名称：actidione 说明:由产生放线菌酮的放线菌发酵液中提得的一种抗生素。无色晶体。熔点119~121℃。易溶于甲醇、乙醇和丙酮，微溶于水。耐酸、耐热。在碱性情况下易分解。对酵母菌、霉菌、原虫等病原菌等有抑制作用。对
细菌无显著抑制作用。农业上，用于防治樱桃叶斑病、樱花穿孔病、桃树菌核病、橡树立枯病、薄荷及松树的疱锈病、甘薯黑疤病、菊花黑星病和玫瑰的霉病等。此外，也是鼠类、兔子、狗熊、野猪等的忌避剂。也可由链霉素、制霉菌素等发酵液中的副产物制得。 性状无色片状结晶。2℃时溶解度(g/100ml)：水中2.1，乙酸戊酯7.0。溶于氯仿、乙醇、乙醚、丙酮和甲醇。 熔点119.5-121℃(115-116℃)，比旋光度[α]D25 +6.8?(c=2，水中)，[α]D29+3.38?(c=9.47，甲醇中)。有毒，半数致死量(小鼠，静脉)150mg/kg。有刺激性。 放线菌酮是一种在真核生物中对蛋白质生物合成过程有抑制效应的 化合物，它是灰色链霉菌（Streptomyces griseus）的一种产物。它通过干扰蛋白质合成过程中的易位步骤而阻碍翻译过程。在生物药学研究中放线菌酮常被用来抑制生物体外真核细胞的蛋白质合成。这个方法非常有效、快速和廉价。而且通过将放线菌酮从试管中去除掉可以很快地取消它的作用。 由于放线菌酮拥有非常强烈的毒性，包括损害DNA、导致畸形胎儿和其它对繁殖过程的效应（包括出生障碍和对精子的毒性），它一般只被用在体外的研究应用中，它不适宜在人体内作为抗菌素使用。过去在农业中它被用来作为杀真菌剂，但是由于对它的危险性的认识不断提高这个用法已经很少了。 碱可以破坏放线菌酮，因此假如工作台面或者容器被放线菌酮污染后只要使用无害的碱溶液（比如肥皂）洗就可以了。
细菌、酵母菌、霉菌、放线菌的异同 1细胞结构 细胞结构群体特征繁殖方式 细菌原核细胞菌落光滑，湿润有些透明二分裂 放线菌原核细胞菌落表面丝绒状，干燥不透明孢子生殖 霉菌真核细胞菌落较大，干燥不透明，有颜色孢子生殖 酵母菌真核细胞与细菌菌落相似，出芽、孢子生殖 原核生物没有成形的细胞核，细胞质中只有核糖体。真核生物有细胞核。 2菌落特征比较： 细菌：湿润，粘稠，易挑起 放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素 酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光滑，比细菌的菌落大而厚 霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状，无固定大小，多有光泽，不易挑起 3细胞壁成分的异同： 细菌肽聚糖磷壁酸类脂质蛋白质 G+ 含量高含量较高一般无不含 G- 含量低不含含量较高含量高 细菌分为G+和G-，G+肽聚糖含量高，G-含量低；G+磷壁酸含量较高，而G-不含磷壁酸；G+类脂质一般无，而G-含量较高；G+不含蛋白质，G-含量较高。 放线菌为G-，其细胞壁具有G-所具有的特点。 酵母菌的细胞壁外层为甘露聚糖，内层为葡聚糖； 霉菌的细胞壁成分为几丁质、蛋白质、葡聚糖。 原生质体制备方法： G+菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶 G-菌原生质体获得：EDTA鳌合剂处理，溶菌酶、肽酶 放线菌原生质体获得：青霉素、溶菌酶、肽酶
霉菌原生质体获得：纤维素酶。 酵母菌原生质体获得：蜗牛消化酶。 原生质体（protoplast）：脱去细胞壁的细胞叫原生质体，是一生物工程学的概念。动物细胞也可算做原生质体。原生质体由原生质分化形成，具体包括细胞膜和膜内细胞质及其他具有生命活性的细胞器。植物和动物的如细胞核、线粒体和高尔基体等，而细菌如核糖体、拟核等。 病原生物学意义严格地说，原生质体指在人为条件下，去除原有细胞壁或抑制新生细胞壁后所得到的仅有一层细胞膜包裹着的圆球状对渗透敏感的细菌。革兰阳性菌最易形成原生质体。 原生质球指革兰阴性菌肽聚糖层受损后尚保留有外膜的原生质体。 原生质体，它是细胞进行各类代谢的主要场所，是细胞中重要的部分。原生质体可分为质膜、细胞器、胞基质三部分。 4.大小比较 细菌大小一般在0.5～5μm 放线菌：菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米，但是比较长。 酵母菌：比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1～~5微米或5～20微米。 霉菌：构成霉菌体的基本单位称为菌丝，呈长管状，宽度2～10微米，长度最长。 噬菌体：是病毒，在细胞内，比细菌小的太多，一个细菌内可以有数百个噬菌体。 所以从小到大：噬菌体、细菌、放线菌、酵母菌、霉菌。 5.pH 细菌6.5-7.5,放线菌7.5-8.0,酵母菌霉菌6.0-6.5 酵母菌渗透压较高。
第二节放线菌（Actinomyces） 放线菌是1877年合兹首先在牛体内发现的。在形态上具有分枝状菌丝、菌落形态与霉菌相似，以孢子进行繁殖。“介于细菌与丝状真菌之间又接近细菌的一类丝状原核生物”放线菌实际上是属于细菌范畴内的原核微生物，只不过其细胞形态为分枝状菌丝。 放线菌：是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强的原核生物。也可将之定义为一类主要呈丝状生长和以孢子繁殖的G＋细菌。 原核：无核膜、核仁和线粒体等，核糖体为70S，属原核生物 菌丝直径与细菌相仿：放线菌的菌丝体为单细胞，菌丝直径比真菌细，与细菌接近； 细胞壁的主要成分是肽聚糖：细胞壁含胞壁酸，二氨基庚二酸，不含几丁质，纤维素，革兰氏染色阳性 有鞭毛的放线菌孢子同细菌鞭毛相同 放线菌噬菌体同细菌的相似 pH值同多数细菌相似，呈碱性：对环境pH值的要求是近中性或微偏碱，这与细菌相近而不同于真菌 (一般偏酸性)； DNA重组方式同细菌相同 核糖体为70S 对溶菌酶敏感 同细菌有相同敏感的抗生素：凡能抑制细菌的抗生素也能抑制放线菌，而抑制真菌的抗生素对放线菌无抑制作用； 一、放线菌的分布 放线菌广泛分布在含水量较低、有机物较丰富和呈微碱性的土壤中。 1克土壤中可存在数万～数百万个孢子。 一般，肥沃土＞贫瘠土 农田＞森林 中性偏碱土壤＞酸性土壤 含水低土＞含水高土 放线菌大多数为腐生菌，少数为寄生菌。它在自然界中分布极广，主要习居于土壤之中。每克土壤中含有数万乃至数百万个放线菌的孢子，一般在中性或偏碱性的土壤中较多。土壤特有的腥味主要是由放线菌所产生的代谢产物引起的。 放线菌大多数为腐生菌，少数为寄生菌。它在自然界中分布极广，主要习居于土壤之中。每克土壤中含有数万乃至数百万个放线菌的孢子，一般在中性或偏碱性的土壤中较多。土壤
2 放线菌（Actinomyces） 第2章 微生物主要类群及其 形态与结构
2 放线菌(Actinomycetes )
放线菌是1877年合兹首先在牛体内发现的。 放线菌实际上是属于细菌范畴内的原核微生物， 只不过其细胞形态为分枝状菌丝。 是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性 较强的原核生物。也可将之定义为一类主要呈丝状生 长和以孢子繁殖的G＋细菌。
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放线菌的分布
放线菌广泛分布在含水量较低、有机物较丰富 和呈微碱性的土壤中。 1克土壤中可存在数万～数百万个孢子。 一般， 肥沃土 ＞ 贫瘠土 农田 ＞ 森林 中性偏碱土壤 ＞ 酸性土壤 含水低土 ＞ 含水高土
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放线菌与人类的关系
（2）生产抗生素(Antibiotics)的主要微生物 据估计，全世界近万种抗生素约70％是放线菌 的次生代谢产物。
1.多数属于有益菌
（1）腐生型放线菌在自然界物质循环中起很重要 的作用。------分解者
（3）筛选到许多新的生化药物 Eg.抗癌剂、酶抑制剂、抗寄生虫剂、免疫抑制剂 和农用杀虫（杀菌）剂等。 （4）是许多酶、维生素等的产生菌
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（5）Frankia（弗兰克氏菌属）对非豆科植物的
2.危害
（1）寄生型的放线菌可引起人、动物和植物的许多 疾病，eg.肺部感染、皮肤病、脑膜炎…… （2）具有特殊的土腥味（土霉素的味道），主要由 放线菌产生的土腥味素所引起的。可使水、食品变 味，也能破环棉毛织品、纸张等。
共生固氮具有重大作用。
（6）在甾体转化、石油脱蜡、烃类发酵、污水处 理等方面也有应用 （7）具有极强的分解纤维素、石蜡、角蛋白、琼 脂和橡胶等的能力，故它们在环境保护、提高土壤 肥力和自然界物质循环中起着重大作用。
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气生菌丝发育到一定阶段，其上可分化出形成 孢子的菌丝，即孢子丝
放线菌的形态与构造
t单细胞，大多由分枝发达的菌丝组成； t菌丝直径与杆菌类似，约1um； t细胞壁组成与细菌类似，革兰氏染色阳性（少 数阴性）； t细胞的结构与细菌基本相同， 按形态和功能可分为营养菌丝、气生菌丝和 孢子丝三种。
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营养菌丝匍匐生长于 培养基内，吸收营养
营养菌丝发育到一定阶段， 伸向空间形成气生菌丝
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Aerial mycelia
Reproductive mycelium
Aerial hyphae emerging from the substrate mycelium.
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Magnification of aerail hyphae
Streptomyces lividans 1326
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Lawn of aerial hyphae
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第二章微生物的特征 第二节放线菌 放线菌是介于细菌和真菌之间的一类微生物，细胞构造与细菌相似，形状与霉菌相似，是唯一的一种以丝状体存在的原核生物。它主要以无性孢子繁殖，也可借菌丝断裂产生新的个体。它分布广泛，一般在中性或偏碱性环境中生长，大多数腐生，少数寄生。最大的特点就是产生抗生素，代表菌有链霉菌、小单孢菌及诺卡氏菌属。 一、放线菌的结构 放线菌菌体由丝状的菌丝组成，大部分有分枝。菌丝纤细且有分枝，直径一般在0.2~1.2μm，无横隔膜。 (一)菌丝 放线菌的菌丝由于形态与功能的不同，分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝3部分(图2.15)。 基内菌丝又称营养菌丝，伸入到培养基内，主要功能是吸收营养物，一般无横隔膜。直径0.2 ~0.8μm，有的无色，有的因产色素而呈不同颜色。 气生菌丝生长发育到一定阶段，分化出可以形成孢子的菌丝称为孢子丝(图2.16)。孢子丝的形状以及在气生菌丝上的排列方式因种而异，孢子的形状、排列方式、颜色也各不相同，这些均为鉴定菌种的重要依据。 图2.15 放线菌形态示意图 1-基内菌丝2-气生菌丝3-孢子丝
图2.16 放线菌不同类型的孢子丝 (二)放线菌的细胞构造 细胞膜、放线菌形状与霉菌相似，细胞结构则与细菌细胞一样，属于原核细胞。具有细胞壁、细胞膜、细胞质及内含物与核质体等。化学组成也与细菌细胞相似，只是细胞壁中含有胞壁酸和二氨基庚二酸，没有几丁质或纤维素，革兰氏染色阳性。 二、放线菌的菌落特征 放线菌因菌落呈放射状而得名。菌落一般圆形，光平或有许多皱褶，菌落周围具辐射状菌丝。气生菌丝较细，生长缓慢，分枝交错缠绕，因而形成的菌落质地致密。菌落特征也因不同的菌丝类型而异。 有一种类型的放线菌产生大量分枝的基内和气生菌丝，菌丝体交织成网，使菌落与培养基结合较紧，不易挑起或整个菌落被挑起而不破碎，如链霉菌菌落。另种类型放线菌不产生大量的菌丝，菌落粘着力较差，粉质，挑起时易粉碎，如诺卡氏菌菌落。 放线菌菌落幼龄阶段与细菌相似，不易区分。但形成大量孢子后，表面呈现絮状粉末状或颗粒状。同时由于孢子和菌丝会产生不同的色素而使菌落的正背面颜色不同。另外，水溶性色素可扩散使培养基着色，脂溶性色素不会扩散。