NCI-H292肺癌、NCI-H460肺癌、HGC-27胃癌
LTEP-A-2肺癌、MGC-803胃癌、
肺癌是种常见的疾病，日常生活中导致肺癌的原因很多，长期吸烟导致患上肺癌，环境的污染也有可能会导致患上肺癌。当肺癌发展到晚期时，很容易出现其他部位的扩散转移，给患者机体带来的影响很大，预后较差，致死率也较高，因此患者的生存期成为患者及其家属非常关注的问题之一，那肺癌晚期已扩散大概还能活多久呢？ 对于肺癌晚期已扩散大概还能活多久这个问题，并不能一概而论，受多方面因素的影响，如扩散的程度，病理分型、患者的身体状况以及治疗效果等。肺癌晚期出现扩散转移，患者脏器功能受损，容易并发各种症状，降低患者生存质量，患者生存期可能也不会太长，有一年左右的时间，一般来说肿瘤恶性程度越低，治疗越敏感，则生存期越长，如果患者身体状况一般，心理素质差，也会对生存时间产生影响，缩短寿命，反之患者能乐观、平和面对，树立战胜病魔的信心，积极配合科学、合理的治疗，是能够控制病情，延长生存时间的。 肺癌晚期扩散转移，多数患者已经失去了手术的机会，可以做局部放疗、全身性的化疗，抑杀机体内的癌细胞，控制病情，抑制原发灶和转移灶，在一定程度上延长生存时间，但放疗、化疗产生的副作用也会损伤机体，影响患者生存质量，甚至影响到生存时间，需要慎重选择。近年来中医的抗癌功效被日益认可，且得到了大量临床案例的证实，尤其适用于中晚期患者。中医在治疗时从患者整体出发，实施辨证施治，与放、化疗不同的是，增强免疫力、体质，维持机体免疫功能与肿瘤对抗的平衡，把阴阳、气血、脏腑调理好，让免疫系统来吞噬癌细胞，达到控制病情，提高生存质量，延长生存时间的目的。另外联合放化疗，中医还能减轻毒副作用，增强治疗效果，进一步延长生存时间。 中医治疗与阴阳、五行相结合，注重调节患者全身机制的平衡，提倡标本兼治，郑州希福中医肿瘤医院院长袁希福经过从医30余年来不断的临床实践，对数十年来所搜集到的6000多个抗癌秘、单、验方和2000余种中草药进行了精心比较、筛选、整理，并与袁氏医方进行优化组合，袁希福终于摸索出来以三联平衡理论为指导的抗癌新思路。“三联”是指联系到肿瘤患者存在的元气亏虚、痰凝血淤、癌毒结聚三大基本病因病机，用药进行扶正补虚、消痰化淤、攻毒散结；“平衡”是指使患者气血、阴阳平衡。概括地说，就是联系到“虚”“淤”“毒”三大病因，以“扶正”“通淤”“排毒”辨证施治，达到调节人体阴阳、气血生理机能平衡的根本目的。多年来，在该理论的指导用药下，部分患者减轻了痛苦，延长了生命，甚至有有些患者实现了临床康复或长期带瘤生存。 部分参考案例： 案例1：廖年零，女，右肺中央型肺癌，湖南省岳阳人 2014年5月，廖年零老伴带其去岳阳市第一人民医院调理糖尿病时，无意间被确诊为右肺中央型肺癌，并双肺多发转移。另外一家医院告知晚期，不能手术，只能放化疗。可是由于年龄大，放化疗可能受不住，加上老伴的弟弟也是肺癌，去放化疗不到一年人就走了。不想走这个老路的他们，一门心思想找个中医看病。后经一位康复十五年的食道癌病友介绍，于2014年6月9日到郑州希福中医肿瘤医院求诊。 袁希福院长对其进行中医治疗后，廖年零的后背疼、腋下疼、胸疼，在服药80天后，后背不疼了，就腋下疼，胸闷。服药三个月后，疼痛基本没有了。服药6个月后，2014年12月19日，诉复查CT对比8月份结果，肿块从3.2cmx1.8cm 缩小到3.0cmx1.5cm。随后继续用药，病情一直稳定，在2015年4月10日复诊之前做了次检查，结果显示肿块比之前缩小了三分之二。为感谢袁希福院长，廖
摘要】目的比较耐顺铂的人肺腺癌细胞(A549DDP)凋亡相关基因的表达与亲代A549细胞的差异，探讨细胞凋亡与细胞耐药的发生机制。方法应用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片，检测A549和A549DDP细胞相关凋亡基因表达水平。结果A549DDP细胞表达BAD、BAG3、BFAR、CARD8、CASP6、GADD45、TNFRSF14、CD70、TRADD、TRAF1、TRAF3基因较亲代A549细胞显著增高(P<0.05),二者比值上调2倍以上。结论肺腺癌A549DDP细胞过表达上述凋亡相关基因，可能是导致细胞凋亡受抑、细胞耐药的主要原因。 【关键词】肺癌;凋亡基因;细胞凋亡;耐药 细胞耐药是导致化疗失败的主要原因。研究发现耐药的发生与细胞凋亡基因的异常表达密切相关。采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测细胞凋亡相关基因，具有敏感性高、速度快和重复性好等优点。目前尚未见以Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片方法检测A549细胞凋亡相关基因的报道。本文采用Oligo GE Array细胞凋亡基因芯片检测人肺腺癌亲代细胞与耐顺铂细胞(A549和A549DDP)凋亡相关基因,并对检测结果的临床意义进行初步分析，进一步探讨肿瘤细胞凋亡与耐药的发生机制。 1 对象与方法 1.1 对象人肺腺癌亲代A549细胞和耐顺铂的A549DDP细胞(华西医科大学新桥医院呼吸病研究所提供)。 1.2 方法 1.2.1 细胞培养人肺腺癌A549与A549DDP细胞,以含有10%胎牛血清的DMEM培养基在37℃、5% CO2条件下培养,每2～3 d传代1次,初始密度为2×105/ml(2 ml/6孔板)。取对数生长期细胞进行实验。 1.2.2 凋亡基因检测按着Oligo GEArray基因芯片实验操作步骤进行(Oligo GEArray细胞凋亡基因芯片由上海康成生物科技有限公司提供)。 1.2.3 RNA 抽提Trizol一步法进行细胞总RNA的抽提。 1.2.4 RNA质量检测经变性琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收测定法对RNA质量进行检测。 1.2.5 cRNA标记与合成首先合成cDNA，再合成cRNA，并对合成的cRNA进行标记和扩增，进而cRNA 纯化。 1.2.6 芯片杂交、化学发光检测、图象采集和数据分析。 1.3 统计学分析采用χ2检验。 2 结果 对芯片中114个与凋亡相关的基因检测时发现耐顺铂的A549DDP细胞表达凋亡相关基
近些年来，肺癌发病率及死亡率均以惊人的速度不断上升，男性明显多于女性，高发年龄为40—60岁。对于肺癌患者来说，要想取得良好的治疗效果，获得较好的预后，关键是要做到早发现、早诊断、早治疗，但由于肺癌起病的隐匿性，很多患者一经确诊已属晚期，此时病情较重，预后也较差，因此患者的生存期也成为患者及其家属非常关注的问题之一，那肺癌晚期发现后一般能活多久呢？ 目前每年因癌失去生命的患者不在少数，且很多患者死于疾病的晚期，因此有的患者在得知病情后，就认为自己活不长了，治不好了，消极对待治疗。其实关于肺癌晚期发现后一般能活多久这个问题，很难给出明确的答案，与患者的身体状况、病理分型、治疗是否及时得到等有关，即使病属晚期，患者通过合理有效的治疗，也能控制病情，延长生存时间，但如果患者消极对待，甚至放弃治疗，病情会不断发展，很容易出现其他脏器的扩散转移，不仅给患者带来极大的痛苦，且会很快走向死亡。 当肺癌到了晚期时，病情较重，患者症状表现也较多，在控制病情，抑杀癌细胞的基础上，也要注重缓解患者症状，提高生存治疗，延长生存时间。对于肺癌晚期的治疗，越来越多的患者选择多学科、多手段的个体化综合治疗，其中中医在综合治疗中占据着重要的地位，发挥了独特的优势。如选择放化疗的晚期患者，虽然能抑杀机体内的癌细胞，控制病情，但会产生一系列的副作用，损伤患者机体，联合中医药的治疗，有助于减轻放化疗的副作用，改善病情，增强放疗的敏感性，缓解患者耐药的程度，提高整体的治疗效果，预防病情反复，进一步延长生存时间。另外对于年龄大、身体弱、转移范围广，不能或者不愿西医治疗的患者，也可以采用中医保守治疗，通过调节患者机体内的环境，恢复气血、阴阳、脏腑的平衡，去除恶性肿瘤生存的环境，达到控制病情，缓解症状，提高生存质量，延长生存时间的目的。 中医治疗与阴阳、五行相结合，注重调节患者全身机制的平衡，提倡标本兼治，郑州希福中医肿瘤医院院长袁希福经过从医30余年来不断的临床实践，对数十年来所搜集到的6000多个抗癌秘、单、验方和2000余种中草药进行了精心比较、筛选、整理，并与袁氏医方进行优化组合，终于摸索出来以三联平衡理论为指导的抗癌新思路。“三联”是指联系到肿瘤患者存在的元气亏虚、痰凝血淤、癌毒结聚三大基本病因病机，用药进行扶正补虚、消痰化淤、攻毒散结；“平衡”是指使患者气血、阴阳平衡。概括地说，就是联系到“虚”“淤”“毒”三大病因，以“扶正”“通淤”“排毒”辨证施治，达到调节人体阴阳、气血生理机能平衡的根本目的。如在郑州希福中医肿瘤医院先后举办的五届百位抗癌明星中医康复经验交流大会上，有部分参会患者在该理论指导用药下减轻了痛苦，延长了生命，甚至一些实现了临床康复或长期带瘤生存。 为保障患者就医需求，郑州希福中医肿瘤医院特成立袁希福远程医疗中心，患者可将各种检查资料或出院报告等，加上患者舌苔、面部照片，通过微信提交到医院，由袁希福抗癌专家团为患者制定“三联平衡”抗癌方案，帮助肿瘤患者实现“足不出户看名老中医”。为确保会诊质量，特实行“先预约、先会诊、每天限号10人”的专业服务。 部分参考案例： 案例1：廖年零，女，右肺中央型肺癌，湖南省岳阳人 2014年5月，廖年零老伴带其去岳阳市第一人民医院调理糖尿病时，无意间被确诊为右肺中央型肺癌，并双肺多发转移。另外一家医院告知晚期，不能手
●肺癌的分型 生长于肺的肿瘤就是肺癌，但也有一部分是别的肿瘤转移到肺的，称为转移性肺癌。而我们常说的肺癌，则是原发于支气管黏膜及肺泡上皮细胞的恶性肿瘤，又称原发性支气管肺癌。 肺癌的分型 一、鳞状细胞肺癌（鳞癌）：这是在肺癌中最常见的一种类型，患者年龄大多数在50岁以上，男性占大多数。生长较缓慢，对放射治疗及化学药物治疗比较敏感。Xw2西安华福肿瘤研究所 二、小细胞肺癌：发病率比鳞癌低，发病年龄较轻，多见于男性。恶性程度较高，生长快，早期即可出现淋巴和血行的广泛转移，对放射治疗和化学治疗虽较敏感，但在各型肺癌中预后最差。Xw2西安华福肿瘤研究所 三、腺癌：这一型在女性中比较多见，早期一般没有临床症状，生长较慢，但有时早期就可发生血行转移，淋巴转移发生较晚。Xw2西安华福肿瘤研究所 四、大细胞肺癌：较少见，分化程度低，常在发生脑转移后才被发现Xw2西安华福肿瘤研究所 五、类癌：占1%～2‰。此癌为分化好的神经内分泌癌，恶性程度低。 六、细支气管肺泡癌：欧美占2‰～3‰，国内占20‰。为一种异源性肿瘤，可起源于细支气管Clara细胞、肺泡II型上皮细胞及化生的粘液细胞。 其他还有不典型类癌、大细胞神经内分泌、巨细胞神经内分泌癌、不能分类的神经内分泌癌、癌内瘤及成细胞瘤等。 由于小细胞肺癌的生物学行为表现为高度恶性，早期即发生广泛的转移，对化疗和放疗敏感，治疗原则有所不同，所以，从临床治疗角度考虑，目前世界上倾向于将肺癌初分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌。 ●肺癌的死亡率是排名全世界第一的，所以当有人被确诊为肺癌时，就会感觉必死无疑。 其实，肺癌并没有那么可怕，主要对肺癌这种疾病足够了解，就可以做到有效的预防和及时发现及时治疗。下面，我们一起来了解一下肺癌的分型。 一、鳞形细胞癌(又称鳞癌)，是最为常见的一种类型，约占50%。患病年龄大多为50岁以上的男性。鳞癌大多起源于较大的支气管，常为中央型肺癌。鳞癌的生长发展速度比较缓慢，病程较长，对放射和化学疗法较敏感。 二、未分化癌：发病率仅次于鳞癌，多见于年轻的男性，大多起源于较大支气管。中央型肺癌可根据组织细胞形态分为燕麦细胞、小圆细胞和大细胞等类型，以燕麦细胞最为常见。未分化癌恶性度较高，生长速度快，会较早地出现淋巴和血行广泛转移，对放射和化学疗法较敏感，在各型肺癌中预后最差。 三、腺癌：发病率比鳞癌和未分化癌低，患者大多为年轻女性。腺癌大多起源于支气管黏膜上皮，为周围型肺癌。癌症早期一般没有明显的临床症状，常在胸部x线检查时被发现。腺癌的生长缓慢，早期即可发生血行转移。
·论著· 热疗对人肺癌细胞凋亡的影响 蒋东 李芳 葛锦峰 郑世营 【摘要】 目的 探讨热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长与凋亡的影响。方法 ＭＴＴ法检测热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞生长的抑制作用；流式细胞术观察热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞周期和凋亡的影响；ＲＴ－ＰＣＲ检测凋亡相关基因ｐ５３及Ｃａｓｅｐａｓｅ－３的表达。结果 热疗对人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞的生长均有抑制作用。热疗可以明显改变人肺癌Ａ５４９细胞生长周期的分 布，Ｇ０／Ｇ１期细胞明显减少；但对人肺癌Ｈ１２９９细胞生长周期的分布影响不大。热疗能使Ａ５４９细胞ｐ ５３蛋白的表达明显增强，但不能诱导Ｈ１２９９细胞ｐ５３蛋白的表达。热疗能同时诱导Ａ５４９、Ｈ１２９９两种细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达的增强，并且以Ａ５４９细胞的表达尤为明显。结论 热疗对两种肺癌细胞的生长均有抑制作用，可以增加细胞凋亡。ｐ５３基因可能在热疗诱导肺癌细胞凋亡和周期分布改变的过程中起主导作用。 【关键词】 热疗；肺癌细胞；ｐ ５３基因；凋亡【中图分类号】 Ｒ７３４ 【文献标识码】 Ａ 【文章编号】 ０２５３－３６８５（２０１２）１５－１７３７－０３Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ＪＩＡＮＧ Ｄｏｎｇ，ＬＩ Ｆａｎｇ，ＧＥ Ｊｉｎｆｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃａｒｄｉｏｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｕｒｇｕｒｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５００６，ＣＨＩＮＡ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ，ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｏｎＡ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＭＴＴ，ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＦＡＣＳ，ａｎｄ ＲＴ－ＰＣＴ ｗａｓ ａｄｏｐｔｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅｓｏｆ ｐ５３ａｎｄ Ｃａｓｐａｓｅ－３．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ．Ｔｈｅｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｏｆ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｃｈａｎｇｅｄ ｂｙ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｉｎ Ｇ０／Ｇ１ｐ ｈａｓｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｗｈｉｃｈ ｏｆ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｐ５３ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｉｎ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｎｏｔ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓｐａｓｅ－３ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ｂｏｔｈ Ａ５４９ａｎｄ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ ｉｎ Ａ５４９ｃｅｌｌｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｔｈｅｒｍｏｔｈｅｒａｐｙ ｈａｓｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｃｉｒｃｌｅ ａｎｄ ｃａｎ ｉｎｄｕｃｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｗｈｉｃｈ ｐ５３ｇｅｎｅ ｍａｙ ｔａｋｅ ａ ｒｏｌｅ．【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 Ｈｙｐｅｒｔｈｅｒｍｉａ；Ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌ；ｐ５３ｇｅｎｅ；Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇ ｕｓｔ ２０１２，３８（１５）：１７３７－１７３９．］ 基金项目： 江苏省社会发展重大课题资助项目（ＢＳ２００５０４７）作者单位：２１５００６ 江苏省，苏州大学附属第一医院心胸外科（蒋东、葛锦峰、郑世营）；苏州大学基础医学与生命科学学院人体解剖与组织胚胎系（李芳） 通讯作者：郑世营 Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｙｚｈｅｎｇ８８＠ｖｉｐ ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ 近年来肿瘤热疗已成为继手术、 化疗、放疗、生物治疗之后的对肿瘤的第五类有效治疗手段。肺癌目前的发病率和死亡率在我国男性中较高，约６５％的肺癌患者确诊时已属晚期，失去手术机会，因而包括热疗在内的综合治疗在晚期肺癌的治疗中占有重要的地位。本研究以我们培养的Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞为实验对象，主要观察不同温度加热处理对ｐ５３表达情况不同的两种肺癌细胞生长、细胞周期和凋亡的影响，探讨热疗促肺癌细胞凋亡的机制。 材料与方法 一、材料 人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞株由苏州大学分子生物实验室提供。ＲＰＭＩ１６４０培养基（Ｇｉｂｃｏ），小牛血清（杭州四季青），逆转录试剂盒、Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶（立陶宛Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ公司），引物由南京金思特科技有限公司合成。 二、方法 １．细胞培养 人肺癌Ａ５４９、Ｈ１２９９细胞常规在含１０％小牛血清的ＲＰＭＩ１６４０培养液中，３７．０℃、５％ＣＯ２培养箱中培养，待细胞生长汇合达８５％时，用０．２５％胰酶消化， 按１∶３传代。实验时选取对数生长期细胞。 · ７３７１·江苏医药２０１２年８月第３８卷第１５期 Ｊｉａｎｇｓｕ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｕｇｕｓｔ ２０１２，Ｖｏｌ ３８，Ｎｏ．１５
根据我们国家近几年来的调查研究发现，肺癌已经成为威胁我们身体健康、生命安全的第一大癌症杀手。当肺癌到了晚期时，随着病情的不断发展，患者身体出现的不良症状表现也越来越多，有不少患者会吐一些黑色的东西，引起患者及家属的恐慌，那肺癌晚期病人吐黑色的东西怎么办呢？ 肺癌晚期患者吐黑色的东西可能是消化道出血引起的，主要和胃底静脉曲张、凝血功能异常以及应激性溃疡等有关，需要引起足够的重视，应及时就医排查，并采取相应的措施治疗，如护胃、止血、补液等，以免出现大出血的情况，威胁患者生命。当患者出现吐黑色东西的情况时，可能预示着病情进一步加重，一定要积极进行抗肿瘤的治疗，控制病情发展，减轻患者痛苦，延长生存期。 目前对于肺癌晚期的治疗，越来越多的患者选择多学科、多手段的综合治疗，其中中医在综合治疗中占据了重要的地位。肺癌到了晚期很容易出现其他部位的扩散转移，多数患者已经失去了手术的机会，放化疗可以控制病情，缓解症状，但会产生一系列的副作用，有不少患者因无法耐受而中断治疗。在放化疗过程中通过补气养血、健脾和胃、滋肝补肾等中药，有助于扶正元气，调理患者脾胃，减轻和改善放化疗的副作用，增强机体的免疫功能，提高治疗效果，使患者顺利完成治疗。 对于不能或者不愿放化疗的患者，可以选择中医保守治疗。中医治疗肺癌全部使用中草药，副作用小，基本上不会影响患者的正常生活和饮食，而且在治疗时注重调节患者的机体，补充元气，提高免疫力和抵抗力，还能在一定程度上抑制肿瘤细胞，控制病情发展，缓解不适症状，改善睡眠、饮食、精神状况，提高生存质量，延长生存时间。 对于肺癌患者来说，在确诊病情后要及时将中医纳入治疗方案中，维护身体的元气，增强抵抗力，才有助于控制肿瘤的生长，预防病情的恶化，通过长期的研究与总结，袁希福指出肺癌的病机非常复杂，但主要病机可以简单地概括为三个字“虚、瘀、毒”。他强调:在治疗中仅着眼于局部是不够的，要想达到治疗目的，必须全面调理、重点用药，从而使人体达到自然状态下的阴阳平衡。就这样逐渐形成了他独特的中医抗癌三联平衡理论。 “三联平衡理论”的实质就是针对“虚”、“瘀”、“毒”三大病机，统筹兼顾，采取“扶元”、“通瘀”、“排毒”三大治疗措施，有的放矢，重点用药，调节人体阴阳、气血、脏腑生理功能平衡，使人体达到自然状态下的康复。正如肿瘤患者用药，既不能过于攻伐，以免进一步加重元气损伤，又不能只为扶元固本，忽视对于其他病机的治疗，只有三者兼顾，才能更有效地抗癌。多年来，众多用药患者受益，减轻了痛苦，延长了生命，甚至一些患者实现了临床康复或长期带瘤生存。 部分参考案例： 案例1：廖年零，女，右肺中央型肺癌，湖南省岳阳人 2014年5月，廖年零老伴带其去岳阳市第一人民医院调理糖尿病时，无意间被确诊为右肺中央型肺癌，并双肺多发转移。另外一家医院告知晚期，不能手术，只能放化疗。可是由于年龄大，放化疗可能受不住，加上老伴的弟弟也是肺癌，去放化疗不到一年人就走了。不想走这个老路的他们，一门心思想找个中医看病。后经一位康复十五年的食道癌病友介绍，于2014年6月9日到郑州希福中医肿瘤医院求诊。 袁希福院长对其进行中医治疗后，廖年零的后背疼、腋下疼、胸疼，在服药80天后，后背不疼了，就腋下疼，胸闷。服药三个月后，疼痛基本没有了。服
细胞凋亡在癌症治疗中的应用 班级：08制药工程2班学号：20086868 姓名：王本竹 关键词：细胞凋亡肿瘤癌症抗癌药物抗药性 摘要生物体内各种组织细胞通过增殖与凋亡来维持数量的平衡。一旦这种平衡被打破就会导致一些疾病的产生，如癌症。细胞凋亡与癌症之间的关系为癌症的治疗提供了新思路。抗癌药物的研究经历了一个漫长的发展过程，尽管已对许多抗肿瘤药物的细胞目标有了一定了解，但对于药物与肿瘤作用后如何导致细胞死亡的确切机制尚不清楚。近年来的研究发现细胞凋亡是各种抗癌药物引发细胞死亡的主要方式，从而使得细胞凋亡与癌症之间的关系及细胞凋亡在癌症治疗中的作用成为抗肿瘤研究的新焦点。 1细胞凋亡 细胞死亡一般有两种方式，即细胞坏死(necrosis)和细胞凋亡(apoptosis)。细胞坏死通常发生在一群接触的细胞中，是由各种非生理因素，如局部缺血等引起的难以控制的一种破坏现象。它通过干扰细胞能量代谢，引起细胞渗透压不平衡，细胞质肿胀，最终由溶酶体酶导致细胞结构的不可逆性破坏并诱发局部的炎症反应。 细胞凋亡这一概念是1972年由Kerr和Wyllie等提出的。它是一种主动的、固有的程序化现象，故又称程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)。许多生理性、非生理性的因素都可以引起细胞凋亡，如射线、高温、毒素及各种抗癌药物等。而坏死实质上是由于细胞周围环境产生严重的损伤性变化所诱发的，所以这两种过程在发生机制、形态学和生物化学等诸方面都不相同。凋亡的细胞由于失去细胞间相互联系而与邻近细胞分离，随后细胞表面释放出信号分子被吞噬细胞识别，因此凋亡不损伤周围的细胞。凋亡一般伴有明显的形态学特征，以细胞核的变化为主，表现为核浓缩、细胞浆中细胞器密集、胞膜突出、体积缩小、DNA断裂及形成凋亡小体。 在生物体的每种细胞中，细胞数量的控制都是通过增殖与死亡之间的平衡来完成的，细胞增殖是受到高度调控的。但是直至最近人们才认识到细胞死亡的调控与细胞增殖的调控一样复杂，而且多细胞组织中不同细胞似乎都是通过活化一种内部编程的自杀程序而导致凋亡的（1）。尽管不同的细胞之间有共同的死亡机制，但各种细胞发生凋亡的诱导信号各不相同。各种不同细胞甚至同一细胞不同阶段对凋亡诱导的难易程度、速度也各不相同，如静止期的T细胞在X光照射后迅速凋亡，而活化后的T细胞则不同，与胸腺中蛋白质紧密结合的未成熟T 细胞株对凋亡更为敏感（2）。 是什么导致了这些不同?越来越多的工作表明对凋亡的敏感性主要由Bcl-2、p53两种基因调控。p53基因位于17号染色体短臂上，长14～24 kb，编码一个由393个氨基酸组成的53 kD的蛋白质。p 53蛋白是细胞周期的“分子警察”，也是在DNA损伤后诱导凋亡的因子。p 53蛋白通过上调p 21蛋白来介导细胞周期停滞，p 21蛋白是各种细胞周期蛋白、CDK5(细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶)及细胞周期蛋白-CDK5复合物的抑制剂，细胞周期停滞可以为DNA修复赢得时间，另一方面，如果细胞内损伤已无法修复，则p 53蛋白促进细胞凋亡。Bcl-2基因发现于人类滤泡性淋巴瘤的14、18位染色体转换点，它可以阻断细胞的凋亡而不影响细胞增殖。它是Bcl-2家族中的一员，该家族中一些成员促进凋亡，
近年来随着天气污染的加重，呼吸道系统的疾病越来越多，肺癌的发生率也是在逐年的增高。中晚期可能会伴随其他部位的扩散转移，不仅治疗难度较大，治疗不当可能还会威胁到患者的生命，因此患者非常关注自己还有多长时间，那肺癌中晚期患者一般多久会死呢？ 关于肺癌中晚期患者一般多久会死这个问题，不能一概而论，跟患者的体质、病情、选择的治疗方法以及心态有关，有的患者体质较好，并通过及时有效的治疗控制病情，生存期也会相对较长，可能存活一年左右，甚至更长的时间，如果患者病情较重，身体较差，或者消极对待治疗，生存期可能不会太长，只能存活几个月。对于肺癌中晚期患者来说，要有治疗的信心，能够结合自身的病情和身体状况，选择合适的方法积极配合治疗，还是能够控制病情，减轻痛苦，延长生存时间的，无论病情发展到何种程度都不能轻易放弃。 当肺癌到了中晚期时，手术治疗的时机多已错失，即使满足手术的条件，也是姑息性的切除，为其他治疗创造机会。除了手术之外，临床上治疗肺癌中晚期常用放化疗和中医治疗，其中放化疗可以在短时间内杀死癌细胞，缩小肿块，但放化疗会产生一系列的副作用，影响患者生存质量和生存期，建议在治疗的同时联合中医药的治疗，有助于发挥增效减毒的功效，使治疗顺利完成，并进一步延长生存时间。对于无法耐受放化疗副作用的患者，可以采用中医保守治疗，从患者整体出发，实施辨证施治，在抑杀癌细胞，稳定病灶的同时，也会调节患者机体，增强患者体能，提高免疫力和抵抗力，缓解症状，提高生存质量，延长生存时间。 对于肺癌患者来说，在确诊病情后要及时将中医纳入治疗方案中，维护身体的元气，增强抵抗力，才有助于控制肿瘤的生长，预防病情的恶化，袁希福祖辈中，出过很多有名的中医，如曾多次奉召进京，为皇亲国戚医病，因其医术高超、医德高尚，被同治、光绪皇帝先后颁发圣旨，诰封为“奉直大夫”的袁积德。由于出身中医世家，耳濡目染让袁希福对中医产生了浓厚的兴趣，因而12岁时就在祖父指导下开始熟读医书，并先后至北京中医药大学及中国中医研究院深造，师从多位名家，为从事中医中药治疗恶性肿瘤打下坚实的理论基础。 从事中医治疗肿瘤近40年，袁希福通过大量的临床实践发现，几乎所有的恶性肿瘤患者都同时存在三种基本病机，即元气亏虚，痰凝血瘀，癌毒结聚，可用三个字来概括，即“虚”、“瘀”、“毒”。他认为肿瘤患者的“虚”须从元气亏虚论治，在病程的任何治疗阶段都须扶元气为先，“邪之所凑，其气必虚”，扶元气亦是祛邪。而“破血逐痰”、“排毒通瘀”则为祛邪外出提供出路，达到邪去正自安的目的。唯有三者共治，调整人体阴阳、气血、脏腑的功能平衡，使人体达到自然状态下的康复，才能有效地控制肿瘤，达到理想的治疗效果。 部分参考案例： 案例1：廖年零，女，右肺中央型肺癌，湖南省岳阳人 2014年5月，廖年零老伴带其去岳阳市第一人民医院调理糖尿病时，无意间被确诊为右肺中央型肺癌，并双肺多发转移。另外一家医院告知晚期，不能手术，只能放化疗。可是由于年龄大，放化疗可能受不住，加上老伴的弟弟也是肺癌，去放化疗不到一年人就走了。不想走这个老路的他们，一门心思想找个中医看病。后经一位康复十五年的食道癌病友介绍，于2014年6月9日到郑州希福中医肿瘤医院求诊。 袁希福院长对其进行中医治疗后，廖年零的后背疼、腋下疼、胸疼，在服药80天后，后背不疼了，就腋下疼，胸闷。服药三个月后，疼痛基本没有了。服
肺癌组织凋亡相关基因的表达意义(一) 作者：王述民，马颖艳，程庆书 【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达 【Abstract】AIM:TodiscusstheexpressionsoftheapoptosisrelatedoncogenesFas,Bcl2,Baxandp53inlungcancertis suesandtheirsignificance,inordertoprovidethetheoreticalbasisforthemolecularbiologicalstudy.ME THODS：Theexpressionsofp53,Bcl2,BaxandFasproteinsin57casesoflungcancerweredetectedbytheimmuno histochemicaltechniqueandTUNEL.RESULTS：TheexpressionratesofBcl2,p53,Bax,Fasproteinsinlungcancertissueswere33%,69%,70%and28%,res pectively,andtheexpressionrateofeachapoptosisrelatedoncogenewasdifferentinlungcancertissues ofthedifferentpathologictypes.Therewasnodefiniterelationshipbetweenthelymphnodemetastasis andtheapoptosisrelatedoncogenes （P0.05）.Withtherisingofthepathologicstagingofthetumor,theexpressionsofp53andFasproteinsi ncreased,whiletheexpressionofBcl2decreased.Thereseemedtobenodefiniterelationshipbetweent heexpressionofBaxproteinandthepathologicalstaging（P0.05）.CONCLUSION：Therearetheapoptosisrelatedoncogeneexpressionsinlungcancertissues,andtheirexpressiondegree isrelatedwiththeirpathologicaltypes.Theoverexpressionsofp53andFasproteinsmaybeassociatedwit hthebadprognosisoflungcancer. 【Keywords】lungneoplasms;oncogenes;TUNEL;immunohistochemistry;geneexpression 【摘要】目的：探讨肺癌组织中凋亡相关基因Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达意义，为进行肺癌的分子生物学研究提供理论依据.方法：应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术对57例肺癌切除标本进行Fas，Bax，p53及Bcl2蛋白检测.结果：在肺癌组织中凋亡相关基因阳性率分别为：Fas28%，Bax70%，p5369%，Bcl233%，各基因在肺癌不同病理类型中表达率亦不同，且肺癌的淋巴结转移与调亡相关基因表达无明显关系（P0.05）.其中，p53，Fas随肺癌病理分期的升高而增加，Bcl2则随病理分期的升高而减少，而Bax 则与病理分期无明显关系(P0.05).结论：肺癌组织有调亡相关基因表达，其表达程度与肺癌的病理类型有关，p53,Fas表达可能与不良预后有关. 【关键词】肺肿瘤；癌基因；TUNEL；免疫组织化学；基因表达 肺癌的发病率逐年升高，从分子水平进一步阐明肺癌的发生和发展，对其防治具有一定的意义.Fas，Bax，p53及Bcl2均为凋亡相关基因，在肺癌组织中的表达情况报道尚少.我们应用原位末端DNA片段标记法（TUNEL），结合免疫组化技术，检测了57例肺癌石蜡包埋组织中Fas，Bax，p53，Bcl2蛋白的表达情况，探讨其彼此之间的关系及其与临床分期、预后的关系，为进一步进行肺癌的凋亡研究提供理论依据. 1材料和方法 1.1材料第四军医大学唐都医院胸外科手术切除标本57（男43，女14）例，年龄36~73（53.4±1.8）岁.其中小细胞肺癌14例，腺癌21例（低分化腺癌11例，高分化腺癌10例），鳞癌22例（低分化鳞癌10例，高分化鳞癌12例）.根据手术病理诊断按国际抗癌联盟分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期13例，Ⅲa期17例，Ⅳb期12例，Ⅴ期10例.SABC试剂盒购自广州华美公司，兔抗Fas多克隆抗体，鼠抗Bcl2mAb，兔抗Bax多克隆抗体及p53mAb均购自Doka公司，TUNEL试剂盒购自Sigma公司.常规100g/L甲醛固定，石蜡包埋，选取典型病变蜡块作为研究对象.肺癌组织学类型按WHO标准分类〔1〕. 1.2方法Fas，Bcl2，Bax，p53蛋白的表达均采用肺癌组织石蜡切片免疫组化染色SABC法〔2〕.TUNEL染色按试剂盒说明操作.光镜下从染色强度和阳性细胞比例两方面评价染色结果.
?肺癌的病理—组织细胞学证据 ?病理检查是诊断肺癌最准确最可靠的方法。它是将脱落的肺癌细胞(痰、纤维支气管镜检刷片或冲洗液、胸水制成涂片，或直接取下肺癌病灶小块组织制成切片，放置在显微镜下观察其细胞形态、结构等。确定肿瘤的性质。 病理检查是诊断肺癌最准确最可靠的方法。它是将脱落的肺癌细胞(痰、纤维支气管镜检刷片或冲洗液、胸水制成涂片，或直接取下肺癌病灶小块组织制成切片，放置在显微镜下观察其细胞形态、结构等。确定肿瘤的性质。 很多的病人认为做先进的检查如CT或MRI等就可以确诊肺癌了，这是不确切的。无论CT等诊断方法多么准确，毕竟仍是“隔岸观火”。看到的是肺部肿块的影子或者说是形态，但这个肺部肿蛱到底是什么性质。还必须靠病理，肺癌的诊断必须有病理学证实，必须在显微镜下直接看到癌细胞才能最后确诊。 1．痰里就能找到癌细胞 一口痰就可以查出肺癌?一点也不假。原发性肺癌源于支气管黏膜上皮，因而肿瘤细胞会脱落于管腔，随痰而排出，因此痰里就可以找到癌细胞。 期肺癌往往在X线胸片上还不能找到可疑肺癌病灶时，痰中已能找到癌细胞，这说明痰液细胞学检查要比X线发现得早，借此，可提高肺癌的早期发现率。 痰液细胞学检查不但是肺癌的早期诊断的重要检查手段，而且少部分病人，能从细胞学形态上区分出属何类型，这对临床医师确定治疗方案大为有利。但以痰检作肺癌的病理分型往往不够确切，因为脱落细胞数量少，分散，并且无肿瘤结构，会出现分型错误。 痰检不需要昂贵的设备、简便易行，病人无痛苦，其诊断阳性率可达70％～80％，目前已作为诊断肺癌的常规检查方法。 (1)怎样留取合格的痰标本 痰检阳性率和痰标本质量有关，因此要做到： 晨起漱口后，第一口痰废弃(除去喉部积痰)，避免口腔及咽喉部脱落细胞的污染。 用力深咳，痰必须是从肺部气管内咳出来的，唾液及鼻涕不能混入。 每次送验痰量要2～3口，吐入干净容器内。 血丝痰阳性率较高，水样痰是唾液，应重新咳痰留验。 要求新鲜标本，在l～2小时内及时送病理科。 (2)干咳无痰时怎样留痰找癌细胞 口服几天祛痰剂，如必嗽平等。 在杯子内倒入热开水，吸人蒸气帮助咳痰。 暂时吸支烟，让烟雾刺激支气管黏膜后，咳出深部痰。 在医院可用盐水超声雾化吸入。 (3)为什么要多次留痰 痰检阳性率也和痰检次数有关，一般来说，单次痰涂片的阳性率为40％～60％，但5次痰涂片检查时，阳性率可达80％以上，因此，一般要求连续送检3次或3次以上。 (4)为什么会有假阴性和假阳性
现在越来越多的人们不注意自己的健康患上了小细胞肺癌，由于是肺部发生病变，所以导致病患不能正常的呼吸，当小细胞肺癌到了晚期时，病情较重，患者症状也越来越多，而疼痛的出现常常令患者难以忍受，尤其是全身疼痛，严重影响患者生存质量以及治疗的信心，甚至认为自己已经病入膏肓了，那小细胞肺癌晚期患者浑身疼痛还有多久呢？ 关于小细胞肺癌晚期患者浑身疼痛还有多久这个问题，很难给出明确的答案，与病情的严重程度、患者的体质、选择的治疗方案以及心态有关，当出现疼痛症状时应及时查明病因，采取相应的措施对症治疗，尽可能的控制病情发展，减轻患者痛苦，提高生存质量，延长生存时间。小细胞肺癌晚期疼痛的出现，多是由于肿瘤压迫、进入周围器官组织与神经引起的，此时可以根据患者的疼痛程度，给予相应阶梯的止痛药，能在短期内看到明显的镇痛效果，但是需要长期按时、按量的用药，易产生不良反应，还易出现耐药性和依赖性，需要特别注意。 对于疼痛的缓解，除了服用止痛药外，还应积极进行抗肿瘤的治疗，控制病情发展，缓解不适症状。当小细胞肺癌到了晚期时，手术切除的可能性很小，可以选择放化疗和中医治疗等。放化疗短期效果明显，能缓解因疾病本身所带来的疼痛，但患者在治疗过程中要承受副作用带来的痛苦，影响患者生存质量，甚至有患者因过度的放化疗而加重了病情，因此需要慎重考虑。中医治疗副作用小，基本上不会因治疗本身对机体产生伤害，年龄大、身体弱、广泛转移的患者也能耐受。中医治疗从患者整体出发，有助于控制病情发展，抑制扩散转移，还能帮助患者调理机体，补充元气，对于提高生存质量，延长生存时间有积极的作用。 中医治疗遵循整体施治、标本兼治的原则，是治疗小细胞肺癌的重要手段之一，三联平衡理论是我国中医肿瘤专家袁希福在传统中医理论及袁氏“阴阳平衡疗法”的基础上，结合自身30余年恶性肿瘤的中医临床经验，把博大精深的中医药理论提纲挈领，高度概括，并涵盖了当代免疫理论、细胞分化增殖及基因理论等，用于治疗各种肿瘤的中医药新思路、新理论。“三联”是指联系到肿瘤患者存在的元气亏虚、痰凝血淤、癌毒结聚三大基本病因病机，用药进行扶正补虚、消痰化淤、攻毒散结；“平衡”是指使患者气血、阴阳平衡。概括地说，就是联系到“虚”“淤”“毒”三大病因，以“扶正”“通淤”“排毒”辨证施治，达到调节人体阴阳、气血生理机能平衡的根本目的。多年来，众多用药患者受益，减轻了痛苦，延长了生命，甚至一些患者实现了临床康复或长期带瘤生存。 部分参考案例： 案例1：高清莲，女，小细胞肺癌，河南濮阳县人 2000年3月份，65岁的高清莲老人突然出现吐血、胸闷，在当地医院检查后发现肺部有阴影，随后确诊为小细胞肺癌。确诊后，医生告知无法手术，只能采取化疗。虽然病情得到短暂控制，但其家属却反映“三番五次吐血，后来化疗也不能吃饭，身体一天比一天弱”。 经同乡癌症患者的介绍，高清莲家人得知郑州希福中医肿瘤医院中医治癌的消息，遂抱着试试看的心态去寻求帮忙。用药后，老人身体明显好转，用至85副药时，其家属高兴地说：“当时从郑州回来还不能自理，需要别人护理，现在看来病情稳定了，不疼了，身体逐渐好起来了，也能吃饭了！” 在2017年9月24日，郑州希福中医肿瘤医院举办的第五届抗癌明星康复经验交流大会上，很难看出这样一个声音洪亮，又唱、又跳，向人们表达康复喜悦的老人是一个癌症病人。 小记:从2004年第一届百位抗癌明星康复经验交流大会到2017年第五届大
肺癌的分类及病理学 肺癌的分类以及病理学 一、肺癌的临床大体分型 （一）肺癌分为周围型肺癌及中心型肺癌。 肺癌可发生于两肺的任何肺叶,但右肺多于左肺,上叶多于下叶，中叶最少,上叶前段最多。 1.中心型肺癌(２0％～40%) （1）发生于主支气管、叶支气管,即段支气管开口近肺门侧者称中心型肺癌。 （2）以鳞癌或小细胞癌多见。 （3）生长在气管或其分叉处的为气管癌;中心型肺癌早期,瘤体很小时局限于气管内者为管内型； 以浸润管壁为主时称管壁浸润型；以浸润管 壁外为主，并与管壁外转移淋巴结融合者称 为腔外型。 （4）中心型肺癌之肿瘤发展至局部晚期时,肿瘤原发灶与其转移的肺门及(或）、淋巴结融合并 将肺门血管包裹其中，形成大块，则成为肺 门巨块型肺癌。 2.周围型肺癌（６0％～8０%) （1）发生于段支气管开口以远的支气管或肺泡的肺癌称周围型肺癌。
（2）以腺癌或肺泡细胞癌多见. （3）弥漫型肺癌：肺癌发生于细支气管或肺泡,常常累及双侧，亦可发生于单侧，散在的数不 清的球状病灶分布于整个肺野称为弥漫型肺 癌。此型应注意与粟粒性肺结核、肺平滑肌 瘤病、肺淋巴管癌、肺真菌感染、肺多发小 脓肿相鉴别。 （4）肺炎型肺癌:胸片及CT显示整个大叶性肺炎的浸润型改变，但发热、寒战、周围血象白 血球升高的中毒症状均不严重、不典型.纤维 支气管镜也可能无特殊发现,纵膈淋巴结常无 明显转移，故术前诊断很为难。术中发现叶 裂完好处病灶界限清楚,叶裂发育不良处病变 界限也不清楚,应切除部分健康肺组织。病人 能耐受时应考虑全肺切除术,此型称为肺炎型 肺癌，病理诊断常为细支气管肺泡癌.......感谢聆 听 （5）纵膈型肺癌：病灶起源于贴近纵膈处的肺组织边缘,原发灶不太大，却与纵膈胸膜粘连并 浸润纵膈胸膜,且转移至纵膈淋巴结，继而融 合成团，常引起纵膈内血管或心包或椎体受 侵.一些病人以上腔静脉受压为第一临床表现，但病变并无远隔转移，手术切除后部分病人 可获得长期存活，此型称为纵膈型肺癌。...... 感谢聆听 （6）胸膜型肺癌：当周围型肺癌病灶起源于肺组织边缘，原发灶不大,很难确认，甚至胸片和
利用纳米孔测序技术解析肿瘤基因组结构变异、非整倍性 变异及肿瘤异质性 癌症是一种基因组疾病，除了染色体数目异常变异之外，还存在数千种大规模的缺失、重复和易位等变异。 图1 两个肺癌细胞系的全基因组测序。结果显示每个样本均有不同程度的重复、缺失和易位等变异。 a)H441细胞系b)A549细胞系 利用全基因组测序解析两个肺癌细胞系大规模不同类型的的缺失、重复、易位以及非整倍性变异的基因组图谱 同一患者的肿瘤细胞中经常发现DNA重组，正常细胞中则没有发现。这些重组包括不同类型的结构变异（SV）：拷贝数变异，染色体内及染色体间重组，以及转座子和其他外源序列的插入。很多重组不会直接导致癌症扩散，但是一些关键基因的改变能够促使肿瘤形成。癌症的SV分析可以用于表征特殊肿瘤类型，从而针对性地采用不同地治疗方式。癌症SV通常是复杂的或者大规模的基因重组，并且只能通过能够完整测到整个重组基因的长度长测序来解决。为了研究纳米孔长度长测序在揭示癌症SVs中的应用，我们对两个肺癌细胞系NCI-H441和A549进行了基因组DNA提取，文库制备并在GridIONTM上完成了测序。已知这两种细胞系都有大量的结构变异。NCI-H441和 A549的测序覆盖度分别为19.5X和15X。我们用ngmlr将测序结果与人类基因组序列进行比对，并参考图1制作了覆盖度分析图。覆盖度值与这些样品已公开的核型图非常接近。
图2 对两个细胞系染色体内和染色体间重组的进一步分析 a) A549的Circos图 b) KRAS基因的 SNPs c) H441的 KRAS基因重复 d) H441的Circos图 两个肺癌细胞系均在KRAS信号转导GTP酶基因中发生点突变，此外还有染色体内和染色体间重组 为了检测SV，我们用sniffles进行比对，若5个及以上reads仍不能确定其SVs 类型则排除。我们对每个细胞系作Circos图（图2），可以看到大量的染色体内和染色体间重组。除此之外，已知这两个细胞系都在12号染色体相邻位置的KRAS基因中具有非同义突变。A549在25245351（G12S）处发生C→T碱基转换，H441在25245350（坐标hg38）处发生C→A碱基颠换。这些突变都清晰的展现在测序数据中（图2b）。我们的reads检测到H441的C→A碱基颠换的比例约为2:1，与已经公布的H441细胞系12号染色体是三倍体结果一致。图2d展示了两个细胞系在12号染色体的12p12.1区域1kb区间的标准覆盖度。与A549相比，H441的KRAS基因及其周围区域具有更高的标准覆盖度。通过纳米孔技术测序，我们可以更加清晰地发现数量更多、长度更小的基因组重复。这些结果充分显示了纳米孔长度长测序可用于肿瘤基因组DNA分析，并能够鉴定比核型图分辨率更高的SVs。