金黄色葡萄球菌菌血症的临床处理（2）
中国医学论坛报2014-11-21
文献标题：Clinical management of Staphylococcus aureus bacteremia: a review.
文献来源：JAMA 2014 Oct 1;312(13):1330-41
美国北卡罗来纳州达勒姆市杜克大学医学院医学系感染性疾病和国际卫生分部托马斯.霍兰等
MRSA菌血症的最佳抗生素疗法
在检出的1876篇文献中，105项满足纳入标准。在这些文献中，有24项随后在进行的文评价后被剔除（补充材料e图2），对余下的81项研究进行了质量评价。纳入研究的样本量范围为6～337例患者。在81项研究中，有68项在独立质量评价中达成一致（84%）。所有13项评价的分歧相差一个证据水平，13项中有11项被评价者评级为质量低或非常低。
数据质量总体差。仅有1项研究28满足GRADE的高质量证据标准。3项研究分类为中等，22项研究分类为低，55项研究为非常低。表2是对分级为高、中或低等研究的总结。研究转归不一，包括死亡率、临床成功（定义不一）、微生物学成功、金黄色葡萄球菌菌血症持续时间及复发情况。
万古霉素的证据
万古霉素是大多数MRSA菌血症治疗研究的标准疗法。仅有的1项高质量试验28在金黄色葡萄球菌菌血症患者中对万古霉素与达托霉素进行了比较。在疗法结束后42天，对治疗成功情况进行了评价，失败的定义为多种事件组成的复合转归，包括临床失败，微生物学失败，死亡，无法获得血培养，接受了可能有效的非研究抗生素，或者因临床失败、微生物学失败或不良事件而提前停止研究的药物治疗。
达托霉素不劣于标准疗法[成功率为44.2%（53/120例）对41.7%（48/115例），绝对差异2.4%（95%CI为-10.2%～15.1%）]，标准疗法包括万古霉素（用于MRSA菌血症或对青霉素过敏的患者）或一种抗葡萄球菌的青霉素[用于甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌菌血症（MSSA）]，分别与小剂量、短疗程的庆大霉素联合应用。
在开放标签随机试验中，也将万古霉素与替考拉宁、甲氧苄啶-磺胺甲基异唑、利奈唑胺，41及dalbavancin48进行了比较。这些抗生素的作用均不显著优于万古霉素。
达托霉素的证据
如上所述，达托霉素对金黄色葡萄球菌菌血症及右心感染性心内膜炎的作用不劣于标准疗法28。在预先规定的MRSA菌血症患者亚组中，45例接受达托霉素治疗的患者中有
20例治疗成功（44.4%），接受万古霉素治疗的44例患者中有14例（31.8%）治疗成功。
在预先规定的二次分析中，差异未达到统计学的显著性[绝对差异为12.6%（95%CI 为-7.4%～32.6%），P=0.28]。本研究促使美国食品与药物管理局（FDA）批准达托霉素用于金黄色葡萄球菌菌血症与右心感染性心内膜炎的治疗。
在MRSA所致菌血症、且万古霉素最小抑制浓度值高的患者中，与万古霉素相比，达托霉素[剂量为FDA批准的6mg/（kg.d），或者高于该剂量,治疗金黄色葡萄球菌菌血症是否与临床转归较好相关？
一些队列以及病例对照研究对此假说进行了验证。在1项左心感染性心内膜炎患者的前瞻性队列研究34中，与标准治疗相比，大剂量达托霉素[中位剂量为9.2mg/（kg.d）]治疗不与院内死亡率有任何差异显著相关[达托霉素的1/7例（14.3%）对标准治疗的8/18例（44.4%），P=0.35）。
在接受较高剂量达托霉素[中位剂量为8.9mg/（kg.d）]治疗的患者中，抗生素相关不良事件（例如，肌炎、周围神经病或间质性肺炎）发生率低。因研究设计未达最佳标准（包括疗法缺乏随机化），致使这些结果的普遍性受限。
利奈唑胺的证据
利奈唑胺是一种唑烷酮类抗生素，在体外对许多革兰阳性病原体（包括MRSA）有活性。来自1项慈善用药计划的观察提示，利奈唑胺治疗革兰阳性菌血症可能有效。
绍尔等对5项较早的、比较利奈唑胺与万古霉素随机试验中菌血症患者的数据进行了汇集。在原始研究所纳入的3228例患者中，53例有MRSA菌血症，可以接受评估。
在这53例患者中，临床治愈率（定义为原发感染基线体征与症状的消失，且放射学、实验室和其他客观结果有改善或没有进展）没有差异[利奈唑胺的14/25例（56%）对万古霉素的13/28例（46%），比值比（OR）为1.5（95%CI为0.5～4.3）]。
在1项涉及可疑导管相关菌血症患者的开放标签Ⅲ期研究中，利奈唑胺在革兰阳性菌感染患者中的作用不劣于万古霉素。
但是，利奈唑胺组患者的死亡率高于比较组。这使得FDA就利奈唑胺在已知或者怀疑革兰阴性菌感染导管相关菌血症中的经验性应用提出了黑框警告。
利奈唑胺是作为万古霉素或替考拉宁治疗≥7天、仍持续存在的MRSA菌血症的疗法进行评价的。接受利奈唑胺治疗者与接受万古霉素或替考拉宁治疗者的微生物学疗效反应、治疗成功及死亡率没有显著差异，均不理想。
甲氧苄啶-磺胺甲基异唑的证据在1项纳入可疑金黄色葡萄球菌菌血症静脉毒品使用者的随机试验中，研究者比较了甲氧苄啶-磺胺甲基异唑与万古霉素。
在纳入的228例患者中，65例有金黄色葡萄球菌菌血症，其中38例为MRSA所致。在可评价的101例患者中，64%有金黄色葡萄球菌菌血症，万古霉素优于甲氧苄啶-磺胺甲基异唑[治愈率为57/58例（98%）对37/43例（86%），OR=9.2（95%CI为1.1～79.9）]。
2组的治疗失败均发生在MSSA患者中。最近，有研究者将38例回顾性诊断为MRSA菌血症、且接受了甲氧苄啶-磺胺甲基异唑治疗的患者与76例匹配的、接受万古霉素的对照进行了比较。不同治疗组的30天死亡率、复发或持续菌血症及肾衰竭发生率没有显著性差异。
联合治疗的证据
MRSA菌血症的抗生素联合疗法一般是无效的。如果治疗MRSA感染性心内膜炎，与随机接受单纯万古霉素治疗的患者相比，万古霉素加用利福平与菌血症持续时间的缩短或治愈率的改善不相关。
在1项纳入MSSA感染性心内膜炎患者的随机试验中，萘夫西林加用庆大霉素未能改并发症的发生率或死亡率。
这一结果与1项对87例持续性金黄色葡萄球菌菌血症或感染性心内膜炎（其中48例有MRSA感染）患者的回顾性评价结果一致。接受一种氨基糖苷类药物治疗者的6个月内复发率较低，不过与其他转归无显著相关性（包括菌血症持续时间，6个月的全因死亡率，持续性菌血症或感染性心内膜炎的并发症发生率，以及肾衰竭发生率）。
福勒等的达托霉素试验安全性数据显示，在接受小剂量庆大霉素治疗的122例患者中，27例（22%）临床肾功能显著减退，相比之下，没有接受庆大霉素治疗的100例患者中有8例出现此情况（8%，P=0.005）。
有病例报告证实了氟喹诺酮与利福平联合疗法在MRSA感染性右心心内膜炎中的应用，也证实了利奈唑胺或达托霉素加用β内酰胺类抗生素在MRSA菌血症中的应用。
其他抗生素的证据
关于其他几种抗生素用于MRSA菌血症的治疗，仅有初步性（研究）数据或者数据有限。来自1项随机试验的中等质量数据表明，对于导管相关的革兰阳性菌菌血症，dalbavancin是万古霉素的一种可能替代选择，不过试验中仅有14例患者有MRSA菌血症。
来自1项急诊用药计划、质量非常低的数据显示，喹奴普丁-达福普丁可能是MRSA 感染（包括菌血症）的治疗选择之一。不过，这种抗生素联合用药与一系列令人不快的不良事件相关，包括注射部位的疼痛、恶心和肌痛。
Telavancin是一种脂糖肽类抗生素，已被批准用于治疗有复杂性皮肤和皮肤结构感染5及金黄色葡萄球菌引起的院内获得性和呼吸机相关细菌性肺炎。在73例细菌性肺炎（其中33例有MRSA菌血症）患者中，telavancin与万古霉素相比，治愈率无明显差异。
在1项小规模、验证概念的随机试验中，研究者对telavancin与标准疗法用于单纯性金黄色葡萄球菌菌血症治疗的作用进行了比较。可以评价的所有9例MRSA患者（其中5例接受了telavancin治疗）均治愈。
在1项纳入接受ceftaroline治疗患者的回顾性评价中，129例可评价的金黄色葡萄球菌菌血症患者中有101例（78.3%）获临床成功（其中92.5%有MRSA）。
有研究者报告了来自8项试验、接受替加环素治疗菌血症患者的汇总结果，不过仅10例患者为MRSA菌血症。FDA随后对10项试验中的患者进行了一项分析，证实替加环素治疗的死亡危险增加，这使得FDA要求为替加环素增加黑框警告，即仅将其用于无适合替代治疗的情况下。
治疗金黄色葡萄球菌菌血症的疗程
过去采用4～6周的静脉抗生素疗程，对金黄色葡萄球菌菌血症进行治疗。在过去的30多年内，研究者们试图识别可安全接受较短疗程治疗的亚组患者。
短疗程治疗的一个前提条件是能够提前分辨出单纯性金黄色葡萄球菌菌血症（有可能通短疗程治疗治愈）和复杂性金黄色葡萄球菌菌血症（需要较长疗程的治疗）的患者。
指南对单纯性金黄色葡萄球菌菌血症的定义是：存在金黄色葡萄球菌感染，但（1）除外感染性心内膜炎；（2）不存在置入假体；（3）初次起病后2～4天抽取的血培养随访为无菌；（4）患者在开始有效抗生素治疗72小时内退热；（5）检查未发现迁移性感染的证据。
在所有MRSA菌血症患者中，仅少数满足这些标准。在这些患者中，推荐的治疗疗程为首次血培养阴性后接受静脉抗生素治疗至少14天。但支持该推荐的证据有限。
1项前瞻性研究报告，在符合指南单纯性金黄色葡萄球菌菌血症定义、治疗不足2周的患者中，复发率高，令人无法接受。
1993年的1项对较早研究进行的荟萃分析，评价了在血管内导管相关金黄色葡萄球菌菌血症患者中抗生素治疗14天或不足14天的疗效。这项研究估计，短疗程疗法的晚期感染性并发症发生率为6.1%，并得出了应给予2周以上静脉抗生素治疗的结论。
罗森等提出，在识别适合短疗程疗法的血管内导管相关金黄色葡萄球菌菌血症患者方面，经食管超声心动图是一个费用-效益比好的方法。1项有关金黄色葡萄球菌菌血症治疗疗程的多中心随机试验正在进行中。
我们推荐万古霉素或达托霉素作为MRSA菌血症的一线疗法。对于单纯性金黄色葡萄球菌菌血症的患者，应在首次血培养阴性后至少治疗14天。复杂性金黄色葡萄球菌菌血症的患者应接受4～6周治疗。不过这些推荐均是基于低质量的证据。
讨论
经食管超声心动图
在金黄色葡萄球菌菌血症患者中检出感染性心内膜炎方面，经食管超声心动图检查显著优于经胸超声心动图检查或体检。3项采用经食管超声心动图检查的前瞻性队列研究，在大约1/4的金黄色葡萄球菌菌血症患者中检出了感染性心内膜炎。
事实上，临床医师更可能在临床高度怀疑感染性心内膜炎的患者中，推荐经食管超声心动图检查，这很可能使患病率增加，显然，在一部分经胸超声心动图检查未作出诊断的金黄色葡萄球菌菌血症患者中，经食管超声心动图确实可成功诊断感染性心内膜炎。
但不推荐将经食管超声心动图检查用于所有金黄色葡萄球菌菌血症病例。
第一，经食管超声心动图与费用及危险（高）相关，像食管穿孔这样的严重并发症的发生率约为1例次/5000次检查。
第二，没有证据证实采用经食管超声心动图检查提高瓣膜小赘生物或可摆动目标的检出（率），可改善金黄色葡萄球菌菌血症患者的临床转归。
虽然有1项小规模的单中心研究71报告，与经胸超声心动图检查结果为阳性的患者相比，只有经食管超声心动图检查（经胸超声心动图阴性之后）才能发现的较小的赘生物的患者，不太可能发生栓塞事件或因其感染而死亡，但这一发现尚未得到外部验证。
第三，目前有几项研究提示，有可能识别出这样一部分金黄色葡萄球菌菌血症患者：他们发生感染性心内膜炎的危险低，并非必须接受经食管超声心动图检查。对于该低危亚组患者，经胸超声心动图检查就已足够，可将其保守地定义为满足以下全部标准的患者：（1）院内感染菌血症；（2）首次发病后4天内血培养随访阴性；（3）无永久性心脏内装置；（4）未接受维持性血液透析治疗；（5）无感染性心内膜炎或继发性感染灶临床征象。或金黄色葡萄球菌菌血症已治愈，以及因其他类型的复杂性金黄色葡萄球菌感染（如骨髓炎或内脏脓肿）而计划接受疗程延长的抗生素治疗的患者，可能不需要接受经食管超声心动图检查。
第四，经胸超声心动图影像质量的改善，缩小了两种检查手段间的诊断差距，特别是对于自体瓣膜的评价方面。这些结果总体上提示，所有金黄色葡萄球菌菌血症患者均应接受超声心动图检查。在可行的情况下，虽然经食管超声心动图检查是首选，但仍有可能识别出那些不需要接受经食管超声心动图检查的低危患者。
MRSA菌血症最佳抗生素疗法
在美国，万古霉素与达托霉素是FDA唯一批准用于MRSA菌血症治疗的药物。万古霉素的批准，很大程度是基于过去的先例。近期，人们对MRSA临床分离株的万古霉素最小抑菌浓度的升高产生了顾虑。观察发现，由万古霉素最小抑菌浓度较高（不过仍敏感）的分离株导致的MRSA菌血症患者，其全因死亡率高于万古霉素最小抑菌浓度较低分离株导致感染的患者，这也加重了上述担忧74。这种相关性的原因尚不清楚。
虽然指南推荐，治疗MRSA所致的严重感染，万古霉素谷浓度目标值应为15～
20mg/L76，但是较高的万古霉素谷浓度与MRSA菌血症患者转归间的相关性尚不清楚。
近期的几项观察性队列研究提出，在对万古霉素最小抑菌浓度高MRSA所致的菌血症进行治疗时，也许可优先选择达托霉素而非万古霉素。
这需要进行随机试验。但是对于复杂性MRSA菌血症，越来越多的临床医师处方达霉素，剂量超过FDA批准的6mg/kg、1次/日静脉给药剂量。这种做法的证据质量较低。
替考拉宁是万古霉素的另一个替代选择，但该药在美国尚未上市。采用万古霉素联合庆大霉素和（或）利福平对MRSA菌血症与自体瓣膜感染性心内膜炎进行治疗，并未取得有意义的获益，并且可能有害。
在万古霉素或达托霉素基础上加用一种β内酰胺类抗生素治疗MRSA菌血症56的获益未获证实。低质量的证据显示，对于一线治疗无效的患者，利奈唑胺、甲氧苄啶-磺胺甲基异唑、dalbavancin、ceftaroline、奎奴普丁/达福普汀及telavancin可能有效。
应避免应用替加环素。尚无有关tedizolid或oritavancin（近期均被FDA批准用于治疗皮肤感染）或研究用药（如ceftobiprole）用于治疗MRSA菌血症的数据。
所有MRSA菌血症（患者）均应接受最少14天（从血培养阴性开始）的静脉抗生素治疗。对于不满足单纯性菌血症定义的患者，推荐4～6周的治疗。
金黄色葡萄球菌菌血症其他处理内容的证据
在可能的情况下，采用抗葡萄球菌β内酰胺抗生素治疗MSSA感染是被广泛接受的标准治疗。这一实践的证据水平差，是由几项观察性研究组成，这些研究提示，MSSA感染、且接受万古霉素治疗的患者治疗失败率较高。
例如，一项纳入298例MSSA菌血症患者的前瞻性队列报告，在MSSA菌血症患者中，采用萘夫西林替代万古霉素进行治疗，微生物学失败率较低[0/18例对13/70例（19%）；OR=6.5（95%CI为1.0～53.0）]。
其他几项前瞻性与回顾性队列研究证实，在接受β内酰胺类抗生素治疗的MSSA感染患者中，总死亡率及感染相关死亡率较低。虽然大多数自行报告青霉素过敏的患者皮试时并非真正过敏，且可耐受β内酰胺类抗生素疗法，但患者报告青霉素过敏仍是处方万古霉素或其他抗葡萄球菌抗生素的一个重要理由。
在一项治疗MSSA感染心内膜炎的决策分析中，皮试似乎具有良好的费用效益比，即使是假定万古霉素与β内酰胺类具有同等有效性之后也是如此。至少有15项观察性研究就感染性疾病会诊（IDC）对于金黄色葡萄球菌菌血症的作用进行了评价。
所有研究均发现了临床获益，有11项研究报告，在接受IDC的金黄色葡萄球菌菌血症患者中，死亡率改善。感染性疾病会诊与标准处理的依从性增加相关，这些标准处理包括治疗MSSA菌血症的β内酰胺类抗生素治疗复杂性金黄色葡萄球菌菌血症的较长疗程疗法移除感染的导管及装置，血培养及超声心动图检查的随访以及引流脓肿。
虽然有关在金黄色葡萄球菌菌血症患者中常规进行IDC的证据仅限于低质量证据，但是其支持对于该类患者，应该考虑IDC的结论。
结论
大多数金黄色葡萄球菌菌血症的管理策略的证据差。有关指导在金黄色葡萄球菌菌血症成人患者中应用经食管超声心动图检查的证据弱。预先检出一组接受经胸超声心动图检查即已足够的低危患者是可能的。万古霉素与达托霉素仍是MRSA菌血症的一线疗法。
对于单纯性金黄色葡萄球菌菌血症，在首次血培养阴性后，治疗应至少持续14天，对于复杂性金黄色葡萄球菌菌血症，治疗应持续4～6周。需要对治疗策略、抗生素及治疗疗程进行比较的高质量试验，从而为这一常见的严重感染的处理提供更好的信息。
金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析 发表时间：2016-10-25T16:13:17.490Z 来源：《医师在线》2016年8月第16期作者：王芳 [导读] 医院内各类金黄色葡萄球菌感染（SAU）的发生率逐年攀升，其耐药性也逐渐增强。 （遵义市红花岗区北京路办事处社区卫生服务中心；贵州遵义563000） 摘要：目的旨在金黄色葡萄球菌医院感染临床分布特点及药敏情况。方法选择某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者作为研究对象，严格参照《全国临床检验操作规程》获取所选患者痰、血、脓液和尿液等标本，经培养、分离获得金黄色葡萄球菌，采用血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌。采用K-B法鉴定金黄色葡萄球菌药敏性，苯唑西林纸片扩散法鉴定MRSA药敏性。结果各年份SAU和MRSA检出数基本相当（P>0.05）； 207株SAU菌株培养来源，88株来自痰液，50株来自脓液，32株来自血液，剩余来自其他标本，其中痰液分布最高，显著高于其他来源标本（P<0.01）；SA）和耐甲氧MRSA主要分布于ICU、脑外科、门诊；SAU对青霉素类药物耐药性最强，耐药率为93.24%，其次为红霉素，耐药率达68.60%，而对万古霉素和利奈唑胺类药物没有耐药性，对利福平和呋喃妥因类药物耐药率均<3%。结论分析SAU临床分布特点、被感染组织或器官位置及其对不同抗生素耐药性，可得到有效治疗SAU感染、避免抗生素滥用的目的。 关键字：金黄色葡萄球菌；医院感染；临床分布特点；耐药性 目前，医院内各类金黄色葡萄球菌感染（SAU）的发生率逐年攀升，其耐药性也逐渐增强，特别以是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 最为明显[1]。该菌种对β-内酰胺类及其它多种抗生素均有较强的耐药性，造成由其诱发感染疾病治疗难度较高、患者死亡率不断上升，因此分析金黄色葡萄球菌耐药性已成为医院研究的热点之一。本文回顾性分析某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者临床资料，旨在探讨金黄色葡萄球菌医院感染临床分布特点及药敏情况，从而提高全院对此类细菌感染认识，现将研究结果总结如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选择某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者作为研究对象，含男患者37例，女患者33例，年龄22~85岁，平均(58. 54±14.32)岁，住院7～120 d，平均( ,50. 45±20.15) d，住院时间≥30 d患者为55例，约占78.57%；入院至金黄色葡萄球菌感染时间为4～50d，平均(24. 12±17. 42) d。患者诊断标准符合中华医院感染管理委员会编定的《医院感染诊断标准》[2]。 1.2 研究方法 严格参照《全国临床检验操作规程》获取所选患者痰、血、脓液和尿液等标本，经培养、分离获得金黄色葡萄球菌，并根据患者临床表现确诊为金黄色葡萄球菌感染。采用血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌。采用K-B法鉴定金黄色葡萄球菌药敏性，苯唑西林纸片扩散法鉴定MRSA药敏性，操作步骤、鉴定结果和质量控制严格按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准[3]。所用试剂和仪器包括金黄色葡萄球菌单克隆抗体、金黄色葡萄球菌ATCC 25923（由中国卫生部临床检验中心提供）和Thermo ARIS 2X全自动微生物鉴定及药敏分析系统。 1.3 统计学方法 选择SPSS 16.0软件对本研究数据进行统计学分析。方差检验，计数资料组间对比选择卡方检验，P <0.05代表差异有统计学意义。 2 结果 2.1 菌株分离情况 本研究共收集、分离、培养207株SAU球菌，各年份内细菌培养分离数基本相当（P>0.05）。其中MRSA检出152株，检出率
金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。 目录 简介 流行病学 引发病症 球菌检验 球菌控制 感染处理 限量存在 简介 金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020
金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多
金黄色葡萄球菌的危害评估 （一）一般情况：葡萄球菌感染是一组常见的细菌感染性疾病，包括皮肤软组织感染、中毒性休克综合征、败血症、心内膜炎、肺炎、肠炎、脑膜炎及骨髓炎等。在医院感染的致病菌中，金黄色葡萄球菌(Staphylococcal aureus，金葡萄)仅次于大肠杆菌，处于第二位。金葡菌感染常对多种抗菌药物耐药。金葡菌以其存在的普遍性、致病的多样性及对抗菌药物的耐药性，已成为细菌性感染的主要病原之一。金葡菌感染一般呈散发，但也可呈流行或爆发，后二者多为毒力较强的菌株引起。全年均可发生，以夏秋季发病较多。目前血浆凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative staphylococcus, CNS)感染有逐渐增多的趋势。皮肤软组织感染、食物中毒、尿路感染及骨髓炎等预后良好。败血症在有效药物处理下病死率仍高，约30%。脑膜炎中死亡者可达50%～60%。治疗早晚对肺炎患者的影响较大，在积极治疗下病死率为15%～20%，否则可达50%左右，幼儿和老年患者的预后较差。当前TSS的病死率约3%。到目前为止，人类还未研制出有效的疫苗。 （二）致病性：金葡菌能产生金黄色色素，血浆凝固酶阳性，能分解甘露醇，致病性强。金葡菌产生多种外毒素和酶，如α溶血毒素除引起溶血外，尚可损伤血小板、巨噬细胞和白细胞，使血管平滑肌收缩而导致局部组织缺血坏死；杀白细胞素能破坏白细胞和巨噬细胞；血浆凝固酶可使血浆中纤维蛋白沉积于菌体表面，从而阻止吞噬细胞的吞噬和杀灭作用，并有利于血栓形成；透明质酸酶可溶解组织
间质中的透明质酸，易于病菌扩散。此外，某些菌株可产生肠毒素(有A、B、C1、C2、D和E6种)、剥脱性毒素、溶纤维蛋白酶、过氧化氢酶、磷酸酶及溶脂酶等。金葡菌主要寄殖于鼻前庭粘膜、腋下、腹股沟及会阴部等处，偶也寄生于皮肤、肠道、阴道及口咽部等，人群带菌者相当普遍，在一般人群中约15%正常人鼻咽部带菌，医护人员带菌率约30%，免疫缺陷疾病患者中带菌率也高。入侵途径主要为受损伤的皮肤粘膜，也可因进食含肠毒素的食物，或吸入染菌尘埃而致病。病房中凡可引起尘埃飞扬的操作(如整理床铺)，均易导致葡萄球菌的传播。染菌手直接接触易感者为传播金葡菌感染的重要途径，空气传播等其他途径较少见。医院中较易发生金葡菌感染的为有创伤的外科和烧伤科患者，还有营养不良，免疫缺陷、恶性肿瘤、肺部疾患、糖尿病及尿毒症等疾病患者，以及新生儿和老年人等。农民、工人、儿童因受伤机会多而易患金葡菌感染。病后免疫力不强，可反复感染。（三）抵抗力：本菌广泛分布于自然界，存在于正常人皮肤、鼻咽部及肠道等部位，对外界抵抗力较强，加热80℃30分钟可杀灭。金葡菌产生的肠毒素为一组热稳定性单纯蛋白质，能耐受100℃30分钟加热不被破坏。
宁城县中蒙医院 SOP文件金黄色葡萄球菌危害评估报告 一．危害程度分类 金黄色葡萄球菌是最常见的化脓性球菌，因排列的规则形似葡萄状，故称之为金黄色葡萄球菌。金黄色葡萄球菌为需氧或兼性厌氧，广泛分布于自然界中。如空气，土壤，水以及日用物品，在卫生部公布的《人间传染的病原微生物名录》中将其列为第二类病原微生物，属高致病性病原微生物，引起人和动物的化脓性疾病。 二．背景资料 金黄色葡萄球菌呈球形，直径微米，无鞭毛、无芽孢，革兰氏染色呈阳性，对营养要求不高，在普通培养基上生长良好，最适生长温度37度，PH为，耐盐性强，培养24小时出现，表面光滑、湿润，有光泽，不透明菌落（1-2mm），产不同色素，如金黄、白色、柠檬色，对湿热敏感，在100度煮沸5分钟后杀死，浓汁中，紫外线敏感致病性和感染数量：金黄色葡萄球菌之所以能引起疾病是其产生多种毒素和酶，主要有a溶血毒素b杀白细胞素c肠毒素d剥脱性毒素e凝固酶f其他物质引起的局部的蜂窝组织炎等化脓性感染，还可引起如肺炎，心包炎，骨髓炎，肾盂肾炎等重症者可发展呈脑膜炎，败血症，脓毒血症，目前，耐药性菌株的增多，已成为医院内交叉感染的一个急待解决的问题 金黄色葡萄球菌有多种传播途径，主要为吸入带菌的飞沫及接触
带菌的感染伤口引起肺炎及伤口化脓性感染，传染源为带菌的物品，空气等。传播途径主要为接触。金黄色葡萄球菌对实验室人员以及其他可能暴露在实验室传染性气溶胶中的人员是一种危害，尤其是有伤口暴露在空气中，其传染的实验室人员发病率比其他人群高。三．实验活动及及其危害性与预防措施 四、实验室实验活动危害评估本实验室主要从事金黄色葡萄球菌微生物学的实验内容有： 1、金黄色葡萄球菌的培养与耐药检测，生化分型实验 2、金黄色葡萄球菌的涂片染色 金黄色葡萄球菌培养传代，药物敏感实验，生化分型、涂片、染色等工作中可产生气溶胶，培养物制剂的溅出，泼洒和容器的破碎等也可造成严重污染。 拟采取防护措施： 1在工作台面应当放置一块浸有消毒液的布或吸有消毒液的纸，使用后将其高压灭菌或按感染性废物处理。避免感染性物质的扩散。 2 为了避免转移物质洒落，微生物接种环的直径应为2~3mm并完全封闭，手柄的长度应小于6cm以减小振动，或者采用一次性灭菌棉签。 3 用封闭式微型电加热器消毒接种环能够避免在本生灯的明火上加热所引起的感染性物质爆溅。 4 样品容器应当坚固，正确地用盖子或塞子盖好后应无泄漏。在容器外部不能有残留物。
金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每
金黄色葡萄球菌 一、生物学性状 1、形态与染色 革兰阳性，球形，呈葡萄串状排列。无芽孢、无鞭毛，体外培养时一般不形成荚膜，少数菌株的细胞壁外层可见有荚膜样黏液物质。在某些化学物质（如青霉素）作用下，可裂解或变成L型。 2、培养特性 需氧或兼性厌氧。营养要求不高，在普通培养基中，37℃生长良好。属内不同菌种可产生金黄色、白色或柠檬色等不同颜色的脂溶性色素并使菌落着色。致病性葡萄球菌菌落呈金黄色，于血琼脂平板上生长后，在菌落周围还可见完全透明溶血环（β溶血环）。 3、生化反应 多数菌株能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产气。致病性菌株能分解甘露醇，产酸。触酶阳性，可与链球菌相区分。 4、抗原 （1）葡萄球菌A蛋白（SPA）：90%以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面存在SPA 蛋白。在体内，SPA与IgG结合后所形成的复合物还具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。 （2）荚膜多糖：利于细菌黏附道细胞或生物合成材料表面（如生物性瓣膜、导管、人工关节等）。 （3）多糖抗原：具有群特异性，存在于细胞壁。金黄色葡萄球菌中可提出A群的多种抗原，其化学组成为磷壁酸中的N-乙酰葡糖胺核糖醇残基。 5、抵抗力 葡萄球菌对外界理化因素的抵抗力较强。在干燥的脓汁或痰液中科存活2～3个月；加热60℃1小时或80℃30分钟才能将其杀死；耐盐，于100～150g/LNaCl 培养基中仍能繁殖。对青霉素、金霉素、红霉素和庆大霉素高度敏感，对链霉素中度敏感，对磺胺、氯霉素敏感性差。该菌易产生耐药性，对青霉素G的耐药菌株已达90%以上，尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA），已成为医院感染最常见的致病菌。耐药性的产生机制与细菌的质粒或与细菌细胞壁成分改变和合
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染治疗指南 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是对一线抗生素普遍耐药的一类金黄色葡萄球菌，是院内感染的重要病因之一。近15年来，社区MRSA（CA-MRSA）感染逐渐增多，日益成为严重的健康问题，尤其侵入性感染危害严重。据统计，2005年，美国共发生 94360例侵入性MRSA感染，超过18000例死亡，其中多数为院内感染，约1/7为社区MRSA感染。 2011年1月4日，美国感染性疾病学会（IDSA）首次发布MRSA 感染患者的循证治疗指南，对多种MRSA感染相关临床综合征的治疗进行了探讨，包括皮肤和软组织感染（SSTI）、菌血症和心内膜炎、肺炎、骨和关节感染及中枢神经系统感染。推荐内容涉及万古霉素剂量和监测、万古霉素低敏感性 MRSA菌株感染的治疗及万古霉素治疗失败后的替代治疗等，具有较高的临床指导价值。 该指南的主要编写者之一，美国加州大学凯瑟琳〃刘（Catherine Liu）说，MRSA已日益成为一个重要的公共卫生问题，医生在诊疗过程中常遇到困难。本指南为皮肤和各种侵入性真菌感染治疗建立了框架，其内容包含了最新的治疗信息，且推荐使用的抗生素在临床上应用广泛。
在此，本报选取部分内容进行介绍，并邀请浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室肖永红教授进行要点分析及评论。 指南推荐 CA-MRSA SSTI ●对于化脓性蜂窝织炎门诊患者，在培养结果得出前，推荐针对CA-MRSA行经验性治疗5~10天（A-Ⅱ）。 ●对于非化脓性蜂窝织炎门诊患者，推荐针对B族溶血性链球菌感染行经验性治疗（A-Ⅱ）。对于β-内酰胺类药物反应不佳及伴全身毒性反应患者，建议对CA-MRSA进行经验性覆盖。推荐治疗5~10天。 ●对于SSTI门诊患者的CA-MRSA经验性覆盖治疗，可选口服抗生素包括：克林霉素、复方磺胺甲唑（TMP-SMX）、四环素类和利奈唑胺（A-Ⅱ）。在必要时，可同时覆盖B族溶血性链球菌和CA-MRSA，可选药物包括：克林霉素（单用）、TMP-SMX或四环素类药物联合β-内酰胺类药物及利奈唑胺（A-Ⅱ）。 ●目前不推荐用利福平（单药或联合）治疗SSTI（A-Ⅲ）。 ●对于复杂性SSTI住院患者，除手术清创和应用广谱抗生素外，应在培养结果得出前进行MRSA经验性治疗7~14天。 ●上述治疗均应根据患者临床反应进行个体化调整。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。它在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，它很容易就能够污染一些食物来源，从而引发疾病。特别是金黄色葡萄球菌肠毒素，它是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。误食金葡菌污染的食品,可引起呕吐和腹泻等症状。因此，在本篇文献中，我们选取了关于金黄色葡萄球菌肠毒素的一部分内容进行了较为细致的思考。 文中提到，肠毒素能够引起人和哺乳动物肠胃道毒性反应。但是，金葡菌肠毒素同时也是一种典型的超级抗原。在免疫反应中，只需极微量，就能通过一种独特的机制，使之产生大量细胞因子和细胞毒性物质。从而抑制异常分裂的癌症细胞生长而可能起到治疗癌症的效果。 那么，肠毒素治疗肿瘤的机制是什么呢？ 首先，肠毒素是一种超级抗原。超抗原是一类只需极低浓度就能激活大量T细胞克隆或B细胞克隆、产生极强免疫效应的物质。它远超普通抗原的多克隆激活能力，可视其为具非特异性免疫原性但无免疫反应性的抗原。它在体内能够活化CD4 + T细胞，这种细胞能分泌多种细胞因子。它们不仅能够直接或间接地杀伤肿瘤细胞，而且可以增加肿瘤细胞表达MHC 抗原分子，增强肿瘤细胞刺激宿主免疫系统的能力; 另一方面，这些细胞因子又刺激T细胞进一步增殖分化，而增殖分化的T细胞又将产生更多的细胞因子与细胞毒作用，共同导致肿瘤细胞的破坏溶解，从而形成级联效应，达到对肿瘤的治疗作用。 除了对肿瘤的治疗作用，肠毒素在一定浓度和不同途径给予时，还具备着非特异性促进人和哺乳动物细胞的有丝分裂效果。特别是对损伤部位的组织有促进分裂和生长作用，能够致使损伤组织快速愈合。故有利于对损伤组织的治疗。但这种反应作用的机制我们小组尚且还无法解释，希望在之后的课程中能够有所启发。
实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶
开题报告 食品质量与安全 金黄色葡萄球菌产肠毒素的研究 一、选题的背景与意义 金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）(以下简称金葡)是动物和人类化脓感染中最常见的病原菌，在自然界中分布广泛，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可能存在［8］，因而食品特别是牛奶及奶制品受其污染的机会很多。金葡菌最常见的污染是通过化脓性皮肤疾病、上呼吸道炎症、口腔内疾病的人，以及健康人咽喉和鼻腔内带菌，经与食物接触或者通过空气传播而污染食物，并在其中繁殖和产毒。金葡菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶的数量，当金葡菌污染了含淀粉和水分较多的食品时，在温度等条件适宜时，经10小时左右即可产生相当数量的肠毒素，据估计，进食者吃下约100g的肠毒素A即可出现食物中毒的症状。因此食品和食品原料中污染有金葡菌就有可能产生肠毒素，就有食物中毒的潜在危险。葡萄球菌毒素（SE）是食物中毒最常见的原因之一，它引起的食物中毒症状主要是呕吐和腹泄，这些毒素蛋白质的结构主要为金葡菌的次生代谢产物。 虽然热处理可破坏葡萄球菌，但致病毒素对热稳定，可在热处理过程中保持甚至增加活性，100℃加热30分钟仍不失去其活性，因此金葡菌一旦污染了食品并在其中产生了肠毒素，用一般的烹调方法将活菌体灭活后，也不能将肠毒素破坏，必须加热100℃两小时才能破坏其毒性。而对于冷冻食品，由于其制作及保藏处于温状态，所以更易感染金葡菌。金葡菌肠毒素还有一种特点是对蛋白酶有耐性，在活性阶段可抗蛋白水解酶水解，故在水货道中也不易被破坏，因而食品极易被金葡菌污染极易引起食源性疾病的爆发。 金葡菌繁殖、是否产毒和产毒程度与食品的性质和组分密切相关，金葡菌污染食品后，如果被污染食品具备产毒条件时，就会产生肠毒素，对产品造成更进一步的污染，一般地，在PH6.0- 8.0、水分含量较多、蛋白质或者淀粉比较丰富的食品中，在温度等条件合适的情况下，该菌最容易繁殖并产生毒素，并且当氧分压较低时肠毒素较易形成，而冻虾仁具备金葡菌的繁殖和生产的主要条件。即使通过物理或者化学的方法将产口中的金葡菌完全灭活，但其中肠毒素仍不容易被破坏，因此产品也你存在肠毒素污染的危险。 如今，国内外贸易增多，国外食品和食品原料大量进入我国市场，检验局经常从进口的冷冻虾仁中检验出金葡菌，因此该产品也有存在金葡菌肠毒素的危险，而对于此肠毒素未做过相应的检测。因此研究冻虾仁中金葡菌和产生金葡菌肠毒素之间的关系，研究虾仁中金葡菌的产肠毒素条件，对于预示冷冻虾仁中是否有肠毒素，防止金葡菌产生肠毒素和改进虾仁后加工工序步骤有指导
金黄色葡萄球菌的概况 摘要：本文旨在讲述金黄色葡萄球菌的目前现状，以及其主要检测方法，代谢物肠毒素检测方法，耐药检测和幼儿园发病原因，这些对金葡菌的检测、治疗和预防起到了很好的帮助。关键词：金黄色葡萄球菌；检测；肠毒素；耐药；发病 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）是食品卫生标准中规定不得检出的常见食物中毒致病菌，是食品卫生微生物常规检测项目之一[1]。SA是葡萄球菌属，革兰染色阳性，呈葡萄状排列。当衰老、死亡、被吞噬后常转为阴性。无鞭毛、无芽胞、体外培养一般不形成荚膜。在浓汁及液体培养基中常单个、成对、或短链状排列。在普通培养基上即可生长，当加入血液或其他营养物质生长的更好。需氧或兼性厌氧。最适pH7.4，最适温度28-38℃，致病菌在37℃生长最好。某些菌株耐盐性特强，在100-150g/L氯化钠培养基中都能生长。在某些影响细胞壁形成物质的作用下可形成L型。触酶试验阳性。多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，致病菌株可分解甘露醇。SA能产生大量核酸酶，该酶可耐受100℃30min不破坏，降解DNA和RNA的能力较强。此酶对检测葡萄球菌的致病性与血浆凝固酶具有同等价值。 由于致病金黄葡萄球菌能分泌肠毒素，因此一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒[2]。金黄色葡萄球菌是一种能引起食物中毒的重要细菌。根据美国疾病控制中心的一些报告，由SA引起的食物中毒居第二位，仅次于大肠杆菌，在细菌性食物中毒中的比例为33％。加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％[3]。中国每年发生SA中毒事件也屡见不鲜，因此造成每年的经济损失相当惨重，目前世界各国都把SA定为重要的食品卫生法定检测项目。在1960年，人们将一种半合成的青霉素-甲氧西林第一次应用于临床，而且仅仅一年之后，在英国就发现了首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistance Staphylococcus aureus,MRSA），再后来，在世界范围内MRSA便以惊人的速度蔓延开去，继而发展成为医院内最最常见的微生物病原菌，与乙型肝炎、艾滋病同为当今世界三大感染顽疾[4]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院内重要感染的致病菌，其发病率和病死率在世界各地均很高，美国疾病控制中心在2003年做了大量工作，根据统计了解，每年因为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，大约有数十万人住院接受治疗，在医院内由SA引起耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，其分离程度已经高达80%以上，而且呈向社区扩散的趋势[5]。1996年，日本报告了第一例对万古霉素敏感性下降的金葡菌[6] ，人们把万古霉素认为是治疗SA的最后防线，最为经济有效的药物，不过在20世纪90年代后期又出现了耐万古霉素的SA，开始表现为万古霉素中介金黄色葡萄球菌（vancomycin intermediate-susceptible staphylococcus aureus ，VISA），美国、英国、德国、意大利、韩国等相继报道检出了VISA[7]，；1997年美国分离了2例VISA[8]同期，在欧洲与亚洲多个国家均有类似报到[9]。 国内外对SA的检测方法，主要有传统分离培养及生化鉴定、显色培养基鉴定、酶联免疫(ELISA)、PCR、美国3M公司的petrifilm培养片等方法。现行国标检测食品中的SA主要是采用传统的分离培养之后进行生化鉴定，整个检测过程获得最终结果需时5天左右。而且免疫学的ELISA法所用的抗体基本上全部依赖国外进口，试剂也相对昂贵；但传统的PCR法却需要提取DNA，加大了人力、物力的消耗，成本提高。对于SA的检测，很多研究者都来检测致使其食物中毒的肠毒素基因[10]，尤其是用于食物中毒事故的调查，所以对于研发一种快速、便捷的检测方法是目前食品安全检测的当务之急。 SA的常规检验检验程序：检样处理→增菌→分离→分纯→溶血试验→革兰染色镜检→血浆凝固酶试验→肠毒素检验[11]。常规检验具有操作简便，所需设备简单，成本相对较低的优点，但其操作繁琐，检测时间较长，且灵敏度较低[12]。
金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告 一、生物学特性 金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 二、危害程度分类 根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。 三、致病性和感染剂量 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。 四、暴露的潜在后果 暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。 五、感染途径 通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。 六、微生物在环境中的稳定性 葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。1:100000～1:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。 七、浓度和浓缩标本的容量
我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解： 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 1、样品制备： 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。因此，这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。 4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。 5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等} 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。 附：怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 生活常识分享金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些 导语：金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人 金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人员暂时寄居细菌的手进行传播，尤其是在新生儿童症监护病房(NICU)金葡菌是最常见的毒力最强的致病原。那么金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？看过下面的文章相信你就会明白。 金黄色葡萄球菌脑膜炎是指由金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎，起病急，常有全身感染中毒症状，如畏寒、发热，伴持久而剧烈的头痛，颈强直较一般脑膜炎明显，除有脑膜炎症状外，尚有局部感染病灶，败血症患者还有其他迁徙性病灶，出现皮疹，如荨麻疹样、猩红热样皮疹或小脓疱疹，皮肤可见出血点，很少融合成片。 金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎多继发于金葡菌败血症，尤其多见于合并左心内膜炎的患者，通过细菌栓子经血流侵袭脑膜。面部痈疖并发海绵窦血栓性静脉炎可进一步导致脑膜炎，颅脑损伤、颅脑手术后及腰椎穿刺时消毒不严也可并发脑膜炎。脑膜附近的感染病灶如中耳炎，乳突炎、鼻窦炎等亦可引起本病，新生儿脐带和皮肤的金葡菌感染也可继发脑膜炎，发病时间多在产后2周左右。 金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？上面的内容已经让我们知道了答案.为了您和家人的健康，如有发现类似感染的症状请及时就医，如果您还有什么需要咨询的请随时向我们提问，我们的专家24小时在线回答您的问题接军您的疑惑给您提供一个最佳的治疗方案，相信一定能给您满意的答复。
实验5 金黄色葡萄球菌的检验 1 目的和要求 （1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法 （2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2 基本原理 金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。 3 实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。 4 检样程序 5 操作步骤 5.1 5.1.1样品的处理
称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。 5.1.2 增菌和分离培养 5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 5.1.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3 鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1℃培养18 h～24 h。 取新鲜配臵兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，臵36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒臵时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1℃培养18 h～48 h，重复试验。 病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 5.2 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或臵盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支1 mL 无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 5.2.1.4 按5.2.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 5.2.2 样品的接种
金黄色葡萄球菌的检查 同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。 金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。 所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样： 在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。 接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划
线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。 当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。 若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。 1. 革兰染色镜检 革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。 2. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。