金黄色葡萄球菌感染
葡萄球菌（staphlococcus）是常见的化脓性球菌，寄生在大多数人的皮肤上，常引起皮肤、软组织感染，细菌可侵入淋巴管及血液，引起危及生命的败血症及严重的转移性感染如心内膜炎、关节炎、骨髓炎、肺炎、脑膜炎等。某些金葡菌可产生毒素，引起皮疹或多系统功能障碍，如中毒性休克综合征。凝固酶阴性的葡萄球菌，特别是表皮葡萄球菌，是院内感染的重要致病菌，腐生葡萄球菌是泌尿道感染的常见致病细菌。
【病原学】
葡萄球菌属微球菌属，革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，故名为葡萄球菌。已知葡萄球菌属有20余种，造成人群感染者有10多种，其中金葡菌、表葡菌及腐生性葡萄球菌（腐葡菌）为常见致病菌。此外溶血性葡萄球菌、糖发酵葡萄球菌、人葡萄球菌等也可致病，但很少见。葡萄球菌可用噬菌体、血清、生化反应、对抗生素的敏感性及质粒指纹图谱等方法分型。大多数金葡菌可为噬菌体裂解，表葡菌对噬菌体不敏感，故噬菌体分型仅用于金葡菌。此种分型对流行病学调查，追踪传染源、研究型别与感染种类及耐药性等有重要价值。金葡菌的致病性最强，主要因其产生多种毒素和酶有关。
【流行病学】
葡萄球菌为院内感染的重要致病菌。金葡菌感染多为散发，但金葡菌和表葡菌均可在有大面积皮肤损伤病人居住区如烧伤病房、新生儿病房造成流行。
1.传染源病人和带菌者为传染源。人群带菌情况相当普遍。凝固酶阴性葡萄球菌是皮肤粘膜和下段肠道正常菌群中的一部分，以表葡菌最常见。约70%以上的人鼻腔有金葡菌的短期存在，其中20%～30%的人需长时间才能清除。当局部皮肤屏障破坏时，金葡菌便能在皮肤上寄生并可繁殖。
2.传播途径主要途径是通过污染的手造成人间传播。金葡菌主要经破损的皮肤和粘膜（包括口咽部、肠道、阴道粘膜裂隙）侵入人体；也可因吸入染菌尘埃而致病。
3.易感人群主要是有创口的外科病人、严重烧伤患者、新生儿、老年人、免疫缺陷者、血液病、恶性肿瘤及糖尿病患者，或患流感、麻疹伴肺部病变者。病后免疫力不强，可反复感染。
【发病机制】
葡萄球菌感染通常是由细菌的致病因子与机体防御功能降低共同作用的结果。细菌进入机体后吞噬细胞及血清中特异和非特异因子能将其吞噬、杀灭，或将病菌局限于某区域内。随着局部细菌繁殖，感染部位出现炎症和组织化脓性坏死形成脓肿。
若宿主防御功能不能使感染局限化，葡萄球菌可进入血流引起败血症。中性粒细胞在抵抗葡萄球菌感染中发挥重要作用，凡有中性粒细胞数量减少或功能缺损者易发生葡萄球菌
感染。人体内置留异物如各种导管、起搏器、人造血管等均为感染诱因。
金葡菌产生的酶与致病关系密切，血浆凝固酶可阻碍吞噬细胞对细菌的吞噬作用，并有利于感染性血栓的形成；透明质酸酶可使感染扩散；溶脂酶有利于细菌侵入皮肤和皮下组织；过氧化酶有保护细菌免受吞噬的作用。
金葡菌产生多种毒素在发病中起重要作用，溶血素有4种抗原型，除产生溶血外，尚可损伤血小板、巨噬细胞和白细胞及局部组织坏死，葡萄球菌感染患者出现急性水样腹泻也与此毒素有关；杀白细胞素（亦称pv物质）能杀死白细胞和巨噬细胞或破坏其功能，使细菌被吞噬后仍能在细胞内生长繁殖；肠毒素可引起呕吐和腹泻，是引起食物中毒的外毒素；表皮剥脱毒素可使皮肤表皮浅层分裂脱落产生大疱型天疱疮等症状；产热疹毒素产生猩红热样皮疹；中毒性休克综合征毒素-1（tsst-1）与中毒性休克综合征（tss）的产生有关。此外细菌的细胞结构与疾病的发生也有一定关系，磷壁酸和肽聚糖可通过激活补体，参与休克和播散性血管内凝血的发生；蛋白a与igg的fc片段或与吞噬细胞的fc受体相连，具有抗吞噬作用；某些金葡菌有荚膜，可使金葡菌毒力增强，也能促使抗荚膜抗体的产生。
葡萄球菌对抗生素产生的耐药性，有助于细菌的播散。金葡菌产生耐
药的机制可能有多种：①产生β-内酰胺酶。这种耐药性由质粒控制，可以传代，并可经噬菌体的传导将耐药基因传递给敏感细菌。90%以上的金葡菌含有这种酶，对多种青霉素类抗生素耐药，如青霉素g，氨苄青霉素、羧苄青霉素、苯咪唑组青霉素及阿莫西林等，对头孢噻啶也可耐药，但甲氧西林、异唑组青霉素及多数头孢菌素类对青霉素酶很稳定。此外金葡菌尚可产生破坏氯霉素、四环素、红霉素、氨基糖苷类抗生素的灭活酶。②耐甲氧苯青霉素金葡菌（methicillin resistants .aureus, mrsa）。mrsa的耐药性经染色体传递，与一种和β-内酰胺亲和力低的变异性青霉素结合蛋白(pbp2a或pbp2）的产生有关。mrsa对所有β-内酰胺抗生素耐药，包括头孢菌素类药物，并常对红霉素、四环素类、氯霉素、林可霉素及某些氨基糖苷类抗生素（如链霉素）也耐药；但对万古霉素、替考拉宁利福平、某些氨基糖苷类抗生素（如庆大霉素、奈替米星等）、褐霉素、氟喹诺酮类仍可敏感。
③葡萄球菌对β-内酰胺类药物的耐受性在体外特征为，对一般杀菌性抗生素的致死活性耐受。其特点为药物的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度之间有明显差异。此类耐药菌株对万古霉素也可呈耐受现象。大多数表葡菌在医院获得，对抗生素的耐药程
度及变异性比金葡菌大，其耐药谱与金葡菌相仿。表葡菌也对万古霉素敏感，但在溶血性葡萄球菌中，已发现有
耐万古霉素菌株。喹诺酮类抗菌药对耐甲氧苯的葡萄球菌有效，但单独使用这类药物也易产生耐药性。
【临床表现】
1.皮肤软组织感染引起皮肤和软组织感染的细菌主要是金葡菌，少数情况下表葡菌也可成为致病菌。主要表现为毛囊炎、痔、痈、脓疱、脓疱疮、天疱疮、外耳炎、伤口感染、烫伤样皮肤综合征、麦粒肿、褥疮感染、海绵窦栓塞及肛门周围脓肿等。毛囊炎为葡萄球菌的表浅感染，表现为小的红斑结节，不侵入周围皮肤和深部组织。较广泛的侵袭毛囊或皮脂腺，并波及皮下组织的感染，则可为痔，常见于面颈部、腋下，臀部及大腿等部位。痈多见于颈后及背上部，为红肿及疼痛多窦道排脓的巨大硬结。痈可引起发热、白细胞增多、剧痛、出汗等。常伴有菌血症。新生儿易患皮肤脓疱。主要为遍及全身的大疱者，称天疱疮。皮损为水疱，破后有脓液渗出及痂盖形成者，称脓疱疮。
2.葡萄球菌皮肤烫伤样综合征（staphylococcal scalded skin syndrome，ssss）此为一种全身表皮剥脱性皮炎，常由产剥脱性毒素的金葡菌所致，多为金葡菌噬菌体#型感染。典型病例多见于新生儿及5岁以下儿童，成人极其罕见。ssss发病时首先为局部皮肤感染，有轻微发热，继之出现弥漫性红斑和大水疱，最后大疱破裂，在皮肤上形成红色剥脱面，与烫伤类似。受累部位炎症反应轻微，可找到少量病原菌。
3.败血症葡萄球菌是引起败血症的常见病原菌，其中仍以金葡菌为多，表葡菌在医院内感染者也不少见，甚至有时多于金葡菌。表葡
菌败血症多发生于有严重原发病的病人，也多见于新生儿。病原菌入侵途径主要为皮肤，患者发生败血症前常有皮肤感染病灶，挤压皮肤炎症或脓啞，尤其在血供丰富部位，使局部防御功能破坏后尤然；少数患者原发病灶可能为肺炎、骨髓炎或为尿路感染等；也可能为医源性感染，细菌经静脉输液管直接进入血流。临床表现为急骤起病，寒战、高热、全身不适、头痛、心动过速、呼吸急促、出汗、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等严重毒血症症状，重者可出现中毒性脑病，约5%～20%患者可发生中毒性休克。皮疹形态多样，以瘀点、荨麻疹为多，偶可见猩红热样皮疹。部分病例关节症状明显，多见于大关节有疼痛和行动受限，也有呈化脓性关节炎者。易发生迁徙灶化脓病灶，常见为皮下软组织脓肿、肺炎、心内膜炎、骨髓炎、关节炎、肝脓肿、脑膜炎等。
4.中毒性休克综合征（toxic shocksyndrome,tss）tss 为一个多系统疾患
，其发病主要是由金葡菌产生的外毒素tsst-1所致，葡萄球菌肠毒素b或c也可引起tss。临床主要表现为高热，弥漫性红斑皮疹，且于1～2周后在手掌和脚趾处脱皮、休克、呕吐、腹泻等胃肠功能紊乱表现，肝、肾功能不全，粘膜充血、肌肉疼痛、定向障碍或意识改变而脑脊液检查无异常。此病多见于青年妇女，用
于宫塞者更多；但绝经妇女、男性及儿童均可发生。tss的病死率为3%，常发生于顽固性休克或成人呼吸窘迫综合征（ards）的患者。5.心内膜炎是葡萄球菌败血症主要并发症之一；也可为装置人工心瓣膜后，胸骨创口感染所致；上述手术后因导尿、拔牙等所致暂时菌血症可引起心内膜炎；静脉补液或静脉注射毒品也可发生此病。感染常侵犯主动脉瓣及二尖瓣，注射毒品者常累及三尖瓣。典型葡萄球菌心内膜炎是一急性过程，有高热、寒战、进行性贫血及毒血症征象。原心脏正常患者早期可无杂音，在病程中出现病理性杂音；原有杂音者，病程中杂音可有明显变化。皮肤、粘膜瘀点及肾、脑栓塞现象较草绿色链球菌所致者少。早期即可有心功能不全。迁徙性病灶多见，可有肾、脑、肺的化脓感染。表葡菌多发生于人工心瓣膜术后或有病变的心脏患者。多呈亚急性经过。
6.肺炎主要是金葡菌所致。多发生于病毒性肺炎（如麻疹、流感）之后或为血行播散引起。病者多为婴幼儿。病情发展迅速，短期内心肺功能很快恶化，体征与病情不平行。成人病例一般发热不高，病程迁延，早期肺部病变少，但可出现呼吸窘迫现象。
7.脑膜炎葡萄球菌脑膜炎常继发于败血症病程中，也可由远处病灶经血行播散而来，颅脑外伤及手术、穿刺等原因直接引起，或由头面部感染、中耳炎直接蔓延所致。多见于2岁以下儿童。临床表现与其它化脓性脑膜炎相似。
8.骨及关节感染金葡菌骨髓炎一般继发于外伤，也可为血源性感染，以小腿部为多。椎骨骨髓炎成人较多，局部疼痛可能为唯一症状
或伴有低烧。金葡菌关节炎局部红、肿、热、痛明显。
9.肠炎金葡菌产生的肠毒素可引起食物中毒；或广谱抗菌药物应用后产生菌群交替性肠炎，目前此类感染较少见。
10. 尿路感染多由表葡菌及腐葡菌引起。前者常见于留置导尿管患者，尤其是前列腺切除病例，一般无明显症状，拔除导尿管后病菌即可消除。后者常为膀胱炎表现，也可侵犯上尿路。
11.肝脓肿多为血源感染，是败血症迁徙性脓肿常见部位。常为多发性脓肿。
12.其他葡萄球菌尚可引起肾周脓肿、肾皮质脓肿及脾脓肿等，但属少见。
【实验室检查】
1.血象葡萄球菌感染时，
白细胞一般均增高，中性粒细胞增多；败血症时白细胞总数常为（1.0～3.0）×109/l之间，出现明显核左移及细胞内中毒颗粒。
2.病原学检查可取病变局部的分泌物、排泄物、脓液、痰、脑脊液等处取标本涂片革兰染色镜检或培养找细菌。血、骨髓培养查病菌是确诊的重要依据。凡疑为败血症和心内膜炎者应在用抗菌药前取血3～4次进行培养，每次间隔1/2～1小时；已用抗菌药者在高热时采
血。取血量要多，最好弃血清留血块作培养，所分离的细菌应保留作药敏试验及血清杀菌试验。
3.其他血清磷壁酸抗体及dic的检测。
【诊断】
葡萄球菌感染的诊断，主要根据各不同部位感染的临床表现及上述实验室检查。同时，机体免疫状态，有无原发病及诱因等对诊断也有一定参考价值，确诊为在病变部位或血、骨髓中检出病原菌为依据。一般皮肤软组织感染所致、痈、脓疱疮、毛囊炎、麦粒肿容易辨认，不会造成误诊。败血症、心内膜炎、肺炎、脑膜炎、尿路感染等与其它细菌所致者难以鉴别，诊断的确立有赖于病原菌的发现。
【治疗】
1.一般治疗根据病情休息，注意营养，重视提高机体免疫功能，加强护理，注意纠正水电解质紊乱及酸碱失衡情况，保护心、肺、肝、肾等重要脏器的功能，抢救感染性休克。可按需要输血、血浆、白蛋白等。肾上腺皮质激素需小心慎用。
2. 病灶处理化脓病灶无论原发或继发的迁徙病灶，均应及时充分引流。在适当抗菌药物应用下可穿刺引流或外科切开引流，肺脓肿可考虑体位引流。
3. 病原治疗及时诊断，及早选用恰当抗菌药物，是治疗葡萄球菌感染成功的关键。抗菌药物的选择应根据病原菌对药物的敏感情况，及各种不同类型感染而定。
（1）不产青霉素酶金葡菌感染青霉素g为首选，但90%以上金葡菌
产生此种酶，所以在青霉素酶及药敏测定前不宜选用。对产酶金葡菌引起的感染，选用耐酶的半合成青霉素如苯唑西林、氯唑西林及第一代头孢菌素，对上述药物过敏者，可用万古霉素或红霉素、林可霉素、克林霉素等。
（2）耐甲氧西林金葡菌（mrsa）感染最好选用万古霉素（每日30mg/kg，分2～3次静脉滴注）、去甲万古霉素；也可根据药敏结果选用氨基糖苷类、磷霉素、氟喹诺酮类、利福平、褐霉素及复方磺胺甲唑，后三者易产生耐药性，而与万古霉素及β-内酰胺类合用，可增强其抗菌活性。轻度mrsa感染可用复方磺胺甲唑。
（3）凝固酶阴性葡萄球菌感染表葡菌对多种抗菌药耐药、一般应按药敏结果选药，必要时可选用β-内酰胺类与氨基糖苷类药物联合应用。腐葡菌对多数抗菌药敏感，
一般可采用sd-tmp等治疗。mrcns株者可用万古霉素治疗。
（4）严重感染如败血症、心内膜炎、肺部感染、骨关节感染，可选用苯唑青霉素，氯苯唑青霉素、头孢噻吩、头孢孟多等。mrsa所致者应选用万古霉素或去甲万古霉素，静脉给药。氨基糖苷类、利福平、磷霉素、林可霉素及氯林可霉素等可作为联合用药。疗程宜长。脑膜炎患者可选用耐酶半合成青霉素如苯唑青霉素、头孢三嗪及头孢噻肟
等，万古霉素也可选用。
【预防】
1.保持皮肤粘膜完整，避免一切损伤。
2.严格新生儿病室，烧伤病室及外科病室、手术室等处的消毒隔离工作，防止金葡菌交叉感染。
3.医院内如有金葡菌感染流行，应立即追踪调查，制订防治措施，尽快控制流行。
4.治疗处理好医护人员中的带菌者。
5.及早查明一切葡萄球菌感染病灶并及时治疗。
6.切忌挤压或针挑刺疮。
7.合理使用广谱抗生素及肾上腺皮质激素。
8.提高机体免疫力，积极治疗各种慢性病如糖尿病、血液病及肝硬化等。
金黄色葡萄球菌的临床分布特点及耐药性分析 发表时间：2016-10-25T16:13:17.490Z 来源：《医师在线》2016年8月第16期作者：王芳 [导读] 医院内各类金黄色葡萄球菌感染（SAU）的发生率逐年攀升，其耐药性也逐渐增强。 （遵义市红花岗区北京路办事处社区卫生服务中心；贵州遵义563000） 摘要：目的旨在金黄色葡萄球菌医院感染临床分布特点及药敏情况。方法选择某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者作为研究对象，严格参照《全国临床检验操作规程》获取所选患者痰、血、脓液和尿液等标本，经培养、分离获得金黄色葡萄球菌，采用血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌。采用K-B法鉴定金黄色葡萄球菌药敏性，苯唑西林纸片扩散法鉴定MRSA药敏性。结果各年份SAU和MRSA检出数基本相当（P>0.05）； 207株SAU菌株培养来源，88株来自痰液，50株来自脓液，32株来自血液，剩余来自其他标本，其中痰液分布最高，显著高于其他来源标本（P<0.01）；SA）和耐甲氧MRSA主要分布于ICU、脑外科、门诊；SAU对青霉素类药物耐药性最强，耐药率为93.24%，其次为红霉素，耐药率达68.60%，而对万古霉素和利奈唑胺类药物没有耐药性，对利福平和呋喃妥因类药物耐药率均<3%。结论分析SAU临床分布特点、被感染组织或器官位置及其对不同抗生素耐药性，可得到有效治疗SAU感染、避免抗生素滥用的目的。 关键字：金黄色葡萄球菌；医院感染；临床分布特点；耐药性 目前，医院内各类金黄色葡萄球菌感染（SAU）的发生率逐年攀升，其耐药性也逐渐增强，特别以是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( MRSA) 最为明显[1]。该菌种对β-内酰胺类及其它多种抗生素均有较强的耐药性，造成由其诱发感染疾病治疗难度较高、患者死亡率不断上升，因此分析金黄色葡萄球菌耐药性已成为医院研究的热点之一。本文回顾性分析某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者临床资料，旨在探讨金黄色葡萄球菌医院感染临床分布特点及药敏情况，从而提高全院对此类细菌感染认识，现将研究结果总结如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选择某院2013年1月~2015年12月期间70例金黄色葡萄球菌医院感染患者作为研究对象，含男患者37例，女患者33例，年龄22~85岁，平均(58. 54±14.32)岁，住院7～120 d，平均( ,50. 45±20.15) d，住院时间≥30 d患者为55例，约占78.57%；入院至金黄色葡萄球菌感染时间为4～50d，平均(24. 12±17. 42) d。患者诊断标准符合中华医院感染管理委员会编定的《医院感染诊断标准》[2]。 1.2 研究方法 严格参照《全国临床检验操作规程》获取所选患者痰、血、脓液和尿液等标本，经培养、分离获得金黄色葡萄球菌，并根据患者临床表现确诊为金黄色葡萄球菌感染。采用血浆凝固酶试验鉴定金黄色葡萄球菌。采用K-B法鉴定金黄色葡萄球菌药敏性，苯唑西林纸片扩散法鉴定MRSA药敏性，操作步骤、鉴定结果和质量控制严格按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）标准[3]。所用试剂和仪器包括金黄色葡萄球菌单克隆抗体、金黄色葡萄球菌ATCC 25923（由中国卫生部临床检验中心提供）和Thermo ARIS 2X全自动微生物鉴定及药敏分析系统。 1.3 统计学方法 选择SPSS 16.0软件对本研究数据进行统计学分析。方差检验，计数资料组间对比选择卡方检验，P <0.05代表差异有统计学意义。 2 结果 2.1 菌株分离情况 本研究共收集、分离、培养207株SAU球菌，各年份内细菌培养分离数基本相当（P>0.05）。其中MRSA检出152株，检出率
一起金黄色葡萄球菌引起食物中毒的调查报告 【摘要】目的：分析食物中毒的原因、性质和特征，探讨预防措施。方法：描述性分析这次食物中毒的流行病学和现场卫生学调查资料。结论：加强从业人员及大众卫生知识培训与销售店的卫生监督，控制食物中毒的发生。 【关键词】金黄色葡萄球菌；食物中毒 【文章编号】1004-7484（2014）04-1987-01 1 流行病学调查： 2013年7月26日8时30分，疾控中心接卫生局电话，县医院报告有5个食物中毒住院病例，立即组织食物中毒调查小组前往县医院进行调查。经调查任显军等住院5人是选营乡松木沟的一家人，（家长任显军，41岁；妻子隋淑琴，42岁；长女任静，17岁；次女任畅，5岁；长子任成茁，3岁）于7月25日18时许，在村小卖铺购买真空包装完好扒鸡一只，后回家立即开封食用，其他食物还有炒芹菜、咸菜和新蒸的米饭，共同就餐有6人，其中1人（任显军的同村亲属），因不吃肉而未食用扒鸡未发病，其他5人均食用了扒鸡，于20：30时起陆续出现以胃肠道症状为主的不适反应，主要表现为恶心、反复呕吐并伴有腹痛等症状。 2 临床表现：
5人症状均是恶心、呕吐、腹痛、腹泻、头晕、体温正常。腹泻5-7次，为稀便，临床诊断为食物引起中毒反应，进行了补液治疗，未用抗生素，次日有明显好转。 3 实验室检测： 3.1标本种类共采样10份，其中患者呕吐物2份，患者大便3份，留样食品4份（芹菜、咸菜、米饭、扒鸡），操作台面1份。 3.2 检测方法对采集的标本进行金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、志贺氏菌等食源性致病菌的实验室检测。在剩余样品扒鸡、患者的粪便、患者呕吐物中均检出金黄色葡萄球菌。 4 结论： 根据流行病调查，临床表现及实验室结果，判定此次事件是由于食用了被污染了金黄色葡萄球菌的扒鸡所造成的食物性中毒。 5 分析 由于患者是买完包装完好的扒鸡后回家立即开封食用，这就说明了扒鸡是在生产过程中某一环节受到污染，在保存时常温保存，扒鸡又是很好的培养基，当时夏季温度较高，正是金黄色葡萄球菌生长的适宜温度，因此被金黄色葡萄球菌污染后极易增值并产毒。 6 措施： 6.1 加强对食品加工、零售行业的卫生监测、监督和管
金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片 金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。 目录 简介 流行病学 引发病症 球菌检验 球菌控制 感染处理 限量存在 简介 金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。
显微图像 金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：
金黄色葡萄球菌检测方 法 Revised as of 23 November 2020
金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法 目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。 技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。 技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。 此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法 各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。 免疫学方法包括下面两个部分： （1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。 （2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。 基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法 金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多
金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义 金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： （1）恒温培养箱：36℃±1℃。 （2）冰箱：2℃～5℃。 （3）恒温水浴箱：37℃～65℃。 （4）天平：感量0.1g。 （5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。 （6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。 （7）无菌培养皿：直径90mm。 （8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂 （1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。 （2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）感染治疗指南 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是对一线抗生素普遍耐药的一类金黄色葡萄球菌，是院内感染的重要病因之一。近15年来，社区MRSA（CA-MRSA）感染逐渐增多，日益成为严重的健康问题，尤其侵入性感染危害严重。据统计，2005年，美国共发生 94360例侵入性MRSA感染，超过18000例死亡，其中多数为院内感染，约1/7为社区MRSA感染。 2011年1月4日，美国感染性疾病学会（IDSA）首次发布MRSA 感染患者的循证治疗指南，对多种MRSA感染相关临床综合征的治疗进行了探讨，包括皮肤和软组织感染（SSTI）、菌血症和心内膜炎、肺炎、骨和关节感染及中枢神经系统感染。推荐内容涉及万古霉素剂量和监测、万古霉素低敏感性 MRSA菌株感染的治疗及万古霉素治疗失败后的替代治疗等，具有较高的临床指导价值。 该指南的主要编写者之一，美国加州大学凯瑟琳〃刘（Catherine Liu）说，MRSA已日益成为一个重要的公共卫生问题，医生在诊疗过程中常遇到困难。本指南为皮肤和各种侵入性真菌感染治疗建立了框架，其内容包含了最新的治疗信息，且推荐使用的抗生素在临床上应用广泛。
在此，本报选取部分内容进行介绍，并邀请浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室肖永红教授进行要点分析及评论。 指南推荐 CA-MRSA SSTI ●对于化脓性蜂窝织炎门诊患者，在培养结果得出前，推荐针对CA-MRSA行经验性治疗5~10天（A-Ⅱ）。 ●对于非化脓性蜂窝织炎门诊患者，推荐针对B族溶血性链球菌感染行经验性治疗（A-Ⅱ）。对于β-内酰胺类药物反应不佳及伴全身毒性反应患者，建议对CA-MRSA进行经验性覆盖。推荐治疗5~10天。 ●对于SSTI门诊患者的CA-MRSA经验性覆盖治疗，可选口服抗生素包括：克林霉素、复方磺胺甲唑（TMP-SMX）、四环素类和利奈唑胺（A-Ⅱ）。在必要时，可同时覆盖B族溶血性链球菌和CA-MRSA，可选药物包括：克林霉素（单用）、TMP-SMX或四环素类药物联合β-内酰胺类药物及利奈唑胺（A-Ⅱ）。 ●目前不推荐用利福平（单药或联合）治疗SSTI（A-Ⅲ）。 ●对于复杂性SSTI住院患者，除手术清创和应用广谱抗生素外，应在培养结果得出前进行MRSA经验性治疗7~14天。 ●上述治疗均应根据患者临床反应进行个体化调整。
金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。它在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，它很容易就能够污染一些食物来源，从而引发疾病。特别是金黄色葡萄球菌肠毒素，它是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。误食金葡菌污染的食品,可引起呕吐和腹泻等症状。因此，在本篇文献中，我们选取了关于金黄色葡萄球菌肠毒素的一部分内容进行了较为细致的思考。 文中提到，肠毒素能够引起人和哺乳动物肠胃道毒性反应。但是，金葡菌肠毒素同时也是一种典型的超级抗原。在免疫反应中，只需极微量，就能通过一种独特的机制，使之产生大量细胞因子和细胞毒性物质。从而抑制异常分裂的癌症细胞生长而可能起到治疗癌症的效果。 那么，肠毒素治疗肿瘤的机制是什么呢？ 首先，肠毒素是一种超级抗原。超抗原是一类只需极低浓度就能激活大量T细胞克隆或B细胞克隆、产生极强免疫效应的物质。它远超普通抗原的多克隆激活能力，可视其为具非特异性免疫原性但无免疫反应性的抗原。它在体内能够活化CD4 + T细胞，这种细胞能分泌多种细胞因子。它们不仅能够直接或间接地杀伤肿瘤细胞，而且可以增加肿瘤细胞表达MHC 抗原分子，增强肿瘤细胞刺激宿主免疫系统的能力; 另一方面，这些细胞因子又刺激T细胞进一步增殖分化，而增殖分化的T细胞又将产生更多的细胞因子与细胞毒作用，共同导致肿瘤细胞的破坏溶解，从而形成级联效应，达到对肿瘤的治疗作用。 除了对肿瘤的治疗作用，肠毒素在一定浓度和不同途径给予时，还具备着非特异性促进人和哺乳动物细胞的有丝分裂效果。特别是对损伤部位的组织有促进分裂和生长作用，能够致使损伤组织快速愈合。故有利于对损伤组织的治疗。但这种反应作用的机制我们小组尚且还无法解释，希望在之后的课程中能够有所启发。
实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验 一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。 二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。 三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量 （三）应制备的培养基 培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶
金黄色葡萄球菌的概况 摘要：本文旨在讲述金黄色葡萄球菌的目前现状，以及其主要检测方法，代谢物肠毒素检测方法，耐药检测和幼儿园发病原因，这些对金葡菌的检测、治疗和预防起到了很好的帮助。关键词：金黄色葡萄球菌；检测；肠毒素；耐药；发病 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）是食品卫生标准中规定不得检出的常见食物中毒致病菌，是食品卫生微生物常规检测项目之一[1]。SA是葡萄球菌属，革兰染色阳性，呈葡萄状排列。当衰老、死亡、被吞噬后常转为阴性。无鞭毛、无芽胞、体外培养一般不形成荚膜。在浓汁及液体培养基中常单个、成对、或短链状排列。在普通培养基上即可生长，当加入血液或其他营养物质生长的更好。需氧或兼性厌氧。最适pH7.4，最适温度28-38℃，致病菌在37℃生长最好。某些菌株耐盐性特强，在100-150g/L氯化钠培养基中都能生长。在某些影响细胞壁形成物质的作用下可形成L型。触酶试验阳性。多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，致病菌株可分解甘露醇。SA能产生大量核酸酶，该酶可耐受100℃30min不破坏，降解DNA和RNA的能力较强。此酶对检测葡萄球菌的致病性与血浆凝固酶具有同等价值。 由于致病金黄葡萄球菌能分泌肠毒素，因此一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒[2]。金黄色葡萄球菌是一种能引起食物中毒的重要细菌。根据美国疾病控制中心的一些报告，由SA引起的食物中毒居第二位，仅次于大肠杆菌，在细菌性食物中毒中的比例为33％。加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％[3]。中国每年发生SA中毒事件也屡见不鲜，因此造成每年的经济损失相当惨重，目前世界各国都把SA定为重要的食品卫生法定检测项目。在1960年，人们将一种半合成的青霉素-甲氧西林第一次应用于临床，而且仅仅一年之后，在英国就发现了首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistance Staphylococcus aureus,MRSA），再后来，在世界范围内MRSA便以惊人的速度蔓延开去，继而发展成为医院内最最常见的微生物病原菌，与乙型肝炎、艾滋病同为当今世界三大感染顽疾[4]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院内重要感染的致病菌，其发病率和病死率在世界各地均很高，美国疾病控制中心在2003年做了大量工作，根据统计了解，每年因为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，大约有数十万人住院接受治疗，在医院内由SA引起耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，其分离程度已经高达80%以上，而且呈向社区扩散的趋势[5]。1996年，日本报告了第一例对万古霉素敏感性下降的金葡菌[6] ，人们把万古霉素认为是治疗SA的最后防线，最为经济有效的药物，不过在20世纪90年代后期又出现了耐万古霉素的SA，开始表现为万古霉素中介金黄色葡萄球菌（vancomycin intermediate-susceptible staphylococcus aureus ，VISA），美国、英国、德国、意大利、韩国等相继报道检出了VISA[7]，；1997年美国分离了2例VISA[8]同期，在欧洲与亚洲多个国家均有类似报到[9]。 国内外对SA的检测方法，主要有传统分离培养及生化鉴定、显色培养基鉴定、酶联免疫(ELISA)、PCR、美国3M公司的petrifilm培养片等方法。现行国标检测食品中的SA主要是采用传统的分离培养之后进行生化鉴定，整个检测过程获得最终结果需时5天左右。而且免疫学的ELISA法所用的抗体基本上全部依赖国外进口，试剂也相对昂贵；但传统的PCR法却需要提取DNA，加大了人力、物力的消耗，成本提高。对于SA的检测，很多研究者都来检测致使其食物中毒的肠毒素基因[10]，尤其是用于食物中毒事故的调查，所以对于研发一种快速、便捷的检测方法是目前食品安全检测的当务之急。 SA的常规检验检验程序：检样处理→增菌→分离→分纯→溶血试验→革兰染色镜检→血浆凝固酶试验→肠毒素检验[11]。常规检验具有操作简便，所需设备简单，成本相对较低的优点，但其操作繁琐，检测时间较长，且灵敏度较低[12]。
（生物科技行业）金黄色葡萄球菌生物危害评估报告
金黄色葡萄球菌生物危害评估报告 一、金黄色葡萄球菌的传播与致病 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，在空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。 金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道；上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。 一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。 而肠毒素形成条件包括：存放温度，在37℃内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 葡萄球菌性菌血症可发生于任何与血管内导管或其他异物有关的局限性葡萄球菌脓肿或感染,它是严重烧伤病人死亡的常见原因。持续性发热常见,而且可伴有休克。 葡萄球菌性心内膜炎特别好发于静脉注射给药者和装有人工心脏瓣膜的病人。突然出现心脏杂音,脓毒性栓子和其他经典体征便可作出可疑诊断,确诊需依据超声心动图和血培养。 葡萄球菌性骨髓炎主要见于儿童,可引起寒战,发热和受累骨疼痛,继之出现红肿。关节周围感
金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告 一、生物学特性 金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 二、危害程度分类 根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。 三、致病性和感染剂量 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。 四、暴露的潜在后果 暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。 五、感染途径 通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。 六、微生物在环境中的稳定性 葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。1:100000～1:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。 七、浓度和浓缩标本的容量
我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解： 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 1、样品制备： 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。因此，这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。 4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。 5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等} 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。 附：怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
【中图分类号】r155.3【文献标识码】a【文章编号】1005-2720(2010)05 - 136 - 02 【关键词】食物中毒;金黄色葡萄球菌 2009年9月11日,新民市胡台镇中心小学发生1起食物中毒,中小学生保健所接到报告后,立即会同疾病预防控制中心有关人员赶往现场。经流行病学调查,结合临床表现和实验室检验结果,证实是1起由金黄色葡萄球菌感染造成的细菌性食物中毒。 1 中毒发生经过 2009年9月11日中午11时30分胡台镇中心小学学生536人在该校食堂就餐。于当天下午13时20分开始有3名学生出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻,之后陆续有学生发生类似症状,至15时40分左右共有64名学生发病,发病人数占就餐人数的11.9%。该校老师及家长带学生到当地卫生院就诊,经输液应用抗生素及对症治疗(补液),患病学生病情稳定,截止9月13日已全部痊愈出院,无死亡病例。 2 流行病学调查 2.1 食谱调查64名患者早餐均在自家进餐,进食食谱均不一样。中午同时在该校食堂进餐,主食为大米饭,副食为土豆片炒尖椒,凉拌素鸡,凉拌黄瓜,火腿肠片。 2.2 现场调查情况胡台镇中心小学食堂已取得卫生许可证,但新上岗三名从业人员未进行健康检查。且该校食堂冰箱内存放食品生、熟混放;餐具、食品用容器消毒不彻底,没有消毒记录,无消毒管理制度;该食堂无冷荤配制间,凉菜制作时无专用洗手设施和专用菜板、刀具;生熟菜板无标记混用;凉拌菜工作人员张哲未使用专用工具,直接用手拌制凉菜;食堂库房没有通风设施。 2.3 临床表现通过对中毒学生的个案调查,此次食物中毒潜伏期最短为 1.8h,最长为4.2h,平均为2.6h。中毒的64例名学生中有不同程度的恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状。有恶心的61人,占95.3%,呕吐有57人,占89.06%,腹痛52人,占81.2%,腹泻48人,占75%。 2.4 实验室检查结果由于该校食堂未按照要求进行就餐食品留样,疾病预防控制中心的工作人员不能采集进餐食品,只采集到生、熟菜板刮取物、食品容器、生活饮用水、患者的呕吐物及粪便。做病原菌检测,gb/4789.10-2003常规操作,进行病原菌分离,结果在熟菜板刮取物和患者的呕吐物及便样中均检出金黄色葡萄球菌,生活饮用水中检出粪大肠菌群。 3 讨论 葡萄球菌在空气、土壤、水、粪便、污水及食物中广泛存在,主要来源于动物及人的鼻腔、咽喉、皮肤、头发及化脓性病灶。健康人的咽部带菌率可达40%～70%,手部达56%,葡萄球菌可产生多种毒素(a、b、c、d、e5型)和酶类,引起食物中毒的主要是能产生肠毒素的葡萄球菌,其中以金黄色葡萄球菌致病力最强,大约50%以上的金黄色葡萄球菌菌珠可在实验室条件下产生两种或两种以上的葡萄球菌肠毒素,食物中的肠毒素耐热性强,一般烹调温度不能将其破坏,218～248℃油温下才能被破坏。 3.1 本次发病的特征发病人员有共同进餐史和共同食物史,均食用了凉拌素鸡和凉拌黄瓜。该学校食堂无凉拌菜制作间,刀具和用具未经消毒,盛装生、熟食品容器未严格分开,菜板被污染后直接切凉拌菜原料,造成食品的交叉污染,是引起本次食物中毒的主要原因。
实验5 金黄色葡萄球菌的检验 1 目的和要求 （1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法 （2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2 基本原理 金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。 3 实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。 4 检样程序 5 操作步骤 5.1 5.1.1样品的处理
称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。 5.1.2 增菌和分离培养 5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 5.1.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3 鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1℃培养18 h～24 h。 取新鲜配臵兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，臵36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒臵时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1℃培养18 h～48 h，重复试验。 病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 5.2 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或臵盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支1 mL 无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 5.2.1.4 按5.2.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 5.2.2 样品的接种
金黄色葡萄球菌的检查 同学们，这一节我们一起来学习一下第四章微生物限度检查法中的金黄色葡萄球菌的检查。 金黄色葡萄球菌为葡萄球菌属中的一种。本菌在自然界分布甚广，空气、土壤、水和日常用具，人的皮肤。看，这就是金黄色葡萄球菌，它是一种革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇，血浆凝固酶阳性。 该菌是葡萄球菌中致病力最强的一种，可经皮肤、粘膜侵入人体引起化脓性病变等局部及全身化脓性炎症，严重时可导致败血症。 所以，国家规定外用药品和一般滴眼剂、眼膏剂、软膏剂等规定不得检出金黄色葡萄球菌，检验金黄色葡萄球菌有重要意义。 金黄色葡萄球菌的操作流程如图所示，与之前讲述过的其他控制菌的检查一样： 在完成培养基的配制和供试品的处理后，用营养肉汤于30～35℃增菌培养18～24小时，必要时可延至48小时。增菌培养的目的使被检药物中的被检菌增殖，避免出现漏检。 接着，进行分离纯化，其目的是使被检菌从混合菌中分离出来。以接种环沾取以接种环沾取1～2环培养液，划
线接种于卵黄氯化钠琼脂平板或甘露醇氯化钠琼脂平板上，置30～35℃培养24～72小时。 当阳性对照平板呈典型菌落生长时，供试品分离平板无菌落生长，或有菌落生长但不同于表中所列特征，可判为未检出金黄色葡萄球菌。 若供试品分离平板生长的菌落与表中所列特征相似疑似时，应选取2～3个以上菌落，分别接种于营养琼脂斜面上，于30～35℃培养18～24小时，取其培养物做以下检查。 1. 革兰染色镜检 革兰染色镜检观察显微镜下的细菌结构是否符合金黄色葡萄球菌的形态特征：金黄色葡萄球菌为革兰阳性球菌，无芽孢，无荚膜。排列呈不规则的葡萄状，亦可呈单个、成双或短链状排列，菌体较小。 2. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌能产生血浆凝固酶，能将血浆里的纤维蛋白原转化为纤维蛋白，使血浆凝固。
金黄色葡萄球菌引起的食物中毒 发表时间：2018-01-21T14:06:33.717Z 来源：《健康世界》2017年23期作者：杨囡张俊君王丽娟王莹莹陈斌 [导读] 根据病原学检测结果及流行病学调查，这是一起由荷叶饼夹肉受金黄色葡萄球菌污染而引起的食物中毒。 陕西省咸阳市疾病预防控制中心陕西咸阳 712000 摘要：目的为了及时追查食物中毒发生的原因，查清致病菌污染食品的来源，为临床用药治疗提供依据。方法根据GB789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》[1]的方法和有关的参考资料，对可疑食品进行致病性肠道杆菌、球菌检验。结果经培养鉴定，从食品荷叶饼夹肉及2名患者呕吐物中检出金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，3株致病菌产肠毒素检测均为阳性。结论根据病原学检测结果及流行病学调查，这是一起由荷叶饼夹肉受金黄色葡萄球菌污染而引起的食物中毒。 关键词：金黄色葡萄球菌；肠毒素检测；食物中毒 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，食品受其污染的机会很多，金黄色葡萄球菌能产生数中引起急性胃肠炎的蛋白质肠毒素，由其导致的食物中毒多见于春夏季节，且中毒食品种类繁多[2-5]，金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大占45%，而在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒占细菌性食物中毒的25%[6]。 2017年2月16日渭城区某幼儿园两个班级学生饭后出现不适，主要症状为恶心、呕吐。随后我实验室接到渭城区疾控中心送来学校餐厅食物留样及中心医院留取的病人呕吐物，经过数天培养与最后的生化鉴定，从患者呕吐物及食品荷叶饼夹肉中检出3株金黄色葡萄球菌，并进行了葡萄球菌肠毒素检测，证实该菌产生了肠毒素现将结果分析如下。 1 材料和方法 1.1 样品来源 现场采取餐厅食物留样：荷叶饼夹肉1份，约70g，南瓜粥1份，约110g患者呕吐物2份，患者肛拭子1份。 1.2检验项目 根据流行病学调查情况，将可疑样品根据GB789.4-2010《食品微生物学检验沙门氏菌检验》、GB4789.10-2010《食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》、GB4789.30-2010《食品微生物学检验单核增生李斯特菌检验》和GB4789.14-2014《食品微生物学检验蜡样芽孢杆菌检验》的方法进行增菌分离鉴定。同时将食品样品的增菌液及患者的咽拭子、肛拭子标本按要求处理后提取核酸，进行分子生物学检测。 1.3培养基及试剂 缓冲蛋白胨水（BPW）、沙门显色平板、7.5%氯化钠肉汤、金黄色葡萄球菌显色平板、单核增生李斯特菌显色平板、磷酸盐缓冲液、蜡样芽孢杆菌平板（MYP）、血平板均采用青岛海博生物有限公司；Baird-Parker（BP）平板、LB增菌液、营养琼脂均采用北京路桥生物有限公司；VITEK2阳性杆菌鉴定卡、VITEK2阴性鉴定卡、VITEK2芽孢鉴定卡均采用法国梅里埃生物有限公司；金黄色葡萄球菌荧光定量PCR试剂盒采用江苏硕世生物有限公司；ELISA金黄色葡萄球菌肠毒素检测试剂盒采用德国拜发生物分析系统有限公司。 1.4检测方法 （1）增菌：①将食品荷叶饼夹肉、南瓜粥按比例称取样品分别进行沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核增生李斯特菌及蜡样芽孢杆菌增菌培养，将样品充分混匀，除单增菌外（单核增生李斯特菌30℃培养24小时），其它增菌液置于37℃培养24小时。②将2份呕吐物及1份肛拭子接种血平板、营养琼脂平板。 （2）分离培养：将上述增菌液分别取一接种环接种于相应的分离培养基（沙门显色平板、单增显色平板、MYP平板、金葡显色平板、BP平板、血平板）作平板划线，经37℃培养24小时后观察各平板上菌落，同时将剩余增菌液及患者咽拭子、肛拭子进行处理，用手工法提取核酸进行PCR分子生物学实验。 （3）各平板菌落生长形态：①食品荷叶饼夹肉及南瓜粥：沙门氏菌、单核增生李斯特菌、蜡样芽孢杆菌分离平板均无可疑菌落生长，食品南瓜粥中，金黄色葡萄球菌分离平板也无可疑菌落生长，故排除该菌污染食物的可能性。②食品荷叶饼夹肉：金黄色葡萄球菌显色平板上可见蓝绿色中等大小光滑湿润菌落；BP平板上可见灰黑色光滑湿润，周围有一混浊带边缘透明的小圆形菌落；血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈。③呕吐物及肛拭子：2份呕吐物：血平板：圆形，菌落较大，乳黄色光滑湿润，周围有完全透明溶血圈；营养琼脂平板：乳黄色中等大小，光滑湿润的圆形菌落；1份肛拭子：血平板及营养琼脂平板均无可疑菌落生长。 （4）鉴定试验：将可疑的菌进行革兰染色、生化试验及分子生物学试验。 食品荷叶饼夹肉及2份呕吐物的金黄色葡萄球菌的鉴定试验 ①生化试验见表1 ②分子生物学试验：对荷叶饼夹肉的增菌液及2份呕吐物样品进行处理，用手工法提取核酸，进行了荧光定量PCR的检测，在PCR结果中也显示出食品荷叶饼夹肉中金黄色葡萄球菌结果为阳性，2份呕吐物样品结果也为阳性。 ③肠毒素检测试验：由于金黄色葡萄球菌对人的治病因子主要为肠毒素，所以我实验室对分离出的金葡菌株是否产肠毒进行了检测，我们分别采用了PCR方法和ELISA方法对5种金葡菌肠毒素进行了检测，结果见表2和表3。