【课题名称】 3.1 基因的分离定律课型新授课总课时 6
【学习目标】1、例举生物的性状及表现方式，区别性状及相对性状（A）
2、阐明孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程（B）
【学习重点】孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程
【学习难点】孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程
【学法指导】自主阅读、合作探究
【知识链接】
【导学过程】个案补充
预习导学（20分钟）
（请同学们在20min内快速阅读教材第三章、第一节P27～29内容完成下列填空，
并将答案在课本上标出。）
知识点一：孟德尔及其对遗传学的贡献
孟德尔选择豌豆作为实验材料，最先揭示了遗传的两个基本规律，即
和。
知识点二：孟德尔的豌豆杂交实验
1、选用豌豆作遗传实验材料的优点
（1）豌豆是严格的植物，而且是闭花传粉。自然情况下一般都是。（2）豌豆花大，易于做人工实验。
（3）具有易区分的。
（4）性状能稳定遗传。
【相关概念】
①性状：生物体的形态特征和生理生化等特性。（见课本P73）
②相对性状：生物性状的不同表现类型。
（请同学们思考：对多对相对性状应该如何研究？）
2、一对相对性状的杂交实验
（1）实验过程图解（观察课本上
P287对相对性
状图，思考：什
么是性状？相
对性状？）
请同学们思考：
要进行豌豆的
杂交实验，如何
进行异花传
粉？
请同学们思考：
什么是显性性
状？隐性性
状？性状分
离？
请同学们思考：
F2中出现3︰1
的性状分离比
这是偶然还是
必然？是普遍
【相关概念】
①把F1表现出来的亲本性状称为，（如豌豆的紫花）
②把没有表现出来的亲本性状称为。（如豌豆的白花）
③F1植株自花受粉产生子二代（F2），在子二代中，有些植株表现显性性状（紫花），
有些植株表现隐性性状（白花），有的开白花，这种在杂种后代中出现不同亲本性
状的现象，称为。
（2）实验结论
①F1中只表现出显性性状；②F2中出现了；
③F2中出现了性状分离比为。
知识点三：对分离现象的解释
1、孟德尔对分离现象提出的假说
（1）生物的性状是决定的，遗传因子是独立存在的，互不融合。决
定显性性状的为；（用大写字母如A表示）决定隐性性状的
为。（用小写字母如a表示）
（2）体细胞中遗传因子是存在的。如纯种紫花豌豆的体细胞中有成对
的遗传因子 , 纯种白花豌豆的体细胞中有成对的遗传因子。像这
样，遗传因子组成相同的个体叫做。因为F1自交后代出现了隐性性状，
所以F1细胞中必然含有隐性遗传因子；而F1表现的是显性性状，因此F1体细胞中
的遗传因子应该是。像这样，遗传因子组成不同的个体叫做。
（3）生物体在形成生殖细胞（配子）时，成对的遗传因子彼此，分别进
入的配子中，配子中只含有每对遗传因子中的。
（4）受精时，雌雄配子的结合是的。
2、一对相对性状的遗传分析图解
基因型：AA∶ Aa ∶ aa=
表现型: 紫花∶白花 = ∶
的还是个别现
象呢？
阅读“积极思
维”。
1909年，丹麦
生物学家约翰
逊给“遗传因
子”起了一个新
名字叫做“基
因”。
注意：
纯合子能稳定
遗传，它的自交
后代不会再发
生性状分离；
杂合子不能稳
定遗传，它的自
交后代还会发
生性状分离。
请同学们思考：
什么是基因
型？表现型？
课上自主学习
小结：
1、F1形成的配子种类和，比
值是，配子结合是随机的。
2、F2基因型有、、三
种，比例为，F2表现型
有和，比例
为。
【相关概念】
①显性基因：控制的基因（大写英文字母表示，如A）。
②隐性基因：控制的基因（小写英文字母表示，如a）。
③等位基因：同源染色体上决定一对的两个基因（如A和a）。（请同学们预习完相关内容后，自主解答以下几道练习。）
1、豌豆是一种理想的杂交实验材料，这是因为（）
A. 豌豆是严格的闭花受粉植物
B. 不同品种的豌豆具有易于区分的性状
C. 豌豆生长期短、易于栽培
D. A、B、C 三项都是
2、下列各组性状中，属于相对性状的是（）
A．豌豆的高茎与绿色豆荚 B．羊的黑毛与兔的白毛
C．棉花的细绒与长绒 D．人的双眼皮与单眼皮
3、下列基因型的个体表示纯合子的是（）
A. Ee
B. EF
C. ee
D. Ed
展示导思（10分钟）
小组合作讨论：
1、基因型分别为bb、Bb、BB的三个植物个体，其中属于杂合体的是，属于纯合体的是。表现型相同的个体有。
2、用纯种的紫花豌豆与白花豌豆进行杂交实验，F1产生种不同类型的雌雄配子，其比为。F2的基因型种，类型，其比为。 F2的表现型有种，类型，比例为。其中，不能稳定遗传、自交后代会发生性状分离的基因型是。（紫花为显性，用A和a表示相应的基因。）
检测导练（15分钟）
1、下列几组杂交中，哪组属于纯合子之间的杂交（）
A. DD×Dd
B. DD×dd
C. Dd×Dd
D. Dd×dd
2、下列哪一组实验结果将出现性状分离现象（）
A．AA×aa B．AA×Aa C．Aa×Aa D．aa×aa
3、在一对相对性状的杂交实验中，子一代未表现出来的亲本性状称为（）
A. 显性性状
B. 隐性性状
C. 相对性状
D. 性状分离
4、对孟德尔“一对相对性状的杂交试验”中性状分离现象的各项假设性解释中错
误的是（）A．生物的性状是由细胞中的遗传因子决定的
B．体细胞中的遗传因子成对存在，互不融合
C．在配子中只含有每对遗传因子中的一个
D．生物的雌雄配子数量相等，且随机组合
5、等位基因是指（）
A．一个染色体的两条染色单体上的基因
B．一个DNA分子的两条长链上的基因
C．同源染色体的同一位置上的基因
D．同源染色体的同一位置上控制相对性状的基因
6、下列表示等位基因的是（）
A． YY B． Yy C． yy
D． XY
7、在香水玫瑰的花色遗传中，红花、白花为一对相对性状，受一对等位基因的控
制(用R、r表示)。从下面的杂交实验中可以得出的正确结论是（）
A．红花为显性性状 B．红花A的基因型为Rr
C．红花C与红花D的基因型不同 D．白花B的基因型为Rr
8、下图为豌豆的一对相对性状遗传实验过程图解，请仔细读图后回答下列问题：（1）该实验的亲本中，父本是，母本是。
（2）操作①叫，为了确保杂交实
验成功，①的操作应注意，时间上；
操作②叫，处理后必需用纸袋对母本进
行。其目的是。
（3）高茎（D）对矮茎（d）为显性，若P皆为纯合体，让F1进行自交，F2性状中高茎与矮茎之比为，F2的基因类型有，且比值为。这种现象称作。
9、某种自花传粉的豆科植物，同一植株能开很多花，不同品种植株所结种子的子叶有紫色也有白色。现用该豆科植物的甲、乙、丙三个品种的植株进行如下实验。
实验组别亲本的处理方法
所结种子的性状及数量
紫色子叶白色子叶实验一将甲植株进行自花传粉409粒0
实验二将乙植株进行自花传粉0 405粒实验三
将甲植株的花除去未成熟的全部雄蕊，然后套上纸
袋，待雌蕊成熟时，接受乙植株的花粉
396粒0 实验四将丙植株进行自花传粉297粒101粒
分析回答：
（1）在该植物种子子叶的紫色和白色这一对相对性状中，显性性状是。如果用A代表显性基因，a代表隐性基因，则甲植株的基因型为，丙植株的基因型为。
（2）实验三所结的紫色子叶种子中，能稳定遗传的种子占。
（3）实验四所结的297粒紫色子叶种子中杂合子的理论值为粒。
课中合作探究课上自主检测
一、DEPC水是用DEPC(diethyl pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压灭菌的MiliQ纯水。经检测不含杂质RNA、DNA和蛋白质。 物理性质分子式：C6H10O5 分子量：162.1 外观：无色液体折射率：1.398（20°C）密度：1.12g/ml 摩尔浓度：6.9M DEPC气味芳香浓烈，强挥发性，有毒，需在通风橱中操作。 化学性质DEPC对湿气和酸碱敏感，在乙醇和二氧化碳的水溶液中缓慢分解，在155°C自行分解。DEPC 在氨水中特别不稳定，生成一种致癌的聚氨酯胶的物质。DEPC对核酸酶有积极地抑制作用。（主要是对含有-NH，-SH，-OH活性部位的酶起作用）。 使用要点：DEPC水可以用于RNA沉淀的溶解，含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等，以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。通常使用0.1%的DEPC水溶液使Rnase 失活，即1ml DEPC溶于1L纯净水中。溶解时，DEPC不会很快溶解，开始时以小球的形式存在于溶液中，因此要在搅拌器中搅动直到小球消失为止。DEPC自行分解成乙醇和二氧化碳很慢，可以通过高压灭菌处理破坏DEPC或水溶液中煮沸15分钟以上。 注意事项保存：避光干燥密闭容器于2-8°C 注：使用时要戴乳胶手套和口罩。如果不慎溅到皮肤或眼睛，应立即用大量清水冲洗，如果感到不适，就医。 二、DEPC处理枪头： 1、用去离子水配制0.1%的DEPC，避光; 2、将枪头和EP管放入0.1%的DEPC内，保证枪头和EP管内都充满0.1%的DEPC（看自己的操作习惯了，本人是用左手拿住镊子夹住枪头或者EP管，右手使用移液器吸取0.1%的DEPC，将枪头或者EP管内充满0.1%的DEPC）； 3、避光、静置、过夜 4、装枪头和EP管的盒子不需要用DEPC浸泡，将枪头或者EP管内的DEPC水大致去除干净后，装起，包好 5、121摄氏度，30min 6、180摄氏度，干燥数个钟头（三个左右吧，这个时间具体记得不是很清楚了），用前拿出来 注意：处理DEPC时需要戴乳胶手套、口罩！ 三、 使用甲酰胺和二甲亚砜（DMSO）一般不会导致高背景。在杂交液中加入30%二甲亚砜可使T2噬菌体DNA的Tm值比原先降低14℃，而使用酰胺甚至可使DNA在室温下变性和
运用黑腹果蝇研究数量性状的遗传 焦诗卉 （中山大学生命科学院08级生物技术一班广州 510275） 摘要：在生物中，有些性状可用某种尺度来测量并可用数字形式来描述，如果果蝇的身体大小，生长速度，小刚毛数量的多少等，这样的性状就是数量性状。本次实验以黑腹果蝇腹板着生的小刚毛数为研究对象，了解数量性状遗传的特点与规律，并且运用数理统计和数学分析的方法，掌握实验遗传率的计算。 关键词：黑腹果蝇；数量性状；遗传率；刚毛数；数理统计 在生物中凡是可数、可度、可衡等并可用数字形式描述的形状，称数量性状。数量性状大都由多基因控制。一般，控制同一性状的基因数目很多，而每个基因的作用很小，并且很容易受环境影响。群体的表型变量通常呈连续分布。一个显示数量性状的个体，其表型是受到多个不同等位基因的作用，而每个基因对表型的贡献很小，单相关的基因数目很多，另外，其表型也受到环境因素的影响。因此，数量性状的变异由遗传变异和非遗传变异组成。因此，对于数量性状的分析，要运用数理统计的方法来操作。 1、实验仪器和试剂 1.1仪器、用具 恒温培养箱，显微镜，载玻片，培养瓶，麻醉瓶，白瓷板，尖头镊子，毛笔 1.2试剂 乙醚 2、实验材料 黑腹果蝇 3、方法与步骤 3.1 把两品系杂交所得分离世代作为亲代群体，从中随机选出处女蝇和雄蝇各20只，适度麻 醉，逐一在显微镜下观察腹部的小刚毛数。记录之后装入已消毒过的小指管中，没管一只，贴上标签，并标明性别、小刚毛数； 3.2 观察完毕后，再从中选小刚毛最多和次多的雌雄果蝇各1只放入一培养瓶中交配，并贴 上标签； 3.3 把配对好的果蝇放在20~25℃的培养箱中培养，使其交配，经7天左右，可见下一代幼 虫出现，此时把亲本的成蝇倒干净并处死； 3.4 下一代成虫羽化后，分别在两个选择交配的组合中随机取出雌雄各20只，同亲代一样观 察记录小刚毛数。
原位杂交组织（或细胞）化学（In situ Hybridization Histochemistry，ISHH）简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA 杂交三类。 根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法一般用半抗原标记探针，最后通过免疫组织化学法对半抗原定位，间接地显示探针与靶核酸形成的杂交体。 原位杂交最初是以同位素标记探针进行的。尽管同位素标记（如35S，3H，32P等）仍然广泛使用，但非同位素标记探针的迅速发展（尤其是生物素标记探针和地高辛标记探针），更引起科技工作者的极大兴趣。 一、基本要求 1. 组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞最好在30 min 内固定。 2. 固定目的是： （1）保持细胞结构； （2）最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平； （3）使探针易于进入细胞或组织。 最常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂（如戊二醛）不同，多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接，因而不会影响探针穿透入细胞或组织。 3. 增强组织的通透性和核酸探针的穿透性： （1）稀酸处理和酸酐处理：为防止探针与组织中碱性蛋白之间的静电结合，以降低背景，杂交前标本可用0.25%乙酸酐处理10 min，经乙酸酐处理后，组织蛋白中的碱性基团通过乙酰化而被阻断。组织和细胞标本亦可用0.2 M HCl处理10 min，稀酸能使碱性蛋白变性，结合蛋白酶消化，容易将碱性蛋白移除。 （2）去污剂处理：去污剂处理的目的是增加组织的通透性，利于杂交探针进入组织细胞，最常应用的去污剂是Triton X-100。注意：过度的去污剂处理不仅影响组织的形态结构，而且还会引起靶核酸的丢失。
果蝇数量性状实验
摘 要： 在生物 中凡 是可数 、可 度、可 衡等并 可用 数字 形式描 述的性 状， 称数 量性状 （quantitative characteristics） 。数量性状大都由多基因控制。一般，控制同一性状的 基因数目很多，而每个基因的作用很小，并且很容易受环境影响。群体的表型变量通常呈连 续分布。本实验用果蝇刚毛数量作为数量性状的研究。 关键词：黑腹果蝇；刚毛；数量性状；遗传。 引言 在生物中，有些性状可用某种尺度来测量并可用数字形式来描述，如果蝇的身体大小、 生长速度、小刚毛数量的多少等，这样的性状都是数量性状。一个显示数量性状的个体，其 表型是受到多个不同等位基因的作用， 而每个基因对表型的贡献很小， 但相关的基因数目很 多，另外，其表型也受到环境因素的影响。因此数量性状的变异由遗传变异和非遗传变异组 成。 对影响数量性状的单个等位基因的分离， 以及用普通遗传学方法去追查各个基因的行为 都是困难的， 因此通常不能用孟德尔的分析方法进行分析， 而是用数理统计的方法来进行分
[1]
析 。 材料与方法 ①仪器和试剂：1、仪器、用具：恒温培养箱，显微镜，载玻片，培养瓶（有培养基的） ，麻 醉瓶，白瓷板，毛笔，乙醇棉球。 2、试剂：乙醚或三乙基胺。 ：把两个不同的实验室品系杂交，再把 F1 ②材料：黑腹黑蝇（Drosophila melanogaster） 系内近交，利用 F2 变异类型丰富的群体。培养供试果蝇宜在 20℃左右低温下饲养，这样成 虫个体较大，便于观察和计数小刚毛。 ③方法步骤： 1. 每个人适度麻醉♀、 ♂果蝇各一只 （必须是处女蝇） 在 40 倍显微镜下计算小刚毛， ， ♂的计算倒数第一、第二腹板上的小刚毛数，♀的计算倒数第二、第三腹板上的小 刚毛数，将蝇装入小指管里，贴上标签（标明性别、两腹板小刚毛合计数目） 。 2. 做好记录，把刚毛数填到全班统一的表上，选出小刚毛数最多和最少的♀、♂果蝇 各 2 只。 3. 把小刚毛数最多的 2 只♀和 2 只♂（冠、亚军） ，冠军♀、♂装一管，亚军♀、♂ 装另一管，共 2 管；小刚毛数最少的 1♀和 1♂配成一管，次少的♀、♂配成另一 管，配好后，放在 25℃培养箱中培养两周。 （冠军不育时，用亚军） 4. 把所有冠军后代成虫倒出试管中进行麻醉并观察小刚毛数，统计和估算遗传率[2]。 实验结果分析和讨论 刚毛数向多的方向选择简称 H，向少的方向选择简称 L，下同。 统计方法： ① 用分组数据统计频数(用 excel 软件的 frequency 函数)，并作出频数分布直方图 ② 用平滑曲线将频数分布数据连接起来，与标准正态曲线对比 ③ 用 excel 的 normdist 函数拟合出正态分布数据表并作图 ④ 分别比较两种性别中，亲本和 H，L 的正态分布曲线，定性分析数量遗传性状的定 向改变 ⑤ 利用课本记忆实验书上的内容计算遗传力等指标数据[3]。
♀果蝇刚毛统计表
原位杂交原理及具体操作
原位杂交实验原理与方法 一、目的 本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。 二、原理 原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。 当然杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。 探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。目前，大多数放
射性标记法是通过酶促反应将标记的基因掺入DNA中，常用的同位素标记物有3H、35S、125I 和32P。同位素标记物虽然有灵敏性高，背底较为清晰等优点，但是由于放射性同位素对人和环境均会造成伤害，近来有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。 探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。cDNA 探针又可分为双链cDNA探针和单链cDNA探针。原位杂交又可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。 菌落原位杂交（Colony in situ hybridization）菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸 纤维素滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂菌以释出DNA。将NDA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号，并与平板上的菌落对位。 组织原位杂交（Tissue in situ hybridization）组织原位杂交简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交，它与菌落的原位杂交不同。菌落原位杂交需裂解细菌释出DNA，然后进行杂交。而原位
【课题名称】基因的分离定律课型新授课总课时6【学习目标】 1、例举生物的性状及表现方式，区别性状及相对性状（A） 2、阐明孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程（B） 【学习重点】孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程 【学习难点】孟德尔的一对相对性状的杂交实验过程 【学法指导】自主阅读、合作探究 【知识链接】 【导学过程】个案补充 预习导学（20分钟） （请同学们在20min内快速阅读教材第三章、第一节P27～29内容完成下列填空，并 将答案在课本上标出。） 知识点一：孟德尔及其对遗传学的贡献 孟德尔选择豌豆作为实验材料，最先揭示了遗传的两个基本规律，即 和。 知识点二：孟德尔的豌豆杂交实验 1、选用豌豆作遗传实验材料的优点 （1）豌豆是严格的植物，而且是闭花传粉。自然情况下一般都是。（2）豌豆花大，易于做人工实验。 （3）具有易区分的。 （4）性状能稳定遗传。 【相关概念】 ①性状：生物体的形态特征和生理生化等特性。（见课本P73） ②相对性状：生物性状的不同表现类型。（观察课本上 P287对相对性 状图，思考：什 么是性状相对 性状） 请同学们思考： 要进行豌豆的 杂交实验，如何 进行异花传粉 请同学们思考： （请同学们思考：对多对相对性状应该如何研究） 2、一对相对性状的杂交实验 （1）实验过程图解 【相关概念】 ①把F1表现出来的亲本性状称为，（如豌豆的紫花） ②把没有表现出来的亲本性状称为。（如豌豆的白花） ③F1植株自花受粉产生子二代（F2），在子二代中，有些植株表现显性性状（紫花）， 有些植株表现隐性性状（白花），有的开白花，这种在杂种后代中出现不同亲本性 状的现象，称为。 （2）实验结论 ①F1中只表现出显性性状；②F2中出现了； ③F2中出现了性状分离比为。 知识点三：对分离现象的解释 1、孟德尔对分离现象提出的假说 （1）生物的性状是决定的，遗传因子是独立存在的，互不融合。决 定显性性状的为；（用大写字母如A表示）决定隐性性状的 为。（用小写字母如a表示） （2）体细胞中遗传因子是存在的。如纯种紫花豌豆的体细胞中有成对 什么是显性性 状隐性性状性 状分离 请同学们思考： F2中出现3︰1 的性状分离比 这是偶然还是 必然是普遍的 还是个别现象 呢 阅读“积极思 维”。 1909年，丹麦 生物学家约翰 逊给“遗传因 子”起了一个新 名字叫做“基 因”。 注意： 纯合子能稳定 遗传，它的自交 后代不会再发 生性状分离； 杂合子不能稳 课上自主学习
原位杂交实验操作步骤 一质粒制备 1质粒的转化和扩增 1.1制备XL1-Blue感受态细菌 1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mlLB培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm 培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的CaCl2重悬细菌，分装(200μ/tube)，-80℃保存。 2.转化：在冰浴中将1管XL1-Blue感受态菌解冻，将浓度为2ng/μ1的质粒DNA4μ1加入到8Oμ1感受态菌中。 3.轻轻摇匀，冰浴30min。 4.42℃热激9O秒，然后迅速冰浴2min。 5.加入LB培养液(无氨苄青霉素)0.8ml，在37℃，100转/min水浴孵育60min。 6.取200μl菌液铺于琼脂板上(涂有X-Gal(20mg/ml)-IPTG(200mg/ml)的LB-氨苄青霉素50mg/ml,1μl/ml培养基)，待菌液全部被吸收后，倒置平板于37℃培养12-16h。 1.2鉴定和挑选含重组质粒的菌落 1.用无菌牙签挑取单菌落，接种到10ml含氨苄青霉素的LB培养液的离心管中，于37℃，200转/分培养2h，取1ml之一Eppendorf离心管，加 50μl10mmol/L EDTA(pH8.0)。 2.加入50μl新配置的0.2mol/LNaOH、0.5%SDS、20%蔗糖溶液后，振荡30秒。 3.在70℃温育5min，然后冷却到室温。 4.加1.5μ14mol/LKCl和0.5μ1含0.4%溴酚兰染液，振荡3O秒后，冰浴5min。 5.12000g，4℃离以3min，以除去细菌碎片。 6.制备1%的琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)，取50μl上清液加入到样品孔中，其中一孔加入中等分子量DNAMarker。恒压50V，进行电泳。 7.当溴酚兰迁移到凝胶全长的2/3-3/4时，停止电泳，在紫外灯下检查质粒DNA 分于量的大小是否与转入质粒相符。
原位杂交操作流程 1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天 1）二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟； 2）无水乙醇浸泡2次，每次3分钟； 3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟； 4） PBS清洗3分钟； 5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟； 6） PBS清洗10分钟； 7）加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育15分钟； 8） PBS清洗2次，每次3分钟； 9） 0.2N的HCl孵育30分钟； 10）PBS清洗2次，每次3分钟； 11）0.25%无水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分钟； 12）PBS清洗2次，每次5分钟； 13）预杂交缓冲液孵育30分钟； 14）准备核酸探针混合物：使用预杂交缓冲液稀释探针，85℃加热5分钟，置于冰块中10分钟； 15）杂交；第二天 16）将玻片置于SSC中2次，每次5分钟以去除封片； 17）PBS清洗3分钟； 18）RNA酶A溶液中（或0.1-1ng/mlPBS中），37℃孵育30分钟； 19）PBS清洗5分钟； 20）室温，2×SSC清洗10分钟； 21）37℃，1×SSC清洗10分钟； 22）37℃，0.5×SSC清洗10分钟； 23）缓冲液A孵育10分钟； 24）缓冲液A（1%正常绵羊血清和0.03%三重氢核X-100）孵育30分钟； 25）加入抗地高辛抗体（1/200的上述缓冲液，来自Boehringer Mannheim），37℃孵育3 小时； 26）缓冲液A清洗2次，每次10分钟； 27）缓冲液B清洗2次，每次5分钟； 28）制成NBT/BCIP暗处保存30-60分钟，显微镜下进行观察，如果背景尚佳，显色时间可延长到16小时；29）停止缓冲液B的反应，用水进行简单的清洗； 30）固红，脱水以及封片进行核的复染。 2、使用地高辛标记的寡核苷酸探针进行石蜡切片的原位DNA杂交第一天 1）二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟； 2）无水乙醇浸泡2次，每次5分钟； 3） 95%乙醇浸泡2次，每次5分钟； 4） PBS清洗5分钟； 5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟； 6） PBS清洗5分钟； 7）加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育10分钟； 8） PBS清洗2次，每次5分钟； 9） 0.2N的HCl孵育30分钟； 10）PBS清洗2次，每次5分钟； 11）0.25%无水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分钟；
第2节 孟德尔的豌豆杂交试验（二） 【教材内容解读】 要点 1 两对相对性状的杂交实验过程及结果 亲本： 纯种黄色圆粒×纯种绿色皱粒 子一代： 黄色圆粒（正、反交结果相同） 子二代： 黄色圆粒、绿色圆粒、黄色皱粒、绿色皱粒（比例总是接近9:3:3:1） 子二代中不同性状之间发生了自由组合。 对子二代的两对相对性状分开分析： 对一对相对性状独立分析说明：每一对相对性状的遗传都遵循分离定律。 要点 2 孟德尔对自由组合现象的解释 假设豌豆的圆粒和皱粒分别由遗传因子R 、r 控制，黄色和绿色分别由遗传因子Y 、y 控制，这样，纯种黄色圆粒和纯种绿色皱粒豌豆的遗传因子组成分别是YYRR 和yyrr ，它们产生的F 1的遗传因子组成是YyRr ，表现为黄色圆粒。F １在产生配子时，每对遗传因子彼此分离，不同对的遗传因子可以自由组合。这样F １产生的雌配子和雄配子各有4种：YR 、Yr 、yR 、yr ，它们之间的数量比为 l ∶１∶１∶l 。受精时，雌雄配子的结合是随机的。雌雄配子的结合方式有16种；遗传因子的组合形式有9种：YYRR 、YYRr 、YYrr YyRR 、YyRr 、、Yyrr 、yyRR 、yyRr 、yyrr ，性状表现为4种：黄色圆粒、黄色皱粒、绿色圆粒、绿色皱粒，它们之间的数量比是9∶3∶3∶l 。 要点 3 对自由组合现象解释的验证 根据设想推测测交实验的结果： 孟德尔所做的测交实验，无论是正交还是反交，结果都符合预期的设想。 要点 4 自由组合定律 控制不同性状的遗传因子的分离和组合是互不干扰的；在形成配子时，决定同一性状的 粒形： 圆粒种子:皱粒种子=3:1 粒色： 黄色种子:绿色种子=3:1
原位杂交实验操作步骤 撰写人：范为民 一、实验原理 原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已经成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生，发展和调控等根本性问题的有力工具。 二、试剂盒 本实验室常用的原位杂交试剂盒是博士德公司生产的敏感加强型原位杂交检测试剂盒，此试剂盒分为两种，一种为过氧化物酶（POD）检测（MK1030型），一种为碱性磷酸酶(AP)检测系统（MK1032型），用于mRNA的杂交。过氧化物酶（POD）检测的最终信号为棕黄色，而碱性磷酸酶(AP)检测的信号为紫色，因后者信号比较突出，所以一般采用后一种检测方法。两种检测方法的实验步骤相差不多，所用洗脱缓冲液也大同小异。用于杂交的探针也可以分为两种，一种是DNA探针，即是用DNA与组织中的mRNA杂交，另一种是RNA 探针，即用RNA与组织中的mRNA杂交。DNA探针处理操作简单，但杂交信号一般不如RNA探针强烈，所以条件允许的话一般采用RNA探针。下面先介绍碱性磷酸酶(AP)检测试剂盒，采用RNA作为探针的操作步骤。 三、实验步骤 原位杂交实验主要包括三大部分，即组织冰冻切片、RNA探针标记、原位杂交三部分。 （一）组织冰冻切片 1. 实验准备 （1）原位杂交专用载玻片：用多聚赖氨酸处理后的载玻片，使切片紧密粘附在玻片上，可以用于后面的洗脱。一般一张载玻片上可以贴至多十张切片（可以是不同组织的切片），所以需要玻片的数目需要根据实验的要求而定。这种专用载玻片可以从中杉金桥公司购买，目前价格是每片2.2元，玻片有一面的一端是毛玻璃，用于标记组织名称等，切片应该贴在此面，切勿贴到反面。 （2）缓冲液配备 1.1器具准备 剪刀、镊子各三把，开壳钳一把，100ml量筒一个，磁力搅拌子一个；100ml试剂瓶一个，250ml试剂瓶三个。以上器具均洗净后置于180摄氏度以上烘烤6小时以上。铅笔、显微镜、冰、吸水纸、一次性塑料手套等。 1.2 溶液配制 0.1M PB缓冲液：Na2HPO4?12H2O 5.8021g,NaH2PO4?2 H2O 0.5928 g,加入200ml ddH2O溶解于之前准备的250ml试剂瓶中，再加入200ūl DEPC，充分摇匀后过夜，高压灭菌。以上溶液配制两份，其中一份瓶中放入磁力搅拌子。
实验六果蝇的数量性 状遗传
专业班级：09生物技术2班学号：20091052215 姓名：杨扬同组人：王英玉实验日期：2011年10月18日室温：21.7℃大气压：83.4KPa 实验六果蝇数量性状的遗传 一、目的： 1、以果蝇（Drosophila melanogaster）腹片着生的小刚毛为对象，研究数量性状遗传的特点。 2、学习估算统计遗传学基本参数——遗传率（heritability） 二、原理： 1、在生物中凡是可数、可度、可衡等并可用数字形式描述的形状，称数量性状。数量性状大都由多基因控制。 2、数量性状的变异由可遗传的变异和不可遗传的变异组成，因为控制同一数量性状的基因数目很多，而每个基因的作用很小，并且很容易受环境影响。群体的表型变量通常呈连续分布。因此，对数量性状遗传的分析，要运用数理统计的方法来操作。 3、果蝇的第四腹板和第五腹板上的小刚毛数就是典型的数量性状，不同的个体小刚毛数不同。本实验采用不同品系果蝇的杂交后代为研究材料，在恒温培养下，从F2代开始观察雌雄果蝇不同个体的小刚毛数（因为考虑到F1代还未完全出现性状分离，故从F2代开始计数），并且选择刚毛数最多和最少的♀、♂个体分别进行杂交，计算产生的F3代的小刚毛数，最后根据以下公式估算遗传率。 即 H2= ΔG/ σpi 式中σp为标准差，i=ΔP/σp为标准选择差，ΔP为子代平均值―亲代平均值，ΔG为遗传获得量。 说明： 在多基因遗传中，遗传因素所起的作用称为遗传率，一般采用百分比来表示。遗传率是一个统计概率，只能运用于群体而不能用于个体。遗传率有广义遗传率和狭义遗传率之分，广义遗传率是指遗传方差在总的表现型中所占的比率；而狭义遗传率是指计算基因的相加效应的方差VA在总的表型方差中所占百分率。记作： 狭义遗传率＝相加的遗传方差/表型方差＝相加的遗传方差／(相加的遗传方差＋显性的遗传方差＋环境方差)。
1.For each probe (control and experimental), set up a separate 100-ml PCR in a 0.5-ml sterile tube, as tabulated below. Either.cDNA inserted in plasmids or genomic DNA can be used as templates for the PCR (see REAGENT SETUP for details on primer design). 每个探针(实验组和对照组),在0.5 -ml无菌管设立一个独立的100毫升PCR,正如下面的表。另外。互补脱氧核糖核酸插入到基因组DNA质体或可用作模板PCR(见试剂设置有关底漆设计)。 **注意关键： 1.很多版本的实验反义核酸探针可以作为一种控制背景染色(见试剂设置)。然而,我们相信最好的方法来演示特异性是获取相同的空间限制表达模式使用不同的非重叠探测器相同的基因。 2.小心不要污染pcr.使用无菌试管和过滤器的技巧和戴手套 3.另外,PCR扩增,cDNAs质粒中可以使用约束线性化酶,独特的站点位于5￠(反义核酸探针)或3￠(对感官探测)来插入。净化的线性DNA可以通过苯酚/氯仿萃取乙醇沉淀紧随其后。 2| Run the PCR using the conditions tabulated below. 使用下面列出的条件运行PCR **暂停点：把扩增好的pcr产品放4℃降温和在-20℃贮藏几个星期。 3| Add the 100-ml PCR to a Microcon YM-50 column and add 400 ml of sterile water. Centrifuge for 15–20 min at 1,000 g at room temperature. 加入100毫升PCR到Microcon YM-50列并加入400毫升的无菌水。在室温下1000g离心15 - 20分钟。 **注意关键：膜应该是干的。如果没有再离心 4|Place the Microcon column into a new microfuge tube (provided in the kit), add 20ml of sterile water, vortex briefly and then turn the Microcon column upside down. Spin for 1 min at 1,000 g at room temperature to recover the DNA. 把小层析柱放在一个新的离心管(在这个工具包中提供),增加20毫升的无菌水、短暂离心,然后颠倒层析柱。自旋1分钟1000 g在室温下恢复了DNA **注意关键：离心的步骤应该快速。离心机1分钟只是为了避免样本太干。 5|Check the quality, quantity and size of the PCR amplification product by loading 1/20 of the preparation on a 1% (wt/vol) agarose gel in 1 TBE buffer. DNA should appear as a band and not as a smear. The 1/20 of the preparation should contain at least 40 ng of DNA. 通过装载1/20的稀释液在1*的TBE buffer缓冲液中的1% (wt/vol)的琼脂糖凝胶检查PCR的扩增产物的质量
第1章遗传因子的发现 第1节孟德尔的豌豆杂交实验(一) 第1课时一对相对性状的杂交实验过程和解释[学习目标] 1.总结豌豆适于作为遗传实验材料的原因。2.结合花的结构说出人工异花传粉的过程及注意事项。3.掌握相对性状、性状分离、显性性状、隐性性状、正交、反交、自交等基本概念。4.写出杂交实验图解并区分不同符号代表的含义及正确规范书写一对相对性状的杂交实验。 知识点一豌豆用作遗传实验材料的优点 1．优点 (1)豌豆是□01自花传粉植物，避免了□02外来花粉的干扰，所以豌豆在自然状态下一般都是□03纯种。 (2)具有稳定的易于区分的□04相对性状，且能□05稳定地遗传给后代。 2．人工异花传粉 (1)去雄 ①对象：□06母本。 ②时间：□07花未成熟时，即花蕾期。 ③要求：□08除去未成熟花的全部雄蕊。 ④套袋：套上纸袋，防止□09外来花粉的干扰。 (2)采集花粉：待去雄花的□10雌蕊成熟时，采集另一植株的花粉。 (3)传粉：将采集到的花粉涂在□11去雄花的雌蕊的□12柱头上，再□13套上纸袋。 3．相关概念
(1)自花传粉：□14两性花在□15未开放时，它的花粉会落到□16同一朵花的雌蕊的柱头上，从而完成受粉，这种传粉方式叫作自花传粉，也叫□17自交。 (2)异花传粉：□18两朵花之间的传粉过程叫作异花传粉。 (3)父本：不同植株的花进行异花传粉时，□19供应花粉的植株叫作父本(♂)。 (4)母本：不同植株的花进行异花传粉时，□20接受花粉的植株叫作母本(♀)。 (5)相对性状：□21一种生物的□22同一种性状的□23不同表现类型。 易漏边角 问题探究对单性花植物进行人工异花传粉的基本操作程序中，是否需要去雄处理？为什么？ 提示：不需要。因为单性花中的雌花只有雌蕊。 问题探究对单性花植物进行异花传粉的基本操作程序中是否需要套袋？为什么？ 提示：需要。因为异花传完粉后也需要利用套袋来防止外来花粉的干扰。 [例1]孟德尔选用豌豆做遗传实验的理由及对豌豆进行人工异花传粉前的处理是() ①豌豆是闭花受粉植物②豌豆在自然状态下是纯种③用豌豆做遗传实验有直接的经济价值④各品种间具有一些稳定的、容易区分的性状⑤开花期母本去雄，然后套袋⑥花蕾期母本去雄，然后套袋 A．①②③④；⑥B．①②；⑤⑥ C．①②④；⑥D．②③④；⑥ 解题分析豌豆是闭花受粉植物，在自然状态下是纯种，而且具有一些稳定
southern杂交实验方法和步骤 一、主要仪器： 离心机 恒温水浴锅 Orbital shaker恒温摇床 Poner PAC300核酸电泳仪 VersaDoc凝胶成像系统 水平摇床 HL-2000Hybrilinker分子杂交仪 烘箱 二、主要材料 whatman3mm滤纸尼龙膜吸水纸玻璃板玻璃棒废旧胶片方形果盘平板 三、主要试剂 RNase A 真菌基因组提取试剂盒 DIG-High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I DNA Maker NaOH，NaCl，浓盐酸，Tris碱，柠檬酸钠，马来酸 四、试剂准备 变性液：0.5mol/L NaOH，1.5mol/L NaCl； Southern blot中和液：0.5mol/L Tris-HCl（pH=7.5），1.5mol/L NaCl； 20×SSC：3mol/L NaCl，0.3mol/L柠檬酸钠，浓盐酸调节pH至7.0； 2×SSC：取100mL20×SSC溶液，灭菌去离子水定容至1L； 2×SSC+0.01%SDS：取100mL20×SSC溶液，10mL10%SDS，灭菌去离子水定容至1L； 0.5×SSC0.01%SDS：取25mL20×SSC溶液，10mL10%SDS，灭菌去离子水定容至1L； 洗涤缓冲液：0.1M马来酸，0.15M NaCl，pH7.5，0.3%（v/v）Tween20； 马来酸缓冲液：0.1M马来酸，0.15M NaCl，用NaOH（固体）调节pH值至7.5； 检测缓冲液：0.1Tris-HCl，0.1M NaCl，pH9.5；
第1节孟德尔的豌豆杂交实验(一) 第1课时一对相对性状的杂交实验过程和 解释 课程标准要求核心素养对接学业质量水平 阐明有性生殖中基因的分离和自由组合使得子代的基因型和表型有多种可能，并可由此预测子代的遗传性状1.科学思维——根据豌豆的物种特点，归纳概 括出其作为遗传学实验材料的优点；并能运用 比较分析的方法，概括出玉米作为遗传学实验 材料的优点。 水平二 2.科学探究——理解豌豆人工异花传粉的一般 过程，运用比较分析的方法，概括出玉米等其 他作物人工异花传粉的一般过程。 水平二 3.生命观念——理解孟德尔对于分离现象的解 释，并能利用遗传图解，分析预测一对遗传因 子杂交实验的结果。 水平二 4.科学思维——熟练掌握一对遗传因子的6种 杂交组合及其结果，在试题所给的情景中灵活 应用。 水平三
———————————————自主梳理———————————————1.豌豆用作遗传学实验材料的优点 豌豆的自花传粉和玉米的同株异花传粉都称为自交 物种特点相应优点 豌豆花是两性花，在未开放时，进行自花传 粉(自交)，避免了外来花粉的干扰，所以自 然状态下一般都是纯种。 结果既可靠，又容易分析 具有易于区分的相对性状，且能稳定地遗传。便于进行杂交实验，容易观察和分析实验结果 豌豆的生活周期短且易栽培，一次产生的后 代数量多。 确保实验结果误差小 2.豌豆人工异花传粉(杂交)的一般步骤 3.相对性状 一种生物的同一种性状的不同表现类型，叫做相对性状。如豌豆的红花与白花、狗的直毛与卷毛、人的单眼皮与双眼皮等。
(1)玉米作为遗传学实验材料，有何优点？ 提示①单性花，雌雄同株，便于进行人工杂交；②具有多对易于区分的相对性状，且能稳定遗传；③易栽培，生长周期短，一次产生的后代数量多。 (2)利用玉米进行人工杂交时，是否还需要在开花前对母本去雄？为什么？ 提示不需要。因为玉米是单性花，即雌雄异花，只需在开花前对母本的雌花进行套袋，即可避免自交和外来花粉的干扰。 (3)利用玉米进行人工杂交时，主要的操作流程有哪些？ 提示开花前套袋→(开花时)采集花粉→人工授粉→套袋。 [典例1] (2019·1月浙江学考)下列各项中，互为相对性状的是() A.猫的长毛与鼠的黑毛 B.豌豆的紫花与白花 C.牛的有角与羊的有角 D.茉莉的白花与绿叶 解析相对性状是指一种生物的同一种性状的不同表现类型。A和C都不属于同一种生物，因此不属于相对性状；D属于同一种生物的不同性状，所以也不属于相对性状。 答案 B [对点练1]（多选）豌豆和玉米是遗传学研究的常用实验材料，下列有关它们共性的叙述，正确的是() A.豌豆和玉米均为两性植株，进行杂交实验都要去雄→套袋→授粉→套袋 B.豌豆和玉米均具有一些易于区分的相对性状，便于区分、观察 C.豌豆和玉米的生长周期短，繁殖速度快 D.豌豆和玉米产生的后代数量多，统计更准确 解析玉米是单性花植物，所以进行杂交实验时不需要去雄，A错误。 答案BCD
姓名:王堽学号20140322142 班级:2014级生物技术1班 实验五:数量性状实验 一、目得 1.以黑腹果蝇腹板上着生得小刚毛数为研究对象,了解数量性状遗传得规律与特 点 2.学习运用数理统计与数学分析得方法, 3.掌握实现遗传率得计算。 二、原理 遗传力,就是指某一特定性状在一定时间与某一群体中由于基因得作用所造成得表型变异百分率,即亲代传递其遗传特性得能力。它可用遗传率来表示,通常指遗传变异占总变异得百分数,其值介于0与1之间,为0时表明表型变异完全由环境影响所造成,为1时表明表型变异完全由遗传因素所决定。此次主要计算狭义遗传率: h2=V A /V P =V A /V A +V D +V E V A 指加性遗传方差,V D 指显性遗传方差,V E 指环境方差。 1、在生物中凡就是可数、可度、可衡等并可用数字形式描述得形状,称数量性状。数量性状大都由多基因控制。 2、数量性状得变异由可遗传得变异与不可遗传得变异组成,因为控制同一数量性状得基因数目很多,而每个基因得作用很小,并且很容易受环境影响。群体得表型变量通常呈连续分布。因此,对数量性状遗传得分析,要运用数理统计得方法来操作。 3、果蝇得第四腹板与第五腹板上得小刚毛数就就是典型得数量性状,不同得个体小刚毛数不同。本实验采用不同品系果蝇得杂交后代为研究材料,在恒温培养下,从F2代开始观察雌雄果蝇不同个体得小刚毛数(因为考虑到F1代还未完全出现性状分离,故从F2代开始计数),并且选择刚毛数最多与最少得♀、♂个体分别进行杂交,计算产生得F3代得小刚毛数,最后根据以下公式估算遗传率。 即H2= ΔG/ σpi 式中σp为标准差,i=ΔP/σp为标准选择差,ΔP为子代平均值―亲代平均值,ΔG为遗传获得量。 说明: 在多基因遗传中,遗传因素所起得作用称为遗传率,一般采用百分比来表示。遗传率就是一个统计概率,只能运用于群体而不能用于个体。遗传率有广义遗传率与狭义遗传率之分,广义遗传率就是指遗传方差在总得表现型中所占得比率;而狭义遗传率就是指计算基因得相加效应得方差VA在总得表型方差中所占百分率。记作 : 狭义遗传率＝相加得遗传方差/表型方差＝相加得遗传方差／(相加得遗传方差＋显性得遗传方差＋环境方差)。 但不管就是广义遗传率还就是狭义遗传率都涉及方差,方差就是反映观察娄同平均数之间得变异程度。观察娄同平均数之间得偏差越大,方差就越大,也就就是观察得离散度大,其分布范围广;方差小,则表示各个观察值之间比较接近。方差可用变数同平均数之间偏差得平均平方来表示。记作:S2,如写成公式则就是:S2=∑(X—ˉX)2/n 需要注意得就是,公式中得分母n,只限于平均数就是由理论假定得时候才适用。如果平均数就是从实际观察数计算出来得时候,则分母应该就是(n-1)。
原位杂交技术的操作详解及小贴士 原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。 多种探针标记检测系统 基于地高辛、生物素和荧光标记分子的标记和检测系统是常见的原位杂交检测方法。 荧光标记检测常为直接探针标记方法，如在dUTP/UTP/ddUTP上连接Fluorescein后进行核酸标记。由于标记在核酸上的荧光分子必须经受杂交和洗脱过程中的考验，以及荧光分子易于衰减，其检测灵敏度受到一定的影响。但对荧光分子的直接检测呈现的背景较低。 间接标记的方法中应用了报告分子标记的探针，报告分子通过亲和酶促的方法进行显色。常用的报告分子如地高辛，生物素。结合地高辛抗体或链霉亲和素上耦联的酶系统进行间接的底物反应检测。地高辛标记核酸的历史可追溯到1987年，由于地高辛是洋地黄的花和叶中特有的成分，检测时使用的地高辛抗体不会结合于其他的生物分子。这是相较于生物素标记系统的优势。地高辛抗体上可耦联碱性磷酸酶、过氧化酶，及荧光分子和胶体金等，根据不同的应用需求，呈现高信噪比的核酸检测结果。但需注意，由于引入了免疫检测反应，在放大检测灵敏度的同时，应注意样品内源性酶的灭活，以降低检测背景。 通过不同标记方法的联合应用，还可在同一样本中实现染色体不同区域或细
胞样本中不同RNA序列的多重检测。 原位杂交中探针的选择 DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也更好，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。DNA 探针、RNA探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶核酸序列，增加检测的灵敏度。 就DNA探针和RNA探针的比较，DNA探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能，也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体，从而影响其渗透能力。而RNA 探针的应用，将提高DNA-RNA杂交子的热稳定性。 Tips：RNA探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性，其检测特异性和灵敏度均优于DNA探针。常用的RNA探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过PCR扩增的方法，可以更方便地进行RNA探针的制备；RNA探针合成后，还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特异性。具体实验流程和注意事项可参考技术文章：A Method for High Quality Digoxigenin-Labeled RNA Probes for In Situ Hybridization 原位杂交检测步骤 原位杂交涉及的步骤：玻片的准备和样品固定，细胞或组织的预渗透处理，靶DNA变性（DNA原位杂交），探针制备，原位杂交过程，杂交后洗涤，探针（显色）检测。 1. 玻片的准备和样品固定 对于染色体涂片，1：1的乙醇/醚处理的载玻片已能符合要求。对于组织切片的原位杂交，为了在实验过程中不丢失组织样品，可使用多聚赖氨酸或铬矾
第1课时一对相对性状的杂交实验 ?用豌豆进行遗传实验时,下列操作错误的是 ( ) A.杂交时,必须在开花前除去母本的雄蕊 B.自交时,雌蕊和雄蕊都无须除去 C.杂交时,必须在开花前除去母本的雌蕊 D.人工授粉后,应套袋 ?下列各组性状中,属于相对性状的是( ) A.兔的长毛和短毛 B.玉米的黄粒与圆粒 C.鸡的长腿和毛腿 D.马的白毛和羊的黑毛 ?大豆的白花和紫花为一对相对性状。下列四组杂交实验中,能判定性状显隐性关系的是( ) ①紫花×紫花→紫花②紫花×紫花→301紫花+110白花③紫花×白花→紫花④紫花×白花→98紫花+107白花 A.①和② B.②和③ C.③和④ D.①和④ ?[2017·山西师大附中月考]用豌豆作为遗传实验材料是孟德尔获得成功的重要原因之一,因为豌豆( ) ①是自花传粉植物②是异花传粉植物③是闭花传粉植物④具有易于区分的相对性状 ⑤花大,易于去雄和人工授粉⑥是单性花,易于进行人工授粉 A.①③⑤ B.②④⑥ C.①③④⑤ D.②③④⑥ ?下列各种遗传现象中,不属于性状分离的是 ( ) A.F1的高茎豌豆自交,后代中既有高茎豌豆,又有矮茎豌豆 B.F1的短毛雌兔与短毛雄兔交配,后代中既有短毛兔,又有长毛兔 C.花斑色茉莉自交,后代中出现绿色、花斑色和白色三种茉莉 D.黑色长毛兔与白色短毛兔交配,后代出现一定比例的白色长毛兔
?下列对“一对相对性状的杂交实验”中性状分离现象的各项假设性解释错误的是( ) A.生物的性状是由细胞中的遗传因子决定的 B.体细胞中的遗传因子成对存在,互不融合 C.在配子中只含有每对遗传因子中的一个 D.生物的雌、雄配子数量相等,且随机结合 ?下列关于隐性性状的叙述,不正确的是 ( ) A.生物在正常情况下不能表现的性状 B.只有在隐性纯合时才能表现的性状 C.具有相对性状的纯合亲本杂交,在F1中不能表现的性状 D.由隐性遗传因子决定的性状 ?通过测交实验,不能推测被测个体的( ) A.产生配子的种类 B.各种配子的比例 C.遗传因子组成 D.产生配子的数量 ?请从下列实验中指出哪一项一定是显性遗传因子( ) A.具有一对相对性状的两个纯合子杂交,子一代只表现亲本之一的性状,控制没有表现出来的性状的遗传因子 B.具有一对相对性状的两个纯合子杂交,子一代只表现亲本之一的性状,控制表现出来的性状的遗传因子 C. 两纯合子交配,产生的子一代性状一致,该子一代细胞内控制其表现出来的性状的遗传因子 D. 两纯合子交配,产生的子一代性状一致,该子一代细胞内控制其全部性状的遗传因子 某一遗传因子组成为Aa的生物,在自然状态下,下列有关它所产生配子的叙述,不正确的是( ) A.雄配子数量通常为A∶a=1∶1 B.雌配子数量通常为A∶a=1∶1