病毒滴定方法
病毒滴定方法
1．样品
细胞培养中生长的病毒，或保存于储存液中的病毒，都可用于下列程序。
2. 原理
在进行病毒中和试验之前，所有的病毒必须预先于以定量，以便使中和试验中的病毒与其反应物（如待测病人的血清抗体）相互之间有一个合适的量。病毒滴定是先将病毒作一系列的10倍稀释，再将它们分别加到敏感细胞的培养物上，培养一定时间以后观察病毒生长迹象。滴度的终点是能使50%接种的细胞产生病毒增殖的病毒最高稀释度，称为半数细胞感染量，即TCID50。因此，滴定结果并不是病毒颗粒的准确数量，而是一种稀释度，病毒在这一稀释度时仍然存在并具有感染性。
3. 材料
3.1 仪器无菌易盖试管（12 × 75 mm），无菌吸管（1 mL，5 mL），斜架，35°C培养箱，显微镜，振荡器。
3.2 试剂细菌培养基
4. 方法
4.1 准备病毒悬液
如果病毒是从单层细胞培养得到的腺病毒或肠道病毒，可按以下冻融法制备病毒悬液。先将含病毒的细胞管连同其中的培养液一起放入
-70°C冷冻。当培养液完全冻结以后，取出置于自来水笼头下以流水融化。重复如此冻融一次。移入离心管，1500 × g离心10分钟，取上清液滴定病毒。
对于其它病毒（VZV除外），可以用病毒培养的细胞上清液滴定病毒。
4.2 取8支无菌试管，分别标上-1，-2，-3，-4，-5，-6，-7，-8，这些数字代表稀释度的指数。
4.3 每管中加入0.9 mL细胞培养基
4.4 用100 μL 移液枪取0.1 mL混匀的病毒悬液（4.1），加入到第1管（-1管）中，盖上盖以后振荡混匀。
4.5 换用一支新的枪头，从-1管中取0.1 mL移入-2管中，振荡混匀。如此继续稀释至-8管，注意每次移液都必须换用新的枪头，否则就会将枪头外面的病毒带入到新的一管，导致过高估计滴度的终点。
4.6 对于一个稀释度，准备2支敏感细胞，作好标记。
4.7 从不同稀释的病毒管中各取0.1 mL接种到相应标记的敏感细胞管中，每个稀释度种2管。每次均换新的枪头。
将细胞管送入培养箱，培养7天（有些生长慢的病毒需要更长时间）。其间经常观察
病毒生长迹象。
以每个稀释度的两管中至少有一管出现细胞病变的最高稀释度为滴定的终点。滴
定终点意味着含有一个TCID50的稀释度。在病毒鉴定过程中，一般
使用含有100个TCID50或1000个TCID50的稀释度。计算100 TCID50时，在TCID50的指数上加上2；计算1000 TCID50 时，在1 TCID50指数上加上3。例如，假如一个病毒悬液的滴定终点是10-6稀释度，即0.1 mL的10-6稀释的病毒悬液中含有1 TCID50，那么其100个TCID50的计算是:
6.0（1个TCID50的指数）+2（100的指数）=-4.0（待稀释的指数）就是说，10-4稀释的病毒悬液中，其0.1 mL含有100个TCID50。
细胞毒性检测方法总结！ 细胞毒性(cytotoxic)是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。 细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法： MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进行检测 一.LDH的方法：通过检测细胞培养上清中LDH的酶活性，来检测细胞毒性 其它酶方法：如检测上清中碱性磷酸酶、酸性磷酸酶的活性等 细胞增殖能力分析试剂 原理：正常细胞代谢旺盛，其线粒体内的琥珀酸脱氢酶，可将四唑盐类物质（如MTT、XTT、WST-1等）还原为紫色的结晶状的物质，沉积在细胞周围，然后通过酶标仪读取OD值，从而检测到细胞增值状态 优点：1）快速：96孔培养板形式，可进行高通量检测。2）灵活：可直接通过显微镜观察，也可通过酶标仪进行定量检测。 二.荧光素发光法细胞生存能力检测 原理：腺苷酸激酶（AK）存在于所有真核和原核细胞的胞浆中，AK具有激活ADP 生成ATP。当细胞受损后，细胞膜发生破损，AK会释放到培养上清中。该试剂盒利用荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光，通过化学发光仪可以定量进行检测。 特点： 1）简单、快速。2）板式检测，可进行高通量 。 三.LDH法细胞毒性检测 原理：LDH（乳酸脱氢酶）是一种稳定的蛋白质，存在于正常细胞的胞质中，一旦细胞膜受损，LDH即被释放到细胞外； LDH催化乳酸形成丙酮酸盐，和INT（四唑盐类）反应形成紫色的结晶物质，可通过500nm酶标仪进行检测。通过检测细胞培养上清中LDH的活性，可判断细胞受损的程度 特点：1）方法简单，安全，不使用放射性物质2）可进行高通量检测
流感病毒的快速检测方法 一、RT-PCR快速诊断方法 （一）生物安全要求 （二）病毒核酸提取 （三）RT-PCR （四）PCR 产物纯化 （五）流感病毒RT-PCR检测引物 二、免疫荧光方法检测流感病毒 （一）原理 （二）标本处理 （三）间接免疫荧光法 （四）结果判断 三、实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）快速诊断检测 （一）基本原理 （二）实验试剂 （三）实验步骤 四、快速诊断试剂盒 流感的快速检测方法，与传统的病毒分离鉴定相比具有快速、简便的特点。因此常用于流感暴发时早期病原学检测用。流感的快速诊断包括直接和间接免疫荧光法、ELISA、RT-PCR、Real-Time PCR快速诊断速方法、流感快速诊断试剂盒等。这里介绍RT-PCR、Real-Time PCR、免疫荧光快速诊断速诊断方法和几种流感快速诊断试剂盒优缺点。无论那种快速诊断都无法代替传统的病毒分离鉴定方法。 一、RT-PCR快速诊断方法 核酸检测是一种鉴定流感病毒基因组的有力方法，即使基因组含量很低或死病毒也可以检测到。本章将介绍检测流感病毒的聚合酶链式反应（PCR）。 流感病毒的基因组是负链RNA，在进行PCR扩增前必须合成与病毒RNA 互补的DNA，即为cDNA。逆转录酶（RT）就是用于合成cDNA的多聚酶，因此，扩增流感病毒基因组的过程称为RT-PCR。 RT-PCR需要一对型别特异引物，四种脱氧核苷酸（dNTPs），RNA模板，逆转录酶及Taq DNA 多聚酶；首先由逆转录酶将病毒的RNA逆转录合成cDNA，然后再进行聚合酶链反应经25～30个循环，使DNA产物达到倍增的效果。 （一）生物安全要求 生物安全级别与个人防护要求：生物安全二级实验室，防护要求与二级实验室的要求相同。并应遵守相应的生物安全规定。进行高致病性禽H5 RT-PCR快速检测时可以在生物安全二级实验室里进行，核酸提取在生物安全三级实验室的生物安全柜里完成。
可以采用倍比稀释来测定病毒的滴度。 第一个Ep管中加入10uL病毒原液，记为1E+1 uL ； 第二个Ep管中进行了第一次十倍稀释，所得病毒原液为第一个Ep中的1/10，记为1E+0 uL； 第三个Ep管中进行了第二次十倍稀释，所得病毒原液为第二个Ep中的1/10，记为1E-1 uL ； 依次类推… 第七个Ep管中进行了第六次十倍稀释，所得病毒原液为第六个Ep中的1/10，记为1E-5 uL ； 第八个Ep管中进行了第七次十倍稀释，所得病毒原液为第七个Ep中的1/10，记为1E-6 uL ； 换句话说：如果在加入1E-5 uL 病毒原液的孔中观察到3个带有荧光的细胞，说明该孔中至少有3个病毒颗粒感染了细胞，则该病毒的滴度等于带有荧光的细胞数除以病毒原液量，本例子中就是3/(1E-5)=3E+5，单位为TU/ uL ，也就等于3E+8 TU/mL。 稀释计数法 滴度单位：TU/mL，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。「TU」为「transducing units」的缩写，中文为「转导单位」，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。 第一天细胞准备 将生长状态良好的293 T 细胞消化计数后稀释至1×100 000/mL，加入96 孔板，100 μL/孔，为每个病毒准备10 个孔。放入37℃，5% 二氧化碳培养箱中培养。 第二天加病毒 在EP 管中做10 倍梯度稀释，连续10 个稀释度。稀释方法如下：每种病毒准备10 个1.5mL EP 管，每管加入90 μL 培养液，往第一个管中加入10 μL 病毒原液，混匀后，吸取10 μL 加入第二个管混匀。依此类推，做十个稀释度（10—0.00000001）。 吸取96 孔板中原有的培养基，加入含稀释好的病毒液。并做好标记。 第三天追加培养液 在每个孔再加入100 μL 完全培养液，利于细胞的生长。 第四天观察结果并计算滴度 在荧光显微镜下观察结果，并数出最后两个有荧光的荧光细胞克隆数。假设为X 和Y，则滴度（TU/mL）=（X+Y×10）×1000/2/X 孔的病毒液的含量（μL）。 定量PCR 法 病毒感染1 天前，取6 孔板接种HOS 细胞。每孔细胞为5×100 000 个。 接种细胞24 小时后，取两个孔的细胞用血球计数板计数，确定感染时细胞的实际数目，记为N。 弃去其他培养板中的培养基，更换为含有5 μg/mL polybrene 的新鲜培养基。将浓缩病毒用培养基稀释200 倍，也就是取1 μL 病毒加入到199 μL 的培养基中。在3 个培养孔中分别加入0.5 μL，5 μL 和50 μL 的稀释病毒。 感染开始后20 小时，除去培养上清，换为500 μL 含DNaseI 的新鲜培养基。在37℃消化15 分钟，这一步是要除去残余的质粒DNA。然后换为2 mL 正常的培养基，继续培养48 小时。 用0.5 mL 0.25% 胰酶-EDTA 溶液消化细胞，在37℃放置1 分钟。用培养基吹洗下，离心收集细胞。按照DNeasy 试剂盒的说明抽提基因组DNA 。每个样品管中加入200 μL 洗脱液洗下DNA 。用DNA 定量试剂盒定量（Bio-Rad）。基因组DNA 可以稳定保存在-20℃至少两个月。 准备PCR 所需的试剂和样品。为病毒序列检测引物配总管Ⅰ： Forward primer （100 pmol/mL）：0.1μL ×n Reverse primer （100 pmol/mL）：0.1μL ×n Probe （100 pmol/mL)：0.1μL ×n 水：19.7 μL ×n n = number of reactions。例如：总反应数为40，将1 mL 2×TaqMan Universal PCR Master Mix，4 μL forward
c．其它有关材料。 6．2 试验条件 6．2．1 环境温度：15℃-35℃ 6．2．2 环境湿度：≤85%RH 6．2．3 供电电源 a．直流电源：额定值±10% b．交流电源：220V+10% 220V-15% 6．2．4 周围环境应无干扰检测的因素 6．3 仪器外观、结构和功能检查 a．仪器外表涂层应色泽均匀，不得有明显的擦伤、露底、裂纹及起泡现象； b．紧固件、开关、旋钮等部件装配应可靠，使用方便，性能良好； c．仪器的结构应符合5.1要求； d．仪器的零点、量程、报警点三个电位器应调节方便，设置可靠； e．仪器通电检查其功能应符合5.2要求。 6．4 试验前的准备 6．4．1 试验前仪器稳定时间 按仪器生产厂家规定的稳定时间。 6．4．2 试验前调零 经过6.4.1条规定的稳定时间后，在零气条件下调节仪器的零点使指示值为零。 6．4．3 试验前仪器标定 经6.4.2条调零后，在通入标定气条件下调节仪器，使其指示值与标定气浓度值相对应。 6．5 试验要求 6．5．1 试验前按6.4条做好试验准备。 6．5．2 标准气选用该仪器检测气体与空气（或氮气）的混合气，按GB5274、GB5275配制，其浓度的不确定度在±3%以内。 6．5．3 试验时通气方法要严格模拟该仪器的使用情况 a．泵吸式仪器，标准气流量要恒定在额定值，不应因入口压力变化而使标准气流量波动。 b．扩散式仪器，标准气接触检测器的压力要求恒定在常压（大气压）或一个微小的压力（其值不得超过100Pa），通气流量要恒定。 6．6 试验项目及方法 6．6．1 示值误差试验 a．示值误差 指示值与标准气浓度值之差，用相对量表示，按下式计算： b．试验方法
第25章病毒感染的检查方法 与防治原则 第一节病毒的诊断 随着对病毒感染从生物学及分子生物学水平的研究进展，病毒的诊断技术已由传统方法扩展至新的快速诊断技术。病毒感染的快速诊断有利于对病毒感染者的治疗；例如对有些病毒（如疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒）感染已有较特异的抗病毒药物治疗。早期诊断及早期治疗对控制病毒感染十分重要。此外，从群体感染角度分析，确诊病毒感染的病原在监测病毒的流行病学（如新型流感病毒、肺出血型汉坦病毒的发现等）方面也有重要的现实意义。 标本的采集与送检用于分离病毒或检测病毒及其核酸的标本应采集病人急性期标本。根据不同病毒感染采取不同部位的标本（如鼻咽分泌物、脑脊液、粪便或血液）。由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。如欲检测抗体，早期单份血清可用于检测IgM抗体，而欲检测早期与恢复期的抗体效价的变化，则需采集早期与恢复期双份血清。血清抗体检测标本应保存于－20℃。 病毒的分离、培养与鉴定目前最常用的方法是细胞培养。在注明欲检测的病毒后，病毒分离培养的实验室将选择适当的原代培养细胞（敏感性高）及传代细胞系（便于在实验室保存）作病毒分离培养。接种标本后，细胞可出现病变或也可并不出现病变而需用血细胞吸附等方法检测是否有病毒增殖，并进一步还需用特殊的抗体鉴定病毒的种类，例如用特异荧光抗体染色或抗体中和试验等。当无病毒增殖时，可能标本中病毒含量较低，未被检出，则需要盲目传代3次后方可明确标本中是否存在病毒。这一分离与鉴定病毒的全过程有时可长达2～3个月，而且仅在有设备、实验条件及合格工作人员的实验室方可进行。虽然这种方法所需时间长、步骤多，但在确定病原上是“黄金标准”，即其准确性高而无误。如我国台湾省确定由肠道病毒71型引起多数患儿发生脑膜炎并致死的研究报道，就是由分离培养及鉴定病毒所确诊。如欲提高病毒感染细胞培养的敏感性，可将病毒接种于内有盖玻片的细胞培养瓶，经低温离心后，以增加病毒与细胞接触的机率。再将盖玻片进行培养，并用单克隆抗体染色，藉以通过检测病毒的早期抗原进行诊断。 在流感病毒的分离培养中，最敏感而特异的方法是鸡胚接种，并用血凝和血
病毒感染的实验诊断 病毒感染的实验诊断（一） ●考点 病毒的生物学性状 病毒的实验室检查方法 常见病毒的感染 [讲义编号NODE70103300270100000101：针对本讲义提问] 【内容讲解】 第一节概述 一类非细胞型微生物，个体极小，可通过细菌滤器，需用电子显微镜观察。 仅含一种核酸作为遗传物质，外被蛋白质衣壳或还有包膜。 病毒只能在活细胞内寄生，以复制的方式进行增殖。 在临床微生物感染中，近75%的传染病是由病毒引起的。 [讲义编号NODE70103300270100000102：针对本讲义提问] 一、病毒的基本性状 （一）形态结构 1.大小和形状： 大小：测量单位用纳米表示，一般在20-300nm之间。 形态大致可分为：球形或近似球形、杆状、弹形、砖形、蝌蚪形等。 [讲义编号NODE70103300270100000103：针对本讲义提问] 2.结构 [讲义编号NODE70103300270100000104：针对本讲义提问] （二）病毒的增殖 病毒必须依赖宿主细胞，
以特殊的自我复制方式进行增殖。 病毒的复制周期： 吸附、穿入、脱壳、生物合成、 组装与成熟、释放6个阶段。 [讲义编号NODE70103300270100000105：针对本讲义提问] 异常增殖： 顿挫感染：病毒进入细胞后的环境不利于它的复制，不能合成本身的成分或不能组装和释放有感染性的病毒颗粒。 缺陷病毒：由于病毒基因组不完整或基因位点改变而不能进行正常增殖的病毒。 干扰现象：当两种不同的病毒或两株性质不同的同种病毒，同时或先后感染同一细胞或机体时，可发生一种病毒抑制另一种 [讲义编号NODE70103300270100000106：针对本讲义提问] （三）噬菌体 以细菌、真菌等为宿主，能引起细菌等裂解的病毒。 噬菌体特异性识别细菌表面受体，可用于进行细菌的鉴定与分型。 噬菌体感染细菌后产生两种后果： 溶菌周期和溶源性周期。
病毒的分离方法 一般情况下分离病毒可以用传代细胞、原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种，只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒。 大致过程应该是这样的： 第一获取病毒分离样品，这个要求比较高，采集后如果不能立即操作则必须低温保存，并尽快送实验室操作。另外也可以冷冻保存，一般情况下病毒是不容易冻死的。当然某些特殊病毒除外，这需要查阅相关资料。 第二病毒分离操作，将获取病样研磨，并冻融至少一次，当然研磨过程中必须低温。同时研磨应充分，在研磨时可以加入生理盐水或PBS或者直接加细胞培养液，研磨完全后冻融一到三次，冻融的目的是为了让细胞完全破裂将细胞内的病毒释放到溶液中。然后低速离心，取上清用0.22微米的滤膜过滤，去过滤后的液体接种细胞。此时须注意，并不是所有病毒接种是都需要让细胞完全长满细胞瓶，一般是不能产生细胞病的病毒最好在细胞长到40%左右接种，而能产生细胞病变的则需要完全长满细胞瓶以后再接种病毒。接种过程中为避免污染可以加入双抗，或者其他抗生素。 第三接种后观察，某些能产生细胞病变的病毒很容易观察，直接在显微镜下就能看是否分离成功；如果病毒不产生细胞病变，则需要用其他的方法来检测，比如可用荧光抗体染色、PCR或者其他方法。不过大部分情况下第一代都不容易看到或者效果不好，这时你可以再传几代试试。如果再传四~五代以后都没有的话，那恭喜你，你失败了，或者你的方法有问题，或者根本就没有你要分离的病毒，或者在分离过程中你的病毒就已经死了。 用细胞分离病毒大概就是这个过程，当然某些病毒可能还没有相应的传代或者原代细胞，如果要分离就只能用易感动物了，操作都是相似的，无非都是采样、样品处理、接种、接种后检测观察、收集病毒而已。上面说到的方法都是从动物组织中分离，当然如果不是组织，比如你要从粪便或者尿液或取的拭子上分离，则可直接将其用生理盐水、PBS或细胞培养液稀释（要尽量摇匀如果是拭子的话应多挤压摇匀）然后离心取上清过滤接种细胞就可以了。
病毒性传染病快速检测方法的原理及发展趋势 人副流感病毒的病原学特征及流行病学规律 1、HPIV的治疗中（）只能在早期使用 B、利巴韦林、干扰素和蛋白酶抑制剂 2、下列有关于HPIV的说法中，错误的是（） E、HPIV已成为能够导致最沉重疾病负担及影响经济的病毒之一 3、HPIV的实验室检测手段有（） A、LLC-MK2（恒河猴肾细胞） 4、有关HPIV的病原学特征说法错误的的是（） B、病毒粒子呈多形性、无包膜，直径约125～250nm 5、下列关于几个亚型的HPIV的季节流行特征的说法中，错误的是（） C、HPIV2的几乎每年均可检出，发病高峰期为春夏季
人呼吸道合胞病毒的病原学特征及流行病学规律 1、下列选项中（）属于HRSV的实验室检测 B、Hep-2细胞单层 2、（）是目前临床上唯一用于治疗HRSV感染的药物 A、利巴韦林 3、下列关于HRSV的临床表现中错误的是（） B、大多数病儿可并发中耳炎、胸膜炎及心肌炎 4、HRSV的致病机包括（） E、以上都是 5、HRSV的病原学特征不包括（） B、HRSV病毒粒子呈球形和棒状两种形态，病毒颗粒约120~300 nm 人禽流感病毒及实验室检验技术
1、血凝（HA）试验原理是HA能与人或其它动物多种红细胞表面（）受体结合引起红细胞凝集 B、N－乙酰神经氨酸酶 2、中国流感/人禽流感监测信息系统至少有（）个国家级网络实验室 A、60 3、人禽流感病毒检测接种鸡胚，样本需要在温度33-35℃、湿度40-60%条件下孵育（） A、2-3天 4、以下哪项不属于人禽流感病毒核酸检测方法（） D、鸡胚接种 5、微量血抑（HI）试验应制备相应亚型的（）个血凝单位的抗原 B、8
狂犬病病毒实验室检测方法 摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。 关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法 狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎 100%。 据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。 1、狂犬病病毒形态特征 RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因 1 型，单股负链RNA病毒。电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。病毒双层脂质包膜的内侧主要是膜蛋白
有毒气体检测报警仪技术条件及检验方法来自: 安全管理网（https://www.doczj.com/doc/759013072.html,）详细出处：https://www.doczj.com/doc/759013072.html,/Standard/Trade/Chemical/200810/4840.shtml 1 主题内容与适用范围 本标准规定了有毒气体检测报警仪分类、技术要求、检验方法等。 本标准适用于有毒气体检测报警仪的质量评价、检验和选型。 2 引用标准 GB2421 电工电子产品基本环境试验规程总则 GB3836.1 爆炸性环境用防爆电气设备通用要求 GB3836.2 爆炸性环境用防爆电气设备隔爆型电气设备“d” GB3836.4 爆炸性环境用防爆电气设备本质安全型电路和电气设备“i” GB5274 气体分析校准用混合气体的制备称量法 GB5275 气体分析校准用混合气体的制备渗透法 GB12358 作业环境气体检测报警仪通用技术要求 3 术语 3．1 有毒气体检测报警仪（以下简称仪器） 用于监测空气中对人体有毒有害气体的仪器（包括检测仪、报警仪、检测报警仪）。 3．2 零气 不含被测气体或其它干扰气体的清洁空气或氮气。 3．3 标准混合气（简称标准气） 被测气体和零气的混合气，其浓度和不确定度均为已知。 3．4 标定用标准混合气（简称标定气） 用仪器全量程（50—70）%浓度的标准气做为标定气。 4 仪器分类 表1 仪器分类表 5 技术要求 5．1 结构要求 5．1．1 防爆型的仪器必须符合GB3836.1、GB3836.2和GB3836.4的规定要求并取得防爆检验合格证。 5．1．2 仪器要坚固耐用，便于操作、维修、标定和校验。 5．1．3 仪器与有害气体以及其它腐蚀性物质接触的部分应使用耐腐蚀性材料或经过耐腐蚀处理的材料制作。 5．2 功能要求 5．2．1 仪器是否处于工作状态，应有明确显示。 5．2．2 报警信号应有明显的报警作用。 5．2．3 设置多点监测报警的仪器，应保证即使某一点正在报警而其它点出现报警条件时，也应该进行报警，并且能够分别指示报警场所。 5．2．4 仪器有较高的抗干扰能力。 5．2．5 连续式仪器应有故障报警功能。 5．3 性能要求
计算机病毒处理常用办法 1、预防病毒的好习惯 1）建立良好的安全习惯。 对一些来历不明的邮件及附件不要打开，不要上一些不太了解的网站、不要执行从Internet 下载后未经杀毒处理的软件，不要共享有读写权限的文件夹或磁盘，机器间文件的拷贝要先进行病毒查杀； 2）经常升级安全补丁。 一部分病毒是通过系统安全漏洞进行传播的，像红色代码、尼姆达、SQL Slamer、冲击波、震荡波等病毒，我们应密切关注病毒、漏洞预警，即使修补系统漏洞补丁； 3）使用复杂的用户口令。 有许多病毒是通过猜测用户口令的方式攻击系统的。因此使用复杂的口令，会提高计算机的病毒防范能力；一般来讲，复杂的口令须具备：长度8位或8位以上，口令中必须含字母、数字而且字母分大小写； 4）迅速隔离受感染的计算机。 当计算机发现病毒或异常时应立刻断网，以防止计算机受到更多的感染，或者成为传播源； 5）了解一些病毒知识。 这样可以及时发现新病毒并采取相应措施，使自己的计算机免受病毒破坏。如果能了解一些注册表知识，就可以定期看一看注册表的自启动项是否有可疑键值；如果了解一些内存知识，就可以经常看看内存中是否有可疑程序。 6）安装专业的防毒软件进行全面监控。 在病毒日益增多的今天，应该使用防病毒软件进行病毒防范，在安装了防病毒软件之后，还要经常进行病毒库的升级，并打开实时监控（如文件双向监控）器进行监控。 2、怎样区别计算机病毒与故障 在清除计算机病毒的过程中，有些类似计算机病毒的现象纯属由计算机硬件或软件故障引起，同时有些病毒发作现象又与硬件或软件的故障现象相类似，如引导型病毒等。这给用户造成了了困惑，许多用户往往在用各种病毒软件查不出病毒时就去格式化硬盘，不仅影响了工作、减少了硬盘的寿命，而且还不能从根本上解决问题。所以，有必要正确区分计算机的病毒与故障，下面的经验供用户参考： 1）计算机病毒的现象 在一般情况下，计算机病毒总是依附某一系统软件或用户程序中进行繁殖和扩散，病毒发作时危及计算机的正常工作，破坏数据与程序，侵犯计算机资源。计算机在感染病毒后，往往有一定规律性地出现一些异常现象，比如： A. 屏幕显示异常。屏幕显示出不是由正常程序产生的画面或字符串, 出现显示混乱现象； B. 程序装载时间明显增长, 文件运行速度显著下降； C. 用户没有访问的设备出现异常工作信号； D. 磁盘出现莫名其妙的文件和坏块, 卷标发生变化； E. 系统自行引导； F. 丢失数据或程序, 文件字节数发生变化； G. 内存空间、磁盘空间异常减小； H. 异常死机或自动重启； I. 磁盘访问时间比平时明显增长； J. 系统引导时间明显增长。 2）与病毒现象类似的硬件故障 硬件的故障范围不太广泛，比较容易确认，但在处理计算机异常现象时易被忽略。排除硬件故障是解决问题的第一步。
中国感染与化疗杂志２０１５年１月２０日第１５卷第１期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，Ｊａｎ．２０１５，Ｖｏｌ．１５，Ｎｏ．１·论著· 甲氧西林耐药／敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测 王俊瑞１， 杜小莉２， 塔 拉１， 崔晶花２， 福 泉１， 韩艳秋 １ 摘要： 目的 分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（ＭＲＳＡ）和甲氧西林敏感金葡菌（ＭＳＳＡ）临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异，了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法 采用脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）方法和多位点序列分型（ＭＬＳＴ）方法对呼和浩特地区住院患者中分离的３０株ＭＲＳＡ和３０株ＭＳＳＡ进行分子分型，同步采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测菌株毒力基因。结果 ６０株金葡菌ＰＦＧＥ分型共分１９个型，ＭＳＳＡ菌株分布在Ｉ和Ｈ型等１６个基因型中，而ＭＲＳＡ株主要集中分布在Ｋ和Ｍ２个基因型中。２０株不同ＰＦＧＥ型菌株ＭＬＳＴ分型结果显示，ＭＲＳＡ株主要为ＳＴ－２３９型；ＭＳＳＡ株呈多样性分布特征，主要以ＳＴ－５型、ＳＴ－７型、ＳＴ－ １５型为主。毒力基因在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ中分布差异显著。ＭＳＳＡ毒力基因整体携带率明显高于ＭＲＳＡ（５３．９％对４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）。ＭＲＳＡ株ｓｅａ、ｃｎａ和ｃａｐ８基因携带率明显高于ＭＳＳＡ携带率（Ｐ＜０．０１），而ｓｅｃ、ｓｅｇ、ｓｅｉ、ｓｅｍ、ｓｅｎ、ｓｅｏ、ｆｎｂＢ、ｅｂｐＳ、ｃａｐ５基因携带率明显低于ＭＳＳＡ（Ｐ＜０．０５）。结论 呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点，ＭＲＳＡ主要以ＳＴ－２３９型为主。ＭＳＳＡ毒力基因携带率高，特定毒力因子在ＭＲＳＡ和ＭＳＳＡ株中呈现一定聚集分布特征，金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。 关键词： 金黄色葡萄球菌； 耐药性； 毒力基因； 分子分型 中图分类号：Ｒ３７８．１１ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００９－７７０８（２０１５）０１－００７０－ ０６ 基金项目： 国家自然科学基金（８１２６０２４４）。 作者单位： １．内蒙古医科大学附属医院检验科，呼和浩特０１００５０； ２． 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所。 作者简介： 王俊瑞（１９８１—），男，博士，主治医师，主要从事金黄色葡萄球菌感染致病机制研究。 通信作者：韩艳秋，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｙ ｈ１０１６＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅＳｔａｐｈｙ ｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓＷＡＮＧ Ｊｕｎｒｕｉ，ＤＵ Ｘｉａｏｌｉ，ＴＡ Ｌａ，ＣＵＩ Ｊｉｎｇｈｕａ，ＦＵ Ｑｕａｎ，ＨＡＮ Ｙａｎｑｉｕ． （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｏｈｈｏｔ ０１００５０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（ＭＲＳＡ）ａｎｄ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（ＭＳＳＡ）ｉｎ ｔｅｒｍｓ ｏｆ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍＨｏｈｈｏｔ，ａｎｄ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ．ＭｅｔｈｏｄｓＰｕｌｓｅｄ ｆｉｅｌｄ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ）ａｎｄ ｍｕｌｔｉ ｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ（ＭＬＳＴ）ｍｅｔｈｏｄｓ ｗｅｒｅ ｅｍｐｌｏｙｅｄ ｔｏ ｄｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｙｐｉｎｇ ｆｏｒ ３０ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ３０ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ Ｈｏｈｈｏｔ，Ｉｎｎｅｒ Ｍｏｎｇｏｌｉａ．ＰＣＲ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄｔｏ ｐｒｏｆｉｌｅ ｔｈｅ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ａｍｏｎｇ ｔｈｅｓｅ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＰＦＧＥ ｔｙｐｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ６０ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ ｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅ ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ ｉｎｔｏ １９ ｍａｊｏｒ ｔｙｐｅｓ．ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｂｅｌｏｎｇｅｄ ｔｏ １６ ｔｙｐｅｓ，ｍａｉｎｌｙ ｔｙｐｅｓ Ｉ ａｎｄ Ｈ．ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｍａｉｎｌｙ ｂｅｌｏｎｇｅｄｔｏ ｔｙｐｅｓ ｏｆ Ｋ ａｎｄ Ｍ．Ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ２０ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ＰＦＧＥ ｔｙｐｅｓ，ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｍａｉｎｌｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ａｓ ＳＴ－２３９ ｔｙｐｅ．ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｓｈｏｗｅｄ ｄｉｖｅｒｓｅ ＳＴｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐ ｒｅｄｏｍｉｎａｎｔｔｙｐｅｓ ｗｅｒｅ ＳＴ－５，ＳＴ－７ ａｎｄ ＳＴ－１５．Ｔｈｅ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｈｅ ｏｖｅｒａｌｌ ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ＭＲＳＡｓｔｒａｉｎｓ（５３．９％ｖｅｒｓｕｓ ４０．０％，χ２ ＝３ ２．７，Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｓｅａ，ｃｎａ ａｎｄ ｃａｐ８ ｇｅｎｅｓ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇ ｈｅｒ ｉｎ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｔｈａｎ ｉｎ ＭＳＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ（Ｐ＜０．０１），０ ７
第12章病毒感染的检查方法与防治原则 学习要点 一、病毒感染的检查方法 1.检材的采集与送检 病毒分离标本的采集原则是：①早期取材；②注意无菌操作；③正确处理含菌标本；④低温保存与尽快送检。 2.病毒的分离培养与鉴定 （1）动物接种 （2）鸡胚接种 （3）组织培养：原代细胞；二倍体细胞；传代细胞系 （4）病毒增殖的指标：①细胞的变化；②红细胞吸附；③干扰现象；④培养基pH改变。 3.病毒感染的血清学诊断 (1)中和试验； (2)补体结合试验； (3)血凝抑制试验 4.病毒感染的快速诊断 (1)形态学检查法：光学显微镜检查法；电镜和免疫电镜检查 (2)免疫学检查法：检查病毒抗原；检查病毒特异性IgM (3)检测病毒核酸：核酸杂交技术；PCR技术 二、病毒感染的防治原则 1.病毒感染的预防 (1)人工自动免疫用于人工自动免疫的生物制品有：①灭活疫苗；②减毒 活疫苗；③基因工程疫苗；还有亚单位疫苗、多肽疫苗、核酸疫苗等。 (2)人工被动免疫人工被动免疫常用的制剂有：动物免疫血清、人血清丙 种球蛋白、转移因子等。 2.抗病毒治疗 (1)抑制病毒穿入与脱壳金刚烷胺
(2)抑制病毒生物合成核苷类化合物（疱疹净、阿昔洛韦、阿糖腺苷、病毒唑、 叠氮脱氧胸苷、拉米呋啶等）；病毒蛋白酶的抑制物（沙喹纳伟、英迪纳伟等）；IFN及其诱生剂等。 (3)免疫制剂特异性免疫球蛋白、治疗性疫苗等。 (4)抗病毒中草药 复习题 一、名词解释 1.二倍体细胞 2.细胞病变效应 3.红细胞吸附试验 4.血凝抑制试验 5.减毒活疫苗 6.灭活疫苗 二、选择题 A1型题 1.从患者体内分离病毒，采集标本时的错误 ．．做法是： A.在发病早期采集 B.选取正确部位取材 C.标本冷藏 D.标本尽快送实验室 E.疾病恢复期取材 2.细胞病变效应不．包括： A.细胞圆缩、脱落 B.细胞融合 C.形成包涵体 D.干扰现象 E.细胞裂解 3.病毒凝集红细胞(血凝试验)的机制是： A.红细胞表面抗原和血凝素抗体结合 B.红细胞表面受体与病毒表面血凝素结合 C.红细胞表面病毒抗原与相应抗体结合 D.病毒与结合在红细胞表面的抗体结合 E.红细胞上的血凝素与病毒结合 4.预防病毒病最有效的方法是使用： A.抗毒素 B.抗病毒化学疗剂 C.中草药 D.疫苗 E.抗菌药物 5.以下描述正确的是 A.人工被动免疫接种的物质为抗原 B.人工被动免疫不能用于治疗
·１９０·星堕墅墅盘查！！！！生篁！！鲞釜ｉ塑！里！』曼！！丛！！至！坠：！！塑！！！！：！！：堕！：！ 流感病毒的实验室检测方法及进展 李月越陈杭薇李兵 【摘要】流行性感冒（流感）是由流感病毒引起的急性呼吸道传染病，其在人群中蔓延快，且具有高发病率及致死率的特点。流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，其确诊还有赖于实验室检查。流感病毒的检测技术大致分为４个方面，即病毒分离培养、血清学诊断、现代免疫学诊断及分子生物学诊断。现分别从以上几个方面对流感病毒实验室检测方法及进展进行综述。 【关键词】流感病毒；检测方法 Ｌａｂ帅ｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓ狮ｄｐ哪哪艄０ｆｄ咖ｔｉＩｌｇｉＩＩｆｌｕ眦ａｖｉｎ麟Ｕｙ访ｙ獬，ＣＨＥＮ协咒ｇ－讹ｉ，ＵＢｉ恕ｇ．＆加仃批，ｚｆｏ，尺Ｐｓ加ｍ￡ｏ删Ｍ毒ｄ觑九８，＆巧ｉ挖ｇＣＤｍ凇挖ｄ＆咒８ｍ￡Ｈｏｓｐｉ￡ｎＺｏ，ＰＬＡ，＆巧锄ｇ１００７００，吼ｉ御 （乃ｒｒ已ｓ户Ｄ行矗ｉ７２９口“腩ｏｒ：（ＨＥ小，Ｈ口ｎｇ一议，Ｐｉ 【ＡｂｓｔＩ’ａｃｔ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓｃａｕｓｅａｎａｃｕｔｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｔｈａｔｓｐｒｅａｄｓｅｐｉｄｅｍｉｃａｌｌｙｉｎｔｈｅｈｕｍａｎｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＣｈａｒａｃｔｅｒｏｆＩｎｆｌｕｅｎｚａｉｓｈｉｇｈｍｏｒｂｉｄｉｔｙａｎｄｍｏｒｔａｌｉｔｙ．ＤｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｉｎｆｌｕｅｎｚａｄｅｐｅｎｄｓｏｎｎｏｔｏｎｌｙｃｌｉｎｉｃｉａｌｓｙｍｐｔｏｍｓａｎｄｓｉｎｇｓｂｕｔａｌｓｏｌａｂｏｒａｔｏｒｉａＩｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ．Ｖｉｒａｌｃｕｌｔｕｒｅａｎｄｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｓｅｒｏｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ｉｍｍｕｍｏｌｏ—ｇｉｃａｌａｓｓａｙａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏＩｏｇｉｃａｌｄｉａｇｎｏｓｉｓａｒｅｆｏｕｒｍｅｔｈｏｄｓｔｈａｔｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｅｄｆｏｒｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉａｌｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｅｓｏｆｄｅｔｅｃｔｉｎｇｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓａｒｅｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｔｈｅｆ０１ｌｏｗｉｎｇｔｅｘｔ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓｅｓ；Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ 流行性感冒简称流感，是由流感病毒引起的急 性呼吸道传染病，传染性强，蔓延快，其抗原易变异， 对人群尤其是儿童、老年人及机体免疫力低下的人 群有较高的发病率及致死率，危害很大。流感病毒 分为甲、乙、丙三型，其中变异大的、危害重的主要是 甲型和乙型流感病毒，尤以甲型为主，常可引起较大 范围的流行［１］。 流感的诊断不仅要根据临床症状和体征，还需 要实验室检测来证实。病毒诊断技术大致分为４个 方面，即病毒分离、血清学诊断、现代免疫学诊断及 分子生物学诊断瞳］。现分别进行介绍。 ｌ病毒分离培养 病毒分离培养是诊断流感最可靠的方法之一。 因流感病毒能够在鸡胚中良好生长，所以早期多用 鸡胚分离流感病毒，一般用９日龄至１１日龄的鸡胚 通过羊膜腔或尿囊腔接种分离病毒，接种后２４～９６ｈ 收集鸡胚尿囊液，２４ｈ内死亡的鸡胚弃掉，用鸡的 红细胞检测尿囊液或细胞培养液的血凝活性来证实 病毒的增殖和存在，如初次分离不到病毒，可盲传２ 代再进行检测；但近年来，随着分子生物学技术的发 展，发现通过鸡胚所分离到的流感病毒，其抗原性与 原始标本有所不同，而通过马一达犬１肾细胞（ＭＤＣＫ） 作者单位；１００７００北京军区总院呼吸内科 通讯作者：陈杭薇．综述． 分离病毒的抗原性与原始标本相似，另外由于 ＭＤｃＫ细胞对“ｏ”相毒株的敏感性比鸡胚高很多， 故ＭＤＣＫ细胞已成为流感病毒分离不可缺少的一 种宿主系统，现亦得到较为广泛的应用；ＭＤＣＫ分 离的病毒在很多国家尚未批准用于疫苗生产，因此 病毒分离现同时采用鸡胚及ＭＤＣＫ细胞两套系 统口］。但无论是以上哪种方法对标本中病毒采集、 运输及保存条件要求均较高，病毒样品如能在４８ｈ 分离，可在４℃保存，如果样品要存放较长时间必须 低温冻存（一７０℃）；且要求标本中的病毒含量高， 必须达到鸡胚或ＭＤＣＫ培养法所需要的病毒含量， 分离培养较为复杂、耗时且不稳定，也不能在普通实 验室进行，要确诊需要较长时间，故对流感早期诊断 及临床指导意义不大。 Ｓｈｉｈ等Ｈ３将一种新的实验室培养技术——离 心培养技术（ｓｈｅｌｌｖｉａｌｃｕｌｔｕｒｅ，ＳＶＣ）应用于流感病 毒的培养，其与传统培养方法没有本质的区别，不同 点为在标本接种后进行长时间的低速离心，使标本 中含病毒的颗粒在外力作用下被压挤吸附于培养细 胞，从而大大缩短了培养时间并提高了敏感性。在 国内倪安平等口］亦采用ＳＶＣ技术快速诊断流感病 毒，结果显示该技术能在２４ｈ内获得流感病毒培养 结果，可以快速确诊流感患者。 郭元吉等［６３建立了一种流感快速诊断方法，具 体为：采集标本经成片ＭＤＣＫ细胞扩增，使细胞表万方数据
医用输液、输血、注射器具细菌内毒素检验方法 中华人民共和国国家标准 GB/T14233.2—93 1993-03-16发布 一、定义及适用范围:本法系列用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应 的机理，以判断供试品中内毒素限量是否符合规定的一种方法。 用以代替家兔法对供试品进行热原初试。本法仅适用于一次性使用输液器、输血器。其他产品可参照使用。 二、主要设备:超净工作台、电热干燥箱、恒温水浴。 三、试剂 1、细菌内毒素国家标准品：用于仲裁鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。 2、细菌内毒素工作标准品：用于标定鲎试剂灵敏度和试验中阳性对照。 3、鲎试剂：灵敏度为0.25EU/ml，规格为0.5ml。 4、无热原水：内毒素含量小于0.05EU/ml。 四、试验前准备 1、器具除热原:与试验液接触的所有器具均应除热原。玻璃器具置电热干燥箱内250℃干烤至少60min；塑料器具置30%双氧水中浸泡 4h，再用无热原水冲洗后于60℃烘干备用。 2、鲎试剂灵敏度测定 （1）试验前应核对使用批号鲎试剂的灵敏度，应符合规定。 （2）灵敏度测定：根据标示的灵敏度范围，将细菌内毒素工作 标准品用无热原水以1→2等比稀释，选择能出现阳性和阴性结果的4个连续稀释液。取同一批号鲎试剂若干支，分别按标示量
加入无热原水溶解为鲎试剂溶解液。取10mm×75mm试管若干 支，分别加入0.1ml鲎试剂溶解液，加入内毒素稀释液0.1ml，每一稀释液平行操作4管，轻轻振动试管混匀内容物，封闭管 口，置37±1℃恒温水浴中保温60±2min观察结果。最高浓度的4管应均为阳性，最低浓度的4管应为阴性。 五、试验方法 1、供试品数量 :同一批号至少3个单位供试品。 2、浸提介质:无热原水。 3、供试液制备:在无菌条件下，每套输液器内腔注入10ml，输血器内腔注入15ml浸提介质，反复荡洗5次后两端密封，置37±1℃恒温箱中保温2h，取出后将供试液汇集至一无热原具塞玻璃容器内。供试液贮存应不超过2h。 4、试验步骤:将鲎试剂和细菌内毒素工作标准品分别按标示量加入无热原水溶解。细菌内毒素工作标准品逐次稀释至0.5Eu/ml，供作阳性对热。取10mm×75mm试管6支，其中供试品管2支各加入0.1ml 内毒素工作标准品稀释液，阴性对照管2支各加入0.1ml无热原水，阳性对照管2支各加入0.1ml内毒素工作标准品稀释液，再逐一加入0.1ml鲎试剂溶解液。轻轻混匀试管内容物，封闭管口，垂直放入37±1℃水浴中保温60±2min，轻轻取出，观察结果。 5、结果判定 1)、将试管缓慢倒转180°，管内容物呈坚实凝胶者为阳性，记录为（+），不呈凝胶状或虽呈凝胶状但不能保持完整者为阴性，记录为（-）。
想想Facebook、LinkedIn、Youtube、Dropbox和Skype都有什么共同点？除了都非常成功之外，或许它们共同的特点就是能在快速增长过程中运用很有效的病毒式营销了。 至于这些公司是怎么做到的，来看看下面这八种方式吧。 1、天生的传播特性（Inherent virality） 这是最原始的一种病毒式传播，可以称得上是口碑效应。简单说就是如果你的产品足够好，自然会将你的用户转变为“传播者”。虽然刚开始这种传播效果并不明显，但经过一段时间后，就会出现爆炸性的增长，Skype就是最典型的例子。当然这种方式效果最好，但也较难实现。 2、协同效应传播（Collaboration virality） 这种传播是指虽然一个产品对单独一个用户来说是有价值的，但如果他推荐使用该产品的用户越多，这个产品对他来说产生的价值就会越大，那么使用者就会形成病毒式传播。比如Dropbox，你虽然可以用Dropbox存储文件，但如果可以和其他人共享文件，Dropbox就会给你带来更大的价值。 3、沟通效应传播（Communication virality） 这种情况一般会在交流工具中出现。通过某种交流工具（比如邮件），某个名称经常会在交流过程中出现，久而久之人们就会记住这个品牌。比如使用某种工具定期、群发、设定对象的发送邮件或微博时，人们收到的内容最后经常会有“由xx工具发送”类似的标注，这样人们就会不经意的记住这个产品。这也是一种病毒式传播，就像你经常会在别人的微博下看到“来自FaWave”、“来自36氪”一样。 4、激励效应传播（Incentivized virality）
这个其实很简单。比如你在一个网站上邀请了其他人加入进来的时候，系统会给你相应的奖励，就像Dropbox会给你增加空间、某些游戏会给你发放金币一样。这种策略虽然很简单，但屡试不爽，只要你不搞得原用户对此感到恶心就行。 5、可植入性传播（Embeddable virality） 这种病毒式营销非常适合内容性网站，比如以文章、视频、资料等为主要内容的网站。在这些内容里面，原创者会把原创信息植入进去，这样无论这些内容怎样传播，原创信息都会被用户看到。这看起来像是“软文”，但其实并不是软文。最简单的例子就是现在已经泛滥的“视频广告”，前面来一段感天动地、制作精良的短篇，最后来了个毫不相干的品牌名称（当然，有一些广告还是有关联的）。 6、签名式传播（Signature virality） 顾名思义，就是在传播本体最后加上一个签名。最常见的比如你做在线调查，最后生成调查报告时，通常会有一句“来自xxx调查网站”。或者当你看到信息图的时候，最后都会有一个“本信息图汉化来自36氪”的小图标。 7、社交化传播（Social virality） 这种传播依附现有的社交网络，当用户使用该产品的时候，社交网络会将相关信息显性或隐性地传播给其他用户。比如美国最大的社交网络游戏商Zynga就是通过这种方式，当你在玩某一游戏时，其他好友就会收到你正在玩这个游戏的信息，这样吸引新用户的速度就会变得更快。所以，这就是为什么很多网站会通过Facebook、微博等社交网络来授权注册账户。 8、话题性传播（Pure word of mouth virality） 注意，这不是单纯的口碑效应。当然，这里面有一些口碑效应的因素，但不全是。话题性传播是指人们愿意讨论这款产品或和这款产品相关的事件。比如你的产品确实很酷，或者出现了一个很值得人们讨论的话题，人们在讨论中便会记住你的产品或相关信息。但这种效果很难量化，因为如果话题只是该产品创始人的八卦信息的话，很难知道有多少人会因为这个八卦信息而使用你的产品。最后要注意的是，话题有好有坏。如果你制造的是反面话题的话，那就不是病毒式营销了，而是公关危机了。 如何量化病毒性传播 说完了上面这八种病毒式传播的方式，那我们该如何量化它呢？最懒最聪明的建议就是——不要去量化它。