德国sykamS433D/S433（赛卡姆）氨基酸分析仪
仪器主要特点：
1、经典的茚三酮柱后衍生法、符合国家标准
2、带制冷功能的溶液存放单元，全部试剂均有惰性气体保护，试剂瓶带独立阀门
3、全自动进样器带电子制冷，进样体积可编程，无样品损失
4、四元梯度泵内置在线真空脱气，优化后的洗涤梯度只需2-3种缓冲液
5、检测系统包含可精确控温的柱温箱及衍生系统，双波长同时检测
6、中英文、图形化软件极易操作，具有日志记录及权限管理，符合GLP/21CFR规范
7、优异的定性定量重复性，超长的分离柱使用寿命
仪器技术参数：
1、分析柱
●电子恒温（制热或制冷）
●柱温 可梯度编程 20℃～99℃
●温度准确度 0.1℃
●柱 PEEK，4.6 x 150mm, 7um，10%交联（最适于氨基酸分析的强度）
●安全保护 过热保护
2、自动进样器
●进样模式 100μl体积可变环进样
●进样体积 可变； 1μl～5000μl，0.1μl增量
●样品清洗 最高5000μl清洗液，1μl增量
●记忆效应 低于0.01%（自动清洗进样回路）
●重现性 10μl 变体积进样时变异低于1%
●进样/样品瓶 每个系列1～9次进样，可设不同体积
●样品盘 两个盘，每盘60个样品位，1.5ml样品瓶
●温度控制 +5℃～70℃（电子恒温）
3、溶液存放单元，带电子恒温装置
●可存放所有缓冲液、再生液及茚三酮试剂
●温度 4℃
●内置式冷却器，可进行温度控制
4、四元梯度泵（输液单元）
●活塞 双活塞短行程技术，自动清洗
●流速 0.000ml/min～9.999ml/min
●流速稳定性 RSD<0.1%
●最大压力 40MPa (400bar，6000psi)
●操作方式 恒流，恒压
●梯度混合室 100μl～500μl
●材料 PEEK
5、检测系统
●检测波长 570nm, 440nm（可同时检测）
●荧光检测（选配）
●流动池体积 8μl
●光程 10mm
●试剂泵流速 0.000 ml/min～2ml/min
●反应器温度范围 室温～180℃
●标准反应器 1.5mm x 0.3mm x15m
●安全装置 过热保护
●温度准确度 0.1℃
6、系统指标
●缓冲液种类: 2种（水解蛋白）或3种（生理体液）
●定性（保留时间）重复性RSD: 全部氨基酸RSD<0.5% (Arg精氨酸 RSD<0.1%)
●定量（峰面积）重复性RSD: 全部氨基酸RSD<1% (Gly甘氨酸His组氨酸 RSD<0.5%)
●分离度： 全部大于1.2, 平均大于3.3
●检测极限: 8pmol（Asp天冬氨酸 3pmol, 信噪比S/N=2）
●分析时间： 蛋白水解30分钟－50分钟
●生理体液90分钟－180分钟
S433D简要操作步骤
1．开机，各模块按F1进入 “STATUS”界面，检查液面及气压；
2．运行ClarityAmino，进入仪器窗口。
3．进入 (设置项目目录)窗口新建一个文件夹（一般用日期命名）。
4．点编辑并保存Sequence，第一步导入自动再生平衡程序；第二步开始编辑正常的样品序列，最后一步导入自动冲洗反应器程序；设置序列选项；
5．检查序列并保存，点击“”图标，开始分析。
6．得到图谱后，积分标样文件，在校正窗口编辑校正文件（cal文件），选择需要的峰，输入浓度，并保存。
7．在图谱窗口，对需要计算的样品图谱进行积分，将积分合适的图谱保存。
输入样品信息，程序将自动根据选定校正文件进行计算。
8．编辑或选择打印报告文件，预览，输出报告
9．关机前，确保S4300模块右下角显示的时间（即最后的冲洗时间）在100MIN 以上。 建议S7130不要关机，除非闲置2个月以上。
日立L-8900全自动氨基酸分析仪标准操作规程 一. 目的 为规范日立L-8900全自动氨基酸分析仪的基本操作、维护保养、异常处理程序，防止人为操作失误，确保氨基酸分析仪正常运转，特制定本程序。 二.适用范围 本程序适用于日立L-8900全自动氨基酸分析仪。 三．责任 1. 本程序的实施者为氨基酸分析仪操作者，各实验室负责人对本程序的实施情况进行监 督。 2. 日常运行及维护、定期维护、定期点检及保养由氨基酸分析仪操作者负责。 四. 内容 1．联机 （1）打开电脑。 （2）打开L-8900主机电源。 （3）双击桌面的图标，进入1-1画面，双击图标，进入程序。 1-1 （4）在菜单栏中依次点击和，出现1-2画面，单击
联机。大约两分钟，初始化完毕。中Uninitialized 变成Idle，图1-2变成了图1-3，各个组件可以进行控制了。初始化完毕后，分离柱的温度逐渐上升，分离柱的温度会升到50℃。如果打开反应柱的柱温控制，则温度大约20分钟升到135℃。 1-2
1-3 2、手动各组件控制操作 （1）泵1和泵2 点击，出现2-1的画面。设置泵1，流量0.1ml/分钟，B6 100%。点击打开泵1。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。
2-1 点击，出现2-2的画面，设置泵2，流量0.1ml/分钟，R3 100%。点击打开泵2。泵打开后，泵的背景颜色由灰色变为黄色。 2-2 （2）自动进样器 点击，出现2-3的画面，设置Sampler Wash不少于3次。
2-3 （3）分离柱柱温箱 点击，出现2-4画面，设置柱温50℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。 2-4 （4）反应柱柱温箱 点击，出现2-5画面，设置柱温135℃，设置ON，打开柱温箱。柱温箱打开后，背景颜色由灰色变为黄色。 2-5
蛋白酶能将蛋白质水解成氨基酸吗 生物100（bio1297）——很用心的生物学，有态度的自媒体，关注中、高考和教学、科普的平台。点击标题下蓝字“生物100”免费关注，我们将为您提供有价值的生物学、有意思的生物学。蛋白酶是蛋白水解酶的简称，蛋白酶主要包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶等。各种蛋白酶都水解肽键，但它们的专一性各不相同。胃蛋白酶催化具有苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸以及亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺等肽键的断裂，使大分子的蛋白质变为较小分子的多肽。胰蛋白酶水解碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸）的残基与其他氨基酸的氨基形成的肽键，产物是以碱性氨基酸作为羧基末端的多肽和少量碱性氨基酸。糜蛋白酶水解芳香族氨基酸（苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等）的残基与其他氨基酸的氨基形成的肽键，产物是以芳香族氨基酸作为羧基末端的多肽和少量芳香族氨基酸。弹性蛋白酶水解缬氨酸、亮氨酸、丝氨酸、丙氨酸等各种脂肪族氨基酸的羧基与其他氨基酸的氨基形成的肽键，产物是以脂肪族氨基酸作为羧基末端的多肽和少量脂肪族氨基酸。经过胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶作用后的蛋白质，已经变成短链的肽和部分游离氨基酸。短肽又经羧肽酶和氨肽酶的作用，分别从肽段的C-端和N-端水解下氨基酸残基。羧肽酶有A、B两种，分
别称为羧肽酶A和羧肽酶B，前者主要水解由各种中性氨基酸为羧基末端构成的肽键，产物是寡肽和中性氨基酸。后者主要水解由赖氨酸、精氨酸等碱性氨基酸为羧基末端构成的肽键，产物是寡肽和碱性氨基酸。氨肽酶则水解氨基末端的肽键。寡肽再通过寡肽酶（氨基肽酶和二肽酶）水解成氨基酸。蛋白质经过上述各种酶的协同作用，最后全部转变为游离的氨基酸。综上所述，蛋白酶是能将蛋白质水解成氨基酸的。所以人教版选修一教材P：6：“蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸”，以及P：46“碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子蛋白质水解成可溶性的氨基酸和小分子的肽”的说法并无错误。
食物中氨基酸的测定方法 测定食物中的胱氨酸使用过甲酸氧化-氨基酸自动分析仪法，测定色氨酸使用荧光分光光度法，测定其它氨基酸使用氨基酸自动分析仪法。 一、氨基酸自动分析仪法 1.原理 食物蛋白质经盐酸水解成为游离氨基酸，经氨基酸分析仪的离子交换柱分离后，与茚三酮溶液产生颜色反应，再通过分光光度计比色测定氨基酸含量。一份水解液可同时测定天冬，苏，丝，谷，脯，甘，丙，缬，蛋，异亮，亮，酪，苯丙，组，赖和精氨酸等16种氨基酸，其最低检出限为10pmol。 2.适用范围 GB/T14965-1994食物中氨基酸的测定方法。 本法适用于食物中的16种氨基酸的测定。其最低检出限为10pmol。本方法不适用于蛋白质含量低的水果、蔬菜、饮料和淀粉类食物的测定 3.仪器和设备 3.1真空泵 3.2恒温干燥箱 3.3水解管：耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管，体积20～30ml。用去离子水冲洗干净并烘干。 3.4真空干燥器（温度可调节） 3.5氨基酸自动分析仪。 4.试剂 全部试剂除注明外均为分析纯，实验用水为去离子水。 4.1浓盐酸：优级纯 4.26mol/L盐酸：浓盐酸与水1：1混合而成。 4.3苯酚：需重蒸馏。 4.4混合氨基酸标准液（仪器制造公司出售）：0.0025mol/L 4.5缓冲液： 4.5.1 pH2.2的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠（Na3C6H5O7.2H2O）和16.5ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至2.2
4.5.2 pH3.3的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和12ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节至pH至3.3。 4.5.3 pH4.0的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和9ml浓盐酸加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至4.0。 4.5.4 pH6.4的柠檬酸钠缓冲液：称取19.6g柠檬酸钠和46.8g氯化钠（优级纯）加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠溶液调节pH至6.4。 4.6茚三酮溶液 4.6.1 pH 5.2的乙酸锂溶液：称取氢氧化锂（LiOH.H2O）168g，加入冰乙酸（优级纯）279ml，加水稀释到1000ml，用浓盐酸或50%的氢氧化钠调节pH至5.2。 4.6.2茚三酮溶液：取150ml二甲基亚砜（C2H6OS）和乙酸锂溶液（2.6.1）50ml加入4g 水合茚三酮（C9H4O3.H2O）和0.12g还原茚三酮（C18H10O6.2H2O）搅拌至完全溶解。 4.7高纯氮气：纯度99.99%。 4.8 冷冻剂：市售食盐与冰按1：3混合 5.操作步骤 5.1样品处理：样品采集后用匀浆机打成匀浆（或者将样品尽量粉碎）于低温冰箱中冷冻保存，分析用时将其解冻后使用。 5.2称样：准确称取一定量样品，精确到0.0001g。均匀性好的样品如奶粉等，使样品蛋白质含量在10～20mg范围内；均匀性差的样品如鲜肉等，为减少误差可适当增大称样量，测定前再稀释。将称好的样品防于水解管中。 5.3水解：在水解管内加6mol/L盐酸10～15ml（视样品蛋白质含量而定），含水量高的样品（如牛奶）可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚3～4滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻3～5min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空（接近0psi），然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复三次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将已封口的水解管放在110±1℃的恒温干燥箱内，水解22h后，取出冷却。 打开水解管，将水解液过滤后，用去离子水多次冲洗水解管，将水解液全部转移到50ml 容量瓶内，用去离子水定容。吸取滤液1ml于5ml容量瓶内，用真空干燥器在40～50℃干燥，残留物用1～2ml水溶解，再干燥，反复进行两次，最后蒸干，用1mlpH2.2的缓冲液溶解，供仪器测定用。 5.4测定：准确吸取0.200ml混合氨基酸标准，用pH2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释浓度为5.00nmol/50μL，作为上机测定用的氨基酸标准，用氨基酸自动分析仪以外标
氨基酸自动分析仪 1.实验目的 ①了解氨基酸自动分析仪的分析原理； ②掌握氨基酸自动分析仪的操作技巧。 2.实验原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。 3.实验仪器与耗材 实验仪器： 耗材： 4．实验步骤 ①样品处理： 测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。测定必须在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析
一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1～3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 5.结果计算 带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外，根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 6.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。
第三节氨基酸 氨基酸是一类具有特殊重要意义的化合物。因为它们中许多是与生命活动密切相关的蛋白质的基本组成单位，是人体必不可少的物质，有些则直接用作药物。 α-氨基酸是蛋白质的基本组成单位。蛋白质在酸、碱或酶的作用下，能逐步水解成比较简单的分子，最终产物是各种不同的α-氨基酸。水解过程可表示如下： 蛋白质→月示→胨→多肽→二肽→α-氨基酸 由蛋白质水解所得到的α-氨基酸共有20多种，各种蛋白质中所含氨基酸的种类和数量都各不相同。有些氨基酸在人体内不能合成，只能依靠食物供给，这种氨基酸叫做必需氨基酸（见表18-3，*）。 一、氨基酸的构造、构型及分类、命名 （一）氨基酸的构造和构型 分子中含有氨基和羧基的化合物，叫做氨基酸。 由蛋白质水解所得到的α-氨基酸，可用通式表示如下： 除甘氨酸（R=H）外，所有α-氨基酸中的α碳原子均是手性碳，故有D型与L型两种构型。天然氨基酸均为L-氨基酸。 L-氨基酸 （二）α-氨基酸的分类和命名 氨基酸有脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和杂环氨基酸。 在α-氨基酸分子中可以含多个氨基和多个羧基，而且氨基和羧基的数目不一定相等。因此，天然存在的α-氨基酸常根据其分子中所含氨基和羧基的数目分为中性氨基酸、碱性氨基酸和酸性氨基酸。所谓中性氨基酸是指分子中氨基和羧基的数目相等的一类氨基酸。但氨基的碱性和羧基的酸性不是完全相当的，所以它们并不是真正中性的物质，只能说它们近乎中性。分子中氨基的数目多于羧基时呈现碱性，称为碱性氨基酸；反之，氨基的数目少于羧基时呈现酸性，称为酸性氨基酸。
氨基酸的系统命名方法与羟基酸一样，但天然氨基酸常根据其来源或性质多用俗名。例如胱氨酸是因它最先来自尿结石；甘氨酸是由于它具有甜味而得名（见表18-3）。 表18-3 常见的α-氨基酸
氨基酸分析仪实验 测试中心吕雪娟 一、实验目的 了解氨基酸分析仪的主要结构及工作原理，掌握氨基酸分析的过程，前处理方法。 二、原理 氨基酸分析仪的分析原理是基于各种a一氨基酸的酸碱性、极性及分子大小的差异，用阳离子交换树脂在柱上进行层析分离，用几种不同pH值和离子强度的缓冲溶液依次将它们洗脱，从柱子上分离和洗脱下来的各种氨基酸在反应柱中与茚三酮进行加热反应，反应产物用可见光分光光度计进行检测，根据检测信号的大小计算出各种氨基酸的含量。 氨基酸和茚三酮反应
氨基酸分析仪结构示意图 二、操作步骤 1.准备工作 1.1缓冲液和茚三酮溶液的配制及正确放置 1.2氮气压力调整 1.2.1打开氮气钢瓶阀，调节其压力至50－100KPa（0．5－1.0Kgf／cm2）。 1.2.2顺时针轻轻旋转氮气调节器，使压力读数为34-40KPa（0.35－0.4Kgf ／cm2）。 1.2.3脱气瓶中液体的更换 1.3放置自动进样器清洗瓶，向清洗瓶（C-1，1L）中盛上蒸馏水，放置于指定的位置并拧上盖子。 2.开稳压器 3.启动L－8800ASM应用程序 3.1系统初始化，OK 3.2打开Module Operation界面
3.3泵1流速设定----缓冲液的清洗，打开泵1的排液阀；清洗完毕，关闭泵1； 3.4泵2流速设定—一缓冲液的清洗，打开泵2的排液阀；清洗完毕关闭泵2； 3.5自动进样器流路和针头清洗,除气泡，重复此过程三次。 3.6泵的压力归零 4.分析程序 4.1选择应用程序 4.2选择分析方法 4.3输入待测样品的信息，编辑样品表，保存； 4.4打开数据采集监控画面 4.5选择样品表 4.6打开泵1和泵2 4.7按样品表顺序放置样品。 4.8单击监控屏幕下方的Start Series按钮，开始样品测试。 4.9开始结束后，关闭采集监控画面 4.10关闭L－8800ASM应用程序 4.11关电源 三、实验报告要求 1.实验原理及分析条件； 2.实验结果。
氨基酸的常见化学反应 ? -氨基的反应 ?亚硝酸反应 ?范围：可用于Aa定量和蛋白质水解程度的测定（Van slyke法） ?注意：生成的氮气只有一半来自于Aa，ε氨基酸也可反应，速度较 慢． ?与酰化试剂的反应 ?Aa＋酰氯，酸酐－→Aa被酰基化 ?丹磺酰氯用于多肽链末端Ａa的标记和微量Ａa的定量测量． ?烃基化反应 ?Aa的氨基的一个氢原子可被羟基（包括环烃及其衍生物）取代． ?与2，4－二硝基氟苯（DNFB，FDNB）反应 ?最早Sanger用来鉴定多肽或蛋白质的氨基末端的Aa ?与苯异硫氰酸酯（PITC）的反应 ?Edman用于鉴定多肽或蛋白质的N末端Aa．在多肽和蛋 白质的Aa顺序分析方面占有重要地位（Edman降解法） ?形成西佛碱反应 ?Aa的α-NH2能与醛类化合物反应生成弱碱，即西佛碱（schiff ‘s base） ?前述甲醛滴定：甲醛与H2N-CH2-COO-结合,有效地减低了后者的 浓度,所以对于加入任何量的碱, [H2N-CH2-COO- ]/ [+H3N-CH2-COO- ]的比值总要比不存在甲醛的情况下小得多。加入 甲醛的甘氨酸溶液用标准盐酸滴定时，滴定曲线B并不发生改变。 ?脱氨基反应 ?Aa在生物体内经Aa氧化酶催化即脱去α-NH2而转变成酮酸 ?α-COOH参加的反应 ?成盐和成酯反应 ?Aa + 碱－→盐 ?Aa + NaOH －→氨基酸钠盐(重金属盐不溶于水) ?Aa-COOH + 醇－→酯 ?Aa+ EtOH －－－→氨基酸乙酯的盐酸盐 ?当Aa的COOH变成甲酯，乙酯或钠盐后，COOH的化学反 应性能被掩蔽或者说COOH被保护，NH2的化学性能得到 了加强或活化，易与酰基结合。Aa酯是制备Aa的酰氨or 酰肼的中间物 ? ?成酰氯反应 ?当氨基酸的氨基用适当的保护基保护以后，其羧基可与二氯亚砜作 用生成酰氯 ?用于多肽人工合成中的羧基激活 ?叠氮反应 ?氨基酸的氨基通过酰化保护后，羧基经酯化转变为甲酯，然后与肼
氨基酸 氨基酸为分子结构中含有氨基―NH2和羧基―COOH的有机化合物。氨基酸是组成蛋白质的基本单位蛋白质经水解即生成20多种氨基酸，如甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等。氨基酸在生化研究中用途较小，大都用于有机合成、石油化工、医疗等方面。氨基酸及其衍生物品种很多，大多性质稳定，要避光干燥贮存。 20. 抗菌素抗菌素又名抗生素，是各种生物体（植物、动物和微生物）特别是土壤微生物生命代谢活动的产物。具有在低浓度时也能选择性地抑制它种微生物病毒以及组织细胞的性能。目前抗菌素已发展到2000多种，但实际广泛应用的尚不多。抗菌素的化学结构各异，性质不一，按其化学结构可分为32类，如肽类、核苷类、蛋白质类、大环类、多稀大环内酯类等等。目前对抗菌素的研究和应用日益扩大，在医药上可防治各种传染病，在畜牧方面可防治禽兽的疾病，促进幼龄禽兽的发育，节约饲料和提高肉产量等；在农业方面可防治植物病害，刺激植物生长，提高作物产量；在工业上可用作鱼肉、蔬菜和水果等食品的保鲜剂。由于抗菌素来源于生物体，长期受潮受热易于变质失效，故对大多数抗菌素应防潮以及阴凉处保存，对有些抗菌素还应放在低温处。 21. 糖碳水化合物糖类又称碳水化合物，旧称醣。广泛存在于动植物中，是多羟基醛或多羟基酮以及它们的缩合物和某些衍生物的总称。按缩合结构的不同可分为单糖、低糖类、多糖类。糖类的物理化学性质比较稳定，一般不需特殊贮存保管，但长期贮藏应防止受潮发霉变质。 22. 酶酶旧称酵素，为具有特殊催化能力的蛋白质。它由生物体、动物、植物、微生物产生，也可说酶是一种生物催化剂，它在生物体内持续地促进大量复杂的化学反应，如淀粉酶催化淀粉和糖原水解成糊精和麦芽糖、蛋白酶催化蛋白质水解成肽、脂肪酶催化油脂水解成脂肪酸和甘油。酶的性质不很稳定，易受各种因素的影响而被破坏丧失活力，要较好地保存关键在于水分和温度。水分越高越不稳定，温度越高越易被破坏。一般需在低温处+4℃以下，有的要求在-20℃以下保存，但即使干燥冷藏，长期贮存后仍能逐渐降低或丧失其活性而变质，所以酶制剂大多规定一定的贮存期。
德国sykamS433D/S433（赛卡姆）氨基酸分析仪 仪器主要特点：
1、经典的茚三酮柱后衍生法、符合国家标准 2、带制冷功能的溶液存放单元，全部试剂均有惰性气体保护，试剂瓶带独立阀门 3、全自动进样器带电子制冷，进样体积可编程，无样品损失 4、四元梯度泵内置在线真空脱气，优化后的洗涤梯度只需2-3种缓冲液 5、检测系统包含可精确控温的柱温箱及衍生系统，双波长同时检测 6、中英文、图形化软件极易操作，具有日志记录及权限管理，符合GLP/21CFR规范 7、优异的定性定量重复性，超长的分离柱使用寿命 仪器技术参数： 1、分析柱 ●电子恒温（制热或制冷） ●柱温 可梯度编程 20℃～99℃ ●温度准确度 0.1℃ ●柱 PEEK，4.6 x 150mm, 7um，10%交联（最适于氨基酸分析的强度） ●安全保护 过热保护 2、自动进样器 ●进样模式 100μl体积可变环进样 ●进样体积 可变； 1μl～5000μl，0.1μl增量 ●样品清洗 最高5000μl清洗液，1μl增量 ●记忆效应 低于0.01%（自动清洗进样回路） ●重现性 10μl 变体积进样时变异低于1% ●进样/样品瓶 每个系列1～9次进样，可设不同体积 ●样品盘 两个盘，每盘60个样品位，1.5ml样品瓶 ●温度控制 +5℃～70℃（电子恒温） 3、溶液存放单元，带电子恒温装置 ●可存放所有缓冲液、再生液及茚三酮试剂 ●温度 4℃ ●内置式冷却器，可进行温度控制 4、四元梯度泵（输液单元） ●活塞 双活塞短行程技术，自动清洗 ●流速 0.000ml/min～9.999ml/min ●流速稳定性 RSD<0.1% ●最大压力 40MPa (400bar，6000psi) ●操作方式 恒流，恒压 ●梯度混合室 100μl～500μl ●材料 PEEK 5、检测系统 ●检测波长 570nm, 440nm（可同时检测） ●荧光检测（选配）
各种类型氨基酸分析仪性能比较一览表 常规氨基酸分析是指20种蛋白水解氨基酸和40余种游离氨基酸的分析。氨基酸分析仪自1958年问世以来，不断借助现代化的硬件和软件更新换代，现已发展成为现代食品、饲料、生物技术、医药卫生和生命科学等行业氨基酸分析必不可少的自动化常规检测设备。 氨基酸分析仪按其分离和检测方法的不同可分为两大类型。第一类是基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生光度法测定的经典方法（IEC）。此类方法于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。第二类是所有基于反相色谱分离、柱前衍生、荧光或紫外检测的高效液相法（HPLC）以及阴离子交换分离直接安培法检测的离子色谱法（IC）。两类方法的特性比较见表1。 表1：氨基酸分析方法的分类和特性比较表[1]
说明：IEC离子交换色谱；PITC异硫氰酸苯酯；OPA邻苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羟基琥贝酰亚胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯 由表1可见，IEC标准方法优于HPLC非标准方法，且此类仪器为专用型自动氨基酸分析仪器。 国外氨基酸分析仪器中，基于I EC标准方法原理并按照国家计量法规规定迄今业已正式通过国家技术质量监督总局型式认证的，有日立公司的L-8800，安玛西亚公司的30系列和安米诺西斯公司的A200型三种氨基酸分析仪。尚待通过计量认证的有Sykam和Jeol。而提供HPLC型氨基酸分析仪器的外国厂家有沃特斯、安捷伦、岛津和戴安等。但此类仪器用做氨基酸分析仪器时，还须首先通过氨基酸分析的计量认证。上述三家IEC型仪器的性能和技术参数见表2。 表2：三种IEC型氨基酸分析仪主要性能和技术参数对比一览表[2]
水解氨基酸样品前处理方法 酸水解（HCl法） 1．准确称取固体样品50——200mg（根据氨基酸的大体含量，如鱼粉可以少称，水果等可以大量称样），小心加入水解管中，注意：尽量防止挂壁。 左图是水解管的两种式 样，其中式样1是一次性 使用，管壁要求至少0.5mm 后，如果太薄，水解过程 中有发生炸管显现，但出 现较少；水解管式样2可 以多次使用，其管颈较长。 2．小心加入1：1的分析纯盐酸（约6M）10ml 3．酒精喷灯封管后置烘箱中于110℃水解22-24小时。 封管的三种方式： 第一：液态氮冷冻后封管（注意：冷等时不能将水解管直接置液氮中，否则容易冻裂） 第二：真空泵抽真空后封管（注意：如果真空泵抽力太大，则容易在封管过过程中将软化的玻璃抽碎） 第三：氮吹仪吹氮气15分钟后封管。 推荐：第三种方法，比较简单。 左图为封管后的式样，将 封管的样品置烘箱中110 度水解22-24小时后，取 出冷却开管。 4．样品过滤和定容。水解后的样品取出冷却至室温，开管后用小漏斗和滤纸过滤到25或50ml小容量瓶中，水解管用去离子水洗涤三次，洗涤液过滤到容量瓶中，用去离子水洗涤滤纸，洗涤液也收集到小容量瓶中。定容至刻度线。 5．吸取定容后的样品1-2ml，置真空脱酸仪上脱酸。温度60℃，脱至干燥，底部留有少许固体或痕渍为止。
脱酸缓冲装置示意图 6．脱酸后的样品，加入1-2ml样品缓冲液，置震荡混合器上混合均匀，针管吸取少量，通过0.45或0.22um过滤器过滤后，上机分析。 附录： 关于蛋白水解钱处理的方法主要是三种： 第一种是液氮冷冻后抽真空的方法，这种方法用到的设备有： 水解管、液氮灌、真空泵、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶（一般采用厚壁锥形瓶，至少三个） 第二种：水解管、真空泵、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶 第三种：水解管、氮吹仪、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶。 推荐第三种方法：原因是好多单位有氮吹仪，充氮气比液氮冷等成本低廉，液氮容易挥发，安钵瓶中装的液氮即使不用，段时间也会挥发完毕；充氮气不用抽真空，抽真空的方法因为水解管烧结的过程中容易抽碎，但是充氮气则无此麻烦。
氨基酸自动分析仪 氨基酸分析仪是进行氨基酸分离、衍生和检测的自动化分析系统，广泛用于制药、食品、饲料、农业、育种、医学研究、临床诊断和地质考察等领域。 仪器类别：仪器仪表 /成份分析仪器 /氨基酸分析仪 指标信息：分辨率：THR-Ser Ile-leu ≥98% 保留时间重现性：RSD≤0.5% (水解，所有峰) 峰面积重现性：RSD≤1% (水解，所有峰) 1．原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm 有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。
2．操作方法 ①样品处理： 测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。测定必须 在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下 进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析 一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1～3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 3.结果计算 带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量 峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外，根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 4.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。 5.应用举例
水解氨基酸样品前处理方法 酸水解（HCl 法） 1．准确称取固体样品50——200mg（根据氨基酸的大体含量，如鱼粉可以少称，水果等可以大量称样），小心加入水解管中，注意：尽量防止挂壁。 左图是水解管的两种式 样，其中式样1是一次性 使用，管壁要求至少0.5mm 中有发生炸管显现，但出现较少；水解管式样2可 以多次使用，其管颈较长。 2．小心加入1：1的分析纯盐酸（约6M）10ml 3．酒精喷灯封管后置烘箱中于110℃水解22-24小时。 封管的三种方式： 第一：液态氮冷冻后封管（注意：冷等时不能将水解管直接置液氮中，否则容易冻裂） 第二：真空泵抽真空后封管（注意：如果真空泵抽力太大，则容易在封管过过程中将软化的玻璃抽碎） 第三：氮吹仪吹氮气15分钟后封管。 推荐：第三种方法，比较简单。 左图为封管后的式样，将 封管的样品置烘箱中110 度水解22-24小时后，取 出冷却开管。 4．样品过滤和定容。水解后的样品取出冷却至室温，开管后用小漏斗和滤纸过滤到25或50ml 小容量瓶中，水解管用去离子水洗涤三次，洗涤液过滤到容量瓶中，用去离子水洗涤滤纸，洗涤液也收集到小容量瓶中。定容至刻度线。 5．吸取定容后的样品1-2ml，置真空脱酸仪上脱酸。温度60℃，脱至干燥，底 部留有少许固体或痕渍为止。 厚，如果太薄，水解过程 中有发生炸管可能，但出 第一：液态氮冷冻后封管（注意：冷冻时不能将水解管直接置液氮中，否则容易第二：真空泵抽真空后封管（注意：如果真空泵抽力太大，则容易在封管的过程出冷却、开管。
关于蛋白水解前处理的方法主要是三种： 脱酸缓冲装置示意图 6．脱酸后的样品，加入1-2ml 样品缓冲液，置震荡混合器上混合均匀，针管吸取少量，通过0.45或0.22um 过滤器过滤后，上机分析。 附录： 第一种是液氮冷冻后抽真空的方法，这种方法用到的设备有： 水解管、液氮灌、真空泵、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶（一般采用厚壁锥形瓶，至少三个） 第二种：水解管、真空泵、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶 第三种：水解管、氮吹仪、酒精喷灯（或手持式煤气灯）、电烘箱、脱酸仪、缓冲瓶。 推荐第三种方法：原因是好多单位有氮吹仪，充氮气比液氮冷等成本低廉，液氮容易挥发，安钵瓶中装的液氮即使不用，段时间也会挥发完毕；充氮气不用抽真空，抽真空的方法因为水解管烧结的过程中容易抽碎，但是充氮气则无此麻烦。
烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法（YC/T 282—2009） 日期：2009/6/2 10:39:18 作者：来源： 烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法（YC/T 282—2009）由国家烟草专卖局于2009年3月30日批准发布，自2009年5月1日起实施。 前言 本标准的附录Ａ、附录B、附录C为资料性附录。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（TC144/SC1）归口。 本标准起草单位：湖北中烟工业有限责任公司、中国烟草总公司郑州烟草研究院。 本标准主要起草人：王娟、李丹、刘建锋、马舒翼、宋旭艳、郭国宁、刘克建。 烟叶游离氨基酸的测定氨基酸分析仪法 1 范围 本标准规定了烟叶中游离氨基酸的氨基酸分析仪测定方法。 本标准适用于烟叶中天冬氨酸（Asp）、苏氨酸（Thr）、丝氨酸（Ser）、天冬酰胺（Asn）、谷氨酸（Glu）、脯氨酸（Pro）、甘氨酸（Gly）、丙氨酸（Ala）、缬氨酸（Val）、胱氨酸（Cys）、异亮氨酸（Ile）、亮氨酸（Leu）、酪氨酸（Tyr）、苯丙氨酸（Phe）、β-丙氨酸（β-Ala）、β-氨基异丁酸（β-Aia）、γ-氨基丁酸（γ-Aba）、赖氨酸（Lys）、组氨酸（His）、色氨酸（Trp）、精氨酸（Arg）等21种游离氨基酸的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 YC/T 31-1996 烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 烟叶中游离氨基酸 dissociated amino acid（free amino acid）in tobacco leaf 烟叶的盐酸浸出物中，以游离状态存在、未结合在蛋白质分子中的氨基酸。 4 原理 氨基酸为两性电解质，在酸性环境下形成阳离子。烟叶中的游离氨基酸经酸溶液萃取后，经氨基酸分析仪的磺酸型锂离子交换柱分离，然后与茚三酮混合，通过加热反应，伯胺与之生成蓝紫色化合物，仲胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用波长分别为570 nm和440 nm的双通道紫外检测器同时进行定性定量分析测定（氨基酸分析仪管路图参见附录A）。 5 试剂 除特别要求以外，本标准所使用的试剂均为分析纯试剂，水为去离子水。 5.1盐酸溶液，0.005 mol/L。
1.简介 采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法，对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似，但针对氨基酸分析进行了细节优化（例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等）2.系统 通常细分为两种系统：蛋白水解分析系统（钠盐系统）和游离氨基酸分析系统（锂盐系统），利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25 种氨基酸，速度较快，基线平直度好；锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸，速度较慢，基线一般不如钠盐系统好。 3.效果 分析效果：从目前已知的氨基酸分析方法比较来看，除灵敏度（最低检测限）比HPLC柱前衍生方法稍低以外（HPLC：<0.5pmol；氨基酸分析仪：<10pmol)，其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面，都优于其他分析方法。 4.如何选择质量可靠的氨基酸分析仪 1、原理。基于阳离子交换柱分离、柱后茚三酮衍生、光度法测定的离子交换色谱法（IEC）。此类方法由Stein和Moore两人
1958年发明，并于1972年获诺贝尔奖，是当今国际标准和国家标准以及仲裁和涉外的方法。 2、重要指标。满足分析需要的技术指标如分离度、重复性等要求，而其中的分离度又是更为重要的指标，因为，色谱理论一般以分离度达到1.2作为两峰基本分离的判定前提，只有峰分开了，才有意义去讨论定性和定量的重复性。 3、指标的真实性。有些厂家只标出个别氨基酸的指标如Asp 或Arg，或只用平均数据替代全部数据等等，而仪器性能好，经营信誉较高的厂家就会标出全部氨基酸的指标供用户参考。 4、仪器的可靠性。如果仪器今天堵了、明天漏了，用户不仅要付出大量人力财力，分析结果的可信度也将大打折扣。 5、仪器的运行成本。例如是否可以使用国产试剂、柱子寿命（以多少次进样计算、而不以多少年计算）等。 6、仪器设计是否有利于氨基酸分析。例如是否有惰性气体保护（茚三酮极易被氧化）、是否提供在线脱气、是否提供溶液和样品的制冷控制等。 7、售后服务。分析过程中遇到困难是在所难免，厂家必须能够快速响应、尽快解决问题。另外，常用备件的价格也是一个重要因素，因为用户在购买前一般难以注意到售后的问题，而很多厂家也没有公示自己的常用备件价格，这就为将来的使用埋下了隐患，事实上，也的确有很多仪器在出现一些看似微小的故障之后，就因为维修费用太高而被“束之高阁”。
利用毛发水解废液制作氨基酸肥料的研究 摘要废液污染环境是国内外胧氨酸生产中未解决的难题。本研究利少l]胧氦酸废液中的氮墓酸成分，添加适量的背养元素，将废液制成氛基酸肥料。试验证明，氦签酸比等氮量的无机氮肥的肥效l拓。用氦基酸肥料施肥，在蔬菜、花卉和粮食作物_L都取得了满意的增产效果关健词胧氮酸废液氮丛酸肥料以毛发为原料，以提取胧氮酸为1}的的毛发水解行业，由于原料来源广，成本较低，技术比较简单，制成胧氦酸后的经济效益可观，因此，近几年生产胧氦酸的工厂象雨后春笋一样在我国各地兴起。值得注意的是，到目前为止，各地对提取胧氮酸后的大量母液仍无妥善的处理办法。据测试母液中含10几种游离氦丛酸和氯化按(含量见表3)，化学耗氧量(COD)和生物耗氧量(BOD)均大大超过排放标准，如排1111厂外，不仅浪费了有用资源，还将造成环境污染。 氨墓酸是构成蛋白质的墓本单位，是含氮的有机化合物，用氨获酸制造牲畜饲料，或加工成人体保健药品，已有比较成熟的工艺可循。用氨基酸制造植物吸收利用的肥料还是一个前人未解决的探索性的课题。因为①一百多年前，德国著名的农业化学家李比锡(1803一1873)经过多年试验观察，提出了所谓植物无机营养学说，认定植物只能吸收无机养分，氮雄酸是含有一个短碳键的有机物质，我们尚无充分的试验论据，突破李比锡传统的概念，证明氨从酸可以成为植物直接吸收利用的肥料。②由于人工合成或从生物残体，中分离、提取氨基酸比较困难，所以氮华酸制剂一直是试验室内昂贵的试剂，如不解决来源问题，即使氨基酸肥效很好，将氦基酸作为农用肥料，也只能是可望不可及的科学幻想。 现在，我们认为研制氨雄酸肥料的条件已经成热，因为我们可以用试验证明植物能直接吸收氨基酸，同时肤氨酸生产中又有大量废弃母液为氨基酸提供了丰富的来源。本文报道了氨基酸分子的肥效试验，以及利用提取胧氨酸后的毛发水解母液(简称废液)为原料制成的不同类型的氨基酸肥料和它们的肥效作用。文章还探讨了利用“三废”，增加工厂收益，根治环境污染等问题。 1氨基酸分子的肥效试验 1.1试验材料 氨基酸试剂，共n种，来自我院畜牧研究所。NH4CI，分析纯试剂，来自我所化肥监 测中心。芹菜(A夕fumgroveo‘e，之s)，美芹，来自我院蔬菜花卉研究所。 1.2试验方法 木试验采用盆栽对比方法，芹菜育苗移栽，每盆定苗8株。
氨基酸自动分析仪 氨基酸是蛋白质的组成成分，是蛋白质化学研究的主要内容之一。蛋白质是一切生命物质的基础，因此，探讨和揭示生命现象的发生、生长、新陈代谢、遗传变异过程，都与氨基酸的研究有关。 随着近代物理学、化学和电子学的飞速发展，氨基酸的分析技术亦在不断更新。氨基酸分析仪是本世纪50年代研制的，仅40多年，已发展到现在的进样、分离、检测和数据处理全部自动化的程度。检出量由微克分子到毫微克分子，分析时间由原来的24小时到现在的半个小时，分析技术的提高促进了其他科学领域的发展。 一、氨基酸自动分析仪的进展 用于氨基酸分析的方法很多，有纸色谱法、柱色谱法、薄层色谱法、电泳法及气相色谱法等。一般认为离子交换柱色谱法是较为精确的检测方法，氨基酸分析仪就是在此基础上研制成功的。1951年Moor和Stein采用离子交换树脂色谱，用茚三酮试剂显色和分光光度计检测而设计，后来在Spaekman的协助下，使分析操作自动化。迄今氨基酸分析仪的条件和自动程度有了很大的改观，其特点主要表现以下几个方面。 ⒈树脂粒径减小近年来制成的小颗粒球状树脂，使氨基酸分析仪得到很大改进。由于树脂粒径减小就对应地增加等
量树脂的总面积，使现在少量树脂达到过去大量树脂的分离效果，从而减小了树脂柱的内径和体积，节省了试剂用量，缩短了分析时间。树脂的粒径从200→20→10→5μm。 ⒉色谱柱内径缩小树脂粒径减小使填充树脂床的色谱柱内径减小，由过去的粗长柱变为微柱。色谱柱内径的变化为18→6→2.8→1.75mm。 ⒊输压泵压力增高一般氨基酸分析仪采用低压泵，其施加于输液的压力只有几9.80665×104Pa，以后增加至几十 9.80665×104Pa，现在发展到2068×104Pa。 ⒋分析时间缩短由于树脂粒径的改善，色谱柱内径缩小和泵压增高，使分析时间大大缩短。蛋白质水解液的分析时间从过去的24小时缩短到现在的半个小时左右。 ⒌仪器灵敏度提高由于仪器的不断改进，使灵敏度大为提高，过去仪器的最高灵敏度已远不及现在仪器的最低灵敏度。现在一般氨基酸分析仪的灵敏度均达到0.1nmol。 ⒍试剂用量减少由于分析时间大大缩短，致使试剂消耗量大为降低。氨基酸分析的试剂要求纯度很高，且价格昂贵，试剂用量减少会降低分析费用，试剂流量(每小时茚三酮试剂的用量)的变化为70→35→18→3.5ml。 ⒎样品用量少由于仪器灵敏度不断提高，同时不少仪器采用单柱分析法，所以样品用量逐渐减少，从过去一次分析需要样品几ml到现在只用20μl。这对科研中难以收集和制
实验六蛋白质的酸水解及其氨基酸的纸层析鉴定 一、目的要求 学习和掌握蛋白质的水解方法以及纸层析法分离氨基酸的基本原理和方法。 二、实验原理 蛋白质可用酸、碱或酶(如胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、铵肽酶、羧肽酶、二肽酶等)水解，其最终产物为氨基酸。碱法水解产生的氨基酸要发生外消旋化，产生等物质的量的D-和L-氨基酸的混合物；酶法水解需要多种酶的联合作用，才能将蛋白质完全水解为L-氨基酸。最常见的是酸法水解，其优点是在水解过程中不发生外消旋作用，所得到的氨基酸均为L-氨基酸。大多数氨基酸在煮沸酸中是稳定的，但色氨酸则完全被破坏。丝氨酸和苏氨酸在酸法水解过程中或多或少地也有破坏。色氨酸的水解产物呈棕黑色，因此，用酸法水解蛋白质得到的水解液为棕黑色的。 纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法。展层剂由有机溶剂和水组成。物质被分离后在纸层析图谱上的位置由迁移率(Rf)来表示： 点样点到层析点中心的距离 Rf= 点样点到溶剂前沿的距离 在一定的条件下，某种物质的Rf是常数。Rf的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量与层析温度等因素有关。本实验利用纸层析法来分离蛋白质酸水解液中的氨基酸。 三、材料、器材与试剂 1〉材料 酵母粉。 2〉器材 安瓿瓶、干燥箱、蒸发皿、沸水浴、试管、烧杯、铅笔、尺子、层析缸、层析滤纸、、毛细管、喷雾剂。 3〉试剂 (1) 6mol/L盐酸。 (2) 10%的异丙醇。 (3)展层剂(4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物)：将20ml正丁醇和5ml冰醋酸放入分液漏斗中，与15ml水混合，充分振荡，静置后分层，放出下层水层即可。 (4)标准氨基酸溶液：分别配制0.5%的赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及它们的混合液(各组分浓度均为0.5%)各5ml。 (5)显色剂：0.1%水合茚三酮-正丁醇溶液。 四、实验步骤 (1)蛋白质的酸水解：称取大约0.2g酵母粉，装入一个安瓿瓶中。向瓶中加入1ml 6mol/L 的盐酸，于火焰上封口。再将安瓿瓶放干燥箱内，在110~120°C下水解24h。然后把安瓿瓶内的水解液倒进蒸发皿内，放入沸水浴上加热以出去盐酸。再向蒸发皿内加入少量蒸馏水溶解残留物，继续在沸水浴上加热除去水分。当水解液的pH接近3时，将水解液再次蒸干后，溶解于0.5~1.0ml 10%的异丙醇中备用。 (2)取层析滤纸(22c m×14cm)一张。在纸的一端距边缘2~3cm处用铅笔画一条直线，在此直线上每隔1.6cm作一点样点。在点样点下用铅笔标明试样简称。 (3)点样：用毛细管将各标准氨基酸样、混合标样及待测样品分别点在其相应的点样点上。每个样点点两次。控制使其扩散斑的直径不超过0.5cm。 (4)展层：将滤纸卷成圆筒状，用胶带粘合(点样的一端在下并向外)。将约20ml扩展剂
（1）故障现象：泵1泵2压力均高（正常压力泵1约9MPa，泵2约1MPa） 产生原因：反应柱被堵塞。 判断方法：将泵1泵2通往混合器的连接管路取下，此时如果两个压力明显下降则可断定。解决方法：将反应柱取下放入干净的容器中并注入蒸馏水，利用超声波清洗器清超30分钟，然后反装回原位利用泵2走水（用R3），流量视压力而设定，由小到大直至压力正常为止，最后将反应柱恢复原状（注意：反相冲洗反应柱时脱开通往流动池的管路，以防流动池堵塞）。（2）故障现象：仅泵1压力高 产生原因1：在线过滤器被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法1：将在线过滤器与分析柱脱离后压力远远大于0.5MPa。 解决方法1：将过滤器的滤芯取出，利用超声波清洗30分钟后反相开路用缓冲液1冲洗，直至压力恢复正常；如果无效则要更换滤芯。 产生原因2：分析柱入口被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法2：将在线过滤器与分析柱脱离后压力小于0.5MPa。 解决方法2：参考清洗反应柱方法。 产生原因3：分析柱内树脂被样品污染。 判断方法3：氨基酸组分出峰拖尾，分辨率下降。 解决方法3：参照说明书方法处理树脂后再填装。 产生原因4：除氨柱堵塞。 判断方法4：脱开除氨柱出口管路后压力远远大于0.3MPa。 解决方法4：参考清洗反应柱方法或重新填充除氨柱。 产生原因5：自动进样器有关管路被堵塞。 判断方法5：将通往在线过滤器的管路开路后压力仍高。 解决方法5：此故障较难判断，一般规律多发生在六通阀及取样环部位。 产生原因6：压力传感器出口过滤网被堵塞。 判断方法6：脱开除氨柱入口的管路后压力仍高。 解决方法6：取出过滤网后用超声波清洗。 （3）故障现象：仅泵2压力高 产生原因1：反应柱被堵塞（此故障发生率较高）。 判断方法1：将反应柱输出管路开路后压力仍高。 解决方法1：参考上述方法。 产生原因2：泵2输出软管被堵塞。 判断方法2：将软管与混合器处的连接脱开后压力仍高。 解决方法2：利用泵2走水，流量设定为0.1ml/min，长时间冲洗直至压力降下来，如无效则要更换输出软管。 产生原因3：压力传感器出口过滤网堵塞。 判断方法3：脱开压力传感器出口的软管后压力仍高。 解决方法3：取出过滤网用超声波清洗。 （4）故障现象：泵1或泵2压力低 产生原因1：有关管路漏液。 判断方法1：用滤纸在有关连接处试漏。 解决方法1：再紧固有关连接处。 产生原因2：缓冲液或茚三酮试剂瓶中吸管头的过滤器堵塞，不能吸液。 判断方法2：将良好的泵停止运转，仅启动有问题的泵，检查废液管排液量。 解决方法2：利用超声波清洗或更换新的过滤头。