当前位置：文档之家› 最全的动物疫病实验室检测方法

最全的动物疫病实验室检测方法

最全常见疫病实验室检测方法

常见疫病实验室检测方法 (1)

目录 (1)

常见ELISA操作方法 (3)

亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒 (3)

猪瘟抗原检测试剂盒 (6)

猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验 (12)

猪瘟单抗酶联免疫吸附试验 (14)

口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA） (16)

口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验 (18)

PRRS抗体间接酶联免疫吸附试验 (22)

犬细小病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (24)

犬瘟热病毒抗体酶免测定试剂盒说明书 (26)

常见PCR操作方法 (28)

猪伪狂犬病毒PCR诊断试剂剂盒 (28)

猪圆环病毒PCR诊断试剂盒 (31)

常见RT-PCR操作方法 (34)

口蹄疫病毒分子检测诊断试剂盒 (34)

H5亚型禽流感病毒RT-PCR检测试剂盒说明书(20次) (36)

新城疫病毒RT-PCR 检测试剂盒 (38)

猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒 (41)

凝集、血凝实验操作方法 (44)

弓形虫间接血凝试验(lHA)试剂使用说明书 (44)

伪狂犬病乳胶凝集试验试剂盒 (45)

猪细小病毒病乳胶凝集试验〈LAT〉诊断试剂盒使用说明书 (46)

猪传染性萎缩性鼻炎乳胶凝集试验〈LAT〉操作程序 (47)

猪瘟正向间接血凝试验试剂使用说明书及实验操作程序 (48)

口蹄疫正向间接血凝试验 (51)

高致病性禽流感血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验程序 (52)

琼脂扩散试验 (54)

鸡马立克氏病 (54)

禽流感琼脂凝胶免疫扩散试验 (56)

荧光抗体检测 (58)

猪瘟荧光抗体试验操作程序 (58)

对狂犬病疑似动物脑组织的直接免疫荧光(dFA)检测 (59)

血清学诊断检测常用试剂配方 (61)

禽流感HA和HI试验用溶液的配制 (61)

补充实验 (64)

猪流感病毒H1亚型Hl试验抗原与阴、阳性血清说明书 (64)

猪流感病毒RT-PCR检测 (67)

猪瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒猪繁殖与呼吸综合症（Nsp2 1594~1680变异株）RT-PCR检测实验 (69)

一、布鲁氏菌病试管凝集试验抗原与阴、阳性血清 (72)

二、布鲁氏菌病虎红平板凝集试验 (73)

动物结核病诊断操作规程 (74)

常见ELISA操作方法

亚洲 1 型口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测试剂盒

一试剂盒内含物

.说明书亚洲 1 型口蹄疫阳性对照血清( 己稀释浓度为 1:8) .96 孔 ELISA 板亚洲 1 型口蹄疫阴性对照血清

.液体稀释槽 3% 双氧水

.U 型96孔抗原抗体反应板 25×PBST洗涤液(稀释时准确量取)

.封板膜豚鼠抗血清稀释液

.灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原 (用冰决包裹 ) 终止液

.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被缓冲液(碳酸盐)胶囊

.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物 (柠檬酸 -磷酸盐)缓冲液片剂.兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物 OPD 片剂

二器材准备 ( 需用户自备 )

1.移液器:5-50μl移液器、0.2—10μl移液器、50—200μl移液器、50—300μl 12道移液器各一把。

2.移液枪尖 (若干)。

3.抗原抗体反应板:微量血凝板(U型、V型均可)5块,本试剂盒配备两块,用于被检血清的稀释和抗原抗体反应。注:抗原抗体反应板可重复使用,实验后,用水冲洗干净,然后用无离子水沸水浴30秒,晾干,待用。

4.超纯水 , 无离子水或蒸馏水。

三、试剂准备(需用户完成)

1.包被缓冲液(PH9.6)

将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中溶解即可。4℃存放,1月内有效。

2. 洗涤液(PBST)

将本试剂盒配备的 25 倍浓缩 PBST 液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4)

3.底物溶液

取1片柠檬酸—磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100mL无离子水中,溶化后,取50mL 溶液, 再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装（5mL/ 瓶或 10Ml∕瓶 ), 避光之-2O℃保存。用前避光溶化 ,临时每1mL上述溶液加 10μL 本试剂盒配备的 3% 的双氧水(H202) 。务必加双氧水!

四、操作步骤

1.用包被缓冲液稀释亚洲 1 型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000), 在ELISA 板上每孔加 50μl, 振荡 , 封板或置湿盒内，室温过夜。

2. 抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应

根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。

图 1 为抗体滴度测定 (定量) 检测 10 份样品布局图;图 2 为抗体滴度测定( 定量 )检测 20 份样品布局图。

以图 1 为例 , 在 U 型血凝板上按 50 μl/孔量用 PBST 将待检血清从1:4开始做2倍连续稀释至 1:512。同时,按图示稀释阴阳性对照血清 , 然后每孔加入 50 μl 用PBST 稀释到使用浓度的亚Ⅰ洲型口蹄疫病毒抗原 (1:4,即1份病毒抗原、加3份PBST), 病毒抗原对照孔加100μl。振荡混匀,封板,4℃过夜。加入病毒抗原后血清的稀释度变为从1:8开始的2倍稀释。

3.用洗涤液 (1×PBST) 洗 ELISA板5 次,在洗水纸上甩干,再将抗原抗体混合物从抗原抗体反应板上按次序转移至ELISA板上的相对应孔,每孔50μl封板,37℃温育1小时。

4.同上洗板5次, 甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释亚洲1型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度 (1:1000), 每孔加50μl,封板,37℃温育1小时。

5.同上洗板 5 次 , 甩干。用 l×PBST 稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度

(1:500), 每孔加 50 μl 封板 ,37 ℃温育 1 小时。

6. 同上洗板5次,每孔加50μl底物溶液 (务必加双氧水),37℃温育15分钟。每孔再加50μl终止液终止反应,立即在492nm波长下读取光吸收值(OD492nm值)。

五结果判定

1. 试验认可标准

每块板设 4 孔病毒抗原对照,病毒抗原对照不加任何血清,直接用PBST稀释至使用浓度,与血清/病毒抗原复合物同步加入ELISA板孔,50μl/孔,病毒抗原对照OD492nm 值应在1.5±0.5范围内。阳性对照抗体效价应在1:1024±1滴度以内,阴性对照血清抗体效价应＜1:8。

2.病毒抗原对照平均OD492nm 值50%计算(临界值)

抗原对照是4孔,弃去最高和最低OD492nm值,计算剩余2孔的平均OD492nm值,再除以2,即50%对照值。该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD492nm值。

3.结果判定

以病毒抗原对照平均OD492nm 值的50%为临界值,被检血清稀释孔OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔,阳性孔的OD492nm值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均OD492nm值为1.2,则其50%为0.60。若某一待检血清在1:128时OD492nm值为0.6,则该份待检血清的抗体滴度为1:128 。若临界值处于两个滴度之间 ,如处于1：64与1：128之间，则抗体滴度取中间值为1:9O。定性检测中 , 两个重复孔只要有一孔为阳性孔 , 则抗体滴度判定为1:128, 两孔均为阳性孔 , 则判定为抗体滴度＞1:128 。

ELISA抗体效价≥1:128,判定为亚洲 1 型口蹄疫抗体阳性。

ELISA抗体效价与保护力的关系:牛、羊:抗体效价≥1:128,99% 保护；效价≤1:16, 不保护；效价在1:22-90之间,50%保护。

猪瘟抗原检测试剂盒

Classical Swine Fever Virus Antigen Test kit(CSFVAg)

概述

猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、边界病病毒(BDV)都是瘟病毒科黄病毒属的成员。

猪瘟病毒自从成为一种重要的病原体以来，给养猪业造成了巨大的经济损失，并引起猪的严重死亡。感染高致病力猪瘟病毒后，猪在出现临床症状前会排出大量的病毒。耐过急性或亚急性感染的动物会产生抗体并且不再散毒。低致病力温和病毒会造成猪的隐性感染，病猪将会持续或间歇排出病毒直至死亡。怀孕母猪与猪瘟病毒接触后可能通过胎盘感染胎儿。先天性感染可能导致流产，木乃伊胎儿，死产和/或弱仔及畸形胎儿。先天性感染低毒力病毒的结果是产出持续性感染的仔猪，仔猪出现免疫耐受，不表现任何症状向外排毒。

猪也有可能感染BVDV或BDV。尽管这些感染通常呈温和经过并且是自限性的，但将它们同猪瘟病毒有效区分是很重要的。

原理

本ELISA检测试剂盒是用来检测外周血白细胞、全血、细胞培养物以及组织样本中的猪瘟病毒抗原。采用双抗体夹心ELISA，将CSFV单克隆抗血清包被微量反应板，可与样品中的CSEV抗原结合。猪瘟病毒的特异性单克隆抗体形成了夹心的上层。形成的单克隆抗体+样品+单克隆抗体夹心可以用辣根过氧化物酶标记物检测。加入与辣根过氧化物酶反应的底物，在酶的作用下形成有色产物。通过酶标仪测定其吸光度。可以用450nm单波长或450nm 与620m双波长测定各孔吸光度。

试剂

本试剂盒采用96孔板，可以一次检测92个样品(每个样品1孔，每个对照2孔)或46个样品(每个样品2孔，每个对照2孔)；或分6次使用，每次用2个板条，设2个对照，测定6个样品(每个样品2孔)。为了检测结果的准确性，最好每个样本都设重复。

试剂数量

1、多克隆羊抗血清包被板条8孔×12条(96孔)

2、10倍浓缩样品稀释液(10x) 55ml

足以配制550mL直接使用的1x稀释液

3、10倍浓缩洗涤液(10x) 125ml

足以配制1、25L直接使用的洗涤液工作浓度(1x)

4、CSFV单克隆抗体，含防腐剂4ml

5、阳性对照，含有防腐剂 1.5ml

6、阴性对照，含有防腐剂 1.5ml

7、100倍浓缩辣根过氧化物酶标记物(100x)，

辣根过氧化物酶标记抗鼠IgG，含有防腐剂200μl

8、酶标抗体稀释液15ml

9、底物液，TMB/H2O2溶液12ml

10、终止液，1M HCI(小心，强酸) 12ml

注意事项

1、仔细阅读并遵守操作说明；

2、试剂盒试剂于2～7℃冷藏保存。建议将浓缩的洗涤液(10x)保存在18～25℃室温，以免形成结晶。

3、所有试剂在使用前必须恢复至室温。

4、未使用的包被板应该密封保存在配备的塑料袋中，于2～7℃冷藏保存。

5、不要将不同批次的说明书以及试剂盒成分混合使用。

6、注意防止真菌或细菌污染试剂盒成分。处理试剂时要小心。

7、不要用超过保质期的检测试剂盒。

8、进行样品或试剂操作时严禁吃东西、喝水或吸烟。

9、每个样品都用单独的吸头。

10、每一批次的试剂必须用其配备的阴阳对照。

11、配制试剂时只能用超纯水。

12、不要用嘴吸取液体。

13、底物溶液和浓缩的样本稀释液对眼睛、呼吸系统和皮肤有剌激性，避免与皮肤和眼睛接触。

14、终止液为1MHCl，HCI为强酸并且能造成灼伤，小心处理。

15、本试剂盒只能用于体外诊断。兽医专用。

试剂配制

1、包被的反应板、猪瘟病毒特异性单克隆抗体、阳性对照、阴性对照、底物溶液、终

止液为现用试剂。

2、洗涤液

10倍浓缩洗涤液必须用超纯水或双蒸水进行10倍(1：10)稀释，稀释的洗涤液于2～7℃冷藏保存，但不能超过3天；或冰冻保存，至少可以保存一年。例如：配制500ml稀释的洗涤液，将450ml超纯水或双蒸水加到50ml浓缩液中，混匀。注意：如果浓缩液有结晶，在使用前必须溶解。可将瓶子放在温水中30分钟以上。

3、样品稀释液

10倍浓缩样品稀释液必须用超纯水或双蒸水进行10倍(1∶10)稀释，但如果检测全血样品时，将适量的10倍浓缩液与等体积的超纯水混合，制成5倍浓缩液(5X)即可。将制备的稀释液于2～7℃冷藏保存，但不能超过3天；或者冰冻保存，可以保存一年以上。

4、辣根过氧化物酶标记物(100x)

100倍(100X)浓缩标记物在使用前必须用标记物稀释液进行1∶100倍稀释。如果只使用部分试剂，只要用稀释液按100倍(1∶100)稀释足够本次使用的标记物浓缩液(旋涡振荡混勾)即可。稀释后的标记物溶液只能保存24小时。例如：10ml的辣根过氧化物酶标记物工作液，只需取100μl浓缩标记物(100X)加到10ml标记物稀释液中，在旋涡振荡器上混匀即可。

自备器材

1、精密移液器，5μ1至1000μ1

2、一次性移液吸头。

3、双蒸水或超纯水。

4、洗瓶或自动洗板机。

5、湿盒或封板胶带。

6、离心机，2000xg。

7、酶标仪。

8、离心管和小试管。

9、微量离心机，10，000xg。

10、旋涡振荡器。

11、剪刀和摄子。

12、0.17MNH4CI溶液，制备白细胞用。

样品制备

注意：制备好的样品或组织可以在2～7℃保存7天，或-20℃冷冻保存6个月以上。但这

些样品在应用前应该再次以1，500xg离心10分钟或10，000xg离心2～5分钟。

外周血白细胞

a) 取10ml肝素或EDTA抗凝血样品，1，500xg离心15～20分钟。

b) 用移液器小心吸出血沉棕黄层，加入500μl样品稀释液(1X)，在旋涡振荡器上混匀，室温下放置1小时，其间不时用旋涡器混合。然后直接进行步骤f操作；

c) 假如样品的棕黄层压积细胞体积非常少，那么就用整个细胞团(包括红细胞)。将细胞加进10ml的离心管，并加入5ml预冷(2～7℃，下同)的0.17MNH4CI(氯化铵)混匀，静置10分钟。

d) 用冷(2～7℃)超纯水或双蒸水加满离心管，轻轻上下颠倒混匀，1，500xg离心5分钟。

e) 弃去上清，向细胞团中加入500μl样品稀释液(1x)，用洁净的吸头悬起细胞，在旋涡振荡器上混匀，室温放置1小时。期间不时用旋涡器混合。

f) 1，500xg离心5分钟，取上清液按"操作步骤"进行检测。

g) 注意：处理好的样品可以在2～7℃冷藏保存7天，或-20℃冷冻保存6个月，但在使用前必须再次离心。

外周血自细胞(简化方法)

a) 取0.5～2ml肝素或EDTA抗凝血与等体积冷(2-8℃)0.17M NH4CI加入离心管混合。室温放置10分钟。

b) 1，500xg离心10分钟(或10，000xg离心2－3分钟)，弃掉上清。

c) 用冷(2～7℃)超纯水或双蒸水加满离心管，轻轻上下颠倒混匀，1，500xg离心5分钟。

d) 弃去上清，向细胞团中加入500μl样本稀释液(1x)。旋涡振荡充分混匀，室温放置1小时。期间不时用旋涡器混合。取75μl按照"操作步骤"进行检测。

全血(肝素或EDTA抗凝)

a) 取25μl 10倍浓缩样品稀释液(10X)和475μl全血加入微量离心管，在旋涡振荡器上混匀。

b) 室温下温育1小时，期间不时用旋涡器混合。此样品可以直接按照“操作步骤”进行检测。

或：直接将75μl全血加入酶标板孔中，再加入10μl 5倍浓缩样品稀释液(5X)。晃动酶标板/板条，使样品混合均匀。再按照“操作步骤”进行检测。

细胞培养物

a) 移去细胞培养液，收集培养瓶中的细胞加入到离心管中。

b) 2，500xg离心5分钟，弃去上清。

c) 向细胞团中加入500μl样品稀释液(1x)。旋涡振荡充分混匀，室温放置1小时。期间不时用旋涡器混合。取此样品75μl按照“操作步骤”进行检测。

组织

最好用新鲜的组织。如果有必要，组织可以在处理前于2～8℃冷藏保存1个月。每只动物检测1～2种组织，最好选取扁桃体、脾、肠、肠系膜淋巴结或肺。

a)取1～2g组织用剪刀剪成小碎块(2～5mm大小)。

b) 将组织碎块加入10ml离心管，加入5ml样品稀释液(1x)，旋涡振荡混匀，室温下放置1～2小时，期间不时用旋涡器混合。

c) 1，500xg离心10分钟，取75μl上清液按照“操作步骤”进行检测。

操作步骤

注意：所有试剂在使用前应该恢复至室温18～25℃；使用前试剂应在室温条件下至少放置1小时。

1、每孔加入25μlCSFV特异性单克隆抗体。此步骤可以用多道加样器(8～12道)操作。

2、在相应孔中分别加入75μl阳性对照、阴性对照，各加2孔。注意更换吸头。

3、在其余孔中分别加入75μl制备好的样品，注意更换吸头。轻轻拍打酶标板，使样品混合均匀。

4、置湿盒中或用胶条密封后室温(18～25℃)温育过夜。也可以放置室温温育4个小时，但是这可降低检测灵敏度。

5、甩掉孔中液体，用洗涤液(1X)洗涤5次，每次洗涤都要将孔注满。将孔中的所有液体倒空，用力拍打酶标板，以使所有液体拍出。或者，每孔加入洗涤液250～300μl用自动洗板机洗涤5次。注意：洗涤酶标板要仔细细心。

6、每孔加入100μl稀释好的辣根过氧化物酶标记物，在湿盒或密封后置室温温育1小时。

7、重复操作步骤5；每孔加入100μl底物液，在暗处室温温育10分钟。第1孔加入底物液开始计时。

8、每孔加入100μl终止液终止反应。加入终止液的顺序与上述加入底物的顺序一致。

9、在酶标仪上测量样品与对照孔在450m处的吸光值，或测量在450nm和620nm双波长的吸光值(空气调零)。

10、计算每个样品和阳性对照孔的矫正吸光值的平均值(参见“计算方法”)。

计算方法

首先计算样品和对照孔的OD平均值，在判定结果之前，所有样品和阳性对照孔的OD平均值必须进行矫正，矫正的OD值等于样本或阳性对照值减去阴性对照值。

矫正OD=样本OD－阴性对照OD

注意：北京爱德士元亨生物科技有限公司奋进行平均值相UN值计算并提供数据汇总的仪器和软件系统(xChek)

试验有效性判定

阳性对照OD平均值应该大于0.500，阴性对照OD平均值应小于0.150，试验结果方能有效。否则，应仔细检查实验操作并进行重测。如果阴性对照的吸收值始终很高，将阴性对照液在微量离心机中10，000xg离心3～5分钟，重新检测。

结果判定

被检样品的矫正吸光值大于或等于0.30，则为阳性：

被检样品的矫正吸光值小于0.20，则为阴性；

被检样品的矫正吸光值大于0.20，小于0.30，则为可疑。

建议根据外周血白细胞处理方案或细胞培养物处理方案进行全血样品的处理和检测。

猪瘟病毒抗体阻断ELISA试验

本方法是用于检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的一种阻断ELISA方法，通过待测抗体和单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的竞争结合，采用辣根过氧化物酶与底物的显色程度来进行判定。

1 操作步骤在使用时，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温18～25℃。使用前应将各组分放置于室温至少1小时。

1.1 分别将50uL样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。

1.2 分别将50uL的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，注意不同对照的吸头要更换，以防污染。

1.3 分别将50uL的被检样品加入剩下的检测孔中，注意不同检样的吸头要分开，以防污染。

1.4 轻弹微量反应板或用振荡器振荡，使反应板中的溶液混匀。

1.5 将微量反应板用封条封闭置于湿箱中（18～25℃）孵育2小时，也可以将微量反应板用封条置于湿箱中孵育过夜。

1.6 吸出反应孔中的液体，并用稀释好的洗涤液洗涤3次，注意每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔。

1.7 分别将100uL的抗CSFV酶标二抗（即取即用）加入反应孔中，用封条封闭反应板并于室温下或湿箱中孵育30分钟。

1.8 洗板（见1.6）后，分别将100uL的底物溶液加入反应孔中，于避光、室温条件下放置10分钟。加完第一孔后即可计时。

1.9 在每个反应孔中加入100uL终止液终止反应。注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。

1.10 在450nm处测定样本以及对照的吸光值，也可用双波长(450nm和620nm)测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。

1.11 计算样本和对照的平均吸光度值。计算方法如下：计算被检样本的平均值OD450（＝ODTEST）、阳性对照的平均值（＝ODPOS）、阴性对照的平均值（＝ODNEG）。根据以下公式计算被检样本和阳性对照的阻断率；

ODNEG- ODTEST

阻断率＝———————× 100%

ODNEG

2 试验有效性阴性对照的平均OD450应大于0.50。阳性对照的阻断率应大于50%。

3 结果判定如果被检样本的阻断率大于或等于40％，该样本被判定为阳性（有CSFV抗体存在）。如果被检样本的阻断率小于或等于30％，该样本被判定为阴性（无CSFV抗体存在）。如果被检样本阻断率在30～40％之间，应在数日后再对该动物进行重测。

猪瘟单抗酶联免疫吸附试验

（一）材料及试剂

1．猪瘟单抗纯化抗原

2．兔抗猪IgG酶标抗体

3．猪瘟阳性血清

4．猪瘟阴性血清

1～4均由指定的生物制品所购买。

5．ELISA反应板

6．包被液

碳酸钠1.50g碳酸氢钠2.93gH2O加至1 000mlpH值9.6

7．PBS液

氯化钠8.90g、磷酸二氢钾0.20g、无水磷酸氢二钠2.13g、加双馏水1 000ml

8．PBS－吐温洗涤液、PBS液1 000ml、犊牛血清5ml、混合即可

9．底物溶液

⑴0.1Mol/L柠檬酸液、柠檬酸21g、双蒸馏水加至1 000ml

⑵0.2Mol/L Na2HPO4液、Na2HPO4·12H2O 71.6g、双蒸馏水加至1 000ml

⑶pH5.0磷酸盐－柠檬酸缓冲液

取⑴液24.30ml、⑵液25.70ml混匀即可

⑷邻苯二胺液

取⑶液50ml、双馏水50ml、磷苯二胺20mg、30%H2O2 0.15ml，待邻苯二胺溶化后再加H2O2，现用现配。

10．终止液

浓H2SO4(98%) 22.2ml、H2O 177.80ml

（二）操作方法

1．用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化酶联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释，每孔包被100μl，4℃湿盒过夜。

2．次日取出，甩去孔内液体，3×3′冲洗。

3．将待检血清以PBS液做400倍稀释，每孔加100μl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释，于对照孔中加100μl。37℃温育1.5h～2h。

4．重复第二步，取出，甩去孔内液体，3×3′洗涤。

5．将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释，每孔加100μl，37℃温育1.5h～2h。

6．重复第4步。

7．每孔加底物溶液100μl，室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时，立即终止反应，并以阴性孔做空白对照。

8．每孔加终止液50μl立即于酶联免疫吸附检测仪测定490nm波长的光密度。

（三）结果判定

在猪瘟弱毒酶联板上，OD≥0.2，为猪瘟弱毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟弱毒抗体阴性。

在猪瘟强毒酶联板上，OD≥0.5，为猪瘟强毒抗体阳性；OD＜0.2，为猪瘟强毒抗体阴性。

口蹄疫结构蛋白检测方法（3ABC-I-ELISA）简介

口蹄疫(FMD)是一种高度接触性传染病，传播迅速，可形成世界性大流行，对养殖业和国际畜产品贸易具有严重的负面影响。控制和消灭FMD策略包括疫苗免疫和屠宰可疑畜群。在采用疫苗的国家，大多数动物血清口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白和病毒感染相关抗原(VIAA，即3D)抗体均为阳性，因此，一些基于结构蛋白和VIAA的诊断方法很难确定口问疫病毒感染与否。只有将感染动物和隐性带毒动物与疫苗免疫动物加以区分才能为FMD的控制和消灭提供科学的依据。日前的疫苗生产工艺，在病毒纯化过程中去除绝大部分非结构蛋白，因此灭活疫苗免疫动物体内没有病毒非结构蛋白3ABC抗体产生，而自然感染动物体内既有结构蛋白抗体，也有非结构蛋向3ABC抗体。因此检测FMDV非结构蛋白3ABC抗体的ELISA方法不但可以检测隐性感染动物，而且可以区分感染动物和免疫动物。

口蹄疫病毒非结构蛋白抗体检测试剂盒(FMD3ABC-I-ELlSA)对感染牛的检出率很高，敏感性在99%以上。对免疫牛的特异性在96%以上。

用途

FMD3ABC-I-ELISA试剂盒检测FMDV非结构蛋白3ABC抗体。该试剂盒不受血清型影响，适用于活畜进出口调运、疫区净化检疫和群体无症状感染评价，区分感染和免疫动物。

原理

FMD3ABC-I-ELISA试剂盒采用间接ELISA模式。用3ABC基因表达蛋白（Ag）包被ELISA 板，洗板封闭。检测时，加入待检血清样品，如果血清样品中有3ABC抗体，与ELISA板上3ABC蛋白结合，形成抗原-抗体复合物，再与酶标二抗结合，加入底物后，就会出现颜色反应。如果待检样品为阴性，就不能形成抗原-抗体复合物，酶标二抗不会结合，因此就不显色。

注意事项

1．冰冻血清样品应充分融化，且应混和均匀。

2．血清稀释液和底物应平衡至室温应用。底物A在4℃为结晶状态，需要在室温或37℃水浴化开后应用。

3．最好在血清稀释板上稀释血清，以减小操作误差。

4．应使用相同的加样器加样，以保证加样量的准确，减小试验误差。

5．多道微量移液器所用的吸头应为同一规格和型号，避免加样误差。

6．应使用自动或手动连续洗板系统洗板。

7．加样先后次序应该一致，保证作用时间一样。

8．底物作用时间到后，如果颜色较浅，可适当延长作用时间。

9．本试剂盒只能检测一种动物的血清样本，应分别订购检测牛、猪或羊血清的试剂盒，以测定不同动物来源的血清。

试剂准备

l.洗涤液(PBST)

将试剂盒配备的25倍浓缩PBST用无离子水或蒸馏水做l:25倍稀释即可。

操作步骤

1. 待检血清样品和阳性、阴性对照血清用血清稀释液1:2l倍稀释(120μL血清稀释液加血清6μL)，每孔加入lOOμL，阴、阳性对照血清平行加两孔，用封口膜封口，37℃结合30分钟。

2. 取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涤5次，最后一次拍干。

3. 用血清稀释液按l:lOO比例稀释酶标二抗，每孔加入100μL，用封口膜封口，37℃结合30分钟。

4. 取掉封口膜，每孔加满洗涤液，洗涤5次，最后一次拍干。

5. 将底物A按1:50比例(体积比)稀释于底物B中(lmL底物B中加入2OμL底物A)，吹打混匀，每孔加入lOOμL，封口膜封口，37℃避光作用10～15分钟。

6. 每孔加入.100μL终止液。

7. 轻轻摇振混匀，测定波长450nm吸光值(OD450nm值)。

8. 阳性对照平均OD值应大于0.6；阴性对照平均OD值应小于0.2。

9. 结果计算:样品效价为:(OD样品-OD阴性)÷(OD阳性-OD阴性)。

结果判定

若效价<0.2，为阴性；效价在0.2～0.3之间为可疑；效价>0.3为阳性。可疑和阳性样品应进行复测，复测为可疑或者阳性时，应判为阳性。

口蹄疫抗体液相阻断-酶联免疫吸附试验

一试剂盒内含物

.说明书亚洲 1 型口蹄疫阳性对照血清( 己稀释浓度为 1:8) .96 孔 ELISA 板亚洲 1 型口蹄疫阴性对照血清

.液体稀释槽 3% 双氧水

.U 型96孔抗原抗体反应板 25×PBST洗涤液(稀释时准确量取)

.封板膜豚鼠抗血清稀释液

.灭活亚洲Ⅰ型口蹄疾病毒抗原 (用冰决包裹 ) 终止液

.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒兔抗血清包被缓冲液(碳酸盐)胶囊

.亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒豚鼠抗血清底物 (柠檬酸 -磷酸盐)缓冲液片剂.兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物 OPD 片剂

二器材准备 ( 需用户自备 )

1.移液器:5-50μl移液器、0.2—10μl移液器、50—200μl移液器、50—300μl 12道移液器各一把。

2.移液枪尖 (若干)。

4.超纯水 , 无离子水或蒸馏水。

三、试剂准备(需用户完成)

1.包被缓冲液(PH9.6)

将本试剂盒配备的碳酸盐缓冲液胶囊1粒小心打开,将胶囊内粉末倒入100ml无离子水中溶解即可。4℃存放,1月内有效。

2. 洗涤液(PBST)

将本试剂盒配备的 25 倍浓缩 PBST 液(可能有结晶形成,用时微热溶化)用无离子水或蒸馏水做1:25稀释。(如果PH降低,务必用NaOH调至7.4)

3.底物溶液

取1片柠檬酸—磷酸盐片剂(本试剂盒配备)溶于100mL无离子水中,溶化后,取50mL 溶液, 再加1片邻苯二胺(OPD)片剂,充分溶解,分装（5mL/ 瓶或 10Ml∕瓶 ), 避光之-2O℃保存。用前避光溶化 ,临时每1mL上述溶液加 10μL 本试剂盒配备的 3% 的双氧水(H202) 。务必加双氧水。

四、操作步骤

1.用包被缓冲液稀释亚洲 1 型口蹄疫病毒兔抗血清至工作浓度(1:1000), 在ELISA 板上每孔加 50μl, 振荡 , 封板或置湿盒内，室温过夜。

2. 抗原抗体(阴阳性对照血清及待检血清)反应

根据不同的需要,选择图1-2中的一种布局在抗原抗体反应板上操作。

图 1 96 孔酶标板检测 10 份样品布局图

图 1 为抗体滴度测定 (定量) 检测 10 份样品布局图;图 2 为抗体滴度测定( 定量 )检测 20 份样品布局图。

图 2 96 孔酶标板检测 20 份样品布局图

4.同上洗板5次, 甩干。用豚鼠抗血清稀释液稀释亚洲1型口蹄疫病毒豚鼠抗血清至工作浓度 (1:1000), 每孔加50μl,封板,37℃温育1小时。

5.同上洗板 5 次 , 甩干。用 l×PBST 稀释兔抗豚鼠酶结合物至工作浓度

(1:500), 每孔加 50 μl 封板 ,37 ℃温育 1 小时。

6. 同上洗板5次,每孔加50μl底物溶液 (务必加双氧水),37℃温育15分钟。每孔再加50μl终止液终止反应,立即在492nm波长下读取光吸收值(OD492nm值)。

五结果判定

1. 试验认可标准

2.病毒抗原对照平均OD492nm 值50%计算(临界值)

抗原对照是4孔,弃去最高和最低OD492nm值,计算剩余2孔的平均OD492nm值,再除以2,即50%对照值。该值即为临界值，表示阻断50%反应的对照OD492nm值。

3.结果判定

以病毒抗原对照平均OD492nm 值的50%为临界值,被检血清稀释孔OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔,小于或等于临界值的孔为阳性孔,阳性孔的OD492nm值等于临界值时所对应的稀释度为该份血清的抗体滴度。例如病毒抗原对照平均OD492nm值为1.2,则其

检验分析方法的验证和确认

检验分析方法的验证和确认一、法规要求二、分析方法验证三、分析方法确认四、分析方法验证和确认总结一、法规要求：新版GMP（2010年修订）第二百二十三条物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求：（一）企业应当确保药品按照注册批准的方法进行全项检验。（二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证。1. 采用新的检验方法；2. 检验方法需变更的；3. 采用《中华人民共和国药典》及其他法定标准未收载的检验方法；4. 法规规定的其他需要验证的检验方法。（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠。法规要求：中国药典（2010年版）凡例1. 检验方法和限度。2. 二十三、本版药典正文收载的所有品种，均应按规定的方法进行检验。如采用其他方法，应将该方法与规定的方法做比较试验，根据试验结果掌握使用，但在仲裁时仍以本版药典规定的方法为准。法规要求：分析方法确认或验证相关指南二、分析方法验证 1. 分析方法验证的定义 2. 分析方法验证的目的 3. 分析方法验证范围 4. 分析方法验证的时机 5. 需验证的分析方法类型 6. 分析方法验证的具体内容 7. 验证检测项目小结 8. 分析方法验证的方式和步骤 9. 分析方法验证常见问题1. 分析

方法验证的定义是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。 2. 分析方法验证的目的（1）证明采用的分析方法是科学、合理。（2）证明分析方法能有效控制药品的内在质量。? 验证过程和结果均应记载在标准起草或修订说明中。 3. 分析方法验证范围（1）适用范围：化学药品的理化分析方法和仪器分析方法的验证与确认；清洁验证方法的验证。（2）不适用：化学药品的微生物方法；生物制品分析方法验证。 4. 分析方法验证的时机（1）建立新的药品质量标准；（2）药品生产工艺变更；（3）制剂的组分变更；（4）对原分析方法进行修订时。方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准起草说明或修订说明中。 5. 需验证的分析方法类型（1）鉴别试验（2）杂质定量或限度检查（仪器或非仪器检测方法）（3）原料药或制剂中活性成分以及制剂中选定组分（如防腐剂等）的定量测定含量测定（4）化学药品/中药制剂中其他需控制成分(如残留物、添加剂等）的测定（5）制剂溶出度、释放度等检查（6）原料药粒度检测 6. 分析方法验证的具体内容（1）专属性（2）线性（3）范围（4）准确性（5）精密度（6）检测限（7）定量限（8）耐用性（9）系统适用性根据检测的类型，采用的技术检测方法，确定具体方法拟订验证的内容。专属性1. 鉴别、杂质和含量测定的方法学

分析方法验证与确认管理规程完整

3 定义 3.1 检验方法验证：证明采用的方法适用于相应检测要求。 3.2 检验方法确认：证明使用法定方法在目前实验室条件下是否能获得可靠结果，是否适用于相应的检测工作。在本质上和验证一样，但不一定是验证项目的全部。 3.3 药典方法：经过国家药监部门批准的药典收载的质量标准和检验方法 3.4 法定方法：法定方法包括药典方法、国标方法等。 3.5 准确度：是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率表示。 3.6 精密度：是指在规定的测试条件下同一个均匀供试品经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 3.7 重复性：在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度称为重复性。 3.8 中间精密度：在同一个试验室，不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果之间的精密度称为中间精密度。 3.9 重现性：在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度称为重现性。 3.10 专属性：是指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物质的特性。 3.11 检测限：是指供试品中被测物能被检出的最低量。 3.12 定量限：是指供试品中被测物能被定量测定的最低量。 3.13 线性：是指在设计围，测试结果与试样中被测物浓度直接成正比关系的程度。3.14 围：是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低浓度或量的区间。 3.15 耐用性：是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。 4 职责 4.1 标准验证岗 4.1.1 提升现行质量标准工作时，对研究后确定的标准草案进行检验方法验证工作，以确保检验方法的适用性、科学性。 4.1.2 对技术部移交的新品质量标准草案进行确认，以确保检验方法适用性、科学性。 4.1.3 对技术部移交的新品应研究建立设备清洁验证残留物检验方法，并进行方法学验证。

实验室血清学常用检测方法

常用血清学检测方法介绍一、酶联免疫吸附试验诊断技术目前，该项技术已在兽医学上得到广泛的应用,大多数动物传染病都已经研制成 ELISA检测方法。 1、酶联免疫吸附试验的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应o用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相矢，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。 2、ELISA的类型根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型： ①?双抗体夹心法测抗原双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。在临床检验中，此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA，就是根据这种原理设计的。 ②?双抗原夹心法测抗体反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物，以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。乙肝HBs的检测常采用本法。本法尖键在于酶标抗原的制备，需要根据抗原结构的不同，寻找合适的标记方法。此法中受检标本不需稀释，可直接用于测定，因此其敏感度相对高于于间接法。此外，该方法不受被检动物种属差异的限制。 ③?间接法测抗体

检验方法及方法确认程序

检测方法及方法确认程序 l 目的为保证检测结果的正确性和有效性，对检测活动中所采用的方法进行有效控制制定程序。 2 范围适用于检测活动中检测方法的选用，以及检测方法的变更和偏离。 3 职责 3.1 技术负责人的职责负责授权与客户签立检测合同或协议，批准检测作业指导书等文件，维护本程的有效性。 3.2 检测室负责人的职责提出本检测部门的执行标准，制定本部门检测活动的检测程序及抽样、检测的职责和活动以及不确定度分析。 3.3 资料管理员的职责负责对标准、规程及其他技术规范等有效性确认，建立检测标准管理档案。 4 工作程序 4.1 检测方法的选择 4.1.1 为减少检测风险，本检测中心的检测依据首选以下正式颁布的标准。其中优先选用国家标准、行业标准、地方标准：对新旧标准处于过渡期间并均可采用的，优先选择新版标准。 4.1.1.1 国际标用； 4.1.1.2 国家标准； 4.1.1.3 行业标准或政府发布的技术规范； 4.1.1.4 地方标准； 4.1.1.5 企业标用； 4.1.1.6 知名技术组织或科学书籍与期刊公布的方法： 4.1.1.7 制造商指定的方法； 4.1.1.8 自行制定的非标方法。 4.1.2 当老标准己经过期作废时，以上标准应当保证是现行有效的。为此资料管理员首先应当负责检索和收集、查新最新标准及其他技术规范，并按《文件控制程序》保持检测人员所用标准是最新有效版本；其次是每月向检测部门提供中文核心期刊题录，供检测人员参考。当使用外部企业标准检测时，要防止导致可能发生的所有权侵权问题。 4.1.3 当所用标准存在理解、操作等困难对，技术负责人应组织各个检测室负责人编写检测作业指导书，以保证对标准实施的一致性。检测作业指导书应形成正式的书面文件并应经过编制人、审核人和批准人的书面审批手续和保持该文件的

ISO17025：2017检测方法确认程序(食品检测实验室)

1.目的确保实验室所采用的标准方法、非标准方法、实验室自制方法、超出其预定范围使用的标准方法及经过扩充和更改的标准方法得到有效确认，保证上述方法适合于预期用途，并满足特定要求。 2.适用范围适用于标准方法、非标准方法、实验室自制方法、超出其预定范围使用的标准方法以及经过扩充和更改的标准方法的确认。 3.职责 3.1技术负责人负责方法确认计划的制定； 3.2技术负责人负责检测方法的确认； 3.3实验室主任负责验证报告的审核； 3.4实验室主任负责确认方法计划和确认结果的审批。 4.控制程序 4.1实验室技术负责人根据检测工作需要，收集检测方法材料和制定检测方法。 4.2实验室技术负责人实施检测方法的确认，指派人员进行方法确认。 4.3确认范围包括：标准方法、非标准方法、实验室自制方法，确认也可能包括对取样、处置和传送程序的确认。 4.4确认的方式和技术应用应为下列一项或多项的组合： a.使用参考标准或标准物质校准； b.与其他方法所得结果对比； c.实验室间比对； d.系统评价影响结果的因素； e.评价结果不确定度。 4.5非标/自制方法确认工作完成后，由确认人员填写《非标/自制方法验证报告》，并与有关资料一起交主任审定。标准方法确认完成后，由确认人员填写《检测方法确认报告》。 4.6经确认的检测方法交实验室主任审批。实验室主任根据确认方法的准

确性是否适合预期用途和客户要求，决定是否批准使用。 4.7确认的方法应确保在所有有关人员中进行有效交流。 4.8确认报告、确认方法及有关资料由档案管理人员统一归档，并作为实验室的受控文件。 4.9如果对已确认的方法进行了某些更改，应将这些更改文件化，并应重新进行确认。 5.相关文件《人员培训程序》WHHDSPJT/QM02－502A－00 《文件控制程序》WHHDSPJT/QM02－403A－00 6.记录《采用非标准检验方法申请表》 WHHDSPJT/QM04－24 《非标/自制方法验证报告》 WHHDSPJT/QM04－63 《检测方法确认报告》 WHHDSPJT/QM04－35

狂犬病病毒实验室检测方法

狂犬病病毒实验室检测方法摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。一种准确、灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。现就酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光抗体方法（FAT）、快速荧光抑制灶技术（RFFIT）、反转录－聚合酶链反应（RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病病毒实验室诊断方法做一综述。关键词：狂犬病狂犬病病毒检测方法狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。RV可感染多种温血动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。脑组织感染RV后遭到破坏，使得狂犬病感染的病死率几乎 100%。据WHO数据显示狂犬病在全世界150个国家和地区出现过狂犬病病例。尽管狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病，主要集中在亚、非、拉等发展中国家[1]。中国狂犬病疫情较严重，居世界第2位[2~3]，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势[4]。检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流行。下面主要针对RV的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。 1、狂犬病病毒形态特征 RV属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/基因 1 型，单股负链RNA病毒。电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长160～240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状[5]。病毒有双层脂质外膜，其外面镶嵌有1072-1900个8-10nm长的纤突(spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。病毒双层脂质包膜的内侧主要是膜蛋白

动物疫病诊断化验室操作中常见若干问题

动物疫病诊断化验室操作中常见若干问题发表时间：2017-01-09T15:24:57.137Z 来源：《中国医学人文》(学术版)2016年9月第18期作者：阿衣夏木·阿尤甫[导读] 本文主要对此进行了探讨，并提出了提高动物疫病诊断化验室操作水平的举措，以供参考。伊吾县动物疫病控制与诊断中心 839300 【摘要】动物疫病检测、诊断以及防控工作是要求非常严密、综合性的工作，但由于各种因素的影响，在化验室操作中，还不可避免地存在一些问题。本文主要对此进行了探讨，并提出了提高动物疫病诊断化验室操作水平的举措，以供参考。【关键词】动物疫病诊断；化验室操作；操作问题动物疫病诊断是公共卫生事业的重要组成部分，也是一项具有社会性、群众性以及技术性的政府为社会服务的重要公益性质的工作，不仅影响着畜牧产业的健康发展以及畜产品的质量安全，也关乎到人们的身体健康和农牧民的收入以及社会的和谐稳定。同时，动物疫病诊断结果也是衡量一个地区动物防疫水平的重要指标，以及进行疫情认定以及预测预警等的基础内容。从实践来看，加强动物的疫病诊断和监测，将能促进畜牧业实现可持续发展，维护社会的公共卫生和及保障人民健康生活。一、动物疫病诊断的主要内容动物疫病诊断的主要内容有：一是对血、尿、粪等进行临床常规化验；二是从流行病学角度，调查研究动物疫病流行情况，主要调查动物发病时间及地点、疫病蔓延情况、疫情来源及传播的途径与方式等；三是从病理学方面，剖检因患传染病而死亡的畜禽尸体，查看其病理变化，或者取病料进行送检，再进一步做病理组织学方面的诊断；四是从微生物学角度，检查、坚定从患病的畜禽病料当中分离并且培养出来的病原微生物，或者是进行动物接种试验等；五是从免疫学角度，对组织或者细胞的变态反应、细胞的免疫功能及血清学反应等进行诊断。二、动物疫病诊断化验室操作常见问题（一）动物疫病化验室诊断的检测依据问题化验室诊断方法一般采用的检测依据为国家标准、农业标准，其次是有关动物疫病检测的其它技术规程、规范等，还可以采用化验室自行设定的检测方法。应结合化验室条件及样品类型等因素来选择合适的方法。例如，化验室需诊断伪狂犬病，如果没有基因扩增仪，但有酶标仪，就可以采用酶联免疫吸附试验诊断，而不必用聚合酶链反应试验诊断。使用化验室自行设定的检验方法要慎重，因为，第一该检验方法是否正确有待验证；第二如果将来有争议上诉法院，会有较大的麻烦。（二）化验室检测操作中的问题 1、微量移液器的使用不当问题。微量移液器在很多的检验方法中都有用到，其中在血凝和血凝抑制、酶联免疫吸附等试验中使用较多，当调整固定到某一需要的使用量开始使用时，下压排液（放液）有二个档位，轻压一档松开后所吸的液体为指示的用量，重压的另一档一般为放液时使用。有的实验人员容易疏忽，吸液时即重压一档，结果吸液的量不准确，自然检测的结果就不准确了，特别是在倍比稀释时不注意使用，在不同孔中吸液稀释时，时重时轻，造成检测出的同一份样品所稀释的抗体滴度没有规律，试验失败。 2、酶联免疫吸附试验操作上的问题。有关的动物疫病酶联免疫吸附试验，在各出版的动物疫病诊断标准等检验技术规范中，对试验中加底物的反应步骤规定了固定的时间，然后加终止液。而实际许多项目的酶联免疫吸附试验中加底物的反应步骤在遵守资料规定时间之外，应根据阴、阳性对照反应情况来调整反应时间，如阴、阳性对照的反应结果一出现，即可加终止液。有时按出版的有关检验技术规范等资料规定的时间可能太短或太长。太短或太长的时间都将影响反应结果，如加底物反应时间太短，则可能全部样品出现阴性，如加底物反应时间太长，则有可能全部样品呈现阳性，则原有部分阳性或阴性样品的，就出现了误诊。（三）出具的动物疫病检测报告中填写的问题 1、样品号与牲畜耳号不一致问题。在接受检测样品时，来样登记及《检测委托书》上必须标注牲畜的标识，与《检验报告》上样品号相对应。 2、《检验报告》中检验结论的用词问题。在检测中有许多检验项目是检测抗体存在或抗体滴度的，而目前许多疫病都有疫苗可防，动物注射疫苗后自然就产生抗体，或者有了某种疫病但刚发病未产生抗体的，检测出的抗体阳性或阴性的结果。就不能表明是或不是某种疫病，因此，《检验报告》中检验结论一栏，在这种情况下不能填写 “某种样品检验结果判定为某种疫病”，只能填写为 “某样品抗体阳性（阴性）”或“某样品抗体滴度XX”。（四）不开具《检测委托书》问题《检测委托书》是客户送检时与检测单位签定的检测合同，内有标注客户姓名、单位、样品状况、数量、《检验报告》取得的方式等。《检测委托书》一式二份，签定后客户和检测单位各执一份，以避免纠纷及样品混淆等。三、提高动物疫病诊断化验室操作水平的举措（一）改进兽医实验室管理体制使各级、各类实验室的职能清晰、职责明确对于隶属政府兽医主管部门、科研院所、大学院校的各类各级兽医实验室，国家应当统筹规划，科学合理设定职能、配备人员和设备。在定职能上要分工明确，各实验室承担的职责差异化，相互间形成互补，避免实验室都大而全；在设备配置上要根据实验室承担的职能确定仪器设备的多少，特别要注重所有仪器设备的利用率，避免闲置浪费。在定人员上要保证每个实验室都有专业技术把关人才，并形成知识结构、人才队伍上的合理梯度。另外，要重视发挥公司企业兽医实验室的配合作用。（二）创新兽医实验室运行机制根据区域化和畜牧业优势产业带的特点，分层次设立各级诊断监测实验室。在实验室管理和运行方面，一是要建立高度开放的科技资源共享机制，主要指大型、先进仪器设备的对外开放，提高设备利用率；二是加强实验室间的交流与合作。各实验室要在充分发挥各自优势的基础上，实现优势互补；三是在广泛开展合作的同时，鼓励实验室之间进行有限的竞争，以提高资金使用效率和资源优化配置；四是建立评议和奖励机制。国家设立专门委员会，对实验室在经费支持、科研立项等各方面给与倾斜。公益性服务政府买单，社会化服务实行收费。

检验方法确认方案

目录确认方案 1、概述 2、验证依据 3、验证范围 4、验证目的 5、验证内容 6、验证人员分工

1、概述单硝酸异山梨酯注射液收载于《中华人民共和国药典》2010年版二部。质量标准中采用高效液相色谱法测定单硝酸异山梨酯的含量，为进一步确认药典方法的可行性及有效性，更好控制产品质量，现对药典方法进行确认。 2、验证依据《中华人民共和国药典》2010年版二部“单硝酸异山梨酯注射液”项下规定《高效液相色谱法标准操作规程》（SOP-E-5-009-A01）《中华人民共和国药典》2010年版二部附录XIXA“药品质量标准分析方法验证指导原则” 3、验证范围本方案适用于单硝酸异山梨酯注射液检测方法的验证。 4、验证目的对单硝酸异山梨酯注射液含量测定方法进行确认，以确保检验结果的准确性和可靠性。 5、验证内容 5.1色谱条件与系统适用性试验色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－水（25：75）为流动相；检测波长为210nm。取单硝酸异山梨酯对照品与2-单硝酸异山梨酯对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml中各约含5μg的溶液，取20μl注入液相色谱仪，理论板数按单硝酸异山梨酯峰计算不低于3000，单硝酸异山梨酯峰与2-单硝酸异山梨酯峰的分离度应大于2.0。对照品溶液的制备取单硝酸异山梨酯对照品，用流动相定量稀释制成每1ml约含单硝酸异山梨酯0.1mg的溶液，作为对照品溶液。供试品溶液的制备精密量取本品适量，用流动相定量稀释制成每1ml约含单硝酸异山梨酯0.1mg的溶液，作为供试品溶液。 5.2 线性和范围取单硝酸异山梨酯对照品12μl、16μl、20μl、24μl、28μl进样，线性范围1.2μg～2.8μg 按上述色谱条件进样，相应的色谱峰面积为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X，μg），绘制标准曲线，计算线性方程，相关系数R。

兽医实验室工作开展情况

兽医实验室工作开展情况（一）加大实验室硬件设施建设力度，夯实工作基础。**区动植物防疫检验监督所实验室于2005年1月建成，配备有省级统一配给的酶标仪、离心机、生物显微镜、培养箱、恒温培养箱、移液器等仪器设备；2010年重新改造扩建完成后，室内总面积300 平方米左右，布局合理，功能设置和内部环境符合要求，设有解剖室、接样室、仪器室、血清学检测室、消毒洗涤室等功能室，并新增加荧光PCR、高速离心机、原子荧光吸收仪等设备。（二）突出重点，加强实验室人员培训管理。实验室现有工作人员4人，其中中级兽医师1人、助理兽医师3人。4名工作人员都经过专业技术、标准化质量管理以及相关法律法规培训，能熟练掌握实验室的各种实验方法和仪器设备操作，每位人员又具体承担采样、细菌学检测、血清学检测、仪器管理、实验室档案管理等不同的工作项目，保证实验室各项工作的有序有效开展和检测诊断工作的及时、准确、科学、权威。（三）抓住关键，严格执行实验室检测技术标准和操作规程。2004 年至今，严格按照技术标准和实验操作规程，认真开展口蹄疫免疫抗体检测、禽流感免疫抗体检测、猪瘟免疫抗体检测、鸡新城疫免疫抗体检测、布氏杆菌病感染状态检测等检测工作，超额完成上级下达的各项检测任务，没有出现

质量失误和发生生物安全事故。（四）规范实验室档案管理。对与质量有关的文件、资料、技术档案等进行有效控制，对原始记录填写质量、保管和检查进行控制，明确规定原始记录填写、保管和检查程序，保证可追溯性和检验数据的真实、可靠，对实验室相关资料、技术文件、原始记录、检验报告等进行建档保存，技术资料、规范、标准、等资料作长期保存，各种原始记录、检验报告、送检样品保存期为三年。（五）加大检测经费投入，扎实开展动物疫情诊断、检测和流行病学调查，为抓好动物疫病防治打下坚实基础。2011年，我局投入疫病检测经费10万元，全年完成动物疫病抗体检测2999份，完成上级下达的送检任务1427份，全区抗体检测合格率（自检）：蓝耳74%、口蹄疫90%、猪瘟70%、伪狂犬96%、布氏病100%、新城疫72%、禽流感H570%、H998%，达到国家的有关要求，对于检测不合格的养殖场及时督促其进行补免。兽医机构和队伍建设情况一是完善改革，充实人员。根据《国务院关于推进兽医体制改革的若干意见》（国发[2005]15号）、《**市兽医体制改革实施方案》（*府办[2007]108号）等文件精神，在区政府的直接领导下，区农业、编办、人事等部门密切配合，全

非标准检测方法的确认要求

非标准检测方法的确认要求一、检测方法确认要求 1、检测方法的区分：

（1）标准方法－可以直接认可的检测方法； ①以国际、区域或国家发布的标准方法； ②国标委批准的行业标准化委员会发布的行业标准方法。（2）公定方法知名的技术组织公布的检测方法；（3）标准方法中未包含的其他方法、需要确认后才能采用的方法,如： ①扩充和修改过的标准方法； ②超出其预定范围使用的标准方法； ③实验室制定（设计）的方法或企业标准； ④部分由设备制造商指定的方法； ⑤部分有关科学书籍和期刊公布的方法。 2、对非标准方法的确认要求：（1）实验室针对上述非标准方法申请确认时，必须按照相应文件的要求，履行完整的技术文件验证、确认和审批程序，并保留相应记录；（2）在申请对非标准方法进行确认时，实验室必须提交该方法的文本文件、相关验证材料及技术特点的说明材料；（3）CNAL检测方法研究工作组在识别和决定是否受理非标准方法的确认申请时，可根据该方法的技术难易程度，作出决定。对标准方法和公定方法重新组合、或者是对标准方法和公认方法的简单扩充，由于此类型的非标准方法对已有方法的继承性较好，技术难度也较小，可以通过由项目负责人直接提出意见；征求CNAL技术委员会相关技术专家的意见，提交CNAL检测方法研究工作组进行审议。（4）在对非标准方法进行确认时，工作组应对方法的相关资料进行审查，对非标准方法自身的科学性作出评价。二、检测方法的评价在对非标准方法进行确认时，专业组应通过下列方面进行评价： 1、资料审查：检测方法文件、方法研究报告或试验报告、比对试验或参加能力验证试验的结果； 2、技术审核：对非标准检测方法的检测原理、可操作性、准确性、重复性及再现性进行评价。

实验室检验方法的验证和确认

实验室检验方法的验证和确认 1、检验方法验证的基本内容检验方法验证的基本内容包括方案的起草及审批，检测仪器的确认，适用性验证(包括准确度试验、精密度测定、线性范围试验、专属性试验等)和结果评价及批准四个方面。 2、检验方法验证的基本步骤首先是制定验证方案，然后对大型精密仪器进行确认，最关键的一步是检验方法的适用性试验，最后是检验方法评价及批准。 1）验证方案的制定检验方法的验证方案通常由质量验证小组提出。根据产品的工艺条件、原辅料化学结构、中间体、分解产物查阅有关资料，提出规格标准，确定检查项目，规定杂质限度，即为质量标准草案。根据质量标准草案确定检查和试验范围，对检验方法拟定具体操作步骤，最后经有关人员审批方可实施。 2）大型精密仪器的确认分析测试中所用的检测仪器一般可分为三类 (1)普通仪器：崩解仪，折光仪、分析天平、酸度计、溶点测定仪、电导仪等： (2)较精密仪器：旋光仪、永停滴定仪、费休氏水分测定仪、自动滴定仪、药物溶出度仪、可见分光光度计、电泳仪等； (3)大型精密仪器：紫外分光光度计、红外分光光度计、气相色谱仪、高效液相色谱仪、薄层扫描仪等。为了保证分析测试数据准确可靠，每台检测仪器在投入正式使用之前都应进行确认。检测仪器的确认是检验方法验证的基础，应在其它验证试验开始之前首先完成。检测

仪器确认工作内容应根据仪器类型。技术性能而定，通常包括：安装确认、校正、适用性预试验和再确认。校正校正是仪器确认及检验方法验证中的一个重要环节，应当在验证试验以前进行校正。紫外分光光度计校正包括波长校正、吸收度测试、准确度测试、杂散光检查。气相色谱仪与高效液相色谱仪均要求做系统适用性试验。在规定的色谱条件下测定色谱柱的最小理论塔板数。分离度和拖尾因子，并规定变异系数应不大于2％。对于化学检验中使用的计量仪器包括容量瓶、移液管、滴定管、分析天平亦均应校正。适用性预试验仪器的安装确认完成以后，在其功能试验符合要求的情况下，应用标准品或对照品对其进行适用性检查，以确认仪器是否符合使用要求。例如对熔点测定仪的适用性预试验是采用已知溶点的甲硝唑做试验，测试结果与已知熔点比较。紫外分光光度计可用已知含量的某标准品试验，测得结果与已知数值对比，确定仪器是否符合使用要求。在完成上述各项试验工作的同时，应做好相应的文件记录等资料归档工作，每一台仪器均应有一套完整的档案资料。再确认为了确保仪器处于良好的使用状态，对于一台新购买的仪器在确认工作结束以后，应根据仪器的类别。确认的经验制定再确认的计划。再确认的时间间隔和内容要根据仪器类别和使用情况决定，一般是3个月、6个月或1年。仪器再确认的内容通常包括线路连接、附件备品消耗品检查、清洁工作、功能试验、工作日记等，其中重点是安装确认中的功能试验。 3、检验方法的适用性验证

动物疫病预防控制中心实验室检测试剂及耗材采购公示招投标书范本

招标文件河南省动物疫病预防控制中心实验室检测试剂及耗材采购项目采购编号：豫财招标采购--号采购人：河南省动物疫病预防控制中心采购代理机构：恒信咨询管理有限公司日期：二〇一八年五月

目录第一章投标邀请 (2) 第二章招标项目资料表 (6) 第三章投标人须知 (13) 一、说明 (13) 二、招标文件 (14) 三、投标文件的编写 (16) 四、投标文件的递交 (20) 五、开标、资格审查与评标 (21) 六、授予合同 (23) 第四章评标办法（综合评分法） (26) 第五章合同 (32) 第六章招标项目需求及技术要求 (36) 第七章投标文件资格审查文件册通用格式 (56) 一、投标人资格声明函 (58) 二、投标人基本情况 (59) 三、投标人资格证明文件 (60) 第八章投标文件通用格式 (67) 一、法定代表人授权书 (69) 二、投标书 (70) 三、投标保证金 (72) 四、投标报价表格 (73) (一)开标一览表 (73) (二)投标报价一览表 (74) (三)货物分项报价一览表 (75) (四)货物（产品）规格一览表 (76) 五、技术规格和商务条款偏差表 (77) 六、售后服务计划 (78) 七、投标人及投标产品简介 (79) 八、投标人提供的其他优惠条件 (80) 九、反商业贿赂承诺书 (81) 十、政府采购投标担保函（格式）（仅限提供保函形式的投标单位提供） (82) 十一、小型、微型（监狱、残疾人福利性单位）企业产品明细表 (84) 十二、小微企业声明函（投标人） (86) 十三、小微企业声明函（制造商） (88) 十四、残疾人福利性单位声明函 (89) 十五、节能产品、环境标志产品明细表 (90) 十六、其他政府采购政策性规定证明材料 (92)

检测方法的验证及确认

加标回收率的测定可以反映测试结果的准确度。当按照平行加标进行回收率测定时，所得结果既可以反映测试结果的准确度，也可以判断其精密度。在实际测定过程中，有的将标准溶液加入到经过处理后的待测样品中，这不够合理，尤其是测定有机成分而试样须经预处理时，或者测定易挥发物等需要蒸馏预处理的成分时，不能反映预处理过程中的沾污或损失情况，虽然回收率较好，但不能完全说明数据准确。进行加标回收率测定时，还应注意以下几点： 1)加标物的形态应该和待测物的形态相同。 2)加标量和加标回收率测量的精密度应予以控制，一般情况下作如下规定： ①加标量应尽量与样品中待测物含量相等或相近，并应注意对样品容积的影响； ②当样品中待测物含量接近方法检出限时，加标量应控制在校准曲线的低浓度范围； ③加标量尽量不大于待测物含量的3倍； ④加标后的测定值不应超出方法的测量上限的90%； ⑤当样品中待测物浓度高于校准曲线的中间浓度时，加标量应控制在待测物浓度的半量。 3)由于加标样和样品的分析条件完全相同，其中干扰物质和不正确操作等因素所导致的效果相等。当以其测定结果的差值计算回收串时，常不能确切反映样品测定结果的实际差错。

国家标准 GB/T 27404-2008 《实验室质量控制规范食品理化检测》中对回收率试验做了如下规定：对于食品中的禁用物质，回收率应在方法测定低限、两倍方法测定低限和十倍方法测定低限进行三水平试验；对于已制定最高残留限量（MRL）的，回收率应在方法测定低限、MRL、选一合适点进行三水平试验；对于未制定MRL的，回收率应在方法测定低限、常见限量指标、选一合适点进行三水平试验。回收率的参考范围见表F.1.

CODcr实验室检测标准方法

CODcr实验室检测标准方法 1、应用范围本标准适用于各种类型的含COD值大于30 mg/l的水样，对未经稀释的水样的测定上限为700 mg/l。本标准不适用于含氯化物浓度大于1000mg/l(稀释后)的含盐水。 2 、定义在一定条件下，经重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)氧化处理时，水样中的溶解性物质和悬浮物所消耗的重铬酸盐(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)相对应的氧的质量浓度。 3 、原理在水样中加入已知量的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)溶液，并在强酸介质下以银盐作催化剂，经沸腾回流后，以试亚铁灵为指示剂，用硫酸亚铁铵滴定水样中未被还原的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)由消耗的硫酸亚铁铵的量换算成消耗氧的质量浓度。在酸性重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)条件下，芳烃及吡啶难以被氧化，其氧化率较低。在硫酸银催化作用下，直链脂肪族化合物可有效地被氧化。 4、试剂除非另有说明，实验时所用试剂均为符合国家标准的分析纯试剂，试验用水均为蒸馏水或同等纯度的水。 4.1 硫酸银(Ag2SO4)，化学纯。 4.2 硫酸汞(HgSO4)，化学纯，（汞，氯离子屏蔽剂，一类污染物，严禁向环境水体排放）。 4.3 硫酸(H2SO4)，p＝1.84g/ml。 4.4 硫酸银-硫酸试剂：向1L硫酸(4.3)中加入10g硫酸银(4.1).放置1-2天使之溶解，并混匀，使用前小心摇动。 4.5 重铬酸钾（六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放）标准溶液：

4.5.1 浓度为C(1/6K2Cr2O7)＝0.250mol/l的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液：将12.258g在105℃干燥2h后的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)溶于水中，稀释至1000ml。 4.5.2 浓度为C(1/6K2Cr2O7)＝0.0250mol/l的重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液：将4.5.1条的溶液稀释10倍而成。 4.6硫酸亚铁铵标准滴定溶液 4.6.1 浓度为C[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]≈0.10mol/l的硫酸亚铁铵标准滴定溶液；溶解39g硫酸亚铁铵[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]于水中，加入20ml硫酸(4.3)，待其溶液冷却后稀释至1000ml。 4.6.2 每日临用前，必须用重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4. 5.1)准确标定此溶液(4. 6.1)的浓度。取10.00ml重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4.5.1)置于锥形瓶中，用水稀释至约100ml，加入30ml硫酸(4.3)，混匀，冷却后，加3滴(约0.15ml)试亚铁灵指示剂(4.7)，用硫酸亚铁铵(4.6.1)滴定溶液的颜色由黄色经蓝绿色变为红褐色，即为终点。记录下硫酸亚铁铵的消耗量(ml)。 4.6.3 硫酸亚铁铵标准滴定溶液浓度的计算： C[(NH4)2Fe(SO4)2]=0.250×10.00/V[(NH4)2Fe(SO4)2] 式中：V--滴定时消耗硫酸亚铁铵溶液的毫升数。 4.6.4 浓度为C[(NH4)2Fe(SO4)2·6H2O]≈0.010mol/l的硫酸亚铁铵标准滴定溶液：将4.6.1条的溶液稀释10倍，用重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)标准溶液(4. 5.2)标定，其滴定步骤及浓度计算分别与4. 6.2及4.6.3 类同。 4.7 邻苯二甲酸氢钾标准溶液，C(KC6H5O4)＝2.0824mmol/l：称取105℃时干燥2h的邻苯二甲酸氢钾(HOOCC6H4COOK)0.4251g溶于水，并稀释至1000ml，混匀。以重铬酸钾(六价铬，一类污染物，严禁向环境水体排放)为氧化剂，将邻苯二甲酸氢钾完全氧化的COD值为1.1768氧/克(指1g邻苯二甲酸氢钾耗氧 1.176g)故该标准溶液的理论COD值为500mg/l。

ISO17025：2017实验室-检测方法选择和验证程序

页次第 52 页共 4页文件名称检测方法选择和验证程序发布日期2019年1月1日 1 目的对在检测中选用的检测方法进行有效的控制，保证检测方法的适宜性、有效性，从而确保检测结果准确可靠。 2 范围本程序适用于中心所用检测方法选择和验证的全过程。 3 职责 3.1 技术负责人负责组织进行检测方法的验证，提交方法验证报告。 3.2 检测组组长负责检测方法验证的实施。 3.3 主任负责批准后检测方法的投入使用。 4程序 4.1 开展检测时，应采用满足客户需要并适用的检测方法（优先使用国家标委会、国际、地方发布的方法），针对不同检测项目由检测人员按客户的要求进行选择，技术负责人应确保这些标准、规范为最新有效版本。 4.2 当由于缺乏检验指导书，造成检测人员对标准理解、操作方法、判定的不同而影响检测质量时，部门应依据标准编制检验指导书。如果标准方法已包含了如何进行检测和判定的信息，并且这些信息检测人员完全理解并熟练操作时，不需编制检验指导书。 4.3 如果客户要求不适用于检测标准时，综合组应与客户沟通，并在合同中注明。当客户提出的方法已过期时，负责合同评审人员应通知客户，并且在《检测委托单》中说明，建议其采用有效的标准。 4.4 当客户未指定方法，检测组应优先采用国家标委会、国际、地方发布的方法；如实验室制定的方法能满足预期用途并经过验证，也可使用，所选方法由综合组通知客户。

页次第 53 页共 4页文件名称检测方法选择和验证程序发布日期 2019年1月1日 4.5 开始检测前，技术负责人对选用方法进行验证，确保能够满足预期的用途时，才能进行检测。验证的内容应包括以下七个方面： a.对执行新标准所需的人力资源的评价，即检测人员是否具备所需的技能及能力；必要时应进行人员培训，经考核后上岗； b.对现有设备适用性的评价，诸如是否具有所需的标准/参考物质，必要时应予补充； c.对设施和环境条件的评价； d.对样品制备，包括前处理、存放等各环节是否满足标准要求的评价； e.对作业指导书、原始记录、报告格式及其内容是否适应标准要求的评价； f.对新旧标准进行比较，尤其是差异分析与比对的评价； g.准确度的确认(具体方法见4.6)。方法的验证还可包括以前参加过的实验室间比对或能力验证的结果、结果的不确定度、检出限、留样复测的结果。技术负责人填写《使用新方法确认记录表》。当方法发生变化时，应重新进行确认，确认的结果记录于《使用新方法确认记录表》上。 4.6 准确度的验证准确度的确认由精密度和正确度两个参数决定。 4.6.1 精确度检验。 4.6.1.1 用需要验证的方法对标准物质(r V )在重复性条件下测量多次，得到n 个的量结果，计算方差： 2 21 1()1n r i k S x x n ==--∑ 其中： 1 1 n i k x x n == ∑

检验方法确认程序

检验方法确认程序一．目的：适应医学技术的发展，确保检验方法准确可靠，以满足临床需要。二．适用范围：实验室所有开展的检验方法。三.工作程序： 1．实验室必须使用能保证准确和可靠的检验结果的检验方法、器材、仪器、试剂、质控品和校准品、供应品。 2．必须选择能保证检给结果在实验室所确定的方法性能规格内的方法。在检测标本前，实验室必须对使用方法的下述的性能规格进行确认：准确度、精密度。如有必要，可添加特异性和分析灵敏度，以及检验结果的报告范围、参考值以及其它适合的特性。 2．1．实验室引进我国注册登记的国外方法（试剂盒）或我国取得生产许可证和方法（试剂盒）时，在报告检验结果前，必须得到下列特性的性能规格：准确度、精密度、检验结果的报告范围（或者线性）、参考值。实验室至少应检查其准确度、精密度。必要时增加特异性和分析灵敏度，以及报告范围，参考值是否符合本实验室的服务人群等。如与厂商提供的数据进行比较，应取得相符结果。 2．2．实验室自行建立的方法，在报告结果患者前： 2．2．1建立每一方法的性能规格，包括：准确度、精密度、特异性、干扰因素的影响、分析灵敏度、检验结果的报告范围（或者线性）、参考范围、其它需要检测的性能。 2．2．2．建立该方法的校准程序和ICQ规则。 2．3实验室必须有上述活动的记录和文件。并保存到停止到使用这些方法后半年。 3．实验室必须有与所做检验的专业和工作量相适应的，足够的器材、仪器、试剂、质控品和校准品、供应品。 4．实验室必须确定正确制备、储存和使用上述体外诊断用品的条件。 4．1．这些条件包括：水的质量、温度校准。保护器材和仪器，不致由于电流的波动各中断引起对检验结果的不利影响。 4．2．必须将纠正由于达不到规定所采取的改正措施文件化。 5．用商品试剂盒时，对于国家规定应有生产许可证，注册登记证的品种，决不能使用没有生产许可证、注册登记证的商品试剂盒。尚未规定者，生产厂家应提供该产品性能规格以及质量保证书。 6．试剂、溶液、培养基、校准品、质控品和其它供应品，必须加以标记，标记上应有：6．1．识别名：当有意义时应标明浓度，效价，滴度等 6．2．储存要求 6．3．制备日期和失效期 6．4．其它与正确使用有关的信息 7．应根据仪器制造商说明或依据权威机构的要求来选择和使用校准品和质控品。实验室自行选用的校准品或质控品，应有实验依据证明其不影响检验结果的准确性和可靠性。

实验室内部质量控制方法分析

实验室内部质量控制方法分析 Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998

实验室内部质量控制方法分析评审资料（1）能力附表；（2）标准汇总（所有参数中包含的参数全覆盖）；（3）标准查新；（4）原始记录模版的编制及清单汇总；（5）练兵报告（每个参数的练兵至少5 次）；（6）新项目开发表；（7）方法验证（所有扩项参数全覆盖）；（8）实验室之间比对及分析表（每月至少2次,并且全员覆盖）；（9）内部的比对及分析表（每月至少2次,并且全员覆盖）；（10）内部的质量监督记录（每月至少2次,并且全员覆盖）；（11）培训记录（所有扩项参数全覆盖）；（12）仪器的检定证书及检定确认表（包括玻璃仪器的自校记录）；（13）仪器的期间核查记录；（14）仪器的作业指导书；（15）仪器的检测台账；（16）样品的检测记录（每周一次）；（17）标准物质的期间核查记录；（18）试剂标准品的采购验收记录；（19）留样登记记录；（20）留样处理记录；（21）温室度的登记记录；（22）溶液配制记录等。内部控制实验室内部的质量控制主要是用于评价实验室检测质量的精密度，同时反映了实验室分析质量的稳定性。实验室内部的质量控制的方法主要有：人员比对、方法比对、仪器比对、留样再测、有证标准物质检测、加标回收等。实验室内部质量控制的特点：（1）比较方便简单灵活。实验室内部质量控制都是有实验室内部自行组织实施的，组织者和实施者均为实验室内部的人员。可以根据实验室的实际工作情况进行调整，是比较灵活自由的；如果实验室数据出现

文档之家