槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定
【实验目的】
1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。
2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。
【实验原理】
采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。
【实验材料】
设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。
药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁
【实验步骤】
实验1、芸香苷的提取：
称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。
实验2、芸香苷的精制：
称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。
实验3、芸香苷的水解和鉴定：
取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。（可省略重结晶过程）
4、鉴定：
（1）糖的纸色谱鉴定：
样品：取上述滤去槲皮素的水解母液20ml，搅拌加饱和的氢氧化钡水溶液中和至pH7，滤去沉淀，滤液浓缩至1～2ml得样品液对照品：葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液
支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm×7cm）
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）上层液
显色剂：苯胺-邻苯二甲酸试剂喷雾，105℃烘10分钟，显棕色或棕红色斑点
（2）芸香苷、槲皮素的纸色谱鉴定：
样品：1）自制芸香苷乙醇液
2）自制槲皮素乙醇液体
对照品：1）芸香苷标准品乙醇液
2）槲皮素标准品乙醇液
支持剂：新华色谱滤纸（中速15cm×7cm）
展开剂：1）正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）上层液
2）15%醋酸水溶液
显色剂：1）先在可见光下观察斑点颜色，然后在紫外灯下观察斑点颜色
2）经氨气熏后再观察
3）喷三氯化铝试剂后再观察
（3）Molish反应：
取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%α-萘酚溶液1 ml 振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。以同法试验槲皮素，比较二者的不同。
（4）酸性实验：
取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷1mg，第二组每试管中加入槲皮素1mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。
（5）镁粉-盐酸反应：
取芸香苷1mg，加乙醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg，滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。
（6）三氯化铝反应：
取芸香苷1mg，加甲醇1～2 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液2～3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。
（7）醋酸镁反应：
取芸香苷1mg，加甲醇1～2 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2～3滴，呈黄色反应。以同法试验槲皮素。
【实验说明】
1、硼砂的作用，芸香苷分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在
空气中能缓缓氧化变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。硼酸盐能与邻二酚羟基结合，达到保护的目的。但其价格较高，工业上用较大量的石灰加少量硼砂，同样达到提高质量要求。
2、加入石灰乳，使pH8～9，既可以达到碱溶解芸香苷的目的，又可以除去
槐米中含有的大量多糖黏液质。但pH不能过高，碱处理时间尽短，以减少酚类氧化分解。
3、用浓盐酸调pH4～5，pH过低会使芸香苷降低得率。
4、提取时也可以不加碱，直接用沸水提取，得率也比较高。
【实验思考】
1、芸香苷经硫酸溶液水解后得到槲皮素沉淀，试分析其水解母液加饱和的
氢氧化钡水溶液的目的是什么？
2、为什么用碱溶酸沉法提取芸香苷时，要注意pH的控制？
实验4从八角中提取茴香油
水蒸汽蒸馏法
将新鲜的八角枝叶或干果剪碎后,用分凝器、冷凝器、油水分离器合理组合快速分离制备八角茴香油,此法可使油水自动快速分离,操作简便,提油时间短、得油率高,油质量高。
主要仪器设备及安装: 切碎机(1 台)，蒸馏锅，分凝器，冷凝器，油水分离器
取50g新鲜八角枝叶或干果于烧瓶中（八角干果加蒸馏水浸泡过夜），用水蒸气蒸馏提取，直至馏出液约500mL为止，共耗时4h，放置冷却后用NaCl 盐析，分出油状物，再用无水Na2S04干燥，称重，计算产率。
实验从槐花米中提取芦丁 一、实验目的 1．学习黄酮苷类化合物的提取方法。 2．掌握趁热过滤及重结晶等基体操作 二、实验原理 芦丁（Rutin ）又称芸香苷（Rutioside ）有调节毛细血管壁的渗透性的作用，临床上用作毛细血管止血药，作为高血压症的辅助治疗药物。 芦丁存在于槐花米和荞麦叶中，槐花米是槐系豆科槐属植物的花蕾，含芦丁量高达12%~16%，荞麦叶中含8%，芦丁是黄酮类植物的一种成分，黄酮类植物成分是存在于植物界并具有以下基本结构的一类化合物：就黄色色素而言，它们的分子中都有一个酮式羰基又显黄色，所以称为黄酮。 黄酮的中草药成分几乎都带有一个以上羟基，还可能有甲氧基、烃基、烃氧基等其它取代基，3、5、7、3'、4'、几个位置上有羟基或甲氧基的机会最多，6、8、1'、2'、等位置上有取代基的成分比较少见。由于黄酮类化合物结构中的羟基较多，大多数情况下是一元苷，也有二元苷。芦丁是黄酮苷，其结构如下： 黄酮骨架 O O 1 23 4 5 6 782'3'4' 5'6' 芦丁（Rutin ） 三、基本操作训练 【操作步骤】 1、 称取3g 槐花米于研钵中研成粉状，置于50mL 烧杯中，加入30mL 饱和石灰水溶液，加热至沸，并不断搅拌，煮沸一刻钟后，抽滤，滤渣再用20mL 饱和石灰水溶液煮沸10min ，合并滤液用15%盐酸中和，调节PH=3-4,放置1-2小时,使沉淀，抽滤，水洗，得芦丁粗产物。 2、 将制得的芦丁粗品置于50ml 烧杯中，加入30ml 水，加热至沸，并不断搅拌，并慢慢加
入10mL饱和石灰水溶液，调节PH=8-9，等沉淀溶解后，趁热过滤，滤液置于50mL烧杯中，用15%盐酸调PH=4-5，静置30min，芦丁以浅黄色结晶析出，抽滤，水洗，烘干得芦丁纯品。 【实验流程】 槐花米粉末 粗提物 溶液 滤液 酸化，静置，过滤 结晶 芦丁 四、实验关键及注意事项 1、加入饱和石灰水溶液既可以达到碱溶解提取芦丁的目的，又可以除去槐花米中大量多糖 粘液质。也可直接加入150mL水和1gCa(OH) 2 粉末，而不必配成饱和溶液，第二次溶解时只需加100mL水。 2、pH值过低会使芦丁形成盐而增加了水溶性，降低收率。 五、主要试剂及产品的物理常数：（文献值） 六、产品性状、外观、物理常数：（与文献值对照） 黄色粉末 七、产率计算 产率 = 9%
有机综合实验综述 编号 有机综合实验综述 题目：槐花米中芸香苷及槲皮素的提取食品学院食品科学与工程专业 学号1010314428 学生姓名赵维阳 指导教师毛明富 二〇一六年六月
目录 目录 摘要 (1) 第1章槐花米 (1) 1.1 简介及来源 (1) 第2章芸香苷 (1) 2.1 简介及来源 (1) 2.2 功能 (2) 2.3 提取方法 (3) 2.3.1 碱提取法 (3) 2.3.2 醇提取法 (3) 2.3.3 回流提取 (3) 2.3.4微波与超声交替提取法 (4) 2.3.5超临界CO2萃取法.................................................................................. 错误！未定义书签。第3章槲皮素 . (4) 3.1 简介及来源 (4) 3.2 功效 (5) 3.3 芸香苷水解制槲皮素 (5) 3.3.1 中药动态提取法 (5) 3.3.2酸水解法 (5) 3.3.3 星点设计效应面法 (5) 参考文献 (9)
芸香苷 槐花米中芸香苷及槲皮素的提取 摘要 本文就槐花米中芸香苷和槲皮素的提取展开讨论，介绍了槐花米、芸香苷以及槲皮素的来源和性能。通过查找资料，深入了解了芸香苷及槲皮素的提取方法：芸香苷的提取方法主要有水提取法、碱提取法、微波法、超声波法、超临界二氧化碳提取法等。分析比较各个方法的优缺点，选取收益较高的提取方法。槲皮素是芸香苷的水解产物，也属于黄酮类化合物。 第一章槐花米 1.1 简介及来源 槐米广义是为豆科植物槐（Sophora japonica L.）的干燥花蕾及花。中国各地区产，以黄土高原和华北平原为多。夏季花未开放时采收其花蕾，称为“槐米”；花开放时采收，称为“槐花”。采收后除去花序的枝、梗及杂质，及时干燥，生用、炒用或炒炭用。花蕾卵形或椭圆形，长2—6mm，直径约2mm。花萼黄绿色，下部有数条纵纹。萼的上方为黄白色未开放的花瓣。花梗细小。体轻，手捻即碎。无臭，味微苦涩。 [别名] 白槐、槐花、槐花米、槐籽（中医将槐的花与蕾做相同使用）。 [来源] 为豆科植物槐Sophora japonical的花蕾。 槐米主产于河南、山东、山西、陕西、安徽、河北、江苏等地，近年来宁夏、甘肃等地也已有规模，越南也有大面积的栽种。 [采制] 夏季花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质。 [性状] 花蕾卵形或椭圆形，长2—6mm，直径约2mm。花萼黄绿色，下部有数条纵纹。萼的上方为黄白色未开放的花瓣。花梗细小。体轻，手捻即碎。无臭，味微苦涩。 [性味] 性微寒，味苦。 [功能主治] 凉血止血，清肝泻火。用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕。用量4.5—9g。 [附注] 花(槐花)凉血止血；果实(槐角)清热泻火。 染料作用：槐米也是一种天然的植物染料，不仅可以做食品的色素，还可以做纺织品的染料。 第二章芸香苷 2.1 简介及来源 芸香苷在自然界的花、叶、果实中广泛存在，在槐米、罗布麻中含量比较高。在槐花米中，含量约为15%，是一种具有生理活性的黄酮类化合物。芸香苷又名芦丁，为淡黄色小针状结晶，含3个结晶水的芸香苷熔点为174～178℃，无水物的熔点为188℃。溶解情况：冷水1:8000（一份样品需8000分冷水溶解）；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂；易溶于碱液中呈黄色，酸化后析出，可溶于浓硫酸和浓盐酸呈棕黄色，加水稀释析出。
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1.芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
题目: 槐米中芦丁的提取及含量测定
目录 摘要 (3) 关键词 (3) 前言 (3) 1 槐米的简介 (3) 2 芦丁的简介 (4) 1 实验材料、仪器与试剂 (5) 1.1 实验材料 (5) 1.1 实验仪器 (5) 1.2 实验试剂 (5) 2 实验原理及实验条件 (5) 2.1 实验相关原理 (5) 2.2 实验条件的选择 (7) 3实验方法和结果 (7) 3.1芦丁的提取 (7) 3.2芦丁的精制 (7) 3.3芦丁的鉴定 (7) 3.3.1呈色反应 (7) 3.3.2薄层色谱检识 (8) 3.4芦丁的含量测定 (8) 3.4.1对照品溶液的配制 (8) 3.4.2标准曲线的制备 (9) 3.4.3样品测定 (10) 3.4.4样品稳定性试验 (10) 3.4.5加样回收率实验 (10) 4 讨论与小节 (11) 5 参考文献 (11) 6综述 (12)
槐米中芦丁的提取及含量测定 摘要：目的：测定槐米中芦丁的含量，掌握芦丁的提取工艺。方法：采用碱提酸沉法获得芦丁粗提物，利用多次碱提酸沉法获得较纯的芦丁，再通过显色实验以及薄层色谱鉴定槐米提取液中的芦丁，并通过标准曲线法测定提取物中芦丁的含量。结果：吸光度与标准溶液的浓度呈良好的线性关系，回归方程为A=30.1081C+0.0184,采样率为96％，没有太大的区别。结论：该方法易于操作，实验原理比较简单，薄层色谱与分光光度相结合实现了槐米提取液中芦丁的鉴定与含量测定。 关键词：槐米芦丁碱提酸沉法含量测定 Abstract:Objective: to determine the content of luding in acacia and the extraction process of luding.Methods: alkali, acid sinking method to obtain crude extract rutin using multiple alkali acid sinking method to obtain a more pure rutin, again through the color experiment and TLC identification of rutin in the sophora japonica extract, and through the standard curve method for determining the content of rutin in extracts.Results: the concentration of standard solution and absorbance had good linear relationship, the regression equation A = 30.1081 + 0.0184 C, R = 0.9997, the sampling rate is 96%, not much difference.Conclusion: this method, easy to operate, the experiment principle is simple, thin layer chromatography combined with a spectrophotomet Key Words：Sophora japonica rutin alkali extraction and acid precipitation content determination
实验四槐花米中芸香苷的提取及槲皮素的制备与检识（一）目的要求 学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求： 1．通过芸香苷提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 2．掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。 3．掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。 （二）主要化学成分的结构及性质 槐花米为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花蕾，主要含芸香苷（芦丁），含量高达12％～20％，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖；槐花亦含芸香苷，但含量较槐米为少。 芸香苷(rutoside) 分子式C27H30O16，分子量610.51。淡黄色针状结晶，mp.177～178℃，难溶于冷水（1∶8000），略溶于热水（1∶200），溶于热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶30）、冷乙醇（1∶650），难溶于醋酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 槲皮素(quercetin) 又称槲皮黄素，分子式C15H10O7，分子量302.23。黄色结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1∶23）、冷乙醇（1∶300），可溶于甲醇、丙酮、醋酸乙酯、冰醋酸、吡啶等溶剂，不溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿中，几不溶于水。 O O H O H O O R H O O H 芸香苷R=－葡萄糖－鼠李糖 槲皮素R=H （三）实验原理 由槐花米中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。
·生物技术· 北方园艺２０１３（０４）：９２～ ９５第一作者简介：张志美（１９８６－），女，在读硕士，研究方向为植物资源学与分子生物学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｚｈｉｍｅｉ１９８６＠１２６．ｃｏｍ．责任作者：常缨（１９７０－），女，博士，教授，博士生导师，研究方向为植物资源学与分子生物学，现主要从事植物学的教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｉｎｇｃｈａｎｇ １９７０＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．基金项目：国家自然科学基金资助项目（３１０７０２９１）。收稿日期：２０１２－１１－０５ 高效液相色谱法测定香鳞毛蕨中芸香苷及 槲皮素含量的研究 张志美，常 缨 （东北农业大学生命科学学院，黑龙江哈尔滨１５００３０ ） 摘 要： 以不同月份采集的黑龙江省五大连池火山岩生长的香鳞毛蕨为试材，采用高效液相色谱法（Ｈ ＰＬＣ）测定香鳞毛蕨中黄酮类物质芸香苷和槲皮素含量的动态变化。结果表明：２种成分均达到基线分离，芸香苷和槲皮素线性范围分别为０．０３３～０．１６７μｇ（ｒ＝０．９９９２）和０．００１６～０．００９６μｇ（ ｒ＝０．９９９３），与峰面积呈现良好的线性关系；平均加样回收率分别为９９．７８％（ＲＳＤ＝１．６９％）、９９．１０％（ＲＳＤ＝０．７５％）。整株香鳞毛蕨中芸香苷含量最大值出现在９月份，槲皮素含量最大值出现在１０月份， 并且芸香苷的含量远高于槲皮素；香鳞毛蕨地上部分芸香苷与槲皮素含量远高于地下部分。该研究所建的测定方法快速、准确，并准确测定出了香鳞毛蕨中芸香苷和槲皮素含量的动态变化。 关键词：香鳞毛蕨；芸香苷；槲皮素；Ｈ ＰＬＣ；含量中图分类号：Ｑ ９４６．８３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－０００９（２０１３）０４－００９２－０４ 香鳞毛蕨［Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ ｆｒａｇ ｒａｎｓ（Ｌ．）Ｓｃｈｏｔｔ］系鳞毛蕨科鳞毛蕨属多年生蕨类植物。香鳞毛蕨的生长环境极其特殊，主要分布于火山喷发后形成的熔岩台地或滑 石坡等地，且生长缓慢［ １ ］，在我国以黑龙江省为分布中心，尤以五大连池地区分布面积较大。香鳞毛蕨具有很 强的生理活性，据北方民间记载，香鳞毛蕨能治疗多种 皮肤病并具有抗炎镇痛等药理作用，其中对牛皮癣和关节炎的治疗效果非常显著［２ ］。随着我国中医事业的蓬勃发展，天然野生药用蕨类植物的开发利用研究已成为 植物资源学领域的研究热点之一［ ３ ］。近年来关于香鳞毛蕨化学成分、药理作用方面的研究明显增多［ ４－６ ］。国内外学者从香鳞毛蕨中已分离得到的化学成分有间苯 三酚类、黄酮类、萜类、苯丙素类和挥发油类等［ ７－８ ］，李博等［９ ］已从香鳞毛蕨中分离得到黄酮类化合物（Ｆｌａ－ｖｏｎｏｉｄｓ）芸香苷（Ｒｕｄｉｎ）和槲皮素（Ｑ ｕｅｒｃｅｔｉｎ）成分。现代药理研究认为，芸香苷和槲皮素具有抗脑缺血、抗自由 基、镇痛、祛痰、抗菌等多种药理作用［１０－１１ ］，特别是槲皮素具有抗纤维化、抗肿瘤、降低血压、抗病毒、镇痛及止泻 等多种功能［ １２－１３ ］。前人已对香鳞毛蕨的有效药用成分进行了分离鉴定研究，但关于其有效成分含量测定鲜见报道。该试验首先建立了测定香鳞毛蕨中黄酮类物质芸香苷和槲皮素含量的高效液相色谱方法（ＨＰＬＣ），并对其含量的动态变化进行了测定，以期为采收香鳞毛蕨原料提供科学依据。 １ 材料与方法 １．１ 试验材料 １．１．１ 供试材料 香鳞毛蕨于２０１１年８月至２０１２年５月采自黑龙江省五大连池二池火山岩。用铁铲将全株香鳞毛蕨挖出，装入封口袋中，做好标记，最后放入冰盒中带回。根据采集时间将试验样品依次命名为：２０１１０８组、２０１１０９组、２０１１１０组、２０１１１１组、２０１１１２组、２０１２０１组、２０１２０２组、２０１２０３组、２０１２０４组和２０１２０５组，每试验组为根茎大小一致的香鳞毛蕨植株各３０株。 １．１．２ 仪器和试剂 美国Ｗａｔｅｒｓ６００型高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ２８４７型紫外检测器，Ｗａｔｅｒｓ２７０７自动进样器；０．４５μｍ有机系超微滤膜；芸香苷（批号１０００８０－２００７０７ ）、槲皮素（批号１０００８１－２００９０７）对照品均购买于中国药品生物制品检定所；甲醇为美国ＤＩＫＭＡ公司的色谱纯，其它试剂均为分析纯；使用娃哈哈纯净水。 １ ．２ 试验方法１ ．２．１ 供试品溶液的制备 选取各试验组中根茎大小一致的香鳞毛蕨植株各３０株， 自然干燥，平均分成３份，２ ９
槐花米中芸香苷提取及槲皮素的分离与检识[适用对象]药学专业 [实验学时] 18学时 一、实验目的 学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求： （1）通过芸香苷提取与精制，掌握沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。 （2）掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。 （3）掌握黄酮苷和黄酮苷元的分离。 （4）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。 二、实验原理 由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。 三、仪器设备 单口园底烧瓶，冷凝管，铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，微量抽滤器，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。 四、相关知识点 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含
芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。 芸香苷（rutoside ），分子式C 27 H 30 O 16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。难溶于冷水（1﹕8000），略溶于热水（1﹕200），溶于热甲醇（1﹕7），冷甲醇（1﹕100），热乙醇（1﹕30），冷乙醇（1﹕650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 槲皮素（quercetin ），分子式C 15 H 10 O 7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1﹕23），冷乙醇（1﹕300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。 O O O H OH OH OH OR 五、实验步骤 （一）芸香苷的提取（水提取法） 称取槐花米50克，置1000 ml 烧杯中，加沸水800 ml ，加热保持微沸1小时，趁热用棉花过滤，滤渣再加600 ml 水煮沸1小时，趁热过滤，合并2次滤液，放置夜，析出大量淡黄色沉淀，抽滤，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空气中干燥即得粗芸香苷，称重计算得率。 （二）芸香苷的水解
实验二槐米中芸香苷的精制、水解与检识 【实验目的】 1、学会运用重结晶的方法精制芸香苷,并进行水解? 2、学会用显色反应检识黄酮类化合物. 【实验原理】 采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性,能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出?芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离?【实验材料】 设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、新华色谱滤纸、试管、试管架。 药品：芸香苷粗品、浓盐酸、蒸馏水、2僦酸、95聽醇、氨水、三氯化铝、浓硫酸、a -萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉醋酸镁 【实验步骤】 1. 芸香苷的精制： 称一定重量的粗品，按约1 : 200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或60T?70 C干燥， 得精制芸香苷，称重。计算得率。 2. 芸香苷的水解： 取芸香苷1 g,研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2僦酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇(95%乙醇约15 ml)重结晶即得精制槲皮素。 4、检识:
(1) Molish 反应： 取芸香苷少许置小试管中，加乙醇0.5 ml，加10%a -萘酚溶液1 ml振摇使溶解，沿管壁徐徐加入浓硫酸约0.5 ml，静置。观察两层溶液的界面变化，出现紫色环者为阳性。以同法试验槲皮素，比较二者的不同。 (2) 酸性实验： 取小试管四支为一组，共二组，第一组每管中加入芸香苷 1 mg，第二组每试管中 加入槲皮素1 mg，每组分别加稀氨水、5%碳酸氢钠溶液、5%碳酸钠溶液和1%氢氧化钠溶液各2 ml，振摇后，观察各管溶解情况，溶解的溶液应呈黄色。再加盐酸数滴，黄色应褪去或变浅，并有沉淀或浑浊析出。 (3) 镁粉-盐酸反应： 取芸香苷1 mg,加乙醇1?2 ml在水浴上加热溶解，加镁粉约50mg滴加几滴浓盐酸，溶液由黄色渐变红色者，表示有黄酮类化合物。以同法试验槲皮素。 (4) 三氯化铝反应： 取芸香苷1 mg,加甲醇1?2 ml在水浴上加热溶解，加入1%三氯化铝甲醇溶液2?3滴，呈鲜黄色，以同法试验槲皮素。 (5) 醋酸镁反应： 取芸香苷1 mg,加甲醇1?2 ml水浴中加热溶解，加1%醋酸镁甲醇溶液2?3 滴，呈黄色荧光反应。以同法试验槲皮素
综合实验槐花米中芦丁的提取与鉴定 （一）实验目的 (1)通过芦丁的提取与精制，掌握碱溶酸沉法提取黄酮类化合物的原理和操作。 (2)掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷的检识方法。 (3)掌握薄层层析法的操作。 (4)掌握由芦丁水解制取槲皮素的方法。 （二）实验原理 芦丁((rutin)亦称芸香苷（rutinoside），为黄酮苷，广泛存在于植物中，其中以槐花米(为槐树Sophora japnica，的花蕾)和乔麦叶中含量较高。芦丁的主要药理作用有抗炎作用、维P样作用及抗病毒作用，具有维持血管抵抗力，释低其通透性，减少脆性的作用；对脂肪肝有去脂的作用，与谷胱甘肽合去脂作用更明显；对于放射性伤害所引起的出血症也有一定治疗作用；临床上只要作防治高血压的辅助药物，毛细血管性止血药。芦丁水解后可生成槲皮素，槲皮素有一定的平喘作用；此外还有降低血压，增强毛细血管抵抗力，减少毛细血管脆性，降血脂，扩张冠动脉，增加冠状动脉血流量的作用。 槐花米中含芦丁8%~28%，槐花米甲素sophorin A 14% ，槐花米乙素sophorin B 1. 25%，槐花米丙素sophorin C 0. 35%，也含槲皮素quercetin、白桦脂醇betulin，槐二醇sophoradiol等。 本实验以常用中药槐花米为原料，对其主要成分芦丁进行提取分离及鉴定。根据芦丁分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提液加酸后加酸酸化则芦丁游离析出(碱溶酸沉法)，然后也可通过快速柱层析法对粗品进行纯化。 (三)实验步骤 1.芦丁的提取 （1）于250mL烧杯中加入120 mL石灰水溶液，0. 5 g硼砂，置于石棉网上加热至微沸后，加入10g槐花米粗粉，保持微沸60 min(不断搅拌)后，趁热用纱布包裹挤压过滤。滤渣再用100mL石灰水溶液同法操作一次。合并滤液，然后在60∽70℃保温情况下，以15%盐酸液调节pH为3∽4。静置过夜，使沉淀完全。 （2）将静置过夜的滤液的上层清液小心倾倒到烧杯中，剩下的少量液体和沉淀混合物用离心分离法得到沉淀，小心倒出离心管上层清液，再加入蒸馏水，用玻棒搅拌洗涤沉淀，离心，倒出上层清液，重复上述操作，直至倒出的蒸馏水洗液为中性，将离心管和沉淀一起放入烘箱中干燥，称量。
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别 一、实验目的 （1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 （2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 二、实验原理 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下： 水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。 三、实验内容 （一）芦丁(芸香苷)的提取 1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
【实验材料】 槐花米、石灰乳、0.4%硼砂水溶液、浓盐酸、正丁醇、醋酸、氨水、乙醇、70%乙醇、1%氢氧化钠溶液、1%三氯化铝乙醇溶液、2%氯氧化锆甲醇溶液、2%枸椽酸甲醇溶液、10% α-萘酚乙醇溶液、浓硫酸、2%硫酸溶液、葡萄糖标准品、鼠李糖标准品、芸香苷标准品、槲皮素标准品、碳酸钡、氨制硝酸银试液、广泛pH试纸、中速层析滤纸（4cm×15cm）。 【实验原理】 （一）芸香苷 又名芦丁（Rutin），维生素P，紫槲皮苷。分子式C27H30O16，分子量610.51。浅黄色针晶（水），mp.176℃～178℃，[]23 D α+13.82°(乙醇)，[]23Dα-39.43°（吡啶）。在各种溶剂中的溶解度为：难溶于冷水（1∶8000～10000）、可溶于热水（1∶200）、热甲醇（1∶7）、冷甲醇（1∶100）、热乙醇（1∶60）、冷乙醇（1∶650）、可溶于吡啶及碱性溶剂，几乎不溶于苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。由于分子中含有多个酚羟基，易被氧化，在空气中久置会使芸香苷颜色加深，尤其在碱性溶液中更易氧化。 O HO O glu OH OH O rha 芦丁 （二）槲皮素（Quercetin） 又名栎精，槲皮黄素。分子式C15H10O2，分子量 302.23。为黄色针状结晶（稀乙醇），含2分子结晶水，在95℃～97℃成为无水物。mp.314℃（分解）。能溶于冷乙醇（1∶290），易溶于沸乙醇（1∶23），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸及吡啶等溶剂，不溶于水、苯、乙醚、氯仿及石油醚等溶剂。 （三）其他成分 槐花米甲、乙、丙素（Sophorin A、B、C）、白桦脂醇（Betulin）、槐二醇（Sophoradiol）、单宁等。 本实验利用芸香苷分子结构中含有多个酚羟基，显弱酸性，能与碱作用生成盐而溶于碱水，加酸酸化后又能沉淀析出的性质，采用碱溶酸沉淀法进行提取。利用芸香苷在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质，用水作溶剂进行重结晶精制。
天然药物化学实验报告 一、实验题目：槐米中槲皮素的提取分离及结构鉴定 二、实验目的: 通过对该选题进行资料查阅、方案设计、试验、结果分析等，让我自己学到一套系统、完整的槐米药效成分芦丁和槲皮素进行基源鉴定、提取、分离和结构鉴定的方法，并通过此项训练，提高自己的动手操作能力及综合运用自己所学知识的能力，培养自己独立思考、分析问题、解决问题的能力。 掌握槐米中槲皮素的提取及提取方法 了解槲皮素的药理作用及应用价值 掌握槲皮素的纯度检测 掌握槲皮素的结构鉴定的方法 三、实验基本原理： 本实验主要利用黄酮类化合物虽然有一定的极性，可溶于水，但却难溶于酸性水，易溶于碱性水，故可用碱性水提取，再将碱水提取液调成酸性，黄酮苷类即可沉淀析出。以槐米为原料，采用煎煮法提取槐米有效成分芦丁，然后酸溶液水解获得槲皮素粗品，乙醇重结晶获得槲皮素精品。 四、实验所用试剂、仪器的型号及生产厂家： （一）实验试剂，见下表： 序号名称数量规格生产厂家 1 95%乙醇溶液25ml 500ml／瓶 AR 天津天力 2 浓H2SO4 12ml 500ml／瓶 AR 天津天力 3 甲醇10ml 500ml／瓶 AR 天津天力 4 无水乙醇43ml 500ml／瓶 AR 天津天力 5 纯净水1500ml 18L/桶万家纯水 6 硅胶GF254 30g 500g／瓶 青岛海浪 薄层层析
（二）实验仪器，见下表： 序号名称数量型号生产厂家 1 电子天平1台IM-B200 2 余姚市纪铭称量校验设备有 限公司 2 圆底烧瓶1个GG-17 1000ml 蜀牛 3 烧杯1个GG-17 1000ml 蜀牛 4 烧杯1个 GG-17 500ml 环球 5 烧杯1个GG-17 250ml Jing Xing 6 量筒1个100ml BOMEX 7 量筒1个10ml 旌湖 8 直型冷凝 管 1个BOMEX 9 75?弯管1个 10 橡胶管2条 11 移液管1个10ml 12 玻璃棒1个直径7mm 长40cm 高邮亚泰 13 尾接管1个BZ24129 HENG TAJ 14 布氏漏斗1个 15 抽滤瓶1个GG-17 500ml 蜀牛 16 滤纸1张 17 玻璃漏斗1个 18 研钵1套 19 胶头滴管1个 20 薄层板10个 21 展开缸1个P-1 100×100 上海信谊仪器 厂 22 紫外光谱 仪 1台 UV-8三用紫外分 析仪 无锡科达仪器 厂 23 熔点测定 仪 1台 X-6显微熔点测定 仪 北京泰克仪器 有限公司 24 真空泵1台SHD-III型循环水 式多用真空泵 保定高新区阳 光科教仪器厂 25 电热套1台98-1-C型数字控 温电热套 天津市泰斯特 仪器有限公司
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定 一、实验目的 1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。 2．掌握重结晶及过滤等基本操作。 3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。 二、实验原理 芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量 较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦 丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如 下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油 醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和 冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。 芦丁在不同溶剂中的溶液度： 水CH3OH CH3CH2OH 吡啶
冷0.0013 l.0 0.36 8.5 热0.55 11.2 3.5 易溶 芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。 槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。 槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点 313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯 等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为 4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下： 槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ， 359nm。 三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水 洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
实验一天然产物化学成分系统预试验 天然产物中所含的化学成分种类很多，在深入研究之前应首先了解其中含有哪些类型的化学成分，如生物碱、皂苷、黄酮类等等。这就需要进行各类化学成分的系统定性预试验。或根据研究的需要进行单项预试法来初步判断。 一、实验目的与要求 掌握未知成分的天然产物是怎样初步提取分离的，熟悉各主要成分的试管试验、沉淀反应和纸层析、薄层层析的方法并根据试验结果判断含有什么类型的化学成分。 二、基本原理 利用各类成分的颜色反应和沉淀反应，对天然产物的提取液进行检查可以初步判断其中的化学成分。由于提取液大多数颜色较深，影响对颜色变化的观察，可以使用薄层层析（TLC）或纸层析（PC）等方法对天然产物的提取液进行初步分离，再进一步检查。 三、实验内容： 利用不同成分在各种溶剂中的溶解度的不同，一般可采用以下3种溶剂分别提取，试验。 1．水浸液：取中草药粗粉5 g加水60 ml，在50~60℃的水浴上加热1小时，过滤，滤液进行下列试验。
下
糖鉴定 （1）α-萘酚一硫酸试剂检查还原糖。 ①溶液I：10％α-萘酚乙醇溶液。溶液II：硫酸。取1ml样品的稀乙醇溶液或水溶液，加入溶液I 2滴～3滴，混匀，沿试管壁缓缓加入少量溶液II，二液面交界处产生紫红色环为阳性反应。 （2）斐林试剂检查还原糖。 溶液I：6．93g结晶硫酸铜溶于100ml水中。溶液II：34．6g酒石酸钾钠、10g氢氧化钠溶于100ml水中。取1ml样品热水提取液，加入4滴～5滴用时配制的溶液I、II等量混合液，在沸水浴中加热数分钟，产生砖红色沉淀为阳性反应。如检查多糖和苷，取1ml样品水提液，加入1m110% 盐酸溶液，在沸水浴上加热10min，过滤，（成盐去除杂质）再用10％氢氧化钠溶液调至中性，按上述方法检查还原糖。或者直接用高效液相色谱看色谱图。 酚类鉴定试剂 （1）三氯化铁试剂检查酚类化合物、鞣质1％～5％三氯化铁水溶液或乙醇溶液，加盐酸酸化。取1ml样品的乙醇溶液，加入试剂1滴～2滴，显绿、蓝绿或暗紫色为阳性反应。作色谱显色剂用，喷洒后，显绿或兰色斑点为阳性。 2．乙醇提取液
槐米中芸香苷（芦丁）的提取与鉴定 【实验目的】 1、学会运用碱溶酸沉法，从槐米中提取、精制芦丁，并进行水解。 2、学会用显色反应及纸色谱法检识黄酮类化合物。 【实验原理】 采用碱溶酸沉法提取，其原理是芸香苷结构中含有酚羟基，具酸性，能溶于碱水，当加入酸溶液后，则芸香苷沉淀析出。芸香苷的精制是利用其可溶于热水，难溶于冷水的性质与杂质分离。 【实验材料】 设备：电炉、托盘天平、500 ml烧杯、量筒、玻璃棒、移液管、纱布、温度计、滴管、抽滤装置、研钵、250 ml圆底烧瓶、冷凝管、水浴锅、pH 试纸、新华色谱滤纸、紫外灯、展开筒、试管、试管架。 药品：槐米粗粉、浓盐酸、蒸馏水、0.4%硼砂、石灰乳、2%硫酸、95%乙醇、氢氧化钡、葡萄糖标准品水溶液、鼠李糖标准品水溶液、正丁醇、醋酸、芦丁标准品、槲皮素标准品、氨水、三氯化铝、浓硫酸、α–萘酚、氢氧化钠、碳酸氢钠、碳酸钠、镁粉、苯胺-邻苯二甲酸、醋酸镁 【实验步骤】
实验1、芸香苷的提取： 称取槐米粗粉20g，置500 ml烧杯中，加入0.4%硼砂沸水溶液200 ml，在搅拌下加石灰乳，调至pH8～9，加热微沸20分钟（注意保持pH8～9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用四层纱布滤过。滤渣同样操作再提取一次，合并两次滤液。滤液在60℃～70℃用浓盐酸调至pH5左右，静置过夜使沉淀完全，抽滤，沉淀用蒸馏水洗2～3次至中性，抽干，置空气中晾干，得芸香苷粗品。 实验2、芸香苷的精制： 称一定重量的粗品，按约1∶200的比例悬浮于蒸馏水中，煮沸10分钟使其全部溶解，趁热抽滤，冷却滤液，静置析晶。抽滤，置空气中晾干或60℃～70℃干燥，得精制芸香苷，称重，计算得率。 实验3、芸香苷的水解和鉴定： 取芸香苷1g，研细后置于250 ml圆底烧瓶中，加入2%硫酸溶液100 ml，直火微沸回流约40分钟，至析出鲜黄色沉淀不再增加为止，放冷抽滤，滤液保留作糖检查，沉淀用少量水洗去酸，抽干水分，晾干称重，得粗制槲皮素，然后用乙醇（95%乙醇约15 ml）重结晶即得精制槲皮素。（可省略重结晶过程） 4、鉴定： （1）糖的纸色谱鉴定：
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁（Rutin）亦称芸香甙（Rutisude）,广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、养麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和养麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐（Sophora japonica L）的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~ 16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1. 芦丁（Rutin） 淡黄色细小针状结晶，C ~178C （含三分子结晶），188C （无水物）。 溶解度： 水：1:100（冷），1:200（热） 甲醇：1:100（冷），1:9（热） 乙醇：1:650（冷），1:60（热） 吡啶：1:（冷），易溶（热） 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素（Quercetin） 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313C ~314C （含2分子结晶水），316C （无水物）。溶解度： 乙醇：1:290（无水乙醇），1:23（热） 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210C ~220C （分解）。易溶于水、吡啶，能溶于200咅的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄
槐花米中芸香苷提取及槲皮素的分离与检识[适用对象]环境科学专业 [实验学时]8学时 一、实验目的 学习黄酮类化合物的提取、分离和检识，通过实验要求： （1）通过芸香苷提取与精制，掌握沸水提取黄酮类化合物的原理和操作。 （2）掌握由芸香苷水解制取槲皮素的方法。 （3）掌握黄酮苷和黄酮苷元的分离。 （4）掌握黄酮类化合物的主要性质及黄酮苷、苷元和糖部分的检识方法。 二、实验原理 由槐花中提取芸香苷的方法很多，本实验是根据芸香苷在冷水和热水中的溶解度差异的特性进行提取和精制，或根据芸香苷分子中具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液加酸酸化后则芸香苷游离析出。 三、仪器设备 单口园底烧瓶，冷凝管，铁架台，烧杯，电炉，烘箱、水浴锅、三角烧瓶，微量抽滤器，布氏漏斗，滤纸，试管，层析槽，石棉网，毛细管等。 四、相关知识点 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含
芸香苷（芦丁），含量高达12~20%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。 芸香苷（rutoside ），分子式C 27 H 30 O 16，分子量610.51，淡黄色针状结晶，mp.177~178℃。难溶于冷水（1﹕8000），略溶于热水（1﹕200），溶于热甲醇（1﹕7），冷甲醇（1﹕100），热乙醇（1﹕30），冷乙醇（1﹕650），难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀碱液中。 槲皮素（quercetin ），分子式C 15 H 10 O 7，分子量302.23，黄色针状结晶，mp.314℃（分解）。溶于热乙醇（1﹕23），冷乙醇（1﹕300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，几不溶于水。 O O O H O H O H O H O R 五、实验步骤 （一）芸香苷的提取（水提取法） 称取槐花米50克，置1000 ml 烧杯中，加沸水800 ml ，加热保持微沸1小时，趁热用棉花过滤，滤渣再加600 ml 水煮沸1小时，趁热过滤，合并2次滤液，放置夜，析出大量淡黄色沉淀，抽滤，沉淀用水洗3~4次，抽干置于空气中干燥即得粗芸香苷，称重计算得率。 （二）芸香苷的水解
天然药物化学设计实验 开题报告 题目：槲皮素提取及结构鉴定 学生姓名：舒泉湧 学号： 200804040125 院（系）：生命科学与工程学院 专业：制药工程 指导教师：孔阳
一．【文献综述】 1．1研究意义 我国北部、华南和西南地区等地区都产槐花，尤河北和江苏省产量最为丰富。槐花中含有丰富的黄酮类化合物，其芦丁(nltin)为黄酮中的主要成分，含量为8—20％；槲皮素(quercetin)为芦丁的苷元。芦丁和槲皮素具有抗炎作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗血小板聚集作用；对糖尿病的肾脏、胃肠粘膜、器官缺血损伤具有保护作用；同时还有抗忧郁、抗心胸肥大、降压等作用。因此，对槐花中芦丁和槲皮素的提取分离研究具有非常重要的研究意义。 1．2研究现状 1．2．1槐花性状与产地简介 槐花为豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾；前者习称为“槐花”，后者习称为槐米。落叶乔木，单数羽状复叶互生，长达25 cm，叶柄基部膨大，小叶7—15，卵状长圆形或卵状披针形，长2.55 cm，先端尖，基部圆形或阔楔形，全缘,上面绿色，下面伏生白色短毛。小叶柄长2.5cm；托叶镰刀状，早落。花瓣多数散落，完整花呈飞鸟状，花瓣5枚，黄色或淡棕色，皱缩，卷曲。雄蕊淡黄色，须状，有时弯曲，子房膨大；质轻，气微，味微苦；花期为7—8月。主产于我国北部、华南及西南地区；河北省产量较丰富，江苏主产于镇江、苏州、南京、徐州等地。 1．2．2槐花的化学成份及理化性质 1．2．2．1槐花中的化学成份 槐花中含赤豆皂甙（azukisaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ，大豆皂甙（soyasaponin）I、Ⅲ，槐花皂甙（kaikasaponin）Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。还含黄酮类：槲皮素（quercetin），芸香甙（rutin），异鼠李素（isorhamnetin），异鼠李素-3-芸香糖甙（isorhamnetin-3-rutinoside），山奈酚-3-芸香糖（kaempferol-3-rutinoside）。又含白桦脂醇（betulin），槐花二醇（sophoradiol）。花油中含月桂酸（lauric acid），十二碳烯酸（dodecenoic acid），肉豆蔻酸（myristic acid），十四碳烯酸（tetradecenoic acid）十四碳二烯酸（teradecadienoic acid），棕榈酸（palmitic acid），十六碳烯酸（hexadecenoic acid），硬脂酸（stearic acid），十八碳二烯酸（octadecadienoic acid），十作碳三烯酸（octadecatrienoic