国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 一、用途： 浮游生物（浮游植物、浮游动物）的快速计数、辅助鉴定，以及显微分析等，用于水质等的一体化监测评价。 二、主要配置： 1）、专业级2000万像素彩色CMOS相机（索尼1”大芯片）、三目显微镜标准C接口 2）、AlgaeCTM浮游生物计数分析智能鉴定系统软件（含显微分析软件） 1套3）、品牌电脑（酷睿i5 CPU/4G内存/500G硬盘/19.5"彩显/无线网卡，专业版Windows 7或10操作系统下使用）1台 三、主要性能指标： 1）显微成像：实现手动与自动拍摄。可人工控制显微图片的观察、拍摄、存储并自动拍摄多达200张图片；在自动模式下可实现连续自动等间隔图片拍摄。★具有实时预览饱和警告、自动背景矫正特性。 2）★中文、拉丁文双语显示的浮游生物专家图库：a、浮游藻类类群：蓝藻、绿藻、硅藻、裸藻、黄藻、褐藻、甲藻、隐藻、金藻、红藻、轮藻、灰色藻、定鞭藻、原绿藻、针胞藻共15个门、1588个属、14107个种的藻类；b、浮游动物类群：原生动物鞭毛虫类、原生动物肉足虫类、原生动物纤毛虫类、轮虫类、枝角类、桡足类、腔肠动物、被囊动物、毛颚动物等共24大类、1933个属、9423个种的浮游动物。内
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司容包括浮游生物形态文字介绍、手绘图、显微照片。各图库属种和内容可自行扩充（已有有效图片量已达24.3687万张）。 3）★浮游生物计数：a、浮游生物分类标记：采用不同颜色、不同大小的色圈标 记各种浮游生物，并对200张所拍摄图片内的各种浮游生物，按类点击、自动累积计 数（可合并不同倍率计数结果、多个样品计数结果）；b、优势种自动排序、按门（类）排序、优势群落组成百分比分析；c、可自动计算香农-威纳指数、均匀性指数、藻密 度自动换算、浮游动物丰度自动换算；d、按大量形状模型来辅助计算浮游生物的生物量（内置34种几何模型，通过测量少量参数即可计算个体/细胞体积）。内置常见淡 水藻、常见海洋藻等计数表，并可自行编辑、导出、导入计数表。数据管理：自动保 存每批显微照片、统计标识和统计数据；提供报告编写模板、文本输入、打印预览。 微囊藻分析模块能自动学习与分析团状微囊藻群体含细胞数，实现颗粒或单细胞 微藻自动计数。 4）★藻类、浮游动物智能鉴定：具有按相似度自动比对浮游生物图像的图像式智能搜索特性。通过形态学搜索、关键词搜索、常见浮游生物搜索、分类学搜索，经图像、文字对比，快速鉴定浮游生物。能自动索引浮游生物的用户计数表成所在流域小 图库，使【以图搜图】更快捷。 5）浮游生物形态测量功能：a、视野面积、藻群体面积、浮游动物个体面积测量； b、细胞直径、藻丝、鞭毛长度、浮游动物体长及触角测量； c、枝角分枝角度测量等。
山西梁汾醋业有限公司 文件类别及编号：LF-GC-01 版次共页第页 菌落总数测定的标准操作规程 1. 目的 规范山西老陈醋菌落总数测定的操作规程，保证山西老陈醋产品的质量。 2. 适用范围 酿造食醋和配制食醋菌落总数的测定。 3. 仪器设备 恒温培养箱，冰箱，恒温水浴箱，天平（0.1g）,均质器，振荡器；无菌吸管1ml(0.01刻度)、10ml(0.1ml刻度)或微量移液器及吸头；无菌锥型瓶，250ml/500ml; 无菌培养皿：直径90mm；PH计或精密PH试纸；放大镜或菌落计数器 4.培养基和试剂 4.1平板计数琼脂培养基， 成分： 胰蛋白胨 5.0g 酵母浸膏 2.5g 葡萄糖 1.0g 琼脂15.0g 蒸馏水1000ml PH7.0±0.2 制法：将上述加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节PH。分装试管或锥型瓶，121℃高压灭菌15min。 4.2磷酸盐缓冲液
成分： 磷酸二氢钾（KH 2PO 4 ） 34.0g 蒸馏水500ml PH 7.2 制法： 贮存液：称取34.0g磷酸二氢钾溶于500ml蒸馏水中，用大约175ml的1mol/L 氢氧化钠溶液调节PH,蒸馏水稀释至1000ml存于冰箱。 稀释液：取贮存液1.25ml,用蒸馏水稀释至1000ml,分装于适宜容器中，121摄氏度高压灭菌15分钟。 4.3无菌生理盐水 成分： 氯化钠8.5g 蒸馏水1000ml 制法：8.5克氯化钠溶于100ml蒸馏水中121摄氏度高压灭菌15分钟。 5 检验程序
6操作步骤 6.1样品的稀释 6.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1min～2min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 6.1.2液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）
菌落总数检测中的注意要点 菌落总数测定 一、茵落总数的概念和测定意义 菌落(colony)是指细菌在固体培养基上发育而形成的能被肉眼所识别的生长物，它是由数以万计的相同细菌聚集而成的，故又有细菌集落之称。 菌落总数是指在被检样品的单位重量(g)、容积(m1)或表面积(clni)内，、所含能于某种周体培养基上，在一定条件下培养后所生成的细菌集落的总数。 菌落总数主要是作为判定食品被细菌污染程度的标记，也可以应用这一方法观察食一中细菌的性质以及细菌在食品中繁殖的动态．以便对被检样品进行卫生学评价时提供科学依据． 二、茵落总数测定的几项说明 1．菌落总数的测定。是以检样中的细菌细胞和营养琼脂混合后，每个细菌细胞都能形成一个可见的单独菌落的假定为基础的。由于检验中采用37℃于有氧条件下培养(空气中含氧约20％)，因而并不能测出每g或ml检样中实际的总活菌数，厌氧菌、微嗜氧菌和冷营菌在此条件下不生长，有特殊营养要求的一些细菌也受到了限制，因此所得结果，只包括一群能在普通营养琼脂中发育、嗜中温的、需氧和兼性厌氧的细菌菌落的总数。 2．鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个，成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在营养琼脂平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因此平板上所得需氧和兼性厌氧菌菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容量或表面积内的菌落数或菌落形成单位数(colony forming units，CFU)报告之。 3．每种细菌都有它一定的生理特性，培养时，应用不同的营养条件及其他生理条件(如温度、培养时间、PH、需氧性质等)去满足其要求，才能分别将各种细菌都培养出来。因此，要得到较全面的细菌菌落总数，应将检样接种到几种不同的非选择性培养基上，并培养在不同条件下，如温度，氧气供应等。但国家颁发的食品卫生标准对不同食品的菌落总数的规定，都是根据用普通营养琼脂进行需氧培养所得的结果确定的，因此在食品的一般卫生学评价中并不要用几种不同的非选择性培养基培养。 三、茵落总数的测定 测定食品中菌落总数时，是将食品检样做成几个不同的lO倍递增稀释液，然后从各个稀释液中分别取出一定量在平皿内与营养琼脂相混合，经培养后，按一定要求计算出皿内琼脂平板上所生成的细菌集落数，并再根据检样的稀释倍数，计算出每g或m1样品中所含细菌菌落的总数。 四、菌落总数测定中的一些要求和规定 为了正确地反映食品中各种需氧和兼性厌氧菌存在的情况，检验时必须遵循以下一些要求和规定。
产品说明 一、概述 XK97-A型菌落计数器是一种数字显示式半自动细菌检验仪器。由计数器、探笔、计数池等部分组成。计数器采用CMOS集成电路设计制造。黑色纵深背景式记数池内，采用节能环形荧光灯侧射照明，菌落对比清楚。按照细菌计数检验规程规定，仪器显示器设计为三位数，当一只培养皿中菌落生长数超过300个时，应将检验样品稀释重作，以保证计数的准确性。本仪器可减轻实验人员的劳动强度,提高工效和工作质量。产品广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、卫生用品、饮用水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。是各级卫生防疫站、环境监测站、食品卫生监督检验所、医院、生物制品所、药检所、食品厂、日化厂及大专院校、科研单位实验室的必备仪器。 二、主要参数 ·计数器容量：0～999 ·光源灯功率：16W ·总功耗：＜20W ·电源电压：220V±10％，50Hz ·体积：280×230×90 ·重量：1.4kg 三、使用方法 a .接通电源，拨动开关计数池内灯亮，显示屏显示“001”，将探笔插头插入仪器的插孔内，按下“复位”键调零使仪器进入工作状态。 b.放入待检培养皿。 c.用探笔在培养皿底面对所有的菌落逐个点数。每点一个应听到“嘟”声才说明有效，否则应重点。此时，点到的菌落被标上颜色，显示数字自动累加。 d.用放大镜仔细检查，确认点数无遗漏，计数即已完毕。 e.显示屏内的数字即为该培养皿的菌落数。 f.记录数字后取出培养皿。按“复位”键，显示屏进入初始状态。 四、注意事项 a.仪器应放置在平整牢固的台面上使用。 b.点数菌落时，探笔不要过于倾斜,轻轻点下至有弹跳感时，数字即被输入。 c.仪器应防潮、防剧烈震动、防直接日光曝晒、防酸碱侵蚀,用后应加防尘罩。 d.注意防止细菌培养物污染计数池。 e.仪器及探笔均不能随意拆卸。若发现故障，应请有经验的技术人员检修。
A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST ）肉汤 A.1.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨20.0 g 氯化钠5.0 g 乳糖5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75 g 月桂基硫酸钠0.1 g 蒸馏水1 000 mL pH 6.8±0.2 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节pH 。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL 。121 ℃高压灭菌15 min 。
菌落总数检验操作规程 一、目的 建立菌落总数检验的标准操作程序，使操作过程规范化。 二、适用范围 适用于菌落总数的检验操作。 三、职责 1.检验人员 严格按检验操作规程进行检验。 2.QC主管 监督检查执行情况。 四、程序 1.范围 本方法适用于食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定 2.术语和定义 菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 3. 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：
3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。 3.2冰箱：2 ℃～5 ℃。 3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 3.4天平：感量为0.1 g。 3.5均质器。 3.6振荡器。 3.7无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。 3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。 3.9无菌培养皿：直径90 mm。 3.10 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 3.11放大镜或和菌落计数器。 4.培养基和试剂 4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。 4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2 4.3 无菌生理盐水：见附录A中A.3。 5.检验程序 菌落总数的检验程序见图1。 图1 菌落总数的检验程序 6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液 6.1.3用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支
细菌总数检测操作规程 1 原理 试样经过处理，稀释至适当浓度，在一定条件（如使用特定的培养基，在温度30℃±1℃培养72h±3h等）下培养后，所得1g（mL）试样中所含细菌总数。 2 试剂与仪器 2.1 所用器具 三角烧瓶、玻璃珠、具塞试管、培养皿、1000μL枪头、5mL枪头、称量勺、接种环、接种针、移液器 2.2 仪器：分析天平、恒温培养箱、微型振荡器、超净工作台、高压灭菌锅 2.3 所用试剂和培养基 营养琼脂 取营养琼脂32.0g，加入蒸馏水1L，搅拌加热至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌15min，备用。 3、操作步骤 3.1配制0.85%生理盐水。 称取氯化钠8.5g溶于1000mL蒸馏水中。 3.2三角烧瓶加入生理盐水90mL和玻璃珠，试管中加入生理盐水9mL，121℃灭菌30min。（三角烧瓶个数与样品数量一致，试管数量与稀释次数相关） 3.3将1000μL枪头、培养皿、5mL枪头、称量勺，121℃灭菌30min。（注意计算数量）3.4将枪头、培养皿置于烘箱103℃烘干。（1-3步需提前一天完成） 3.5对称量房间进行紫外灭菌30分钟，关灯静置60 min。以无菌操作取样品10g于含90mL 生理盐水三角烧瓶中，于振荡器上振荡30min，制成1:10的均匀稀释液。 3.6用1000μL枪头吸取1:10稀释液1mL，沿管壁慢慢注入含有灭菌生理盐水9mL的试管中，于振荡器上混合均匀，制成1:100的均匀稀释液。 3.7另去一只1mL灭菌吸管，按照上述操作方法，作10倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支灭菌吸头。 3.8选择2个~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个培养皿。 3.9稀释液移入培养皿后，及时将凉至46℃±1℃的培养基（可放置46℃±1℃水浴锅内保温）注入培养皿约15mL，小心转动培养皿使试样与培养基充分混匀（从稀释试样到倾注培.
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司HiCC-A型全自动菌落计数仪及分析系统采用800万像素拍摄仪成像，其显著优点是：准确、简便，可以1机2用（自动菌落计数、显微镜成像图计数分析）。 一、用途： 用于全自动菌落计数分析等、也可用于显微图像中的颗粒物自动计数分析 二、主要性能参数指标： 1 ★成像装置 1）自动对焦的大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪，具有微距拍摄特性，悬浮暗视野、背光可切换的2平皿同时成像超薄工作台板 2）适应培养皿：50～180mm及A4幅面内的矩形平板，同时测定2个90mm平皿（倾注、涂布、膜滤、螺旋平皿、3M纸片）
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 2 菌落计数分析 1）★自动识别统计：SmartdownTM菌落智能识别技术，自动识别大规模团状、 链状粘连的长形杆菌（显微形态大片粘连的大肠杆菌、病菌孢子）及平皿上的各类菌 落（含金色葡萄球菌计数（GB4789.10-2016）、大肠菌群测定（GB4789.3-2016）等等）。可自动形成批处理向导，实现一键式自动计数 2）自动计数精度≥96.5%，最多监视修正3.5%，即达全部正确。分析统计速度：150～800个菌落/s，2个平皿分析时每个平皿成像+计数总耗时≤5秒 3）★菌落粘连分割：自动分割相互成片粘连的长形、圆形等菌落目标，用户可选择分割或不分割。还可手动分割、合并菌落目标图像 4）★颜色形状识别：具有快速水平集提取技术，可按20类分类识别计数特定颜色、形状的菌落数量，并可类别转换修正。可同时选择6个目标区自动分别分析，并 自由增减或编辑分析目标区 5）菌落形态分析：自动获得各菌落面积、等效直径、长轴、短轴、长宽比、圆度、周长、形状系数等。可按形态指标过滤查询。 6）★鼠标点击修正，无痕剔除网格及文字，自动剔除杂质，有效支持复杂微生物统计，符合GB4789.2-2016的参数自动换算特性。 3 导出查询与升级：分析图像与数据结果可保存，自动形成Excel或PDF文档报告。具有在线升级特性★。
重庆卡顿尔食品有限公司 产品质量检验操作规程 部门：品控部 编制：范昌勇 文件编号：KDRQC018 日期：2015年1月12日 一、菌落总数检测操作规程 检测国标：GB 4789.2-2010食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定 样品：卡顿尔蛋糕、卡曲、西点类产品 产品国标：GB/T 20977-2007糕点通则；GB/T 20980-2007饼干 产品卫生标准：GB 7099-2003糕点、面包卫生标准； GB 7100-2003饼干卫生标准 菌落总数指标：糕点：热加工≤1500cfu/g，冷加工≤10000cfu/g
饼干：≤750cfu/g 试剂：生理盐水（约8.5%）（磷酸盐缓冲溶液）；营养琼脂培养基（或平板计数琼脂培养基）；75%消毒酒精 设备：电子称（0.01g）、电子万用炉、灭菌锅、恒温水浴锅、超净工作台、电热恒温培养箱 器具：250ml三角瓶、玻璃棒、烧杯（500ml）、试管（15*150或者18*180）、试管架、培养皿、镊子、钥匙、刻度吸量管（1ml、10ml）、移液器（100-1000ul）、酒精灯 操作步骤： 1.药品配制 营养琼脂培养基（配比：32g+1000ml蒸馏水）；生理盐水（8.5gNaCl+1000蒸馏水）（或磷酸盐缓冲溶液）；75%消毒酒精（500ml95%纯酒精+133ml蒸馏水）。 2.灭菌消毒准备 ⑴往灭菌锅外层锅内加适量的水（水位刚好没过加热管，最好用硬度较低的水，避免结垢而缩短加热管的寿命）。 ⑵培养皿成套同向整齐排列叠放，用干燥的牛皮纸（或者报纸）包裹卷紧，放入灭菌锅内套中。 ⑶将准备好的试管、培养基、刻度吸量管、移液器枪头、生理盐水放入锅内，注意不要放置过于密集紧凑，以免影响蒸汽循环造成灭菌不彻底。 ⑷盖好锅盖并对称地扭紧螺旋。 ⑸加热使锅内产生蒸汽，当压力表指针达到 33.78kPa时，打开排气阀，将冷空气排出，此时压力表指针下降，当指针下降至零时，即将排气阀关好。注意冷空气必须充分排除，否则锅内温度达不到规定温度，影响灭菌效果。 ⑹继续加热，锅内蒸汽增加，压力表指针又上升，当锅内压力增加到所需压力时，将火力减小（自动控制则无需手动操作，老式灭菌锅需手动切断电源来调节），使蒸汽压力升至103.4kPa，温度达121.3°C，维持15~20分钟，然后将灭菌器断电或断火，让其自然冷后再慢慢打开排气阀以排除余气，然后才能开盖取物。 ⑺无菌操作间和超净工作台紫外灯开启，关闭通道门，灭菌30-60分钟。 ⑻更衣进入无菌间，操作前用75%消毒酒精对手部、样品盒表面、操作台、试管架等进行喷洒消毒。 3.样品处理 卡顿尔产品（含半成品）均为固体和半固体样品，样品处理方法如下： 称取25 g 样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10的样品匀液。 1:100样品液稀释方法：用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按此操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。 4.接种培养
菌落计数器计数方法详解 菌落计数器由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确，菌落对比清楚。便于观察。可广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。那么菌落计数器都是怎样进行计数的呢？上海巴玖来为您详细讲解菌落计数器的计数方法。 1.计数器测定法 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果（本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数）。 2.电子计数器计数法 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3.活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是常用的活菌计数法。 4.比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定
菌落计数器的计数方法 菌落计数器由计数器、探笔、计数池等部分组成，计数器采用CMOS集成电路精心设计，LED数码管显示，字高13mm，清晰明亮，配合专用探笔，计数灵敏准确，菌落对比清楚。便于观察。可广泛用于食品、饮料、药品、生物制品、化妆品、卫生用品、饮用水、生活污水、工业废水、临床标本中细菌数的检验。那么菌落计数器都是怎样进行计数的呢？上海巴玖来为您详细讲解菌落计数器的计数方法。 1.计数器测定法 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果（本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数）。 2.电子计数器计数法 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3.活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板，根据培养出的菌落数，可算出培养物中的活菌数。此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是常用的活菌计数法。 4.比浊法
全自动菌落计数器RTAC-1型 RTAC-1型全自动菌落计数器是瑞韬科技根据多年技术积累产品经验，专为基层实验室设计的一款经济实用型菌落计数器，能轻松胜任大多数场合的基本计数：高精度的CCD镜头、全封闭自动定位样品仓、高效准确的菌落分析软件,性价比突出。 1200万像素CCD镜头，全封闭LED冷光源自动样品仓 全新设计的全封闭自动样品箱。辅以平板光源、带状光源和自动进出仓装置，彻底解决了因外界光线对玻璃培养皿折射光斑的干扰而影响统计精度的技术难题。 AutoCount TM菌落智能识别技术，使计数更方便快捷，统计结果更准确。自动菌落计数准确与否的关键是算法，本产品采用“瑞韬科技”专利的AutoCount TM菌落智能识别技术，无论是透明琼脂平板还是深色有色培养基都能轻松处理，且能对纸片进行有效的计数。 快速高效，极大地提高实验效率 “RTAC-1”型全自动菌落计数器采用真彩动态 CCD 和高速图像传输接口，常规平皿统计只需3秒。当原始样品菌浓较高，未做梯度稀释，直接培养形成的数千菌落，也可在5秒内自动计算出。 强大的区域选择功能
当培养皿中有局部片状菌落生长，而其他区域又分布均匀时，可通过区域选择工具，排除污染区域的菌落数。通过平皿直径和稀释度数据，迅速换算为全皿菌落总数。 仪器主要功能与技术指标 ▲培养皿类型：50-160mm ▲成像 ○ CCD规格：1200万像素，32位真彩 ○分辨率：0.04mm（更符合人工检测实际效果避免过度检测） ○图像拍摄：焦距、白平衡、色温可调 ▲光源 ○拍摄箱：全封闭、无日光干扰、自动居中、暗箱拍摄 ○光源：LED双冷光源拍摄系统 ▲统计功能 ○菌落识别技术：AutoCount TM菌落智能识别技术。 ○平皿类型：倾注、涂布、膜滤平皿、3M纸片。 ○菌落统计速度：300个菌落约3秒。 ○全皿菌落统计：菌落总数统计，并按多档尺寸分类显示。 ○区域选择统计：可选择任意圆形圈定区域进行统计。 ○鼠标点击统计：快速标记、添加菌落，适合培养皿边缘菌落的计数。 ○人工辅助修正：删除任意区域内的误选菌落。 ○统计效果调整：可人为调整菌落分析的精度。 ○直径分类统计：设置直径范围，统计特定大小的菌落。 ○颜色识别统计：根据色度、亮度、饱和度筛选特定菌落。 ○统计数据处理：培养样本稀释度输入实现自动换算。 ○大肠菌群计数：根据国家标准GB/T4789.3-2008大肠菌群平板计数和Petrifilm测试片法，实现大肠菌群自动计数。 ○大肠杆菌计数：根据国家标准GB/T4789.38-2008大肠杆菌Petrifilm测试片计数法，实现大肠杆菌自动计数。 ○金黄色葡萄球菌计数：根据国家标准GB/T4789.37-2008 Baird-Parker 平板计数和金黄色葡萄球菌Petrifilm测试片法，实现金黄色葡萄球菌自动计数。
平板菌落计数法 （一）目的要求 学习平板菌落计数的基本原理和方法。 （二）基本原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材 1．菌种大肠杆菌菌悬液。 2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。 3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 （四）操作步骤 l．编号 取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。(稀释度)各3套。另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。 2．稀释 用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。 将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。另取一支lml吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。用此吸管吸取10-1菌液lmL，精确地放0.5mL至10-2试管中，此即为100倍
实验四微生物平板菌落计数法 一、实验目的 学习并掌握平板菌落计数的基本原理和方法。 二、实验原理 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液接种到平板上,经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数,根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞,所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2~3或更多个细胞。因此平板菌落计数的结果往往偏低,为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（ｃｆu）而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。 平板菌落计数法虽然操作较繁,结果需要培养一段时间才能取得,而且测定结果易受多种因素的影响,但是该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验（如活菌制剂），以及食品、饮料和水(包括水源水）等的含菌指数或污染程度的检测。 三、实验器材 1 . 菌种：酵母菌。 2 ．培养基：ＹEB培养基。 3 ．仪器或其他用具: 1ml 无菌吸管,无菌平皿,盛有４.５ml 无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。 四、实验步骤 1 ．编号 取无菌平皿９套,分别用记号笔标明 10-4、10－5、 1０-6(稀释度）各 2 套， 另取 6 支盛有 4．5ml 无菌水的试管，依次标是１０-1、１０-2、 10-3、 10-4、 １0-5、 10－6。 2 . 稀释 用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 已充分混匀的大肠杆菌菌悬液(待测样品)，精确地放 ０.5ml 至 1０-1的试管中，此即为 10 倍稀释。将多余的菌液放回原菌液中。
【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。目前应用于测定食品中菌落总数的方法有: 纸片法、电阻抗法等。本实验采用国标法(GB\T 对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。并与GB 7099-2003糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。 一、实验目的 1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。 2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。 3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。 二、实验原理 菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。 三、实验设备与材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 ℃±1℃，30℃±1 ℃。 冰箱：2 ℃～5 ℃。
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司杭州万深检测科技新推出的这款HiCC-B2型全自动菌落计数仪是傻瓜式便捷操作 的免培训款，一键触控拍照+自动计数来搞定菌落计数，就这么简单！由触控平板电脑、自动对焦彩色拍摄仪、自动菌落计数软件、背光成像装置组成。主要用于微生物、菌 落总数的自动计数分析，快速有效替代半自动计数菌落的落后工作方式。 HiCC-B2型沿袭了HiCC-B型全自动菌落计数仪性能卓越、操作傻瓜化、价格低廉的优点，并大幅提高了拍照成像的便捷性和用户体验，受到广泛追捧和欢迎，已成为 千家万户微生物室必备的自动计数通用工具。 功能特点： 1、由≥11.6寸500万像素自动对焦拍照的平板电脑或具有微距拍摄特性自动对焦的大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪来拍照菌落平皿，软件便自动计数和 输出菌落总数。
国家高新技术企业——杭州万深检测科技有限公司 2、由添加、删除的个别指点修正，可使计数值达100%准确。 3、可查看结果表、导出至EXCEL，以及向指定接收方上传数据。 4、超薄LED背光成像装置使自动计数识别更稳定，可长时间工作。 5、Windows 10系统环境，固态硬盘10秒启动直接进入操作，人性、简洁、智能。 技术参数： 1、配彩色500万像素自动对焦的拍照平板电脑或能微距拍摄的自动对焦大景深800万像素（3264x2448像素）彩色拍摄仪，最高分辨率0.02mm，可识别小至0.05mm 的菌落。 2、悬浮暗视野、背光可切换成像分析的超薄成像装置。 3、适应培养皿直径：50～180mm平皿（倾注、膜滤、3M纸片）。 4、自动分割链状或团状粘连的各类菌落。 5、一键触控拍照自动计数精度≥96.5%，极少修正后可达100%正确。分析速度：50～300个菌落/s。对显色培养基培养出来的大肠杆菌群也能有效自动计数。 6、自动剔除杂质，触屏缩放图像和点击修正等前卫操作，有效支持复杂微生物统计。 7、可存上万张图片及其对应的数据，并无线上网来远程发送图片、结果数据。
菌落总数检验步骤 第一法平板菌落计数法 6 操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，5 000r/min~10 000r/min 均质1 min~2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min~2 min ，制成1：10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1 ：10 的样品匀液。6.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1：10 样品匀液1 mL ，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100 的样品匀液。 6.1.4 按6.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1 mL 无菌吸管或吸头。 6.1.5 根据对样品污染状况的估计，选择2 个~3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）, 在进行10 倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液加人两个无菌平皿内。同时分别取1 mL 稀释液加人两个无菌平皿作空白对照。 6.1.6 及时将15 mL~20 mL 冷却至46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ℃±1 ℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。 6.2 培养 6.2.1 琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃±1 ℃培养48h±2h 。水产品30 ℃±1 ℃培养72h±3h. 6.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL ) ，凝固后翻转平板，按6.2.1 条件进行培养。 6.3 菌落计数 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony - forming units , CFU ）表示。 6.3.1 选取菌落数在30 CFU~300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 6.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2 ，代表一个平板菌落数。 6.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。 7 结果的表述 7.1 菌落总数的计算方法 7.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。 7.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式（l ）计算： N=∑C/（n1+0.1n2）d……………………（1 ) 式中： N ― 样品中菌落数； ∑C ― 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和； nl ― 第一个适宜稀释度平板上的菌落数； n2 ― 第二个适宜稀释度平板上的菌落数；
微生物实验室中所需仪器设备 微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室，对于一个完备的微生物学实验室，我们需要配置如下仪器。 1、超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。 2、培养箱 培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。分为：普通培养箱、生化培养箱、恒温恒湿箱、厌氧培养箱。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 3、天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器 用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器。 5、菌落计数器 菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 6、微波炉/电炉 用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅 微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。
8、移液器 液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。 9、低温冰箱 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存，有些要求是负20度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。 10、生物安全柜 微生物实验中涉及的试剂和样品微生物有些是有毒的，对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散，可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。 11、摇床 摇床又称摇瓶机，是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置 纯水装置包括蒸馏水器和纯水机。蒸馏水器的价格便宜，但在造水过程中需要有人值守;纯水机价格高些，但是使用方便，可以储存一定量的纯水。纯水使用也有不同的级别，实验中配制试剂，配制培养基均需用纯水。 13、生物显微镜 由于微生物体积较小，所以在观察时需要借助生物显微镜。生物显微镜用于微生物和微小物品结构，形态等的观察。 14、冷冻干燥机 主要适用于细菌、微生物、酵母等的干燥。用于干燥保存易脱水的产品，在加水以后能够再次恢复原材料的特性，不影响其生物活性等。通过冷冻干燥，细菌之类的材料成为干燥状态，从而不会发生化学改变。 15、分光光度计 分光光度计在微生物试验中用于测定微生物悬液的浓度，可以正确选取合适的培养时间。一般是在600nm波长测定菌液浓度。 16、恒温干燥箱
科研级菌落计数器:JJSG6R全自动菌落计数器 JJSG6R全自动菌落计数器全新推出的科研级机型，将活菌计数、抑菌圈测量、菌种筛选三大功能融于一体。三色LED 环绕照明、色温可调，使得菌落图像更接近自然光成像效果。专业设计的菌种筛选模块可实现：双圈分析、抑菌圈测量、特定菌挑选、不同菌智能识别。全系列配置了双波长紫外，满足消毒、诱变和荧光激发的需求。高端的配置更高品质的镜头和工业相机，菌落、抑菌圈细节展现更为锐利。 三色LED混合光源、色温调节 科学研究希望能真实反应菌落的色泽，传统白光LED照明成像偏蓝。长寿命、低功耗、环保型三色LED混合光，通过暖色光和冷色光的配比，控制色温范围为3500K-8500k，拍摄出最真实的菌落色泽。 光源－双波长紫外 内置254nm紫外灯,可解决菌落仪长期使用带来的污染问题，也能满足紫外诱变的需要。双侧366nm紫外照明设计能激发菌落荧光，满足大肠埃希氏菌、绿色荧光蛋白等的观察。 全封闭暗箱拍摄 采用全封闭、宽光带照明技术，符合人体工学的舷窗门设计，隔绝环境光的干扰，彻底消除杂散光在玻璃培养皿折射形成的光斑、光环现象，为精确活菌计数提供了必备的光影条件。 上下光源场景式照明 上光源：360度柔性混合光照明，突显菌落的色泽和纹理，使菌落表面的皱折、凹陷、边缘的锯齿更富立体感； 下光源：晶锐悬浮式暗视野照明，不仅清晰勾勒菌落轮廓，还能把霉菌或放线菌的基内菌丝与气生菌丝部分明显区分。锐利图像细节 500万像素F1.4大光圈定焦镜头，结合悬浮式暗视野照明，可清晰展现培养基深层的细小菌落、气泡、划痕。 解决疑难图像－高级统计算法 -基于水平集活动轮廓模型的图像分割方法，是将水平集方法和活动轮廓模型结合起来，在极小化能量泛函的过程中活动轮廓不断逼近分割目标，直到活动轮廓线停止进化时（能量泛函最小）分割完成。其基本原理是把曲线或曲面嵌入高一维水平集函数中，用一个高维函数来表达低维曲线或曲面的演化过程。汇聚了28种图像处理算法，实现了对各类疑难菌落图像的准确分割和统计。病毒学研究-蚀斑/噬菌斑计数 由于平板上噬菌斑与背景反差小，且往往出现多个噬菌斑相连的现象，一般统计设备无法准确识别，目前仍采用人工计数的方式。利用优化分水岭法可实现粘连噬菌斑的准确分割和精确计数。 免疫学分析－OPKA、SBA 在免疫学检测方法中，调理吞噬杀菌试验（OPKA）和血清杀菌试验（SBA）需要对同一平皿内多区域或微孔板不同孔内培养的细菌进行计数，-多区域统计算法可以轻松实现任意多个区域的同步一键计数。 多孔板克隆计数 克隆形成实验中的细胞克隆计数一般是采用手动计数的方式，然而手动计数过程中带有非常大的不确定性，特别是当形成的细胞克隆大小差异较大时，