目录
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第1章引言 1 1.1 抗精子适体课题来源 (1)
1.2 精斑检测的重要性 (2)
1.3 精子细胞富集的重要性 (2)
1.4 精斑检测方法的进展 (3)
1.5 现阶段精斑确定与精子分离技术的研究 (5)
1.6 精子细胞检测中的识别探针 (7)
1.6.1 基于抗原-抗体反应的识别探针 (7)
1.6.2 基于受体配体作用的识别探针 (7)
1.7 核酸适体探针 (8)
1.8 适体和抗体的比较 (9)
1.9 磁珠分选法 (10)
1.10 STR基因座 (11)
1.11 课题介绍 (13)
第2章抗精子细胞的寡核苷酸适体的筛选和鉴定 (15)
2.1 前言 (15)
2.2 实验部分 (15)
2.2.1 试剂和仪器 (16)
2.2.2 cell-SELEX试验总流程图 (19)
2.2.3 文库的制备与引物的合成 (19)
2.2.4 精子细胞的处理 (20)
2.2.5 精子细胞适体筛选 (20)
2.2.6 TOPO TA克隆适体特异性分析 (27)
2.3 实验结果及讨论 (30)
2.3.1 PCR条件优化结果 (30)
2.3.2 不同筛选轮数的PCR产物琼脂糖电泳结果 (31)
2.3.3 荧光基团6-FAM和Alexa Fluor 488对PCR产物影响的比较 (31)
2.3.4 TOPO TA克隆 (32)
2.3.5 适体一级结构同源性分析 (34)
2.3.6 适体二级结构预测 (34)
V
华侨大学硕士学位论文
2.3.7 荧光显微镜检测候选适体与精子细胞的特异性 (36)
2.4 讨论 (37)
第3章基于核酸适体靶向识别功能的精子细胞磁分离和富集研究 (41)
3.1 前言 (41)
3.2 实验部分 (42)
3.2.1 试剂和仪器 (42)
3.2.2 核酸适体功能化磁珠的制备 (43)
3.2.3 核酸适体在磁珠表面的修饰率表征 (44)
3.2.4 精子细胞的染色 (44)
3.2.5 A-3适体功能化磁珠对精子细胞的特异性捕获与富集 (44)
3.2.6 核酸适体功能化磁珠对混合体系中精子细胞的特异性捕获与富集44 3.3 实验结果 (45)
3.3.1 实验原理 (45)
3.3.2 核酸适体在磁珠表面的修饰效率表征 (46)
3.3.3 核酸适体A-3的特异性分析 (46)
3.3.4 核酸适体功能化磁珠对精子细胞的特异性捕获与富集 (47)
3.3.5 核酸适体功能化磁珠对混合体系中精子细胞的特异性捕获与富集49 3.4 讨论 (50)
第4章精子细胞DNA的STR分型 (53)
4.1 前言 (53)
4.2 实验部分 (53)
4.2.1 试剂和仪器 (53)
4.2.2 检材处理 (55)
4.2.3 精子细胞的磁珠结合与分离 (55)
4.2.4 多位点STR复合扩增 (55)
4.2.5 DNA样品电泳 (56)
4.2.6 结果分析 (56)
4.3 结果 (56)
4.3.1 磁珠富集法分离精子细胞DNA分型检测情况 (56)
VI
目录
4.4 讨论 (58)
第5章结论与展望 (61)
参考文献 (63)
致谢 (69)
个人简历、在学期间发表的学术论文和研究成果 (71)
VII
主要符号对照表
主要符号对照表
SELEX指数富集的配基系统进化技术PCR聚合酶链反应
Aptamer核酸适体
RNA核糖核酸
DNA脱氧核糖核酸
EDTA乙二胺四乙酸
MB 磁珠
DNA Polymerase 脱氧核糖核酸聚合酶
dNTP 脱氧核糖核苷三磷酸
Tm 退火温度
DTT 二硫苏糖醇
STR 短串联重复序列