化学发光技术综述 化学发光免疫测定（）是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 （一）原理 化学发光免疫测定（）属于标记抗体技术的一种，它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原，当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后，发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用，发生氧化还原反应，反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光，最后用发光光度计进行检测。 （二）特点 特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。 （三）分类 1、从反应原理上，化学发光免疫技术主要分为直接化学发光和酶促反应化学发光。 1.1直接化学发光
化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。直接化学发光速度快、试剂稳定性好，但灵敏度略低于酶促发光。 代表性的发光剂有：吖啶酯、三联吡啶钌。 1.1.1 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470的光，具有很高的发光效率，其激发态产物甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 这类化合物的发光为闪光型，加入发光启动试剂后0. 4s 左右发射光强度达到最大，半衰期为0.9s左右。 特点： ①发光反应中在形成电子激发态中间体之前，联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来，即未发光部分与发光部分分离，因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。 ②吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂，在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。
电化学发光（Elecsys）检测项目及其临床应用 一、甲状腺功能 甲腺原氨酸(T3, triiodothyronine) T3是甲状腺激素对各种靶器官作用的主要激素。T3（3、5、3’-三碘酪氨酸）主要在甲状腺以外，尤其是在肝脏由T4经酶解脱碘生成。因此，血清T3浓度反映出甲状腺对周边组织的功能甚于反映甲状腺分泌状态。T4转变成T3的减少会导致T3浓度的下降。见于药物的影响，如丙醇、糖皮质类固醇、胺碘酮等以及严重的非甲状腺疾病（N TI），称为“T3低下综合征”。与T4一样，99%以上的T3与运输蛋白质结合，但T3的亲和力要低10倍左右。T3测定可用于T3-甲亢的诊断，早期甲亢的查明和假性甲状腺毒症的诊断。 检测范围：0.300─10.00nmol/l或O.195-6.51ng/ml 正常参考值：1.3-3.1nmol/l或0.8-2.0ng/ml 甲状腺素(T4, thyroxine) T4是甲状腺分泌的主要产物,也是构成下丘脑-垂体前叶-甲状腺调节系统完整性不可缺少的成份。对合成代谢有影响作用。T4由二分子的二碘酪氨酸（DIT）在甲状腺内偶联生成。T4与甲状腺球蛋白结合贮存在甲状腺滤泡的残腔中，在TSH的调节下分泌释放。血清中99%以上的T4以与其它蛋白质结合的形式存在。由于血清中运输蛋白质的浓度易受外源性和内源性作用的影响，因此，在检测血清T4浓度的过程中需考虑到结合蛋白质的状况。如果忽略这一点，结合蛋白质浓度的变化（如怀孕期、服用雌激素或者患肾病综合征等），会导致反映甲状腺代谢状况检测的错误结果。T4测定可用于甲亢、原发性和继发性甲状腺功能减退的诊断以及TSH抑制治疗的监测。 检测范围：5.40─320.0nmol/l或O.420-24.86μg/dl 正常参考值： I. 66-181nmol/l或5.1-14.1μg/dl（标本取自德国和日本） II. 59－154nmol/l或4.6-12.0μg/dl, FT4指数57－147nmol/l或4.4-11.4ug/dl (标本取至美国) 游离T3(FT3- free triiodothyronine) 三碘甲腺原氨酸（T3）是血清中的甲状腺激素之一，起调节代谢作用。测定该激素的含量对鉴别诊断甲状腺功能是否正常、亢进或低下有重要意义。绝大多数的T3与其转运蛋白质（TBG、前白蛋白、白蛋白）结合，fT3是T3的生理活性形式。fT3测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响。因此不需另加测定结合参数（T -uptake，TBG）。 检测范围：0.400─50.00pmol/l或O.260-32.55pg/ml 正常参考值：2.8-7.1pmol/l或1.8-4.6pg/ml 游离T4(FT4- free thyroxine)
化学发光及生物发光的原理及其应用 点击次数：291 发表于：2008-08-24 01:39转载请注明来自丁香园 来源：丁香园 一、发光物质的类型 （一）无机化合物化学发光分析 1、金属离子分析 痕量金属离子对化学发光反应具有很好的催化作用，因而化学发光测定金属离子得到广泛的应用( 见表1) 。但是，由于不同金属离子催化氧化发光试剂时，发光光谱相同，致使金属离子催化化学发光反应的选择性较差。为提高分析的选择性，可采用以下方法: (1)利用待测金属离子与干扰离子配合物稳定性不同进行选择性分析，如加入掩蔽剂EDTA 或水杨酸掩蔽干扰离子; (2) 优化实验条件以减少其它离子的干扰; (3) 稀释样品溶液; (4) 加入敏化剂。但是，当样品中待测物相对于干扰物浓度很小时，上述方法也无济于事，只得进行前处理，常用的分离方法有色谱、溶剂萃取等。 色谱分离的高选择性与化学发光检测的高灵敏度相结合，是一种很有前途的联用技术。关键是流动相的选择，流动相选择得好，不仅可以提高选择性，还可以进行多个离子的同时测定。如用离子交换分离法同时测定Cr (à) 和Cr (? ) 。溶剂萃取也是提高化学发光测定金属离子选择性的一个有效方法。这种方法的主要问题是费时，因为进行化学发光检测前必须将无机物从有机溶剂中反萃取出来，或是将有机溶剂蒸发除去。较好的方法是自动在线溶剂萃取选择性检测待测物。
2、其它无机化合物的分析 化学发光反应中，过氧化氢是最常用的一种氧化剂，因此有关H 2 O 2 化学发光分析的报道较多( 见表2) ，涉及到鲁米诺、过氧草酸酯及光泽精等化学发光反应。根据鲁米诺化学发光反应制成的H2O 2 光纤传感器与流动注射法联用，可检测10nmo l ／L ～1 mmo ／L 的H 2 O 2 ，用模拟酶代替辣根过氧化物酶催化鲁米诺发光，检测限可达5 . 5×10 －9 mo l ／L 。根据ClO - 对鲁米诺的氧化作用，可用于测定ClO - ，其它物质如Cl 2 的干扰，可用流动注射法消除。利用停流技术测定水中ClO - 不必进行前处理。含氮的无机化合物如NH3 ／NH 4 ，可将其衍生后用TCPO 化学发光法检测，线性范围为2 。9ug ／L ～6 m g ／L 。CN －能抑制鲁米诺H 2 O 2 －Cu (II ) 的化学发光，据此可分析测定CN —。在低温条件下化学发光分析测定CN －，当进样量为100uL 时，线性范围为10 －9 －10 -7 g ／mL ，当进样量20 uL 时，线性范围为10 －8 ～5×10 -7 g ／mL 。 （二）有机化合物的化学发光分析 1、有机酸 有机化合物的同系物结构和性质相似，使单一组分的测定遇到困难，因此有机化合物同系物的分析常与HPLC 相结合。有机酸的化学发光分析( 见表3) ，一般是先将其衍生
肌红蛋白测定试剂盒（直接化学发光法） 组成： 适用范围：本试剂用于体外定量检测人血清、血浆中的肌红蛋白（MYO）的含量。
批特异性：每批校准品的值、质控品的质控范围具有特异性，详见瓶签。 以上校准品（选配1）、校准品（选配2）须选择一项获取校准信息。 2.1 物理性状 2.1.1外观 本试剂盒中的组分齐全、完整，液体试剂澄清，无异物、沉淀物、絮状物和无渗漏。各组分标签字迹清晰、无破损。质控品、校准品为淡黄色冻干品，用蒸馏水复溶后应为淡黄色液体。 2.1.2 装量 液体装量不少于标示值。 2.2线性 在[2，3000]ng/mL范围内，用线性拟合公式拟合，相关系数应不低于0.9900。 2.3准确度 将已知浓度的肌红蛋白（MYO）加入到低值样本中，其回收率应在85%-115%。 2.4空白限
本试剂盒的空白限不大于2ng/mL。 2.5重复性 分别用高、低2个浓度的样本，各重复检测10次，其变异系数（CV）不大于8.0%。 2.6 批间差 用3个批号试剂盒分别检测高、低2个浓度的样本，则3个批号试剂盒之间的批间变异系数（CV）不大于15%。 2.7 质控品、校准品批内瓶间差 质控品、校准品批内瓶间差CV（%）应不高于10%。 2.8特异性 检测表2中相应浓度的交叉反应物，检测结果应小于2ng/mL。 表2 被测物常见的交叉反应物 2.9 质控品赋值有效性 质控品测定结果应在本试剂盒规定的范围内。 2.10 校准品溯源性 应根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，校准信息可溯源至本公司工作校准品，工作校准品与已上市肌红蛋白检测系统比对赋值。 2.11 稳定性 2.11.1效期稳定性 将试剂盒在2℃～8℃的环境中放置12个月后，分别检测2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.9项，结果应符合各项目的要求。 2.11.2复溶稳定性 质控品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7、2.9规定的要求。校准品复溶后在2℃～8℃条件下储存28天后，产品性能应符合2.7规定的要求。
化学发光技术综述 化学发光免疫测定（CLIA）是将抗原与抗体特异性反应与敏感性的化学发光反应相结合而建立的一种免疫检测技术。 （一）原理 化学发光免疫测定（CLIA）属于标记抗体技术的一种，它以化学发光剂、催化发光酶或产物间接参与发光反应的物质等标记抗体或抗原，当标记抗体或标记抗原与相应抗原或抗体结合后，发光底物受发光剂、催化酶或参与产物作用，发生氧化还原反应，反应中释放可见光或者该反应激发荧光物质发光，最后用发光光度计进行检测。 （二）特点 特异性高、敏感性高、分离简便、快速、试剂无毒、安全稳定、可自动化。 （三）分类 1、从反应原理上，化学发光免疫技术主要分为直接化学发光和酶促反应化学发光。 直接化学发光
化学发光剂在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。直接化学发光速度快、试剂稳定性好，但灵敏度略低于酶促发光。 代表性的发光剂有：吖啶酯、三联吡啶钌。 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 这类化合物的发光为闪光型，加入发光启动试剂后0. 4s 左右发射光强度达到最大，半衰期为左右。 特点： ①发光反应中在形成电子激发态中间体之前，联结于吖啶环上的不发光的取代基部分从吖啶环上脱离开来，即未发光部分与发光部分分离，因而其发光效率基本不受取代基结构的影响。 ②吖啶酯或吖啶磺酰胺类化合物化学发光不需要催化剂，在有H2O2 的稀碱性溶液中即能发光。因此应用于化学发光检测具有许多优越性。 优点主要有： ①背景发光低，信噪比高； ②发光反应干扰因素少；
化学发光免疫分析技术原理简介 20 世纪60 年代即有人利用化学发光法测定水样中细菌含量和菌尿症患者尿液检查。1977 年Halman 等将化学发光系统与抗原抗体反应系统相结合，创建了化学发光免疫分析法，保留了化学发光的高度灵敏性，又克服了它特异性不足的缺陷。近年来对技术与仪器的不断改进，使此技术已成为一种特异，灵敏，准确的自动化的免疫学检测方法。1996 年推出的电化学发光免疫技术，在反应原理上又具有一些新的特点。这两种技术目前已在国内一些大型医院实验室用于常规免疫学检验。 一、化学发光免疫分析法 化学发光免疫分析法( chemiluminescence immunoassay , CLlA) 是把免疫反应与发光反应结合起来的一种定量分析技术，既具有发光检测的高度灵敏性，又具有免疫分析法的高度特异性。在CLIA中，主要有两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统与放射免疫测定中的抗原抗体反应系统相同化学发光系统则是利用某些化合物如鲁米诺( luminol) 、异鲁米诺(isolu-minol) 、金刚烷( AMPPD) 及吖啶酯( AE) 等经氧化剂氧化或催化剂催化后成为激发态产物，当其回到基态时就会将剩余能量转变为光子，随后利用发光信号测量仪器测量光量子的产额。将发光物质直接标记于抗原(称为化学发光免疫分析)或抗体上(称为免疫化学发光分析) ，经氧化剂或催化剂的激发后，即可快速稳定的发光，其产生的光量子的强度与所测抗原的浓度可成比例。亦可将氧化剂(如碱性磷酸酶等)或催化剂标记于抗原或 抗体上，当抗原抗体反应结束后分离多余的标记物，再与发光底物反应，其产生的光量子的强度也与待测抗原的浓度成比例。发光免疫分析的灵敏度高于包括RIA 在内的传统检测方法，检测范围宽，测试时间短，仅需30 - 60min 即可。试
光激化学发光免疫检测技术与临床应用研究进展 高云朝 近半个世纪以来，临床化学微量免疫分析技术从放射免疫分析、酶联免疫分析，到化学发光免疫分析，经历了检测方法的革新与技术的进步，医学检验质量和数量得到了迅速的提高；20世纪90年代问世的LOCI(Luminescent oxygen channeling immunoassay，LOCI)技术以其独特的检测方法，实现了均相、一步、免清洗和高通量的检测，并以其高灵敏度和特异性等突出的检测性能为世人所瞩目。该技术最初由Ullman等[1]在1994年报道，由美国德灵公司研发成功，后由PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreen TM)，西门子公司生产免疫诊断试剂（LOCI）。国产光激化学发光免疫检测系统由博阳生物科技（上海）有限公司建立在该技术之上，并称之为LiCA（Light Initiated Chemiluminesence Assay，LiCA TM）。仅此对该技术基本原理和特点，以及目前国内外研究现状综述如下。 一、技术原理和特点 1．LOCI检测原理：基于非竞争的免疫检测方法类似于ELISA，而基于的竞争的免疫检测方法类似于放射免疫分析法。以前者为例，双抗体夹心结构(抗体包被发光珠-抗原-生物素化抗体)与链霉亲和素包被的感光珠，通过链霉亲和素与生物素结合到一起，并拉近发光珠和感光珠的间距。然后，感光珠在680nm激发光的照射下，使周围氧分子激发变成单线态氧(1△g O2，带有1个激发态电子的氧分子)，后者扩散至发光珠并传递能量，发光珠发射520-620 nm荧光信号并被光子计数器探测。此过程中，单线态氧的半衰期只有4μs，且最大扩散距离大约200nm。而一般而言，当体系中不存在抗原抗体复合物时，发光珠和感光珠之间的距离大于200nm。因此，此三级发光系统只有结合态发光珠才能传递单线态氧的能量并发光；非结合态发光珠由于相距较远，无法获得能量而不发光[1-6](图1)。
化学发光系统工作原理 半导体激光器又称激光二极管，是用半导体材料作为工作物质的激光器。它具有体积小、寿命长的特点，并可采用简单的注入电流的方式来泵浦其工作电压和电流与集成电路兼容，因而可与之单片集成。 由于这些优点，半导体二极管激光器在激光通信、光存储、光陀螺、激光打印、测距以及雷达等方面以及获得了广泛的应用。 激光器的发光原理 >>>>产生激光要满足以下条件： 一、粒子数反转； 二、要有谐振腔，能起到光反馈作用，形成激光振荡；形成形式多样，最简单的是法布里——帕罗谐振腔。 三、产生激光还必须满足阈值条件，也就是增益要大于总的损耗。 1、满足一定的阀值条件
为了形成稳定振荡，激光媒质必须能提供足够大的增益，以弥补谐振腔引起的光损耗及从腔面的激光输出等引起的损耗，不断增加腔内的光场。这就必须要有足够强的电流注人，即有足够的粒子数反转，粒子数反转程度越高，得到的增益就越大，即要求必须满足一定的电流阀值条件。当激光器达到阀值时，具有特定波长的光就能在腔内谐振并被放大，最后形成激光而连续地输出。 2、谐振腔，能起到光反馈作用 要实际获得相干受激辐射，必须使受激辐射在光学谐振腔内得到多次反馈而形成激光振荡，激光器的谐振腔是由半导体晶体的自然解理面作为反射镜形成的，通常在不出光的那一端镀上高反多层介质膜，而出光面镀上减反膜。 对F－P腔（法布里—拍罗腔）半导体激光器可以很方便地利用晶体的与P－N 结平面相垂直的自然解理面构成F－P 腔。 3、增益条件 建立起激射媒质（有源区）内载流子的反转分布。在半导体中代表电子能量的是由一系列接近于连续的能级所组成的能带，因此在半导体中要实现粒子数反转，必须在两个能带区域之间，处在高能态导带底的电子数比处在低能态价带顶的空穴数大很多，这靠给同质结或异质结加正向偏压，向有源层内注人必要的载流子来实现，将电子从能量较低的价带激发到能量较高的导带中去。当处于粒子数反转状态的大量电子与空穴复合时，便产生受激发射作用。
化学发光成像系统 配置及技术参数 1．暗箱 1.1 尺寸：30×24×46cm 1.2 结构：双层结构，微处理器控制暗箱，确保完全密闭。 1.3 抽屉式载样 1.4 电源220V/50HZ 2．美国原装进口高灵敏度制冷CCD相机 2.1 CCD芯片尺寸：12.49X9.99mm 2.2分辨率：605万像素，2750 x 2200 2.3像素大小：4.54X4.54um 2.4像素密度：16bit(真实65536灰阶) 2.5 量子效率：≥75% 2.6 暗电流: <0.001 e-/pixel/sec. @ -30oC 2.7 读出燥声: 5.5e- RMS at 12 MHz 2.8致冷：三级半导体热电式致冷,常温以下60度 2.9 接口：单一USB线完成图像传输及控制，无需串口线，可靠性强。 3．镜头： 3.1 F0.95大光圈快速镜头,4/3英寸靶面 4．辅助光源： 4.1 LED反射灯*2； 5．样品台: 5.1轨道式化学发光样品台 6.图像采集软件功能 6.1通过USB或1394等数字接口直接采集获取样品图像。 *6.2 高精度自动曝光功能,无需揣摩曝光时间，一键完成western成像 6.3软件有自动1－99帧图像累积功能，具备时间序列图像采集，连续集成等功能，从而避免反复曝光，可从中挑选最中意的图像保存。 *6.4拍摄完成后自动生成专业16bit文件格式，富含原始数据信息，（如：曝光时间、拍摄日期、时间等），且不可修改 *6.5拍摄完成的图像提供三种不同灰阶范围的显示效果并可手动调整 *6.6拍摄完成的所有图像在图像采集界面以小窗口显示，方便查找、浏览及将marker图像与化学发光图像叠加功能 6.7采用先进的像素合并技术1X1，2X2，3X3，4X4等选项，提高灵敏度和信噪比。 6.8方便实用的图像导航浏览功能，通过调整窗宽，窗位，获取最佳图像显示效果。 6.8具有支持16bit图像的旋转，裁切，反色等处理功能，进行图像优化处理。 7.图像分析软件功能 7.1具有支持16bit图像的旋转，裁切，等处理功能，确定最适的图像视野。 方便实用的图像导航浏览功能，通过调整窗宽，窗位，获取最佳图像显示效果。 7.2自动识别泳道条带，并且可以根据需要添加、删除，调整泳道，实现泳道的精确分离。 7.3自动计算泳道中各条带的密度积分和峰值，方便计算分子量大小及条带的迁移率。
全自动化学发光免疫分析仪 技术审查指导原则 （第一次征求意见稿） 一、前言 本指导原则旨在指导注册申请人对全自动化学发光免疫分析仪注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。 本指导原则是对全自动化学发光免疫分析仪的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
二、适用范围 化学发光免疫分析根据化学发光物质的类型和发光特点，可分为电化学发光免疫分析和化学发光免疫分析，其中化学发光免疫分析根据发光剂的不同，可分为直接化学发光免疫分析、酶促化学发光免疫分析和鲁M诺氧途径免疫分析。目前，各类型化学发光免疫分析的常见发光剂包括：电化学发光剂为三联吡啶钌[（）]，直接化学发光剂为吖啶酯（），酶促化学发光剂为辣根过氧化物酶（）催化鲁M诺（氨基苯二甲酰肼，）及其衍生物或者碱性磷酸酶催化（′螺旋金刚烷）甲氧基（″磷酰氧基）苯二氧杂环丁烷（），鲁M诺氧途径发光剂为酞箐、二甲基噻吩衍生物及螯合物。 化学发光免疫技术根据反应过程中标记物是否需要分离可分为均相反应和非均相反应。均相反应主要应用于鲁M 诺氧途径免疫分析中，而非均相反应则应用于其他类型化学发光免疫分析中，通过采用固相分离、过滤分离、珠式分离、顺磁性颗粒分离等方式实现游离标记物和免疫复合物标记物的分离，其中顺磁性颗粒分离较其他分离方式更为常用。目前，基于鲁M诺氧途径免疫分析原理的产品还比较少，临床常用的全自动化学发光免疫分析仪更多地采用非均相反应模式。 本指导原则适用于采用上述化学发光免疫技术和反应
孕酮（Prog）测定试剂盒（光激化学发光法） 适用范围：本试剂盒用于体外定量测定人血清中孕酮（Prog）的含量。
说明： 1.校准品靶值批特异，详见定值单。 2.质控品质控范围批特异，详见定值单。 2.1 外观 外观检查试剂盒组分齐全，内外包装均完整，标签清晰，液体试剂无渗漏。 2.2 检出限 试剂盒的检出限不高于0.37ng/mL（1.2nmol/L）。 2.3 准确度 用国家参考物质GBW09197、GBW09199作为样本进行检测，其测量结果的相对偏差应该在±15%内。 2.4 线性区间 在[0.37,40]ng/mL（[1.2，127.2]nmol/L）区间内，试剂盒的相关系数|r|应≥0.9900。 2.5 精密度 2.5.1 批内精密度 重复检测同一样本10次，测定结果的变异系数（CV）应不大于10.0%。 2.5.2 批间精密度 用三个不同批次产品测定同一样本，测定结果的变异系数（CV）应不大于15.0%。 2.6 质控品测定值 同一套质控品的测定结果应在本试剂盒规定的范围之内。 2.7 特异性 分别添加潜在干扰物于含有孕酮的样本中，获得待测样本中孕酮目标浓度为20 ng/mL （64 nmol/L）（允许相对偏差为±15%），潜在干扰物浓度分别为10ng/mL 的皮质酮和10ng/mL的17α-羟孕酮。各个样本测量结果的均值应在目标浓度平均值（M）±2标准差（SD）范围内。
2.8 稳定性 试剂盒在2℃～8℃保存至效期末后3个月内，检验结果应符合2.1、2.2、2.3、2.4、2.5.1、2.6、2.7规定。 2.9 溯源性 依据GB/T 21415-2008 依据GB/T 21415-2008及有关规定提供所用校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容，本试剂盒配套校准品溯源至国家标准物质GBW09199。
电化学发光的基本原理 电化学发光免疫测定（ECLI）是一种在电极表面由电化学引发 的特异性发光反应，包括电化学和化学发光两个部分。分析中应用 的标记物为电化学发光的底物三联吡啶钌或其衍生N-羟基琥珀酰胺（NHS）酯，可通过化学反应与抗体或不同化学结构抗原分子结合，制成标记的抗体或抗原。ECLL的测定模式与ELISA相似。 基本原理：发光底物二价的三联吡啶钉及反应参与物三丙胺在 电极表面失去电子而被氧化。氧化的三丙胺失去一个H+而成为强还原剂，将氧化型的三价钌还原为激发态的二价钌，随即释放光子而 恢复为基态的发光底物。医学教育网搜|集整理这一过程在电极表面 周而复始地进行，不断地发出光子而常保持底物浓度的恒定。 电化学发光是化学发光方法与电化学方法相互结合的产物，是 指通过电化学方法来产生一些特殊的物质，然后这些电生的物质之 间或电生物质与其它物质之间进一步反应而产生的一种发光现象。 电化学发光保留了化学发光方法所具有的灵敏度高、线性范围宽、观察方便和仪器简单等优点；同物时具有许多化学发光方法无 法比拟的优点，如重现性好、试剂稳定、控制容易和一些试剂可以 重复使用等优点，广泛地应用于生物、医学、药学、临床、环境、 食品、免疫和核酸杂交分析和工业分析等领域。在21世纪中必将继 续为解决人类面临的各种重大问题发挥更加显著的作用。因此有必 要对电化学发光在分析中的应用有更加全面的了解。
电化学发光的应用 1、电极表面活性分布的表征 利用电化学发光成像法可以很好地观察电极表面电化学发光强度的分布情况，而电化学发光强度对电极表面的活性具有很大的依赖性，因此利用电化学发光成像法可以直观地反映电极表面活性分布。 该方法是由Engstrom等于1987年提出的，他们观察到在新抛光的玻碳电极上电化学发光强度分布十分均匀，而在环氧树脂浸渍过的网状玻碳电极上，电化学发光强度的分布不均匀，通过与其它方法相对照，发现电化学发光强度分布能够很好地反映出电极表面活性分布，并且具有微米级的空间分辨能力。在此基础上，他们把电化学发光成像法用于研究碳糊电极表面活性点的分布，观察到碳糊电极表面存在。着活性区域和非活性区域，对于了解碳糊电极的电化学行为具有一定的意义。 由于电化学发光成像法具有直观和简单等优点，许多科学工作者先后将该方法用于表征化学修饰电极表面的活性分布。如Hopper 等用该方法研究了电极表面的电荷对电子转移性质的影响；Pantano 等用该方法研究了电极表面羧基的分布对电子转移性质的影响；ShuItz等用该方法研究了聚合物在电极上的附着情况。从上面的文献可以看出，电化学发光成像法对于了解电极表面的活性分布及其与电极性能之间的关系，进而制备出具有特定功能的电极具有较好的参考价值。
化学发光法在药物分析中的应用的综述报告化学发光分析法是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法，作为一种有效的痕量分析技术,因其具有灵敏度高、线性范围宽、而且分析速度快、重现性好等特点,在分析化学领域得到了迅速发展；但选择性较差如果将其与流动注射、高效液相色谱（HPLC)、毛细电泳(CE)等技术联用，就能较好的克服这一缺点。 化学发光反应体系目前主要使用的有：①鲁米诺、②光泽精、③过氧草酸盐-荧光物质-H2O2等电致发光、④Ce（Ⅳ）、⑤高锰酸钾-还原性有机物等，在医学、生命科学等领域中具有广泛的应用前景。 如果将高效液相色谱（HPLC)、毛细电泳(CE)等技术联用对药物进行分析，是分析化学较为活跃的发展领域，此方法彰示着化学发光法的潜在优势。 下面介绍一些化学发光法的研究成果： 基于碱性介质中敌百虫增强鲁米诺-H2O2体系发光的研究,建立了测定敌百虫的流动注射化学发光分析方法。该法测定敌百虫的线性范围为 1.0×10-8—1.0×10-5g/mL,根据IUPAC建议计算出检出限为3.2×10-9g/mL,相对标准偏差为1.10%(1.0×10-7g/mL的敌百虫,n=11)。对蔬菜中的敌百虫进行固相萃取,有效地除去蔬菜中的干扰物质,并对蔬菜样进行加标测定,回收率范围在88.5%—92.6%之间。 阿莫西林在硫酸溶液中的降解产物与Ce（Ⅳ）在罗丹明6G的增敏作用下可产生化学发光。据此建立了流动注射化学发光测定阿莫西林的新方法。该方法线性范围为0.01～20.0mg·L-1,检出限为
0.008mg·L-1,相对标准偏差(n=11,C=1.0mg·L-1为0.7％。方法用于药物中阿莫西林含量的测定,结果满意。 基于碱性介质中莱克多巴胺对鲁米诺-铁氰化钾体系化学发光的增敏作用,研究了各因素对化学发光的影响。结果表明,在最佳发光条件下,相对发光强度与莱克多巴胺浓度在 4.0×10-9～8.0×10-7 g.mL-1范围内呈良好的线性关系,检出限为2.5×10-9 g.mL-1,相对标准偏差为5.6%。应用该方法成功分析了猪肉和尿样中莱克多巴胺的含量,回收率为69.3%～101.3%,结果令人满意。 在甲醛存在下,高锰酸钾与尿酸能够发生化学发光反应,产生很强的化学发光。据此采用流动注射技术,建立了一种利用高锰酸钾甲醛尿酸化学发光体系测定尿酸的化学发光分析法。方法的检出限为6×10-6 g/L;相对标准偏差为1. 8% (4. 0×10-4 g/L尿酸,n=11 );线性范围为2. 0×10-5 ~5. 0×10-3g/L。本法用于人体尿液中尿酸的测定,结果令人满意。 在碱性条件下,铁氰化钾氧化鲁米诺产生发光,盐酸异丙肾上腺素对该体系有显著的增强作用。基于此并结合流动注射技术建立了测定盐酸异丙肾上腺素的新方法。该方法具有很高的灵敏度,检出限为8.6ng L(IUPAC) ;线性范围为0 .0 5～10 μg L。对1.0 μg L盐酸异丙肾上腺素平行测定11次,其相对标准偏差为3.6 %。 …… 化学发光法的分析对象可分为无机物（无机离子、N的氧化物、含S化合物）有机物、聚合物、活性氧、纳米分子等
化学发光法及其应用 摘要：对近年来化学发光分析法的研究应用最新进展作了评述,包括化学发光体系的类型,化学发光法的新方法，化学发光在无机、药物分析及食品中的应用。 关键字：化学发光法；化学发光体系；应用； 化学发光是在没有光、电、磁、声、热源激发的情况下，由化学反应或生物化学反应产生的一种光辐射。以此为基础的化学发光化学发光(Chemiluminescence ，简称CL)分析法是近30 年来发展起来的一种高灵敏的微量及痕量分析法，由于可以进行发射光子计量，又没有外来激发光源存在时散射光背景的干扰，因而具有很高的灵敏度(检出限可达 10-12-10-21mol)，很宽的线性范围(3-6个数量级)，同时仪器设备又很简单、廉价、易微型化，在二十世纪的最后十年发展非常迅速。 近来,在改进和完善原有发光试剂和体系的同时，新发光试剂的合成,新体系的开发，与其它技术的联用，尤其是流动注射技术，传感器技术，HPLC 技术及各种固定化试剂技术的联用，更显示出化学发光分析快速，灵敏，简便等优点，也进一步拓宽了化学发光的应用范围。并且，化学发光在多类复杂有机物质，如氨基酸、蛋白质、维生素、核酸、DNA、激素、生物碱及各类药物及毒物的检测，多种生物活性物质的分析，多种抗体和抗原的免疫分析，基因芯片、蛋白质芯片、受体芯片、酶芯片、微流控芯片研究中得到了广泛地应用，而且呈现出上升趋势。为生命科学、环境科学、材料科学的研究提供了许多新的、高灵敏度的、有效的分析手段，推动了这方面科学理论和高新技术的发展；同时，其他相关学科的研究成果也为化学发光和生物发光提供了许多新的技术和手段，出现了许多新的化学发光和生物发光法，如纳米发光、发光成像、发光活体分析，大大促进了化学发光的发展及应用。本文将从以下几个方面论述化学发光分析法。 1 化学发光分析法的原理 化学发光(Chemiluminescence，简称CL) 分析法是分子发光光谱分析法中的一类，是指物质在进行化学反应时，由于吸收了反应时产生的化学能，而使反应产物分子激发至激发态，受激分子由激发态回到基态时，便发出一定波长的光。根据化学发光反应在某一时刻的发光强度或发光总量来确定组分含量的分析方法叫化学发光分析法[1]。 换句话说，化学发光是指吸收了化学反应能的分子由激发态回到基态时所产生的光辐射现象, 广义的化学发光也包括电致化学发光。一个化学反应要产生化学发光现象, 必须满足
常见化学发光免疫分析技术比较 1、化学发光免疫分析 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay，CLIA)，英音：[,kemi,lju:mi'nes?ns] [,imju:n?u?'sei] 是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 CLIA是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 1.1、化学发光免疫分析原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hv) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。 1.2、化学发光免疫分析类型
化学发光免疫分析法以标记方法的不同而分为两种: (1)化学发光标记免疫分析法; (2)酶标记、以化学发光底物作信号试剂的化学发光酶免疫分析法 1.2.1化学发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CL IA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物-acridiniumester (AE) , 是有效的发光标记物，其通过起动发光试剂(NaOH-H2O2) 作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。吖啶酯作为标记物用于免疫分析, 其化学反应简单、快速、无须催化剂; 检测小分子抗原采用竞争法, 大分子抗原则采用夹心法, 非特异性结合少, 本底低; 与大分子的结合不会减小所产生的光量, 从而增加灵敏度。 1.2.2化学发光酶免疫分析 从标记免疫分析角度, 化学发光酶免疫分析(chemiluminescent enzyme immunoassay，CLEIA ) , 应属酶免疫分析, 只是酶反应的底物是发光剂, 操作步骤与酶免分析完全相同: 以酶标记生物活性物质(如酶标记的抗原或抗体) 进行免疫反应, 免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物, 在信号试剂作用下发光, 用发光信号测定仪进行发光测定。目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(AL P) , 它们有各自的发光底物。 12.2.1HRP 标记的CLEIA
光谱分析化学Spectral Analytical Chemistry 综述题目化学发光综述 学生姓名 所在学院化学化工学院 专业及班级分析化学 完成日期2013年12月27日
目录 摘要 (3) 1.理论背景 (4) 1.1化学发光分析 (4) 1.2化学发光的分类 (6) 2.化学发光试剂 (7) 2.1直接化学发光剂 (7) 2.1.1 吖啶酯及吖淀酰胺类 (7) 2.1.2 三联吡啶钌 (9) 2.2 酶促反应发光剂 (10) 2.2.1鲁米诺及其衍生物 (10) 2.2.2（金钢烷）- 1,2- 二氧乙烷及其衍生物 (11) 3.国内外主要的化学发光仪器的生产商 (13) 4.化学发光的应用 (16) 4.1化学发光免疫分析 (16) 4.2药物分析方面的应用 (17) 5.化学发光的市场与化学发光免疫分析的临床前景 (18) 5.1国外自动化免疫分析系统生产商及自动化免疫分析系统 (19) 5.2国内自动化免疫分析系统生产商及自动化免疫分析系统 (21) 6.结束语 (22) 参考文献 (22)
化学发光分析 摘要 化学发光作为光谱分析中重要的分析手段越来越受到普遍的关注，由于其不需要外源性激发光源，避免了背景光和杂散光的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比。并具通过特定的化学发光可以定性定量的测定微量物质，有灵敏度高，线性范围宽，设备简单，操作方便，易于实现自动化，分析快等特点。本文首先从化学发光的理论依据出发，进行化学发光的分类，化学发光的仪器的国内外现状，然后详细介绍了化学发光在免疫分析方面的应用，为扩大化学发光分析技术在替它领域的应用提供一些启发，最后进行了化学发光免疫分析系统进行了市场分析，及其临床应用进行了深入探讨。 关键词：光谱，化学发光，免疫分析，应用 0.前言 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由基态（较低能级）跃迁到激发态（较高能级），然后再返回到基态，并释放光子的过程。根据形成激发态分子的能量来源不同可分为：光照发光、生物发光、化学发光等。 光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可见光（荧光）。生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来（现在学术界也把生物发光最为化学发光的一种）。化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反应过程所产生的光的发射现象。某些物质（发光剂）在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 本文主要介绍化学发光方面的理论及其应用。一些化学反应能释放足够的能量把参加反应的物质激发到能发射光的电子激发态，若被激发的是一个反应产物分子，则这种反应过程叫直接化学发光。反应过程可简单地描述如下： A + B C* C* C + hυ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态；
化学发光和金纳米簇简介 化学发光概述 化学发光现象是在某些化学反应过程中，体系中的反应物、生成物或中间体吸收了反应产生的能量从基态跃迁到激发态，然后在从激发态回到基态的过程中，释放光子。依据发光体的不同，化学发光通常分为两种：反应物或者生成物直接吸收能量被激发然后跃迁回基态，释放光子，这是直接发光；而在间接发光中，反应产生激发态的中间体，中间体跃迁回基态的同时将能量传递给另一种物质（能量接受体）使其被激发，最后当其回到基态的时候放出光子产生发光。 化学发光分析是基于化学发光而建立的一种分析方法，借助体系中某一种物质含量不同时化学发光强度的大小不同来确定这种物质的含量。上个世纪20年代末，Albrecht发现，鲁米诺在碱性介质中存在明显的化学发光行为，成为了化学发光作为一种高效分析方法被广泛研究的里程碑。化学发光分析与荧光分析最大的区别是，化学发光分析并不需要光源，因此不受到背景光和杂散光的干扰，线性范围大，灵敏度高，操作简便。现在化学发光分析正被广泛研究，尤其是将化学发光与流动注射、毛细管电泳、传感技术等结合，可以建立许多高灵敏度，高自动化的精密分析方法。其中流动注射化学发光分析方法的建立极大地增加了化学发光分析的应用范围和其精密度。目前化学发光分析方法广泛应用于临床分析、材料分析、环境检测、食品
检验等各个方面。 在化学发光中，对于400-750nm可见光区域的发光，反应能需要达到168～295kJ/mol，而一般情况下具备这种能量的反应是氧化还原反应，因此目前化学发光研究领域最常见的化学发光体系均为氧化还原反应体系。例如目前最普遍的化学发光体系：过氧草酸酯类，钌(II)-联吡啶配合物，鲁米诺，铈(IV)，光泽精以及高锰酸钾反应体系，这些发光体系均为典型的氧化还原反应体系，以氧化还原反应产生的能量作为化学发光反应的能量来源。而这些化学发光体系通常由于选择性不好而在实际应用中受到极大限制，如何提高这些化学发光方法的选择性成为了化学发光研究领域的热点之一，最常用的方法便是合成新的纳米材料来催化增强化学发光信号，开发寻找新的高效的化学发光体系、发光试剂。 鲁米诺化学发光反应体系 鲁米诺（5-氨基邻苯二甲酰肼）是一种酰肼类物质，常温下为黄色晶体，结构简单，性质稳定，无毒，且易于合成。是目前化学发光研究领域中一种十分重要的物质。鲁米诺具有还原性，在强碱性溶液中，在强氧化剂，如过氧化氢、次氯酸盐、氧气、铁氰化钾、高锰酸钾的存在下被氧化，氧化产物吸收能量被激发，发射蓝光，并且回到基态。同时，许多物质对鲁米诺的化学发光存在增强或抑制作用，因此，鲁米诺被广泛应用于各类化学发光反应中。而根据鲁米诺化学发光体系的作用对象和原理的不同，鲁米诺化学发光体系通常被分为直接测定
电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用分析 【摘要】目的：分析电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用效果。方法：选取广西柳州市柳钢集团公司医院2015年1月～2017年1月收入的70例肝硬化患者作为研究对象，分别利用生化免疫比浊法和电化学发光免疫分析法对甲胎蛋白进行检测和比较。结果：两种检测方法所得检测结果差异无统计学意义（P>005）；两种检测方法批内及批间CV变异系数相比较，电化学发光免疫分析法较生化免疫比浊法更小但差异无统计学意义（P>005）。结论：电化学发光免疫分析操作简便、快捷，结果可靠且具备较好的重复性，值得在今后临床检验工作中推广使用。 【关键词】电化学发光免疫分析；肝硬化；甲胎蛋白【中图分类号】R969 【文献标志码】 B【文章编号】1005-0019（2018）06-256-01 随着人们保健意识的提高，前往医疗卫生机构接受诊疗的患者数量日渐增多，大批量样本快速检测成为临床检验面临的一个不可回避的现实问题。既往采用的生化免疫比浊法虽然能够满足临床大样本检测需求但检测结果无论是精密度还是准确性、重复性均相对较低，越发难以满足实际工作
需求。电化学发光免疫分析是继酶免疫测定法、放射免疫法、流注射析、时间分辨荧光免疫技术之后的一种全新酶免疫测定法，自身融合了电化学发光以及免疫测定技术的优势，整个检测工作更加简便、高效[1]。为探寻电化学发光免疫分析及其在临床检验中的应用效果，本次研究内容如下：1资料与方法 11一般资料选取广西柳州市柳钢集团公司医院2014年1月～2016年1月收入的70例肝硬化患者作为研究对象，其中男48例、女22例；年龄35岁～60岁，平均年龄（4879±131）岁；病程时间12年～5年，平均病程（231±028）年；症状表现：疲倦乏力41例、食欲不振29例；病症类型：小结节性肝硬化63例、大结节性肝硬化7例。纳入标准：（1）经临床诊断确诊为肝硬化者；（2）未合并其他肝脏疾病者。排除标准。 12方法于住院次日清晨分时抽取空腹静脉血5ml，采集部位均?橹獠烤猜觯?以3000转/min离心10min后采集血清并将其一分为二，一份采用电化学发光免疫分析测定，仪器设备为罗氏公司生产的Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪。另一份采用生化免疫比浊法进行测定，宁波美康生物科技有限公司生产甲胎蛋白（免疫比浊法）检测试剂盒。所有检测步骤均严格按照仪器或试剂盒内说明书要求进行。选取甲胎蛋白以及批内及批间CV变异系数作为观察指标，