肺炎支原体培养及药敏检测的临床意义
一、支原体
支原体：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。支原体细胞中唯一可见的细胞器是核糖体（支原体是原核细胞，原核细胞的细胞器只有核糖体）。
支原体对热的抵抗力与细菌相似。对环境渗透压敏感，渗透压的突变可致细胞破裂。对重金属盐、石炭酸、来苏尔和一些表面活性剂较细菌敏感，但对醋酸铊、结晶紫和亚锑酸盐的抵抗力比细菌大。对影响壁合成的抗生素如青霉素不敏感，但红霉素、四环素、链霉素及氯霉素等作用于支原体核蛋白体的抗生素，可抑制或影响蛋白质合成，有杀灭支原体的作用。
二、肺炎支原体
肺炎支原体（M.Pneumonia），MP,是支原体的一种，是人类支原体肺炎的病原体。支原体肺炎的病理改变以间质性肺炎为主，有时并发支气管肺炎，称为原发性非典型性肺炎。主要经飞沫传染，潜伏期2～3周，发病率以青少年最高。MP感染的临床表现常无特异性，临床的实际工作中，容易与一般病毒性感冒相混淆。在临床上患儿有下列症状：（1）发热呈弛张热或不规则热。刺激性咳嗽非脓性痰，偶带血丝。（2）可有咽痛、头痛、胸痛，全身症状比体征明显。（3）肺部体征不典型而胸片炎症显著，可见云雾状大片阴影。（4）WBC正常或升高。（5）青霉素类、磺胺类抗生素治疗无效，改用或一开始用大环内酯类抗生素有效。（6）实验室MP检验有1项或1项以上阳性具备以上2个条件或以上者可初步诊断为MP感染。更多时候，临床医生为了尽快缓解患儿的症状，需根据患儿的症状、体征和病史做MP感染的诊断性治疗，但应与肺结核相互鉴别。
三、肺炎支原体的诊断方法比较及临床意义
1、PCR法
咽拭子PCR法检测质粒核酸，该法快速、敏感和特异，通过这一技术可从患儿痰中检测MP-DNA。由于此方法相当敏感，易受污染，故实验室操作时应特别小心。统计结果显示，该法的阳性率为67.76%（103/152），高于快速培养法。此法弥补了极微量的和被药物杀死的MP不能通过快速培养法检出的病例。但是此法操作复杂，对设备及标本要求比较高。
2、血清MP-Ab法
血清MP-Ab法是检测患儿血清中的MP抗体，而非直截了当检测MP本身，因而阳性结果并不能确诊是MP感染。对患儿状态的综合评估应包括对患者临床症状和试验结果的严谨分析。极低量的抗体可能不被此试验检测出来。另外还有些MP感染的患者不产生抗体或只产生少量的抗体，高抗体滴度的样品要出现前带现象。
3、MP培养及药敏法
MP培养及药敏法是利用MP生长代谢产物使培养基液体中指示剂颜色发生改变来判断MP生长；标本中的其他支原体和细菌则因培养基中加入了青霉素和醋酸陀均被抑制。24~48小时培养+鉴定+药敏实验一步到位，操作方便，结果易判断，虽然并非直截了当检测MP本身，阳性结果并不能确诊是MP感染。
但是药敏结果可以直接为临床医生提供用药指导，为患者的治疗争取宝贵的时间，培养及药敏法越来越受到患者及临床医生的欢迎。
五、小结
肺炎支原体引起支原体肺炎，四季均可发生，早期诊断及合理用药能大大减轻患者的痛苦，临床上检测肺炎支原体的方法很多，支原体培养及药敏实验能快速为临床提供可靠的诊断及药敏依据，在临床运用上有重要的临床意义。
毕业论文 题目：三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 地市: 学校: 准考证号: 考生姓名: 王莹 指导老师: 二〇一八年八月十四日
三种肺炎支原体检测法的临床应用分析 摘要 目的探讨肺炎支原体（MP）咽拭子快速液体培养法、咽拭子聚合酶链反应（PCR）法和血清MP被动凝集法（MP-Ab）等方法在儿童MP感染诊断治疗过程中的敏感性方法采用3MP检测法对362例临床拟诊呼吸道（非细菌性）感染的患儿的咽拭子和血清标本进行配对研究，每患儿取咽拭子做快速培养和PCR，同时取血清做MP-Ab检测，对3种方法的检测结果与临床诊断治疗病例进行回顾性分析。结果回顾临床病例诊断MP感染患儿152例。MP快速培养法检出阳性78例，阳性率为51.3%，病程为（4.5±2.6）天；PCR法检测出阳性103例，阳性率为67.8%，病程为（6.2±3.5）天；MP-Ab法检测出阳性127例，阳性率83.5%，病程（8.1±4.5）天。结论 3种MP检测法的敏感性与病程有相关性，临床医生应根据患儿病程选取检测方法，以提高阳性检出率和敏感性。 关键词肺炎支原体，快速培养法，咽拭子聚合酶链反应，血清抗体，配对研究
目录 前言 (4) 第一章文献综述 (5) §1.1 肺炎支原体的定义 (5) §1.2 肺炎支原体的发病机制 (5) §1.3 肺炎支原体的分类 (5) §1.4 肺炎支原体的临床表现 (5) §1.5 肺炎支原体的临床诊断 (5) §1.6 肺炎支原体的实验室检查 (6) 第二章材料和方法 (7) §2.1 样本 (7) §2.2方法概述 (7) §2.3临床诊断MP感染的诊断标准 (7) §2.4实验方法 (7) §2.5统计学方法 .................................................................... .. (8) 第三章结果 (9) 第四章讨论 (10) 结论 (11) 参考文献 (11) 附录 (12) 错误！未定义书签。
两种ELISA 方法来评估三种不同方式感染肺炎支原体后的 血清学结果 E. Fano , C. Pijoan, S. Dee 勃林格殷格翰动物保健 余平良译 概述和试验目的 尽管分子技术已经应用在M.hyo 的诊断，但是血清学方法在猪群感染方式的确诊方面仍然十分重要（1）。在田间条件下血清学检测的结果差异很大，这反应了在感染压力和感染途径等方面具有某些流行病学的特征。该试验证明了DaKo ELISA 比TWeen 20 ELISA 更加敏感（2,3），本研究的目的是为了比较猪肺炎支原体的三种不同感染方式下流行病学的模式，以及比较两种检测肺炎支原体的ELISA 方法的敏感性。 材料与方法 本研究评估了M.hyo 三种感染方式：气管内接种，直接接触感染，间接接触感染。12头3月龄的肺炎支原体阴性的后备母猪气管内接种10ml （105ccu/ml ）肺炎支原体232株。在同一天12头同龄的阴性猪与接种猪关在一起，让其直接接触感染。第三组12头猪关在离感染猪圈3米远的栏中。第三组猪就做为间接接触感染的猪。为了评估血清学曲线图，本研究把三组猪做了纵向的血清学比较检测。试验感染后的第0, 28, 35, 42, 49, 63, 91, 119 和154天，分别采血用DAKO ELISA 检测M.hyo 的抗体。为了同DAKO ELISA 比较，该试验同时还采用TWeen20 ELISA 对血样进行了检测。 结果与讨论 三种不同感染方式的猪血样检测的结果见表1.。两组接触感染的猪其血清阳转时间迟于接种猪，尤其是间接接触感染组。尽管接种猪和接触感染猪都在同一天开始试验，但是接触感染猪很可能是当接种猪排菌后（一周后）才感染的。即使这样，三种感染方式的结果的差异仍然明显。本研究的结果可以解释田间条件下血清抗体曲线图的差异。如前所述(2,3), Dako ELISA 比Tween 20检测法更加敏感，并且能早一周检测到抗体。这个差异在三组猪的试验中表现出来了（表2,3,4）。 表 1. 三个组的血清学反应. IT ，为气管内接种；DC, 为直接接触感染；IC, 为间接接触感染 感染后的天数 感 染比例 %
支原体培养及药敏阳性什么意思 支原体培养及药敏呈现阳性，这说明感染了支原体，如果是已婚人士，一定要夫妻同治，在转阴以后说明彻底治好，但是要及时复查，避免出现反复发作的情况，治疗选择一些敏感的药物是比较重要的，这样对于治疗的效果会更好，除了治疗以外，平时要加强调养，注重饮食保健，保持充分的休息，在治疗期间不能有性生活。 ★支原体的治疗方法：1：需使用敏感抗生素，足量治疗(一般青霉素类没有作用)。2：必须治疗达到足够的时间。一般7-10天。同时注意，预防二次感染。(保持内裤干净，性伴侣同时治疗，禁忌酒和刺激性食物)。最好能在疾病治愈以后再要小孩。解脲支原体是一种通过性接触传播的疾病。3 四环素类及大环内酯类药物效果较佳，尤其是后者。二种或三种药物联合治疗为最好的方案。希舒美首剂1.0g，后0.5g/日，qd，5天1个疗程+美满霉素首剂200mg，后100mg，7天1个疗程+肤阴洁坐浴，1周后，复查白带培养及肝、肾功能。 4 及早到正规医院治疗，并且遵照医嘱定期复查，才能取得良好的疗效。
★支原体阴道炎的患病途径很多 包括性接触、直接接触、自体感染、医源性感染等。有不少女性检查出支原体感染属于携带者，也有些是自体感染(支原体)会寄生人体。解脲支原体感染主要通过性生活传播，多见于年轻性旺盛时期，尤多见于不洁性交后。当泌尿生殖道发生炎症，粘膜表面受损时解脲支原体易从破损口侵入，引起泌尿生殖道感染。解脲支原体感染后，患者大多无明显症状，因此，很难被患者觉察，也易造成医生漏诊。 解脲支原体可侵犯尿道、宫颈及前庭大腺，引起尿道炎、宫颈炎与前庭大腺炎;上行感染时，可引起子宫内膜炎、盆腔炎、 输卵管炎，尤其输卵管炎多见。解脲支原体感染造成的女性生殖器官病理性改变，是不孕不育的重要原因。 因此，女性一定要洁身自爱，注意养成良好的生活卫生习惯，杜绝支原体感染，发现患上支原体阴道炎后要及时到医院接受正规的治疗。
肺炎支原体IgM抗体检测SOP 一、检验目的 规范实验室人员操作，以保证实验结果的准确性。 二、预期用途 该产品用于定性检测血清、血浆或全血中的肺炎支原体IgM抗体。是引起社区获得性呼吸道感染的主要病原体之一，可以导致支气管炎和非典型性肺炎。主要引起人非典型肺炎、气管炎及支气管炎，多经口和呼吸道等途径传播，多发于儿童和青年人。MP感染已占小儿呼吸道疾病30%以上，且有增加趋势。人体感染肺炎支原体后，能产生特异性IgM和IgG抗体。IgM 抗体出现早，一般在感染后1周出现，3~4周达高峰，以后逐渐降低。再次感染或重复感染后，常在1-2周内出现较高水平的IgG抗体。MP肺炎与一般呼吸道感染和肺炎的临床症状没有明显区别，MP感染早期诊断有利于MP肺炎的治疗。血青学诊断法是临床常用的主要诊断方法之一，灵敏度和特异性适中，常用的主要有酶联免疫吸附试验和凝集试验。 三、检验原理 本产品以胶体金作为指示标记，用胶体金标记抗人IgM单抗，以基因工程技术表达肺炎支原体P1蛋白抗原标被硝酸纤维素膜，应用“间接法”免疫层析技术原理，检测的肺炎支原体感染病人血清、血浆或全血中的肺炎支原体抗体IgM,在检测过程中，若样本中存在肺炎支原体抗体gM, 则肺炎支原体抗体1gM与样本吸附垫中的胶体金一抗人IgM单抗结合物形成复合物，复合物沿硝酸纤维素膜移动到检测区，与检测线上包被的肺炎支原体P1蛋白抗原结合，多余的未被结合的结合物继续移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG 抗体结合，反应膜上出现1条红色的检测线和1条红色的质控线；若样本中不存在肺炎支原体抗体IgM,则胶体金一抗人IgM单抗结合物直接沿硝酸纤维素膜移动到质控区，与质控线上包被的羊抗鼠IgG抗体结合，仅形成一条红色的质控线。 四、主要组成成份 1、试剂盒组分 包括肺炎支原体1gM抗体检测卡，样品稀释液。 1.1、检测卡主要组分：包括金标垫和硝酸纤维素检测膜，金标垫内包被有胶体金标记的抗人IgM单克隆抗体；硝酸纤维素检测膜的检测线上包被有基因工程技术表达的肺炎支原体P1蛋白抗原，质控线上包被有羊抗鼠IgG抗体。
支原体肺炎患儿D—二聚体检测及临床意义 目的探讨支原体肺炎血浆D二聚体水平变化及临床意义。方法回顾分析湖南省人医院儿童呼吸病区2012年1月～12月收治的肺炎支原体肺炎患儿，根据临床症状、病程、影像学特点分为普通肺炎支原体肺炎组50例，难治性支原体肺炎组35例。于住院第1 d抽取静脉血行D二聚体检测，难治组恢复期再次抽血检测。普通肺炎组与健康对照组比较，普通肺炎组与难治组比较，难治组急性期与恢复期比较，并对结果进行分析。结果普通肺炎组与健康对照组D二聚体水平差异无统计学意义（P>0.05），难治性支原体肺炎组急性期D二聚体水平显著高于普通肺炎组（P＜0.01），难治性支原体肺炎组急性期与恢复期D二聚体水平差异显著（P＜0.01）。难治性支原体肺炎病情严重程度与D二聚体水平有一定的相关性。结论通过检查D二聚体水平可早期发现诊断难治性肺炎支原体肺炎。在难治性支原体肺炎患儿的诊治过程中，监测D二聚体水平并及时干预，有利于疾病转归。 标签：肺炎支原体肺炎；D二聚体；儿童 肺炎支原体（mycoplasma pneumoniae，MP）是介于细菌与病毒之间能自我复制的一种病原微生物，是社区获得性肺炎的常见病原体之一[1]。既往认为MPP临床表现较轻，部分病例呈自限性。近几年重症/难治性肺炎支原体肺炎（RMPP）病例有逐年增多的倾向[2]。早期识别發现RMPP病例实属必要。本文旨在探讨肺炎支原体肺炎患儿D二聚体水平，为早期发现RMPP提供参考依据。 D-二聚体（D-dimmer）是纤溶酶水解交联纤维蛋白降解后形成的特异性降解产物，是体内高凝状态和纤溶亢进的分子标记物之一。研究证实，感染的程度不同，可伴有不同程度和范围的凝血系统的激活，D-二聚体水平有不同的变化。本研究拟在通过检测、对比分析湖南省人医院儿童医学中心呼吸病区2012年1月～12月收治的支原体肺炎患儿的血浆D-二聚体水平，揭示难治性支原体肺炎组与肺炎组之间的血浆D-二聚体水平差异性，从而为难治性支原体肺炎严重程度判定和临床治疗提供另一条思路，现分析报告如下。 1资料与方法 1.1一般资料资料来源于湖南省人医院儿童呼吸病区2012年1月～12月收治的肺炎支原体肺炎患儿。根据临床症状、病程、影像学特点分组。RMPP组：35例，男16例，女19例，年龄1～3岁5例，4～6岁19例，7～14岁11例，平均年龄（5.32±1.65）岁。MPP组：同期住院诊断MPP50例，男23例，女27例，年龄1～3岁9例，4～6岁23例，7～14岁18例，平均年龄（4.59±1.41）岁。健康对照组：儿童保健科体检儿童20例，男12例，女8例，平均年龄（3.87±1.18）岁。 1.2 MPP诊断标准参照《诸福棠实用儿科学》第7版[3]；起病4 w内双份血清支原体抗体的滴度升高有4 倍以上[4]；鼻咽部和口咽部的标本荧光定时定
肺炎支原体肺炎患儿肺功能变化的意义 【摘要】目的：探讨和分析肺炎支原体肺炎患儿肺功能变化情况。方法：将我院此次收治的40例肺炎支原体肺炎患者做为此次的研究组；另外选择同期进行健康体检的40例人群为对照组。对研究组采用阿奇霉素治疗，治疗前后分别进行肺功能检测。结果：治疗后，观察组患者的肺功能得到明显改善，与治疗前、对照组比较（P<0.05）。研究组治疗有效率为95.0%（38/40），治疗前后，患者的肺功能改善明显，P<0.05。结论：由于肺炎支原体肺炎患者存在大小气道通气障碍，同时气道黏膜受到损害，所以患者容易转归为哮喘。为此，需对患者进行定期的随访和早期干预，同时对患者进行肺功能检测则能够有效地评估患者的病情。 【关键词】肺炎支原体肺炎；阿奇霉素；肺功能；哮喘【中图分类号】R725.6 【文献标识码】A 【文章编号】004-7484（2014）04-2608-01 临床上，肺炎支原体肺炎在儿童人群呼吸道感染中则是一种十分常见的病原体，其大约占到儿童肺炎10.0～ 40.0%[1]。并且肺炎支原体肺炎感染则与哮喘存在一定的关联。此次研究中，为了研究和探讨肺炎支原体肺炎患者的肺功能改变情况，以下是详细报道。
1 资料与方法 1.1 一般资料此次研究的对象为40例肺炎支原体肺炎患者，将其作为研究组，收治时间为2012年7月～2013年12月。其中男性为25例，女性为15例；年龄在 2.5～4.0岁，平均为（ 3.0±0.5）岁。患者不存在其他混合感染以及免疫性疾病。此外，选择同期进行健康体检的40例人群为对照组。其中男性为26例，女性为14例；年龄在2.0～ 4.0岁，平均为（3.0±0.5）岁。比较两组的年龄和性别等资料，P>0.05具有可比性。 1.2 方法 研究组：对患者采用阿奇霉素针剂10mg/（kg.d），1次/d，连用5～7d。在患者症状得到控制后，改为口服阿奇霉素10mg/（kg.d），1次/d，连续使用3d。一共治疗21d。 肺炎支原体的检验：在患者入院后，采集其静脉血液并采用酶联免疫吸附法检测，并根据相关的操作流程进行[2]。 肺功能的检测：对两组人群在诊断和治疗后分别进行肺功能检测。主要检测：用力肺活量（FVC）、第一秒最大呼气量（FEV1）、最大呼气流速峰值（PEF），用力呼气25%流速（MEF25）、用力呼气50%流速（MEF50）[3]。 根据实测值占预计值百分数判定肺功能损害程度。正常：>80%；轻度损害：80%～60%；中度损害：60%～40%；重度损害：<40%[4]。
肺炎支原体抗体检测 （被动凝集法） 1.目的：规范实验室肺炎支原体抗体检测操作。 2.范围： xxxx院xxxx科 3.测定原理： 将肺炎支原体（Mac株）的细胞膜成分致敏人工载体明胶粒子制造而成。这种致敏粒子和样本中的肺炎支原体抗体进行反应发生凝集，由此可以检测出血清和血浆中的肺炎支原体抗体，并且用来测定抗体的效价。 4.标本： 4.1采用正确医用技术收集血清/血浆样本，血浆样本推荐使用肝素钠抗凝血浆，枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。 4.2样本中的沉淀物和悬浮物，红细胞等其它有形成分可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。 4.3严重溶血或脂血的样本不能用于测定。 4.4样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。使用前恢复到室温，轻轻摇动混匀。 5.试剂：珠海丽珠试剂股份有限公司提供的试剂。 5.1试剂盒在2℃—10℃储存，防止冷冻，避免强光照射，有效期12个月。 5.2 试剂盒开启使用后，冷冻干燥品配好后，2℃—10℃保存可使用7日，使用前必须做对照试验。 5.3试剂组成 5.3.1血清稀释液（液体）：用于稀释样品和复溶致敏粒子和未致敏粒子。 5.3.2致敏粒子（冷冻干燥）：肺炎支原体（Mac株）抗原致敏的明胶粒子。使用时加入规定量的血清稀释液。复溶后的试剂含有0.9%的致敏粒子。 5.3.3未致敏粒子（冷冻干燥）鞣化的明胶粒子冻干制品。使用时加入规定量的血清稀释液。 5.3.4阳性对照血清（液体）肺炎支原体（Mac株）抗体阳性的兔血清用血清稀释液1:10 稀释后的制品。 6.临床标本测定 6.1试剂的准备 6.1.1溶解液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.2血清稀释液（液体）：按照测定操作规则使用。 6.1.3致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.4未致敏粒子（冷冻干燥）：加入一定量的溶解液进行调制。请在使用前30分钟于室温（15~30℃）下进行调制。 6.1.5阳性对照血清（液体）：按照操作规则使用。 6.2 手工操作步骤 6.2.1 用微量滴管将血清稀释液滴入微量反应板第1孔中，共计4滴（100ul），从第2孔至第8孔（或更多）各滴入1滴（25ul）血清稀释液。 6.2.2 用微量移液管取样品25ul至第1孔中，然后用微量加样器或微量移液管以倍比稀释的方式从第1孔稀释至第8孔中（或更多）。 6.2.3用试剂盒中提供的滴管在第2孔中加入1滴(25ul)未致敏粒子，用另一个滴管向第3
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２．Ｖｏｌ．１９，Ｎｏ．６ 中国临床医学 ２ ０１２年１２月 第１９卷 第６期 ·论著· 肺炎支原体的分离鉴定与药敏性研究 刘展１＊ 袁春丽１＊ 李青凤２ 汪水城１ 王本旭２ （１．北京市怀柔区妇幼保健院，北京 １０１４００；２．北京军区疾病预防控制中心，北京 １０００４２ ）摘要 目的：探讨肺炎支原体的临床分离株对临床常用药的敏感性。方法：将临床采集的咽试子标本经过选择性培养基筛选培养，同时进行聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测，确定分离到的支原体为肺炎支原体。将肺炎支原体与不同浓度的临床常用抗生素混合， 观察液体培养基颜色的变化，判断肺炎支原体对药物的敏感性。结果：成功分离到１株肺炎支原体；阿奇霉素、红霉素和头孢呋辛钠浓度分别稀释至３１μｇ／ｍＬ、１２５μｇ／ｍＬ、５００μｇ／ｍＬ时，肺炎支原体抑制；而头孢曲松钠、美洛西林、氨苄青霉素等抗生素对支原体无抑制作用，培养基颜色均由红色变为橙黄色。结论：肺炎支原体临床分离株对阿奇霉素高度敏感， 对红霉素和头孢呋辛钠中度敏感。关键词 肺炎支原体； 分离鉴定； 药敏性中图分类号 Ｒ７２５．６ 文献标识码 Ａ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ Ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ＬＩＵ Ｚｈａｎ１ ＹＵＡＮ Ｃｈｕｎｌｉ１ ＬＩＱｉｎｇｆｅｎｇ２ ＷＡＮＧ Ｓｈｕｉｃｈｅｎｇ１ ＷＡＮＧ Ｂｅｎｘｕ２ １．Ｈｕａｉｒｏｕ Ｍａｔｅｒｎａｌ ａｎｄ Ｃｈｉｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０１４００，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｃｏｍｍａｎｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４２，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｓａｍｐｌｅｓｏｆ ｔｈｒｏａｔ ｓｗａｂ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ ｉｎ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＰＣＲ．Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｗｅｒｅｍｉｘｅｄ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｉｆ ｏｎｅ ｄｒｕｇ ｃｏｕｌｄ ｋｉｌｌ ｔｈｅ ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ，ｔｈｅ ｃｏｌｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅｄｉａ ｗｏｕｌｄ ｎｏｔ ｃｈａｎｇｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｏｎｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐ ｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｔｙｐｅ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ．Ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ｅｒｙｔｈｒｏ－ｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ｓｏｄｉｕｍ ｗｅｒｅ ｄｉｌｕｔｅｄ ｔｏ ３１μｇ／ｍＬ，１２５μｇ／ｍＬ，５００μｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｗｅｒｅｓｕｐｒｅｓｓｅｄ．Ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ ｓｏｄｉｕｍ，ｍｅｚｌｏｃｉｌｌｉｎ ａｎｄ ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｒｏａｔ ｓｗａｂ ｓａｍｐｌｅｓ ｉｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｅａｓｉｌｙ ｂｙ ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ．Ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎａｎｄ ｃｅｆｕｒｏｘｉｍｅ ｓｏｄｉｕｍ ａｌｓｏ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ．Ｋｅｙ Ｗｏｒｄｓ Ｍｙｃｏｐｌｓｍａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ； Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ； Ｄｒｕｇ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ＊刘展和袁春丽为共同第１作者 基金项目：北京市首都医学发展科研基金（编号：２００９３２６７）通讯作者 王本旭，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇ ｂｅｎｘｕ２０２８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ 支原体肺炎是肺炎支原体（ｍｙｃｏｐ ｌａｓｍａ ｐｎｅｕ－ｍｏｎｉａｅ，ＭＰ） 引起的肺炎。支原体肺炎起病缓慢，患者有发热、 阵发性刺激性咳嗽、少量黏液性或黏液脓性痰。支原体肺炎多发于青少年，患病率占肺炎的 １５％～３０％［１］ 。目前临床治疗支原体肺炎的常用药 物包括阿奇霉素、红霉素等［ ２］ 。本研究旨在通过探讨ＭＰ临床分离株对临床常用抗生素的敏感性， 为临床治疗支原体肺炎提供用药依据。 １ 资料与方法 １．１ 材料 乳糖酸阿奇霉素（东北制药集团沈阳第一制药有限公司，０．２５ ｇ ，２５万Ｕ／瓶），头孢呋辛钠（Ｅｓｓｅｔｉ Ｆａｒｍａｃｅｕｔｉｃｉ ｓ．ｒ．ｌ，Ｉｔａｌｙ，０．７５ ｇ ／瓶），头孢曲松钠（上海罗氏制药有限公司，０．５ ｇ ／瓶），青霉素（石家庄制药集团有限公司，１ ｇ ／瓶）；美洛西林（华北制药有限公司，１ ｇ ／瓶）；乳糖酸红霉素（湖南中南科伦药业有限公司，０．２５ ｇ ／瓶）；支原体培养基ＣＭ０４０１、ＣＭ０４０３、ＳＲ００５９和ＳＲ００６０Ｃ（Ｏｘｏｉｄ公司，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇ ｄｏｍ）；核酸分子量标准ＤＬ２０００ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ（大连宝生物工程有限公司）。１．２ 研究方法 １．２．１ 双向培养基制备 １００ ｍＬ蒸馏水中加入３．５５ ｇ ＣＭ０４０１，１２１℃高压灭菌１５ ｍｉｎ，每个１５ｍＬ培养管中加入１ ｍＬ灭菌后的ＣＭ０４０１培养基，自然凝固。取１支ＳＲ００６０Ｃ，加入２０ｍＬ蒸馏水溶解。向每个培养管中加入２ ｍＬ ＳＲ００６０Ｃ，４℃保存备用。 １．２．２ 咽拭子标本选择性培养与鉴定 将咽拭子标本浸入双向培养基中，３７℃培养２周左右。当培养基颜色由红色转变为橙黄色时，将培养液于ＭＰ固体培养（ＣＭ０４０３＋ＳＲ００５９＋琼脂粉）上划板培养，直至镜下看到“ 油煎蛋”样菌落长成为止。挑取菌落于双相培养基中继续培养，观察培养基颜色变化。１．２．３ ＭＰ的ＰＣＲ鉴定方法 支原体核酸提取方 法参照ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ，Ｃａｔ２ ２６
来自：杨传松,胡雪飞,廖晚珍. 2379例女性患者支原体感染情况与药敏分析[J]. 实验与检验 医学,2010,01:77-78. 2379例女性支原体感染情况与药敏分析 杨传松⒈胡雪飞⒉廖晚珍⒉ 【摘要】目的了解女性生殖道支原体（Mycoplasma）感染（主要为南昌地区）与药物敏感试验情况，为临床治疗提供依据。方法采用支原体试剂盒对2379例疑诊为生殖道感染女性患者的宫颈分泌物进行支原体培养、鉴定及药敏试验。结果2379份标本中，支原体检测阳性1503例，阳性率63.2%，其中解脲支原体（UU）46.0%（1094/2379），UU+ MH（人型支原体）混合感染及MH分别为15.4% (367/2379)、1.8%（42/2379）。药敏结果：支原体对强力霉素（Dox）、交沙霉素（Jos）、美满霉素（Min）的敏感率均在70%以上,另外,UU对克拉霉素（Cla）、四环素（Tet）也较敏感，分别为92.3%、84.7%，但Cla在MH及UU+ MH混合感染时，敏感率较低,仅为2.4%和7.4%；耐药率较高的是环丙沙星（Cip）、壮观霉素（Spe）等。结论本地区女性生殖道支原体感染以UU 为主，其次是UU+ MH混合感染，较敏感的抗菌药为：Dox、Jos、Min，仅UU 感染时还可选用Cla。为减低支原体的耐药率，建议临床根据药敏结果用药。 【关键词】支原体感染药敏非淋球菌尿道炎 支原体（Mycoplasma）是一类无细胞壁、形态上呈高度多形性，能通过除菌滤器，在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞微生物，由于它们能形成有分枝的长丝，故称之为支原体［1］。感染人类的支原体有十余种，女性生殖道以人型支原体(MH)及解脲支原体（UU）最常见。MH感染多引起阴道炎、宫颈炎和输卵管炎，UU多引起非淋球菌性尿道（non-gonococcal urithritis,NGU）。支原体多与宿主共存，不表现感染症状，仅在某些条件下引起机会性感染，且常和其他致病菌共同致病［2］。大量的研究证明UU与自然流产、先天缺陷、死胎和不孕症有关［3］。支原体感染还是一种性传播疾病，近年来其发病率日趋上升且耐药株增多，受到医务工作者的关注。为了解本地区女性生殖道支原体感染与耐药情况，为临床用药提供参考，作者对来我院就诊的2379位女性患者宫颈分泌物做支原体检测，现将结果报告如下： ----------------------------------------------------- 作者单位：1. 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系 2. 南昌大学第一附属医院检验科 作者简介: 杨传松(1984.04.21),男, 南昌大学公共卫生学院2005级医学检验系学生. 通讯作者: 胡雪飞,E-mail:hxf123666@https://www.doczj.com/doc/6010115752.html, 1资料与方法 1.1一般资料选自2009年1月~6月来我院妇产科门诊及住院的2379例女性 患者，进行宫颈分泌物检测。
300例儿童咽拭子肺炎支原体鉴定培养及药敏分析 目的分析致儿童呼吸道感染的肺炎支原体（MP）的鉴定培养和药敏试验结果，为临床合理使用抗生素提供依据。方法采用肺炎支原体鉴定培养试剂盒对300例急性呼吸道感染的患儿咽拭子标本进行肺炎支原体鉴定培养，并对14种抗生素药敏结果进行分析。结果300例咽拭子标本肺炎支原体培养阳性87例，阳性率29%，其中男性患儿阳性率29.78%，女性患儿阳性率28.30%，男、女比较差异无统计学意义（P>0.05）肺炎支原体对强力霉素、美满霉素和敏感率高，对红霉素的耐药率最高。结论MP鉴定培养药敏试剂盒检测肺炎支原体感染操作简便、检出率高并提供药敏结果，对尽快明确诊断和临床合理使用抗生素具有指导作用。 标签：肺炎支原体；儿童；药敏试验 近年来，MP感染发病率不断上升，患者临床表现与病毒性和细菌性呼吸道感染难以鉴别易造成误诊和病情延误，因此对肺炎支原体的培养鉴定以及提供准确药敏结果对于临床诊断和选择性用药具有重要作用。现将本院急性呼吸道感染患儿咽拭子支原体培养及药敏结果分析如下。 1 资料与方法 1.1一般资料2012年3月～2013年10月在四川省人民医院儿科门诊的急性呼吸道感染儿童咽拭子标本300例，年龄分布0～8岁。 1.2方法 1.2.1检测原理药敏试验板上包被有14种抗生素：大环内酯类（红霉素、罗红霉素、阿奇霉素、克拉霉素、交沙霉素、依托红霉素和乙酰螺旋霉素）；四环素类药物（强力霉素、美满霉素）；氟喹诺酮类（环丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、加替沙星）；林克酰胺类（克林霉素）。若所测的肺炎支原体对包被的抗生素敏感，其酶活性受到抑制，不引起颜色变化。肺炎支原体快速鉴定培养药敏安图试剂由郑州安图绿科生物工程有限公司提供。 1.2.2操作步骤取出及药敏试验板，使其在接种样本前接近室温，旋开培养液瓶盖，用吸咀吸取100ul培养液加入C-对照孔；接种咽拭子（痰拭子或痰液100ul）与剩余的培养液中，加盖摇匀使之混匀；将含样本的培养液加入其余的微孔中，每孔100ul，轻轻震荡药敏试验板：所有微孔滴加1滴试剂盒所附矿油物（使矿物油覆盖液面，否则培养液蒸发，结果不准）；将药敏试验板加盖后，置培养箱中，35℃～37℃培养24～48h观察结果。 1.2.3结果判断培养24～48h培养液有桔红色变成黄色，表示有肺炎支原体生长，用（+）表示；培养液保持桔红色不变，表示没有肺炎支原体生长，用（-）表示；药敏试验板抗生素结果判定：依托红霉素（EST）孔培养液桔红色为敏感
第六节支原体 支原体是一类目前所知能在无生命培养基中独立生活，自行繁殖的最小微生物。支原体感染的范围非常广泛，包括人，动物，植物，昆虫及组织培养的细胞。人体可分离出十几种支原体，其中一些对人有致病性如：肺炎支原体、人型支原体、解脲支原体、生殖支原体、及发酵支原体等。能引起生殖泌尿系感染的支原体主要有两种，即解脲支原体和人型支原体。肺炎支原体主要引起呼吸道的感染。 支原体的体外药敏试验最早是在上世纪60年代提出。在过去的40多年中，很多研究采用肉汤稀释法和琼脂为基础的方法报道了支原体的抗菌活性，但一直没有一个公认的、标准的参考方法。在过去的几年，有关支原体体外药敏试验方法学的研究也有一些报道，但仍存在着一些不足。直至2011年CLSI M43指南出现，规范了支原体体外药敏实验的方法（微量肉汤法和琼脂稀释法）、明确了质控菌株及对不同抗生素的MIC范围、建立了临床用于支原体治疗药物的折点。因支原体培养时间较长，临床治疗支原体感染很难依靠培养及药敏的结果，基本上采用经验抗菌药物的治疗，因此支原体体外药敏试验对于临床分离株的耐药性监测以及新药的研发更具意义。 一、药敏的适应征 1.临床分离的支原体通常不需要进行药敏试验，可经验性使用抗菌药物治疗。 2.当临床经验性抗菌药物治疗效果不好时，而可用于支原体感染治疗的药物又非常的有限，需要进行支原体的体外药敏试验。目前，已知可能的耐药包括： 1）人型支原体、脲原体的某些种对四环素类药物的耐药。 2）人型支原体、脲原体的某些种对氟喹诺酮类药物的耐药。 3）肺炎支原体、脲原体某些种对大环内酯类药物的耐药。 4）人型支原体对克林霉素耐药。 这时就要考虑可用于治疗的药物中那些还可以用于耐药菌株的治疗。 3. 从无菌体液或生殖道以外的部位中分离的人型支原体、脲原体应做药敏，尽管人型支原体、脲原体的某些种常常是泌尿生殖道的致病菌。特别是从有播散性感染的患者如：新生儿或免疫低下患者的无菌部位分离的人型支原体、脲原体应进行体外药敏试验。 二、方法学 （一）肉汤稀释法 1. 微量肉汤稀释法 1）方法 在无菌的96孔板上，加入一定量的液体培养基（含有酚红指示剂），将测试的抗生素倍比稀释。加入终浓度为104～105CFU/ml新鲜培养物到不同抗生素浓度孔中。另外设立3个对照孔：阴性对照（只加培养基）；药物对照（肉汤 + 含抗生素肉汤）；阳性对照（肉汤 + 培养物）。加样完毕，在每孔里面滴加3到5滴无菌液体石蜡，防止长时间培养液体挥发影响实验结果准确性。盖上板盖，在适宜的温度和气体环境中培养，阳性对照孔正常生长后读取MIC。
肺炎支原体检测方法选择的几个注意点 肺炎支原体（MP ），主要引起咽炎及支气管炎，少数累及肺。以其顶端结构与宿主细胞上受体结合粘附于上皮细胞上，一般为表面感染，除穿透支原体外（艾滋病人感染）大多不侵入血液。产生有毒代谢产物如外毒素或过氧化氢等引起发热及局部细胞损伤。 选择检测方法的注意事项： 1.临床常用全血（指尖血）或血清（橘黄管）检测IgM 来判定肺炎支原体的感染，但是，抗体检测只是各种实验室方法的一种，尚有其他方法可用，如培养及DNA 检测，每种方法各有利弊，对不同病程各有针对性。 2.每一种实验结果都需要另外一种实验结果来验证，正常人咽部或支气管可携带MP ，所以不能用一种实验数据来下诊断。 3.初次感染时， IgM 、IgG 都会产生，再次感染时，有时IgM 不产生。 4.儿童由于初次感染几率大，常能产生IgM ，成人由于机体可能感染过多次，常不产生IgM 。 5. 检测方法的选择需要根据病程确定： <6个月 6-12个月 1-9岁 IgM + IgM — 年龄对IgM 抗体产生的影响
抗体 抗原 MP感染不同时段产物的比较 由此图可以看出： a.感染早期，7天之内以检测抗原为主，宜培养或DNA检测： 培养为“金标准”，据国内文献显示，快速培养法阳性率为24%；PCR--DNA检测为96%。美国一篇文献显示，培养阳性率为5%，DNA为57%。 b.早期未产生抗体，导致延误治疗，后期抗体阳性，病原体消失，导致过用抗生素。 c.7天之后可检测IgM抗体； d.IgM可持续较长时间，感染后三个月抗体浓度依然较高，有的可以终生阳性，如果短时间内检测抗体，常不能分辨是否为MP现症感染或其他感染。 e.感染早期宜病原体筛查，此时抗体尚未产生，可导致延误治疗；中后期适宜抗体检测，主要用于回顾性验证试验，此时病原体消失，可导致过用抗生素。
支原体检验法 1 培养基 1.1 检验禽源细胞和由禽胚组织或其细胞制成的活疫苗，用改良Frey 氏培养基。 1.2 检验其他种类细胞和病毒活疫苗，用支原体培养基 1.3 检验血清用无血清的支原体培养基 2 检查法 2.1 样品处理每批制品取样3-5瓶，液体制品混合后备用；冻干制品加液体培养基复原成混悬液后混合。检测血清时用血清直接接种。 2.2 疫苗的检测 2.2.1 接种于观察每个样品需同时用以下两种方法检测 2.2.2.1 液体培养基培养将疫苗混合物5.0ml接种小瓶液体培养基中，再从小瓶中去0.2ml移植接种于1小管液体培养基中，将小瓶与小管置于37℃培养，分别于接种后5日、10日、15日从培养瓶中取出0.2ml培养物移植到小管液体培养基内，每日观察培养物有无颜色变黄或变红，如果无变化，则在最后一次移植小管培养、观察后14日后停止观察。在观察期内，如果发现小瓶或任一小管内液体颜色出现明显变化，在原pH变化达0.5时，应立即移植于液体培养基和固体培养基，观察在液体培养基中是否出现恒定的pH变化，及固体上有无典型的“煎蛋”状支原体菌落。 2.2.2.2 琼脂固体平板培养在每次液体培养物移植小管培养的同时，取培养物0.1-0.2ml接种于琼脂平板，置含5%-10%二氧化碳。潮湿的
环境、37℃下培养。此外，在液体培养基颜色出现变化，在原pH变化达到0.5时，也同时接种琼脂平板。每5-7日，在低倍显微镜下观察各琼脂平板上有无支原体菌落出现，经14日观察，仍无菌落时，停止观察。 2.2.2 对照每次检查需同时设置阳性、阴性对照，在同条件下培养观察。检测禽类疫苗时用滑液支原体作为对照，检测其他疫苗时用猪鼻支原体作为对照。 2.3 血清的检测取本血清50ml代替培养基中的马、猪血清，按附录38页培养基配方配成大瓶培养，按2.2.1.2项稀释、移植、培养，观察小管培养基的pH变化情况和琼脂平板上有无菌落。 3 结果判定 3.1 接种本物的任何一个琼脂平板上出现支原体菌落时，判定血清或者疫苗不合格。 3.2 阳性对照中至少有一个平板出现支原体菌落，而阴性对照中无支原体生长，则检验有效。 附注：上述小瓶培养基是指在100ml小瓶中盛20ml液体培养基；小管培养基是指在1.0cm*10cm中盛1.8ml培养基。小管与小瓶须用胶塞封口。
简易卡 一.【肺炎支原体抗体（IgG）检验方法】 1.将待测血清样本和试剂盒，恢复至室温（20～37℃）. 2.取出反应板，于反应板孔中滴入血清二滴，静置，待血清完全吸入. 3.在20分钟内观察反应板孔中现象. 三.【单纯疱疹检验方法】 1.用一次性真空采血针与抗凝采血管抽取静脉血2-5 ml，轻轻颠倒混匀8-10次，3000r/min 离心10-15分钟，分离血浆. 2.取出反应板，用吸管吸取样本垂直加入，2-3滴. 3.15分钟内观察反应板孔中现象. 七.【革兰氏染色的检验方法】 目的： 1.涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧（中间要有足够的空间），分别作为阴阳性对照。用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2.干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 3.固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4.初染：在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6.媒染：取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约 1min。 7.水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 8.脱色：斜置载玻片，滴加革兰氏脱色剂脱色，至流出的脱色剂不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。
肺炎支原体及其快速培养法 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型，它既不同于，也不同于病毒，是介于细菌和病毒之间，能在无活细胞的人工培养基上生长繁殖的最小微生物。它广泛分布于自然界，与人类、动植物的疾病有密切的关系。支原体的种类繁多，造成的危害非常广泛。目前证明对人体有致病作用的支原体有肺炎支原体、解脲支原体、人型支原体、生殖支原体等几种，但临床以肺炎支原体最为常见［1］。肺炎支原体主要以飞沫传播，引起儿童、青少年呼吸道感染、咽炎、气管炎、肺炎等。近年肺炎支原体感染病例明显增多并有局部流行的趋势，早期诊断极为重要。 1 肺炎支原体的检测方法 目前，肺炎支原体的实验室检测方法有支原体分离培养、PCR法检测质粒核酸、抗体检测、支原体快速培养法、分子生物学方法等。支原体细胞分离培养可获得肺炎支原体，可以确诊。由于支原体分离培养要求苛刻，一般医院实验室难以推广。此法阳性率低，需时3 周甚至更长时间，对临床快速诊断意义不大。PCR法检测质粒核酸快速、特异、敏感，但需昂贵设备，不易普及，且方法过于敏感，容易受污染。传统的冷凝集法检测肺炎支原体的IgM 抗体，方法简单、易行，但其敏感性和特异性均较差，易受病程影响。ELISA 检测支原体抗体法较为简便、可靠。由于发病初期，机体中尚未产生抗体不能被检出，发病时间较长此法才有意义。而快速培养法正以其简单、快速、经济、无创伤等优点，被越来越多的临床实验室所推广，也被越来越多的患者所接受。 2 肺炎支原体快速培养法 肺炎支原体快速培养法是利用肺炎支原体的代谢产物使培养基液体中的指示剂颜色发生改变来判断其生长，标本中的其他支原体和细菌则被培养基中的青霉素和醋酸陀抑制［2］。此法操作简便、快速、无痛苦。先从冰箱中取出快速培养基，复温，按常规方法采集患者咽拭标本，将标本棉签浸入培养液，沿瓶壁
支原体检测SOP 目的：制定支原体检验标准操作规程，确保检验操作正确。 范围：本标准适用于本公司主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞、病毒收获液、原液的支原体检验操作。 依据：《中国药典》2010年版三部通则3301支原体检测法。 一、培养法 1、检测原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。 2、适用器材：灭菌锅、试管（带盖）、10ml移液管、1ml移液管、37℃培养箱、 3、检测步骤： （1）培养基的制备：【外购培养基】 （2）检测培养基的灵敏度： 将菌种接于适宜的支原体培养基中，经36℃±1℃培养至培养基变色，盲传两代后，将培养物接种至待检培养基中，做10倍系列稀释，肺炎支原体稀释至10-7～10-9，接种在支原体肉汤培养基内；口腔支原体稀释至10-3～10-5，接种在精氨酸支原体肉汤培养基内。每个稀释度接种3支试管，置36℃±1℃培养7～14天，观察培养基变色结果。 结果判定以接种后培养基管数的2/3以上呈现变色的最高稀释度为该培养基的灵敏度。 液体培养基的灵敏度：肺炎支原体（ATCC 15531株）应达到10-8，口腔支原体（ATCC 23714株）应达到10-4。 （3）培养基前处理： 检查支原体采用支原体液体培养基和支原体半流体培养基（或支原体琼脂培养基）。半流体培养基（或琼脂培养基）在使用前应煮沸10～15分钟，冷却至56℃左右，然后加入灭能小牛血清（培养基︰血清为8︰2），并可酌情加入适量青霉素，充分摇匀。液体培养基除无需煮沸外，使用前亦应同样补加上述成分。 （4）接种培养： 取每支装量为10ml的支原体液体培养基各4支、相应的支原体半流体培养基各2支（已冷却至36℃±1℃），每支培养基接种供试品0.5～1.0ml，置36℃±1℃培养21天。于接种后的第7天从4支支原体液体培养基中各取2支进行代次培养，每支培养基分别转种至相应的支原体半流体培养基及支原体液体培养基各2支，置36℃±1℃培养21天，每隔3天观察1次。 （5）结果判定： 无生长——合格； 疑有生长——加倍量复试——无生长——合格；
肺炎支原体感染的血清学试验 参考范围： 补体结合试验(CF) <1:8 代谢抑制试验(M1) 阴性 问接血凝试验(PHA) 阴性 酶联免疫吸附试验(ELISA) 阴性 MG链球菌凝集试验<1:40 临床评价： 1．肺炎支原体（MP）是主要的病原性支原体之一，在临床上主要引起上呼吸道感染、气管艾气管炎及支原潍肺炎。过去称为“原发性非典型性肺炎”的病原体中，MP最为常见。约有80％的慢性支气管炎患者合并MP感染。肺炎病例中约有10％～20％由MP引起。MP感染后，可用各种血清学试验检测体内产生的特异性抗体，有助于疾病的诊断。 2．测定病人血清中特异性抗体，常用的方法有CF、MI、PHA和ELISA等，其中CF 试验是诊断支原体肺炎最常应用的方法。支原体有较强的补体结合反应，单份血清抗体效价>1：6 4或恢复期较急性期抗体滴度增加4倍以上即有诊断价值。一般补体结合抗体在感染后7～9天开始上升，3～4周达到高峰，维持4～6个月。问接血凝试验在MP感染的急性期即可出现阳性，血凝抗体可存在数年。代谢抑制试验可测定MP脂多糖胞膜抗原的相应抗体，方法敏感且特异性强。这种抗体的出现较上二者为迟。ELISA所用抗原为MP表面P蛋白，采用间接法检测特异IgM抗体，具有早期诊断意义。 MG链球菌凝集试验是检测患者血清中MG链球菌凝集素效价的一种方法。MG链球菌是从某些原发性非典型性肺炎病人的呼吸道或肺部分离出的一种非溶血性菌株，约有40％～50％的支原体肺炎患者恢复期血清中常产生MG链球菌凝集素，本试验呈阳性，故检测患者血清内凝集素效价对支原体肺炎有辅助诊断意义。本试验还有助于与病毒性肺炎的鉴别，病毒性肺炎不出现MG链球菌凝集反应。 3．采用分离培养的方法检测患者痰、咽拭等标本中的MP，对支原体肺炎具有病原确诊意义，但需要2周以上时间，且阳性率不等，在临床上不能早期、快速诊断。寒冷凝集试验是一种非特异性反应，在临床上常用作支原体肺炎的辅助诊断，约有50％以上病例可出现冷凝集抗体。应用PCR技术检测患者呼吸道分泌物和支气管肺泡冲洗物中MP的DNA，是敏感、特异且快速的实验室诊断方法。 4．影响本试验结果的因素 (1)CF试验的敏感性和特异性不高，所用的MP糖脂抗原可与许多微生物、植物及人体组织有交叉反应。 (2)MG链球菌凝集试验在某些严重感染性疾病也可呈阳性。 寒冷凝集试验 参考范围： 寒冷凝集试验 临床评价： 1．寒冷凝集素是由I抗原刺激机体产生的一种非特异性抗体，属IgM类，在0～10℃的寒冷情况下，能与O型人红细胞或自身红细胞的膜抗原结合，产生凝集现象。此种凝集反应具有可逆性，若将已凝集的红细胞再放置于37℃时，凝集现象即可消失。支原体肺炎患者血清中常可出现高效价的寒冷凝集素，寒冷凝集试验可用于测定该抗体的效价，有助于支原体肺炎的诊断。 2．寒冷凝集素大多在发病后1～2周开始出现，以后继续增高，于病程3～4周达到