1. 目的
为确定本公司水质中菌落总数、大肠菌群测定使用方法，明确菌落总数、大肠菌群检测相关细则，指导人员正确作业，确保检测工作正常开展，根据《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-2006制订本方法作业指导书。
2. 适用范围
适用于水质中菌落总数、大肠菌群的测定。
3. 职责
检测人员严格按照本指导书要求开展检测工作。
4. 检测依据标准及检测方法
《生活饮用水卫生标准》GB 5749-2006
《生活饮用水标准检验方法》GB5750.12-2006
5. 标准值
表1 二次供水菌落总数、大肠菌群
6. 检验仪器及设备
高压蒸汽灭菌器、恒温培养箱、冰箱、显微镜、PH试纸。
7. 试剂和材料
营养琼脂培养基，三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液，伊红美兰琼脂，革兰氏染色液。
8. 检测程序
8.1 菌落总数：取采集的样品1mL于灭菌平皿内，倾入已融化冷却至45℃的营养琼脂15mL，同时做一个平行样和一个空白对照平皿，并立即摇匀。冷却后，翻转平板，置于35℃～37℃恒温箱中，培养48h。计数每个平板上的菌落数。
8.2 大肠菌群：在5支装有10mL双料乳糖蛋白胨培养液的试管各加水样10mL；在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加水样1mL，在5支装有10mL单料乳糖蛋白胨的试管各加稀释后的水样（1:10）1mL。轻摇试管，是液体充分混匀，置35℃～37℃培养箱中24h。观察是否产酸产气，若有，需进一步做证实试验。
8.3 取一环阳性管中的溶液接种到伊红美兰琼脂平板上，置35℃～37℃培养箱中18h～24h，观察菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。
8.4 挑取可疑大肠菌群菌落1或2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，于36℃±1℃培养箱中，培养24h。
8.5 凡乳糖发酵管最终产酸、产气，革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌，为大肠菌群阳性。记下证实试验的阳性管数，查总大肠菌群（MPN）检索表得出100mL水样中总大肠菌群的MPN值。
9. 计算
菌落总数计算见式（1）：
a=b×n (1)
式中：
a—表示菌落总数，cfu/mL
b—平均菌落数
n—表示稀释倍数
10. 表格样式
附录A 水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式
附录A：水质中菌落总数、大肠菌群检测原始记录样式
二次供水检测原始记录
受理编号：中坚（）检[20 ] 号
检测项目：细菌总数、大肠菌群检验日期：年月日依据：《生活饮用水标准检验方法》GB/T 5750.12-2006
一、实验条件：
1、实验室温度：℃；实验室湿度： %；
2、仪器设备：恒温培养箱(仪字第号 )；生物显微镜(仪字第号 )
3、培养基：厂家：批号：
厂家：批号：
厂家：批号：
二、结果：
1、细菌总数：
放置时间：取出时间：
检验者：复核者：
日期：年月日日期：年月日
2、总大肠菌群：
检验者：复核者：
日期：年月日日期：年月日
实验序号 4 实验名称水质分析 实验时间2010年4月12 实验室生科院实验楼综合2 一．实验预习 1．实验目的 学习和掌握测定水中溶解氧、浊度、氟化物、铁、氨氮和pH、六价铬、硫化物、钙、亚硝酸盐氮、有效氯（总氯）COD和总磷的方法。 了解这些因素在水环境中的地位及对水生生物的影响。 2．实验原理、实验流程或装置示意图 实验原理： 水是水生生物生活的场所，水体洁净程度如何，各种化学成分含量多少，是我们选用不同用途水源时的主要依据，进行水质分析已成为环境分析化学的一个重要组成部分，也是生态工作不可缺少的手段。 溶解氧的测定： 水中溶解氧的测定一般用碘量法，在水样中加入硫酸锰及碱性碘化钠溶液，生成氢氧化锰沉淀，此时氢氧化锰性质极不稳定，迅速与水中溶解氧化合生成锰酸锰 4MnSO4 + 8NaOH 4Mn(OH)2(肉色沉淀) + 4Na2SO4 2Mn(OH)2 + O22MnO(OH)2(棕黄色或棕色沉淀) 2H2MnO3 + 2Mn(OH)22MnMnO3+ 4H2O 加入浓硫酸使已化合的溶解氧（以MnMnO3的形式存在）与溶液中所加入的碘化钾发生反应而析出碘，溶解氧越多，析出的碘就越多，溶液的颜色也就越深。 4KI + 2H2SO44HI + 2K2SO4 2MnMnO3 + 4H2SO4 + 4HI 4MnSO4 + 2I2 + 6H2O 用移液管取一定量反应完毕的水样，以淀粉作指示剂，用硫代硫酸钠溶液滴定碘含量（碘量与溶解氧量成比例关系)，计算出水样溶解氧的含量。 氨氮的测定： 氨与碘化汞钾在碱性溶液中生成黄色络合物，其色度与氨氮含量成正比，在0～L的氨氮范围内近于直线。反应式如下： 2K2(HgI4) + 3KOH + NH3 NH2HgOI (黄棕色沉淀) + 7KI + 2H2O 亚硝酸盐测定： 测定亚硝酸盐氮，通常使用重氮比色法，此法是基于亚硝酸盐和对氨基苯磺酸起重氮化作用，再与α-萘胺起偶合反应，生成紫红色染料，与标准液进行比色。 pH测定： 利用玻璃电极作指示电极，甘汞电极作参比电极，组成一个电池。在此电池中，被测溶液的氢离子随其浓度不同将产生相应的电位差。此电位与溶液的pH值的关系，符合能斯特方程式： E = E0 + log[H+] (25℃) E = E0–pH 式中，E0为常数。 浊度（NTU）： 基于不同浊度的被测溶液对电磁辐射有选择性吸收而建立的比浊法。 铁： Fe 2+ +二氮杂菲橙红色络合物 基于在pH3~9的条件下，低价态铁离子与二氮杂菲生成稳定的橙红色络合物，对可见
环境监测原始记录表 环境保护监测中心站 2012年
目录 1. 地表水采样原始记录表19.离子选择电极原始记录表 2. 大气采样原始记录表20.分光光度法分析原始记录表 3. 降水采样原始记录表21.原子吸收分光光度法分析原始记录表 4. 降尘采样原始记录表22.气相色谱分析原始记录表 5. 土壤采样原始记录表23.离子色谱分析原始记录表 6. 底质（底泥、沉积物）采样原始记录表24.细菌总数测定原始记录表 7. 污染源废水采样原始记录表25.粪大肠菌群测定原始记录表 8. 固定污染源排气中气态污染物采样原始记录表26.区域环境噪声监测原始记录表 9. 固定污染源排气中颗粒物采样原始记录表27.城市交通噪声监测原始记录表 10.烟气烟色监测现场记录表28.污染源噪声监测原始记录表 11.pH值分析原始记录表29.机动车排气路检原始记录表 12.电导率分析原始记录表30.一般试剂配制原始记录表 13.色度分析原始记录表（铂钴比色法）31.校准曲线配制原始记录表 14.色度分析原始记录表（稀释倍数法）32.标准溶液配制与标定原始记录表 15.重量分析原始记录表33.样品交接记录表 16.容量法分析原始记录表34.样品分析任务表 17.五日生化需氧量分析原始记录表35.样品前处理原始记录表 18.一氧化碳分析原始记录表36.大气采样器流量校准原始记录表
xx 省环境监测原始记录表（ 1 ） 地表水采样原始记录表 采样目的： 方法依据：GB12998-91 采样日期： 年 月 日 枯 丰 平 pH 计型号及编号： DO 仪型号及编号： 电导仪型号及编号： 采样： 送样： 接样： .第 页 共 页
国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数 实验目的 实验原理：国标法操作的原理 实验器材： 培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml 大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台 实验药品： 磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤： 一： 10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。 用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min 二： 1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。 3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。 4：灭完菌后放入超净台中备用。 三： 1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。 3：取4只试管，编号1—4 4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS 5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀 7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。 9：取4只平皿，编号1—4 10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。 11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。 12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。 四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照） 1号，2号菌落个数多不可计，舍弃 4号平皿中菌落数目小于10 cfu ，舍弃 3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个cfu 。 计算样品中细菌浓度为：1.05× 105 Cfu/ml
原始记录书写要求
1. 记录表格使用炭素,蓝黑墨水填写或计算机打印（必须保证记录的原始性）,字体 要书写工整,不得使用圆珠笔、铅笔或纯蓝墨水填写;分析结果报告单要求必须打印。所有打印的记录不能手工改错,如果改错,须重新打印。 2. 每项监测任务的所有质量记录和技术记录表格,均应使用同一个编号,即本次监测任务的唯一性标识。 3. 手写的记录表格如有空格,则划斜线和加盖“以下空白”印章:打印的记录表格如有空格,不得手划斜线,在最后一个监测分析数据下方如有空格,应在紧邻下一空格内加盖“以下空白”印章或手填“以下空白。” 4. 记录表格整体框架和要素原则上不得变动,但可根据需要适当调整列宽、行高, 也可进行个别相邻格的合并或拆分等。如使用者认为整体框架和要素确需变动或修改,应按照有关程序规定进行。 5. 原始记录填写应在一格中的下半部,不得涂改、刀刮。如需修改,应在错误处划一斜线（应能看清原记录数据）,并加盖本人私章,并在此格上部书写正确的数据, 每页原始记录改错地方不应超过三个。 6. 所有落款应签姓名不得盖章,签姓名用全称,签名字体工整、消晰、整齐原始记录单“分析人”一栏,未持证人员不能单独签名,应将姓名签在持证人员之后:分析人员只有 1 人时,该分析人员不得在校核或审核处签名。 7. 原始记录中相对偏差取一位有效数字或整数,修约规则为只入不舍,加标回收率取整数。 8. 原始记录和分析结果报告单中,当测试结果低于方法检出限或最低检出浓度时, 应填报为“未检出”,并在记录中注明方法检出限或最低检出浓度。容量及重量分析项日,如化学需氧量、生化需氧量、高锰酸盐指数、悬浮物、氯化物、石油类，全盐量。矿化度、溶解性总固体等低于检测下限时，以＜L”的形式填报L”为检测下限值。 9. 气相色谱，液相（离子）色谱,GC-MS色质联用仪、原子荧光仪、测汞仪测试气态、固态样品原始记录可参照相应水质测试原始记录填写。 10. 质控措施在任务通知单中下达,应具体到每个监测因子:采样原始记录单和分析 项目原始记录中“质控措施”一栏填写实际质控情况。检测项目分析工作结束后,应填报质控结果统计表,质量负责人应在任务通知单及质控结果统计表上签字,目的是对质量负责。 11. 无组织排放分析结果报告单“备注”一栏应注明上风向、下风向点位序号、风向、风速、气温、气压、天气情况等因素。 12. 各仪器设备填写使用、维护或维修记录应使用专用表格。 13. 仪器设备使用记录封面唯一性标识编号同仪器设备使用记录表编号。 14. 原始记录、报告单及检测报告中必须采用法定计量单位,诸如mg/标干m3 mg/Nm3”等非法定计量单位一律换成法定计量单位,写出mg/m3”。 15. 检测结果在0.1—1000（不含1000）之内的,不能用科学计数法表示,如540不能写成5.40X102,直接报540即可。 16. 采样记录应填写有关的现场参数。项目名称应该按国家有关标准的名称规范书写,如氰化物不能写成氰,除pH、PM10、TSP三个项目可以用符号外，其他项目一律用文字书写。
样品编号：XL2019— 检测项目：色度 检验依据：GB/T5750.4-2006《生活饮用水标准检验方法》感官性状和物理指标1.1铂—钴标准比色法 （一）检测步骤： （1）本批次均取透明的水样于比色管中，如水样色度过高，可取水样，加纯水稀释后比色，将结果乘以稀释倍数。 （2）另取比色管11支，分别加入铂—钴标准溶液0，0.50, 1.00, 1.50, 2.00, 2.50, 3.00, 3.50, 4.00, 4.50及5.00mL ，加纯水至刻度，摇匀，即配制成色度为0，5，10，15，20，25，30，35，40，45及50度的标准色列，可长期使用。 （3）将水样与铂—钴标准色列比较。如水样与标准色列的色调不一致，即为异色。 （4）标准系列： 铂－钴标准液0 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 色度 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 （5）本批次检测结果（度）：报告结果为中位数 样品编号 比色结果1 比色结果2 比色结果3 报告结果 样品编号 比色结果1 比色结果2 比色结果3 报告结果 检测者：检测日期：年月日 校核者：校核日期：年月日
样品编号：XL2019— 检测项目：浑浊度 检验依据：GB/T5750.4-2006《生活饮用水标准检验方法》感官性状和物理指标2.2目视比浊法—福尔马肼标准 （一）检测步骤： A、浑浊度10度以上的水样 （1）本批次均取浑浊度250度的标准液（吸取含250mg硅藻土的悬浮液，置于1000mL容量瓶中，加纯水至刻度，振摇混匀即得）0，10，20，30，40，50，60，70，80，90及100mL，置于250mL 容量瓶中，加纯水稀释至刻度，振摇混匀后移入成套的250mL具塞玻璃瓶中，即得浑浊度为0，10，20，30，40，50，60，70，80，90及100度的标准液。每瓶中加入1g氯化汞以防菌类生长。将瓶塞塞紧以免水份蒸发。 （2）将振摇均匀的水样盛入成套的250mL具塞玻璃瓶中。 （3）将水样与浑浊度标准液都摇匀，同时从瓶侧观察同一目标（如报纸铅字或划有黑线的白纸等），根据目标清晰程度，选出与水样所产生的视觉效果相近的标准液，读得水样的浑浊度。水样的浑浊度超过100度时，可用纯水稀释后测定。 B、浑浊度10度以下的水样 （1）本批次均取 mL比色管11支，分别加入浑浊度为100度的标准溶液（吸取浑浊度为250度的标准液100mL，置于250mL容量瓶中，加纯水稀释至刻度，振摇混匀，即得浑浊度为100度的标准液）0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0及10.0mL，各加纯水稀释至100mL，混匀，即得浑浊度0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10度的标准液。 （2）取100mL水样，置于同样规格的比色管中，与浑浊度标准液同时振摇均匀，并进行比较，比较时由上往下垂直观察。 （二）本批次检测结果（度）：报告结果为中位数 样品编号 比色结果1 比色结果2 比色结果3 报告结果 样品编号 比色结果1 比色结果2 比色结果3 报告结果 检测者：检测日期：年月日 校核者：校核日期：年月日
微生物检验原始记录(大肠菌群)
检验原始记录 编号：报告类别：微生物共页项目：大肠菌群coliforms 检验地点： 样品名称：样品编号： 样品状态：符合检验要求；其他境条件： 实验依据及步骤GB4789.3-2016 样品稀释 固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225ml生理盐水或磷酸盐缓冲液的无菌均质容器内均质，或放入盛有225ml稀释液的无菌均质袋中拍击式均质器拍打，制成为1:10样品匀液。依次进行10倍递增稀释。 液体样品：以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中混匀，为1:10样品匀液。 样品匀液的ph应在6.5-7.5之间，必要时分别用1mol/lNaOH或1mol/lHcL调节。 取1mL1∶10稀释匀液沿管壁缓缓注入9ml磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用一支无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100样品匀液。 按上述操作顺序做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1mL灭菌吸量管。从样品匀液制备到样品接种完毕，全过程不得超过15min。 初发酵试验（9管法）每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤（大肠菌群测定：如果超过1ml，则用双料LST肉汤） 36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生。 产气者进行复发酵试验，未产气则继续培养至48±2h，产期进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 复发酵试验（证实试验）用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，，观察产气情况。 数据分析与结果一、菌落计数
水质原始记录-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1
水质检验原始记录 样品编号：HS2017— 检测项目：色度 检验依据：GB/《生活饮用水标准检验方法》感官性状和物理指标铂—钴标准比色法 （一）检测步骤： （1）本批次均取透明的水样于比色管中，如水样色度过高，可取水样，加纯水稀释后比色，将结果乘以稀释倍数。 （2）另取比色管11支，分别加入铂—钴标准溶液0，, , , , , , , , 及，加纯水至刻度，摇匀，即配制成色度为0，5，10，15，20，25，30，35，40，45及50度的标准色列，可长期使用。 （3）将水样与铂—钴标准色列比较。如水样与标准色列的色调不一致，即为异色。 （4）标准系列： 铂－钴标准液0 色度 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50
检测者：检测日期：年月日 校核者：校核日期：年月日 水质检验原始记录 样品编号：HS2017— 检测项目：浑浊度 检验依据：GB/《生活饮用水标准检验方法》感官性状和物理指标目视比浊法—福尔马肼标准 （一）检测步骤： A、浑浊度10度以上的水样 （1）本批次均取浑浊度250度的标准液（吸取含250mg硅藻土的悬浮液，置于1000mL容量瓶中，加纯水至刻度，振摇混匀即得）0，10，20，30，40，50，60，70，80，90及100mL，置于250mL容量瓶中，加纯水稀释至刻度，振摇混匀后移入成套的250mL具塞玻璃瓶中，即得浑浊度为0，10，20，30，40，50，60，70，80，90及100度的标准液。每瓶中加入1g氯化汞以防菌类生长。将瓶塞塞紧以免水份蒸发。 （2）将振摇均匀的水样盛入成套的250mL具塞玻璃瓶中。 （3）将水样与浑浊度标准液都摇匀，同时从瓶侧观察同一目标（如报纸铅字或划有黑线的白纸等），根据目标清晰程度，选出与水样所产生的视觉效果相近的标准液，读得水样的浑浊度。水样的浑浊度超过100度时，可用纯水稀释后测定。 B、浑浊度10度以下的水样 （1）本批次均取 mL比色管11支，分别加入浑浊度为100度的标准溶液（吸取浑浊度为250度的标准液100mL，置于250mL容量瓶中，加纯水稀释至刻度，振摇混匀，即得浑浊度为100度的标准液）0, , , , , , , , , 及，各加纯水稀释至100mL，混匀，即得浑浊度0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10度的标准液。 （2）取100mL水样，置于同样规格的比色管中，与浑浊度标准液同时振摇均匀，并进行比较，比较时由上往下垂直观察。
创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王* 微生物实验原始记录 粤珍小厨餐饮管理有限公司 样品名称样品编号放入时培养 箱温度 ℃ 设备名称电热恒温培养箱(±1℃) 设备编号DHP-9082取出时培养 箱温度 ℃ 检验依据GB/T4789.2-2010 GB/T4789.3-2010 样品状态 一、菌落总数（cfu/g） 以无菌操作将检样25g于225ml灭菌生理盐水中，均质后充分振摇做成1：10的均匀稀释液。取1ml灭菌吸管吸取上述稀释液1ml，加入9ml灭菌生理盐水中，混合均匀，做成1：100的稀释液，按上述方法操作，做10倍递增稀释。 每个稀释度吸取1ml于灭菌培养皿内，注入凉至46℃的营养琼脂15ml，混匀。待营养琼脂凝固后，翻转平板于36℃培养48h。同时做空白对照。 样品匀液 （10-i） 10-110-2 10-3 观察结果（C） 计算结果N 报告结果 CFU/g 二、大肠菌群（MPN/100g） 以无菌操作将检样25g于225ml灭菌生理盐水中，均质后充分振摇做成1：10的均匀稀释液。取1ml灭菌吸管吸取上述稀释液1ml，加入9ml灭菌生理盐水中，混合均匀，做成1：100的稀释液，按上述方法操作，做10倍递增稀释。 每个稀释梯度取1ml注入9mlLST接种试管，36℃培养48h。 样品匀液 （10-i） 10-110-210-3
主检：审核：检验日期：年月日 邹平县产品质量监督检验所检验原始记 录 共页
主检：校核：检验日期：年月日 邹平县产品质量监督检验所检验原始记录 共页
主检：校核：检验日期：年月日 创作编号： GB8878185555334563BT9125XW 创作者：凤呜大王*