ph电极及缓冲液知识
时间：2011-11-11 17:11
1．什么是PH标准缓冲溶液它有哪些特点？
PH缓冲溶液是一种能使PH 值保持稳定的溶液。如果向这种溶液中加入少量的酸或碱，或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱，以及将溶液适当稀释，这个溶液的PH值基本上稳定不变，这种能对抗少量酸或大或稀释，而使PH值不变化的溶液就称为缓冲溶液。
PH标准缓冲液有以下特点：
（1）标准溶液的PH值是已知的，并达到规定的准确度。
（2）标准溶液的PH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。
（3）溶液的制备方法简单。
2．如何配制PH标准缓冲溶液？
对于一般PH测量，可使用成套的PH组冲试剂（可配制250mL），配制溶液时，应使用去离子水，并预先煮沸15～30分钟，以除去溶解的二氧化碳。剪开塑料袋将试剂倒入烧杯中，用适量去离子水使之溶解，并冲洗包装袋，再倒入250mL容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀即可。
3．如何正确保存和使用PH缓冲溶液？
缓冲溶液配制后，应装在玻璃瓶或聚乙烯瓶中（碱性PH缓冲液如、、等,应装在聚乙烯瓶中）瓶盖严密盖紧,在冰箱中低温(5～10℃)保存,一般可使用二个月左右,如发现有混频器浊,发霉或沉淀现象,不能继续使用。使用时，应准备几个50 mL的聚乙烯小瓶，将大瓶中的组冲溶液倒入小瓶中，并在不境温度下放置1～2个小时，等温度平衡后再使用。使用后不得再倒入大瓶中，以免污染，不瓶中的缓冲溶液在＞10℃的环境条件下可以使用2～3天，一般、、三种溶液使用时间可以长一些,和溶液由于吸收空气中的二氧化碳,其PH值比较容易变化。
4．PH缓冲溶液有何用途？
（1）PH测量前标定校准PH计。
（2）用以检定PH计的准确性，例如用和标定PH计后，将PH电极插入溶液中,检查仪器显示值和标准溶液的PHs值是否一致。
（3）在一般精度测量时检PH计是否需要重新标定。PH计标定并使用后也许会产生漂移或变化，因此在测试前将电极插入与被测溶液比较接近的标准缓冲液中，根据误差大小确定是否需要重新标定。
（4）检测PH电极的性能。
5．PH电极为何要浸泡如何正确浸泡PH复合电极？
PH电极使用前必须浸泡，因为PH球泡是一种特殊的玻璃膜，在玻璃膜表有一很薄的凝胶层，它只有在充分湿润的条件下才能与溶液中的氢离子有良好的影响。同时，玻璃电极经过浸泡，可以使不对称电势大大下降并趋向稳定。PH玻璃电极一般可以用蒸馏水或PH4缓冲溶液浸泡。通常用PH4缓冲溶液浸泡更好上些，浸泡时间至24小时或更长，根据球泡玻璃膜厚度、电极老化程度而不同。同时，参比电极的液接界也需要浸泡。因为如果液接界干涸会使液接界电势增大或不稳定，参比电极的浸泡液必须和参比电极的外参比溶液一致，即L KCL溶液或饱和KCL
溶液，浸泡时间一般几小时即可。
因此，对PH复合电极而言，就必须浸泡在含KCL的PH4缓冲液在，这样才能对玻璃球泡和液接界同时起作用。这里要特别提醒注意，因为过去人们使用单支的PH玻璃电极已习惯于用去离子水或PH4组冲液浸泡，后来使用PH复俣电极时依然采用这样的浸泡方法，甚至在一些不正确的PH复合电极的使用说明书中也会进行这种错误的指导。这种错误的浸泡方法引起的直接后果就是使一支性能良好的PH复合电极就成一支响应慢、精度差的电极，而且浸泡时间越长性能越差，因为经过长时间的浸泡，液接界内部（例如砂芯内部）的KCL浓度已大大降低了，使液接界电势增大和不稳定。当然，只要在正确的浸泡溶液中重新浸泡数小时，电极还是会复原的。
另外，PH电极也不能浸泡在中性或碱性缓冲溶液中，长期浸泡在此类溶液中会使PH玻璃膜响应迟钝。正确的PH电极浸泡液的配制：取缓冲剂（250mL）一包，溶于250mL纯水中，再加入56克分析纯KCL，适当加热，搅拌至完全溶解即成。
6．可充式和非可充式PH复合电极有何区别？
PH复合电极外壳有塑料和玻璃的区分。可充式PH复合电极即在电极外壳上有一加液孔，当电极的外参比溶液流失后，可将加液孔打开，重新补充KCL溶液。而非可充式PH复合电极内装凝胶状KCL，不易流失也无加液孔。
可充式PH复合电极的特点是参比溶液有较高的渗透速度率，液接界电位稳定重现，测量精度较高。而且当参比电极减少或受污染后可以补充或更换KCL溶液，但缺点是使用较麻烦。可充式PH复合电极使用时应将加液孔打开，以增加液体压力，加速电极响应，当电介液液面低于加液孔2厘米时，应及时补充新的电介液。
非可充PH复合电极的特点是维护简单使用方便，因此也得到广泛的应用。但作为实验室PH电极极使用时，在长期和边续的使用条件下，液接界处的KCL浓度会减少，影响测试精度。因此非可充式PH复合电极不用时，应浸在电极浸泡液中，这样下次测试时电极性能会很好，而而部分实验室PH电极都不是长期和边续的测试，因此这种结构对精度的影响是比较小的。而工业的PH复合电极由于对测试精度的要求比较低，所以使用方便就成为主要的选择。
7．如何正确使用PH复合电极？
（1）球泡前端不应有气泡，如有气泡应用力甩去。
（2）电极从浸泡瓶中取出后，应在去离子水中晃动并甩干，不要用纸巾擦拭球泡，否则由于静电感应电荷转移到玻膜上，会延长电势稳定的时间，更好的方法是使用被测溶液冲洗电极。
（3）PH复合电极插入被测溶液后，要搅拌晃动几下再静止放置，这样会加快电极的响应。尤其使用塑壳PH复合电极时，搅拌晃动要厉害一些，因为球泡和塑壳之间会有一个小小的空腔，电极浸入溶液后有时空腔中的气体来不及排除会产生气泡，使球泡或液接界与溶液接角不良，因此必须用力搅拌晃动以排除气泡。
（4）在粘稠性试样中测试之后，电极必须用去离子水反复冲洗多次，以除去粘附在玻璃膜上的试样。有时还需先用其它试剂洗去试样，再用水洗去溶剂，浸入浸泡液中活化。
（5）避免接触强酸强碱或腐蚀性溶液，如果测试此类溶液，应尽量减少浸入时间，用后仔细清洗干净。
（6）避免在无水乙醇、浓硫酸等脱水性介质中使用，它们会损坏球泡表面的水合凝胶层。
（7）塑壳PH复合电极的外壳材料是聚碳酸酯塑料（PC）PC塑料在有些溶剂中会溶解，如四氯化碳、三氯乙烯、四氢呋喃等，如果测试中含有以上溶剂，就会电极外壳，此时应改用玻璃外壳的PH复合电极。
8．PH电极如何清洗？
球泡和液接界污染后先用以下溶剂清洗，再用去离子水洗去溶剂，将电极浸入浸泡液中活化。
污染物清洗剂
无机金属氧化物低于1mol/L稀酸
有机油脂类物质稀洗涤剂（弱酸性）
树脂高分子物质稀酒精、丙酮、乙醚
蛋白质血球沉淀物酸性酶溶液（食母生片）
颜料类物质稀漂白液、过氧化氢
9．如何检测PH电极的好坏？
用户可按下表数据进行检测PH电极的好坏，步骤如下（PH计调至mV档）
（1）测试零电位PH值，零点PH值：7±
PH电极插入缓冲溶液中,稳定后读数(预先测试出溶液的温度).例如25℃时读数值E1′=186mV(取绝对值),而准确值为178mV(见表格)则误差值186-178=8mV,换算成PH值:8/=（PH是25℃时的K值,见表格)。因此零点PH值合格。一般新电极零电位误差≤±，如零电位误差＞±，电极的测试误差会比较大，尤其当测试溶液温度变化较大时误差会更大。如果测试精度要求不高，则零电位误差值还可以大一些，但最大不能超过1PH。
（2）测试电极百分理论论斜率（PTS）
记录一步聚中的测试数据186mV，将电极清洗后再插入缓冲溶液中,稳定后读数,E2′=111 mV(取绝对值), △E1′= E1′+ E2′=186+111=297 mV,与表格中的△E对照,PTS=97%,合格,一般新电极PTS≥97%,使用长久的电极可以放宽一些,但一般应PTS≥95%,除非测试精度要求很低.
(3)将电极清洗后再插入缓冲液，将读数与步聚（1）中的数据比较，其误差应≤±2 mV，否则表示电极重复性较差。
(4)电极的测试读数应该在30～60秒内稳定，否则表示电极响应太慢。
10。何修复PH电极？
PH复合电极的“损坏”，其现象是敏感梯度降低、响应慢、读数重复性差，可能由以下三种因素引起，一般客户可以采用适当的方法予以修复。
（1）电极球泡和液接界受污染，可以用细的毛刷、棉花或牙签等，仔去除污物。有些塑壳电极头部的保护罩可以旋下，清洗就方便了，如污染严重，可按第22条的方法用清洁剂清洗。（2）外参比溶液受污染，有些电极的结构是可添加溶液的，此时，可用针筒将电极的外参比溶液抽净，配制新的L或饱和KCL溶液，再加进去，注意第一、二次加进去时再要抽出来，以
便将电极内腔清洗净。
（3）玻璃敏感膜老化：将电极球泡用L稀盐酸(9mL盐酸用纯水稀释至100mL)浸泡24小时用纯水洗净,再用电极浸泡溶液浸泡24小时.如果钝化比较严重,也可以将电极下端浸泡在45的氢氟酸溶液中3～5秒钟(溶液配制:4 mL氢氟酸用纯水稀释至100 mL),用纯水洗净,然后在电极浸泡溶液中浸泡24小时,使其恢复性能。
11. 什么是PH计的一点校准？
任何一种PH计都必须经过PH标准溶液的校准后才可测量样品的PH值，对于测量精度在以下的样品,可以采一点校准方法调整仪器,一般选用或标准缓冲溶液。有些仪器本身只或,因此仪器只设有一个定位调节旋扭.具体操作步聚如下:
(1)测量标准缓冲液温度,查表确定该温度下的PHS值.将温度补尝旋钮调节至该温度下.
(2)用纯水冲洗电极并甩干.
(3)将电极浸入缓冲溶液晃动后静止放置.待读数稳定后,调节定位旋钮使仪器显示该标准溶液的PHS值.
(4)取出电极冲洗并甩干.
(5)测量样吕温度,并将PH计温度补偿旋钮调节至该温度值.
(6)将电极浸入样品溶液,晃动后静止放置,显示稳定后读数.
12. 什么是PH计的二点校准？
对于精密级的PH计,除了设有“定位”和“温度补偿”调节外，还设电极“斜率”调节，它就需要用二种标准缓冲液进行校准。一般先以或进行“定位”校准，然后根据测试溶液的酸碱情况，选用（酸性）或或(碱性)缓冲溶液进行“斜率校正。具体操作步聚为：
（1）电极极洗净并甩干，浸入或标准溶液中，温度补偿旋钮置于溶液温度处。待示值稳定后，调节定位旋钮使仪器示值为标准溶液的PHs值。
（2）取出电极洗净并甩干，浸入第二种标准溶液。待示值稳定后，调节仪器斜率旋钮，使仪器的示值为第二种标准溶液的PHs值。
（3）电极极洗净并甩干，再浸入或标准溶液中，如果误差超过，则重复第（1），（2）步聚。直至在二种标准溶液中不需要调节旋钮都能显示正确的PHs值。
（4）取出电极洗净并甩干，将PH温度补偿旋钮调节至样品温度，将电极浸入样品溶液，晃动后静止放置，显示稳定后读数。
13. 温度对PH精度测量有多大影响？
对PH电极，温度影响每一个PH为℃,例如一个级的PH计,在30℃PH缓冲液中进行校准,然后测试60℃的溶液(假定溶液的PH范围在PH6～8之间与相差一个PH单位),则温度影响的最大误差就是30×=.如果是3个PH单位(在PH4～10范围内),最大误差就是,从中可以看妯温度对PH的影响是很大的.当然,我们也可以从中得出结论,为了减少温度对PH测量的误差,我们该注意以下三点:
(1)尽量选择接近被测溶液PH值的缓冲溶液校准PH计。
(2)尽量使校准溶液的温度与被测溶液的温度一致或接近。
(3)应该选择有温度补偿的PH计。
精度高于的PH计都有温度补偿调节,而级的PH计就不带有温度补偿.有些级的PH计也号称有级的精度,其实这是不可能的,有人是将分辨率和精度这二个概念进行了混淆。即使以一个PH单位来说，相隔60℃的PH误差就是×60=,因此,没有温度补偿的PH计,最高的精度也只有.
14. 温度补偿能消除所有温度引起的误差吗？
必须特别指出的是,PH计上设置的温度补偿,只是补偿电极的斜率项F)。受温度影响的还有玻璃电极的标准电势，液接界电势等，它们与温度并非成严格的线性关系。同时PH电极也需要一定的时间才能达到新温度下的平衡。因此，不管是手动温度补偿还是自动温度补偿，都不是很充分的。根据PH测量的操作定义，要想得到精密的测量结果，样品溶液与标准溶液应在相同和恒定的温度下测量，这就是等温测量原理。对于一般精度要求的PH测量，样品溶液与标准溶液的温度不同时，可使用温度补偿。
15．如何判断你的PH计是否准确？
有不少用户在使用PH计时都心存疑惑，这个PH计到底准不准有人以工作经验来判断，有人以PH试纸来判断，也有人以过去使用的PH计来判断，这些都是不可靠的。其实，唯一可靠和最简单的方法就是以PH标准缓冲溶液来来进行检定。这是唯一的检测标准。取三个标准缓冲溶液：、、(最好是新鲜配制并且温度相同),以进行定位校准,以进行斜率校准,然后测试,PH计是否准确,是否合格立见分晓.如果精度不合格还可以进一步判断是PH计有问题还是PH电极有问题。由于检测PH计需要相应的设备和技术太麻烦。我们可以采用本书第23条的方法检测PH电极的好坏，也就是可以确定一支PH电极还是要将PH计送去维修。
pH 标准缓冲溶液(pH=10.00) 简介： pH 标准溶液的pH 值是已知的，并达到规定的准确度，其pH 值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH 标准缓冲溶液常用于酸度计的定位和斜率校准，其准确度范围在±0.01pH 。pH 标准缓冲溶液(pH=10.00)是特 指在25℃下，pH=10.00。 组成： 操作步骤(三点校准通用，仅供参考)： 1、 将pH 电极在纯水中清洗干净并甩干。 2、 用温度计测量pH 标准缓冲溶液的温度，并将pH 计的温度值调整准确。自动温度pH 计 无需该步骤。 3、 定位校正：将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=7.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量 值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的7.00，再显示pH 校准数值，表示pH7.00的校准完成。 4、 斜率校准Ⅰ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=4.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的4.00，再显示pH 校准数值，表示pH4.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示99%)。 5、 斜率校准Ⅱ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=10.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的10.00，再显示pH 校准数值，表示pH10.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示98%)。 注意事项： 1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，尤其以pH 标准缓冲溶液(pH=10.00) 较易失效。 2、 显示pH 校准数值时，pH 值会随温度不同而不同，例如在定位校正中，25℃时显示7.00， 15℃时就显示6.90。 编号 名称 OR0008 OR0008 OR0008 Storage pH 标准缓冲溶液(pH=10.00) 50ml 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份
北京雷根生物技术有限公司 https://www.doczj.com/doc/5a11941487.html, pH 标准缓冲溶液(pH=6.86) 简介： pH 标准溶液的pH 值是已知的，并达到规定的准确度，其pH 值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH 标准缓冲溶液常用于酸度计的定位和斜率校准，其准确度范围在±0.01pH 。pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)是特指在25℃下，pH=6.86。 组成： 操作步骤(三点校准通用，仅供参考)： 1、 将pH 电极在纯水中清洗干净并甩干。 2、 用温度计测量pH 标准缓冲溶液的温度，并将pH 计的温度值调整准确。 3、 定位校正：将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)中，稍微搅动后静止放置，待测量 值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准。 4、 斜率校准Ⅰ: 将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=4.00)中，稍微搅动后静止放置，待测 量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的4.00。 5、 斜率校准Ⅱ: 将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=9.18)中，稍微搅动后静止放置，待测 量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的9.18。 注意事项： 1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。 2、 显示pH 校准数值时，pH 值会随温度不同而不同。 3、 根据pH 等温测量原理，被测溶液的温度与校准溶液的温度越接近，其测量的准确度就越高。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 编号 名称 OR0002 OR0002 Storage pH 标准缓冲溶液(pH=6.86) 50ml 100ml 4℃ 使用说明书 1份
Tris是什么？有什么作用？Tris-HCl，Tris-EDTA如何配制？ Tris：三羟甲基氨基甲烷 三羟甲基氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane，一般简称为Tris）是一种有机化合物，其分子式为(HOCH2)3CNH2。Tris被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备。例如，在生物化学实验中常用的TAE和TBE缓冲液（用于核酸的溶解）都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以与醛发生缩合反应 Tris为弱碱，在室温（25℃下，它的pKa为8.1；根据缓冲理论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。 Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于Tris的pKa的影响。 由于Tris缓冲液为弱碱性溶液，DNA在这样的溶液中会被去质子化，从而提高其溶解性。人们常常在Tris盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，TE缓冲液被用于DNA的稳定和储存。如果将调节pH值的酸溶液换成乙酸，则获得“TAE缓冲液”（Tris/Acetate/EDTA），而换成硼酸则获得“TBE缓冲液”（Tris/Borate/EDTA）。这两种缓冲液通常用于核酸电泳实验中。 用途：有机合成中间体。在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系，稳定电泳过程中的PH值。在凝胶中也起到稳定PH的作用，只不过是Tris-HCl缓冲体系。 Tris缓冲液不仅被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂，还有许多重要用途。Tris被用于不同pH条件下的蛋白质晶体生长。Tris缓冲液的低离子强度特点可用于线虫（C. elegans核纤层蛋白lamin）的中间纤维的形成。Tris也是蛋白质电泳缓冲液的主要成分之一。此外，Tris 还是制备表面活性剂、硫化促进剂和一些药物的中间物。Tris也被用作滴定标准物。
各种缓冲液的配制方法(总5 页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1 -CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除
1．甘氨酸–盐酸缓冲液（L ） X 毫升 mol/L 甘氨酸+Y 毫升 mol/L HCI ，再加水稀释至200毫升 甘氨酸分子量 = ， mol/L 甘氨酸溶液含克/升。 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（ mol/L ） X 毫升 mol/L 邻苯二甲酸氢钾 + mol/L HCl ，再加水稀释到20毫升 邻苯二甲酸氢钾分子量 = ， mol/L 邻苯二甲酸氢溶液含克/升 3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 Na 2HPO 4分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。 Na 2HPO 4-2H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液含克/升。 C 4H 2O 7 ·H 2O 分子量 = ， mol/L 溶液为克/升。 4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液
①使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。 ② 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（ mol/L） 柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量， mol/L溶液为克/升。 柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量， mol/L溶液为克/毫升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（ mol/L） Na2Ac·3H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 7．磷酸盐缓冲液 （1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（） Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。 Na2HPO4·2H2O分子量 = ， mol/L溶液为克/升。
pH 标准缓冲溶液(pH=4.00) 简介： pH 标准溶液的pH 值是已知的，并达到规定的准确度，其pH 值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH 标准缓冲溶液常用于酸度计的定位和斜率校准，其准确度范围在±0.01pH 。 组成： 操作步骤(三点校准通用，仅供参考)： 1、 将pH 电极在纯水中清洗干净并甩干。 2、 用温度计测量pH 标准缓冲溶液的温度，并将pH 计的温度值调整准确。自动温度pH 计 无需该步骤。 3、 定位校正：将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)中，稍微搅动后静止放置，待测量 值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的6.86，再显示pH 校准数值，表示pH6.86的校准完成。 4、 斜率校准Ⅰ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=4.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的4.00，再显示pH 校准数值，表示pH4.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示99%)。 5、 斜率校准Ⅱ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=9.18)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的9.18，再显示pH 校准数值，表示pH9.18的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示98%)。 注意事项： 1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，尤其以pH 标准缓冲溶液(pH=9.18) 较易失效。 2、 显示pH 校准数值时，pH 值会随温度不同而不同，例如在定位校正中，25℃时显示6.86， 15℃时就显示6.90。 3、 根据pH 等温测量原理，被测溶液的温度与校准溶液的温度越接近，其测量的准确度就越高。 编号 名称 OR0001 OR0001 OR0001 Storage pH 标准缓冲溶液(pH=4.00) 50ml 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份
（pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配制方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配制方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。
（pH5.2）□配制量100mL □配制方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配制方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配制方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱
标准缓冲溶液(均用pH标准缓冲物质配制) 1.1 苯二甲酸氢钾标准缓冲溶液：c(KHC8H4O4)=0.05 mol/L(25℃时，pH=4.003)。 苯二甲酸氢钾的pH标准缓冲物质，有小塑料袋和瓶装两种，配制方法如下： a)袋装配制法：在250 mL(或500 mL)量瓶中(根据袋中标准缓冲物质量，选择量瓶大小)，按袋上的说明配制成所需的浓度。保存于聚乙烯瓶中。 b)瓶装配制法：称取5.10 g苯二甲酸氢钾(KHC8H4O4预先在115℃±5℃，烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水并稀释至500 mL，混匀。保存于聚乙烯瓶中。 1.2 0.025 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.025 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)混合标准缓冲溶液(25℃时，pH=6.864)： 磷酸二氢钾和磷酸氢二钠的pH标准缓冲物质，有小塑料袋装(混合磷酸盐)和瓶装(两种pH 标准缓冲物质分别包装)两种。配制方法如下： a)袋装配制法：在量瓶(根据袋上说明确定量瓶大小)中按袋上说明配制成所需浓度后，保存于聚乙烯瓶中。 b)瓶装配制法：迅速称取3.40 g磷酸二氢钾(KH2PO4)和3.55 g磷酸氢二钠(Na2HPO4)(均预先在115±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)溶于蒸馏水，转入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。 1.3 0.008 695 mol/L磷酸二氢钾(KH2PO4)和0.030 43 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)标准混合缓冲溶液(25℃时，pH=7.413)： 磷酸二氢钾和磷酸氢二钠两种pH标准缓冲物质分别用瓶包装，配制方法如下：迅速称取1.18 g磷酸二氢钾和4.31 g磷酸氢二钠(均预先在115℃±5℃烘2～3 h，于干燥器中冷却)，溶于水，全量移入1 000 mL量瓶中，加水至标线，混匀。保存于聚乙烯瓶中。 1.4 硼砂标准缓中溶液：c(Na2B4O7·10H2O)=0.010 mol/L(25℃时，pHs=9.182)。 硼砂的pH标准缓冲物质也有塑料袋装和瓶装两种，配制方法如下： a)袋装配制法： 在500 mL量瓶中，按袋上说明配制成所需浓度后，分装于5个100 mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封。 b)瓶装配制法： 称取1.91 g硼砂(预先在盛有蔗糖饱和溶液的干燥器中平衡两昼夜)，溶于刚煮沸冷却的蒸馏水，全量转入500 mL量瓶中，加水至标线，混匀。分装于5个100 mL聚乙烯瓶中，瓶口用石蜡熔封，有效期为三个月，经常使用的缓冲溶液，每周更换一次。 各种标准缓冲溶液的pH值随温度的变化而变化。0～45℃的pH值列于表21中。 1.5 饱和氯化钾溶液： 称取40 g氯化钾，加100 mL水，充分搅拌后盛于试剂瓶中(此溶液应与氯化钾固体共存)。 温度，℃苯二甲酸氢钾混合磷酸盐磷酸盐硼砂 0 4.006 6.981 7.534 7.534 5 3.999 6.949 7.500 9.391 10 3.996 6.921 7.472 9.330 20 3.998 6.879 7.429 9.226 25 4.003 6.864 7.413 9.182 30 4.010 6.852 7.400 9.142 35 4.019 6.844 7.389 9.105 40 4.029 6.838 7.380 9.072
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）100mg/ml □组份浓度100mg/ml Ampicillin □配制量50mL □配置方法 1.称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2.加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 Kan（卡那霉素）50mg/ml □组分浓度50mg/ml卡那霉素 □配制量50mL □配制方法 1.称取2.5g卡那霉素置于50ml塑料离心管中。 2.加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷) 24 mg/ml □组份浓度24mg/L IPTG □配制量50mL □配置方法 1.称量1.2gIPTG置于50mL离心管中。
2.加入40mL 灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌。 4.小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 X- Gal 20mg/m □组份浓度20mg/L X-Gal □配制量50mL □配置方法 1.称取1gX-Gal置于50mL离心管中。 2.加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解， 定容至50mL。 3.小份分装（1mL/份）后，-20℃避光保存。 LB培养基 □组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配置方法 1.称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone（胰化蛋白胨）10g Yeast Extract（酵母提取物）5g NaCl（氯化钠）10g 2.加入约800mL 的去离子水，充分搅拌溶解。 3.滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.2-7.3。
中国PH计校正溶液配置的标准方法 一、引言：根据目前市场的应用情况看来，中国即我国国内使用的PH计校正的缓冲溶液有三种，即标称pH4 ，pH7 和pH9的三种缓冲溶液，分别学名为如下，笔者根据多项资料整理可得，为的是您能方便快速弄明白这些问题，详情： 1）pH4：0.05M 邻苯二甲酸氢钾溶液； 2）pH7：0.025M 磷酸二氢钾和磷酸氢二钠混合盐溶液； 3）pH9：0.01M 硼砂溶液； 接下来介绍以上3种溶液的主要配置简单方法。 二、PH计校正溶液配置的标准方法 1）pH4，邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液： 精密称取在115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾[KHC8H4O4]10.12g，加水使溶解并稀释至1000ml。 2）pH7，磷酸盐标准缓冲液(pH7.4)： 精密称取在115±5℃干燥2～3小时的无水磷酸氢二钠4.303g与磷酸二氢钾1.179g，加水使溶解并稀释至1000ml。 另补充：磷酸盐标准缓冲液(pH6.8) 精密称取在115±5℃干燥2～3小时的无水磷酸氢二钠3.533g与磷酸二氢钾3.387g，加水使溶解并稀释至1000ml。 3）pH9，硼砂标准缓冲液：
精密称取硼砂[Na2B4O7·10H2O]3.80g(注意：避免风化)，加水使溶解并稀释至1000ml，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免与空气中二氧化碳接触。 总结：从现在使用PH计来看，中国境内即国产的PH计或者是酸度计，它的校正缓冲液拥有的情况有两种： 1）即标准溶液是可以在市场上买到的，一般是在聚乙烯瓶中密闭保存的。在室温条件下标准溶液一般以保存1～2个月为宜，当发现有浑浊、发霉或沉淀现象时，不能继续使用。在4℃冰箱内存放，且用过的标准溶液不允许再倒回。 2）还可以自己买缓冲剂回去配置得。但一般厂家发货时，由于国家规定发货时有的不准有液体或药物存在，所以只能是带有的是干燥的PH缓冲剂，客户使用时需要自己配置，只要使其溶解在预先煮沸15～30分钟的去离子水中，适当冲洗试剂袋中残留的试剂。再倒入250ml容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀即可。 https://www.doczj.com/doc/5a11941487.html,安徽诚缘科技开发有限公司专业生产PH计等相关产品
P B S缓冲液的配方 发布日期:2008-11-11 热门指数:865 PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结： 母液的配制： 0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水 0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水 各种浓度PB(pH=7.4)的配制： 先配0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4，81ml 0.2mol/L 的Na2HPO4, 即可。 然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如： 0.1M PB（PH=7.4）：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。 0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。 若需要NaCL 的话，加入NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。 另：其它各种另PH值的0.2M PB（100ml)配方： pH 0.2M NaH2PO4（ml）0.2M Na2HPO4（ml） 5.7 93.5 6.5 5.8 92 8 5.9 90 10 6.0 8 7.7 12.3 6.1 85 15 6.2 81.5 18.5 6.3 7 7.5 22.5 6.4 73.5 26.5 6.5 68.5 31.5 6.6 62.5 3 7.5 6.7 56.5 43.5 6.8 51 49 6.9 45 55 7.0 38 62 7.1 33 67 7.2 28 72 7.3 23 77 7.4 19ml 81ml 7.5 16 84 7.6 13 87 7.7 10.5 0.5 7.8 8.5 91.5 7.9 7 93 8.0 5.3 94.7 分子生物学常用溶液配制 发布日期:2008-8-25 热门指数:3471
核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5) 组份浓度 2 M Tris-醋酸，100 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加入57.1 ml的乙酸，充分搅拌。 4.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×TBE Buffer (pH8.3) 组份浓度 890 mM Tris-硼酸，20 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 3.加去离子水将溶液定容至l L后，室温保存。 10×MOPS(3-吗啉基丙磺酸)Buffer 组份浓度 200 rnM MOPS，20 mM NaOAc，10 mM EDTA 配制量 1 L 配制方法 1.称41.8 g MOPS，置于1 L烧杯中。 2.加约700 ml DEPC处理水，搅拌溶解。 3.使用2 N NaOH调节pH值至7.0。 6.用0.45 m滤膜过滤除去杂质。 7.室温避光保存。 注：溶液见光或高温灭菌后会变黄。变黄时也可使用，但变黑时不要使用。 溴乙锭 (10 mg/ml) 组份浓度 10 mg/ml溴乙锭 配制量 100 ml 配制方法 1.称量1 g溴乙锭，加入到100 ml容器中。 2.加入去离子水100 ml，充分搅拌数h完全溶解溴乙锭。 3.将溶液转移至棕色瓶中，室温避光保存。 4.溴乙锭的工作浓度为0.5 g/ml。
注意：溴乙锭是一种致癌物质，必须小心操作。 Agarose凝胶 配制方法 1.配制适量的电泳及制胶用的缓冲液(通常是0.5×TBE或1×TAE)。 2.根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉，加入适当的锥形瓶中。 3.加入一定量的电泳缓冲液(总液体量不宜超过锥形瓶的50%容量)。 注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。 4.在锥形瓶的瓶封上保鲜膜，并在膜上扎些小孔，然后在微波炉中 加热熔化琼脂糖。加热过程中，当溶液沸腾后，请戴上防热手套。 小心摇动锥形瓶。使琼脂糖充分均匀熔化。此操作重复数次，直 至琼脂糖完全熔化。必须注意，在微波炉中加热时间不宜过长， 每次当溶液起泡沸腾时停止加热，否则会引起溶液过热暴沸，造 成琼脂糖凝胶浓度不准，也会损坏微波炉。熔化琼脂糖时，必须 保证琼脂糖充分完全熔化，否则，会造成电泳图像模糊不清。 5.使溶液冷却至60℃左右，如需要可在此时加入溴乙锭溶液(终浓 度0.5 μg/ml)。并充分混匀。 注：溴乙锭是一种致癌物质。使用含有溴乙锭的溶液时，请戴好手套。 6.将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子。凝胶 厚度一般在3~5 min之间。 7.在室温下使胶凝固(大约30 min~1 h)，然后放置于电泳槽中进行电泳。 注：凝胶不立即使用时，请用保鲜膜将凝胶包好后在4℃下保存， 一般可保存2~5天。 琼脂糖凝胶浓度与线形DNA的最佳分辨范围 6× Loading Buffer(DNA电泳用) 组份浓度
pH 标准缓冲溶液(pH=6.86) 简介： pH 标准溶液的pH 值是已知的，并达到规定的准确度，其pH 值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH 标准缓冲溶液常用于酸度计的定位和斜率校准，其准确度范围在±0.01pH 。pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)是特 指在25℃下，pH=6.86。 组成： 操作步骤(三点校准通用，仅供参考)： 1、 将pH 电极在纯水中清洗干净并甩干。 2、 用温度计测量pH 标准缓冲溶液的温度，并将pH 计的温度值调整准确。自动温度pH 计 无需该步骤。 3、 定位校正：将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=6.86)中，稍微搅动后静止放置，待测量 值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的6.86，再显示pH 校准数值，表示pH6.86的校准完成。 4、 斜率校准Ⅰ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=4.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的4.00，再显示pH 校准数值，表示pH4.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示99%)。 注意事项： 1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，尤其以pH 标准缓冲溶液(pH=9.18) 较易失效。 2、 显示pH 校准数值时，pH 值会随温度不同而不同，例如在定位校正中，25℃时显示6.86， 15℃时就显示6.90。 3、 根据pH 等温测量原理，被测溶液的温度与校准溶液的温度越接近，其测量的准确度就越高。 4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 编号 名称 OR0002 OR0002 OR0002 Storage pH 标准缓冲溶液(pH=6.86) 50ml 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份
TBST是TBS+Tween的缩写,TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液,为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液 用1N HC1调pH至7.4,Tween为一种非离子型去污剂,有复性抗原的作用,可提高特异性的识别能力. 如果配置1000ml的TBST： ?先称量NaCl 40g ，倒入烧杯中，加DDW蒸馏水400ml,再称量NaCl 47.6g，倒入刚才的那个烧杯中,：由于NaCl的量太多，一次称量不方便，所以分两次称量，且易于溶解）。往烧杯中加入Tris—HCl缓冲液100ml，最后加吐温20， 5ml,转入1000ml 容量瓶中，在定容，转移即可。 TBST缓冲液是以进口粉剂为原材料配制，品质稳定。 ?·主要用于免疫组化和原位杂交，酶联免疫等实验中，清洗免疫印 ?迹膜； ?·无色液体，0.22 μm膜过滤纯化； ?·室温储存，效期为18个月； ?使用说明 ?·1×TBST缓冲液配制：900 ml去离子水与100 ml 10×TBST缓冲液充分混匀； ?友情提示 ?·室温条件下保存，如果低温保存溶液，可能会产生沉淀，可摇晃 ?或加热溶解；为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作； 用来洗细胞的TBS/PBS最好加KCl，这样比较接近体液的电解质比例 其他用途如WB等可以忽略，只要电导和离子浓度符合要求就可以了。个别去垢剂如SDS 遇到钾会沉淀，所以更不能加KCl pH和盐浓度看自己需要而定，不用拘泥于书本，当然一般来说是等渗的150mM NaCl
说明书1份 保存条件： 1：室温保存，12个月 2：如果低温保存溶液，可能会有晶体沉淀产生，可通过摇晃或加热溶解即可使用。注意事项： 1：说明：TBST缓冲液，PH 7.2-7.5； 2：颜色为无色透明液体； 3：为了您的安全和健康，请穿实验服并戴防护手套操作； 使用说明： 1：使用前将10 X TBS缓冲液和Tween20按1:39混合，注意需在使用前新鲜配制。2：将混合后的TBST缓冲液（10X）加入到9份去离子水中，充分混匀即可使用。
常用缓冲溶液的配制方法 1．甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L） 2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L） 邻苯二甲酸氢钾分子量= 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液 24 Na2HPO4·2H2O分子量= 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。 C4H2O7·H2O分子量= 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液 ① 使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH 值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶 液或浓盐酸调节，冰箱保存。 5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L ） 6872柠檬酸钠Na 3 C 6H 5O 7·2H 2O ：分子量294.12，0.1 mol/L 溶液为29.41克/毫升。 6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L ） Na 2Ac·3H 2O 分子量 = 136.09，0.2 mol/L 溶液为27.22克/升。 7．磷酸盐缓冲液
242Na 2HPO 4·12H 2O 分子量 = 358.22，0.2 mol/L 溶液为 71.64克/升。 Na 2HPO 4·2H 2O 分子量 = 156.03，0.2 mol/L 溶液为31.21克/升。 （2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L ） 242KH 2PO 4分子量 = 136.09，1/15M 溶液为9.078克/升。 8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M ） 9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）
实验常用试剂、缓冲液的配制方法 1、1M Tris-HCl□组份浓度1 M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 称量121.1gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。 pH值浓HCl 7.4 约70mL 7.6 约60mL 8.0 约42mL 4. 将溶解定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH 值随温度的变化差很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 2、1.5 M Tris-HCl□组份浓度1.5 M Tris-HCl （pH8.8）□配制量1L □配置方法1.称取181.7gTris置于1L烧杯中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。 3、10×TE Buffer□组份浓度100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）□配制量1L □配置方法1. 量取下列溶液，置于1L烧杯中。 1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0）100mL 500 mM EDTA（pH8.0）20mL 2. 向烧杯中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定至1L后，高温高压灭菌。 4. 室温保存。 4、3 M 醋酸钠□组份浓度3 M 醋酸钠 （pH5.2）□配制量100mL □配置方法1. 称取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL烧杯中，加入约40mL的去离子水搅拌溶解。 2. 加入冰乙酸调节pH值至5.2。 3. 加入去离子水将溶液定容至100mL。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 5、PBS Buffer□组份浓度137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4 □配制量1L □配置方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中。 NaCl 8 g KCl 0.2g Na2HPO4 1.42 g KH2PO4 0.27g 2. 向烧杯中加入约800 mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1L。 4. 高温高压灭菌后，室温保存。 注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸铵□组份浓度10 M醋酸铵 □配制量100mL □配置方法1. 称量77.1g醋酸铵置于100～200 mL烧杯中，加入约30 mL的去离子水搅拌溶解。 2.加去离子水将溶液定容至100mL。 3.使用0.22μm滤膜过滤除菌。 4.密封瓶口于室温保存。 注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。 7、Tris- HCl平衡苯酚□配置方法 1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。 2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。 3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈现结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。 ②加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1％。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色。有助于方便识别有机相。 ③加入等体积的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 ④重复操作步骤③。
pH 标准缓冲粉剂(pH=7.00) 简介： pH 标准溶液的pH 值是已知的，并达到规定的准确度，其pH 值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数。该pH 标准缓冲溶液常用于酸度计的定位和斜率校准，其准确度范围在±0.01，pH 标准缓冲粉剂(pH=7.00)是特指溶 解于超纯水后。 组成： 操作步骤(三点校准通用，仅供参考)： 1、 取pH 标准缓冲粉剂，充分溶解于超纯水，精确定容，即为pH 标准缓冲溶液。 2、 将pH 电极在纯水中清洗干净并甩干。 3、 用温度计测量pH 标准缓冲溶液的温度，并将pH 计的温度值调整准确。自动温度pH 计 无需该步骤。 4、 定位校正：将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液(pH=7.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量 值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的7.00，再显示pH 校准数值，表示pH7.00的校准完成。 5、 斜率校准Ⅰ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=4.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的4.00，再显示pH 校准数值，表示pH4.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示99%)。 6、 斜率校准Ⅱ: 取出pH 电极，用纯水清洗干净并甩干。将pH 电极浸入pH 标准缓冲溶液 (pH=10.00)中，稍微搅动后静止放置，待测量值稳定后，按校准键或参考仪器说明校准，一般会先显示闪烁的10.00，再显示pH 校准数值，表示pH10.00的校准完成。完成校准后会自动显示电极在该线性段的斜率百分比(如显示98%)。 注意事项： 1、 如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用，尤其以pH 标准缓冲溶液(pH=10.00) 较易失效。 2、 显示pH 校准数值时，pH 值会随温度不同而不同，例如在定位校正中，25℃时显示6.86， 编号 名称 OR0009 Storage pH 标准缓冲粉剂(pH=7.00) 1L RT 使用说明书 1份
纯化常用缓冲液配置方法 1. 20mM MOPS Buffer，pH7.0 称取4.12g MOPS，加入无水醋酸钠0.656g，加水800mL溶解搅拌溶解；用2M NaOH（80g/L）调节pH至7.0。再加入EDTA0.5845g，加纯化水定容至1L。 2. 25mM Tris-HCl，0.1M NaCl，pH7.5 称取3.025gTris，5.85gNaCl，加入约800ml纯化水，搅拌溶解，加入1.69mL的浓盐酸，加纯化水定容至1L。 3. 25mM Tris-HCl，0.5M Arginine（精氨酸），pH7.5 称取3.025gTris，87.1g Arginine（精氨酸），加入约800ml纯化水，搅拌溶解，加入1.69mL 的浓盐酸，加纯化水定容至1L。 4. 2M tris-base ( 242.28g Tris-base，加纯化水定容至1L) 5. 175mM Tris，75mM Nacl，pH7.1 称取21.2gTris ，4.3875gNaCl，加入约800ml纯化水，搅拌溶解，加入3.75mL浓盐酸，加纯化水定容至1L。 6. 0.1M Acetate（醋酸盐），pH3.6 称取NaAc（三水醋酸钠1.007g/无水醋酸钠0.6071g），加入冰醋酸5.29mL，加纯化水定容至1L。 7. 0.1M 醋酸（5.7mL醋酸，加纯化水定容至1L） 8. 3M Ammonium sulfate(硫酸铵)，60mM sodium Acetate（醋酸钠），pH3.6 9. 5M Nacl (292.5g Nacl，加纯化水定容至1L) 10. 1.1M Ammonium sulfate(硫酸铵)，20mM MOPS，pH7.0 备注：以上溶液配置均以1L为基础单位 化学物分子式及分子量 Tris 分子式：C4H11NO3 分子量:121.14 Arginine（精氨酸）分子式：C6H14N4O2分子量：174.20 EDTA 分子式：C10H16N2O8分子量：292.248 NaCl 分子量：58.5 MOPS 分子式：C7H15NO4S 分子量：209.26 CH3COOH 分子量：60.05 CH3COONa 分子量：82.03 CH3COONa·3H2O 分子量：136.08 Ammonium sulfate(硫酸铵) 分子式：(NH4)2SO4 分子量：132 NaOH 分子量：40 HCl 分子量：36.5
pH标准缓冲溶液的详细说明 1、什么是pH计的标准缓冲溶液？有什么特点？ pH缓冲溶液是一种能使pH值保持稳定的溶液。如果向这种溶液中加入少量的酸或碱，或者在溶液中的化学反应产生少量的酸或碱，以及将溶液适当稀释，这个溶液的pH值基本上稳定不变，这种能对抗少量酸或碱或稀释，而使pH值不易发生变化的溶液就称为pH缓冲溶液。 pH计标准缓冲溶液具有以下特点： （1）标准溶液的pH值是已知的，并达到规定的准确度； （2）标准溶液的pH值有良好的复现性和稳定性，具有较大的缓冲容量，较小的稀释值和较小的温度系数； （3）溶液的制备方法简单； 2、对于PH计，pH缓冲溶液主要作用是什么？ ⑴pH测量前标定校准pH计 ⑵用以检定pH计的准确性，例如用pH6.86和pH4.00标定pH计后，将pH 电极插入pH9.18溶液中，检查仪器显示值和标准溶液的pHs值是否一致； ⑶在一般精度测量时检查pH计是否需要重新标定。pH计标定并使用后也许会产生漂移或变化，因此在测试前将电极插入与被测溶液比较接近的标准缓冲液中，根据误差大小确定是否需要重新标定。 ⑷检测pH电极的性能 3、如何配制pH标准缓冲溶液？ 对于一般的pH测量，可使用成套的pH缓冲试剂（可配制250ml），配制溶液时，应使用去离子水，并预先煮沸15～30分钟，以除去溶解的二氧化碳。剪开塑料袋将试剂倒入烧杯中，用适量去离子水使之溶解，并冲洗包装袋，再倒入250ml容量瓶中，稀释至刻度，充分摇匀即可。 4、如何正确保存和使用pH缓冲溶液; 缓冲溶液配制后，应装在玻璃瓶或聚乙烯瓶中（碱性的pH缓冲液如pH9.1 8、pH10.01、pH12.46等，应装在聚乙烯瓶中）瓶盖严密盖紧，在冰箱中低温（5～10℃）保存，一般可使用二个月左右，如发现有混浊、发霉或沉淀等现象，不能继续使用。使用时，应准备几个50ml的聚乙烯小瓶，将大瓶中的缓冲溶液倒入小瓶中，并在环境温度下放置1～2小时，等温度平衡后再使用。使用后不得再倒回大瓶中，以免污染，小瓶中的缓冲溶液在>10℃的环境条件下可以使用2～3天，一般pH7.00、pH6.86及pH4.00三种溶液使用时间可以长一些，pH9.18和pH10.01溶液由于吸收空气中的CO2，其p H值比较容易变化。