菌种筛选方法
在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平。
1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。当然，这种鉴别方法只能用于初筛。有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。
2 平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化
反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的"形态"变化。具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图5.6.1。这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。图5.6.1 平皿快速检测法示意图平皿快速检测法操作时应将培养的菌体充分分散，形成单菌落，以避免多菌落混杂一起，引起"形态"大小测定的偏差。
1) 纸片培养显色法将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空，下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿，将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上，保温培养形成分散的单菌落，菌落周围将会产生对应的颜色变化。从指示剂变色圈与菌落直径之比可以了解菌株的相对产量性状。指示剂可以是酸碱指示剂也可以是能与特定产物反应产生颜色的化合物。
2) 变色圈法将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面，在菌落周围形成变色圈。如在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液，使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况。
3) 透明圈法在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就会形成透明圈，透明圈的大小反映了菌落利用此物质的能力。在培养基中掺入可溶性淀粉、酪素或CaCO3可以分别用于检测菌株产淀粉酶、产蛋白酶或产酸能力的大小。
4) 生长圈法利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，若待分离的菌在缺乏上述营养物的条件下，能合成该营养物，或能分泌酶将该营养物的前体转化成营养物，那么，在这些菌的周围就会有工具菌生长，形成环绕菌落生长的生长圈。该法常用来选育氨基酸、核苷酸和维生素的生产菌。工具菌往往都是对应的营养缺陷型菌株。
5) 抑制圈法待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质，或能分泌某种酶并将无毒的物质水解成对工具菌有毒的物质，从而在该菌落周围形成工具菌不能生长的抑菌圈。例如：将培养后的单菌落连同周围的小块琼脂用穿孔器取出，以避免其它因素干扰，移入无培养基平皿，继续培养4-5天，使抑制物积累，此时的抑制物难以渗透到其它地方，再将其移入涂布有工具菌的平板，每个琼脂块中心间隔距离为2厘米，培养过夜后，即会出现抑菌圈。抑菌圈的大小反映了琼脂块中积累的抑制物的浓度高低。该法常用于抗生素产生菌的筛选，工具菌常是抗生素敏感菌。由于抗生素分泌处于微生物生长后期，取出琼脂块可以避免各菌落所产生抗生素的相互干扰。典型的例子是春雷霉素生产菌的筛选，见图5.6.2。
3 摇瓶培养法摇瓶培养法是将待测菌株的单菌落分别接种到三角瓶培养液中，振荡培养，然后，再对培养液进行分析测定。摇瓶与发酵罐的条件较为接近，所测得的数据就更有实际意义。但是摇瓶培养法需要较多的劳力、设备和时间，所以，摇瓶培养法常用于复筛。但若某些突变性状无法用简便的形态观察或平皿快速检测法等方法检测时，摇瓶培养法也可用于初筛。初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定，从大量菌株中选出10-20%较好的菌株，淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶，选出3-5个较好的菌株，再做进一步比较，选出最佳的菌株。
4 特殊变异菌的筛选方法上述一般的筛选菌株方法的处理量仍是很大的，为了从存活的每毫升106左右细胞的菌悬液中筛选出几株高产菌株，要进行大量的稀释分离、摇瓶和测定工作。虽然平皿快速检测法作为初筛手段可减少摇瓶和测定的工作量，但稀释分离的工作仍然非常繁重。而且有些高产变异的频率很低，在几百个单细胞中并不一定能筛选到，所以，建立特殊的筛选方法是极其重要的。例如营养缺陷型和抗性突变菌株的筛选有它们的特殊性，营养缺陷型或抗性突变的性状就象一个高效分离的"筛子"，以它为筛选的条件，可以大大加快筛选的进程并有效地防止漏筛。在现代的育种中，常有意以它们作为遗传标记选择亲本或在DNA中设置含这些遗传标记的片段，使菌种筛选工作更具方向性和预见性。本节还将简单介绍其它一些特殊变异株的筛选方法。
4.1 营养缺陷型突变株的筛选经诱变处理后的菌悬液在筛选前一般应先进行诱变后
培养，以促使变异细胞发生分离，防止出现表型延迟现象，筛选出不纯的菌株。营养缺陷型的筛选一般包括浓缩、进一步检出和鉴别营养缺陷型等步骤。
1) 浓缩营养缺陷型菌株诱变后的细胞群体中大部分存活菌是野生型，而营养缺陷型占的比例相当小，这对分离是很不利的，所以，应该淘汰大量的野生型，以达到浓缩营养缺陷型的目的。常用的浓缩方法有抗生素法、菌丝过滤法、差别杀菌法和饥饿法等。
2)进一步检出所需缺陷型浓缩后的菌液中营养缺陷型的比例较大，但并非全部都是。并且营养缺陷型中也有不同的类型，还需要进一步检出所需要的营养缺陷型。这样就需要采用逐个检出法、夹层培养法和限量补给法等方法进一步检出所需要的营养缺陷型。
3)营养缺陷型的鉴定获得的营养缺陷型菌株还应进一步确认其生长的所需物。菌株较少时，可用生长谱法，若菌株较多时，常采用组合补充培养基法
4.2 抗性突变菌株的筛选抗性突变株的筛选相对比较容易，只要有10-6频率的突变体存在，就容易筛选出来。抗性突变株的筛选常用的有一次性筛选法和阶梯性筛选法两种手段。
1) 一次性筛选法一次性筛选法就是指在对出发菌株完全致死的环境中，一次性筛选出少量抗性变异株。噬菌体抗性菌株常用此方法筛选。将对噬菌体敏感的出发菌株经变异处理后的菌悬液大量接入含有噬菌体的培养液中，为了保证敏感菌不能存活，可使噬菌体数大于菌体细胞数。此时出发菌株全部死亡，只有变异产生的抗噬菌体突变株能在这样的环境中不被裂解而继续生长繁殖。通过平板分离即可得到纯的抗性变异株。耐高温菌株在工业发酵中的应用意义在于它可以节约冷却水的用量，尤其是在夏季，并能减少染菌的机会。耐高温菌株所产生酶的热稳定性较高，适用于一些特殊的工艺过程。耐高温菌株也常采用此法筛选。将处理过的菌悬液在一定高温下处理一段时间后再分离。对此温度敏感的细胞被大量杀死，残存的细胞则对高温有较好的耐受性。耐高浓度酒精的酵母菌的酒精发酵能力较高，也适宜提高发酵醪浓度，提高醪液酒精浓度。而耐高渗透压的酵母菌株具有积累甘油的性能，可用于甘油发酵。耐高酒精度、高渗透压的菌株也可分别在高浓度酒精或加蔗糖等造成的高渗环境下一次性筛选获得。
2)阶梯性筛选法药物抗性即抗药性突变株可在培养基中加入一定量的药物或对菌体
生长有抑制作用的代谢物结构类似物来一次性筛选，大量细胞中少数抗性菌在这种培养基平板上能长出菌落。但是在相当多的情况下，无法知道微生物究竟能耐受多少高浓度的药物，这时，药物抗性突变株的筛选需要应用阶梯性筛选法。因为药物抗性常受多位点基因的控制，所以药物的抗性变异也是逐步发展的，时间上是渐进的，先是可以抗较低浓度的药物，而对高浓度药物敏感，经"驯化"或诱变处理后，可能成为抗较高浓度药物的突变株。阶梯筛选法由梯度平板或纸片扩散在培养皿的空间中造成药物的浓度梯度，可以筛选到耐药浓度不等的抗性变异菌株，使暂时耐药性不高，但有发展前途的菌株不致于被遗漏，所以说，阶梯性筛选法较适合于药物抗性菌株的筛选，特别是在暂时无法确定微生物可以接受的药物浓度情况下
4.3 组成酶变异株的筛选
许多水解酶是诱导酶，只有在含有底物或底物类似物的培养环境中，微生物才会合成这些酶类，所以，诱导酶的生产不仅需要诱导物，而且受到诱导物的种类、数量以及分解产物的影响。能迅速利用的碳源（如葡萄糖）往往会引起酶合成的减少，诱导物有时又比较昂贵。这些都可能造成这些水解酶工业生产的波动以及生产成本提高。如果控制这些酶合成的调节基因发生了变异，诱导酶就可能转变成组成酶，它的合成与细胞的其它组织蛋白一样，不再需要诱导物的存在。由诱导型的出发菌株诱变筛选出组成型变异株对于水解酶的工业生产具有重要的现实意义。具体的筛选方法有恒化器法、循环培养法和诱导抑制物法。
1) 恒化器法恒化器常被用于微生物的"驯化"。在培养基中添加不能起诱导作用的低浓度底物，接入处理后的菌悬液进行培养，此时出发菌株由于不能被诱导，无法合成有关的诱导酶而不能分解该底物，从而生长速率极慢，而群体中少数组成型变异株则可合成有关的酶，分解利用该底物，生长速率较快。为了提高组成酶变异株的优势，即它在群体中的比例，可以应用恒化器培养技术。随着恒化器培养中不断加入新鲜基质而逐渐增大组成酶变异株的优势，这样就能够比较容易地做进一步的纯化分离。
2) 循环培养法利用不含诱导物的培养环境和含有诱导物的培养环境进行交替循环培养待分离的菌悬液，从而使组成酶变异株得到富集。当接种到不含诱导物而含有其它可利用碳源的培养基中时，两种类型菌株同样能较好地生长，但在此环境中组成型突变株已能合成有关的水解酶，而诱导型菌株就不能合成。进而将它们转接入含诱导物的培养基中时，变异株能迅速利用诱导底物进行生长繁殖，而诱导型出发菌株需经历一个诱导合成酶的阶段，
两类菌株的生长就不同步了，随着循环交替培养的继续，组成酶变异株所占的比例将逐渐增大。
3) 诱导抑制剂法有些化合物能阻止某些诱导酶的合成，如α-硝基苯基-β-岩藻糖苷对大肠杆菌的β-半乳糖苷酶的诱导合成有抑制作用，称为诱导抑制剂。当在诱导物和诱导抑制剂同时存在的培养环境中培养待分离菌群时，诱导型菌株不能产生诱导酶，无法正常生长，只有组成型变异株能够利用底物进行生长繁殖。
4.4高分子废弃物分解菌的筛选随着石油化工和塑料工业的发展，各种高分子包装废弃物日益增多，这些"白色污染"在自然界很难被消化而进入物质循环。设法选育能分解利用这些高分子材料的微生物对于环境保护至关重要。这些高分子材料大多是不溶于水的，直接分离具有分解功能的微生物很困难。为此，有人设计了阶段式筛选法，首先寻找能在与聚乙二醇结构相似的含两个醚键的三甘醇上生长的微生物，接着，诱变筛选能分解聚乙二醇的变异株；或者筛选能以乙二醇、丙二醇为碳源的菌株，继而诱变筛选出能利用聚乙二醇等物质的变异株。这种由简单的聚合物单体入手逐级筛选高分子废弃物分解菌也许是一条有效的筛选思路。
4.5无泡沫菌株及高凝聚性菌株的筛选有些菌在发酵过程中会产生大量的泡沫，从而造成发酵液满溢，增大了染菌的机会，使发酵体系反应不均匀，也有可能引起某些发酵产物的生物活性丧失，如蛋白酶变性失活。为了避免泡沫的产生，常常需通过牺牲发酵液的装量或加入大量的消泡剂来消除泡沫的不利影响。发酵过程产生泡沫是菌体代谢、培养基和发酵工艺等方面的原因造成的，而菌种是产生泡沫的关键，选育无泡沫或少泡沫菌株可以从根本上解决泡沫问题。有人用气泡上浮法筛选出了无泡沫的酒精酵母。将变异处理后的菌悬液接种入生长培养基中，培养器皿的底部放置无菌压缩空气喷口，培养过程中不断通入无菌空气，形成鼓泡，易产生泡沫的酵母菌会随泡沫而除去，留下的是不易产生泡沫的变异菌株；也有人用苯胺蓝染色法进行筛选，将经过变异处理的菌悬液经培养后涂布在含葡萄糖3%、酵母膏0.5%、苯胺蓝0.005%的平板上培养4天，出发菌株呈浅蓝色，变异菌株因细胞壁成分和结构改变造成与染料结合力改变，少泡沫的变异菌株呈深蓝色。啤酒发酵和单细胞蛋白培养都希望由凝聚性较好的酵母菌株担任发酵菌种，以便于啤酒的澄清和保持良好的风味，以及单细胞蛋白的收集。采用上述的泡沫上浮法也可以除去不易凝聚的细胞，通过改变鼓泡速度的调节，可以获得具不同凝聚性的菌株。
乳酸菌菌种的分离筛选方法乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状，一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。 一.筛选方法： 1.溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养
Word2003操作练习题【 例3-11 】：将以下素材按要求排版。 (1)、将标题字体设置为“华文行楷”，字形设置为“常规”，字号设置为“小初”、选定“效果”为“空心字”且居中显示。 (2)、将“陶渊明”的字体设置为“隶书”、字号设置为“小三”，文字右对齐加双曲线边框，线型宽度应用系统默认值显示。 (3)将正文行距设置为25磅。 【 素材 】： 归去宋辞 ——陶渊明 归去来兮!田园将芜胡不归?既自以心为形役，奚惆怅而独悲?悟已往之不谏，知来者之可追；实迷途其未远，觉今是而昨非。舟摇摇以轻殇，风飘飘而吹衣。问征夫以前路，恨晨光之熹微。乃瞻衡宇，栽欣载奔。童仆欢迎，稚子候门。三径就荒，松菊犹存。携幼入室，有酒盈樽。引壶觞以自酌，眇庭柯以怡颜。倚南窗以寄傲，审容膝之易安。园日涉以成趣，门虽设而常关。策扶老以流憩，时翘首而遐观。云无心以出岫，鸟倦飞而知还。暑翳翳以将入，抚孤松而盘桓。 【答案与解析】具体操作步骤如下： (1)选定“归去来辞”，单击“格式”菜单中的“字体”命令，打开“字体”对话框。将“中文字体”下拉框设置为“华文行楷”，“字形”选择框设置为常规，“字号”选择框设置为“小初”，选定“效果”框中的“空心字”复选框,并保存. (2)单击“确定”按钮，然后单击“格式”工具栏上的“居中”按钮，将文字居中显示。 (3)选定“陶渊明”，单击“格式”菜单中的“字体”命令，打开“字体”对话框，将“中文字体”设置为“隶书”，“字号”设置为“小三”,并保存。 (4)单击“确定”按钮，然后单击格式”工具栏上的“右对齐”按钮，将文字右对齐显示。 (5)再次选定“陶渊明”，单击“格式”菜单中的“边框和底纹”命令，打开“边框和底纹”对话框。在“设置”中选定“方框”；在“线型”下选择双曲线；在“应用范围”框中选择“文字”，单击“确定”按钮,并保存。 (6)选定正文，单击“格式”菜单中的“段落”命令，打开“段落”对话框。单击“行距”框右端的下拉按钮，打开下拉列表，选择“固定值”，然后将后面的“设置值”设置为25磅,并保存。 、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。 、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
精心整理 乳酸菌菌种的分离筛选方法 乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 时，SL 培养基、MS 对乳酸菌无害。一.筛选方法： 1.溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸，以维持培养基的PH 。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养48h →挑选产生溶
钙圈的菌落反复在MRS培养基上划线→挑起单菌落染色，经镜检确认为纯种→挑选革兰氏阳性单菌落→试管穿刺4℃冰箱保存。 2.溴甲酚绿指示剂法： 培养基：MRS培养基（含溴甲酚绿酒精溶液） 筛选过程：同上，不同之处是稀释涂布后长出菌落，挑取使溴甲酚绿变色的菌落。 二.菌种的分离筛选 1.培养基： ★1.1麦芽汁碳酸钙培养基：麦芽汁（10BX）1L预先灭菌碳酸钙5-10g/LPH自然（分离用） ★★1.2吐温 ★1.3 酵母膏（分离用） 1.4 1.5 MgSO 4 1.6 ★★1.7 蛋白胨 葡萄糖、琼 脂18.0g 酸钙, 1.8BCP 乳糖5.0g蛋白胨5.0g酵母膏3.0g0.5℅溴甲酚紫10ml自来水1000ml pH6.5-7.0（分离用） 1.9BCG牛乳营养琼脂：脱脂奶粉10g，溶于50ml水中，加入1.6℅溴甲酚绿酒 精溶液0.07ml，0.075Mpa20min。另取琼脂2.0g，溶于50ml水中，加酵母膏 1.0g溶解后调pH6.5-6.8，0.1Mpa20min.趁热在无菌操作下两者混合均匀， 倒平板，37℃培养24h，检查是否有杂菌。
Word综合题操作步骤 1.设置多级列表，标题1和标题2的格式。 1)使用多级符号，对章名，小节名进行设置 光标定位于第1行，选择“多级列表”——选择带“标题1”格式的多级列表——“定义新的多级列表”， 设置级别1——第1章 级别2——1.1——确定。 在工具栏样式“标题1”处右击，选择“修改”，将对齐方式设置为居中。 光标定位于第2行——“多级列表”——选择“当前列表” 在工具栏样式“标题2”处右击，选择“修改”，将对齐方式设置为左对齐。 用格式刷修改其它标题 学会借助“导航栏”（可以按“查找”按钮），删除文中原来的编号。 保存。 （如遇第2题，第6题，第17题等，当应用小节样式1.1时，如果小节的编号前，出现了“第2章”，可以采用下面的方式来设置：在应用当前多级列表之前，先将鼠标定位于1.1节的位置，在样式快速工具栏中选择“副标题”，然后再选择“多级列表”里的“当前列表”，即可”，） 2）新建样式0000 8）应用样式0000 光标定位于正文中无编号文字，样式——新建样式——“样式0000” 将样式设置为以下样式 中文字体——楷体，西文字体——Times New Roman，字体大小，小四。 段落，首行缩进2字符，段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍。 用格式刷进行修改其它无编号文字。 保存。 3）图注的设置 5）表注的设置 将光标定位于图的说明文字前——引用——插入题注——新建标签——“图”——编号——包含章节编号； 选择图片，居中；图，居中； 表注的设置，将光标定位于表的说明文字前——引用——插入题注——新建标签——“表”——编号——包含章节编号； 表注——居中，表——居中。 对文中所有的图注和表注进行设置 4）对图注交叉引用 6）对表注交叉引用 选择文中“下图”两字——引用——交叉引用，引用类型——“图”；
注意：该题中准考证号设为：091761126100123。 1．对正文进行排版，其中： （1）章名使用样式“标题1”，并居中；编号格式为：第X章，其中X为自动排序。（2）小节名使用样式“标题2”，左对齐；编号格式为：多级符号，X .Y.。X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1.）。 操作步骤： 1. 选择菜单“格式/样式和格式”，修改“标题1”样式，⑴格式/段落，对齐方式 “居中”，⑵格式/编号，多级符号，选第二行的第二个，单击“自定义”，① 在“编号格式”处，插入“第”和“章”，②在“级别”处选“2”，在“编号 格式”处的最后，输入“.”，“确定”。 2. 修改“标题2”样式，格式/段落，对齐方式“左对齐”。 3. 将“标题1”和“标题2”样式应用到相应位置。 4. 切换到大纲视图，显示级别选2，删除原有的章节编号。 （3）新建样式，样式名为：“样式”+准考证号后四位；其中： a.字体：中文字体为“楷体-GB2312”，西文字体为“Times New Roman”，字号 为“小四”； b.段落：首行缩进2字符，-段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍； c.其余格式，默认设置。 （4）对出现“1.”、“2.”…处，进行自动编号，编号格式不变；对出现“1)”、“2)”… 处，进行自动编号，编号格式不变。 （5）将（3）中样式应用到正文中无编号的文字。 注意：不包括章名、小节名、表文字、表和图的题注。 操作步骤： 光标定位在正文处，单击“新样式”, “确定”…… *************************************************************************** *** （6）对正文中的图添加题注“图”，位于图下方，居中。 a.编号为“章序号”-“图在章中的序号”，（例如第1章中的第2幅图，题注编 号为1-2 ）； b.图的说明使用图下一行的文字，格式同标号； c.图居中。 （7）对正文中出现“如下图所示”的“下图”，使用交叉引用，改为“如图X-Y所示”，其中“X-Y”为图题注的编号。 操作步骤： 1. 将光标定位在图下面那一行文字的行首，选择菜单“插入/引用/题注”，“新建 标签”-图，“编号”，选中“包括章节号”,“确定”。 2. 选中“下图”两字, 选择菜单“插入/引用/交叉引用”，引用类型－图，引用内 容－只有标签和编号，选择要引用的题注，单击“插入”。 （8）对正文中的表添加题注“表”，位于表上方，居中。 a.编号为“章序号”-“表在章中的序号”，（例如第1章中第1张表，题注编号 为1-1）；
菌种筛选方法 在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。初筛的手段应尽可能快速、简单。复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标,测得的数据要能够反映将来的生产水平。 1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。当然，这种鉴别方法只能用于初筛。有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremoth ecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberell a fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。 2 平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的
"形态"变化。具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图。这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。图平皿快速检测法示意图平皿快速检测法操作时应将培养的菌体充分分散，形成单菌落，以避免多菌落混杂一起，引起"形态"大小测定的偏差。 1) 纸片培养显色法将饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空，下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿，将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸上，保温培养形成分散的单菌落，菌落周围将会产生对应的颜色变化。从指示剂变色圈与菌落直径之比可以了解菌株的相对产量性状。指示剂可以是酸碱指示剂也可以是能与特定产物反应产生颜色的化合物。 2) 变色圈法将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表面，在菌落周围形成变色圈。如在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液，使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可粗略判断水解产物的情况。 3) 透明圈法在固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成浑浊、不透明的培养基背景。将待筛选在菌落周围就
office版计算机二级word综合操作步骤图解
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正文内容已输入，按要求对该文档进行以下设置：章样式及自动编号、节样式及自动编号、新建样式并应用、对图表添加题注并设置交叉引用、自动生成目录及图表索引、分别添加奇偶页页眉页脚等。 按下列要求对文档“DWord.docx”进行设置。（注意：以题目要求为准，注意及时保存。）首先“ctrl+A”选中全文，将全文样式修改为“正文”样式。 1、对正文（指的是除了目录索引等外的内容）进行排版，其中： 1)使用多级符号对章名、小节名进行自动编号，代替原始的编号。要求： ?章号的自动编号格式为：第X章（例：第1章），其中：X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 ?小节名自动编号格式为：X.Y，X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1）。 X，Y均为阿拉伯数字序号，对应级别2，左对齐显示。 【操作步骤】： a)先定义新的多级列表：单击段落组中的“多级列表”→“定义新的多级列表”。 图1 定义新的多级列表 b)如图1所示，在“定义新多级列表”对话框中进行以下操作： ★设置章名的样式： ①先删除“编号格式”中原有内容 ②“级别”选择“1”，“编号样式”选择“1, 2, 3, …”，“起始编号”选择“1” ③在“编号格式”的“1”前输入“第”，后输入“章” （此时“编号格式”内容为“第1章”，注意此处的“1”是域结果，灰色底纹显示） ④“对齐位置”值设为“0” ⑤“将级别链接到样式”选择“标题1” （若没有显示“将级别链接到样式”，请先单击对话框右上角的“高级”按钮）如图2所示。
乳酸菌菌种的分离筛选方法 乳酸细菌是一类能利用发酵糖产生大量乳酸的细菌通称。为兼性厌氧菌，杆状或球状，革兰氏阳性菌，无芽孢，不运动。营养要求高，需要提供丰富的肽类氨基酸维生素。在琼脂表面或内层形成较小的白色或淡黄色的菌落。 通常用作为有益微生物的菌种有乳酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、粪肠球菌、乳酸片球菌、双歧杆菌、屎肠球菌、戊糖片球菌等。 乳杆菌常用MRS琼脂作半选择培养基。当乳杆菌仅是复杂区系中的部分菌类 时，SL培养基常用作为选择性培养基。对于芽孢乳杆菌常用GYP培养基，链球菌有TYC培养基、MS培养基。M17培养基被用作乳球菌的分离培养基。 嗜酸乳杆菌属于乳杆菌属的一个种。其特性为：杆菌，两端圆，不运动，无 鞭毛。粪肠球菌为革兰氏阳性，圆形或椭圆形。 乳酸片球菌细胞呈球状，直径0.6~1.0μm，在直角两个平面交替形成四联状， 一般细胞成对生，单生者罕见，不成链状排列。革兰氏阳性，不运动，兼性厌氧。在MRS培养基上菌落小，呈白色。沿洋菜穿刺线的生长物呈丝状。 乳酸菌在一般琼脂培养基上形成微小菌落，不易观察，所以分离时先富集培养并选择合适的培养基。分离培养基一般添加西红柿、酵母膏、吐温-80等物质，也常常加入醋酸盐，因醋酸盐能抑制部分细菌生长，对乳酸菌无害。 培养基中添加碳酸钙，乳酸溶解培养基中的碳酸钙形成透明圈，作为分离鉴别的依据，通过对生成的乳酸量进行性能鉴定。 乳酸菌生长繁殖时需要多种氨基酸，维生素及微氧，一般菌落比较小。分离培养基一般可添加西红柿酵母膏油酸吐温等物质，均具有促进生长作用。也常常 添加醋酸盐抑制有些细菌的生长，对乳酸菌无害。 一.筛选方法： 1.溶钙圈法： 利用一些产酸类细菌在含CaCO3的培养基上产生CaCO3溶解圈，从而筛选出这些产酸类细菌，可用于乳酸菌的筛选。 其中培养基中加入CaCO3的作用是：①鉴别能产生酸的细菌；②中和产生的酸， 以维持培养基的PH。 筛选过程：样品预处理→梯度稀释至10-6→选择合适的稀释度涂布→37℃培养
营养缺陷型菌株的筛选 采用辐射，化学试剂等因素处理细菌，以提高其变异几率，关键步骤是进行营养缺陷型微生物的筛选工作，营养缺陷型是指通过诱变产生的，由于发生了丧失某酶合成能力的突变，因而只能在加有该酶合成产物的培养基中才能生长的突变株。营养缺陷型的筛选与鉴定涉及下列几种培养基：基本培养基（MM，符号为[-]）是指仅能满足某微生物的野生型菌株生长所需的最低成分的合成培养基。完全培养基(CM，符号为[+])是指可满足某种微生物的一切营养缺陷型菌株的营养需要的天然或半合成培养基。补充培养基（SM，符号为[A]或[B]等）是指在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的合成或半合成培养基。 营养缺陷型菌株不仅在生产中可直接作发酵生产核苷酸、氨基酸等中间产物的生产菌，而且在科学实验中也是研究代谢途径的好材料和研究杂交、转化、转导、原生质融合等遗传规律必不可少的遗传标记菌种。 营养缺陷型的筛选一般要经过诱变、淘汰野生型、检出和鉴定营养缺陷型四个环节。现分述如下： 第一步，诱变剂处理：与上述一般诱变处理相同。
第二步，淘汰野生型：在诱变后的存活个体中，营养缺陷型的比例一般较低。通过以下的抗生素法或菌丝过滤法就可淘汰为数众多的野生型菌株即浓缩了营养缺陷型。 抗生素法有青霉素法和制霉菌素法等数种。青霉素法适用于细菌，青霉素能抑制细菌细胞壁的生物合成，杀死正在繁殖的野生型细菌，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细菌。制霉菌素法则适合于真菌，制霉菌素可与真菌细胞膜上的甾醇作用，从而引起膜的损伤，也是只能杀死生长繁殖着的酵母菌或霉菌。在基本培养基中加入抗生素，野生型生长被杀死，营养缺陷型不能在基本培养基中生长而被保留下来。 菌丝过滤法适用于进行丝状生长的真菌和放线菌。其原理是：在基本培养基中，野生型菌株的孢子能发芽成菌丝，而营养缺陷型的孢子则不能。通过过滤就可除去大部分野生型，保留下营养缺陷型。 第三步，检出缺陷型：具体方法很多。用一个培养皿即可检出的，有夹层培养法和限量补充培养法；在不同培养皿上分别进行对照和检出的，有逐个检出法和影印接种法。可根据实验要求和实验室具体条件加以选用。现分别介绍如下：
工业微生物菌种得分离与筛选 来源:青岛海博 一、微生物工业对菌种得要求 (一)、微生物工业得生产水平由三个要素决定:生产菌种得性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。其中生产菌种得性能就是最重要得因素。 (二)、微生物工业对菌种得要求就是: (１)菌株高产,在较短得时间内发酵产生大量发酵产物得能力; (２)在发酵过程中不产生或少产生与目标产品相近得副产品及其她产物; (3)生长繁殖能力强,较强得生长速率,产孢子得菌种应该具有较强得产孢子能力; (4)能够高效地将原理转化为产品; (５)能利用广泛得原材料,并对发酵原料成分得波动敏感性小; (６)对需要添加得前体物质有耐受能力,并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用; (7)在发酵过程中产生得泡沫要少; (8)具有抗噬菌体得能力; (9)遗传稳定性, 二、工业用微生物菌种得来源及选育 (一)微生物菌种得来源 一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品与分离筛选: (1)就是根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买; (２)从大自然中采集样品分离; (3)从一些发酵制品中分离筛选目得菌株、 当前发酵工业所用菌种总趋势就是从野生菌转向变异菌,自然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组得定向育种。 (二)微生物工业菌种得分离 1、野生菌株得分离、筛选过程 (１)新菌种分离与筛选得步骤 菌种分离得流程如下: 标本采集→标本材料得预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏 ①采样 采样季节:以温度适中,雨量不多得秋初为好。 采土方式:在选好适当地点后,用小铲子除去表土,取离地面5—1５cm处得土约10g,盛入清洁得牛皮纸袋或塑料袋中,扎好,标记,记录采样时间、地点、环境条件等,以备查考。为了使土样中微生物得数量与类型尽少变化,宜将样品逐步分批寄回,以便及时分离、 ②标本预处理 ④纯种分离:采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落、 ⑤高产菌株得筛选:这一步就是采用与生产相近得培养基与培养条件,通过三角瓶得容量进行小型发酵试验,获得适合于工业生产用菌种。还要对菌种进行发酵性能测定,
在考生文件夹Word子文件夹中，已有Word.docx文件。注意：（请注意及时保存操作结果！） 1. 对正文进行排版 1) 使用多级符号对章名、小节名进行自动编号。要求： 章号的自动编号格式为：第X章（例：第1章)，其中：X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 小节名自动编号格式为：X.Y，X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1），X，Y 均为阿拉伯数字序号。对应级别2。左对齐显示。 操作步骤： 1.单击开始-段落-多级列表-定义新的多级列表,打开“定义新的多级列表” 窗格，在窗格中选择要修改的级别为“1”，将“输入编号的格式”中“1” 的前后输入“第”和“章”，“将级别到样式”选择“标题1”. 同样，选择要修改的级别为“2”，“将级别到样式”选择“标题2”. 按确定，如下图 2.将标题1与标题2样式应用到对应章名与节名，( 注意将章名居中，并删除章和节中多余的编号，如果没有显示标题2，请单击样式右下方对话框指示器-选项-选择要显示的样式，在样式对话框中选取标题2) 2) 新建样式，样式名为：“样式0000”。其中： 字体 中文字体为“楷体_GB2312”， 西文字体为“Times New Roman”， 字号为“小四”； 段落 首行缩进2字符，
段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍； 其余格式，默认设置。 操作步骤： 1.单击开始-样式中的快速启动器，选择左下方新建样式按钮，弹出”新建样式”对话框 2.在”新建样式”对话框中,名称改为”样式0000”，样式基于”正文” 3.单击左下方的格式按钮，分别对字体和段落格式进行设置. 3) 对正文中的图添加题注“图”，位于图下方，居中。要求： 编号为“章序号”-“图在章中的序号”，（例如第1章中第2幅图，题注编号为1-2）图的说明使用图下一行的文字，格式同编号， 图居中。 操作步骤：光标定位在第一图下方题注文字前面，点击引用-题注-插入题注，新建标签,输入新标签名”图”，单击“编号”按钮，选中“包含章节号”复选框，确定。在标签与图片说明文字之间输入空格。并使题注与图都居中（其余图片以同样方式处理）
常用的菌种的筛选方法如下： （1）施加选择性压力分离法 主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和营养的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微生物生长，而不利于其他种类微生物的生存，以达到使目的菌种占优势。而得以快速分离纯化的目的。如可以控制培养时的氧，可将好氧微生物和厌氧微生物分开；通过控制温度，可将嗜热微生物和非嗜热微生物分开；控制pH，可将嗜酸、嗜碱微生物分离等。在分离培养基中也可以加入不同的抗生素或试剂来增加选择性。如在分离放线菌和细菌时，可加入抗真菌抗生素；分离真菌时，可加入抗细菌药物。 （2）随机分离方法 有些微生物的产物对筛选没有直接的选择性指示作用，因此常采用随机分离方法分离。 A、抗生素产生菌的分离抗生素产生菌的分离常用抑菌圈法。实验必须用工具菌：采用抗生素的敏感菌，传统上常用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌。 B、抗肿瘤药物产生菌的分离抗肿瘤药物产生菌的分离常用方法：生化诱导法、SOS生色检测法、DNA修复能力突变株。原理是利用DNA的损伤，微生物发生突变。B1、生化诱导法：将大肠杆菌的lacZ基因连接在λ噬菌体的PL启动子下，当DNA损伤时，诱发λ阻遏物CI分解，PL启动子启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。B2、SOS生色检测法：利用当DNA损伤时，可活化yecA蛋白，进而分解噬菌体的阻遏蛋白，再引起sifA基因启动lacZ基因转录，测定表达的?-半乳糖苷酶活性，来检测药物的存在。 C、生长因子产生菌的分离以氨基酸产生菌为例，介绍筛选方法。首先将待试菌接入加了抗真菌的化合物（如亚胺环己酮）的分离培养基中生长，然后采用影印法，将菌落复印到能支持氨基酸产生菌生长的培养基中，培养2-3天后，用紫外线杀司长好的菌落，再往此平板上面铺一层相应营养缺陷型菌株菌悬液，培养16小时后，被杀死的氨基酸产生菌的菌落周围应有一检测菌的生长圈。 （3）目的微生物分离 A、根据形态筛选突变株 B、根据平板菌落生化反应筛选变株透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、浑浊圈法等。①透明圈法：在平板培养基中加入溶解性较差的底物，使培养基混浊。能分解底物的微生物便会在菌落周围产生透明圈，圈的大小初步反应该菌株利用底物的能力。该法在分离水解酶产生菌时采用较多，如脂肪酶、淀粉酶、蛋白酶、核酸酶产生菌都会在含有底物的选择性培养基平板上形成肉眼可见的透明圈。在分离某种产生有机酸的菌株时，也通常采用透明圈法进行初筛。在选择性培养
WORD综合操作（OFFICE2010）操作要求：
操作步骤 注意点： 1）每次操作前一定要把光标停在要排版的正文前。 2）做错了不要乱删，用撤销按钮，做对一点保存一次，经常保存。 1．对正文进行排版 （1）使用多级符号对章名、小节名进行自动编号，代替原始的编号。要求： *章号的自动编号格式为：第X章，其中X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 *小节名自动编号格式为：X.Y。X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1）。X、Y 均阿拉伯数字序号。对应级别2。左对齐显示。 操作步骤： （1）设置章名、小节名使用的编号。 步骤1准备：将光标置于第一章标题文字前； 步骤1：选择【开始】→【样式】→【标题1】，多级列表设置选择菜单【开始】→【段落】→【多级列表】，点击【定义新的多级列表】按钮。选择【级别】为1；【编号格式】为“第1章”（1由编号样式决定，在1前输入“第”，在1后输入“章”）；点击【更多】→【将级别链接到样式】：【标题1】；（此时不要点击确定） 选择【级别】：2，【编号格式】：1.1，点击【更多】→【将级别链接到样式】：【标题2】，点击【确定】。 步骤2：点击【样式】，修改【标题1】，单击“居中”按钮→【确定】。 修改【标题2】，单击“左对齐”按钮。
步骤3：首先选中各章标题（Ctrl+单击各章标题）；在格式工具栏【样式】中选择【标题1】。 步骤4：首先选中各小节标题（Ctrl+单击各小节标题）；在格式工具栏【样式】中选择 【标题2】。 （如果样式表中没有出现标题2，按Ctrl+Alt+2显示） （2）新建样式，样式名为：“样式”+准考证号后5位；其中： *字体：中文字体为“楷体”，西文字体为“TimesNewRoman ”，字号为“小四”； *段落：首行缩进2字符，段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍；两端对齐。其余格式，默认设置。 （8）将（2）中新建样式应用到正文中无编号的文字。不包括章名、小节名、表文字、表和图的题注、脚注。 操作步骤： 准备：将光标置于正文文字前； 步骤1：选择菜单【开始】→【样式】右下角（弹出任务窗格）→单击左下角【新建样式】； 步骤2：在【新建样式】窗口中输入【样式名称】：样式12345；【样式基准】：正文；【中文字体】为楷体，【西文字体】为TimesNewRoman ，【字号】为小四； 步骤3：单击左下角【格式】，选中【段落】菜单项，在【段落】窗口中设置：首行缩进2字符，段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍；按【确定】返回新建样式窗口。 步骤4：其余格式不要改动，按【确定】按钮结束。在【样式】任务窗格中增加两项“样式12345”。 步骤5：选中正文（注意：不包括表文字不包括章名、小节名、表文字、表和图的题注），
5.1 典型试 题 以下操作中，假设考生的准考证号码为101805126202224，考生文件夹为“D:\resul t\126202224”，如图5-1 所示，读者练习时请自行创建考生文件夹，考试时考生文件夹已建立。
图5-1 考生信息 5.1.1 单项操作题 典型试题1 一、操作要求 ，如表5-1 所示。再使在考生文件夹P a per子文件夹下，建立成绩信息（C J.xls） 用邮件合并功能，建立成绩单范本文件C J_T.doc，如图5-2 所示。最后生成所有考生的成绩单“CJ.doc”。 表5-1 考生成绩表 图5-2 成绩单范本 二、解答
步骤1：打开E xcel 2003 程序，在S he e t1工作表中输入如表5-1 所示数据，然 后保存在考生文件夹Paper 子文件夹(D:\result\126202224\P aper)下，取名。关闭Ex c el2003 程序。 为“CJ.xls” 步骤2：在W o r d2003 中，建立如图5-3 所示表格，然后选择菜单“视图”→“工具栏”选项，在打开的级联子菜单中，选中“邮件合并”复选框，打开“邮件合并”工具栏，如图5-4 所示。 图5-3 考生成绩表 格 图5-4 “邮件合并”工具栏 步骤3：在“邮件合并”工具栏中，单击“打开数据源”按钮，打开如图5-5 所示“选取数据源”对话框，选择考生文件夹Paper 子文件夹(D:\result\126202224\Paper)中的“C J.xls”文件，再单击“打开”按钮。
图5-5 “选取数据源”对话框 步骤4：在打开的“选择表格”对话框中，选中“Sh e et1$”工作表，如图5-6 所 示，再单击“确定”按钮。 步骤5：将光标定位于“同学”前，单击“邮件合并”工具栏中的“插入域”按
Word操作练习题 操作题例题与解析 【例1 】：将以下素材按要求排版。 (1)、将标题字体设置为“黑体”，字形设置为“常规”，字号设置为“小初”、选定“效果”为“空心字”且居中显示。 (2)、将“陶渊明”的字体设置为“楷体”、字号设置为“小三”，文字右对齐加双曲线边框，线型宽度应用系统默认值显示。 (3)将正文行距设置为25磅。 【素材】： 归去宋辞 ——陶渊明 归去来兮!田园将芜胡不归?既自以心为形役，奚惆怅而独悲?悟已往之不谏，知来者之可追；实迷途其未远，觉今是而昨非。舟摇摇以轻殇，风飘飘而吹衣。问征夫以前路，恨晨光之熹微。乃瞻衡宇，栽欣载奔。童仆欢迎，稚子候门。三径就荒，松菊犹存。携幼入室，有酒盈樽。引壶觞以自酌，眇庭柯以怡颜。倚南窗以寄傲，审容膝之易安。园日涉以成趣，门虽设而常关。策扶老以流憩，时翘首而遐观。云无心以出岫，鸟倦飞而知还。暑翳翳以将入，抚孤松而盘桓。 【解析】具体操作步骤如下：
(1)选定“归去来辞”，单击“格式”菜单中的“字体”命令，打开“字体”对话框。将“中文字体”下拉框设置为“黑体”，“字形”选择框设置为常规，“字号”选择框设置为“小初”，选定“效果”框中的“空心字”复选框。 (2)单击“确定”按钮，然后单击“格式”工具栏上的“居中”按钮，将文字居中显示。 (3)选定“陶渊明”，单击“格式”菜单中的“字体”命令，打开“字体”对话框，将“中文字体”设置为“楷体”，“字号”设置为“小三”。 (4)单击“确定”按钮，然后单击格式”工具栏上的“右对齐”按钮，将文字右对齐显示。 (5)再次选定“陶渊明”，单击“格式”菜单中的“边框和底纹”命令，打开“边框和底纹”对话框。在“设置”中选定“方框”；在“线型”下选择双曲线，单击“确定”按钮。 (6)选定正文，单击“格式”菜单中的“段落”命令，打开“段落”对话框。单击“行距”框右端的下拉按钮，打开下拉列表，选择“固定值”，然后将后面的“设置值”设置为25磅。 【答案】 ——陶渊明
工业微生物菌种的分离与筛选 来源：青岛海博 一、微生物工业对菌种的要求 (一)、微生物工业的生产水平由三个要素决定：生产菌种的性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。其中生产菌种的性能是最重要的因素。 （二）、微生物工业对菌种的要求是： （1）菌株高产，在较短的时间内发酵产生大量发酵产物的能力; （2）在发酵过程中不产生或少产生与目标产品相近的副产品及其他产物; （3）生长繁殖能力强，较强的生长速率，产孢子的菌种应该具有较强的产孢子能力; （4）能够高效地将原理转化为产品; （5）能利用广泛的原材料，并对发酵原料成分的波动敏感性小; （6）对需要添加的前体物质有耐受能力，并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用; （7）在发酵过程中产生的泡沫要少; （8）具有抗噬菌体的能力；
（9）遗传稳定性， 二、工业用微生物菌种的来源及选育 （一）微生物菌种的来源 一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品和分离筛选： （1）是根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； （2）从大自然中采集样品分离； （3）从一些发酵制品中分离筛选目的菌株。 当前发酵工业所用菌种总趋势是从野生菌转向变异菌，自然选用转向代谢育种，从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。 （二）微生物工业菌种的分离 1、野生菌株的分离、筛选过程 （1）新菌种分离与筛选的步骤 菌种分离的流程如下： 标本采集→标本材料的预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏 ①采样 采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，
取离地面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。 ②标本预处理 ④纯种分离：采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落。 ⑤高产菌株的筛选：这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，获得适合于工业生产用菌种。还要对菌种进行发酵性能测定， ⑥毒性试验：据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 2、菌种的分离方法 （1）施加选择性压力分离法 主要是利用不同种类的微生物其生长繁殖对环境和 营养的要求不同，如温度、pH、渗透压、氧气、碳源、氮源等，人为控制这些条件，使之利于某类或某种微
操作系统基础 在计算机软件系统中，操作系统是最基础的软件，是计算机系统中硬件和软件资源的管理者和仲裁者，为用户提供了友好的操作及编写程序的接口，并为其它软件提供可靠的支撑平台和运行环境。没有安装操作系统的计算机，普通人员几乎无法使用，即使会用，工作起来的效率也非常低下。 操作系统经历了一个从无到有，从简单到复杂，功能不断完善的发展过程，并且仍在发展中。现代计算机系统的功能发挥和效率的提高依赖于操作系统。 1 操作系统的概念 计算机系统由硬件系统和软件系统共同组成。硬件系统构成计算机系统赖以工作的物理实体，没有安装任何软件的计算机称为“裸机”。利用“裸机”进行工作是困难的，人们在它之上配置若干软件构成了计算机系统。软件指的是在计算机上运行的各种程序、要处理的数据以及各种相关文档的总称。其中程序是指为解决某个问题，人们事先设计好的计算机能够执行的指令序列；数据是信息的表现，是计算机能处理的某种数据结构的集合；文档是在程序开发以及维护过程中所形成的相关图文资料。 1.1 操作系统的分类 在形成和发展中，基于不同需求目的，产生了多种不同特征的操作系统。按不同标准，对操作系统的分类也不相同。 ①按系统工作方式可分为：批处理操作系统、分时操作系统、实时操作系统。 ●分时操作系统是指将计算机系统资源按时间片来为多个终端用户轮流服务，及时地响应每个用户 的服务请求，由于每个时间片很短，每个用户感觉上主机是在为他一个人服务。 ●实时操作系统能够在限定时间内对输入的数据进行快速响应处理，通常它可分实时控制系统和实 时信息系统。实时系统具有高可靠性、及时性和第一页较少人为干预等特征。 ②按资源共享可分为：单任务操作系统、多任务操作系统、单用户操作系统、多用户操作系统。 ●单任务操作系统的主要特征是在一个计算机系统内一次只能运行一个用户程序，该程序独占系统 的所有软、硬件资源。 ●多任务操作系统则在系统内可同时运行多个用户程序，它们共享系统中的各种资源。 ●单用户操作系统是指同一时刻只能有一个用户登录到计算机系统中。 ●多用户操作系统则允许同时有多个用户登录到系统。 ③按计算机体系结构可分为：单机系统、多机系统、网络系统、分布式操作系统、嵌入式操作系统。 ●单机系统和多机系统是从系统是否支持多处理机进行区分的。 ●网络操作系统能提供网络通信和网络资源共享功能，它可以协调各主机上任务的执行，为用户提 供网络管理和统一的网络软件接口。 ●分布式操作系统是在计算机网络基础上发展起来的，它可以将任务分布到网络中不同计算机系统 上进行处理，并能协调平衡网络中的不同处理机的负载，由多个处理机协同完成任务。 1.2 常见操作系统 1）磁盘操作系统DOS DOS（Disk Operating System，磁盘操作系统）是微软公司20世纪80年代开发的，其早期版权曾卖给IBM公司，主要安装在IBM的个人计算机上，是一个单用户单任务的操作系统。它有着优良的文件管理功能，但是受到Inter x86体系结构的限制，而且存储管理功能较弱，目前已基本淘汰。
正文容已输入，按要求对该文档进行以下设置：章样式及自动编号、节样式及自动编号、新建样式并应用、对图表添加题注并设置交叉引用、自动生成目录及图表索引、分别添加奇偶页页眉页脚等。 按下列要求对文档“DWord.docx”进行设置。（注意：以题目要求为准，注意及时保存。） 首先“ctrl+A”选中全文，将全文样式修改为“正文”样式。 1、对正文（指的是除了目录索引等外的容）进行排版，其中： 1)使用多级符号对章名、小节名进行自动编号，代替原始的编号。要求： ?章号的自动编号格式为：第X章（例：第1章），其中：X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 ?小节名自动编号格式为：X.Y，X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1）。 X，Y均为阿拉伯数字序号，对应级别2，左对齐显示。
④“对齐位置”值设为“0” ⑤“将级别到样式”选择“标题1” （若没有显示“将级别到样式”，请先单击对话框右上角的“高级”按钮）如图2所示。 图2 章节多级符号设置 c)★不要关闭图2“章节多级符合设置”对话框，继续设置小节名的样式： ⑥先删除“编号格式”中原有容 ⑦“级别”选择“2” ⑧“前一级别编号”选择“级别1”；在“编号格式”的“1”后输入“.”；“编号 样式”选择“1, 2, 3, …”，“起始编号”选择“1” （此时“编号格式”显示“1.1”，注意此处2个“1”都是域结果，灰色底纹显示） ⑨“对齐位置”值设为“0”；“将级别到样式”选择“标题2”；勾选“在其后重新 开始编号”，并选择“级别1” ⑩按“确定”按钮后，“样式和格式”对话框样式显示如图4所示。
f)修改标题1和标题2的样式：居中显示和左对齐显示，单击“标题1”右侧下拉列 表中的“修改” 图5 居中显示图6 左对齐显示 2)新建样式，样式名为：“样式”+号后5位，其中：
Word操作题要求及操作步骤 文档1 在考试文件夹（C:\zrexam）中，打开“word01.doc”文档，按要求完成下面操作： 1、给文章加题目“反坦克导弹方队”，并设置为：黑体、三号、居中、红色 2、将正文（不含文章的题目）进行段落设置：首行缩进2字符、1.5倍行距 3、在正文开始处插入C:\zrexam 文件夹中的“反坦克导弹方队.jpg”图片，设置图片的大小为高度6厘米，锁定纵横比，环绕方式为“四周型” 4、将页面设置为：上、下、左、右页边距均为2厘米 5、在正文最后插入一个2行3列的表格，将第一行合并单元格并输入：特点，第二行分别输入：射程远、威力大、命中率高 6、将正文中所有的“Tank”全部替换为“坦克” 7、保存文档并退出 步骤：1、光标指向第一行最前面，输入“反坦克导弹方队”，并选中，从“字体”2、栏中选中“黑体”、三号字（或从菜单栏中选择“格式”→“字体”中的黑体、三号字），选择“居中”，字体颜色选“红色”。 2、光标指向正文第一个字前，按住鼠标左键向下拖动至最后，即将全文选中，从菜单栏中选择格式中的段落，从特殊格式中选择首行缩进（默认2字符），行距中选择1.5倍行距。 3、光标指向第一行第一个字前，从菜单栏中选择“插入”→“图片”→“来自文件”→“对应图片”，选中“图片”，并击右键，选择“设置图片格式”，从“大小”中设置“高度值”，去掉“相对原始图片大小”的勾选框，从“版式”中选择环绕方式为“四周型”。 4、点击菜单“文件”→“页面设置”，从页边距对话框中分别设置“左右上下”页边距数值。 5、光标指向正文最后，选择菜单中的“表格”中的“插入”→“表格”，根据对话框设置对应数值后确定，选中表格中第一行的所有列，并击右键，选择“合并单元格”后输入要求文字，在第二行表格的对应单元格中分别输入要求文字。 6、点击菜单中的“编辑”选中相“替换”，在查找内容后输入“Tank”，在“替换为”后输入坦克后确定。 7保存文件退出。 文档2 在考试文件夹（C:\zrexam）中，打开“word02.doc”文档，按要求完成下面操作： 1、将正文（不含文章的题目）文字设置为：仿宋GB-231 2、小四、蓝色 2、将正文中的第二自然段跟第三自然段互换 3、在正文最后插入C:\zrexam 文件夹中的“女民兵方队.jpg”图片，设置图片的大小为高度8厘米，锁定纵横比，环绕方式为“紧密型” 4、在正文前插入艺术字“女民兵方队”，艺术字选择第二行、第五列所示式样，字号为20，