组培的兰花能变老种么，组培兰花的优点和
缺点介绍
一、能变吗
不能变成老种。老种是指完全在自然环境中繁殖得到的后代苗，它能够较好地保持原种的性状。而组培苗是用母株，利用人工培养在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整的植株。所以组培苗不能是成为老种。它两虽然都是利用母株进行繁殖的，但是区别还是比较大的。组培的根会比老种的根白、细，还比较光滑。
二、组培的优缺点
1.优点：组培兰花可以让一些珍贵的兰花得到大量的繁殖。除了价格上较为便宜，可以让很多名贵品种的兰花走入平常百姓家。还能够满足市场上对兰花苗日益增长的需求量，不然仅靠野生花苗是远远不能满足大众的需求。其次，组培兰花可以集中培养出完全一模一样的兰花，其花色和叶形都不会有所差别。另外，通过组织培养可以进行脱毒，使之成为无毒的种苗。
2.缺点：养殖难度较高。因为组培兰花是在无菌环境中进行培养的，温度和湿度都是经过严格把控的。所以它的抵抗能力比较差，对温湿度要求比较高，不耐病害。也就是说要比野生兰花，比野生兰花要娇气得多。组培兰花的花品容易退化，再者叶片会
短一些，还非常不容易开花。组培的兰花生长不稳定，容易出现叶短且薄、不容易开花、倒苗、花香比较清淡等问题。另外，组培兰花的花色叶形都不会有变动，缺少个性之美。而野生兰花很少有完全相同的，即使同山同种的兰花，由于生长地的不同也会有稍微的差异。
兰花组织培养技术 摘要：在适宜的条件下，将兰花植株的外植体在无菌环境中应用人工培养基，通过外植体的采集与处理、培养基的制作、外植体的接种、继代增殖以及驯化移栽等操作技术，可在短期内获得大量幼小的无病毒植株，从而达到增殖扩繁的目的。组织培养技术是经济有效快速繁殖优良品种的方法，也是产生脱毒苗的重要途径。 关键词：组织培养兰花外植体试管苗 花属兰科多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。 兰花在植物分类学上属于单子叶植物中的一个科，为多年生草本植物，附生、地生或腐生。兰花根呈圆柱状，属肉质组织，茎很短，高度约为2～3cm，兰叶大多叶边全缘，有的略有锯齿。其花属于不整齐花范畴，总状花序。兰属植物的果实为蒴果，呈三角或六角形，俗称“兰荪“。 一、无菌培养物的建立 （一）培养容器的洗涤及培养基的制作 1.培养容器的洗涤 容器的洗涤是否干净直接影响组织培养的成败，为保证培养材料在瓶内生长健壮，在培养前期一定要对容器进行彻底的洗涤与灭菌。以达到“瓶壁锃亮、水膜均匀，不挂水珠”为标准。洗涤时用洗衣粉水洗刷，再用清水冲洗3～4次，干燥后备用。 2.培养基的制作 培养基是植物组织培养的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到外植体的生长于分化。组培快繁中最常用的培养基主要是MS培养基。母液要根据药剂的化学性质分别配置，一般配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类母液。其配置方法是先进行大量元素的配置，称量时应注意多余的药品不能回放在瓶中，应做其它处理。电子天平在使用时先对其进行调平，然后进行微量元素母液、有机物母液的配制。 当MS母液配好以后，则可进行培养基的制作，继之对琼脂和蔗糖进行称取、溶解，琼脂呈现半透明状时将糖加入容器中溶解，再加入事先吸取好的各类母液混合均匀后转入1L容量瓶中对其进行定容，然后根据培养基的要求对PH进行调整（PH值控制在5.6～5.8测定不得少于3～4次）。进行分装时，一般以培养瓶的1/4～1/3为宜，分装后立即进行灭菌。
2006,35(1):71-74. Subtropical Plant Science 蝴蝶兰组织培养研究进展(综述) 郑玉忠，张振霞，陈泽华 (韩山师范学院生物系, 广东潮州 521041) 摘要：本文从蝴蝶兰外植体的选择、不同基本培养基、激素及添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治以及生根壮苗方法等，概述蝴蝶兰组培快繁方面的研究进展，为其组培技术研究提供参考。 关键词：蝴蝶兰；组织培养；原球茎 中图分类号：Q943.1；S682.31 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2006)01-0071-04 Progress in Tissue Culture of Phalaenopsis spp. ZHENG Yu-zhong, ZHANG Zhen-xia, CHEN Ze-hua （Department of Biology, Hanshan Teachers College, Chaozhou 521041, Guangdong China） Abstract: The research progress of tissue culture of Phalaenopsis, including the effects of explants sources, culture mediums, hormones and nutrition compositions on multiplication and differentiation of protocorm-like body, the inhibition on browning of explants and methods of rooting and seedling strengthening before transplanting, are reviewed. Some reference materials are also provided for further study in tissue culture of phalaenopsis. Key words:Phalaenopsis spp.; tissue culture; protocorm-like body 蝴蝶兰（Phalaenopsis spp.）属热带或亚热带的兰科植物，其花形奇特，姿态优雅，色彩鲜艳，花期长久，素有“兰花皇后”之美誉，观赏价值极高，深受人们的喜爱，国内外市场的需求量越来越大。蝴蝶兰的传统繁殖方式为分株繁殖，繁殖系数低，速度慢，不能满足日益增长的市场需求。因此，研究和开发蝴蝶兰具有重要的意义。 组织培养是蝴蝶兰快速繁殖的有效途径，主要通过两条途径：一是利用种子无菌发芽，二是从离体器官诱导产生原球茎，通过原球茎的增殖培养，得到大量幼苗[1]。早在1949年，Potor[2]利用无菌培养技术成功地促使蝴蝶兰花梗上的休眠芽发育成完整植株，该方法经过其他研究人员改进后，曾一度成为蝴蝶兰的主要无性繁殖方式。1974年，Intuwong等[3]利用蝴蝶兰茎尖诱导产生了原球茎状体，再由原球茎分化成植株，为实现蝴蝶兰工厂化生产奠定了基础。原球茎是一类呈珠粒状的幼嫩器官，在兰科植物中多以这种器官发育、增殖和分化。 蝴蝶兰的组织培养中有几个关键的时期：原球茎的诱导、原球茎的继代增殖、壮苗的培育。根据这几个重要的时期及其组织培养的外界条件，国内外研究人员对蝴蝶兰组织培养进行了广泛的研究，并取得了一定的成效。本文就近年来蝴蝶兰组培快繁技术的研究现状进行综述，包括外植体的选择，不同基本培养基、激素、添加物对其增殖与分化的影响，外植体褐变的防治，以及生根壮苗的方法等。同时展望未来的发展趋势，为该研究领域今后的发展提供有益的信息。 1 外植体的选择 诱导蝴蝶兰原球茎采用的外植体主要有根段[4]、花梗苗根尖[5]、花梗腋芽[6]、茎尖[7]、叶片[8-10]、胚 收稿日期：2005-08-03 基金项目：韩山师范学院青年基金项目（QN200503）资助 作者简介：郑玉忠(1977-), 男, 广东潮阳人, 硕士, 从事植物生物技术研究。 注：张振霞为通讯作者。
高等教育自学考试 毕业论文 论文题目：兰花组织培养技术 作者姓名：党莎 专业：应用生物技术 主考学校：甘肃农业大学 准考证号： 440509115003 指导教师姓名职称： 甘肃省高等教育自学考试办公室印制 2010年09月20日
论文标题：兰花组织培养技术论文标题：Orchid tissue culture 论文作者：党莎 论文作者：DANG Sha
目录 摘要 (1) 关键词 (1) 英文摘要 (1) 1.无菌培养的建立 (1) 1.1组织培养的发展史及兰花的形态特征 (1) 1.2培养容器的洗涤及培养基的制作 (2) 1.3外植体的采集及接种 (3) 2.继代增殖 (3) 2.1试管苗生根壮苗培养 (4) 2.2试管苗的驯化移植 (4) 3.影响兰花原球茎增殖的因素 (4) 3.1基本培养基成分对茎增殖的影响 (4) 3.2激素的影响 (5) 3.3切割方式对其影响 (5) 3.4活性炭 (5) 3.5含糖量及培养基硬度的作用 (5) 3.6继代周期的影响 (5) 4.影响兰花生根和移栽成活的因素 (5) 4.4活性炭有否对兰花生根的影响 (5) 4.2生长调节物质的不同种类及浓度比例的影响 (6) 4.3试管苗的生理状况 (6) 4.4无机盐浓度 (6)
5.兰花组培的应用 (6) 5.1快速繁殖优良品种 (6) 5.2建立无病毒株系 (6) 5.3种质资源的保存与交换 (6) 6.兰花病虫害防治 (6) 6.1兰花主要害虫及有害动物 (6) 6.2兰花主要病害 (6) 7.结论 (7) 参考文献 (8) 致谢 (9)
兰花组织培养技术 党莎 （甘肃农业大学生命科学技术学院应用生物技术 730070） 摘要：兰花属兰科（Orchidacere）多年生草本植物，中国兰花为兰科属中的地生兰。其香味怡人，花色淡雅，品种丰富，素有“花中君子”之称。具有很强的观赏价值和经济价值，深受人们的喜爱。如春兰、建兰、墨兰、寒兰等都是珍贵的观赏兰。此外，其也是目前世界上栽培较广的切花材料之一，兰花的切花生产，需要大批量的种苗，要获得优质高产，兰花种苗必须具备种性一致，生长齐一，长势旺盛的特点。在种苗生产上运用最广泛的是组培快繁和分株。生产实践证明，运用组织培养快繁技术生产种苗，其长势旺盛，品种复壮，抗病性强，切花质量好，对加快优良品种的培育，挽救珍惜濒危种类等起到十分重要的作用。关键词：组织培养；兰花；养护管理 Orchid tissue culture DANG Sha （Applied Bio-technology, College of Life Sci. &Tech., Gansu Agricultural University, 730070） Abstract: The orchid is Orchidaceae (Orchidacere) perennial herbs, Chinese orchid is an orchid in terrestrial orchids. The scent is pleasant, elegant colors, variety, known as "Gentleman flowers," said. Highly ornamental value and economic value, very popular. Such as Chunlan, Cymbidium, Cymbidium, Cymbidium orchids and other ornamental and precious. In addition, it also is the world's cultivated a broader one cut material, orchid cut flower production, require large quantities of seed, to obtain high-yield, species of orchid seedlings must have consistent growth and homogeneity, the characteristics of growing strong . In the seed production is the most widely used tissue culture and ramet. Practice shows, the use of tissue culture micropropagation technology to produce seedlings, the growing vigorously and rejuvenation varieties, disease resistance, flower quality, and speed up the cultivation of improved varieties, save endangered species such as value plays an important role. Key words: tissue culture; orchids; conservation and management 1.无菌培养的建立 1.1组织培养的发展史及兰花的形态特征
蝴蝶兰组培研究进展 张丹桂 201310010125 集贤创新实验131班 蝴蝶兰(Phalaenopsis spp.)为兰科多年生附生草本，花形态优美似蝶，枝叶繁茂，花期持久，观赏价值极高，在热带素有“兰花皇后”的美誉。蝴蝶兰是目前兰科植物中栽培最广泛的种类之一，同时也是室内绿化美化的新型观赏花卉，国内外市场对其需求量越来越大。但是，由于蝴蝶兰是单茎性气生兰，植株很少发育侧枝，很难采用常规分株方式进行无性繁殖；其种子也不含胚乳或其他组织，在自然条件下萌发率极低，因此无法利用播种方式进行有性繁殖。而采用组织培养方法进行种苗繁殖是目前蝴蝶兰大规模生产的唯一途径。本文概述了近年来蝴蝶兰的组织培养与快繁技术的研究进展。 外植体繁殖途径糊蝶兰组培的过程一般分为外植体的诱导、继代增殖、壮苗、生根、健化移栽5个阶段。目前，国内外蝴蝶兰组培研究主要集中在外植体的选择、基本培养基选择、植物激素种类和配比浓度、褐变防治措施等方面。 1.外植体选择及培养方法 关于糊蝶兰组培外植体选择方面的报道较多，不同外植体各有优缺点。常见的用作组培的外植体有种子（曾宋君,彭晓明,张京丽,等.蝴蝶兰的组织培养和快速繁殖[J].武汉植物学研究,2000,18(4):344- 346. 章玉平,刘成运,胡鸿钧,等.蝴蝶兰无菌萌发技术的研究[J].武汉植物学研究,2004,22(1):82- 86.）、叶片（李成慧,蔡斌,单丽丽,等.应用正交设计法探讨蝴蝶兰叶片类原球茎的诱导[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版),2004,25(2):76- 78.）、花梗节间（鲁雪华,郭文杰,徐立晖,等.蝴蝶兰花梗节间段培养繁殖的初步研究[J].园艺学报,2002,29(5):491- 492. 刘福林,李淑萍.蝴蝶兰花梗的组织
国兰组织培养技术 中国兰新芽生长期正值南方高温高湿的多雨季节，杂菌繁衍猖獗，土壤、介质中带菌尤为严重。供接种取样的兰盆介质应尽少带杂菌，不施有机肥，放置在透光避雨处，当新芽初露时即让幼芽裸器上面。取6～13cm长的新芽，从植株基部切高，用刮刀除去根、赃物和外包叶2～3片，充分洗净后将材料再切取2～3cm长，在10％次氯酸的药液中消毒10分钟。如带菌严重，应用0.I1%升汞和饱和漂白粉上清波交叉消毒。灭菌后用无菌水冲洗数次，再放到灭菌滤纸上吸干水许，然后在解剖镜下无菌操作利取茎尖和腋芽。如果以去病毒为目的，所剥取的茎尖应在O.2mm以下，否则可剥取2mm以上茎类，带2个叶原基，有利于成活。 （一）、原球茎的诱导 兰花各个部分的离体组织部能诱导形成原球茎，再经分化培养形成植株。一旦形成原球茎后，就能不断分割继队培养增殖起来，也就是建立了无性繁殖系。兰花的原球茎生命力强，遗传性状稳定，对快速繁殖及种质资源保存极为有利。 外植体接种后放置在23一25度的黑暗条件下培养，1～2十月后可分比出1至数个乳白色的原球茎，在解剖镜下观察类似桑果形状的园球突起，以后转绿，再经培养易呈根状茎（或呈树枝状的丛生形），。 影响兰花原球茎诱导成功的因素有： 1、品种的影响：不同品种由于遗传类型、内源激素和多酚类物质含量等囚素的差异，诱导启动的难度也不尽相同。 2、培养基的影响：各品种对不同培养基的适应程度不一样。春兰类品种以White＋BA；＋NAA5＋CM8.5％和B11+BA＋NAA2为好。“夏蕙”、“秋素”等则以MS＋BA0.5＋NAA1十活性炭0.5％的培养基为好。初步观察，春兰品种适应以无机盐浓度和氨态氮含量低，而生长素含量高的培养基。“夏蕙”、“秋素”等品种则适应无机盐浓度较高、生长素含量较低的培养基。 3、新芽氏度及材料类别的影响：茎尖无论启动率和成功率均高于测芽以9～13公分的新芽诱导，成功率最高。 4、诱导启动后褐变死亡的影响：国兰品种的茎顶接种后成活并膨大呈桑果状原球茎因为启动，成功率尚好，但启动后容易褐变死亡，是国兰组培失败的原因之一。据四川农科院生物技术研究所的资料，褐变死亡数几乎占3／4。由于国兰芽端具有较多的多酚氧化酶，经茎项培养易褐化而死亡，如采用较大的外植体接种，降低培养温度、暗培养、尽量减少伤口面以及在培养基中附加褐变抑制剂（常用抗氧化剂，如芸香苷，柠檬酸等），或配合应用活性炭等，有减轻褐变死亡的效果。 （二）、兰科植物多通过原球茎途径分化形成植株 热带兰原球茎多呈园球状，国兰的原球茎则呈丛生状（根状茎）。原球茎形成阶段是兰花大量繁殖的有利阶段，是快速繁殖，提高增殖率的重要环节。茎尖，侧芽接种3～6个月后，根状茎形成时即可分割继代，增殖培养基以W和B11为基本培养基，附加NAA1～2 的液体培养基为宜。放置在漫转速转床上加光培养（1～2转／分），每隔15天更换一次培养基，连续继代3～4次后，又转入相同成分，附加有活性炭（0.3％）和柠檬酸（500mg/1）的固体培养基，每月继代一次。液培、固培交替进行。增殖培养中，原球茎的分割不可太小；培养群体不宜太少；培养液则不可过多；继代培养时间不可太长，否则原球茎生长不良，甚至死亡。原球茎可以不断地再分割、增殖，这样就建立了无性系。国兰原球茎的继件次数和时间还有待探索，但从已继代3～5年的原球茎来看，仍保持正常的增殖和分比能力。
中国兰花的快速繁殖 组织培养是先进的无性繁殖方法。取用植物器官或组织的一小部分，脱离母体而加以培养，经过诱导和分化，使它再生成独立的新植株。也称为外植体培。 早在1902年，德国植物学家哈巴兰特（Haberlandt）预言：“植物细胞具有全能性，每个细胞都像胚胎细胞那样，可以经过体外培养成为一个完整的植株。”在这个假说指引下，法国科学家戈第勒（Gautheret）和诺贝库特（Nobecourt）用小块的胡萝卜根，于1938年成功地在试管中用培养基培养出愈伤组织。1939年，美国科学家怀特（White）用烟草茎段形成层进行组织培养和继代培养，也获得成功。他们的工作为植物细胞和组织培养技术的发展奠定了基础。1949年，美国斯库格等又从愈伤组织中分化出幼苗来，培养出了真正的试管植物。从此之后，组织培养的技术，不断创新改进，在实验上和应用上都获得日新月异的进展。 我们在学校开设的植物组织培养选修课上，进行了兰花组培的实验。下面谈谈自己在实验中的一些心得。 兰花的茎尖组织培养，最早是法国人葛雷尔（Morel）在1960年获得成功的。他利用茎尖培养的目的是想除去兰属植物上的病毒，他得到了无病毒的幼苗。他发现兰属茎尖培养，可逐渐增大而形成类原球茎体，与兰花胚胎正常发育相似、经过分割，重复培养可以大量增殖、按照理论计算，l个外植体在1年之内可产生400万株苗之多。从此，组织培养技术被应用于兰花的繁殖，刀多年来形成了兰花的工厂化、商品化的生产。目前，兰花的各个部位，各个器官，即根、茎、叶、芽、花序、幼胚等都可以作为外植体进行培养。 组织培养要有必要的设备和比较高的技术措施。首先要有培养室、无菌接种室及各种培养用具、用品等。在培养时要先配制培养基，剥取外植体，然后消毒、接种、转移，最后试管苗移植等，都需要比较复杂和细致的技术。现将组织培养的方法简介如下。 培养基的配制,培养基是用各种不同成分和剂量的元素，加上各种维生素、激素等制成。兰花种类不同，培养基的成分也有所不同。大多数的培养基是用固体或半固体的，也有用液体培养的，在液体中培养则需特殊的通气方法，如常用的离心机或转动机，不停地将培养基转动。 培养基须包括矿物质、糖、维生素及生长激素。在实际中用得最多的是MS
兰花的组织培养 张婷婷20081070175 摘要: 对兰花的组织培养进行了综述。着重阐述了兰花组织培养中组织培养程序、外植体的选择、培养基与激素的选择、培养方式和培养条件的研究进展情况。 关键词: 兰花; 组织培养; 外植体; 培养基 兰科(Orchidaceae) 是有花植物中最大的一个科, 约有800 属, 25 000～30 000 种, 广泛分布于全球各地。兰花是整个兰科植物的总称, 常见的有春兰、蕙兰、建兰、蝴蝶兰、石斛、卡特兰, 文心等, 其花具有极高的欣赏价值和经济价值。有些种类如天麻等则具有极高的药用价值。兰花的组织培养始于20世纪60 年代。Morel[1]采用大花蕙兰的茎尖, 在含有细胞分裂素的KC 培养基上进行培养, 茎尖分生组织膨大形成原球茎, 并分化出根和叶, 首次获得兰花无病毒小植株。目前大约已有60 余属数百种兰花可以用组织培养的方法进行繁殖。 1 组织培养程序与外植体选择 种子、胚形态建成途径 用于兰花离体繁殖的外植体材料很多, 通常选择有新芽、幼叶、茎尖等。茎尖是最早用于兰花快速繁殖的外植体。大花蕙兰(Cymbidium) 、嘉德丽亚兰(Cattleya) 、石斛兰(Dendrobim) 蝴蝶兰( Phalaeanopsis) 、文心兰(Oncidium) 等首先在茎尖培养中取得成功[2]。侧芽的应用也很广泛, 一般认为带1～2 个叶原基的茎原椎成活率高, 中间部位侧芽成活率及生长率较高。但因为有的兰花只生一茎,摘取茎尖就有可能丧失母株, 因此, 人们在更大范围内寻找外植体。用叶片作外植体可以减轻或避免对母株的伤害。大多数以叶片为外植体的成功报道是取试管苗的幼叶为培养材料, 从成熟植株上取幼叶为外植体培养成功的报道不多。有研究指出: 蝴蝶兰试管苗幼叶原球茎发生率可达90%, 而成熟叶对诱导反应极弱[。这可能是由于成熟植物组织向培养基中释放高浓度的抑制生长物质, 严重影响兰花组织的存活。现已报道的蝴蝶兰外植体材料各异, 不同的外植体其诱导的效率也不同 表1 不同外植体原球茎的诱导效率 外植体最高诱导率/% 特点( 见参考文献) 子100 产生性状分离, 可用于育种 胚80 产生性状分离, 可用于育种 花梗节间88 保持母株性状, 取材受时间限制花梗腋芽94 保持母株性状, 取材受时间限制[ 叶片( 未切割) 90 保持母株性状, 对母株伤害不大
兰花组培苗的培养与管理 在养植兰花组培苗前，首先要了解什么是组培苗，组培苗是运用现代植物学的科学技术，利用植物的种子、芽或植物的其他组织，在特定的条件进行植物的复制，复制出的苗称为组织培养苗，一般称为组培苗、克隆苗，因组培苗通常在试管内繁殖所以又称试管苗。组培苗在某个植物的大量繁殖、选种、脱毒等方面具有很大的优势，在农业、花卉等领域有着广泛的运用。兰花的组培苗最早７０年代在日本得以应用，兰科中应用最为广泛的是洋兰和大花蕙兰，在春兰、寒兰、墨兰、建兰中也有较多的应用，以春兰占多，蕙兰虽也进行了组培的尝试，但由于技术问题未大量组培，我所见到的只几个实验品种，且移栽成活率很低；兰花的组培主要是通过二个途径：一是利用兰花的种子进行繁殖，即利用兰花成熟朔果内的种子繁殖；二是实验室切取兰花的芽点进行繁殖。现今世界上进行兰花组培的主要是在韩国、中国的台湾及大陆的几个兰花组培单位，大家比较熟悉的是四川的同心公司，各兰花组培单位组培兰花的品种都各有侧重。 一、为了消除部分兰友对组培苗的误解和与杂交苗的混淆，下面我先谈谈组培苗与其他种类苗的关系。 1、兰花组培苗与自然繁殖苗的关系。从植物的特性上说应是同样性质的兰花，自然界的兰花繁殖既有种子在兰花生长地特定环境下发芽生长成龙根体，再在龙根体上长出实生苗，又有实生苗分孽出芽长成苗，这是兰花在自然界的二种繁殖方法--有性繁殖和无性繁殖；组培苗也是通过对兰花种子和芽点发芽，生成龙根体，让龙根长出实生苗的过程，只是通过实验室处理过的兰花种子发芽率远远高于自然界，然而，采用种子亲本繁殖的苗其出芽后的苗品种特性稳定性低于切芽组培，在种子繁殖时生成的苗变化较大，这也是通过种子繁殖选种的一个方法，既会有优于原品种的兰花，也会有不及原品种的兰花，要经过品种的筛选，因此要有与原品种一样的组培苗时多数采用芽点的组培，芽点组培原理与我们的分苗没什么区别，但相对芽点的组培难度非常高，组培出的实生苗既兰花的幼苗，通过移栽成和自然繁殖的兰花苗一样特性的兰花，组培的幼苗较自然状态下繁殖的苗要难养些，原因在下面会提及，但养成成苗后与自然养殖的苗并无区别 2、兰花组培苗与返销苗的关系。这二者的关系包含和被包含的关系，即组培苗是返销苗的一部分，单独一段作介绍是想说明返销苗一事，返销苗是指中国的兰花品种渡过洋出过国，培养后又从国外和台湾地区返销到中国大陆的兰花，这些返销的兰花中既有早年组培苗养成的商品苗，也有原始种自然环境下养殖和采用科学管理快速繁殖的苗，这些兰花的品种特性也没变，最早返销进来的商品苗的品级都很高，所以也比较好养，几个经典的老种如绿云、西神等，由于受追捧，所以组培的较多，返销到大陆种养几年后是分不清哪是返销苗哪是原生种，返销苗就兰花的特性来说与未出过国的原生种是一样的，因此，兰友们也不要迷信原生种，有些销售者所谓的原生种多数只是早年的返销苗，其中很大一部分就是组培兰花，只是你没看到她小时组培的情形，兰商称卖的是"原生种"，只是想利用兰友对原生种的情结多卖几个钱而已，兰友在进苗时主要看苗的状况和先期的培养方式即可。因此兰花的组培苗是兰花返销苗的一部分，返销苗又是兰友现
兰花室内组培及快繁 兰花的繁殖一般可通过分株进行，但繁殖系数低，现在洋兰的商业化生产都是通过试管育苗进行生产，一般可分为种子播种生产实生苗和组织培养生产分生苗两种，各有千秋，下面就其生产流程和应用进行一些说明： 一、兰花的种子播种：兰花的果实俗称兰荪，其中有数千到数百万粒种子，因种类不同而异，兰科植物种子的发育较特殊，种子成熟后没有胚乳，需与某些真菌共生，由真菌提供营养才能萌发，在自然条件下，萌发率很低。早期通过人工接种真菌，可以使兰花种子萌发，但技术烦琐，难度较大，后来发现在人工培养基上，不需真菌共生，如果营养成分合适，兰花种子也能萌发生长，一般常用的培养基有KC，VW和京都等，其中京都配方采用花宝花肥为主要的无机成分，配制方便，较适合兰花发烧友使用。兰花的种子培养是进行兰花杂交育种的必要手段，也是兰花种苗生产的重要技术，如国内目前的蝴蝶兰种苗生产，多数是实生苗，与分生苗相比，实生苗往往不能保证性状的完全一致，因此对亲本的要求就非常高，好的亲本其后代的分离不会很大，好花率可达80%以上。实生苗的生产相对简单，迅捷，以蝴蝶兰为例，由一个好的荚果，播种后两个月左右可产生数万个小原球茎，经过一次分瓶后，就可进行育苗，大约3个月后得到大量可移栽的试管苗。 二、组织培养：上世纪60年代首次成功进行了兰花的组织培养，目前已有数十个属的兰花进行了组织培养，通过组织培养及克隆技术进行生产的种苗具有与母本完全一致的性状。热带兰花的组培快繁一般通过诱导产生类原球茎（PLB），通过PLB增殖进行；其起始材料以茎尖分生组织最佳，花梗上的休眠腋芽也是最常用的材料之一，一些单轴生长的兰花如蝴蝶兰，如取茎尖，往往会失去母株，取花梗就没有这样的担心。 在植物的组织培养过程中常常会发生体细胞无性系变异，这可以做一种育种手段，但对于商业生产而言却是不利的，所以通过PLB增殖时要十分注意去除形态不正常的组织。目前台湾的蝴蝶兰分生苗生产部分采用丛生芽的方法生产，即通过花梗诱导腋芽生成小芽，通过小芽诱导丛生芽并不断切割增殖，这样生产的种苗基本可以保证与母株性状的一致。但生产成本高，周期特长，往往需要拥有一定数量的母株来采取花梗。其实就兰花商品生产而言，通过PLB进行增殖生产分生苗是最有效率的，通过控制，其变异率可以降到非常低的，可以忽略不计的水平。另外幼嫩的花梗也是一种很好的起始材料，可以诱导PLB或不定芽。国兰的组织培养近年有了很大的发展，春兰、墨兰和建兰等传统名兰都可以进行克隆了，这内地生兰的组培与热带兰不同，是通过诱导产生根状茎，通过根状茎进行增殖，在根状茎前端生成小苗。也有愈伤组织诱导的报道，但都要通过根状茎的发生阶段。
收稿日期:2008-08-04;修回日期:2008-09-21 作者简介:丁秋露(1986-),女,专业方向植物组织培养和分子生物学,E m ai:l q i u l u207@sohu co m;通讯作者:赵旵军,E ma i :l han j unzhao @163 co m 。 基金项目:教育部科学技术研究重点项目(206066);安徽省教育厅自然科学研究重点项目(2006K J 061A) doi 10.3969/j issn 1008-9632.2010 02 076 兰花组织培养和分子生物学研究进展 丁秋露1 ,赵旵军 2 (1 安徽师范大学分子生物学及生物技术研究所;2 安徽师范大学生命科学学院,芜湖241000) 摘 要:兰科植物是开花植物中最大的家族之一,其科研和经济价值越来越受到全世界的重视。兰花的组织培养近年来发展迅速,对兰花组织培养中原球茎的诱导和培养基选择的国内外研究进行了综述;并对近年来应用分子标 记、转基因等分子生物学技术研究兰花的遗传多样性、系统分类和基因功能进行综述。关键词:兰花;组织培养;分子生物学;转基因中图分类号:Q 943.1 文献标识码:B 文章编号:1008-9632(2010)02-0076-04 Progress i n orchi d tissue culture and m olecular biology D I N G Q iu lu ,Z HAO H an jun (1 The I nstitute ofM olecular B iology and B i otec hno l ogy ,A nhui Nor m al U ni versity ;2 Co llege of L ife Scie nce ,A nhu iN or m al Un i versity ,Wuhu 241000,Chi na) Ab stract :O rch i d is t he one o f t he larg est flo w er i ng plant f am ilies T he value of orch i d i n sc i entific research and econo m y has been pa i d m ore attenti on O rchi d tissue cu lt ure has been deve l oped quick l y T he prog ress i n orch i d tissue culture such as the o ri g in of pro t o cor m and cu lture mediu m se l ec tion w as su mm ar ized i n this rev ie w R esearches on phy l ogeneti c c lassifica ti on ,g enetic d i versity and gene f unc ti on o f orch i d ,genetic transfor m ation ,DNA mo lecu lar m arker techn i ques etc ,w ere also br i efly i ntroduced K ey word :orchi d ;tissue cu lture ;m o l ecular biology ;gene ti c transf o r m ati on 兰花是整个兰科植物(O rchi daceae)的总称。兰科植物是开花植物中最大的家族之一,而且是单子叶植物中最高度演化的一科,有6个亚科725属25000余种,广泛分布于全球各地。兰花在中国约有170个属1200余种,分布较为广泛,几乎全国各省都有。其中,青藏高原就有99属474种及9个变种,广东有71属208种[1-2]。 兰花不仅具有极高的观赏价值,还具有独特的食用和药用价值。兰花的根、叶、花、果、种子均有很高的药用价值。印度人曾经用兰花Erio p sis L indle y 治疗唇疮,同时其还可以舒缓牙龈和口腔黏膜的不适。不仅如此,兰花对于现代社会人类高发病症 癌症也有较好的功效[2] 。因此,兰花的组织培养及快速繁殖技术的发展以及基因功能的研究对促进人类的健康及医疗事业都有着重要的意义。1兰花组织培养的研究 1 1 兰花外植体的选择和原球茎的增殖 外植体的选择直接关系到原球茎的诱导。在组织 培养中幼嫩部位产生褐化较轻,所以一般选取较幼嫩且生长旺盛的部位。茎尖、叶片和种子是诱导原球茎的理想外植体来源。花瓣、萼片、子房、休眠芽、侧芽、花梗节间段、根尖等均可作为外植体诱导出原球茎[3] 。 1 1 1 茎尖和侧芽作为外植体 茎尖是最早也是使用频率最高的兰花外植体,侧芽应用也相当广泛。茎尖和侧芽顶端分生区细胞的分裂能力强,容易诱导出原球茎。大花蕙兰(Cymbi di um )、卡特丽亚兰(Cattleya )、石斛兰(D endrobiu m )、 墨兰和建兰[4] 等均成功用茎尖诱导出大量的原球茎。但对一些单茎性兰花,如利蝴蝶兰(Phalaeanopsis )、仙指甲兰(A erides )等用茎尖作为外植体有可能丧失母株,因此需要寻找其他外植体。经过对茎尖及侧芽的取材时间、部位及大小的研究,一般认为带1~2个
植物组织培养的发展研究进展 摘要：植物组织培养作为一种有效的技术手段，已经被广泛应用于生产实践的各个领域。本文综述了植物组织培养的应用现状，指出其在雨中和优种块繁等方面的科技支撑作用。同时概述了有关新技术的开发利用，及应用前景展望。 植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、胚胎、原生质体等，在人工配制的培养基上给予适宜的培养条件，进行繁殖的方法。由于是在试管内培养，且培养的是脱离植株母体的培养物，故也称离体培养或试管培养。 目前，植物组织培养技术研究已经取得巨大的进展，在观赏植物，如菊花、牡丹、百合等方面有诸多应用。同时，许多观赏植物已经实现产业化生产，建立了一套相对完善的快繁体系，取得了明显的经济和社会效益。 1 植物组织培养的过程 组织培养的技术过程大致分为六步：植物培养材料的采集，培养材料的消毒预处理，制备外植体，接种和培养，根的诱导，炼苗移植。以上个步骤均在无菌条件下进行。 2 植物组织培养的应用现状 2.1 在植物育种方面的应用 2.1.1单倍体育种单倍体植株往往不能结实，难以进行繁殖。在培养中用秋水仙素处理，可使染色体加倍成纯合二倍体。这种培养
技术在育种上的应用多为单倍体育种。单倍体育种具有高速、高效、基因型一次纯合等优点。因此，通过花药或花粉的培养的单倍体育种已成为一种新的育种手段。 2.1.2 胚培养采用人工的方法在无菌条件县从种子中将成熟胚和未成熟的胚分离出来，然后放在人工合成的培养基上培养，使它发育成正常的植株，从而有效的克服远缘杂交不亲和的障碍，获得杂种植物。目前，在这一方面获得成功的自交或远缘杂交不亲和性植物有怀地黄、矮牵牛、普通小麦、黑小麦等。 2.1.3 培养细胞突变体在组织培养过程中，细胞处于不断分生状态，易受培养条件和外界环境（如放射、化学物质）的影响而产生诱变，从中可以筛选出对人们有利的突变体，从而培育新品种。如抗寒性，耐盐碱性突变新品种的培育。 2.1.4 细胞融合通过植物原生质体的融合，可以克服有性杂交不亲和性而获得体细胞杂种，从而创造出新种群或育成优良品种。目前采用细胞融合方法已培育出多种植物新品种。 2.1.5 基因工程利用植物组织培养技术建立植物的遗传再生体系，是转基因育种的关键所在。在1990年，我国自行研制的抗烟草花叶病毒烟草在辽宁进行了商业化种植，成为世界上第一例商业化生产转基因植株。目前我国转基因植株研发的整体水平在发展中国家处于领先地位，在一些领域已经进入国际先进行列。 2.2 脱毒及快速繁殖植物脱毒与快繁是目前植物组织培养应用最多、最有效的一项技术。许多农作物都带有病毒，特别是无性繁
收稿日期:20050808 基金项目:国家科技部资金项目(2005EA 106-26);广西农科院科技发展基金项目(2002006)作者简介:陈少珍(1958),女,广西博白县人,工程师,主要从事食用菌育种、栽培和植物组织培养工作。 兰花组织培养中常见问题及解决方法 陈少珍, 卜朝阳, 闭志强, 周嘉运, 蒋慧萍 (广西农科院生物技术研究所, 南宁 530007) 摘要:对从台湾引进的兰花品种在组培苗生产过程中出现的褐化、黄化、污染、死亡等问题的原因进行分析,并提出采用适宜的外植体材料和适宜的无机盐成分、蔗糖浓度和激素水平,适当调节pH 、光照和温度,使用适当的外植体消毒剂种类、浓度和处理时间,按照获取无菌外植体的基本操作和外植体灭菌操作规程等措施,可有效减少兰花组培苗的褐化、黄化、污染和死亡现象的发生。 关键词:兰花;组培苗;褐化;黄化;污染;死亡;解决方法中图分类号:S 682.31 文献标识码:B 文章编号:1002—8161(2006)01-0072-03 Comm on problem s i n tissue culture of orch id and the ir solution s CH EN Shao 2zhen ,B u Zhao 2yang ,B i Zh i 2qiang ,ZHUO J ia 2yun ,J I AN G H u i 2p ing (Institu te of B iotechnology ,Guang x i A cad e m y of A g ricu ltu ral S ciences ,N anning 530007) Abstract :T he paper analyzed the causes of common p roblem s of brow ning ,yellow ing ,contam inating and dy 2ing in the p rocess of p roducing tissue 2cultured p lantlets of o rch id varieties introduced from T ai w an .T he m easures of app lying the p roper exp lants ,ino rganic m ineral elem ents ,sucro se concentrati on ,ho r mone levels ,regulating the pH value ,ligh ting and temperature ;p roper type and concentrati on of antisep tic ,ti m e of antisep tic treatm ent fo r exp lants etc .w ere recomm ended to reduce the occurrence of the m enti oned p roblem s . Key words :o rch id ;tissue 2cultured p lantlet ;brow ning ;yellow ing ;contam inating ;dying ;so luti ons 20世纪70年代以后,随着兰花组织培养技术 的日趋成熟和完善,世界各地的兰花组织培养研究和产业化应用进入了迅速发展阶段,目前我国兰花试管苗、温室大棚苗的产业化发展已成规模,组培快繁的商业性应用也正在全国各省市蓬勃发展。虽然兰花组织快繁技术已成熟,但在组培过程中常会出现许多问题,迫切需要解决。现就从台湾引进的兰花品种(蝴蝶兰、大花惠兰、文心兰、卡特兰、石斛兰等)在组培苗生产过程中出现的褐化、黄化、污染、材料死亡等问题的原因归纳如下,并提出解决方法。 1 外植体材料和增殖材料褐化问题 1.1 发生原因 1.1.1 品种(如:M 811、M 802、M 8124、M 8126等)。 不同的兰花品种之间常有很大差异,一般来说,外植体材料中单宁类和多种羟酚类化合物含量高的品种 易引起褐化。 1.1.2 外植体年龄。通常是幼嫩部位产生褐化较轻,随着组织的老龄化而褐化加重。 1.1.3 外植体取样时间和取材部位。一般在春夏季,尤其是在春季采取生长旺盛部位作外植体较好。1.1.4 培养基成分。在初级培养阶段,选择适宜的 无机盐成分、蔗糖浓度和激素浓度对防止褐化也能起到较好的作用。 1.1.5 外植体大小及受伤害程度。外植体组织受伤害程度直接影响褐变。在切取易褐变的兰花外植体时,应尽可能减小伤口面积,伤口剪切要尽可能平整;同时还要考虑外植体的粗、细度,材料切取以细短,粗长为原则。 1.1.6 环境pH 。试验表明,pH 5.5时的成活率明显比pH 4.6～5.0时高。因此,在培养时培养基应保持较高的pH 。 ? 27?广西农业科学 2006年第37卷第1期
国兰组织培养技术的现状和问题 (发布日期：2007-6-4 16:10:08)浏览人数：3 由于国兰重要的经济价值，特别是受到国外洋兰组织培养成功的刺激，我国国兰组培研究在前世纪六十年代后期就已经开始，而文革结束后的八十年代则为研究的最盛时期。根据这个时期各种刊物发表的文献资料推测，当时国内外投入人力物力进行国兰组织培养技术研究的各级科学院、所和大专院校不下百家。此后，国兰组培技术研究开始有所萎缩但仍具有较普遍的规模，例如，国家“863”计划和广东省、广州市的科研主管部门在前些年都还投入较大资金支持通过组培的国兰产业化，国外也还常有高档次的研究论文发表。 经过这么多年的研究探索，国兰组织培养技术现状到底如何？本人认为，目前国兰的组培技术水平和20年前差不多；在过去的20年间，国内外国兰组培在技术上并没有显著的创新或突破，仍然停留在低效率水平。虽然目前国内有几家从事国兰组培苗生产的厂家，但从近年来国内外刊物上发表的论文以及一些间接的证据，例
如某些媒体和非正式刊物的图片和文字资料以及某些已经结题的国兰相关科研项目的社会影响等，可以看出，这些厂家利用的基本上还是20年前的技术。尽管过去的二十年国兰组培技术没有得到长足的发展，但二十年来还是孕育了一批对国兰组培技术情有独钟的国兰爱好者和科技人员。这些科技人员正在总结前人的经验，结合相关学科的新知识，用新的思路开展试验，其中有些人已经取得了重要的研究进展。例如，有位科研人员参考了蝴蝶兰的组培方法以蕙兰的花序为材料培养出了壮芽，这是个有重要意义的进步，其技术难度也比培养蝴蝶兰要高得多。为什么可以这样说呢？这是因为蝴蝶兰的花序基部有叶芽，在通常的栽培条件下也可以萌发生长，芽在组培过程中的增殖是一个“从小到大，从少到多”的过程，是数量上的增加的问题；而蕙兰花序是没有叶芽的，培养蕙兰花序得到壮芽是一个“无中生有”的“创造性”过程，是质的改变的问题。这些长期坚守在国兰组培技术研究第一线的人员，是我们攻克国兰组培难题，提升国兰组培技术水平的希望所在。
7-- 生物技术?遗传育种 DOI:10.16498/https://www.doczj.com/doc/593936233.html,ki.hnnykx.2018.003.002 国兰通常指兰属（Cymbidium ）植物中具有较高观赏价值的地生种兰花，包括春兰（C.goeringii ）、建兰（C.ensifolium ）、蕙兰（C.faberi ）、寒兰（C.kanran ）、墨兰（C.sinense ）、莲瓣兰（Ctortisepalum ）和春剑（C.tortisepalum var .longibracteatum ）7个种类。兰花香味 清幽，花色淡雅，素有“花中君子”的美称，观赏价值、经济价值和文化价值都非常高，深受人们喜爱[1]。 由于兰花种子极小且在自然条件下萌芽率极低，主要是通过分株进行繁殖。兰花每年产生的新芽较少，分株繁殖系数低，而且速度较慢，无法满足日益增长的市场需求。因此，组织培养技术成为国兰生产中行之有效的快速繁殖方法。目前，我国部分兰花试管苗及温室大棚苗的产业化发展已初具规模，组培快繁的市场应用也正在全国各省市迅速发展[2-3]。据相关统计，已有66属兰科植物通过组织培养方法进行繁殖，大大缩短了兰花的生长周期，有效保护兰属植物种质资 源，特别是珍贵濒危的品种。虽然大部分兰花组培快繁技术较为成熟，但是组织培养中还存在一些尚未彻底解决的问题，如外植体污染和玻璃化、褐化等，尤其外植体污染已成为国兰组培是否成功的关键所在。研究以湖南本土国兰不同部位的外植体为材料，通过对组织培养过程中消毒剂、时间、消毒方法的不同搭配设计了6个消毒方案，以期找出适宜不同部位外植体的有效消毒方法，为国兰的快速繁殖技术提供参考。 1 材料与方法1.1 试验地点和材料 试验在湖南省农业生物辐照工程技术研究中心组织培养研究室进行。试验材料为蕙兰种子和湖南本土下山春兰新芽（选取完好无损、无病虫害、带基部的健康新芽）。供试消毒剂有乙醇、升汞、次氯酸钠，均购自长沙隆和化玻实验用品有限公司。 1.2 试验方法 通过文献查阅，选用3种消毒试剂，分别是10%次氯酸钠、0.1%升汞、75%乙醇，设置不同的消毒时间，共6个消毒试验组合，分别为：处理1，75%乙醇45 s +0.1%升汞3 min ；处理2，75%乙醇45 s +0.1%升汞 ?国兰组培中外植体高效消毒方法研究? 胡 瑶1,2,3，李宏告1,2,3，张跃龙1,2,3，张 勇1,2,3，张志德1,2,3，李丽辉1 （1.湖南省核农学与航天育种研究所，湖南 长沙 410125；2.湖南省农业生物辐照工程技术研究中心，湖南 长沙 410125；3.生物辐照技术湖南省工程研究中心，湖南 长沙 410125） 摘 要：以湖南本地种的蕙兰种子和春兰新芽为外植体，以75%乙醇、0.1%升汞、10%次氯酸钠为消毒剂设计了6个消毒方案进行外植体消 毒试验。结果表明：蕙兰种子组织培养时采用75%酒精45 s+0.1%升汞消毒8 min 的效果较佳，75%酒精45 s+0.1%升汞消毒5 min 对春兰新芽组培灭菌效果较好；同时，升汞的消毒效果总体优于次氯酸钠，但需要掌握消毒时间，以免过度处理给外植体造成伤害导致其死亡。 关键词：国兰；外植体；组织培养；消毒 中图分类号：Q813.1+2 文献标识码：A 文章编号：1006-060X （2018）03-0007-03 ?E xplant?Efficient?Disinfection?of?Tissue?Culture?of?Chinese?orchids H U Yao 1,2,3，LING Hong-gao 1,2,3，ZHANG Yue-long 1,2,3，ZHANG Yong 1,2,3，ZHANG Zhi-de 1,2,3，LI Li-hui 1 （1. Hunan Institute of Nuclear Agriculture Science and Space Breeding, Changsha 410125, PRC; 2. Hunan Engineering Technology Research Center of Agricultural Biological Irradiation, Changsha 410125, PRC; 3. Hunan Biological Irradiation Techonology Engineering Research Center, Changsha 410125, PRC ） Abstract ：Taking Hunan local orchid seeds and buds as explants, the explants disinfection tests were conducted by use 75% ethanol, 0.1% mercuric chloride, 10%sodium hypochlorite as disinfectant recpectively.. The results showed that the organization of Cymbidium seed culture by using 75% alcohol 45 s+0.1% mercuric chloride for 8 min was the best, 75% alcohol 45 s+0.1% mercuric chloride for 5 min ideal sterilization effect on tissue culture of Cymbidium shoots. The disinfection effect of mercuric chloride was better than that of sodium hypochlorite, but need to master the disinfection time, so as to avoid excessive damage to the explants.Key?words ：Chinese orchids; explant; tissue culture; disinfection 收稿日期：2017-08-15 基金项目：湖南省科技厅重点研发计划项目（2016NK2180）；湖南省农业生物辐照工程技术研究中心开放基金项目（2016KF005）；湖南省农业科学院科技创新团队项目（2014TD03） 作者简介：胡 瑶（1988-），女，湖南长沙市人，硕士研究生，研究方向为园艺花卉栽培与种植。通讯作者：李丽辉