饲料粗蛋白测定方法
1适用范围
本标准适用于配合饲料和单一饲料。
2原理
凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂上，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱并蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用酸滴定测出氮含量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25计算粗蛋白质量。
此法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。
3仪器设备
①实验室用样品粉碎机或研钵。②分析筛：孔径0.45mm(40目)。③分析天平：感量0.0001g。④消煮炉或电炉。⑤滴定管：酸式，25或10ml。⑥凯氏烧瓶：100或500ml。⑦凯氏蒸留装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。⑧锥形瓶：150或250ml。⑨容量瓶：100ml。
4试剂
①硫酸(GB 625—77)：化学纯。②硫酸铜(GB 665—78)：化学纯。③硫酸钾(HG 3-920-76)：化学纯或硫酸钠(HG 3-908-76)：化学纯。④氢氧化钠(GB 629-77)：化学纯,40 g溶成100 IIll配成40％水溶液(W／V)。⑤硼酸(GB628-78)：分析纯，2 g溶于100ml水配成2％溶液(W／V)。⑥混合指示剂：甲基红(HG 3-958-76)0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿(HG 3—1220-79)0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期1个月以内。⑦0.05N盐酸标准溶液(邻苯二甲酸氢钾法标定)：4.2ml 盐酸(GB 622—77)，分析纯，注入l 000 rm蒸留水中。⑧蔗糖(HG 3—1001—76)：分析纯。⑨硫酸铵(GB 1396-78)：分析纯。
5试样的选取和制备
取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。
液体或膏状粘液试样应注意取样的代表性。用干净的、可放入凯氏烧瓶的小玻璃容器称样。
6测定步骤
饲料中粗蛋白的测定方法 本标准参照采用ISO 5983—1979《动物饲料—氮含量的测定和粗蛋白含量计算》1.1 主要内容与适用范围 本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 1.2 引用标准 GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备 1.3 原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在被催化剂的作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮量转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。 1.4 试剂 1.4.1 硫酸（GB 625）:化学纯，含量为98%，无氮。 1.4.2 混合催化剂：0.4g 五水硫酸铜，6g 硫酸钾或无水硫酸钠，均为化学纯， 磨碎混匀。 1.4.3 氢氧化钠（GB 629）:化学纯，40%水溶液（M/V）。 1.4.4 硼酸（GB 628）:化学纯，2%水溶液（M/V）。 1.4.5 混合指示剂:甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体 积混合，在阴凉处保存期为三个月。 1.4.6 盐酸标准溶液:邻苯二甲酸氢钾法标定。 147 O.lmol/盐酸（HCL）标准溶液：8.3ml盐酸（GB 622）,分析纯，注入1000ml 蒸馏水中。
1.4.8 0.2 mol/盐酸（HCL）标准溶液：1.67ml盐酸（GB 622），分析纯，注入 1000ml 蒸馏水中。 149 蔗糖（HG 3—1001）:分析纯。 1.4.10 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。 1.4.11硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000ml,加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ml, 0.1%甲基红乙醇溶液7ml，4%氢氧化钠水溶液0.5ml，混合，置阴凉处保存 期为一个月（全自动程序用）。 1.5 仪器设备 1.5.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 1.5.2 分析筛：孔径0.42mm（40目）。 1.5.3 分析天平：感量0.0001g。 1.5.4 消煮炉或电炉。 1.5.5 滴定管：酸式（A 级），10、25mL。 1.5.6 凯氏烧瓶：250mL。 1.5.7 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式。 1.5.8 锥形瓶：150、250mL。 1.5.9 容量瓶：100mL。 1.5.10 消煮管：250 mL。 1.5.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白测定仪。 1.6 试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 1.7 分析步骤 1.7.1 试样的消煮 称取试样0.5g~1g（含氮量5mg~80mg）准确至0.0002g,无损失地放入凯氏烧
饲料中粗蛋白测定方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
饲料中粗蛋白测定方法 1、原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 2、试剂 2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。 2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。 2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。 2.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。 2.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。 2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。 2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。 2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。 2.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。 2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。 3、仪器设备 3.1实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。 3.3分析天平：感量0.0001g。 3.4消煮炉或电炉。 3.5滴定管：酸式，10、25mL。 3.6凯氏烧瓶：250mL。 3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 3.8锥形瓶：150、250mL。 3.9容量瓶：100mL。 3.10消煮管：250mL。 3.11定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。 4、试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 5分析步骤 5.1.1试样的消煮 称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻
粗蛋白测定方法—凯式定氮法 粗蛋白crude protein；crude matter（DM）食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物（氮化物）。换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16%（这已通过多次试验得出），再用凯氏法测出总氮量，再乘以 6.25就可求得粗蛋白的含量。 一、实验原理 蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。这些元素在蛋白质中含量都有一定比例关系，其中含碳50～55%、氢6～8%、氧20～23%、氮15～17%和硫0.3～2.5%。此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。 由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15～17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于6.25克蛋白质。所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以6.25，就可以计算出样品中的蛋白质含量。含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。由大分子分解成小分子的过程通常称为”消化”。为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290℃→400℃)，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3)在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。硫酸铵与浓碱作用可游离出氨，借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的H+浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢复溶液中原来H
饲料中粗蛋白的测定 一、实验目的 通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。 二、适用范围 本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 三、实验原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 四、试剂 （1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。 （2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。 （3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。 （4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。 （5）混合指标剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。 （6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定； ①0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。 ②0.02mol/L盐酸标准溶液： 1.67mL盐酸注入1000ml蒸馏水中。 （7）蔗糖：分析纯。 （8）硫酸铵：分析纯，干燥。 （9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。 五、仪器设备
（1）实验室用样品粉碎机或研钵。 （2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。 （3）分析天平：感量0.0001g。 （4）消煮炉或电炉。 （5）滴定管：酸式，10、25mL。 （6）凯氏烧瓶：250mL。 （7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。 （8）锥形瓶：150、250mL。 （9）容量瓶：100mL。 （10）消煮管：250mL。 （11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。六、分析步骤 试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 （1）仲裁法 ①试样的消煮 称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。 ②氨的蒸馏 A. 常量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入60～100ml蒸馏水，摇匀，冷却。 将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流
粗蛋白测定方法一凯式定氮法 粗蛋白crude protein ；crude matter (DM)食品、饲料中一种蛋白质含量 的度量。不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质，及真蛋白质和含氮物(氮化物)。换句话说，粗蛋白是食品、饲料中含氮化合物的总称，食物中以大豆的粗蛋白含量最高，肉类次之。所以说，粗蛋白是一种既包括真蛋白又包括非蛋白的含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、尿素、硝酸盐和氨等。然而，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同。总之，粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。我们可以通过粗蛋白测定仪即凯氏定氮仪来测量粗蛋白的含量，测量步骤如：蛋白质含氮量约为16% (这已通过多次试验得出)，再用凯氏法测 出总氮量，再乘以就可求得粗蛋白的含量。 一、实验原理 蛋白质是由碳、氢、氧、氮及少量硫元素组成。这些元素在蛋白质中含量 都有一定比例关系，其中含碳50?55%、氢6?8%、氧20?23%、氮15?17% 和硫?％。此外在某些蛋白质中还含有微量的磷、铁、锌、铜和钼等元素。 由于氮元素是蛋白质区别于糖和脂肪的特征，而且绝大多数蛋白质的氮元素含量相当接近，一般恒定在15?17%，平均值为16%左右，因此在蛋白质的定量分析中，每测得1克氮就相当于克蛋白质。所以只要测定出生物样品中的含氮量，再乘以，就可以计算出样品中的蛋白质含量。含氮有机物与浓硫酸共热，被氧化成二氧化碳和水，而氮则转变成氨，氮进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 由大分子分解成小分子的过程通常称为”肖化”为了加速消化，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠以提高消化液的沸点(290C-400C )，加入硫酸铜作为催化剂，过氧化氢作为氧化剂，以促进反应的进行。反应(1)(2)在凯氏烧瓶内完成，反应(3) 在凯氏蒸馏装置中进行，其特点是将蒸汽发生器、蒸馏器及冷凝器三个部分融为一体。由于蒸汽发生器体积小，节省能源，本仪器使用方便，效果良好。 硫酸铵与浓碱作用可游离出氨，借水蒸气将产生的氨蒸馏到一定浓度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中的度降低，然后用标准无机酸滴定，直至恢 复溶液中原来H+浓度为止，最后根据所用标准酸的量计算出待测物中总氮量。 二、仪器和试剂
饲料粗蛋白测定的测定方法 Method for the determination of crude protein in feedstuffs 本标准参照采用ISO5983-1979《动物饲料-氮含量的测定和粗蛋白含量计算》。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 2 引用标准 GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备 3 原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收液吸收后，再用酸滴定。测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。 4 试剂 4.1硫酸（GB625）:化学纯，含量为98%，无氮。 4.2混合催化剂 0.4g 硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g 硫酸钾（HG3-920）或硫酸钠（HG3-908），均为化学纯，磨碎混匀。 4.3 氢氧化钠（GB629）：化学纯，40%水溶液（M/V）。 4.4硼酸（GB628），化学纯，2%水溶液（M/V）。 4.5混合指示剂溶液 甲基红（HG3-958）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3-1220）0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。 4.6盐酸标准溶液，c(HCl)=0.1mol/L、0.02mol/L 配制如下： 移取8.3mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液为c(HCl)=0.1mol/L。 移取1.67mL 盐酸(分析纯)，于1000mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。此溶液为c(HCl)=0.02mol/L。 4.7蔗糖，分析纯。 4.8硫酸铵，分析纯，干燥。 4.9硼酸吸收液 1%硼酸水溶液1000mL，加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1% 甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。
粗蛋白测定方法 什么是粗蛋白，粗蛋白跟蛋白质又有什么区别，如何测量饲料中粗蛋白的含量，粗蛋白的含量高是不是一定代表着蛋白质的含量高。我想，当你看到这个题目时，肯定会联想到这一连串的问题中的其中几个。那么接下来，我就来详细介绍下粗蛋白的概念、粗蛋白测量 和其他关于饲料中粗蛋白含量的问题。 粗蛋白概念： 粗蛋白不仅包括蛋白质这一物质，它涵盖的范围更广，包括含氮的全部物质。包括真蛋白质和含氮物(氨化物)。食物中粗蛋白含量以大豆最高,肉类次之。粗蛋白英文为crude protein。粗蛋白是食品、饲料中一种蛋白质含量的度量。由于一般蛋白质中含氮量约为16%，故在概略分析中，常用凯氏(Kjeldahl)法测出总氮量，再乘以系数6.25来求得。实际上，它是食品、饲料中含氮化合物的总称，既包括真蛋白又包括非蛋白含氮化合物，后者又可能包括游离氨基酸、嘌呤、吡啶、尿素、硝酸盐和氨等。此外，不同蛋白质的氨基酸组成不同，其氮含量不同，总氮量换算成蛋白质的系数也不同，如小麦和多数谷物的换算系数为5.80，水稻5.95，大豆5.7，多数食用豆和坚果5.3，牛奶6.38等。粗蛋白只是一个粗 略的概念。 粗蛋白含量： 下面我介绍几种常见物质的粗蛋白含量，仅供大家参考。 薏苡仁粗蛋白含量：13%-14% 棉粕粗蛋白含量：可达40%以上 农大白早糯玉米粗蛋白含量：3.41% 蠡玉168 粗蛋白含量：9.63％ 台湾大青枣粗蛋白含量：0.86% 上文介绍了几种农产品或水果的粗蛋白含量情况，如果需要更多的资料，大 家可自己查阅。 粗蛋白测定： 方法一：最简便也是最快键的方法，就是用蛋白质测定仪来测量。 本标准参照采用ISO 5983—1979 《动物饲料──氮含量的测定和粗蛋白含量 计算》。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中粗蛋白含量的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。 2 引用标准 GB 601 化学试剂滴定分析（容量分析）用标准溶液的制备
饲料中粗蛋白测定方法 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】
饲料中粗蛋白测定方法 1、原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。 2、试剂 硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。 混合催化剂：硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。 氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。 硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。 混合指示剂：甲基红（HG3—958）％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。 2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=L。盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。 盐酸标准溶液：c（HCl）=L。盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。 蔗糖（HG3—1001）：分析纯。 硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。 3、仪器设备 实验室用样品粉碎机或研钵。 分样筛：孔径（40目）。 分析天平：感量。 消煮炉或电炉。 滴定管：酸式，10、25mL。 凯氏烧瓶：250mL。 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 锥形瓶：150、250mL。 容量瓶：100mL。 消煮管：250mL。 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。 4、试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。 5分析步骤 试样的消煮 称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至，放入凯氏烧瓶中，加入混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃
实验二饲料粗蛋白的测定 一、实验目的 通过饲料样品中粗蛋白质的测定，让学生了解了解凯氏定氮法测定的基本原理，掌握半微量凯氏定氮法测定饲料粗蛋白质的方法，掌握粗蛋白质含量的计算方法。 二、实验原理 各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉)的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO2 ↑，H2O↑，SO2↑状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮，用硼酸溶液吸收之并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。 其主要化学反应如下： 1、2NH4（CH2）2COOH+13H2SO4→（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2（丙氨酸） 2、（NH4）2SO4 +2NaOH→2NH 3+3H2O+2Na2SO4 3、4H3BO3+ NH 3→NH4HB4O7+5H2O 4、NH4HB4O7+HCl+5H2O→NH4C1+4H3BO3 本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺，铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。 三、实验设备 1、实验室用样品粉碎机或研钵； 2、分析筛：孔径0.45mm(40目)； 3、分析天平：感量0.0001g； 4、消煮炉或电炉； 5、滴定管：酸式，25或50ml； 6、凯式烧瓶：100或500m1； 7、凯氏蔗馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式； 8、锥形瓶，150或250m1； 9、容量瓶：100ml。 三、实验内容
分析化学 结课作业 常见蛋白质测定方法的总结与比较 材料科学与技术学院 林化13-1班 刘旺衢 130534106
常见蛋白质测定方法的总结与比较 刘旺衢 （北京林业大学材料科学与技术学院林化13-1班 130534106，10083） 蛋白质是构成生物体细胞组织的重要成分。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。具有糖类和脂肪不可替代的作用。蛋白质与营养代谢、细胞结构、酶、激素、病毒、免疫、物质运转、遗传等密切相关,是对人类最重要的物质之一。准确精密的测定蛋白质，关乎人类的生产、生活、生存。目前测定蛋白质含量的方法有多种,如凯氏定氮法、紫外吸收法、双缩脲法、考马斯亮蓝染色法、酚试剂法等几种方法,下面本文将总结比较这五种蛋白质的测定方法。 一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气馏出并为过量的酸液吸收，再以标准酸滴定，就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定，可由其氮量计算蛋白质含量，故此法是经典的蛋白质定量方法。蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数计算蛋白质含量，即含氮量*6.25=蛋白含量。 凯氏定氮法具有灵敏度高, 样品用量少，最低可检出0.05mg氮；精密度、准确度高,平行误差一般小于0.5%；应用范围广,适用于一切形态的食品与生物样品；仪器装置简单,试剂廉价的优点。 但也存在操作比较繁琐费时,特别是蒸馏定氮过程的效率低,不利于大批样品的测定；定氮的结果既包括有机氮,也包括无机氮,有机氮中除蛋白氮外,还包括非蛋白氮,测定的结果只能是粗蛋白质的含量；在蛋白质氨基酸构成有差异的
饲料中粗蛋白测定方法 1、原理 凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数 6.25，计算出粗蛋白含量。 2、试剂 2.1 硫酸（ GB 625）：化学纯，含量为 98％，无氮。 2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB 665）,6g硫酸钾（HG 3 —920）或硫酸钠（ HG 3—908），均为化学纯，磨碎混匀。 2.3 氢氧化钠（ GB 629）：化学纯， 40％水溶液（ m/V）。 2.4 硼酸（ GB 628）：化学纯， 2％水溶液（ m/V）。 2.5 混合指示剂：甲基红（HG 3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3—1220） 0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存 期为三个月。 2.6 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按 GB 601制备。 2.6.1 盐酸标准溶液：c （HCl） =0.1mol/L。8.3mL 盐酸（GB 622,分析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。 2.6.2 盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。1.67mL 盐酸（GB 622, 分析纯），注入 1 000mL 蒸馏水中。
2.7 蔗糖（ HG 3—1001）：分析纯。 2.8 硫酸铵（ GB 1396）：分析纯,干燥。 2.9硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1 OOOmL,加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL， 0.1％甲基红乙醇溶液 7mL， 4％氢氧化钠水溶液 0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。 3、仪器设备 3.1 实验室用样品粉碎机或研钵。 3.2分样筛：孔径0.45mm （40目）。 3.3 分析天平：感量 0.0001g。 3.4 消煮炉或电炉。 3.5 滴定管：酸式， 10、25mL。 3.6 凯氏烧瓶： 250mL。 3.7 凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。 3.8 锥形瓶： 150、250mL。 3.9 容量瓶： 100mL。 3.10 消煮管： 250mL。 3.11 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动。 4、试样的选取和制备 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g,粉碎后全部通过 40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
蛋白质的测定方法 1、原理 蛋白质是含氮有机化合物，与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵，然后在碱性条件下蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量再乘以换算系数，即位蛋白质含量。 2、试剂 2.1、硫酸铜 2.2、硫酸钾 2.3、硫酸 2.4、2%硼酸溶液 2.5、混合指示剂：1份0.1%的甲基红与3份0.1%溴甲酚绿混合。 2.6、30%氢氧化钠溶液。 2.7、0.1M 盐酸标准溶液。 3、操作步骤 3.1、样品处理：称取0.1g-0.15g 固体样品置于消化管内再加入0.2g 硫酸铜，3g 硫酸钾及10ml 硫酸，然后放入消化装置中设定温度430℃，消化3h 。 3.2、打开蒸馏装置的电源，开启作为冷凝水的自来水龙头。 3.3、将消化好的消化管置于蒸馏装置的托盘上，落下安全门。 3.4、仪器开启后，按“设定”键光标显示在“换算系数”栏目中输入需要换算的数值6.25。 3.5、按“↑”键将光标移入“碱量”栏目中，输入需要的碱量体积50ml 。 3.6、按“↑”键将光标移入“吸收液量”栏目中，输入需要的吸收液量的体积30ml 。 3.7、按“↑”键将光标移入“样品量”栏目中，输入需要的样品量质量。 3.8、按“↑”键将光标移入“样品编号”栏目中，输入样品编号。 3.9、按“RUN ”键开始蒸馏工作，同时保存设定的参数。 4.0、滴定至终点时，仪器自动停止蒸馏。 4.1、按“保存”键返回主界面，再按“数据键”进去查看数据，选择要查看的样品编号，按“确定”键查看结果。 4、结果 ()00.014 6.25100HCl V V C M -???=?粗蛋白含量（%） V －样品消耗盐酸标准溶液的体积，单位ml ； V 0－试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，单位ml ； M －样品质量，单位g ； 0.014－盐酸标准溶液1ml 相当于氮克数； 6.25－氮换算成蛋白质的平均系数；
动物性蛋白质饲料 胃蛋白酶消化率的测定过滤法 参考标准：GB/T 17811-2008 一、适用范围 二、实验原理 已脱过脂的试样,用温热的胃蛋白酶溶液(酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定),在恒温、持续不断地振摇或搅拌下消化16小时,过滤分离不溶性残渣,洗涤、干燥,测定残渣的粗蛋白质含量。同时测定空白和脱脂未酶解试样的粗蛋白质含量。 三、实验用品
三、实验内容
取下载有残渣的滤纸(用滤纸将残渣包裹好),无损地移入100烧杯中并置于105℃烘箱内烘干。 5 粗蛋白质 的测定将上述已烘干的滤纸包无损地移入 凯氏烧瓶中，按《FOSS 定氮仪测定 饲料中粗蛋白含量的方法》测定残 渣粗蛋白质的质量分数（ω 2 ）。同 时，称取脱脂风干的样品0.3 g（精 确至0.0002 g），直接按《FOSS 定 氮仪测定饲料中粗蛋白含量的方 法》测定脱脂未酶解的样品中粗蛋 白质的质量分数（ω 1 ）。 测定残渣粗蛋白质时应从每个 样品残渣粗蛋白质中减去酶液 的空白值。 6 计算X- 试样胃蛋白酶消化率，以质 量分数计（%）； ω 1 - 脱脂未酶解的样品中粗蛋 白质的质量分数（%）； ω 2 - 脱脂酶解后的残渣中粗蛋 白质的质量分数（%）。 重复性：1每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果的相对≤6%； 2 每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算 粗蛋质含量允许相对偏差 >25% 1％ 10% 饲料中粗蛋白质的测定 一、目的 掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并测定饲料中粗蛋白质的含量。 二、原理 饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。凯氏法的基本原理是用浓H 2SO4在还原性催化剂(CuSO4、K 2SO4、Na 2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都变为NH ４＋，NH ４＋立即被浓H 2SO4吸收成为(NH 4)2SO4，(NH 4)2SO4在浓碱作用下放出NH 3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿混合指示剂作指示剂，用标准HCL 溶液滴定，求出氮含量，根据不同饲料再乘以一定的换算系数(通常用6.25计算)，即为粗蛋白质的含量。 上述原理的主要化学反应如下： 2.(NH 4)2SO4+2NaOH →2NH 3↑+2H 2O+Na 2SO4 3.H 3BO ３+NH 3→NH 4H 2BO 3 4.NH 4H 2BO 3+HCL →NH 4CL+H 3BO 3 三、仪器设备 1.实验室用样品粉碎机：40目网筛。 2.分析天平：感量0.0001。 3.电子天平: 感量0.001。 4. 六联电炉: 6×1000W 。 5.改良式半微量凯氏定氮仪(图1)。 6.酸式滴定管:25ml 。 7.凯氏烧瓶:100ml 。 8.烧杯:250ml 。 9.三角瓶:150ml 。 10.容量瓶:100ml 。 11.移液管:10ml。 12.量筒: 10ml 。 13.量筒:25ml。 四、试剂 1.浓H 2SO 4 ：化学纯,含量为98%，无氮。 2.混合催化剂：CuSO 4:Na 2 SO 4 =1:10 化学纯。 3.甲基红—溴甲酚绿混合指示剂：0.1%甲基红酒精溶液与0.5%溴甲酚绿酒精溶液等体积混合，阴凉处保存期不超过三个月。此混合指示剂在碱性溶液中呈蓝色，中性溶液中呈灰色，强酸性溶液中呈红色。在硼酸吸收液中呈暗紫色，在吸收氨的硼酸溶液中呈兰色。 4.2%硼酸吸收液：溶2g化学纯硼酸于100ml蒸馏水中，加甲基红—溴甲酚绿混合批示剂0.4ml。 5.40%饱和NaOH溶液：溶40克氢氧化钠（化学纯）于100ml蒸馏水中。 6.0.05mol/l的HCL标准液：取分析纯浓HCL(比重1.19)4.2ml，加蒸馏水稀释至1000ml，用基准物质标定。将基准无水碳酸钠（分析纯）于270-300℃灼烧40分钟称重，至恒重，准确称取0.013-0.015克，溶于50ml 蒸馏水中，加2滴甲基红—溴甲酚绿混合指示剂，用欲配的0.05mol/lHCL滴定至暗紫红色，记录HCL用量 五、测定步骤 1.样本的消化： 精确称取饲料样本0.5-1g，以硫酸纸卷无损的移入消化管中，再加入5氺硫酸铜0.4克，无水硫酸钾或硫酸钠6克，加10ml浓硫酸后将凯氏烧瓶放于通风橱的电炉子上消化(为防止消化时液体溅失，可再加两粒玻璃珠)。 注意：先低温加热(100-200℃)，注意防止泡沫浮起，待泡沫消失后，提高加热温度(约360-410℃) 至沸腾。消化时要经常转动凯氏烧瓶，如果有黑色炭粒不能全部消化，待烧瓶冷却后，补加少量浓硫酸后继续消化至溶液澄明无黑点并呈蓝绿色为止，移出电炉，放于凯氏消化架上冷却。 2.转移：将冷却的消化液加少许蒸馏水约20ml，摇匀后无损移入100ml容量瓶，再用蒸馏水反复冲洗烧瓶数次，直至消化液全部转入容量瓶中，冷却至室温后以蒸馏水定容至刻度。即为试样分解液。 3.空白实验：另取凯氏烧瓶一个，加入混合催化剂（同前），浓硫酸10ml，同样消化至澄清，冷却后按上述方法转移至容量瓶中，定容至刻度备用。 饲料粗蛋白测定方法 1适用范围 本标准适用于配合饲料和单一饲料。 2原理 凯氏法测定试样含氮量，即在催化剂上，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱并蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，用酸滴定测出氮含量，乘以氮与蛋白质的换算系数6.25计算粗蛋白质量。 此法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。 3仪器设备 ①实验室用样品粉碎机或研钵。②分析筛：孔径0.45mm(40目)。③分析天平：感量0.0001g。④消煮炉或电炉。⑤滴定管：酸式，25或10ml。⑥凯氏烧瓶：100或500ml。⑦凯氏蒸留装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。⑧锥形瓶：150或250ml。⑨容量瓶：100ml。 4试剂 ①硫酸(GB 625—77)：化学纯。②硫酸铜(GB 665—78)：化学纯。③硫酸钾(HG 3-920-76)：化学纯或硫酸钠(HG 3-908-76)：化学纯。④氢氧化钠(GB 629-77)：化学纯,40 g溶成100 IIll配成40％水溶液(W／V)。⑤硼酸(GB628-78)：分析纯，2 g溶于100ml水配成2％溶液(W／V)。⑥混合指示剂：甲基红(HG 3-958-76)0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿(HG 3—1220-79)0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存期1个月以内。⑦0.05N盐酸标准溶液(邻苯二甲酸氢钾法标定)：4.2ml 盐酸(GB 622—77)，分析纯，注入l 000 rm蒸留水中。⑧蔗糖(HG 3—1001—76)：分析纯。⑨硫酸铵(GB 1396-78)：分析纯。 5试样的选取和制备 取具有代表性试样，粉碎至40目，用四分法缩减至200g，装于密封容器中，防止试样成分的变化或变质。 液体或膏状粘液试样应注意取样的代表性。用干净的、可放入凯氏烧瓶的小玻璃容器称样。 6测定步骤 实际上，100多年来世界各国一直沿用的是由德国科学家Hennberg和Stohman所创立的Weende饲料分析体系。该分析体系是把饲料分成6种组分来分析测定：①水分(干物质)； ②粗灰分(矿物质)；②粗蛋白(N x 6．25)；④粗脂肪(乙醚浸出物)⑤粗纤维；⑧无氮浸出物(NFE，计算值)。这种饲料分析体系显然是饲料的概略分析(Feed Proximate Analysis) ，但也是最基本的饲料成分分析。按照GB10648-1999 饲料标签的规定：蛋白质饲料、配合饲料、浓缩饲料和复合顶混料等饲料都要把水分、粗蛋白、粗纤维和粗灰分做为保证值项目进行标注。 饲料组成成分的分析 对饲料组成成分的分析是研究营养物质的利用，评价饲料营养价值最基础的工作。 饲料中最重要的营养物质有碳水化合物、蛋白质、脂类、矿物质和维生素。概略养分分析法把饲料组成成分分为水分、粗灰分、粗蛋白质（CP）、粗脂肪或乙醚浸出物（EE）、粗纤维（CF）和无氮浸出物（NEF）。 (一)水分 饲料中的水分有两种存在形式，游离水和结合水。饲料分析中经常测定总水分，采用干燥失重的方法。对于不同饲料，干燥的方法应考虑其理化性质而有所区别。尽管饲料中的水分营养价值不大，但是测定饲料中的水分可得出饲料干物质的含量，这与饲料的能量含量密切相关，因此水分的测定意义重大。 本方法依据GB6435—86 饲料中水分的测定，它适用于配合饲料和单一饲料水分含量的测定，但不适用于做饲料的奶制品、动植物油中的水分测定。 1.方法原理 试样在(105±2)℃烘箱内和常压条件下烘干至恒重的质量为水分。 2.仪器设备 (1)植物样品粉碎机或研钵； (2)试验筛：孔径0.42mm（40目） (3)分析天平：分度值0．0001g； (4)称量皿：玻璃或铝质，直径40mm、高25mm (5)电热式恒温烘箱：控制±2℃； 中华人民共和国专业标准中华人民共和国专业标准 全氮和粗蛋白测定法 Determination of total nitrogen and ZB X 66026-87 crude protein ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 本方法适用于酿造酱油的原料、半成品、副产品的全氮、粗蛋白测定。 1 仪器 a. 分析天平:感量0.1mg; b. 凯氏烧瓶; c. 铁架、铁圈、石棉网; d. 煤气灯(或电炉); e. 干燥管、抽气管、橡皮管; f. 氮气球、冷凝管、锥形瓶; g. 粉碎机等。 2 试剂与溶液 2.1 甲基红-溴甲酚绿混合指示剂 甲基红40mg,溴甲酚绿1g,溶于60mL95%乙醇中。 2.2 硫酸铜-硫酸钾混合试剂 硫酸铜: 硫酸钾= 6∶100 (硫酸铜和硫酸钾都为分析纯)。 2.3 玻璃珠(φ3mm)或锌粒。 2.4 4%硼酸溶液 称取化学纯硼酸4g,用蒸馏水溶解后定容至100mL。 2.5 浓硫酸(分析纯) 2.6 40%氢氧化钠溶液 称取化学纯氢氧化钠40g,加蒸馏水溶解,定容至100mL。 2.7 0.1N盐酸标准溶液 量取分析纯盐酸9mL,加蒸馏水稀释至1000mL。 2.7.1 用无水碳酸钠标定:准确称取无水碳酸钠(预先在180℃的烘箱中烘至恒重)3份, 每份重约0.17g,称准至0.0002g。分别置于150mL锥形瓶中,各加已煮沸过蒸馏水30mL, 温热摇动,使之溶解。再各加甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2 滴,然后用待标定的盐酸 溶液滴定,直至溶液刚呈暗红色为终点,记下耗用毫升数(V)。 计算:盐酸标准溶液的当量浓度N 按下式计算 G N = ━━━━━━ (3) V ×0.05299 式中:N——盐酸标准溶液的当量浓度; G——无水碳酸钠之重量,g; V——盐酸溶液之用量,mL; 0.05299——每毫克当量Na2CO3之重量,g。 2.7.2 用已知当量浓度的氢氧化钠标定:准确吸取25mL需要标定的盐酸溶液于150mL锥形瓶中,加酚酞指示剂2滴,用0.1N氢氧化钠标准溶液滴至微红色,在30s内不退色为终点。记下耗用mL数。 计算: N NaOH×V NaOH 饲料中粗蛋白的测定方法 原理： 凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。 测定方法： 1、试样的消煮 称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360-410℃）直呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。 2、半微量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好人口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在人口处加水密封，防止漏气。蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1mi，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 3、滴定 用上述蒸馏法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。 4、分析结果的表述 计算见下式： （V2-V1）·c×0.0140×6.25 粗白质（%）= ×100 V′ M× V 式中：V1——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL V2——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL C ——盐酸标准溶液浓度，mol/L M ——试样质量，g V ——试样分解液总体积，mL V′——试样分解液蒸馏用体积，mL 0.0140——与1.00mL盐酸标准[c（HCl）=1.000 mol/L]相当的以克表示的氮的质量 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。 凯氏定氮法 仪器设备 1 样品粉碎机或研钵 2 分析筛孔径0.45nm（40目） 3 分析天平感量0.0001g 4 消化炉或电炉 5 滴定管酸氏25 50ml 6 凯氏烧瓶250ml 7 凯氏蒸馏装置常量蒸馏氏或半微量蒸馏氏8 锥形瓶150 250ml 9 容量瓶100ml 10消化管250ml 11定氮仪 试剂及配制 1 浓硫酸（GB 625）化学纯 2 硫酸铜（GB 665）化学纯 3 硫酸钾（HG 3-920）化学纯或硫酸钠（HG 3-905）化学纯 4 400g/l NaOH溶液40g NaOH（GB629）溶于100ml水中 5 20g/l 硼酸溶液2g硼酸（GB628）溶于100ml水中 6 盐酸标准滴定溶液邻苯二甲酸氢钾法标定c(hcl)=0.1mol/l:盐酸标准滴定溶液。8.3ml 盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中 C(hcl)=0.2mol/l:盐酸标准滴定溶液，16.7ml盐酸（GB622,分析纯），注入1000ml水中 7 混合指示剂。甲基红（HG3-958）1g/L乙醇溶液与溴甲酚绿（HG 3-1220）5g/l乙醇溶液，两溶液等体积混合，阴凉处保存3个月以内 8 硫酸铵（GB 1396）分析纯，干燥 9 蔗糖（HG 3-1001）分析纯 10 硼酸吸收液。10g/L硼酸溶液1000ml,加入甲基红1g/L乙醇溶液7ml，与溴甲酚绿1g/L 乙醇溶液10ml，40g/L氢氧化钠溶液0.5ml,混合，至阴凉处保存期为1个月（全自动定氮分析仪用） 测定步骤 1 消化 称取0.5-1g试样（含氮量5-80mg），准确至0.0002g，无损地放入凯氏烧瓶或消化管中，加入硫酸铜（CuSO4.5H2O）0.4g,无水硫酸钾（或无水硫酸钠）6g，与试样混合均匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃珠。把凯氏烧瓶或消化管放在通风柜里的电炉或消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，在加大火力（360-400度），直至溶液澄清后，再加热消化15min.。试剂空白测定：另取凯氏烧瓶或消化管一个，加入硫酸铜0.4g,无水硫酸钾（或硫酸钠）6g，浓硫酸10ml,加热消化至溶液澄清。 2 氨的蒸馏 1 常量直接蒸馏法。将试样消煮液冷却，加水60-100ml，摇匀，冷却。将蒸馏装置冷凝管的末端浸入35ml硼酸吸收液和加混合指示剂2滴的锥形瓶中，然后小心地向凯氏烧瓶或消化管中，加入氢氧化钠溶液至溶液颜色变黑，再稍加少许，使溶液混匀后，加热蒸馏，直至流出液体积约150ml。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开页面，继续蒸馏1-2min,并用水冲洗末端，洗液均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。 2 半微量水蒸气蒸馏法 将试样消煮液冷却，加水20ml，移入100ml容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。取35ml硼酸溶液，加混合指示剂2滴，使半微量装置的冷凝管末端浸入此液。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在在蒸馏过程中此溶液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10-20ml,注入蒸馏装置的反应室中，用少量水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加10ml 400g/L氢氧化钠溶液，小心拉起玻璃塞使之进入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水封好，防止漏气，蒸馏4min,使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min,用水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。饲料中粗蛋白质的测定
饲料粗蛋白测定方法
饲料中基本营养成分测定标准
粗蛋白测定GB-1
饲料中粗蛋白的测定方法
粗蛋白测定
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