犬细小病毒与犬细小病毒病 摘要 1．犬细小病毒 1．1什么是犬细小病毒 犬细小病毒是世界上其中一种最小的病菌，由3个蛋白质组成，是极度简单的病菌。正是由于它是如此简单的生物，这意味着这种病菌很难被分裂，所以要消灭它是非常的难。一般来说他们对绝大部分的清洁剂品免疫，它们能在适当的环境中存活1年。这种病菌对氯胺和甲醛较为敏感，次氯酸盐钠(sodium hypochlorite)，一般来说就是家庭用的漂白水是对付犬细小病菌唯一最常用的消毒剂。世界上有两种犬细小病毒，第一种是在1970年发现的，是不会引起疾病的犬细小病毒。。第二种在1978年发现，而这种是能引发严重疾病的。这种犬细小病毒能引起出血，肠胃炎，在成年犬中有很高的死亡率，还能引发心肌炎使8个礼拜以下的幼犬突然死亡。心肌炎现在已经很少见，这种疾病现今多数以肠炎感染的方式显现。像所有病菌一样，犬细小病毒本身没有复制能力，它们必须依赖一个母体细胞来提供养分。这种病菌通过排泄物和口腔传染。当病菌依附到母体，就是患病的狗狗身上，它就会在咽喉周围和扁桃腺还有淋巴繁殖然后通过血液散布到全身。犬细小病菌的潜伏期是2-14天，但是通常是3-7天。肠部是最易被感染的部位，从十二指肠末端到小肠中段，病毒会深入骨髓，然后不断大量繁殖。病菌依附在排泄物，呕吐物，尿液还有唾液，这些都是很有传染性的。康复的动物在两个礼拜里排泄物里还附带有病菌，但是也有可能长达一年之久。 1．2犬细小病毒的预防措施 注射疫苗：幼犬遗传母体的抗体能阻止感染22个礼拜左右，但是为了确保安全幼犬成长到8个礼拜左右就应该开始注射他们生来第一次的疫苗，在疫苗没有完全注射完毕(第一次注射要注射2-3次，忘了不好意思)之前是要避免带狗出去玩的。 很重要的一点是，如果狗死于犬细小病毒，除了不断要用漂白水清理狗舍和狗日常生活的地方外，要记住这种病毒可以存活1年之久，所以最好等1年以后才养另外一只狗，以免悲剧再发生。如果因细小病毒感染狗入院，兽医一般会隔离管理，主人如果要去看望必须带上手套，面具和特定的靴子进入，以免把病菌带回家里。康复后1-2个礼拜仍然带菌，所以在这段时间内还是应该隔离管理 2．犬细小病毒病 2.1什么是犬细小病毒病 犬细小病毒病是犬的烈性传染性肠道疾病，它引起大的呕吐、腹泻、食欲下降、高热、大量脱水、以致使幼犬和老龄犬死亡。 2.2犬细小病毒病的临床表现 犬接触细小病毒后在3-14天内出现体症，平均发病时间为5-7天。临床症状包括：食欲下降、沉郁、发热、呕吐、腹泻。成年犬开始可不一定出现发热现象，
犬细小病毒中国内蒙株VP2基因克隆及序列分析 Ξ董江丽1,李淑芬2,张鹤龄1 1 (内蒙古大学生命科学院,呼和浩特010021)2(内蒙古农业大学生物工程系,呼和浩特010018) 摘要:从我国内蒙古地区流行的犬细小病毒病病犬的肠溶物中分离提纯犬细小病毒(CPV )。提取病毒基因组DNA ,并以此DNA 为模板,采用人工合成的引物进行PCR 扩增,PCR 产物经B am H I 、S ac I 双酶切后,克隆于pUC19质粒的B am H I/S ac I 位点。重组质粒pUCVP2经PCR 鉴定、限制酶切分析和序列分析,结果表明:获得了犬细小病毒内蒙株(CPV 2IM )VP2基因的全长克隆,VP2基因全长1755nt ,与国外报道的美国1株(CPV 2N )、美国2株(CPV 2B )和猫全白细胞减少症病毒(FPLV )的核苷酸序列同源性分别为99.32%、98.29%、98.52%,氨基酸序列同源性分别为98.87%、97.09%、97.77%。 关键词:犬细小病毒;VP2基因;序列分析 中图分类号:S852.655 文献标识码:A 文章编号:1003-5125(2000)04-0379-09 犬细小病毒(Canine Parvovirus ,CPV )属自主复制的细小病毒,该病毒可引起犬细小病毒病,又称犬细小病毒性肠炎。本病以剧烈呕吐、出血性肠炎、白细胞显著减少为主要特征,不同品种和年龄的犬都易感,幼犬在16周出现心肌炎、死亡率高达20%～100%[1]。目前,国内主要采用CPV 灭活疫苗和犬五联弱毒疫苗进行免疫预防,由于母源抗体的干扰及CPV 毒株在强大的免疫压力下产生抗原漂移,常导致免疫失败。1993年,布日古德等用HA 和HI 调查内蒙警犬基地的CPV 感染,结果表明,在正常接种下,感染率高达26%[2]。 细小病毒是目前动物病毒中最小、最简单的一类单链线状DNA 病毒。CPV 病毒粒体直径为25nm ,无囊膜,呈二十面体,其基因组为单链、负链DNA ,全长5323nt 。基因组包括两个开放阅读框架(ORF )、3′端ORF 编码结构蛋白、5′端ORF 编码非结构蛋白。由晚期启动子起始转录的结构蛋白基因包括V P1和V P2,V P2位于V P1的C 端,且二者终止于同一密码子[3]。Langeveld 等的研究表明:CPV 粒体表面由60个结构蛋白亚单位装配而成,其中V P2占到50个以上,V P1不足10个。V P2基因的N 端及该基因上的蛋白转角结构区loop1和loop3是重要的B 细胞抗原表位区,可诱导机体产生中和性抗体,这些区域氨基酸残基的变化是导致CPV 毒株抗原漂移的主要原因[1]。我们从内蒙古地区的病犬肠溶物中分离提纯CPV ,扩增并克隆了CPV V P2基因,进行了序列分析,比较了我国CPV 毒株与国外CPV 毒株[3,4]间及其与同属的FPLV [5]在核苷酸和氨基酸序列上的差异,为进一步研制新型疫苗打 Ξ收稿日期:1999-07-05,修回日期:1999-09-06 基金项目:内蒙古自然科学基金资助项目(980202) 作者简介:董江丽(1971年-),女,内蒙古包头市人,硕士研究生,内蒙古大学讲师。 第15卷4期 中国病毒学Vol.15 No.4 2000年12月V IROLO GICA SIN ICA Dec. 2000
青海畜牧兽医杂志 2016年第46卷第1期（总第241期） 收稿日期：2015-12-27 1 病原学 在1977年,美国学者Eugster 和Nairn 最早从患有出血性肠炎的犬的粪便中分离得到了该病毒,之后,澳大利亚、法国、日本、南非和意大利等国均有此病的报道。我国也有学者对该病进行报道，梁士哲等于1982年最早报道了类似由犬细小病毒（Canine parvovirus ，CPV ）CPV 所致的犬出血性肠炎，次年徐汉坤等对该病进行了正式报导。经研究〔1~4〕表明，CPV 是细小病毒科、细小病毒属中的一个举足轻重的成员，它与该属的猫泛白细胞减少症病毒（FPV ）和水貂病毒性肠炎（MEV ）之间有密切的抗原关系〔5〕。 CPV 属于细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)。目前研究发现，犬细小病毒只有一个抗原型，即CPV-2。CPV-2粒子为等轴对称的二十面体，无囊膜，核衣壳为等轴对称的20面体，在电镜下呈圆形或六边形，直径约为23nm 。核酸是由单股DNA 构成的,DNA 分子质量为1.4×106-1.7×106，沉淀系数为23S-27S 。 该病毒有VP1、VP2、VP3三种多肽，其中衣壳蛋白的主要成分是由VP2构成的，它具有血凝活性，犬细小病毒在4℃和25℃条件下都能凝集猪和恒河猴的红细胞，但不可以凝集其他动物的红细胞，这一特性可作为病毒鉴定的参考指标〔7〕。近些年来，犬细小病毒的血凝性、抗原及宿主范围有了改变，目前研究表明CPV-2有a 、b 、c 三个亚型，但它们对于致病性无明显差异，而我国目前以CPV-2a 流行为主〔6〕。它对某些化学药物有一定抵抗性，如酒精、乙醚、氯仿；福尔马林、β-丙内酯、氧化剂等对该病毒有抑制作用,同时该病毒对温度也有一定耐受性，紫外线可以使其失活。2流行病学 犬细小病毒主要经消化道传染，全年均可感染，城市饲养犬的感染率比农村饲养犬的感染率要高。品种和年龄对该病的发生没有限制，日常饲养中，由于犬的长途运输，食物、水源、环境的改变，以及寒冷、狭窄的环境对犬造成的应激均会促进该病的发生。该病毒对纯种犬易感，以2~4月龄的犬感染为主，尤其是刚断奶或者还未断奶的犬容易感染。其中1月龄左右的犬易患心肌炎型，2~5月龄的犬易患肠炎型。有证据表明，人、虱、苍蝇和蟑螂可成为机械携带者，健康犬接触污染的饮水、食物或者患病犬的粪便，都是其主要传播途径〔8〕。3发病机理 Meunier 和MacCartney 等对犬细小病毒感染的发病机理进行了细致的研究〔9〕。首先病毒经消化道感染犬，主要攻击犬的上皮细胞和心肌细胞，然后犬分别表现胃肠道症状和心肌炎症状，幼犬多见于心肌炎型。病毒有一定的潜伏期，侵入机体后被感染的前2天,首先在口咽部复制,随着血流传播到其它器官,病毒感染的第3d 到第5d 时会出现病毒血症〔10〕。病毒在口鼻迅速传播，这也是我们使用胶体金试纸检测时需要采口鼻部分泌物的原因；然后病毒在咽喉部的淋巴组 织、肠系膜淋巴组织以及胸腺开始复制，随后感染小肠的肠隐窩，引起犬的腹泻，此时可以在肝、肺、脾、肾、心肌分离出该病毒。在严重感染的情况下,常常会出现嗜中性白细胞减少症和淋巴细胞减少症〔11〕。犬感染细小病毒后的3~4天开始通过粪便向外界排毒,有的犬会排大量红色稀便，有时呈喷射状，此时病毒呈单个散在,传染性最强，而7~10天后，动物的肠黏膜产生IgA ，犬细小病毒特异抗体增多,使散在的病毒被凝集在一起,此时动物的感染性降低,血凝性也大大降低甚至丧失。同时可以检测到血清抗体,血清抗体可以在体内保持至少1年〔12〕。4临床症状及病理变化4.1临床症状 犬细小病毒的自然潜伏期在5~7天，临床表现肠炎型和心肌炎型。 4.1.1肠炎型该类型发病的犬常发生于2~5月龄犬，潜伏期约在1~2周，其临床表现为病犬呕吐、腹泻，呕吐物开始为白色泡沫状，继而粘稠少量，逐渐变成黄色，极少数有淡绿色胆汁吐出并且带有血丝。排便次数增多，排黄色或灰黄色粪便，粘稠腥臭。中期表现为频繁呕吐，无食欲，腹泻常呈喷射状，排出番茄汁样粪便带有脱落的肠黏膜，体温可达40℃。后期的病犬体温下降至常温以下，可视粘膜表现苍白，肛门肌肉松弛，呼吸困难，脱水严重，各个器官衰竭而死。脱水主要表现为眼窝深陷，犬的鼻干燥，皮肤弹性下降，严重者昏迷休克。病程在一周左右，抵抗力较高或者打过疫苗的犬的症状较轻，治愈率较高，恢复较快。4.1.2心肌炎型该类型常发生于1月龄幼犬。其症临床状往往突然表现出来，病程较急，初期的精神尚好，仅有轻微的腹泻、呕吐和体温升高，随后发展迅速。病犬的临床症状有可视粘膜苍白，病犬迅速衰弱，表现呻吟，有干咳、呼吸困难等症状，听诊常有有心内杂音，心律不齐等，病犬因急性心力衰竭突然死亡。4.2病理变化 4.2.1肠炎型病犬逐渐消瘦，经常蜷缩，由于脱水，弹性降低，眼窝下陷，鼻也出现干燥，肛门由于长时间排稀便变得松弛，周围有粪便污染。犬由于呕吐，无法进食，胃内无食物，导致胃粘膜有大量的出血斑和溃疡灶。细小病毒感染肠隐窩胚上皮组织，使上皮细胞遭到破坏和萎陷，犬的肠绒毛变短。脾脏有广泛淤血,淋巴细胞弥漫性坏死，个体变小。动脉周围组织淋巴鞘变宽。肺脏的颜色较深红，挤压有血性泡沫，肺表明有出血点，肺泡毛细血管扩张、充血、出血,肺泡隔变厚,肺泡腔变小,其内可见脱落的上皮细胞、嗜中性粒细胞和大量红细胞〔13〕。 4.2.2心肌炎型心肌型病变主要表现在肺和心脏。肺脏呈灰红色，表面出血斑点，挤压有血样液体流出；气管和支气管充满泡沫样液体；心脏主要表现为心肌细胞变细，肌纤维疏松，肌浆减少,胞核变长,局部断裂、崩解，心肌毛细血管扩张，有充血的现象。心肌为白色条纹状，左心室壁变薄。具有诊断意义的病理变 犬细小病毒病研究进展 王羽迪，郝满良，张程,李俊杰 （河北农业大学动物医学院，保定，071000） 摘要：本文从犬细小病毒病的病原学、流行病学、诊断以及防治方面做一综述。关键词：犬细小病毒病；病原学；流行病学；诊断；防治中图分类号：S855.3文献标识码：A 文章编号：1003-7950（2016）01-0046-03 46
一例犬细小病毒病的诊治 摘要：对一例养犬场暴发的犬细小病毒病的流行病学、临床症状、病理剖检及实验室检查等进行了介绍，以及对病犬分病程、中西药结合对症抗病毒治疗，取得了对犬疫情的有效控制。 关键词：犬；细小病毒病；诊断；治疗 中图分类号：S858.292 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2014）02-0056-02 犬细小病毒病又称犬病毒性肠炎，是一种急性、高度接触性传染病。其临床特征是以剧烈呕吐、严重脱水、腹泻和血便为特征。发病率较高，死亡率高达60%以上。该病的发生无明显季节性，四季均发，但在寒冷的季节较多见。不同年龄、性别和品种的犬均易感。感染犬是该病的主要传染源，病犬的粪便、尿液、呕吐物及唾液中均含有病毒。青年犬多以肠炎综合症为主，幼犬多以心肌炎型发病。 1 基本情况 贺州市平桂管理区羊头镇梁某的养犬场，在2013年11月10日，有20只体重5kg左右的小狗发生轻重不同的呕吐、腹泻，严重者出现便血，另有6只死亡。随后，犬主到我处求诊，通过流行病学调查，临床诊断，病理剖检，实验室检
查，诊断为犬细小病毒病。经过5～7 d的综合治疗，除2只病重犬死亡外，其余病犬病情得到有效控制。 2 临床症状 病犬精神沉郁，体温升高至40 ℃以上，食欲减退，有的绝食，起初轻微呕吐或排软便，之后，随病程发展频繁呕吐和剧烈腹泻。呕吐物初为未消化的食物，后为带有黄绿色液体或黄白色浓稠带泡沫黏液，1 d出现多次呕吐。发病初粪便稀，中后期有的病犬水样腹泻，有的血便，排出的粪便带有番茄汁样恶臭，颜色呈现黄白色或乳白色。病犬渴欲增加，严重脱水，消瘦，眼窝深陷，鼻镜干燥。 3 病理剖检 病犬胃黏膜充血肿胀，有少量出血点，小肠出血，肠内膜大量出血，回肠黏膜潮红、肿胀、出血，肠系膜淋巴结肿大。 4 实验室检查 ①取病死犬的心脏、肝脏、肾脏组织触片，革兰氏染色镜检未见细菌。采取肝脏病料接种肉汤，普通琼脂板培养基，37 ℃培养24 h，均无致病性细菌生长。②血清学检查：采集病犬粪便经氯仿处理后作血凝试验，使用0.5%～1.0%猪红细胞作指示系统，稀释液为含0.05%牛血清白蛋白的0.015 mol/L、pH 6.8后磷酸盐缓冲液，反应温度4 ℃。检查结果若血疑价大于1∶80，即为阳性。
分类号：单位代码：10019 密级：学号：S0******* 硕士学位论文 北京地区犬细小病毒VP2基因序列分析和流 行病学调查 Sequence analysis of VP2 gene and epidemiological survey of canine parvovirus in Beijing 研究生：宋永奇 指导教师：吕艳丽副教授 合作指导教师： 申请学位门类级别：农学硕士 专业名称：预防兽医学 研究方向：兽医微生物学与免疫学 所在学院：动物医学院 2008年 5 月
独 创 性 声 明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：时间：年月日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名：时间：年月日 导师签名：时间：年月
摘 要 犬细小病毒（Canine parvovirus，CPV）感染是目前危害养犬业的最严重传染病之一。为了了解CPV的变异情况，本研究在2006-2007年间不同时间采集CPV感染患犬粪便样本20份，经PCR方法从中扩增出了CPV VP2基因，并对该基因进行了序列测定与分析；为了了解本病的流行状况，本研究对临床上常用的CPV检测方法的可靠性进行了评估，并在此基础上对2005-2007年到中国农业大学动物医院诊治的所有有呕吐、腹泻和呕吐或腹泻症状的犬粪便样本的CPV检测结果进行了统计分析，获得如下结果： VP2基因全长1755bp，编码585个氨基酸。经核苷酸及推导的氨基酸序分析显示，20个样本中，有19个属于CPV-2a，1个为CPV-2b；所有病毒样本VP2的297氨基酸残基位点均发生Ser→Ala的置换；基因型为CPV-2a样本的555氨基酸残基位点均发生IIe→Val的置换。与经典的CPV-2a/2b参考毒株比较，80.0%（16/20）的样本在324位有Tyr→Ile的置换；样本CPV/BJ005/07和CPV/BJ008/07的139位氨基酸残基由Val置换为Ile；样本CPV/BJ004/07和CPV/BJ050/07分别在226与382位发生置换（Ser→Asn，和Arg→Lys)。应用DNAStar软件对Ile-139、Asn-226、Ile-324和Lys-382置换进行的抗原表位变化分析表明，这4处氨基酸残基置换都不会改变病毒的抗原表位。 将犬细小病毒抗原检测试剂盒与HA-HI和PCR方法进行了比较：犬细小病毒抗原检测试剂盒与HA-HI法比较，其敏感性、特异性和总符合率分别为100.0%、84.5%、90.8%；与PCR法比较，其敏感性、特异性和总符合率分别为85.3%、96.2%、90.0%。这表明该试剂盒可以用于CPV 的流行病学调查。 CPV检测数据统计分析显示，2005、2006和2007年度CPV年检出率分别为24.14%、35.73%和25.52%；该病一年均可发生，但以第一和第四季度发病率较高；各年龄犬均可感染，但1-3月龄幼犬易感性最高。 关键词：犬细小病毒（CPV），VP2基因，序列分析，诊断方法，流行病学调查
犬细小病毒病研究进展 犬细小病毒病是由犬细小病毒（Canine parvovirus,CPV）引起的犬的一种急性传染病。本病以犬的剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少以及心肌炎为主要特征。不同品种和年龄的犬都易感染，发病率高，传染性强，死亡率高，是危害我国养犬业最为严重的疾病之一，可造成严重的损失。 1977年美国Eugster从患出血性肠炎病犬粪便中发现了犬细小病毒，1982年，我国梁士哲等最早报道了类似CPV所致的犬出血性肠炎；1983年，徐汉坤等正式确认本病的流行。犬细小病毒的发现虽然只有30年的时间，但该病对犬的危害严重。本文就病毒生物学特性及其基因组结构、流行病学、发病机理及病理变化、临床症状、疫苗研发以及病原的检测方法等方面的研究进展进行概述。 目前尚无CPV感染的有效治疗药物，对于发病动物，可以对症治疗配合高免血清或单克隆抗体治疗。预防该病的有效措施是加强饲养管理和准确诊断基础上的有效疫苗接种。 1.1 犬细小病毒病的流行病学特征 CPV主要感染犬，特别是断奶前后的幼犬。其他犬科动物，如貂、狐、狼等也易感。病犬是本病的主要传染源，病毒随呕吐物、唾液、粪便等排出体外，污染饲料、垫料、饮水以及周围环境、康复犬仍可通过粪便长期向外排毒。健康易感犬直接接触病犬或带毒犬、或摄入污染的食物和饮水通过消化道而遭受感染。此外，人工注射、肌肉或静脉接种也能引起本病的发生。犬感染细小病毒后发病急，死亡率高，不同年龄、性别、品种的犬均可感染。乳幼犬由于可能从母体获得抗体，所以较少发病；断奶后的幼龄犬最为易感，往往以同窝暴发为特征；成年犬一般只出现感染后的免疫反应，很少出现明显的临床症状，但近年也常发生成年犬因出血性肠炎而致死的严重病例[22]。4~6周龄犬感染后呈致死性心肌炎的为多；8~10周龄的犬则以肠炎为主。小于4周龄的仔犬和大于5周龄的老犬发病率较低，一般分别为2%和16%。根据临床发病犬的种类来看，纯种犬和外来犬的发病率高于土种犬。 本病一年四季均可发生，但以天气寒冷的冬春季多发，粪便中含毒量最高。犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)引起的，犬以剧烈呕吐、
目录 第一章引言 (1) 1.1狂犬病概述 (1) 1.1.1狂犬病 (1) 1.1.2狂犬病流行病学 (1) 1.1.3狂犬病临床症状与致病机理 (1) 1.1.4狂犬病毒基因组结构及编码蛋白 (2) 1.1.5狂犬病毒的生活周期 (3) 1.1.6狂犬疫苗研究进展 (3) 1.2 犬细小病毒病概述 (4) 1.2.1犬细小病毒病 (4) 1.2.2犬细小病毒起源与演化 (4) 1.2.3犬细小病毒病的临床症状与致病机理 (5) 1.2.4犬细小病毒分类学和结构 (5) 1.2.5犬细小病毒疫苗研究进展 (6) 1.3 负链RNA病毒的反向遗传操作和应用 (6) 1.3.1负链RNA病毒的反向遗传操作 (6) 1.3.2负链RNA病毒拯救过程的优化 (8) 1.3.3反向遗传技术在狂犬病毒中的应用 (8) 1.4 目的与意义 (10) 第二章犬细小病毒VP2基因克隆分析及原核表达 (11) 2.1 材料与方法 (11) 2.1.1 病料 (11) 2.1.2 主要试剂 (11) 2.1.3 引物的设计与合成 (12)
2.1.4 VP2基因的克隆与测序 (12) 2.1.5 重组表达质粒的构建与鉴定 (13) 2.1.6 VP2蛋白的原核表达及Western Blotting鉴定 (13) 2.1.7 VP2蛋白切胶免疫豚鼠及豚鼠血清的免疫学鉴定 (13) 2.2 结果与分析 (14) 2.2.1 VP2基因的扩增以及序列分析 (14) 2.2.2 VP2基因的系统进化树分析 (15) 2.2.3目的蛋白表达载体构建及鉴定结果 (16) 2.2.4 VP2蛋白的表达和Western Blotting 检测 (17) 2.2.5 多克隆抗体的制备及免疫原性分析 (18) 2.3 讨论 (18) 第三章重组病毒RBNSP-CPV-VP2的拯救及生物学特性研究 (20) 3.1 材料与方法 (20) 3.1.1 质粒、细胞 (20) 3.1.2 主要试剂 (20) 3.1.3 引物设计与合成 (21) 3.1.4 PCR扩增犬细小病毒VP2基因 (21) 3.1.5 表达VP2蛋白重组狂犬病毒基因组全长cDNA克隆的构建 (21) 3.1.6 重组病毒的拯救 (21) 3.1.7 免疫荧光鉴定重组病毒 (22) 3.1.8 重组病毒的传代和毒价测定 (22) 3.1.9 Western Blotting鉴定外源蛋白表达 (22) 3.1.10 外源基因稳定性检测 (22) 3.2 结果 (23) 3.2.1 犬细小病毒VP2基因的扩增结果 (23) 3.2.2 重组质粒双酶切鉴定结果 (23)
毕业设计（论文）题目：不同药物组合对犬细小病毒病的疗效姓名： 学号： 系部： 班级： 专业： 指导老师：职称： 二0年月
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摘要 犬细小病毒（CPV）是常见的犬类传染病之一。该病例（犬雄性 3月龄泰迪）经诊断判断为犬细小病毒病，其临床症状主要为呕吐、腹泻、血便。在诊治中，以对因治疗和对症治疗相结合的方式进行治疗。犬细小病毒（CPV）属细小病毒科，细小病毒属，其病原体是犬细小病毒，无囊膜、单股DNA，病毒主要侵害两种细胞：一种是肠上皮细胞，另一种是心肌细胞，分别表现胃肠道症状和心肌炎症状，在一些肿大的心肌纤维核内可以检出包涵体。[2]临床上以剧烈呕吐、血样粪便、出血性肠炎、脱水、非化脓性心肌炎为特征，其感染率高达100%，致死率高达10%~15%。 【关键词】：犬细小病毒；诊断；治疗
1.病原学 1.病原及流行病学 1、1犬细小病毒（CPV）属细小病毒科，细小病毒属，其病原体是犬细小病毒，无囊膜、单股DNA，病毒主要侵害两种细胞：一种是肠上皮细胞，另一种是心肌细胞，分别表现胃肠道症状和心肌炎症状，在一些肿大的心肌纤维核内可以检出包涵体。[2]临床上以剧烈呕吐、血样粪便、出血性肠炎、脱水、非化脓性心肌炎为特征，其感染率高达100%，致死率高达10%~15%。 1、2犬细小病毒式1997年首先在美国被发现的，从发现该病毒至今，世界各地均有流行，是危害犬类的主要烈性传染病之一，主要经消化道传染，城市饲养犬的感染率较农村饲养犬要高。本病一年四季均可发生，寒冷季节多发，多见于比较聚集的单位或地区[3]不同性别、年龄和品种的犬均能感染本病，但以未成年的幼犬最为易感，纯种犬比土种犬易感性高，而且病情反复重，死亡率也高。治疗措施 1、抗病毒治疗组合干扰素(CIFN)*3，广谱抗病毒剂，并不直接杀伤或抑制病毒，而主要是通过细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，抑制病毒的复制。 2、消炎防继发感染犬硫酸庆大霉素*3，是一种氨基糖苷类抗生素, 抗菌谱较广，抗菌活性强。主要用于治疗细菌感染，尤其是革兰氏阴性菌引起的感染。庆大霉素能与细菌核糖体30s亚基结合，阻断细菌蛋白质合成。 速克(头孢噻呋)4mg∕kg *3，具广谱杀菌作用，对革兰氏阳性. 革兰氏阴性均有效。 犬地塞米松磷酸钠0.2mg∕kg，肾上腺皮质激素类药。具有抗炎、抗过敏、抗风湿免疫抑制作用.常用于过敏及自身免疫性疾病 3、止血（便）维生素C注射液20mg∕kg *3，又名抗坏血酸，有一定的止血
一例犬细小病毒的病例 犬细小病毒属主要对犬类感染性强，尤其是抵抗力较弱的幼犬，一旦发病死亡率比?^高。主要传染源为犬类的粪便、尿液以及呕吐物，这其中又以粪便为甚。症状分为出血性肠炎型及心肌炎型。出血性肠炎型一般常发生在犬子刚换环境后，潜伏期3～5天，患病后初期病犬厌食、精神不振、偶见发热伴随轻度呕吐，随后呕吐频繁、剧烈腹泻、呕吐物从食物到胃液，甚至有胆汁，呈顽固性呕吐；造成体液大量散失和不食；腹泻则从正常腹便变成水泻，病重时甚至从肛门喷出带有血的粪便，恶臭味非常重。病犬迅速脱水、消瘦、毛色暗淡、毛型凌乱、四肢冰凉，再往后不及时诊疗犬往往死亡，病程一般不超过1周。心肌炎症型多见于4～6周幼犬，通常没有先兆性，或仅表现轻微腹泻，继而突然衰弱、呻吟、黏膜发绀、呼吸极度困难、脉搏快而弱，对心脏听诊常见杂音，尸体剖检可见心脏扩张，心肌有苍白条纹，几天内死亡，也有的幼犬仅见轻度腹泻后即死亡。 2017年12月，蒙自市的一对夫妇带着一只金毛犬来诊，该犬10公斤，性别：母，年龄：4个月。主人叙述，该犬已有5天没有进食，又吐又泻，拉出大便成番茄汁样。该犬体态极度消瘦，四肢冰凉，乏力体温39.6℃，眼神呆滞，鼻镜
发干，黏膜苍白，严重贫血，严重脱水，在检查时又吐出带血的黄绿色黏液，用细小病毒试纸测试显示为阳性，诊断结果为细小病毒性肠炎。 对症治疗，大量补液，抗病毒，止血，止吐，消炎，补充营养，注射犬用免疫球蛋白，让主人对犬舍环境进行消毒。抗病毒，犬细小病毒单克隆抗体按2毫升/公斤体重皮下注射，每24小时1次。犬免疫球蛋白5毫升/次皮下注射，每天1次。补充营养，50%葡萄糖20毫升，维生素C2毫升（0.5克），静脉注射，每天2次。止吐，维生素B60.2克，静脉注射，每天2次。止血，止血敏4毫升/次，每天3次，2次静脉注射，1次肌肉注射。消炎，头孢曲松钠100毫克/公斤体重静脉注射，每天1次。经过1天治疗，第2天病犬眼神略有好转，呕吐物里的带血量也有所减少，呕吐次数也有所减少。治疗4天后，病犬能自己走动，不吐不泻，并且有吃食欲望，少喂一点糊状食物；治疗6天后痊愈，间隔2周后打防疫针，已恢复正常。 犬细小病毒病发病急、死亡快，如果治疗不及时死亡率极高，在治疗过程中一定要注意补充营养，悉心照料，可使治愈率明显提高。病犬刚刚恢复食欲时，不能一次喂得太多，否则肠胃难以适应又会导致呕吐，引起病情复发，少量多餐，喂糊状温热食物2天后，恢复正常饮食。
Re search Paper 研究报告 微生物学报Acta Microbiologica Sinica 49(5 :648-652; 4May 2009ISS N 0001-6209; C N 11-1995ΠQ http :ΠΠjournals. im. ac. cn Πactamicrocn 基金项目:国家自然科学基金(30771586 ; 河北省自然科学基金(C2008000244 ; 河北省人事厅留学人员科技活动择优资助项目(20080808 3 通信作者。T el :+86231227528473; E 2mail :feizhong2000@yahoo. com 作者简介:王微(1983- , 女, 河北省秦皇岛人, 硕士研究生, 主要从事基因工程药物方面的研究。E 2mail :airenwu@1261com 收稿日期:2008211219; 修回日 期:2009202225Δ引用自该课件 犬细小病毒VP2王微1 , 李秀锦2 , 13 1, 111, 李巍 1 (1 (2, 秦皇岛066004 摘要:【目的】利用真核细胞分泌表达犬细小病毒VP2蛋白和研究其特性。【方法】为构建犬细小病毒(Canine parv ovirus , CPV VP2基因的真核分泌型表达载体, 首先通过酶切从含有人C D5信号肽序列的质粒中将C D5信号肽基因片段切出, 将其连接到真核表达载体pcDNA311A 的多克隆位点上, 构建成pcDNA3112C D5sp
质粒。然后再通过PCR 方法从含有犬细小病毒VP2基因的质粒中扩增VP2基因, 并将其插入到pcDNA3112C D5sp 载体中C D5信号肽的下游, 构建成VP2基因的真核分泌型表达载体pcDNA 2C D5sp 2VP2。经磷酸钙介导转染293T 细胞, 使其在真核细胞中进行分泌表达, 并通过E LIS A 检测表达的VP2蛋白与犬转铁蛋白受体(T fR 结合的活性。【结果】序列分析结果表明, 本实验构建的犬细小病毒VP2基因真核分泌型表达载体结构正确, 将该表达载体转染的293T 细胞, 在培养基中通过Western 2blot 检测到有VP2重组蛋白的存在。经E LIS A 检测表明表达的重组VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。【结论】利用人的C D5信号肽实现了犬细小病毒VP2蛋白在真核细胞中的分泌表达, 表达的VP2蛋白具有与犬转铁蛋白受体结合的活性。关键词:犬细小病毒;VP2蛋白;293T 细胞; 分泌性表达;T fR 中图分类号:S852165,Q786文献标识码:A文章编号:000126209(2009 0520648205 犬细小病毒病是由犬细小病毒(Canine parv ovirus , CPV 引起的一种急性传染病。此病主要表现急性出血性胃肠炎和急性心肌炎。传染性强, 发病率和死亡率高, 对我国养犬业和经济动物养殖 业造成极大的危害[1-2] 。 CPV 是一类结构简单的单链线状DNA 病毒, 病毒颗粒直径约为25nm , 无囊膜, 成二十面体。病毒基因组全长为5323nt , 含有2个ORF ,5′端主要编码早期转录的调节蛋白(NS1和NS2 ,3′端编码晚期转录的结构蛋白, 即病毒衣壳蛋白(VP1和 VP2 ,VP2是衣壳蛋白的主要成分。VP2不仅具有较强的免疫 原性, 可用于制备亚单位疫苗或DNA 疫苗[3] , 同时 VP2可以与宿主细胞膜上的转铁蛋白受体(T fR 结 合介导细小病毒的感染[4-6]