石榴叶乙醇水提取物的抑菌杀虫活性研究
王东方谷鹏柏显首王庆忠
山东省高校生物化学与分子生物学重点实验室（潍坊学院生物与农业工程学院）,山东,潍坊,261061)
摘要用索氏提取法以乙醇水加热提取石榴叶的有效成分，并对提取物的抑菌作用和对果蝇与槐蚜触杀活性进行了探究。结果表明，石榴叶提取物对革兰氏阳性菌（白色葡萄球菌）有明显抑制作用，其有效抑菌浓度值为40mg/mL ；对果蝇的药理作用明显，数据变化显著，有上升趋势；对槐蚜有明显的触杀活性，其LC50为10.4203mg/mL。因此，石榴叶提取物对革兰氏阳性菌及昆虫有良好的抑菌杀虫效果。
关键字石榴叶；提取物；生物活性；细菌；果蝇
[中图分类号] S482.1 [文献标识码] A
The Study of the Ethanol Antimicrobial, Insecticidal Biological Activity of the Ethanol and Water Extract of Pomegranate Leaf
Wang Dongfang, Gu Peng, Bai Xianshou, Wang Qingzhong
Key Laboratory of biochemistry and molecular biology in university of Shandong province (College of bio-engineering and agriculture, Weifang university), Shandong, Weifang, 261061
[abstract] In present study, the active ingredient was extracted fron pomegranate leaf by Soxhlet extraction method with ethanol and water solution accompanied by heating, and preliminary study of the extract that can interacted bacteria bacteriostatic action and the activity of the drosophilas and the Cassia aphids pharmacological role initial inquiry. The results showed that pomegranate leaf extract have significantly suppress of Gram-positive bacteria (Staphylococcus albus),the effective inhibitory concentration value of 40mg/ml; and it has obviously pharmacological on Drosophila with data changes, and rising;With pharmacological effects Cassia aphids value , its LC50 is 10.4203mg/mL. Therefore, the pomegranate leaf extract is good antibacterial insecticidal effect on gram-positive bacteria and insect. [Key words] pomegranate leaf; extract; biological activity ; Bacterial; drosophilas 石榴叶为石榴科植物石榴(punica granatun L)的叶。石榴叶具有收敛止泻、解毒杀虫功效，主治泄泻、痘风疮、癞疮、跌打损伤，在埃及作为传统的药材。以前的研究表明，科学研究者对石榴叶化学成分进行了许多研究，取得了较大进展，石榴叶中含有20多种化合物，包括熊果酸、白果酸、白桦脂酸、甘露醇、菟资单宁、鞣花单宁以及黄酮苷类等[1]。石榴叶水浸剂能显著增强大鼠胃蛋白酶活性，促进胆汁分泌，并可以加强大鼠小肠蠕动；能显著抑制大鼠胃液分泌和总酸排出量[2]。研究还观察到石榴叶水浸剂对大鼠试验性胃溃疡的作用，发现石榴叶水浸剂可显著降低大鼠胃溃疡发
生率，并减少胃溃疡面积和降低胃溃疡程度。石榴叶水提取物在调节血脂、清除氧自由基等方面也有活性，具有调脂作用的活性部位——石榴叶鞣质，在体外试验中，石榴叶鞣质能明显抑制还原酶活性，石榴叶鞣质的效价较辛伐他汀强100倍左右，同时也提示了石榴叶鞣质降低胆固醇的作用机制，部分与抑制该酶活性有关[3]；鞣质能凝固微生物体的原生质及多种酶，因而对各种细菌和真菌有抑制作用。临床研究已经证实石榴皮对淋球菌有明显的抑制作用。[4]
本实验用乙醇水提取石榴叶的有效成分，然后用提取液对细菌进行抑菌试验和果蝇毒理实验，统计和分析实验所得数据，最终得到试验结果。
1 材料和方法
1.1 材料与仪器试剂
材料来源：石榴叶采集于潍坊学院校园内；大肠杆菌（革兰氏阴性菌）和白色葡萄球菌（革兰氏阳性菌）菌株取自潍坊学院生物与农业工程学院微生物实验室，菌种斜面培养进行繁殖；成年雌雄黑腹果蝇取自遗传实验室，后在微生物实验室内扩代培养了；槐蚜采集于潍坊学院校内。主要仪器有800Ａ型中药粉碎机（青州市精诚医药装备制造有限公司）、RE－5299旋转蒸发仪、SHZ－IIIA 循环水真空泵（上海一凯设备有限公司）、CJ一1680型超净工作台，YSQ．SG41．280型手提式压力蒸汽灭菌锅、低温冰箱、指形管等。主要试剂有乙醇（上海凌峰化学试剂有限公司生产）、二甲基亚砜（DMSO）（国药集团化学试剂有限公司）、链霉素、青霉素；牛肉膏、蛋白胨、琼脂；蔗糖、Nacl、甲醇、HCl、NaOH等。以上药品均为A．R级。
1.2 石榴叶提取物的制备
石榴叶经清洗和晾干；烘箱中65℃烘干后，用中药粉碎机粉碎15～30s；称取100g粉末置入索氏提取装置的烧瓶中，加入75％乙醇500ml，在电磁恒温搅拌器上搅拌煮沸回流萃取2h；真空抽滤后用旋转蒸发仪40℃浓缩至干；称重后，用10％DMSO配制成配制成浓度为60mg/ml储存液备用[5]。1.3 石榴叶提取物对细菌的抑菌活性测定
将培养基制成平板，细菌用牛肉膏蛋白胨培养基。用无菌生理盐水把各种菌种（大肠杆菌和白色葡萄球菌菌种）配制成106～107个／L孢子悬液，吸取0.2 mL孢子悬液均匀涂抹到灭菌平板上。[6]用10% DMSO将石榴叶提取物配制成浓度分别为10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L、40 mg/L、50 mg/L、60 mg/L的溶液。将直径约0.4cm滤纸圆片置于各质量浓度的溶液中浸泡，将浸渍过提取物溶液的滤纸片风干，放到每个涂有菌液的平板上，等距离放4片，每个试验平行3次，文中所列数据为平均值。细菌培养在37℃下24 h。测定抑菌圈直径大小，并用无菌水作空白对照(以CK表示)，以直径大于1.00cm为有效果来确定抑菌效果[7]。以上操作均在无菌条件下进行。统计结果（如图1）。
0.20.40.60.811.21.41.60
10
20304050
60
不同药物浓度下抑菌圈大小
药物浓度（mg/ml）
抑菌圈大小（c m ）
大肠杆菌白色葡萄球菌
图1 提取物的抑菌效果
用10% DMSO 分别配制链霉素、青霉素各浓度。链霉素：30u /mL 、50u /mL 、80u /mL 、100u /mL 、150u /mL 、200u /mL ；青霉素：10 mg/L 、1 mg/L 、10-1 mg/L 、10-2 mg/L 、10-3 mg/L 。作为参照，将直径约0.4cm 滤纸圆片置于各质量浓度的溶液中浸泡，将浸渍过提取物溶液的滤纸片风干，放到每个涂有菌液的平板上，等距离放4片，每个试验平行3次，文中所列数据为平均值。细菌培养在37℃下24 h 。测定抑菌圈直径大小，并用无菌水作空白对照(以CK 表示)，以直径大于1.00cm 为有效果来确定抑菌效果。以上操作均在无菌条件下进行[7]
。统计结果。（见图2和图3）
00.511.52
30
50
80100
150
200
不同链霉素浓度下抑菌圈大小
链霉素浓度
抑菌圈大小
大肠杆菌
白色葡萄球菌
图2 链霉素的抑菌效果
00.511.522.50
0.001
0.01
0.1
1
10
不同青霉素浓度下抑菌圈大小
青霉素浓度（mg/ml）
抑菌圈大小（c m ）
大肠杆菌
白色葡萄球菌
图3 青霉素的抑菌效果
1.4 石榴叶提取物对果蝇的毒理活性测定
研究石榴叶提取物对果蝇的影响方案常采用棉球饲喂法[8]
。
（1）配制果蝇培养基，饲养繁殖黑腹果蝇。（2）供试饲养液的制备：用2%的蔗糖水溶液作为对照培养液；在2%的蔗糖水溶液中加入不同量的石榴叶提取物，配制成一定浓度梯度：1、2、3、4、5及10mg/mL 。（3）果蝇毒性试验：供试果蝇为黑腹果蝇成虫，用乙醚麻醉后，饥饿5~6h 后饲以不同浓度的供试溶液，准备10个指形管，每指形管中放置一个0.2g 的脱脂棉球，棉球上蘸有大约2.5mL 饲养液，各指形管中接入大约25头果蝇，设置5次重复，用2%的蔗糖水溶液作为对照组，所有的指形管置于温度25℃、相对湿度为50~60%、光照周期为12D/12L 的培养箱中，连续饲养4d ，每12~13h 记录各处理的死亡果蝇数，4d 统计汇总各组果蝇死亡数[9]
。（见图4）
y = 0.95515x+10.07
R 2 = 0.9635
010203040506070800
10
20
3040
50
60
提取物浓度（mg/ml ）
致死率（%）
24h 累计死亡率(%)线性 (24h 累计死亡率(%))
图4 不同浓度下的死亡率图
1.5 石榴叶提取物对槐蚜的杀虫活性测定
石榴叶提取物的杀蚜活性测定采用室内叶片法。采集虫口密度大的国槐枝叶带回实验室，选择带蚜叶片，剔除不合格的虫，以大小适中的健康无翅成蚜为试虫，并将带虫叶片修剪为每片25头虫左右，置于铺有滤纸的培养皿中。用10％DMSO 水溶液梯度稀释石榴叶提取物储存液，并喷洒于各个试验皿中，以10％ DMSO 水溶液作为对照，然后置于温度为25℃、湿度为80％的培养箱内培养，24ｈ后统计蚜虫死亡率。每浓度3次重复，死亡率以3次重复的平均值计。
[10]
死亡率（%） ＝
试虫总数
试虫死亡数
×100 ；
校正死亡率（%） ＝
）
对照组死亡率（—）对照组死亡率（—）处理组死亡率（%100%%×100 。
2 结果分析与小结
2.1 石榴叶提取物及青霉素、链霉素对细菌的抑菌活性测定
通过以上3个图表（图1、2和3）可以看出，提取物的成分与青霉素的效果相似，对白色葡萄球菌
（即革兰氏阳性菌）有明显效果，而对大肠杆菌（即革兰氏阴性菌）无明显效果。
2.2 石榴叶提取物对果蝇的毒理活性测定结果
由图4可以看出，提取物对果蝇有很好的触杀作用，浓度越高，死亡数越多。其触杀作用的毒力回归方程Ｙ＝0.95515ｘ+10.07，相关系数为R2＝0.9635，其LC50=52.36mg/ml
表１石榴叶提取物对槐蚜的触杀作用（±SEM，n=4）[11]
提取液浓度／mg·mL-124h死亡率／%24h校正死亡率／%
60 96.84±1.2Δ96.72
50 95.07±1.9Δ94.89
40 86.3±1.2Δ89.52
20 77.4±1.4Δ80.29
10 38.9±2.1Δ40.35
对照 3.6±1.7Δ
注：Δ表示与对照组比较差异显著（Ｐ＜0.05）
2.3 石榴叶提取物对槐蚜的杀虫活性测定结果
由表１可以看出，提取物对槐蚜有很好的触杀作用，20～40ｍｇ／ｍＬ时，校正死亡率达到89.52％；当浓度为60mg／mL时，校正死亡率达到96.72％。其触杀作用的毒力回归方程Ｙ＝－21.28ｘ＋120.71，相关系数为R2＝0.864，LC50为10.4203mg/mL。
2.4 绪论与讨论
石榴叶提取物对革兰氏阳性菌有明显的抑菌效果，对革兰氏阴性菌效果不明显；提取物对黑腹果蝇成虫有明显毒害作用，且毒性效果与浓度呈正相关，可用作除蝇成分。提取物对槐蚜有明显的防治效果，60mg/ml提取物24h后的防治效果达96.72％，与目前使用的化学农药吡虫啉的防治效果相比无显著差异（P＜0.05）。
石榴是我国重点发展的经济水果之一，在我国各地均有栽培，种植面积正大规模发展。但是在很多地区石榴叶仅作为茶叶饮用，这就造成了严重的资源浪费。在今后，社会应进一步加强石榴叶的药理活性成分研究，为临床研制出一个新的有效天然药物，为天然性新药的开发打下良好基础[12]。石榴叶越来越明确的药理作用已经越来越受到人们的关注，相信随着对天然性药物研究的深入，必将拥有一个更加明亮的开发前景。
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收稿日期：２００７－０６－３０ 基金项目：湖北省“十一五”重点科技攻关项目（２００６ＡＡ２０５Ａ０１）；湖北省农业科技创新中心资助项目（２００７－６２０－００１－０３）作者简介：张国强（１９８２－），男，山东潍坊人，２００５级硕士研究生，（电话）１３７９７０７９４９５（电子信箱）ｇｕｏｑｉａｎｇ＿ｆｓｅ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ； 通讯作者，杨自文，研究员，博士，（电话）０２７－８７３８９７３２（电子信箱）ｚｗｙａｎｇ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｗｈ．ｈｂ．ｃｎ。 文章编号：０４３９－８１１４（２００７）０５－０７４１－０３ 第４６卷第５期２００７年９月 湖北农业科学 ＨｕｂｅｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ Ｖｏｌ．４６Ｎｏ．５Ｓｅｐ．，２００７ 泡菜发酵是一种具有２０００多年历史的乳酸发酵工艺。泡菜发酵主要是乳酸发酵，发酵过程中会产生大量有机酸，细菌素，益生菌等，可以调节动物和人体肠道微生态平衡，对机体的健康十分有益，并有帮助消化，防止便秘，防止细胞老化，降低胆固醇，抗肿瘤以及调节人体生理机能等保健和医疗作用［１］。当前各国学者致力于将随机的经典式筛选转变为目标明确的理性筛选，创建新的筛选模型与方法［２］。本文设计了一种使用１０ｍＬＥｐ管培养菌液，用 ＣａＣＯ３中和酸法筛选产抑菌活性物质乳酸菌的新型 筛选方法。 １ 材料与方法 １．１ 样品来源 各地市售泡菜（包括四川、湖北、湖南、江苏、安 徽、福建、甘肃、河南、山东等地） １．２供试指示菌 大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）；鼠伤寒沙门氏菌 （Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｎｉｕｎｓ）；金黄色葡萄球菌 （Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｃｏｃｕｓａｕｒｅｕｓ）；枯草芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；蜡状芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｅｒｅｕｓ），以上菌株 均由湖北省生物农药工程研究中心提供。 １．３培养基［３，４］ 乳酸菌分离培养基（ＢＣＰ培养基）；乳酸菌筛选 培养基（改良ＭＲＳ培养基）；乳酸菌发酵培养基（改良ＭＲＳ液体）；指示菌生长培养基（ＬＢ液体培养基）；抑菌实验培养基（ＬＢ培养基）。 １．４方法 １．４．１乳酸菌分离与鉴定 取各种液体样品（固体 样品需先剪碎、研磨处理），分别用无菌生理盐水作梯度稀释，选择适宜的稀释浓度梯度（１０４，１０５，１０６）用 Ｌ棒涂布ＢＣＰ平板，３０℃厌氧培养４８ｈ，挑取颜色 变黄特征性菌落，多次划线纯化后保存于ＭＲＳ斜 面试管，并做革兰氏染色镜检，符合乳酸菌形态特征的初步判定为乳酸菌菌株。 １．４．２乳酸菌发酵液制备在灭菌的１０ｍＬＥｐ管 一种产抑菌活性物质乳酸菌的快速筛选方法 张国强１，２，杨自文２，王开梅２ （１．西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西杨凌 ７１２１００；２．湖北省生物农药工程研究中心，武汉４３００６４） 摘要：采用１０ｍＬＥｐ管培养菌液，用ＣａＣＯ３中和酸法筛选产抑菌活性物质乳酸菌的新方法，与传统方法相比具有工作量小，检测手段灵敏，筛选效率高等特点，特别适用于筛选微好氧菌及兼性厌氧菌。关键词：乳酸菌；快速筛选；抑菌活性物质；ＣａＣＯ３中和酸法中图分类号：Ｑ９３９．１１＋７；Ｑ９３．３１ 文献标识码：Ｂ ＡＭｅｔｈｏｄｆｏｒＲａｐｉｄＳｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓＰｒｏｄｕｃｉｎｇＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃＳｕｂｓｔａｎｃｅ ＺＨＡＮＧＧｕｏ－ｑｉａｎｇ１，ＹＡＮＧＺｉ－ｗｅｎ２，ＷＡＮＧＫａｉ－ｍｅｉ２ （１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＡ＆ＦＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ７１２１００，Ｓａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ； ２．ＨｕｂｅｉＢｉｏｐｅｓｔｉｃｉｄｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，Ｗｕｈａｎ４３００６４，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒｒａｐｉｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｒｏｄｕｃｉｎｇａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｕｂｓｔａｎｃｅ：ＣｕｌｔｕｒｉｎｇＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｙＥｐｔｕｂｅｓａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｂｙＣａＣＯ３ｔｅｓｔｉｓｒｅｐｏｒｔｅｄｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ．Ｔｈｉｓｋｉｎｄｏｆｍｅｔｈｏｄｉｓｍｏｒｅｃｏｎｖｅｎｉｅｎｃｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈａｎｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄ．Ｉｔｉｓｓｕｉｔａｂｌｅｔｏｔｈｅｉｓｏｌａｔｉｏｎｏｆａｅｒｏｂｅａｎｄｆａｃｕｌｔａｔｉｖｅａｅｒｏｂｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ；ｒａｐｉｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓｕｂｓｔａｎｃｅ；ＣａＣＯ３ｔｅｓｔ
前也有明显下降[21],说明针箭颗粒降低SHR大鼠血压的同时能够显著改善其伴随的胰岛素抵抗。 6 问题及展望 分析以上中医药治疗高血压的实验研究结果,中医药治疗高血压的实验研究大致从以下几方面来进行:抑制交感神经活性;降低肾素血管紧张素系统活性;改善血管内皮细胞分泌功能;保护靶器官;降低胰岛素抵抗等。这些研究或从高血压的发病机制研究入手,或从保护靶器官、改善代谢异常入手,取得一定成果,但不够系统深入。一方面缺乏分子生物学方面的深层次研究,另外,缺少结合中药制剂的特点,针对发现中药制剂优势的探索性研究。高血压的发病机制错综复杂,在分子生物学水平有着复杂的病理机制网络。中医药治疗本病可多途径、多环节、多靶点发挥作用,故二者必然有着契合点。如何充分运用现代自然科学技术和成果,开展多学科、深层次的交叉研究,发挥中医药本身的优势和特色,尤其是在对高血压靶器官的保护作用,是相关研究的难点,也将是热点之一。随着研究的进一步深入,中医药防治高血压病的优势会逐渐被认识,并使高血压患者在临床治疗中有更多的获益。 参考文献 1 周明.苦马豆总黄酮甙的降压作用及其机理.湖南中医药导报,1997, 3(5)∶21～23 2 张新军,章茂顺,高志芬,等.醋柳黄酮对原发性高血压患者交感神经兴奋性的影响.华西医科大学学报,2001,32(4)∶547～550 3 蒋自强,郭会军,任德启.镇肝熄风合剂对实验性肾性高血压及缩血管物质影响的实验研究.中医研究,2002,15(2)∶22～24 4 鄢东红,金益强,唐发清,等.自发性高血压大鼠肝阳上亢证模型肾上腺组织的酪氨酸羟化酶基因表达研究.中国现代医学杂志,2000,10(8)∶24～26 5 袁成民,丁书文.黄连清降合剂治疗高血压病的实验研究.中国中医药信息杂志,2005,12(6)∶24～256 陈孟莉,王彩云,朱秀美,等.益肾降压方对肾实质性高血压及RAS 系统物质的作用研究.中国医药学报,2002,17(4)∶207～209 7 石咏军,马琼英,高鸣,等.葛根素注射液抑制(延缓)自发性高血压大鼠肾脏血管重塑的实验研究.中国中西医结合肾病杂志,2002,3(7)∶387～390 8 段学忠,孙西庆,李丁友.益脉降压流浸膏降压及调节内皮素与降钙素基因相关肽的实验研究.中国中医药科技,2000,7(3)∶143～144 9 严冬,唐蜀华,陈晓虎,等.降压益肾颗粒对S HR大鼠循环系统及组织中NO、NOS的影响.江苏中医2001,22(6)∶40～42 10 韩梅,温进坤.滋补肝肾益气活血法治疗肾性高血压的实验研究.中国老年学杂志,2001,21(4)∶244～246 11 江巍,张文高,马学盛,等.降脂调压颗粒治疗原发性高血压及血管内皮功能保护作用的临床研究.中国中西医结合杂志,2002,22(1)∶18～20 12 吕俊华,杨文豪,熊爱华.红丝线草提取物对肾性高血压模型大鼠降压机制研究.山东中医杂志,2004,23(6)∶357～359 13 李剑,潘毅,严灿,等.滋补肝肾、活血祛痰方药对原发性高血压大鼠左心室肥厚的影响.山西中医,2003,19(2)∶54～56 14 范金茹,吴华堂,戴小良,等.滋阴平肝法降血压及逆转左室肥厚的实验研究.中国中医急症,2006,15(1)∶72～73 15 李敬孝,张茗.益气平肝活血祛痰法及其组方对肾性高血压大鼠左室肥厚及c-f os、c-myc基因表达的影响.山西中医,2006,22(5)∶47～49 16 孙联平.丹参对自发性高血压大鼠左室肥厚及心肌I型和Ⅲ型胶原的影响.中华新医学,2003,4(6)∶481～483. 17 石咏军,马琼英,高鸣,等.葛根素注射液抑制(延缓)自发性高血压大鼠肾脏血管重塑的实验研究.中国中西医结合肾病杂志,2002;3(7)∶387～390 18 徐向东,徐向青,侯秀娟.益肾方对自发性高血压大鼠肾脏保护作用的研究.辽宁中医杂志,2004,31(7)∶615～616 19 龚一萍,倪美文,宋霄红,等.天麻钩藤饮对高血压肝阳上亢证大鼠胰岛素抵抗影响的实验研究.浙江中医学院学报,2005,29(2)∶62～64 20 司晓晨,潘杨,程海波,等.胰敏胶囊阻止果糖诱导的胰岛素抵抗大鼠高血压的发生研究.中医药学刊,2004,22(2)∶250～252 21 陈晓虎,蒋卫民,唐蜀华.针箭颗粒对自发性高血压大鼠血压及胰岛素抵抗的影响.中成药,2002,24(10)∶788～790 番石榴叶药理作用及其机制的研究 黄海军,黄桂琼,周迎春 (南方医科大学南方医院中医内科,广州 510515) 番石榴叶性平,味甘涩,具有收敛止泻、消炎止血的功效,主要化学成分有黄酮类化合物、鞣质、挥发油、槲皮素、植物固醇、叶绿素和多糖等,中外民间医药多有采用番石榴叶治疗糖尿病及腹泻等疾病。近年来对其药理作用的研究相对较多,因此本文将对其药理作用研究作一简要综述。 1 降糖作用 M ukhtar等[1]的研究表明番石榴叶水提取物对四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠有明显的降糖作用。Yus of等的研究则表明链佐菌素复制的糖尿病小鼠模型,在食用含高膳食纤维的番石榴果4周后其平均空腹血糖值与格列本脲组相比有统计学差异[2]。以往众多研究表明这种降糖作用主要与黄酮甙提高胰岛素敏感性及番石榴富含的维生素C及微量元素对胰岛细胞保护、胰岛素释放的调节、糖代谢的调节有关[3]。2005年Oh 等[4]的研究表明番石榴叶提取物的降糖作用在一定程度上是由于其对蛋白酪氨酸磷酸激酶的抑制作用所介导的。 342 中药药理与临床2007;23(5)
石榴多酚的提取 榨汁后的石榴籽——干燥——粉碎——脱脂——浸提——离心——过滤——多酚提取液 原料预处理 将榨汁后的石榴籽用清水清洗干净并晾干，用粉碎机粉碎待用。 2.脱脂 将石榴籽粉末进行脱脂处理。 2.多酚物质的提取 称取一定量脱脂石榴籽粉末于锥形瓶中，加入一定量的乙醇溶剂采用超声波辅助反复浸提，合并提取液，离心，取上清液，即得多酚提取液。 3.多酚含量的测定方法 多酚含量的测定采用反应比色法即取1mL石榴籽多酚提取稀释液于50mL容量瓶内,加10mL蒸馏水,摇匀,再加3mLFolin - Ci ocalteu试剂,摇匀,在放30s后加入12mL10%Na2CO3溶液,450s内完,混匀，加水定容，再混匀然后30℃下避光反应2h,760nm波长处测定吸光值，根据测得的标准曲线方程计算石榴籽提取液中多酚含量(以没食子酸计)，经进一步计算即得多酚提取得率： 提取得率Y =（CV/M）×100式中:Y=提取得率(% ) C: 提取原液中多酚的浓度(mg/mL ) V: 提取多酚液总体积(mL)
M: 石榴量( mg) 石榴皮多酚提取工艺 石榴为石榴属落叶灌木或小乔木植物，原产于中亚一带，至西汉张骞使西域引入我国，我国陕西临潼、山东枣庄、安徽怀远、四川会理、云南蒙自均有种植。石榴皮，为石榴的干燥果皮，其性酸、味涩，具有涩肠、止血、杀虫之功效。石榴皮多酚是石榴皮中羟基化合物的总称，包括鞣花单宁、没食子单宁、鞣花酸、没食子酸、儿茶素、花色素、绿原酸、阿魏酸和栎精等多种化合物，占干重量的10% ～20%，研究表明其具有抗氧化、抗衰老、抗菌、抗突变、降血压和润肤美容的作用，在食品、医药和日用化学品等领域有巨大的应用价值。 1.石榴皮多酚提取方法 多酚物质的提取方法一般有热水提取法、溶剂提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超声波辅助提取法、微波提取法和超临界CO2提取法，在多酚的提取过程中选择适宜的提取方法将有助于提取效率的提高和提取效果的增强，从而得到理想的实验效果，为后续实验创造有利的条件。 1.1溶剂提取法 溶剂提取法是根据植物中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分的溶解度小的溶剂，将活性成分从植物组织内溶解出来的方法目前，多酚的浸提方法主要是有机溶剂提取法，常用的有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，这些有机溶
八宝景天抑菌活性实验方案 1 材料与仪器 1.1 材料 八宝景天（茎、叶、花），采摘于吉林农业大学校园，去离子水洗净，阴干，经粉碎机粉碎(过40～60 目筛)，所得植物粉用密封袋于遮光处保存备用。 1.2 微生物 真菌：黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、黄瓜黑星病菌（Cladosporium cucumerinum）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum nigrum）由吉林省蔬菜花卉科学研究院提供。番茄叶霉病菌( Fulvia fulva )、番茄早疫病菌(Alternaria solani)、甜瓜茎腐病菌(Fusarium gramimearum)、水稻立枯病菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、番茄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、黄瓜菌核病菌(Sclerotinia sclerrotium) 均由吉林农业大学农学院植物病理研究室提供。 1.3 试剂与仪器 95%乙醇分析纯国药集团化学试剂有限公司 葡萄糖分析纯国药集团化学试剂有限公司 琼脂粉生化试剂天津科密欧化学试剂有限公司 马铃薯 JFSD-100粉碎机上海淀久中药机械制造有限公司 JJ200型精密电子天平美国双杰兄弟有限公司常熟双杰测试仪器厂HH-S数显恒温水浴锅江苏省金坛市医疗仪器厂 RE-2000旋转蒸发器上海亚荣生化仪器厂 SHZ-III型循环水真空泵上海亚荣生化仪器厂 TDL-5A低速大容量离心机上海悦丰仪器仪表有限公司 生化培养箱SPX-250型上海跃进医疗器械厂 ZKF035电热真空干燥箱上海实验仪器厂有限公司 KQ5200B型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司 不锈钢手提式灭菌器上海申安医疗器械厂 超净工作台上海生物科技有限公司
抑菌活性实验方案 薄层层析(TLC)是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪类、糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。 (1) 初始发酵培养基的筛选 在250 mL三角瓶装100 mL基础培养，将种子培养基以6%接种量接入各种基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养5d，测定不同培养基下发酵液对供试病原菌的抑制率，确定最佳基础培养基。 (2) 发酵时间的确定 将活化的种子培养基以6%接种量接入筛选出的基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养不同时间段，测定每个时间段发酵液上清液对供试病原菌的抑制率，确定最佳发酵时间。 (3) 发酵初始pH值的初步确定 将优化后碳氮源的基础培养基的pH分别调成3、5、7、9、11，然后再按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同pH培养基发酵液无菌滤液对供试病原菌的抑制率，确定初始pH范围。 (4) 发酵温度的初步确定 以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按 6 %接种种子培养基，分别在20 ℃、24 ℃、28 ℃、32 ℃、36 ℃，170 r/min培养一定时间后，测定不同温度下发酵所得发酵液对供试病原菌的抑制率，确定发酵温度范围。 (5) 发酵接种量的初步确定 以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，分别按2 %、4 %、6 %、8 %、10 % 接种种子培养基，在28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同接种量对发酵液抑菌活性的影响，确定发酵接种量范围。 (6) 发酵转速的初步确定 以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按6 %接种种子培养基，28 ℃、以100r/min、130 r/min、160 r/min、190 r/min、210 r/min培养一定时间后，测定不同发酵转速对发酵液抑菌活性的影响。 (7) 发酵装液量的初步确定 以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，在250 mL锥形瓶中装入50 mL、75mL、100 mL、125 mL、150 mL，按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min 培养一定时间后，测定不同发酵装液量对发酵液抑菌活性的影响。 (8) 碳、氮源的筛选 碳源优化：分别以葡萄糖、果糖、蔗糖、可溶性淀粉、小米、玉米粉、麦芽糖、燕麦粉和麸皮替换筛选出基础培养基中的碳源，并以缺少碳源的基础培养基
第30卷第1期Vol.30，No.1 西华大学学报(自然科学版) Journal of Xihua University ·Natural Science 2011年1月Jan．2011 文章编号:1673- 159X (2011)01-0098-05收稿日期:2010-10-14基金项目:四川省教育厅自然重点项目(09ZA158);西华大学2008校人才培养与引进科研课题(R0820501) 作者简介:唐鹏程(1985-)，男，硕士研究生，主要研究方向为食品营养与安全。通信作者:焦士蓉(1968-)，女，副教授，博士，主要研究方向为食品生物技术。E- mail :jsrong2004@https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html, 石榴皮多酚提取工艺及活性研究进展 唐鹏程，焦士蓉，唐远谋 (西华大学生物工程学院，四川成都610039) 摘要:结合多酚提取方法及原理，综述了近年来国内外关于石榴皮多酚的提取方法，并对石榴皮提取物活性 研究成果进行了归纳和总结。 关键词:石榴皮;多酚;提取;活性中图分类号:TS255 文献标志码:A Advance of the Extraction of Pomegranate Peel Polyphenol and Its Activity TANG Peng-cheng ，JIAO Shi-rong ，TANG Yuan-mou (School of Bioengineering ，Xihua University ，Chengdu 610039China ) Abstract :In this paper ，methods for extraction of Pomegranate Peel Polyphenol are reviewed ，at the same time ，the activities of pomegranate peel extract at home and abroad are summarized． Key words :pomegranate peel ;polyphenol ;extraction ;activity 石榴(pomegranate )为石榴属落叶灌木或小乔 木植物，原产于中亚一带，至西汉张骞出使西域引入我国，我国陕西临潼、山东枣庄、安徽怀远、四川会 理、云南蒙自均有种植［1］ 。石榴皮(pomegranate peel )为石榴的干燥果皮，其性酸、味涩，具有涩肠、 止血、杀虫之功效［2］ 。石榴皮多酚是石榴皮中多酚羟基化合物的总称，包括鞣花单宁、没食子单宁、鞣花酸、没食子酸、儿茶素、花色素、绿原酸、阿魏酸和栎精等多种化合物，占干重量的10% 20%，研究表明其具有抗氧化、抗衰老、抗菌、抗突变、降血压和润肤美容的作用，在食品、医药和日用化学品等领域有巨大的应用价值。 1石榴皮多酚提取方法 多酚物质的提取方法一般有热水提取法、溶剂提取法、碱性稀醇或碱性水提取法、超声波辅助提取法、微波提取法和超临界CO 2提取法，在多酚的提取过程中选择适宜的提取方法将有助于提取效率的提高和提取效果的增强，从而得到理想的实验效果，为后续实验创造有利的条件。 1.1 溶剂提取法 溶剂提取法是根据植物中各种成分在溶剂中的溶解性质，选用对活性成分溶解度大，对不需要溶出成分的溶解度小的溶剂，将活性成分从植物组织内 溶解出来的方法［3］ 。目前，多酚的浸提方法主要是有机溶剂提取法，常用的有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙 酯等［4-6］，这些有机溶剂对多酚都有良好的溶解能 力，不与多酚物质发生化学反应，且浸出杂质少、易 于分离。贾冬英等［7］ 采用体积分数为20%的乙醇做溶剂，料液比1:20，在50?条件下提取1h ，多酚 得率达22.86%，取得了很好的效果;孙兰萍等［8］ 亦 采用50%的乙醇作为提取溶剂，在液料比25?1， 70?条件下提取1.5h ，石榴皮多酚得率为16.28%; 王晓瑜等［9］ 通过预实验采用甲醇、乙醇、乙酸乙酯和水分别对新疆石榴皮总多酚进行提取，结果多酚得率是甲醇＞乙醇＞水＞乙酸乙酯。由于甲醇和乙醇作溶剂时多酚得率相差不大，并且三种溶剂中乙醇的安全性最高，价格最为低廉，来源广，回收率高，因此选用乙醇作为提取溶剂。由此可见，石榴皮多
v1.0 可编辑可修改 1 实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般为外径8 mm，内径6 mm，高10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7个浓度。灭菌蒸馏水为对照。2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动5 min，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15×20倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野80-100个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中，水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取5 mL带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径6.0mm、高10mm），每皿内按合适的间隔放置6个不锈钢小管，其中1个小管为对照，其余5管为5种不同浓度的药液（药液加至在管口形成凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。
11种植物提取物对4种病原细菌的抑菌活性筛选 植物源杀菌剂具有选择性高、环境友好、对非靶标生物安全、低毒、低残留等优点，从植物中寻找抑菌活性物质，是研发新型杀菌剂的热点之一。目前，中国开发与应用的植物源杀菌剂主要有苦参碱、黄岑苷、小檗碱、丁子香酚、香芹酚、儿茶素、大蒜素、乙蒜素、大黄素甲醚等。但前述产品多集中于对植物真菌病害的防治，对植物源杀细菌剂的研究大多侧重于食品污染菌的控制，且大多数还处于室内筛选阶段。魏希颖等研究发现泡桐花提取液对金黄色葡萄球菌有很强的抑制作用。叶舟测定了木麻黄（Casuarina equisetifolia Forst）小枝提取液的抑菌活性，发现对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌表现出较强的抑制活性。崔彦等的研究证明五倍子、丁香、地榆对黄瓜细菌角斑病菌表现出显著的抑制作用，其中五倍子提取物的活體防效可达60%，具有一定的开发潜力。李玉玲发现竹焦油对甘蓝黑腐病菌、番茄细菌性斑点病菌、茄青枯病菌等多种供试细菌都有不同程度的抑制活性。为了获得对植物细菌病害有广泛抑菌谱的植物源物质，本研究选取已报道过的具有广泛抑菌活性的11种植物提取物，对魔芋软腐病菌、猕猴桃溃疡病菌、核桃黑斑病菌、白菜软腐病菌4种常见的病原细菌进行室内抑菌活性筛选，旨在为新型植物源杀细菌剂的开发研究提供线索。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 供试菌种魔芋软腐病菌（Erwinia carotovora pv. carotovora）、猕猴桃溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. actinidiae）、白菜软腐病菌（Erwinia carotorora）均由西北农林科技大学无公害农药研究服务中心提供；核桃细菌性黑斑病菌（Xanthomonas campestris pv. juglandis）由西北农林
植物多酚抗氧化性的研究进展及其运用 摘要：植物多酚( 植物单宁) 是一类广泛存在于植物体内的重要的天然产物，叙述了多酚的抗氧化性及多酚在国内外食品工业、医药保健、日用化学品等方面的应用现状, 展望了多酚在国际市场上的广阔前景。 关键词: 植物多酚；抗氧化性； 植物多酚（Plant polyphenol）又名植物单宁（Vegetable tannin），为植物体内的复杂酚类次生代谢物，具有多元酚结构，主要存在于植物的皮、根、叶、果中，在植物中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素。植物多酚(polyphenol)是多羟基苯，如苯二酚、苯三酚等。植物多酚是在植物性食物中发现的、具有潜在促进健康作用的化合物。由于其羟基取代的高反应性和吞噬自由基的能力而具有很好的抗氧化活性【1】酚类化合物是众所周知的抗氧化剂。主要有黄酮类、多 酚类、多糖类和维生素类等。近年来研究发现，一些农业、食品工业副产品（如茶叶、花生壳、柑橘类果皮、果汁残渣等）的提取物中也含有丰富的多酚类物质，其中有些提取物中多酚含量很高。因此来自农业和食品工业副产品的植物多酚将成为保健食品、医药、化妆品等行业的重点开发研究对象【2-3】。 一、植物多酚研究利用的化学基础 人类最初对植物中所含多酚类化合物的利用, 是将其用于鞣制皮革, 并将这类化合物称为植物单宁( vegetable tannins)。按照White和Bate-Smith 的定义, 植物单宁是指分子量在500—3000 范围内的具有鞣性的多元酚。1981年,Haslam 提出了植物多酚这一术语,它包括单宁及相关化合物( 如单宁的前体化合物和单宁的聚合物)。这一名称能更全面地概括这类天然产物的特点, 也符合各学科领域的实际研究情况,因而被人们广泛采用。植物多酚的化学研究始于18世纪末。其结构复杂, 化学性质活泼,并且常以大量性质相似的同系物的混合物形式存在, 因此本世纪30 年代以前,多酚化学的进展一直非常缓慢。植物多酚的科学分类方法直到1920 年才由Freudenberg 提出,即根据化学结构不同,植物多酚分为水解单宁( 酸酯类多酚) 和缩合单宁( 黄烷醇类多酚或原花色素)。前者主要是酸及其衍生物与多元醇以酯键或甙键形成,可细分为单宁和鞣花单宁两类。后者主要是羟基黄烷醇类单体的缩合物, 单体间以C—C 键相连如图1所示。[4]
v1.0可编辑可修改实验七杀菌剂生物活性测定方法——抑菌圈法 一、实验目的 学习并掌握杀菌剂的离体活性测定方法——抑菌圈法。 二、实验原理 抑菌圈法即水平扩散法基本原理是在已接种供试菌的琼脂培养基上施以少量抗菌性物质或杀菌剂，使之接触培养基和病菌，经定温培养一定时间后，因药剂的渗透扩散作用，施药部位周围因杀死了病菌而抑 制了其在培养基上的生长，从而产生了抑菌圈。在一定范围内，抑菌圈直径的平方或面积与药剂浓度的对 数呈直线函数关系，从而可比较供试样品杀菌活性大小。其最大优点是精确度高，操作简单，能较快得出 结果。但测定结果受药剂溶解性和扩散能力影响很大，具一定局限性。根据药剂施加在琼脂培养基表面方 式不同，又分为管碟法（牛津杯法）、滤纸片法、孔碟法、滴下法等，其中以管碟法和滤纸片法应用最广。 三、实验材料 供试药剂：速克灵或扑海因。供试病原菌：番茄灰霉病菌。 实验器材：无菌水、无菌接种针、灭菌三角瓶、玻璃珠、灭菌双层纱布、75%酒精棉球、消毒摄子、移液管、试剂瓶、吸耳球、超净工作台、胶头滴管、尺子。 四、实验方法 采用管碟法。将供试药剂加于放置在琼脂培养基表面的用不锈钢制成的小圆筒（又称为牛津杯，一般 为外径 8 mm，内径 6 mm，高 10 mm）内，定温培养一定时间后测量抑菌圈大小。 1．配制药液：用灭菌蒸馏水将供试药剂配成一系列梯度浓度，一般5-7 个浓度。灭菌蒸馏水为对照。 2．制备一定“浓度”的供试菌悬浮液：如真菌，则宜用孢子悬浮液。在培养好的菌种上倒入10 mL 灭菌水，用接种针轻轻刮动平面孢子悬浮，倾于灭菌三角瓶内（事先装数粒玻璃珠）摇动 5 min ，将孢子悬浮液用灭菌双层纱布过滤入另一灭菌三角瓶内。用低倍（15× 20 倍）显微镜检查，调节孢子浓度，每视野 80-100 个孢子为宜；以上操作应在无菌条件下进行，动作要迅速准确。 3．浇制双层培养基：将装在试管内已灭菌的清水琼脂培养基10 mL溶化后，趁热倒入9 cm直径培养皿中， 水平冷凝。将适合供试菌生长发育的100 mL培养基熔化后冷至45-50 ℃左右后，迅速吸取10 mL菌液加入培养基中，充分混匀后，立即吸取 5 mL 带菌培养基加在已凝固的清水琼脂培养基上，并使之均匀地铺在 底层上。 4．注药用消毒镊子夹取不锈钢小管（即牛津杯，外径8.0mm、内径 6.0mm、高 10mm），每皿内按合适的间隔放置 6 个不锈钢小管，其中 1 个小管为对照，其余 5 管为 5 种不同浓度的药液（药液加至在管口形成 凸面），在适合的温度下培养。 6．结果检查培养一定时间后，取出用十字交叉法测量抑菌圈直径，并以抑菌圈的有无及抑菌圈大小评价 杀菌活性。若抑菌圈直径呈椭圆形，长短之差超过一个单位，最好舍去不要。 1
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html, 石榴皮多酚的提取及其抗肿瘤作用的研究 作者：赵宝鑫张艳菲高旭 来源：《健康周刊》2018年第12期 【摘要】石榴（punicagranatum L.）又名若榴、丹若、天浆，为石榴科（Punicaceae）石榴属（Punica L.）植物[1]。是一种药食两用植物。石榴具有多种药理作用，其中石榴皮具有抗氧化、抗衰老、抗癌防癌、抗菌、润肤美容、降血压和预防心脑血管疾病等多种生理和药理活性。在食品、医药和日用化学品等领域显示出巨大的应用价值。本文主要就石榴皮多酚的提取及其对肿瘤的活性的抑制方面进行研究。 【关键字】石榴；多酚提取；抗肿瘤 石榴皮富含多酚类物质，在新鲜皮中的质量分数约为10%～21%[2]是石榴皮抑制肿瘤活性的的主要成分，主要含有：没食子酸（gallicacid）、石榴皮亭A（granatin A）、石榴皮亭B （granatinB）、鞣云实精（corilagin）、鞣花酸（ellagic acid）、安石榴林（punicalin）、安石榴苷（punicalagin）、木麻黄宁（casuarinin）、英国栎鞣花酸[pedunculagin（2，3，4，6-bis- （S）-HHDP-G-glucose）]、特里马素E（tellimagrandin）、没食子酰双内酯（gallagyldilatone）。多酚独特的化学结构赋予了多酚独特的生理活性。 1 石榴皮多酚的提取方法 1.1 酶解法 酶技术是一种新型、高效绿色提取技术，具有快速，高效，反应条件温和，专一性强等诸多优点，已越来越广泛地应用于食品、药品及动植物细胞有效成分的提取。王华斌[2]等利用 酶解法分解石榴皮细胞间质的果胶质，使果胶完全分解成小分子物质，提取最适条件：纤维素酶和果胶酶的复合酶（C∶P=2∶1）质量浓度0.25mg/mL，酶解时间150min，酶解温度50℃，pH6.0。 1.2 超声提取法 赵艳红等将新鲜石榴手工去皮，在40℃下鼓风干燥40h，用万能粉碎机粉碎50s（颗粒粒度：60～120目），将石榴皮粉末置于棕色瓶中，在低温、干燥、避光条件下保存。称取一定量石榴皮粉置于锥形瓶中，按料液比为1：20（m/V）加入60%的乙醇溶液，置于超声波清洗器中，超声功率为90W，室温下超声提取25min过滤，滤液经4000r/min离心20min，40℃下真空旋转蒸发回收乙醇后，冷干燥得石榴皮多酚[3]。 1.3 微波浸提提取
基金项目：新疆维吾尔自治区科技计划项目（２０１２３３１３５ ）作者简介：丁 楠（１９８８－） ，女，硕士，研究方向：新疆地产资源新药开发研究。通信作者：高晓黎，女，教授，博士生导师，研究方向：药物传递系统研究与新药开发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｌｉ＿ｇ ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。ＨＰＬＣ法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量 丁 楠，高晓黎 （新疆医科大学药学院药剂／物化教研室，乌鲁木齐 ８３００１１ ）摘要：目的 建立石榴皮提取物中鞣花酸含量的ＨＰＬＣ测定方法。方法 色谱条件：色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙酸乙酯∶磷酸（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶磷酸二氢钾（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶甲醇（０．０５∶２０∶２０∶６０）；流速１ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２５４ｎｍ；柱温２５℃。结果 鞣花酸在５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为９７．８２％，ＲＳＤ为１．４１％（ｎ＝９）。结论 ＨＰＬＣ法简便，准确，重复性好，可用于石榴皮提取物中鞣花酸的含量测定。 关键词：石榴皮；鞣花酸；ＨＰＬＣ 中图分类号：Ｒ９１４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０６－０７７０－ ０３Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ Ｐｅｅｌ ｂｙ ＨＰＬＣＤＩＮＧ Ｎａｎ，ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ ｌｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎａｎ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ，０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－Ｈ３ＰＯ４，ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．０５∶２０∶２０∶６０）ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ａｔ ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄｗａｓ ５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．８２％ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．４１％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅ－ｇｒａｎａｔｅ ｐ ｅｅｌ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ；ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ；ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ） 石榴皮为石榴科植物石榴（Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍＬ． ）的果皮，性温，味酸、涩，归大肠经，具有涩肠止泻、杀虫、收敛止血的功效。石榴皮富含多酚类物 质， 主要含有没食子酸、鞣花酸、安石榴林、安石榴苷等。鞣花酸是没食子酸的二聚衍生物，呈反式没食 子酸单宁结构，其具有抗氧化［１］、抗癌变［２］、抗诱 第３５卷 第６期新疆医科大学学报 Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．６ ２０１２年６月Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＪｕｎ．２０１２
Advances in Microbiology 微生物前沿, 2014, 3, 29-35 Published Online June 2014 in Hans. https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html,/journal/amb https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html,/10.12677/amb.2014.32004 Establishment of Rapid Determining Method for Antibacterial Activity by Microplate Reader Zixiong Zhou1, Qinhua Huang2, Shuang Zhu2, Lin Zhou2* 1School of Traditional Chinese Medicine, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 2Guangdong Province Key Laboratory for Biotechnology Drug Candidates, School of Biosciences and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou Email: zzxyaoji@https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html,, *bio_zhoulin@https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html, Received: Apr. 23rd, 2014; revised: May 28th, 2014; accepted: Jun. 4th, 2014 Copyright ? 2014 by authors and Hans Publishers Inc. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html,/licenses/by/4.0/ Abstract To investigate the main factors influencing the antimicrobial activity by microplate reader method for high throughput screen antimicrobial substances, the inhibitory rate of staphylococcus aureus was determinated against four typical antibiotics (kanamycin hydrochloride, terramycin, ampicillin, vancomycin) under different culture conditions. The result showed that the concentration of the drug, culture conditions and culture time will affect the inhibitory rate of Staphylococcus aureus. With bacterial concentrations of 5 × 105 cfu?mL?1, static culturing, incubation time of 6 h, the inhi-bitory rate of kanamycin hydrochloride, terramycin, ampicillin, vancomycin was 57.4%, 52.8%, 57.4%, 52.8% respectively with the concentration of 100 μg/mL antibiotic, while the inhibitory rate was 55.6%, 36.1%, 56.5%, 36.1% respectively with the concentration of 10 μg/mL antibiotic, and the inhibitory rate was 46.3%, 10.0%, 52.8%, 50.0% respectively with the concentration of 1 μg/mL antibiotic. The precision and repeatability of the assay were good. There is no significant difference, in the inhibitory rate, between the microplate reader method and tube turbidimetry method from 2010 China Pharmacopoeia. The established microplate reader method could be ap-plied to high throughput screen of antibacterial substances. Keywords Microplate Reader, Antimicrobial Activity, High Throughput Screen 酶标仪快速测定抗菌物质抑菌活性方法的建立*通讯作者。
番石榴提取物项目 可行性研究报告 编制单位：北京中投信德国际信息咨询有限公司编制时间：https://www.doczj.com/doc/4a14392747.html, 高级工程师：高建
关于编制番石榴提取物项目可行性研究报 告编制说明 （模版型） 【立项 批地 融资 招商】 核心提示： 1、本报告为模板形式，客户下载后，可根据报告内容说明，自行修改，补充上自己项目的数据内容，即可完成属于自己，高水准的一份可研报告，从此写报告不在求人。 2、客户可联系我公司，协助编写完成可研报告，可行性研究报告大纲（具体可跟据客户要求进行调整） 编制单位：北京中投信德国际信息咨询有限公司 专 业 撰写节能评估报告资金申请报告项目建议书 商业计划书可行性研究报告
目录 第一章总论 (1) 1.1项目概要 (1) 1.1.1项目名称 (1) 1.1.2项目建设单位 (1) 1.1.3项目建设性质 (1) 1.1.4项目建设地点 (1) 1.1.5项目主管部门 (1) 1.1.6项目投资规模 (2) 1.1.7项目建设规模 (2) 1.1.8项目资金来源 (3) 1.1.9项目建设期限 (3) 1.2项目建设单位介绍 (3) 1.3编制依据 (3) 1.4编制原则 (4) 1.5研究范围 (5) 1.6主要经济技术指标 (5) 1.7综合评价 (6) 第二章项目背景及必要性可行性分析 (7) 2.1项目提出背景 (7) 2.2本次建设项目发起缘由 (7) 2.3项目建设必要性分析 (7) 2.3.1促进我国番石榴提取物产业快速发展的需要 (8) 2.3.2加快当地高新技术产业发展的重要举措 (8) 2.3.3满足我国的工业发展需求的需要 (8) 2.3.4符合现行产业政策及清洁生产要求 (8) 2.3.5提升企业竞争力水平，有助于企业长远战略发展的需要 (9) 2.3.6增加就业带动相关产业链发展的需要 (9) 2.3.7促进项目建设地经济发展进程的的需要 (10) 2.4项目可行性分析 (10) 2.4.1政策可行性 (10) 2.4.2市场可行性 (10) 2.4.3技术可行性 (11) 2.4.4管理可行性 (11) 2.4.5财务可行性 (11) 2.5番石榴提取物项目发展概况 (12)