实验报告
实验项目名称：基因工程综合实验所属课程名称：基因工程原理
班级：12生物工程3班学号：201230620312
姓名：李杰锋
指导老师：徐学锋
目录
0.摘要 (1)
1.前言 (1)
2.实验材料和仪器 (2)
2.1 实验材料 (2)
2.2 实验仪器 (2)
3.实验试剂 (2)
3.1DNA提取所需试剂 (2)
3.2 PCR实验所需试剂 (2)
3.3 双酶切实验所需试剂 (2)
4.实验步骤 (3)
4.1 质粒DNA提取 (3)
4.2 聚合酶链式反应（PCR） (3)
4.3 质粒DNA的双酶切分析 (4)
4.4 琼脂糖凝胶制备 (4)
5.实验结果与分析 (5)
5.1质粒DNA提取所得凝胶电泳结果 (5)
5.2 PCR扩增实验结果 (5)
5.3质粒DNA的双酶切分析结果 (6)
摘要：本实验包括质粒DNA的提取、DNA的凝胶电泳、质粒DNA中靶基因的酶切分析及质粒DNA中重组进的靶DNA序列的PCR扩增。通过本综合实验，进一步理解质粒DNA的提取原理、凝胶电泳中DNA分离的机理、限制性内切酶的工作原理及PCR是如何实现DNA扩增的，也掌握了DNA的提取技术、凝胶电泳技术、DNA酶切分析技术及靶基因的体外快速扩增技术，进而了解实验中出现的现象并学会分析与解决实验中出现的有关问题。
聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA或RNA的地方。
关键词：凝胶电泳限制线内切酶DNA质粒
1 前言
本次实验对象为含有重组了1kb DNA片段的PET32.a表达质粒。该表达质粒中长度约6kb。首先采用离心破碎法破碎细胞，再使用碱裂解法提取质粒DNA。最后通过各种化学抽提纯化质粒DNA，最后得到纯化后的DNA质粒作为之后实验的材料。在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液时，变性质粒DNA 又恢复到原来的够型；而线性的大分子量细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶物，通过离心沉淀可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂的RNA可用RNaseA酶消除，再用酚/氯仿处理，可除去残留的蛋白质，达到纯化质粒DNA的目的。
PCR是根据DNA双螺旋结构在变性温度下解链为单链DNA，在退火温度下加入反应体系的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合，然后在延伸温度下，通过DNA聚合酶的聚合作用，不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则，由引物引导合成出与模板DNA互补的新链，实现DNA的扩增的技术。本次实验我们将以纯化后的质粒DNA作实验材料，在预先设计好引物后
用PCR技术扩增目的片段。
利用提取的质粒DNA作目的序列的双酶切实验。限制性内切酶能在适当温度、pH等条件下识别DNA序列中的特定序列并对识别序列进行有效切割。
利用琼脂糖凝胶电泳，通过电泳结果检验DNA提取纯度、PCR和双酶切实验的效果，并对比各组实验效果了解实验各步骤的各项影响因素核试验操作。
2 实验材料和仪器
2.1实验材料
大肠杆菌DH5α（含重组了约1000bp DNA片断的PET32.a表达质粒，Amp抗性）2.2 实验仪器
高压灭菌锅、超净工作台、恒温摇床、台式离心机、涡旋振动器、培养管、移液器、离心管、吸管头、量筒、紫外观测仪、小三角瓶、PCR仪、微量移液器、冰盒、制胶模、电泳仪
3 实验试剂
3.1 DNA提取所需试剂
LB培养基、3mol/L醋酸钠（pH5.2）、TE缓冲液（pH8.0）、无水乙醇、75%乙醇、RNaseA（10mg/ml）、goldview DNA染色剂、氯仿、琼脂糖
溶液Ⅰ：50 mmol/L葡萄糖，25 mmol/L Tris-Cl（pH8.0），10 mmol/L EDTA (pH8.0) 溶液Ⅱ： 0.2 mol/L NaOH， 1%SDS(w/v)，现配现用
溶液Ⅲ：3 mol/L KAc，用冰醋酸调pH值至5.2
3.2 PCR实验所需试剂
实验一提取的质粒DNA，0.5U/μL的 Taq酶及5 × PCR buffer、1 mmol/L 的dNTP、克隆基因特异引物PF、PR（各1μmol/L），0.2mL的PCR管，TIP头，goldview DNA染色剂，琼脂糖，10×上样缓冲液，0.5×TBE、marker DNA等。
PCR扩增引物： PF：5`—CTCGGATCCATGGAGCTAGCTACTGCGGG—3`
PR：5`—CCGGTCGACTCCATCAATCTTGGAAAGCA—3`
3.3双酶切实验所需试剂
实验一提取的质粒DNA，BamH I（3 U /μL），HindⅢ（3 U /μL），1.5mL的EP 管，TIP头，goldview DNA染色剂，琼脂糖，6×上样缓冲液，0.5×TBE等。
4 实验步骤
4.1 提取质粒DNA
4.1.1 挑LB固体平板菌落于2ml含Amp的LB液体培养基中，37℃振摇培养过夜。4.1.2 取1mL菌液放入Ep管中，12000 r/min（简写rpm）离心1min；弃尽上清。4.1.3 加入200μL预冷的含RNaseA的溶液I，旋涡以充分混匀。
4.1.4 加入200μL的溶液Ⅱ，温和混匀，室温静置5min以充分裂解细菌。
4.1.5 加入200μL的溶液Ⅲ，温和混匀，－20℃放置8min，12000rpm离心5min；
吸上清至另一新的1.5mL EP管，加500μL氯仿/异戊醇（V：V=24：1）充分混匀，12000rpm离心5min。
4.1.6 移取上清液500μL至一新1.5mL EP管，加入2倍体积无水乙醇，充分混匀，-20℃静置10min，12000 rpm离心10min，弃上清；加入200μL 70%乙醇洗DNA沉淀，12000rpm离心5min，倒掉乙醇，再12000rpm离心几秒钟，用移液器
尽可能除去乙醇，烘箱适度风干。
4.1.7 加入20μL RTE（含10μg/mL RNaseA 的TE，pH8.0）溶解质粒DNA， 37℃
放置10min，乃至30min，以充分消化RNA。
4.1.8 取4～5μL质粒DNA溶液于另一干净离心管中，加入8μL TE及2μL上
样缓冲液，混匀后全部点样于一个琼脂糖凝胶点样孔中。
4.1.9 打开电源开关，调电压为80～100伏进行电泳。
4.1.10 电泳约40分钟后关掉电源，把凝胶置于紫外仪上观察结果并记录。
4.2 聚合酶链式反应
4.2.1 PCR反应液配制
反应液组分起始浓度反应系终浓度20μL反应体系所需量
DNA模板提取的质粒5ng到10ng 取2μL已稀释20×的质粒DNA溶液引物PF 1μmol/L0.2μmol/L 4μL
引物PR 1μmol/L0.2μmol/L 4μL
dNTP mix 2.5mmol/L 0.25mmol/L 2μL
反应buffer 10×1×2μL
Taq酶0.5U/μL20μL体系加1U 2μL
无菌水H
O ——补水至总体积20μL，混匀盖上盖
2
4.2.2 把上述配制的反应液体系放置于PCR仪中，并使PCR仪运行如下PCR反应程序，实现靶DNA的扩增。
94℃ 3min→94℃ 50sec→54℃ 50sec→72℃ 1.5min→72℃ 5min
↑ 20循环↑
4.2.3 PCR扩增过程中，全班分组按实验一的方法制备1％的琼脂糖凝胶。
4.2.4 PCR结束后取10μL反应产物，加入2μL上样缓冲液，混匀并全部上样于1％琼脂糖凝胶1点样孔中；每块琼脂糖凝胶分别留一个点样孔并上样5μL marker DNA做标准分子量大小对照。
4.2.5 接通电源，调电压80～90伏开始电泳，电泳持续约30～40分钟。
4.2.6 切断电源，取出凝胶并置于紫外仪中观察、记录实验结果。
4.3 质粒DNA的双酶切分析
4.3.1 在一1.5mL离心管中配制反应体系为20μL的质粒双酶切反应液：
加入成分加入量
质粒DNA （<1μg）2-5μL
10×Buffer1μL
BamH I 1μL
HindⅢ1μL
O 补水至20μL
ddH
2
用移液器tip头轻轻混匀。
4.3.2 37℃恒温条件下酶切反应约1-1.5h。
4.3.3 酶切结束后，往酶切反应管中加入4μL 6×上样缓冲液，轻轻混匀。4.3.4 取10μL酶切液点样于琼脂糖凝胶1点样孔中；每块琼脂糖凝胶分别留一个点样孔并上样5μL标准分子量 marker DNA。
4.3.5 接通电源，调电压80～90伏开始电泳，电泳持续约30～40分钟。
4.3.6 切断电源，取出凝胶并置于紫外仪中观察、记录实验结果。
4.4 琼脂糖凝胶制备
4.4.1 称量0.3g的琼脂糖粉置于一干净的小三角瓶中。
4.4.2 加入30mL 0.5×TBE于三角瓶中，称出总重量并记录。
4.4.3在微波炉中充分溶解，称溶解后的总重量并用蒸馏水补充至原总重量。
4.4.4 室温条件下放置或自来水冲三角瓶下部到溶液温度冷却到约50度，并经常摇动防止降温不均匀导致局部凝固现象，此时再加入1.5μL goldview 染料(原则上按照100mL 琼脂糖液加goldview 染料3-5μL )，混匀。
4.4.5 把混合液倒入一已插入梳子的制胶模具中，让其自然充分凝固。
4.4.6 拔掉梳子，把凝胶转移到电泳槽中，即可用于点样和电泳检测。 5 实验结果与分析
5.1 质粒
DNA 提取所得凝胶电泳结果
图1 质粒DNA 的电泳图
M:DNA marker III ；泳道1-6：不同样品提取质粒
上图中有3条相近的条带（第一条最亮），原因是提取的质粒DNA 相对质量相同，但各种因素导致会出现螺旋、线形和开环这三种泳动速度不同的构像。
5.2 PCR 扩增实验结果
图2 质粒的PCR 扩增
M:DNA marker III ；泳道1-6：PCR 扩增产物
4500
3000
2000
1200
800
bp M 1 2 3 4 5 6
bp M 1 2 3 4 5 6
4500
3000
2000
1200
800
以pF/pR 为引物，使用PCR 克隆技术扩增不同样品的质粒，经凝胶电泳，结果显示扩增片段大小约为1kb ，与预期结果相符（图2）。其中根据显色效果，5号样品扩增结果最为理想。
PCR 基本影响因素有变性-退火温度、引物设计、温度循环参数、不同的DNA 聚合酶、模板序列本身。模板变性温度是决定PCR 反应中双链DNA 解链的温度，达不到就不会产生单链DNA 模板，PCR 不会启动。变性温度低则变性不完全，DNA 双链会很快复性，因而减少产量。引物退火温度决定PCR 特异性与产量；温度高特异性强，但过高则引物不能与模板牢固结合，DNA 扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板错配，非特异性产物增加。
引物设计也影响PCR 扩增的特异性，设计引物时会按照模板链长度决定引物长度，使其序列在该长度下仅可能出现一次。还要遵循引物内不含发夹结构等次级结构，引物间不互补。可按特殊需要设计特殊序列或增加其他功能集团。
不同的DNA 聚合酶通常配合不同的目的载体，达到不同的功能与目的。如Taq 酶具有在扩增序列3‘段结果添加一个腺嘌呤，配合相关载体可在扩增后用于载体的构建。酶的最大酶活力和最适催化条件也不同，这也影响PCR 结果。
最后模板序列本身对PCR 也有影响，如模板序列中（G+C ）%过大或过小、序列中存在次级结构等因素，这都会影响PCR 扩增结果。
5.3质粒DNA 的双酶切分析结果
图3 重组质粒酶切鉴定 M:DNA marker III ；泳道1-6：不同质粒样品双酶切
bp M 1 2 3 4 5 6
4500
3000
2000
1200
800
将重组质粒进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定，结果显示：5kb，6kb处出现特异性条带（图3）。据分析，实验应现三种条带，一种是没被酶切或仅仅被切了一端的长度还是6kb 的质粒DNA，该DNA特点是会再附近出现多种构象导致的三重条带；第二种是已被完整切去目的序列剩下的5kb的线性DNA；第三种是被酶切出来的1kb目的序列。可能酶切效率较低，目的序列较少，不能显示。
小学自然实验报告模板 教学模式是在一定的教学思想或教学理论的指导下建立起来的，较为稳定的教学活动结构框架和活动程序。“结构框架”意在从宏观把握教学活动整体各要素之间的内部关系；“活动程序”意在突出教学模式的有序性和可行性。 自然学科是人类在认识自然的过程中所积累的知识。它与人的认识过程有较高的一致性，最适用于发现式的学习方法。实验是传授自然科学知识和培养与发展学生各种能力的重要手段。我校的教研组推出的四环节实验课教学模式，以其较完美的操作性、开放性、优效性和灵活性形成了自然实验课的基本框架，较好地揭示课堂教学的一般程序、课堂教学诸因素的内在联系和课堂教学的普遍规律。现就模式谈一下我在教学中的实践与几点体会。 一、教学模式的四个环节在实践中的具体运用 （一）提出问题阶段 提出问题阶段是当研究一个问题时，为了激发学生的求知欲望，引导学生探索并调动他们积极性的阶段。教师可结合要研究的问题，用生动形象的语言恰如其分地提问，让学生在观察和思维中发现问题。 例如，《物体的热胀冷缩》一课，先进行演示实验，在铁架台上放一平底烧瓶，瓶中装满水，用酒精灯加热，水还没烧开，瓶中的水就往外溢。教师接着问大家，你们看了这个现象有什么想法？学生一下子提出许多问题：“为什么水加热后往上溢呢？”
“水难道会变多吗？” 教学时，为了激发学生探求知识的欲望，应千方百计创造性地运用各种方法，如：做游戏、讲故事、变魔术、猜谜语、出示挂图、运用幻灯等。引起学生要研究问题的兴趣，提出自己的想法。 (二)作出假设阶段 学生提出了问题，但在还没有学习有关的知识时，教师引导学生对自己的问题作出假设的回答。教师再从学生假设中引导学生逐渐进入要研究的问题中去。 例如，《水蒸气的凝结》，教师将还在冒白气的温水杯加盖，过一会儿再揭开盖，请同学们看盖上的水珠，水蒸气碰到什么样的物体在上面结成水珠呢？引导学生作出假设，发表不同意见。有的同学说：“水蒸气遇到热的物体结成水珠。”有的说：“水蒸气遇到冷的物体结成水珠。”教师接着说：“那么我们就一起研究一下，水蒸气在什么条件下能变成水呢？”这样就逐渐地把学生引入要研究的课题。 在这个阶段中，学生根据已有知识的经验，通过演绎、归纳、推理而提出的假设，不少带有猜测的性质。此时教师要引导学生积极作出假设，不应压抑学生的思维，不管是对是错，都不要忙于作出评价。 （三）设计实验阶段
word基本操作实验报告 一、实验目的与要求 1．掌握word的基本操作； 2．掌握字符格式、段落格式和页面格式等排版技术； 3．掌握图文混排、表格处理和邮件合并技术； 4．熟悉个人名片或毕业论文的设计与制作； 5．学会自己提出问题，并得出解决问题的方法。 二、实验内容与方法 1．word的基本操作，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 2．word的字符格式，段落格式和页面格式等排版技术，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 3．word的图文混排、表格处理和邮件合并技术，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 4. 通过word进行个人名片或毕业论文的设计与制作，通过上机摸索，并查阅书籍网络了解。 三、实验步骤与过程 1.word的基本操作：①启动word软件 (1) 启动“开始”菜单中的microsoft word程序 (2) 双击资源管理器或“我的电脑”中的c:\program files\microsoft office\office11\winword.exe程序 (3) 双击word 文档文件（*.doc） (4) 双击桌面上的word图标 (5)开始-运行-输入“winword”②认识word2003窗口（1）标题栏位于屏幕最顶端的是标题栏，由控制菜单图标、文件名、最小化按钮、最大化（还原）按钮、关闭按钮组成。（2）菜单栏 菜单栏位于标题栏下面。使用菜单栏可以执行word的许多命令。菜单栏共有九个菜单：文件、编辑、视图、插入、格式、工具、表格、窗口、帮助。当鼠标指针移到菜单标题上时，菜单标题就会凸起，单击后弹出下拉菜单。在下拉菜单中移动鼠标指针时，被选中的菜单项就会高亮显示，再单击，就会执行该菜单所代表的命令。如“文件”—“打开”，就会弹出“打开”文件对话框。（3）工具栏 标题栏下面的是工具栏，使用它们可以很方便地进行工作。通常情况下，word会显示【常用】和【格式】两个工具栏。 “常用”工具栏：新建、打开、复制、粘贴、打印、撤消、恢复等“格式”工具栏：字体、字号、下划线、边框、对齐方式等 如果想了解工具栏上按钮的简单功能，只需将鼠标指针移到该按钮上，过一会儿旁边会出现一个小框，显示出按钮的名称或功能。 word窗口中可以有许多工具栏，可以根据需要在“视图”—“工具栏”中增加或减少工具栏。每一个工 具栏都可以用鼠标拖动到屏幕的任意位置，所以又称为浮动工具栏。工具栏内图标按钮体现了“菜单栏”中的一些主要功能。我们可以利用这些按钮进行相应操作。如我要打开一个文件，除了可以使用菜单栏外，还可以使用工具栏上的按钮。 （4）编辑窗口 再往下的空白区域就是word的编辑窗口，输入的文字就显示在这里。文档中闪烁的竖线称为光标，代表文字的当前输入位置。（5）标尺 在编辑窗口的上面和左面有一个标尺，分别为水平标尺和垂直标尺，用来查看正文的高度和宽度，以及图片、文本框、表格的宽度，还可以用来排版正文。（ 6）滚动条在编辑窗口的右面和下面有滚动条，分别为垂直滚动条和水平滚动条，用来滚动文档，显示在屏幕中看不到的内容。可以单击滚动条中的按钮或者拖动滚动框来浏览文档。（7）显示方式按钮
基因工程实验报告 、
小麦GAPDH截短体的重组与表达 摘要：本实验通过基因工程（genetic engineering）手段对小麦总RNA进行提取、PCR扩增及与质粒载体的重组构建的操作，并将重组质粒以氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞，诱导目的基因表达，并在蛋白水平进行Western检测。通过本对实验的实践，我们对基因工程技术将会有一个比较全面的认识和了解。 关键字：小麦基因；载体；感受态 前言 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。为在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。它克服了远缘杂交的不亲和障碍。 （一）实验过程
1.实验部分流程：
2．小麦总RNA提取（Trizol法） 2.1 材料 小麦幼苗 2.2 试剂配制及器具处理 ① 0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） ②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在 0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。 ③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入 0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 ④Trizol ⑤ 75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 ⑥氯仿(最好用新的)。 ⑦异丙醇(最好用新的)。 2.3 操作步骤： ①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。 ②室温放置5min，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③ 12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10min，12000rpm 离心10min。 ④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。 ⑤重复步骤④。 ⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30μL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 3. RT-PCR扩增目的基因cDNA 3.1 试剂 ① RNA模板 ②Olig（dT）18 ③反转录缓冲液 ④dNTP ⑤ M-MULV反转录酶 ⑥ RNA抑制剂（RNasin） ⑦Premix EX Taq DNA聚合酶 ⑧ PCR特异引物 3.2操作步骤： 3.2.1 RNA的反转录 采用Thermo Scientific（Fermentas）RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit Total RNA 6μL（需加入RNA约1μg） OligodT primer 1μL H2O（nuclease-free）5μL 12μL 65℃ 5min，补加下列试剂： 5× Reaction buffer 4μL RibolockRNase Inhibitor 1μL 10mM dNTP Mix 2μL RevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase 1μL 20μL 42℃ 60min 70℃，5min，﹣20℃保存
科技实验报告 一、定义与作用 实验报告，就是在某项科研活动或专业学习中，实验者把实验的目的、方法。步骤、结果等，用简洁的语言写成书面报告。 实验报告必须在科学实验的基础上进行。成功的或失败的实验结果的记载，有利于不断积累研究资料，总结研究成果，提高实验者的观察能力。分析问题和解决问题的能力，培养理论联系实际的学风和实事求是的科学态度。 二、写作要求 实验报告的种类繁多，其格式大同小异，比较固定。实验报告，一般根据实验的先后顺序来写，主要内容有： 1．实验名称名称，要用最简练的语言反映实验的内容。如验证某定律，可写成“验证×××”；如测量的实验报告，可写成 “×××的测定。” 2．实验目的实验目的要明确，要抓住重点，可以从理论和实践两个方面考虑。在理论上，验证定理定律，并使实验者获得深刻和系统的理解，在实践上，掌握使用仪器或器材的技能技巧。 3．实验用的仪器和材料如玻璃器皿。金属用具、溶液、颜料、粉剂、燃料等。 4．实验的步骤和方法这是实验报告极其重要的内容。这部分要写明依据何种原理。定律或操作方法进行实验，要写明经过哪儿个
步骤。还应该画出实验装置的结构示意图，再配以相应的文字说明，这样既可以节省许多文字说明，又能使实验报告简明扼要。清楚明白。 5．数据记录和计算指从实验中测到的数据以及计算结果。 6．结果即根据实验过程中所见到的现象和测得的数据，作出结论。 7．备注或说明可写上实验成功或失败的原因，实验后的心得体会、建议等。 有的实验报告采用事先设计好的表格，使用时只要逐项填写即可。 三、撰写时应注意事项 写实验报告是一件非常严肃。认真的工作，要讲究科学性、准确性。求实性。在撰写过程中，常见错误有以下几种情况：1．观察不细致，没有及时、准确、如实记录。 在实验时，由于观察不细致，不认真，没有及时记录，结果不能准确地写出所发生的各种现象，不能恰如其分。实事求是地分析各种现象发生的原因。故在记录中，一定要看到什么，就记录什么，不能弄虚作假。为了印证一些实验现象而修改数据，假造实验现象等做法，都是不允许的。 2．说明不准确，或层次不清晰。 比如，在化学实验中，出现了沉淀物，但没有准确他说明是“晶体沉淀”，还是“无定形沉淀”。说明步骤，有的说明没有按照操作顺序分条列出，结果出现层次不清晰。凌乱等问题。
基因工程实验报告
————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期： 2
基因工程实验报告 、
小麦GAPDH截短体的重组与表达 摘要：本实验通过基因工程（genetic engineering）手段对小麦总RNA进行提取、PCR扩增及与质粒载体的重组构建的操作，并将重组质粒以氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞，诱导目的基因表达，并在蛋白水平进行Western检测。通过本对实验的实践，我们对基因工程技术将会有一个比较全面的认识和了解。 关键字：小麦基因；载体；感受态 前言 基因工程（genetic engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。为在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。它克服了远缘杂交的不亲和障碍。 （一）实验过程
1.实验部分流程： 片段胶 小麦幼苗小麦总RNA RT-PCR扩增小麦pGEX-4T-1 表达载体 表达菌株 目的蛋白 目的蛋白 Western
2．小麦总RNA提取（Trizol法） 2.1 材料 小麦幼苗 2.2 试剂配制及器具处理 ① 0.1％的DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） ②器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和1.5ml和0.2ml 的EP管等用纱布包裹，在 0.1％的DEPC H2O中浸泡过夜（37℃），高压灭菌，80℃烘干备用。剪刀、镊子和药匙等160℃烘烤6h以上。 ③无RNA酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃×2h）装蒸馏水，然后加入 0.1%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 ④Trizol ⑤ 75%乙醇：用新打开的无水乙醇和DEPC处理过的水配制75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。 ⑥氯仿(最好用新的)。 ⑦异丙醇(最好用新的)。 2.3 操作步骤： ①先在研钵中加入液氮，再将小麦叶片剪成小段在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中（注意研磨粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%），充分混合均匀。 ②室温放置5min，然后加入200μL的氯仿，盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。 ③ 12000rpm离心10min，取上层水相于一新的EP管中（千万不要将中间的沉淀层和下层液混入，否则重新离心分离），加入500μL异丙醇，温和颠倒混匀。室温放置10min，12000rpm 离心10min。 ④小心地弃去上清液，加入1ml的75%乙醇，涡旋混匀，4℃下12000rpm离心5min。 ⑤重复步骤④。 ⑥弃去上清液（尽量将残余液体除去），室温或真空干燥5～10min（注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度）。用30μL DEPC处理过的水将RNA溶解，必要时可55℃～60℃水浴10min。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 3. RT-PCR扩增目的基因cDNA 3.1 试剂 ① RNA模板 ②Olig（dT）18 ③反转录缓冲液 ④dNTP ⑤ M-MULV反转录酶 ⑥ RNA抑制剂（RNasin） ⑦Premix EX Taq DNA聚合酶 ⑧ PCR特异引物 3.2操作步骤： 3.2.1 RNA的反转录 采用Thermo Scientific（Fermentas）RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit Total RNA 6μL（需加入RNA约1μg） OligodT primer 1μL H2O（nuclease-free）5μL 12μL 65℃ 5min，补加下列试剂： 5× Reaction buffer4μL RibolockRNase Inhibitor 1μL 10mM dNTP Mix 2μL RevertAid M-MuLV Reverse Transcriptase 1μL 20μL 42℃ 60min 70℃，5min，﹣20℃保存
基因工程综合实验报告 A型产气荚膜梭菌α毒素基因克隆及表达 班级生物工程081班 姓名盖雪 学号08771029 指导教师高凤山 实验时间2011.10.10-10.14 成绩
一、实验原理 二、主要试剂 DNA Ligation Kit Ver.2.0; Eco RI、Bam HI限制性内切酶；含15%甘油的 0.1mol/L CaCl2，20-30mL。无菌;0.1mol/L CaCl2 , 20-30mL ；50%甘油（无菌，保存菌种用，50mL）4×25mL LB液体培养基(现配现用)，卡那霉素（Kan）100mg/mL配2mL（过滤），X-gal 二甲基甲酰胺配成20mg/mL 配2mL; IPTG 24mg/mL, 配2mL（需过滤）;蛋白Marker; 0.5M EDTA,pH8.0; 溴化乙锭溶液(EB) （贮存浓度：10mg/mL，使用浓度0.5μg／mL）
三、仪器设备 紫外成像系统，高速冷冻离心机，恒温震荡培养箱，高压灭菌锅，冰箱，水浴锅，微波炉，电炉子，试管架，tube 架，试管，瓶塞，锥形瓶，胶板，电泳槽（包括琼脂糖凝胶和SDS-PAGE），电泳仪，培养皿，移液枪，枪头（各种规格），玻璃涂棒，记号笔，标签纸，卫生纸，水漂（水浴用），试纸，称量纸，一次性手套，酒精灯，火柴，药勺，搅拌子，量筒，烧杯，镊子，tip, tube(1.5mL, 2mL) 五、实验步骤 (一)准备工作 LB培养基配制；LB固体培养基配置；接菌（制备感受态用） 1）LB固体配制 配制固体培养基100mL 加入蒸馏水100mL溶解，用2mol/L NaOH调pH值至7.4，121℃灭菌20min。 灭菌结束后，待温度降至80℃以下时，方能取出，在超净台上，当培养基凉至50-60℃时，迅速加入Kan 30μL（若氨苄，加100ul），摇匀，倒板(4个)。凝固后放入4℃冰箱。 2）LB液体配制 配制100mL液体LB培养基 加入蒸馏水100mL溶解，用2mol/L NaOH调pH值至7.4。 然后分装，每管5mL，每人分装2管，一共12管；另外分装30mL LB与三角瓶中，余下的LB在原三角瓶中与试管等一起高压，121℃，20min。高压后，将剩余三角瓶中的LB分装至1.5mL tube中，每管800μL LB (共10个)。在时间允许的情况下，将高压后的LB试管加入卡那，每管1.5μL。 总结：需要灭菌的东西-液体培养基（试管、30mL三角瓶及剩余液体LB的三角瓶）-固体培养基、离心管（至少30个）、各种规格的枪头。 3）接菌 下午，接种BL21感受态于1管5mL培养基中，37℃震荡培养。 （二）感受态细胞制备、转化、重组菌接种 1）感受态细胞的制备 1.从大肠杆菌DE3平板上挑取一个单菌落接种于5mL LB液体培养基的试管
实验报告 （2013 / 2014 学年第二学期） 课程名称Java语言程序设计 实验名称综合图形界面程序设计 实验时间2014年5月5日 指导单位计算机学院软件教学中心 指导教师薛景 学生姓名臧玉付班级学号12001037 计算机科学与技术学院（系）计算机学院专业 （计算机通信）
2、编写一个简单的计算器软件，实现简单的四则运算。（请在下方空白处填写本程序的全部 ．．程序代码及软件界面截图） import java.awt.BorderLayout; import java.awt.GridLayout; import java.awt.event.ActionEvent; import java.awt.event.ActionListener; import javax.swing.JButton; import javax.swing.JFrame; import javax.swing.JPanel; import javax.swing.JTextArea; import javax.swing.JTextField; public class test extends JFrame { private final int BUTTON_WIDTH=50; private final int BUTTON_HEIGHT=40; JButton one=new JButton("1"); JButton two=new JButton("2"); JButton three=new JButton("3"); JButton four=new JButton("4"); JButton five=new JButton("5"); JButton six=new JButton("6"); JButton seven=new JButton("7"); JButton eight=new JButton("8"); JButton nine=new JButton("9"); JButton zero=new JButton("0"); JButton DOT=new JButton("."); JButton ADD=new JButton("+"); JButton SUB=new JButton("-"); JButton MUL=new JButton("*"); JButton DIV=new JButton("/"); JButton EQU=new JButton("=");
一、实验名称： 重组DNA技术 二、实验目的： 1.了解掌握DNA重组技术理论基础； 2.掌握质粒载体、外源DNA的准备、酶切、连接技术方法； 3.掌握连接产物的转化方法及操作； 4.掌握阳性重组体的的鉴定和筛选方法； 三、实验原理: 1.重组DNA技术 重组DNA技术是指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸（基因）进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新特性的生物类型的技术。它主要包括以下几个步骤： ①目的基因的获取：主要有化学合成、PCR、基因组文库、cDNA文库构建等。cDNA文库是以mRNA为模板，利用反转录酶合成与mRNA互补的DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有cDNA信息，总称cDNA文库。常用于筛选编码蛋白质的结构基因。基因组DNA文库是利用限制性核酸内切酶将组织或细胞染色体DNA切割后，与适当载体连接后转入受体菌，这些受体菌包含了所有基因组DNA信息，因此称为基因组DNA文库。 ②基因载体的选择与构建：常用载体有质粒、噬菌体、病毒DNA等。分为克隆载体和表达载体。克隆载体：用于目的基因的克隆、扩增、序列分析和体外定点突变等。表达载体：用于在宿主细胞中表达外源目的基因，获得大量表达产物。选择好的载体与目的基因利用限制性内切酶切割成合适片段。
③目的基因与载体的拼接：通过粘性末端连接法（同源互补粘性末端连接、非同源互补粘性末端连接）、平端连接、人工接头连接、同聚物接尾、经部分补平的不匹配末端的连接等将目的基因与载体进行连接。 ④重组DNA分子导入受体细胞：将连接有目的DNA的载体导入宿主细胞，主要有以下几种方法：a、转化：将质粒或其它外源DNA导入宿主细胞(常用大肠杆菌)，并使其获得新的表型的过程。b、转染：将外源DNA导入真核细胞的过程。c、感染：以λ噬菌体、柯斯质粒和病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。 ⑤重组体的筛选：可通过遗传标记如抗药性标志选择、营养缺陷型的互补筛选法及分子标记（PCR、分子杂交）等直接筛选或是根据免疫化学法、酶联免疫检测法等进行间接筛选。 ⑥无性繁殖转化子(含重组分子的受体细胞) ⑦目的基因的表达 2、质粒酶切及鉴定原理 限制性内切酶是一种工具酶，其特点是具有能够识别双链DNA分子上的特异核苷酸序列的能力，能在这个特异性核苷酸序列内，切断DNA双链，形成一定长度的DNA序列。根据限制性内切酶的识别切割特性、催化条件及是否具有修饰酶活性可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类，II型限制性内切酶只需要二价镁离子的激活，酶在其识别序列内切割双链DNA，产生的各种DNA片段具有相同的末端结构，而且大多数的II型酶可提供粘性未端，有利于片段再连接，限制性内切酶对环状质粒DNA产生的酶切片段数与切口数一致。因此，鉴定酶切后的片段在电泳凝胶的区带数，就可以推断切口的数目;从片段迁移率可判断酶切片段大小。用已知分子量的线状DNA为对照，通过电泳迁移率的比较，可以粗略地测出分子形状相同的未知DNA的相对分子大小。本实验采用的限制性内切酶是Bam HI 和Hind III。 对于DNA回收，回收的目的是为了纯化提取的质粒，以用于以后的分子杂交、重组质粒的构建、序列分析等。目前常用的回收技术有：柱纯化回收法、电洗脱法、低熔点琼脂糖凝胶法、DEAE滤膜插片法等，其中柱纯化回收法、电
实验报告模板 不知道如何写实验报告的朋友，下面请看我给大家整理收集的实验报告模板，希望对大家有帮助。 实验报告模板1 一、演示目的 气体放电存在多种形式，如电晕放电、电弧放电和火花放电等，通过此演示实验观察火花放电的发生过程及条件。 二、原理 首先让尖端电极和球型电极与平板电极的距离相等。尖端电极放电，而球型电极未放电。这是由于电荷在导体上的分布与导体的曲率半径有关。导体上曲率半径越小的地方电荷积聚越多(尖端电极处)，两极之间的电场越强，空气层被击穿。反之越少(球型电极处)，两极之间的电场越弱，空气层未被击穿。当尖端电极与平板电极之间的距离大于球型电极与平板电极之间的距离时，其间的电场较弱，不能击穿空气层。而此时球型电极与平板电极之间的距离最近，放电只能在此处发生。 三、装置 一个尖端电极和一个球型电极及平板电极。 四、现象演示 让尖端电极和球型电极与平板电极的距离相等。尖端电极放电，而球型电极未放电。接着让尖端电极与平板电极之间的距离大于球型电极与平板电极之间的距离，放电在球型电极与平板电极之间发生
雷电暴风雨时，最好不要在空旷平坦的田野上行走。为什么? 实验报告模板2 一、实验目的及要求： 本实例是要创建边框为1像素的表格。 二、仪器用具 1、生均一台多媒体电脑，组建内部局域网，并且接入国际互联网。 2、安装windows xp操作系统;建立iis服务器环境，支持asp。 3、安装网页三剑客(dreamweaver mx;flash mx;fireworks mx)等网页设计软件; 4、安装acdsee、photoshop等图形处理与制作软件; 5、其他一些动画与图形处理或制作软件。 三、实验原理 创建边框为1像素的表格。 四、实验方法与步骤 1) 在文档中，单击表格""按钮，在对话框中将"单元格间距"设置为"1"。 2) 选中插入的表格，将"背景颜色"设置为"黑色"(#0000000)。 3) 在表格中选中所有的单元格，在"属性"面版中将"背景颜色"设置为"白色"(#ffffff)。 4) 设置完毕，保存页面，按下"f"键预览。 五、实验结果
实验报告 实验项目名称：基因工程综合实验所属课程名称：基因工程原理 班级：12生物工程3班学号：201230620312 姓名：李杰锋 指导老师：徐学锋
目录 0.摘要 (1) 1.前言 (1) 2.实验材料和仪器 (2) 2.1 实验材料 (2) 2.2 实验仪器 (2) 3.实验试剂 (2) 3.1DNA提取所需试剂 (2) 3.2 PCR实验所需试剂 (2) 3.3 双酶切实验所需试剂 (2) 4.实验步骤 (3) 4.1 质粒DNA提取 (3) 4.2 聚合酶链式反应（PCR） (3) 4.3 质粒DNA的双酶切分析 (4) 4.4 琼脂糖凝胶制备 (4) 5.实验结果与分析 (5) 5.1质粒DNA提取所得凝胶电泳结果 (5) 5.2 PCR扩增实验结果 (5) 5.3质粒DNA的双酶切分析结果 (6)
摘要：本实验包括质粒DNA的提取、DNA的凝胶电泳、质粒DNA中靶基因的酶切分析及质粒DNA中重组进的靶DNA序列的PCR扩增。通过本综合实验，进一步理解质粒DNA的提取原理、凝胶电泳中DNA分离的机理、限制性内切酶的工作原理及PCR是如何实现DNA扩增的，也掌握了DNA的提取技术、凝胶电泳技术、DNA酶切分析技术及靶基因的体外快速扩增技术，进而了解实验中出现的现象并学会分析与解决实验中出现的有关问题。 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNA或RNA的地方。 关键词：凝胶电泳限制线内切酶DNA质粒 1 前言 本次实验对象为含有重组了1kb DNA片段的PET32.a表达质粒。该表达质粒中长度约6kb。首先采用离心破碎法破碎细胞，再使用碱裂解法提取质粒DNA。最后通过各种化学抽提纯化质粒DNA，最后得到纯化后的DNA质粒作为之后实验的材料。在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液时，变性质粒DNA 又恢复到原来的够型；而线性的大分子量细菌染色体DNA则不能复性，与细胞碎片、蛋白质、SDS等形成不溶物，通过离心沉淀可被除去，而质粒DNA及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂的RNA可用RNaseA酶消除，再用酚/氯仿处理，可除去残留的蛋白质，达到纯化质粒DNA的目的。 PCR是根据DNA双螺旋结构在变性温度下解链为单链DNA，在退火温度下加入反应体系的特异引物根据碱基互补配对原则与单链DNA特异结合，然后在延伸温度下，通过DNA聚合酶的聚合作用，不同的脱氧核苷酸按照碱基互补配对原则，由引物引导合成出与模板DNA互补的新链，实现DNA的扩增的技术。本次实验我们将以纯化后的质粒DNA作实验材料，在预先设计好引物后
实验报告格式范文 实验报告如何写?格式是什么?下面是我给大家整理收集的实验报告格式范文，供大家阅读参考。 实验报告格式 实验名称 要用最简练的语言反映实验的内容。如验证某程序、定律、算法，可写成"验证×××";分析×××。 学生姓名、学号、及合作者 实验日期和地点(年、月、日) 实验目的 目的要明确，在理论上验证定理、公式、算法，并使实验者获得深刻和系统的理解，在实践上，掌握使用实验设备的技能技巧和程序的调试方法。一般需说明是验证型实验还是设计型实验，是创新型实验还是综合型实验。 实验原理 在此阐述实验相关的主要原理。 实验内容 这是实验报告极其重要的内容。要抓住重点，可以从理论和实践两个方面考虑。这部分要写明依据何种原理、定律算法、或操作方法进行实验。详细理论计算过程。 实验步骤
只写主要操作步骤，不要照抄实习指导，要简明扼要。还应该画出实验流程图(实验装置的结构示意图)，再配以相应的文字说明，这样既可以节省许多文字说明，又能使实验报告简明扼要，清楚明白。 实验结果 实验现象的描述，实验数据的处理等。原始资料应附在本次实验主要操作者的实验报告上，同组的合作者要复制原始资料。 对于实验结果的表述，一般有三种方法: 1. 文字叙述: 根据实验目的将原始资料系统化、条理化，用准确的专业术语客观地描述实验现象和结果，要有时间顺序以及各项指标在时间上的关系。 2. 图表: 用表格或坐标图的方式使实验结果突出、清晰，便于相互比较，尤其适合于分组较多，且各组观察指标一致的实验，使组间异同一目了然。每一图表应有表目和计量单位，应说明一定的中心问题。 3. 曲线图 应用记录仪器描记出的曲线图，这些指标的变化趋势形象生动、直观明了。 在实验报告中，可任选其中一种或几种方法并用，以获得最佳效果。 讨论 根据相关的理论知识对所得到的实验结果进行解释和分析。如果所得到的实验结果和预期的结果一致，那么它可以验证什么理论?实验结果有什么意义?说明了什么问题?这些是实验报告应该讨论的。但是,不能用已知的理论或生活经验硬套在实验结果上;更不能由于所得到的实验结果
大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测 （基因工程实验报告） 程庆佳 （云南大学，生命科学学院，生物技术，20091070004） （班级：周二下午实验班; 组号:第八组; 老师：赖建华；同组员：顾聚） 摘要：此次实验的目的是对大肠杆菌核糖核苷酸HII基因的克隆及其检测，其中的关键步骤包括了大肠杆菌基因DNA的提取，PCR扩增，DNA体外重组，感受态细胞的制备，重组DNA的转化，重组转化的检测等多种具有紧密连接性的实验，使学生可以掌握一套具有连贯性的实验过程，帮助学生塑造连贯试验的观念，从而得到更好地成长与进步。 关键词：提取、扩增、重组、感受态细胞、转化、检测 正文：此次实验的最终目的是要使学生连贯性的掌握本学期的实验，所以要求我们要熟悉每个实验的原理过程，以及实验结果的准确分析，只有这样才能保证实验最终结果的准确性，才能真正地掌握此次实验。 1、大肠杆菌基因组DNA的提取 原理： DNA是一个环形的大分子DNA,真核生物的DNA是以染色体的形式存在于细胞核内。不同种属的生物，以及不同形式的细胞（如菌类、培养细胞、植物组织，动物组织）基因组提取的方法是不同的，但其基本原则是类似的，即既要将DNA与蛋白质、脂类和糖类等分离，又要保持DNA分子的完整。提取DNA的一般过程是将分散好的组织细胞在含十二烷基硫酸钠（SDS）和蛋白酶K的溶液中消化分解蛋白质，再用酚和氯仿/异戊醇抽提分离蛋白质，得到的DNA溶液经乙醇沉淀使DNA从溶液中析出。SDS的作用机理是由于其能结合蛋白，中和蛋白的电性，使蛋白质的非共价键受到破坏，失去二级结构，从而变形失活，蛋白酶K 的重要特性是能在SDS和EDTA（乙二胺四乙酸二钠）存在的情况下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中，SDS可通过失活蛋白破坏细胞膜、核膜，并使组织蛋白与DNA 分离；而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使DNA分子完整地分离出来。CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白，多糖类物质分开。最后通过乙醇或异丙醇沉淀DNA，而CTAB溶于乙醇或异丙醇而除去。 简要步骤： （1）、菌种活化：将菌落接种于LB培养基中，37度培养过夜 （2）、取1ml菌液转入1.5ml离心管中，5000rpm离心1分钟，去上清。 （3）、加入500ulTE，50ul 10% SDS，5ul蛋白酶K，混匀，55度，保温20min （4）、加入50ul，5M Nacl混匀，再加入50ul CTAB 提取液，混匀，65度，20min （5）、去蛋白：300ul的酚和氯仿，轻轻混匀，10000rpm，2min （6）、上清转入另一个干净的1.5ml离心管，加入等体积氯仿异戊醇，轻轻混匀，10000rpm，2min，上清转入干净的1.5ml离心管中 （7）、加入1/10体积的醋酸钠，2倍体积的无水乙醇轻轻旋转小试管，可见絮状沉淀，即为染色体丝，10000qpm，3min收集沉淀 （8）、弃上清，沉淀用500ul 75%乙醇洗涤两次（每次10000rpm离心1min）
基因工程简介 教学目标： 1.基因工程的概念。 2.基因操作的工具和基本步骤。 3.基因工程的基本原理 教学重点和难点： 1.教学重点：基因工程的概念基因工程的基本步骤。 2.教学难点：基因工程的基本原理。 教学方法： 引导法 教学工具： 电子白板、多媒体课件等 教学过程： 一、导入新课 众所周知，对于大多数生物而言， DNA是主要的遗传物质，有遗传效应的DNA片段叫基因，生物之所以体现出各种形态是基因表达的结果。但是各种生物间的性状千差万别这是为什么呢？ 提出问题，引导学生回答：生物体的不同性状是基因特异性表达的结果。 列举几种生物的不同性状，如下：1．青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素。2．豆科植物的根瘤菌能够固定空气中的氮气。3．人的胰岛日细胞能分泌胰岛素调节血糖的浓度。 以上几种生物各自有其特定的性状，这些性状都是基因特异性表达的结果，但是人类能不能改造基因呢？能不能使本身没有某个性状的生物具有某个特定性状呢？例如，让禾本科植物能够固定空气中的氮气；让微生物生产出人的胰岛素、干扰素等药物。这样既节省了人力，又简化了生产，同时还不会对环境造成污染。这种设想能实现吗？回答是可以的。通过科学家们的不断努力，在20世纪70年代终于创立了一种能定向改造生物的新技术——基因工程。 二、讲授新课 1．基因工程的概念 对于基因工程的概念，教师应在指导学生阅读教材的基础上，让学生理解基因工程概念的两种不同的表述方式（标准概念和通俗概念），并通过提问的方式指导学生找出概念中的关键词语， 重组生物体剪切→拼接→导入→表 思考题：在以上的基因工程培育抗虫棉的过程中，关键步骤或难点是什么？ 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取。关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA 连接。关键步骤三：抗虫基因进入棉细胞。 关键步骤一的工具：基因的剪刀——限制性内切酶。关键步骤二的工具：基因的针线——DNA 连接酶。关键步骤三的工具：基因的运输工具——运载体。 （1）基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶）。 ①分布：主要在微生物中。 ②作用特点：特异性，即识别特定核苷酸序列，切割特定切点。
浙江工业大学计算机学院实验报告 实验名称 姓名 学号 班级 教师 日期
验内容与要求 一、实 1.1实验内容 要求详 细描述实验内容，不要干巴巴一行字，要展开叙述。汉字用宋体，11 号。所有的数 度。不能随意空行。格式如下： 字和英文字符用Times New Roman 字体。每段开头空 2 个汉 字宽 ××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××××。 1.2实验要求 要求写明具体的实验要求，实验预期的结果或效果等。可以整段文字写明，也可以分条目 逐个说明实验的各项要求。分条目说明的格式如下： (1) ××××××； (2) ××××××； (3) ××××××。 ???? 线 二、实 验原理与硬件连 2.1实验原理 ×. ×所示。图 注，图 应该有图 明××××如图 要求详细说明实验原理。出现图、表的地方，应 说 注段后间距为 0.5 行。 注都要求左右居中，图注文字比正文文字小 1 号，图 和图 里给大家提供最基本的图 ，如图1、2、3 和4 所示（文件最后）。如有需要，按照自己 我这 件去 整。所有的图都要求用visio软 内容进行插入。流程图和年字的图需要根据自己内容进行调 距等要和我给大家提供的一致，格式出 画（可从网上下载），而且文字大小、箭头样子、线条间 错的成绩统统降级。 线 2.2 硬件连 线 和 连 应 的 首先用文字说明连线事宜。如果需要，用图 的形式表示连线的方法，各引脚对 地址都要标出。 译码
实验一：大肠杆菌5 a和21感受态细胞的制备 【实验步骤】 1从平板上挑取新活化的大肠杆菌 5 a单菌落，接种到5培养基中，37C振荡培养过夜。 2取1培养物接种到100培，养基（250三角瓶）中，37C振荡培养2~3h。 3将菌液转移到50离心管（2管）中，冰上放置15。 4 4C 4000离心5,弃去上清液，倒置使培养液流尽。 5用20冷2溶液悬浮菌体沉淀合并成一管，在4C 4000离心5,弃去上清液。 6用10冷2溶液悬浮菌体沉淀，冰浴30。 7 4 C 4000 离心5，弃去上清液，用2的冷2溶液悬浮。 8分装到数个管中，每管200，冷冻保存备用。 实验二：目的基因质粒（或218） 和表达载体质粒（32或30）的转化及大量提取 【实验步骤】 一、载体的转化（无菌条件，冰上进行） 1、取200新鲜制备的感受态细胞，分别加入质粒 2 （32a, 18），混匀，冰上放置30。 2、将管放到42C保温90s,冰浴2。 3、加入800液体培养基，37 C慢摇复苏1 h。 4、将100的复苏细胞涂布在含有（100）的培养皿中，正置平皿30 （使菌液被培养基吸收）。 5、倒置平皿37C培养16 h，出现菌落。 二、质粒的提取 1挑取单菌落接种于100加入50的液体培养基中，振荡培养过夜。 2过夜培养的菌液加入1.5的小指管（20个每组）中，每次1 , 4 C, 12000，离心1 , 4次，弃上清。 3加入150溶液I悬浮细胞，漩涡振荡，室温静置10。 4加入350溶液H （新鲜配制），轻微颠倒混匀20次，冰浴5。（不能再剧烈震荡） 5加入300溶液川（冰上预冷），颠倒混匀20次，不能剧烈震荡，冰浴10。 6 4 C, 12000，离心10，取上清转移至另一离心管中。 7向上清中加入0.6倍异丙醇，轻轻混匀，室温静置20。 8 4 C, 12000，离心10，弃上清，倒扣于吸水纸上，吸净液体。 9用1 70%乙醇洗涤质粒沉淀2次，每次4 C, 12000，离心3，吸去上清。 10 55C烘干至无酒精，加入20 ,所有集成一管后加入1~2 , 37C消化1~2h, -20 C保存。 11电泳分析。制胶：0.14g琼脂糖，20 1 X缓冲液，溶解后倒入制胶板，放入梳子，冷 却凝固待用。点样：6质粒+1上样缓冲液。电压：180V,电泳至蓝色带距离点样孔3。 实验三目的基因质粒和表达载体质粒的酶切及其产物的分离纯化 【实验步骤】 1酶切 酶切体系 试剂小量酶切大量酶切 火菌水5一 质粒1088 I0.51 出0.51
成都理工大学管理科学学院 教学实验报告 课程名称：沙盘模拟＿ 专业：＿人力资源管理＿＿＿＿ 学号：＿＿＿＿＿ 姓名：＿＿＿＿ 担任角色：＿＿产品总监＿＿＿ 团队名称：＿Hakula—Matata＿＿＿ 指导教师：＿＿刘勇＿＿＿＿＿ 实训日期：2012年12月28日—31日 管理科学学院管理综合实验室 二○年月日
1.实验目的 在整个训练过程中，并没有一成不变的问题或标准答案，其核心的是一套完善的模拟系统和全面专业的管理学知识体系。参加训练的学生组成相互竞争的多家模拟企业，为完成经营目标，借助所掌握的理论知识，独立做出各种运营决策。包括：制订企业战略、分析市场信息、制订研发计划、产品特性设计、营销渠道建设、生产制造管理、竞争对手分析、产品定价策略、市场营销推广、全面预算管理、经营绩效分析等等。通过逼真再现的商业环境和学生对虚拟企业的亲自运营管理，帮助学生掌握应对在现实中可能碰到的各种管理问题的有效办法，在失败中吸取教训，在成功中领悟真谛，从而增强对企业的感性直观的认识，掌握所学管理知识在实践中的具体应用，真正提升日常企业管理经营中的分析决策能力。 2.实验分析 2.1企业经营管理分析： 2.1.1公司基本概况： （1）公司筹建 企业名称：Hakula Matata 企业价值观：优质和服务是我们终身的承诺 企业目标：为顾客提供顶级产品和服务 总经理：蒲爽（主持日常经营管理工作，制定公司发展计划和投资方案） 市场总监：陈玉龙（根据企业产品和销售业绩，制定销售方案和战略目标） 生产总监：王艺筱（制定公司发展战略与年度经营计划，主持制定、调整年度生产计划及预算，计划并指导与生产、工厂管理、原材料供应及质量相关的工作）研发总监：张艺川（整体研究、策划、设计和完善公司的各个产品，对产品线进行开发以及产品生命周期管理） 财务总监：许晓珊（合理控制企业资金，保证企业生存发展的资金空间） 其他角色任命：人力资源总监——蒲爽（组织制订公司用工制度、人事管理制度、劳动工资制度、人事档案管理制度、员工手册、培训大纲等规章制度、实施细则和人力资源部工作程序，经批准后组织实施） 2.1.2企业战略 ——总战略：HM公司主要走集中低成本路线，在成本战略的基础上，集中战略市场。 短期战略（1-3季）：集中人力物力财力进行华北市场和华中市场的开拓和商务人士产品研发，集中销售青少年产品，为以后季度的销售打下基础；、 中期战略（4-6季）：在已经开发完成的华北市场上着重销售商务人士产品，增加主打产品的销售量，同时稳固已有的产品市场占有份额，保障企业在整个市场的份额。 长期战略（7-8季）：保持经济的稳定增长，合理的控制成本，根据产品的生命周