1.病毒是一类什么样的微生物？它有什么特点？
2.病毒的分类依据是什么？分为哪几类病毒？
3.什么叫毒性噬菌体？什么叫温和噬菌体？
4.什么叫溶原细胞？什么叫原噬菌体？
5.什么叫噬菌斑？
1.细菌有哪几种形态？有哪些一般结构和特殊结构？它们各有哪些生理功能？
2.革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构有什么异同？各有哪些化学组成？
3.简述细菌细胞质膜的结构和化学组成？各有哪些生理功能？
4.叙述革兰氏染色的机制和步骤？
5.何谓细菌菌落？细菌有哪些培养特征？
1.何谓原生动物？它有哪些细胞器和营养方式？
2.原生动物分几纲？在废水生物处理中有几纲？
3.真菌包括哪些微生物？水体富营化与哪些藻类有关？
4.霉菌有几种菌丝？如何区分霉菌和放线菌的菌落？
1.酶是什么？它有哪些组成？各有什么生理功能？
2.简述酶蛋白的结构和酶的活性中心？
3.按酶所在细胞的不同部位，酶可分为哪几种？按催化化学反应类型可分为哪几种？
4.酶的催化作用有哪些特性？影响酶活力的因素有哪些？
5.微生物含有哪些化学组分？需要哪些营养物质？
6.什么叫培养基？按物质的不同，培养基可分为哪几类？按实验的目的和用途不同，可分为哪几类？
7.什么叫底物水平磷酸化、氧化磷酸化和光合磷酸化？
8.营养物质进入细胞的方式有哪些？各有什么特点？
1.什么叫灭菌？什么叫消毒？
2.细菌的生长繁殖期可分为几个时期？每期各有什么特点？
3.微生物生长量的测定方法有哪些？
4.菌种的保藏方法有哪些？
1.DNA和RNA的结构有什么区别？
2.什么是分子遗传学中心法则？
3.什么是DNA的变性和复性？
4.简述DNA的复制过程？
5.基因突变的特点是什么？
6.杂交、转化、转导的区别是什么？
1.蛋白质的水解过程是怎样的？
2.何谓氨化作用、硝化作用、反硝化作用、固氮作用？它们各由哪些微生物起作用？
3.氮在自然界存在的三种方式是什么？
4.什么叫硫化作用？参与硫化作用有哪些微生物？
1.菌胶团的作用表现在哪些方面？
2.简述原生动物及微型后生动物的指示作用？
3.简述水体富营养化的原因及危害？
4.简述废水的脱氮、除磷原理？
1.简述革兰氏染色的原理和步骤？
2.大肠杆菌和枯草杆菌染色后各得到什么结果？（包括颜色、细菌形态）
3.灭菌都有哪些方法？为什么湿热比干热灭菌优越？
4.培养基是根据什么原理配置成的？肉膏蛋白胨琼脂培养基中不同成分各起什么作用？
一、选择填空（每题1.5分，共30分）
1.自然界中分离到的细菌,形态各种各样,其中种类最多的是( )
A.球菌
B.螺旋菌
C.放线菌
D.杆菌
2.在下列原核生物分类中,属古细菌的是:
A.大肠杆菌
B.枝原体
C.放线菌
D.产甲烷细菌
3.细菌的细胞核是:
A.裸露的DNA分子.
B.DNA与组蛋白结合的无核膜包围的染色体.
C.RNA与组蛋白结合的无核膜包围的染色体.
4.Bacillus subtilis在生长发育的一定时期能形成:
A.孢囊
B.芽胞
C.伴胞晶体
D.子实体
5.细菌的繁殖主要靠:
A.二分分裂
B.纵裂
C.出芽生殖
D.有性生殖
6.下列微生物属于原核微生物的是:
A.细菌
B.霉菌
C.酵母菌
D.单细胞藻类
7.最主要的产芽胞细菌是:
A.革兰氏阳性杆菌
B.球菌
C.螺旋菌
D.产甲烷细菌
8.假单胞菌属的拉丁文属名为:
A. Xanthomonas
B. Nitrobacter
C. Pseudomonas D．Bacillus
9.细菌芽胞抗热性强是因为含有:
A.聚-b-羟基丁酸
B.2,6-吡啶二羧酸
C.氨基酸
D.胞壁酸
10.细菌的鞭毛是:
A.细菌运动的唯一器官
B.细菌的一种运动器官
C.细菌的一种交配器官
D.细菌的繁殖器官
11.酵母菌的菌落类似于:
A.霉菌菌落
B.链霉菌菌落
C.细菌菌落 D．放线菌菌落
12.指出错误的回答，真核微生物包括:
A.真菌
B.藻类（蓝藻除外）
C.枝（支）原体
D.原生动物
13.病毒含有的核酸通常是:
A.DNA和RNA
B.DNA或RNA
C.DNA
D.RNA
14.硝化细菌是:
A.化能无机营养菌。
B.化能有机营养菌。
C.光能营养菌。
15.ATP含有:
A.一个高能磷酸键
B.二个高能磷酸键
C.三个高能磷酸键
16.酶是一种___的蛋白质
A.多功能
B.有催化活性
C.结构复杂
17.在微生物细胞中单糖主要靠_____途径降解生成丙酮酸。
A.EMP
B.HMP
C.ED
D.TCA
18.在下列微生物中___能进行产氧的光合作用。
A.链霉菌
B.蓝细菌
C.紫硫细菌
D.绿硫细菌
19.杀死所有微生物的方法称为:
A.消毒
B.灭菌
C.防腐
D.化疗
20.自养型微生物和异养型微生物的主要差别是：
A.所需能源物质不同
B.所需碳源不同
C.所需氮源不同
二、判断题（每题2分，共20分）
1.稀释平板测数时,细菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300个之间的稀释度进行计数。
2.核糖核蛋白体是核酸和蛋白质合成的场所。
3.四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌均是多细胞的微生物。
4.葡萄糖彻底氧化产生38个ATP,大部分来自TCA循环。
5.NAD通过呼吸链可产生3个ATP,FAD通过呼吸链链可产2个ATP。
6.组成20种氨基酸三联体密码的碱基是A.T.G.C。
7.革兰氏阳性菌和阴性菌的差异在于细胞壁的构造和成分的不同。
8.组成微生物细胞的化学元素来自微生物生长所需要的营养物质。
9.基团转位运输方式中,除了在运输过程中物质发生化学变化这一特点外,其它特征均与主动运输方式相同。
10.空气是微生物栖息繁殖的良好环境。
三、解释名词（每题4分，共20分）
1.单纯扩散、促进扩散
2.化能自养菌、光能自养菌
3.三羧酸循环
4.酶
5.放线菌
四、问答题（每题5分，共30分）
1.革兰氏染色反应的成败关键是什么? 为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义? 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的革兰染色结果分别是什么？
2.何谓细菌菌落？细菌的菌落有那些特征？
3.什么是微生物? 它包括哪些类群?
4.比较无氧呼吸与发酵作用的主要区别。
5.细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点?
6.何谓原生动物？分几纲？代表种是什么？
一、选择题（每题2分，共30分）
1.原核生物（）
A.有细胞核
B.有有丝分裂
C.有线粒体
D.有细胞壁
2.放线菌是抗生素的主要生产菌，许多著名常用的抗生素都是（）属的种的次生代谢产物。
A．链霉菌 B.小单孢菌 C.诺卡菌 D.放线菌
3构成丝状真菌营养体的基本单位是 .
A.菌丝
B.菌丝体
C.无隔菌丝 D .有隔菌丝
4酵母菌的细胞壁主要含（）。
A.肽聚糖和甘露聚糖
B.葡聚糖和脂多糖
C.几丁质和纤维素 D葡聚糖和甘露聚糖
5.噬菌体是一种感染的病毒。
A.酵母菌
B.霉菌
C.放线菌和细菌
D.原生动物
6.在实验中我们所用到的淀粉水解培养基是一种（）培养基。
A.基础培养基
B.加富培养基
C.选择培养基
D.鉴别培养基
7.培养料进入细胞的方式中运送前后物质结构发生变化的是（）
A.主动运输
B.被动运输
C.促进扩散
D.基团移位
8.硝化细菌属于（）型的微生物。
A.光能自养
B.光能异养
C.化能自养
D.化能异养
9.当一个NADH分子经代谢并让它的电子通过电子传递链传递后，可产生（）
A.6个氨基酸分子
B.1个葡萄糖分子
C.3个ATP分子
D.1个甘油三酯和2个甘油二酯
10.电子传递链中（）
A.氧用作末端受体
B.细胞色素分子不参加分子转移
C.转移的一个可能结果是发酵
D.电子转移的电子来源是DNA
11.当进行糖酵解化学反应时，（）.
A. 糖类转变为蛋白质
B.酶不起作用
C.从二氧化碳分子产生糖类分子
D.从葡萄糖分子产生丙酮酸分子
12.在化学消毒剂中，通过凝固蛋白作用杀菌的是（）
A.新洁尔灭
B.乙醇
C.甲醛
D.拮抗
13.在细菌细胞中能量代谢场所是（）
A.细胞膜
B.线粒体
C.核蛋白体
D.质粒
14.在微生物细胞中单糖主要靠_____途径降解生成丙酮酸。
A.EMP
B.HMP
C.ED
D.TCA
15.杀死所有微生物的方法称为:
A.消毒
B.灭菌
C.防腐
D.化疗
二、指出图中存在的错误，并改正（10分）
三、解释名词（每题4分，共20分）
1.主动运输促进扩散
2.氨化作用硝化作用反硝化作用
3.合成培养基、天然培养基
4.消毒灭菌
5.单成分酶、全酶
四、问答题（每题5分，共20分）
1.革兰氏染色反应的成败关键是什么? 为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义? 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的革兰染色结果分别是什么？
2.概述证明核酸是遗传基础的三个经典实验的过程。
3.微生物在氮素循环中行为作用是什么？每一行为的实质是什么？
4.细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点？
五、论述题（每题10分，共20分）
1.设计一个实验，从海洋中分离出能够降解苯酚的细菌，请写出主要步骤和在配制培养基时应该注意的问题。
2.葡萄糖在好氧条件下是如何彻底氧化分解的（说明代谢过程和能量产生过程）？
一、选择题（每题1.5分，共30分）
1.用来染芽胞的染料通常是( )
A.孔雀
B.结晶紫
C.复红
D.番红
2.噬菌体是专性寄生于( )的寄生物
A.细菌
B.酵母菌
C.霉菌
D.真菌
3.自然界中的大多数微生物是靠（）产能
A.发酵
B.有氧呼吸
C.光合磷酸化
D.无氧呼吸
4.Escherichia细菌的鞭毛着生位置是( )
A.偏端单生
B.两端单生
C.偏端丛生
D.周生鞭毛
5.细菌的芽胞是（）
A.一种繁殖方式
B.细菌生长发育的一个阶段
C.一种运动器官
D.一种细菌接合的通道
6.自然界中的大多数微生物是靠（）产能
A.发酵
B.有氧呼吸
C.光合磷酸化
D.无氧呼吸
7．高压蒸汽灭菌的工艺条件是（）
A.121℃/30min
B.115℃/30min
C.130℃/30min
8.牛肉膏蛋白胨培养基用来培养（）
A.酵母菌
B.霉菌
C.细菌
D.放线菌
9.在溶源细胞中,原噬菌体以( )状态存在于宿主细胞中
A.游离于细胞质中
B.缺陷噬菌体
C.插入寄主染色体
10. 细菌中紫外线引起的突变是（）
A. 由于染色体断裂
B.由于引起移码突变
C.由于形成胸腺嘧啶二聚体
D.由于DNA的一个片段颠倒
11. 下面所有特征适合于三羧酸循环，除了（）之外。
A. CO2分子以废物释放
B.循环时形成柠檬酸
C. 所有的反应都要酶催化
D.反应导致葡萄糖合成
12. 平板划线分离法需要下面所有的物品，除了（）之外
A.接种环
B.琼脂培养基平板
C.细菌的培养物
D.离心机
13. 假单胞菌属的拉丁文属名为( )
A. Xanthomonas
B. Nitrobacter
C. Pseudomonas D．Bacillus
14.单纯扩散和促进扩散的主要区别是( )
A.物质运输的浓度梯度不同
B.前者不需能量,后者需要能量
C.前者不需要载体,后者需要载体
15.自养型微生物和异养型微生物的主要差别是( )
A.所需能源物质不同
B.所需碳源不同
C.所需氮源不同
16.两种微生物形成共生关系后，不能够( )
A.在生理功能上相互分工
B.象一种生物一样繁衍
C.由其它微生物任意代替其中的任何一种微生物
D.组成一个结构统一的生物体
17.放线菌的菌体呈分枝丝状体,因此它是一种( )
A.多细胞的真核微生物
B.单细胞真核微生物
C.多核的原核微生物
D.无壁的原核微生物
18.下列细菌中能产芽胞的种是（）
A.Bacillus subtilis
B.Staphylococcus aureus
https://www.doczj.com/doc/4518354202.html,ctobacillus plantarum
D.
E.coli
19.在使用显微镜油镜时,为了提高分辨力,通常在镜头和盖玻片之间滴加( )
A.二甲苯
B.水
C.香柏油
D.甘油
20.下面所有特征适合于三羧酸循环，除了（）之外
A . CO2分子以废物释放 B. 循环时形成柠檬酸
C. 所有的反应都要酶催化
D. 反应导致葡萄糖合成
二、填空题（每空2分，共20分）
1.人类对微生物的利用主要集中在三个方面，一是利用菌体，如（）,二是利用微生物的代谢产物，如（），（）,三是利用微生物的代谢过程，如（）。
2在营养物质运输中,能逆浓度梯度方向进行营养物运输的运输方式是（）,（）。
3测定微生物数量的方法有（），（），（），（）。
三、解释名词（每题3分，共15分）
1.单纯扩散、促进扩散
2.发酵
3.碳源、氮源
4.合成培养基、天然培养基
5.微生物营养
四、问答题（每题5分，共25分）
1.什么叫菌落？什么叫菌苔？试分析细菌的细胞形态与菌落形态间的相关性？
2.什么是微生物? 它包括哪些类群?
3.微生物有哪些共同特性？试举例分析其利弊
4.革兰氏染色反应的成败关键是什么? 为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义? 大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的革兰氏染色结果分别是什么？
5.细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点?
五、论述题(共10分)
画出一条从葡萄糖开始的乙醇发酵代谢途径示意图，并说明该代谢途径在微生物细胞内发挥哪些生理作用。
一、辨别正误（每题1分，共10分）
1、放线菌可分为单细胞放线菌和多细胞放线菌两种类型。
2.、绝大多数污泥膨胀是由霉菌过度繁殖引起的。
3、在液体培养基中，细菌都形成沉淀。
4、细菌的荚膜是休眠细胞，具有的抗热性、抗辐射、抗干燥能力。
5、洁净的土壤中只有原核微生物存在，没有真核微生物存在。
6、有些微生物没有氧气也能存活。
7、蓝细菌的营养类型为化能自养型。
8、S元素可以作为微生物的能源。
9、芽孢起保护作用，是细菌生命活动所必需的。
10、线虫是微型后生动物。
二、选择题（每题1分，共10分）
1、微生物的营养要素包括( )。
A氮源 B明胶 C酵母膏 D蛋白胨
2、霉菌的营养类型为( )。
A光能无机营养型 B光能有机营养型 C化能无机营养型 D化能有机营养型）3、革兰氏染色的关键操作步骤是( )。
A初染 B媒染 C 脱色 D 复染
4、直接显微镜计数用来测定下列所有微生物群体的数目，除了( )之外。
A轮虫 B酵母菌 C细菌 D噬菌体
5、发生在废水处理系统中的微生物反硝化作用的主要产物是( )。
A尿素 B氮气 C蛋白质 D氨
6、营养物质从胞外运输到胞内需要消耗能量同时发生化学变化的是（）。
A简单扩散 B促进扩散 C主动运输 D基团转位
7、下面属于原核生物的是（）。
A红藻 B绿藻 C硅藻 D蓝藻
8、细菌细胞中的磷贮藏颗粒是（）。
A羧酶体 B淀粉粒 C聚-β-羟基丁酸 D异染颗粒
9、革兰氏染色中一般使用的染料是（）。
A美蓝和刚果红 B苯胺黑和碳酸品红
C结晶紫和番红 D刚果红和番红
10、遗传物质存在的场所是（）
A. 拟核
B. 异染粒
C. 荚膜
D. 核糖体
三、名词解释（每题4分，共20分）
1. 酶、辅酶
2. 硝化作用、氨化作用
3. 酵母菌、真菌
4. 丝状污泥膨胀、非丝状污泥膨胀
5. 鉴别培养基、选择培养基
四、简答题（每题5分，共40分）
1. 酶可分为哪6大类？写出其反应通式。
2. 藻类一共分哪几个门?
3. 比较无氧呼吸与发酵作用的主要区别。
4. 细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点？
5. 病毒是一类怎样的微生物？有什么特点？
6. 说明微生物脱氮机理？
7. 何谓原生动物？分几纲？代表种是什么？
8. 测定微生物的生长有哪些方法？各有何优缺点？
五、问答题（每题10分，共20分）
1. 光能自养微生物、光能异养微生物、化能自养微生物、化能异养微生物的碳源和能源各是什么？
2. 比较分析细菌和病毒的异同点。
2007 ~ _2008学年第 2 学期环境工程微生物学课程试卷
标准答案及评分标准A( √ )/B( ) 卷
专业_环境科学、环境工程_ 班级 _061、062_
注意：标题请用宋体4号，内容请用宋体5号。
一、辨别正误（每题1分，共10分）
1 2 3 4 5
错误正确错误正确错误
6 7 8 9 10
错误正确正确错误正确
二、选择题（每题1分，共10分）
1 2 3 4 5
A D C D D
6 7 8 9 10
D D D C A
三、名词解释（每题4分，共20分）
1. 酶：酶（enzyme）由生物体内细胞产生的一种生物催化剂（2分）。由蛋白质组成（少数为RNA）。能在机体中十分温和的条件下，高效率地催化各种生物化学反应，促进生物体的新陈代谢。生命活动中的消化、吸收、呼吸、运动和生殖都是酶促反应过程。酶是细胞赖以生存的基础。细胞新陈代谢包括的所有化学
反应几乎都是在酶的催化下进行的（2分）。
2. 硝化作用：硝化细菌在好氧条件下将氨氧化为硝酸的过程（2分）。先是亚硝化单胞菌将铵氧化为亚硝酸；然后硝化杆菌再将亚硝酸氧化为硝酸。这两群细菌统称硝化细菌。在自然界氮循环中发挥着非常重要的作用（2分）。
3. 放线菌：原核生物的一个类群（2分）。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，气生菌丝和孢子丝。以无性孢子和菌体断裂方式繁殖。在自然界分布很广，产生种类繁多的抗生素。与人类关系十分密切。重要的属有：链霉菌属，小单孢菌属和诺卡氏菌属等（2分）。
4. 污泥膨胀：常的活性污泥沉降性能好，其SVI约为50—150之间为正常，当SVI>200并继续上升时，称为污泥膨胀，主要是由丝状菌繁殖引起的膨胀（2分）。即污泥中丝状菌过渡增长繁殖的结果，丝状菌作为菌胶团的骨架，细菌分泌的外酶通过丝状菌的架桥作用将千万个细菌凝结成菌胶团吸附有机物形成活性污泥的生态系统。但当丝状菌大量生长繁殖，活性菌胶团结构受到破坏，形成大量絮体而漂浮于水面，难于沉降。这种现象称为丝状菌繁殖膨胀（2分）。
5. 鉴别培养基：利用不同微生物进行培养后，予培养基中加入特定的试剂或指示剂，以其反应的变化，区分不同类型的微生物（4分）。
四、简答题（每题4分，共40分）
1. 细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点？
将少量单细胞微生物接种于一定量的液体培养基内，在适宜的条件下培养，并定时取样测定活微生物数目的变化，叫做间歇培养（分批培养）。用坐标法作图,以时间为横坐标，以单细胞微生物数量的对数为纵坐标，可以绘出一条有规律的曲线，称为生长曲线。分为停滞期、对数期、静止期和衰亡期四个时期。（2分）（1）停滞期：当细菌被接种到新鲜培养基中，开始一段时间内，通常不立即进行细胞分裂、增殖，生长速率近于零，细胞数目几乎保持不变，甚至稍有减少，这段时间被称为停滞期。
（2）对数期：对数期的细胞分裂速度最快、繁殖一代的时间最短、代谢活动旺盛、对环境变化敏感，并且细胞内的核糖体等组分也像细胞数目一样以同样的对数生长速率增加，细胞合成核糖体以及蛋白质越多，其生长速率也越快。
（3）静止期：静止期细胞从生理上的年轻转化为衰老，表现为细菌的代谢活力钝化，细胞含有较少的核糖体，RNA和蛋白质合成缓慢，mRNA的水平低下，因此细胞的生长变得不平衡，细胞的形状有的也发生改变。因不能维持细胞壁的合成与修复，细胞的染色特点也发生变化，如G+转变为G-。
（4）衰亡期：衰亡期细胞的总数虽然镜检直接计数可能会保持不变，但间接计数检测到的细胞数目却在减少，同时伴随着细胞的裂解或自溶可释放出一些代谢产物，如氨基酸、转化酶、外肤酶或抗生素等。衰亡期的长短与对数生长期一样在不同微生物中变化是很大的，主要与菌种的遗传特性有关。通过补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡期的细胞死亡速率，延长细菌培养物的存活时间。（2分）
2. 测定微生物的生长有哪些方法？各有何优缺点？
测定微生物生长的方法主要有直接测定法、间接测定法和重量法等。（2分）直接测定法可以分为涂片染色法、计数器测定法、比例计数法、比浊计数法等，优点是快速，缺点是不能区分死菌和活菌；间接计数法包括平板计数法、液体计数法（MPN法）、薄膜过滤计数法，可以区分死菌和活菌，但测定过程通常比较繁
琐；重量法包括测定细胞干重法、细胞含N量法、DNA含量法等。（2分）
3. 为什么在自然界清洁淡水水体中主要存在一些光能自养型和化能自养型微生物?
这些环境条件下由于缺少有机物，光照好以及纯在S、Fe2+等因素，导致光能自养型和化能自养型微生物易于生长。
4. 有机物（C、N、S）好氧降解与厌氧降解的产物有何区别？
（1）在好氧条件下有机物（C、N、S）降解产物：
C→CO2 + 碳酸盐和重碳酸盐
N→NH3→HNO2→HNO3→ 盐
S → H2SO4（2分）
（2）在好氧条件下有机物（C、N、S）降解产物：
C→RCOOH（有机酸）→CH4+CO2
N→RCHNH2COOH→NH3+有机酸
S→H2S（2分）
5. 那些物质可以作为无氧呼吸中氢和电子的最终受体。
可以作为无氧呼吸中氢和电子最终受体的包括：硝酸盐、硫酸盐、硫元素、Fe3+、H2、CO2等。
6. 光能自养微生物、光能异养微生物、化能自养微生物、化能异养微生物的碳源和能源各是什么？
碳源分别是二氧化碳、小分子有机物、二氧化碳、有机物（2分）；能源分别是光能、光能、化学能、化学能。（2分）
7. 酵母菌、乳酸菌在无氧条件下将丙酮酸分解生成的产物是什么？并列出其中关键的酶。
酵母菌在无氧条件下将丙酮酸分解生成的产物是乙醇，关键酶是乙醇脱氢酶；（2分）乳酸菌在无氧条件下将丙酮酸分解生成的产物是乳酸，关键酶是乳酸脱氢酶。（2分）
8. 写出大肠埃希氏杆菌和枯草芽孢杆菌的拉丁文全称。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（2分）大肠杆菌Escherichia coli（2分）9. 病毒是一类怎样的微生物？有什么特点？
病毒是一类超显微的非细胞生物，每一种病毒只含有一种核酸；它们只能在活细胞内营专性寄生，靠其宿主代谢系统的协助来复制核酸、合成蛋白质等组分，然后再进行装配而得以增殖；在离体条件下，它们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。（2分）
病毒的特点
（1）形体极其微小，必须在电子显微镜下才能观察，一般都可通过细菌滤器。（2）没有细胞构造，故也称分子生物。
（3）其主要成分仅有核酸和蛋白质两种。
（4）每一种病毒只有一种核酸，不是DNA就是RNA。
（5）既无产能酶系也无蛋白质合成系统。
（6）在宿主细胞的协助下，通过核酸的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖，不存在个体的生长和二分裂法等细胞繁殖方式。
（7）在宿主的活细胞内营专性寄生。
（8）在离体条件下，能以无生命的化学大分子状态存在，并可形成结晶。（9）经提纯的病毒结晶能保持侵染力。
（10）对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感。（2分）
10. 细菌有哪些一般结构和特殊结构？它们各有哪些生理功能？
细菌基本结构包括：细胞壁、细胞质膜、细胞质及其内含物、细胞核物质。特殊结构包括：芽孢、鞭毛、荚膜、粘液层、菌胶团、衣鞘及光合作用层片等。（2分）
细胞壁的功能：①保护原生质体免受渗透压引起的破裂作用；②维持细菌的细胞形态；③细胞壁是多孔结构的分子筛，阻拦某些分子进入和保留蛋白质在间质；
④使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性；⑤为鞭毛提供支点，使鞭毛运动。细胞质膜的生理功能：细胞质膜的生理功能有：①维持渗透压的梯度和溶质的转移；②细胞质膜上有合成细胞壁和形成横膈膜组分的酶，故可在膜的外表面合成细胞壁；③膜内陷形成的中间体含有细胞色素，可参与呼吸作用；④可在细胞质膜上进行物质代谢和能量代谢；⑤为鞭毛提供附着点。
核糖体是合成蛋白质的场所。
细胞内含颗粒：气泡（水生细菌）：提供浮力；异染颗粒：磷源和能源性贮藏物。聚b-羟基丁酸（简称 PHB）颗粒：能量的贮存物；调节pH。糖原和淀粉粒：用作碳源和能源。硫粒：某些化能自养型硫细菌，贮存的能源物质。
拟核：拟核携带全部或部分遗传信息，它的功能是决定遗传性状和传递遗传信息，是重要的遗传物质。
荚膜：（1）保护作用：保护细菌免受干燥的影响，保护不受宿主吞噬细胞的吞噬。（2）当缺乏营养时，荚膜可被用作碳源和能源。（3）具荚膜的致病菌毒力强，失去荚膜的致病力下降。（4）废水生物处理中的细菌荚膜有生物吸附作用，将废水中的有机物、无机物及胶体吸附在细菌体表面上。
芽孢：保护作用。
鞭毛：运动器官。（2分）
五、问答题（每题1分，共20分）
1. 酶可分为哪6大类？写出其反应通式。
据酶所催化的反应类型，把酶划分为6类:
水解酶：催化底物的加水分解反应。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。如脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应。
氧化-还原酶：催化氧化-还原反应。包括脱氢酶(dehydrogenase)和氧化酶(Oxidase)。如乳酸(Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。
转移酶：催化基团转移反应，即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。例如，谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。
裂合酶：催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及逆反应。主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。
异构酶：催化各种同分异构体的相互转化。例如，6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。
合成酶，又称为连接酶，能够催化C-C、C-O、C-N 以及C-S 键的形成反应。这类反应必须与ATP分解反应相互偶联。A + B + ATP + H-O-H = A-B + ADP +Pi 2. 比较分析细菌和酵母菌的异同点。
要点：细菌是原核生物，酵母菌是真核生物（5分）。然后从大小、形态、生理、菌落形态等方面进行比较（5分）。
一、辨别正误（每题1分，共10分）
1、放线菌可分为单细胞和多细胞两种类型。
2.、在生物膜法水处理工艺中通常会发生污泥膨胀现象。
3、在液体培养基中，细菌都形成沉淀。
4、细菌的荚膜具有的抗热性、抗辐射、抗干燥能力。
5、有些微生物可以利用氰化物作为能源和碳源。
6、有些微生物可以在没有氧气的情况下生存。
7、真菌的营养类型为化能自养型。
8、硫元素可以作为微生物的能源。
9、芽孢起保护作用，是细菌生命活动所必需的。
10、轮虫是一种原生动物。
二、选择题（每题1分，共10分）
1、微生物的营养要素包括( )。
A生长因子B明胶C酵母膏D蛋白胨
2、紫硫细菌菌的营养类型为( )。
A光能无机营养型B光能有机营养型C化能无机营养型D化能有机营养型）3、革兰氏染色的最后步骤是( )。
A初染B媒染C 脱色D 复染
4、直接显微镜计数用来测定下列所有微生物群体的数目，除了( )之外。
A原生动物B藻类C细菌D病毒
5、淀粉水解的产物是（）。
A葡萄糖B氨基酸C核苷酸E纤维素
6、营养物质从胞外运输到胞内需要消耗能量、不发生化学变化的是（）。
A简单扩散B促进扩散C主动运输D基团转位
7、1分子葡萄糖彻底氧化分解可产生（）ATP分子。
A8 B2 C38 E4
8、蛋白质合成的场所是（）
A. 拟核
B. 异染粒
C. 荚膜
D. 核糖体9、革兰氏染色中一般使用的染料是（）。
A、美蓝和刚果红
B、苯胺黑和碳酸品红
C、结晶紫和番红
D、刚果红和番红
10、从土壤中分离到一株菌，欲对其进行鉴定，首先应进行的是（）。
A、获得菌株的纯培养
B、革兰氏染色
C、查找权威鉴定手册基
D、DNA提取
三、名词解释（每题4分，共20分）
1. 辅酶、辅基
2. 反硝化作用、硝化作用
3. 真菌
4. 活性污泥、生物膜
5. 菌落、菌苔
四、简答题（每题5分，共40分）
1. 为什么在自然界清洁淡水水体中主要存在一些光能自养型和化能自养型微生物?
2. 有机物（C、N、S）好氧降解与厌氧降解的产物有何区别？
3. 那些物质可以作为无氧呼吸中氢和电子的最终受体。
4. 光能自养微生物、光能异养微生物、化能自养微生物、化能异养微生物的碳源和能源各是什么？
5. 酵母菌、乳酸菌在无氧条件下将丙酮酸分解生成的产物是什么？并列出其中关键的酶。
6. 写出大肠埃希氏杆菌和枯草芽孢杆菌的拉丁文全称。
7. 细菌有哪些一般结构和特殊结构？它们各有哪些生理功能？
8. 大肠杆菌在37℃的牛奶中每12.5分钟繁殖一代，假设牛奶消毒后，大肠杆菌的含量为1个/100ml，请问按国家标准（30000个/ml），该消毒牛奶在37℃下最多可存放多少时间？（列出算式即可）
五、问答题（每题10分，共20分）
1. 细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点？
2. 测定微生物的生长有哪些方法？各有何优缺点？
2007 ~ _2008学年第 2 学期环境工程微生物学课程试卷
标准答案及评分标准A( )/B( √ ) 卷
专业_环境科学、环境工程_ 班级 _061、062_
注意：标题请用宋体4号，内容请用宋体5号。
一、辨别正误（每题1分，共10分）
1 2 3 4 5
错误错误错误错误正确
6 7 8 9 10
正确错误正确错误错误
二、选择题（每题1分，共10分）
1 2 3 4 5
A A D D A
6 7 8 9 10
C C
D C A
三、名词解释（每题4分，共20分）
1.辅酶：某些为催化活性所必需的，与酶蛋白疏松结合的小分子量的有机物质（2分）。一部分酶除蛋白质部分外，尚含有对它们的功能直接有关的一些无机或有机成分，这些成分统称为酶的辅因子，如果缺少这些成分，酶就显不出活性。辅因子包括金属离子和一些分子量不大的有机化合物（2分）。
2.反硝化作用：反硝化细菌在缺氧条件下（2分），还原硝酸盐，释放出分子态氮（N2）或一氧化二氮（N2O）的过程（2分）。
3.真菌：真菌是具有真核和细胞壁的异养生物（2分）。种属很多，已报道的属达1万以上，种超过10万个。其营养体除少数低等类型为单细胞外，大多是由纤细管状菌丝构成的菌丝体。低等真菌的菌丝无隔膜，高等真菌的菌丝都有隔膜，前者称为无隔菌丝，后者称有隔菌丝（2分）。
4.活性污泥：活性污泥是向废水中连续通入空气，经一定时间后因好氧性微生物繁殖而形成的污泥状絮凝物（2分）。其上栖息着以菌胶团为主的微生物群，具有很强的吸附与氧化有机物的能力（2分）。
5.培养基：培养基是一种人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的营养基质（2分）。任何培养基都应具备微生物所需要的营养要素，且其间的比例是合适的。任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌，否则很快引起杂菌丛生，并破坏其固有成分和性质（2分）。
四、简答题（每题5分，共40分）
1. 酶可分为哪6大类？写出其反应通式。
据酶所催化的反应类型，把酶划分为6类:
水解酶：催化底物的加水分解反应。主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。如脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应。
氧化-还原酶：催化氧化-还原反应。包括脱氢酶(dehydrogenase)和氧化酶(Oxidase)。如乳酸(Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。
转移酶：催化基团转移反应，即将一个底物分子的基团或原子转移到另一个底物的分子上。例如，谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。
裂合酶：催化从底物分子中移去一个基团或原子形成双键的反应及逆反应。主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。
异构酶：催化各种同分异构体的相互转化。例如，6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。
合成酶，又称为连接酶，能够催化C-C、C-O、C-N 以及C-S 键的形成反应。这类反应必须与ATP分解反应相互偶联。A + B + ATP + H-O-H = A-B + ADP +Pi 2. 藻类一共分哪几个门?
根据形、色、结构等，将藻类分为十一门，即蓝藻门、裸藻门、绿藻门、隐藻门、轮藻门、金藻门、黄藻门、硅藻门、甲藻门、褐藻门、红藻门。
3. 大肠杆菌在37℃的牛奶中每12.5分钟繁殖一代，假设牛奶消毒后，大肠杆菌的含量为1个/100ml，请问按国家标准（30000个/ml），该消毒牛奶在37℃下最多可存放多少时间？
假设可存放x分钟，则有：
2X/12.5 =30000×100
同时取对数
X/12.5lg2=lg3000000
X=12.5×lg3000000/lg2=12.5×6.477/0.3010=269min=4.48h
4. 比较无氧呼吸与发酵作用的主要区别。
在生物氧化或能量代谢中，发酵是指在无氧条件下，底物脱氢后所产生的还原力[H]不经过呼吸链传递而直接交给某一内源氧化性中间代谢产物的一类低效产能反应（2.5分）。无氧呼吸（厌氧呼吸）是一类呼吸链末端的氢受体为外源无机氧化物的生物氧化。这是一类在无氧条件下进行的产能效率较低的特殊呼吸。其特点是底物按常规途径脱氢后，经部分呼吸链递氢，最终由氧化态的无机物受氢（2.5分）。
5. 写出大肠埃希氏杆菌和枯草芽孢杆菌的拉丁文全称。
枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis（2.5分）大肠杆菌Escherichia coli（2.5分）
6. 病毒是一类怎样的微生物？有什么特点？
病毒是一类超显微的非细胞生物，每一种病毒只含有一种核酸；它们只能在活细胞内营专性寄生，靠其宿主代谢系统的协助来复制核酸、合成蛋白质等组分，然后再进行装配而得以增殖；在离体条件下，它们能以无生命的化学大分子状态长期存在并保持其侵染活性。（2分）
病毒的特点
（1）形体极其微小，必须在电子显微镜下才能观察，一般都可通过细菌滤器。（2）没有细胞构造，故也称分子生物。
（3）其主要成分仅有核酸和蛋白质两种。
（4）每一种病毒只有一种核酸，不是DNA就是RNA。
（5）既无产能酶系也无蛋白质合成系统。
（6）在宿主细胞的协助下，通过核酸的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖，不存在个体的生长和二分裂法等细胞繁殖方式。
（7）在宿主的活细胞内营专性寄生。
（8）在离体条件下，能以无生命的化学大分子状态存在，并可形成结晶。（9）经提纯的病毒结晶能保持侵染力。
（10）对一般抗生素不敏感，但对干扰素敏感。（3分）
7. 说明微生物脱氮机理？
首先由硝化细菌在好氧条件下将铵盐盐转化为硝酸盐（2.5分），然后由反硝化细菌在缺氧条件下将硝酸盐转化为氮气（2.5分）。
8. 何谓原生动物？分几纲？代表种是什么？
原生动物是动物中最原始、最低等、结构最简单的单细胞动物（2分）。形体微小，在10~300微米之间，光学显微镜下可观察到。原生动物是单细胞真核微生物，无细胞壁，有细胞质、细胞膜，有分化的细胞器，细胞核具核膜。有独立生活的生命特征和生理功能，如摄食、营养、呼吸、排泄、生长、繁殖、运动及对刺激的反应等，均由相应的细胞器执行。主要有三个纲，鞭毛纲、肉足纲和纤毛刚。鞭毛纲，主要有眼虫、粗袋鞭虫等。肉足纲主要有变形虫、太阳虫和辐球虫。纤毛纲有游泳型和固着型两种，如草履虫、钟虫等（3分）。
五、问答题（每题1分，共20分）
1.细菌的生长曲线分为几个时期，每个时期各有什么特点？
将少量单细胞微生物接种于一定量的液体培养基内，在适宜的条件下培养，并定时取样测定活微生物数目的变化，叫做间歇培养（分批培养）。用坐标法作图,以时间为横坐标，以单细胞微生物数量的对数为纵坐标，可以绘出一条有规律的曲线，称为生长曲线。分为停滞期、对数期、静止期和衰亡期四个时期。（2分）（1）停滞期：当细菌被接种到新鲜培养基中，开始一段时间内，通常不立即进行细胞分裂、增殖，生长速率近于零，细胞数目几乎保持不变，甚至稍有减少，这段时间被称为停滞期。（2分）
（2）对数期：对数期的细胞分裂速度最快、繁殖一代的时间最短、代谢活动旺盛、对环境变化敏感，并且细胞内的核糖体等组分也像细胞数目一样以同样的对数生长速率增加，细胞合成核糖体以及蛋白质越多，其生长速率也越快。（2分）（3）静止期：静止期细胞从生理上的年轻转化为衰老，表现为细菌的代谢活力
钝化，细胞含有较少的核糖体，RNA和蛋白质合成缓慢，mRNA的水平低下，因此细胞的生长变得不平衡，细胞的形状有的也发生改变。因不能维持细胞壁的合成与修复，细胞的染色特点也发生变化，如G+转变为G-。（2分）
（4）衰亡期：衰亡期细胞的总数虽然镜检直接计数可能会保持不变，但间接计数检测到的细胞数目却在减少，同时伴随着细胞的裂解或自溶可释放出一些代谢产物，如氨基酸、转化酶、外肤酶或抗生素等。衰亡期的长短与对数生长期一样在不同微生物中变化是很大的，主要与菌种的遗传特性有关。通过补充营养和能源，以及中和环境毒性，可以减缓死亡期的细胞死亡速率，延长细菌培养物的存活时间。（2分）
2.测定微生物的生长有哪些方法？各有何优缺点？
测定微生物生长的方法主要有直接测定法、间接测定法和重量法等。（4分）直接测定法可以分为涂片染色法、计数器测定法、比例计数法、比浊计数法等，优点是快速，缺点是不能区分死菌和活菌。（3分）间接计数法包括平板计数法、液体计数法（MPN法）、薄膜过滤计数法，可以区分死菌和活菌，但测定过程通常比较繁琐；重量法包括测定细胞干重法、细胞含N量法、DNA含量法等。（3分）
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
目录 生物安全柜操作规程及维护 (3) 实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (6) 物体表面细菌监测 (8) 医护人员手指细菌监测 (9) 空气中细菌含量的监测 (10) 环境卫生学监测质控标准 (12) 使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (13) 一次性医疗用品微生物监测 (14) 紫外线消毒质量控制程序 (15) 污水的细菌监测(总大肠菌群) (16) 正确洗手的手法 (18)
生物安全柜操作规程及维护 1.目的： 为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。 2.原理： 通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。 3.工作条件： 环境温度：18－30℃相对湿度：<80% 安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。 环境必须有良好的通风设备。 4、操作步骤： 生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。具体操作步骤为： 4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。 4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。 4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。 4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。 4.5如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。 4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。 4.7 当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。
显微镜下的微生物及结构(一) 【知识要点】 1.说出显微镜的各部分结构名称： 2.显微镜的使用方法有：①安放②对光③放片④调焦距⑤观察⑥收镜、整理。安放时左手 托镜座，右手握镜臂，放在靠体前略偏左的位置，对光时低倍物镜正对通光孔，转动遮光器（光圈）为最大，左眼看，右眼睁转动反光镜，看到明亮的视野。向后（内）旋转粗准焦螺旋，物镜会快速上升；向前（外）旋转细准焦螺旋，物镜会慢慢下降。慢慢移动装片，可发现目镜中的物象移动方向跟装片的移动方向相反，这说明显微镜中看到的物象是原物的倒像。注意物像的移动方向与装片的移动方向相反，如果物象在视野的左下方，则把物体向左下方移动，物象在视野的右下方，则把物体向右下方移动。 3.反光镜可以给我们使用显微镜提供光线，反光镜包括凹面镜和平面镜，除了反光镜，光 圈也可以控制光量的大小 4.使用高倍物镜的方法：在低倍镜下，把要放大观察的部分移到视野正中心，然后转动转 换器，使高倍物镜对准通光孔，在稍微调节细准焦螺旋，即可看到进一步放大的物像 5.收镜时：①上升镜筒，物镜呈“八”字形朝前下降镜筒，②关掉集光器，垂直反光镜。 6.显微镜的放大率（总放大倍数）是：放大率= _____ × _____= ______ 7.制作临时装片的操作顺序应该是擦、滴、取、展、盖、染、吸。 8.生物体一般是由细胞构成的，大多数生物属于多细胞生物，少数属于单细胞生物，如衣 藻属于单细胞植物、草履虫属于单细胞动物。 9.衣藻的细胞结构有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、叶绿体、鞭毛、眼点、伸缩泡 10.为什么衣藻属于单细胞植物——因为衣藻只有一个细胞，具有叶绿体，能进行光合作用， 自己制造营养物质。衣藻的鞭毛、眼点的作用——鞭毛可以帮助运动；眼点可以感知光线强弱， 11.草履虫的细胞结构有纤毛、口沟、食物泡、伸缩泡、大核小核、细胞膜、细胞质 12.单细胞生物的共同特征——个体微小，全部生命活动在一个细胞内完成，一般生活在水 中 13.细菌是一种没有细胞核的微生物，是原核生物。根据形态不同，细菌可分螺旋菌球菌杆 菌三类。所有的细菌都有细胞壁、细胞膜、细胞质这三种结构，细菌没有叶绿体,只能依赖寄生生存；没有细胞核，被称为原核生物。有细胞核的都是真核生物，包括动物、植物和真菌三大类。我们平时吃的金针菇、冬虫夏草、灵芝、香菇、蘑菇、木耳等都是属于真菌。霉菌、青霉、酵母菌等都是属于真菌。细菌和真菌通常被称为微生物 14.菌落是大量细菌组成的细菌团，细菌和真菌并不都是对人体有害，有些有益如青霉、酵 母菌等
微生物的显微直接计数法 一、实验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 二、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。 2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 四、实验方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
食品微生物检测标准 受控状态： 文件编号：H-XM-PGZY-10 颁发部门：品管部 接收部门：品管部 发布日期：// 实施日期：//
更改记录
微生物检测目录
食品接触面微生物检测 一、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 二、范围： 标准适用于盘锦兴牧肉联加工集团有限公司食品接触面微生物的检测。 三、采样与检测方法： 3.1、空气微生物采样（自然沉降法） 3.1.1、采样布点要求 (1)室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。（2）采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个灯分点上，5个采样点的按梅花布点。 （3）采样点距离地面高度1.2m-1.5m,距离墙壁不小于1m。 （4）采样点应避开通风口、通风道等。 （2）采样方法 采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min(静态)，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2、菌落培养： （1）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养
48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2 个以上菌落计数。 c)计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验 结果以每平皿菌落数（CFU/皿） 3.2、车间设备、工器具（作业前/后）表面采样与检测方法： 3.2.1、样品采集范围： a)在设备、工器具加工前/后进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。 c)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 d)正常生产状态的擦拭，每周一次。 3.2.2、采样方法： 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25 cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管待检。 3.3、车间工人手、手套（作业前、后）采样及检测方法 3.3.1、样品采样范围：各班组在线工人生产前/后手、手套进行抽检。
第一章微生物的细胞结构与功能 真菌细胞的质膜中具有甾醇，原核生物的质膜中很少或没有甾醇。 载色体亦称色素体或叫光合膜：是光合细菌进行光合作用的场所 羧酶体又称多角体是自养细菌特有的内膜结构，由3.5nm厚的蛋白质单层膜包围，是自养细菌固定CO2的场所 类囊体（th ylakoid）是蓝细菌进行光合作用的场所 内质网指细胞质中一个与细胞基质相隔离、但彼此相通的囊腔和细管系统，由脂质双分子层围成 高尔基体是一种内膜结构，由许多小盘状的扁平双层膜和小泡组成，与细胞的分泌活动和溶酶体的形成等有关是合成、分泌糖蛋白和脂蛋白以及进行酶切加工的重要场所。 磁小体是趋磁细菌细胞中含有的大小均匀、数目不等的Fe3O4 / Fe3S4颗粒，外有一层磷脂、蛋白或糖蛋白膜包裹 芽孢某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量极低、抗逆性极强的休眠体 溶酶体是胞质中一类包着多种水解酶的小泡溶酶体的标志酶是酸性水解酶 微体是一种单层膜包裹的、与溶酶体相似的小球形细胞器，但其所含的酶与溶酶体所含的不同 一．什么是原核生物与真核生物？ 原核微生物是细胞内有明显核区，但没有核膜包围；核区内含有一条双链DNA 构成的细菌染色体；能量代谢和很多合成代谢均在质膜上进行；蛋白质合成“车
间”--核糖体分布在细胞质中。 真核微生物是细胞核具有核膜、核仁，能进行有丝分裂，细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的一类微生物。 二．比较原核生物和真核生物的异同点？ 相同点：不论是原核生物还是真核生物，它们的遗传物质的本质相同；在它们的细胞中同时具有DNA和RNA；一般都有产生能量与合成细胞物质的完整的酶系统；ATP是生物用来进行能量转换的物质之一；细胞的元素组成，糖代谢，核苷酸与氨基（除赖氨酸以外）生物合成途径基本相同；蛋白质和核酸生物合成的方式也基本相同 比较项目原核生物真核生物 细胞大小较小（通常直径小于 2um）较大（通常直径大于2um） 细胞壁主要成分多数为肽聚糖纤维素、几丁质等细胞器无有 鞭毛结构如有，则细而简单如有，则粗而复杂鞭毛运动方式旋转马达式挥鞭式 繁殖方式无性繁殖有性、无性等多种 细胞核核膜无有 组蛋白无有 DNA含量高（约10％）低（约5％）核仁无有
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
微生物基础知识试题 部门：____________ 姓名：______________ 成绩：____________ 一、填空题（每空2分，共40分） 1、微生物的形体极度小，必须借助于_____________或______________放大数， 百倍、千倍至数万倍，常用______________、______________作为测量单位。 2、微生物分布广泛，存在于_________、_______、_________、______________ 、______________之表以及______________。 3、原核细胞生物由_____________构成，真核细胞生物多数由_____________组成。 4、利用某种微生物制成_____________或____________为人类预疾病。 5、活性粒子是夹带有大量_____________的粒子，非活性粒子是单纯的_____________粒 子。水是制药企业的____________或____________，由于水的污染，将直接导入污染源。 6、热力灭菌利用高温杀微生物可分为__________________、________________。 二、多项选择题（共15分） 1、来苏（甲酚皂）2%的水溶液用于（）消毒。 A．皮肤B、设备C、容器D、空气 2、常用的消毒剂75%的乙醇用于（）消毒。 A．皮肤工具B、设备C、容器D、空气 3、消毒剂用于表面活性剂0.1-0.2%的新洁尔灭液，用于（）消毒。 A．皮肤B、工具C、地漏D、容器 4、37-40%的甲醛液8-9ml/m3( )消毒。 A．皮肤B、工具C、地漏D、室内 5、常用的灭菌器主要有（） A．高压蒸汽灭菌器B、烘箱C、紫外线灯
微生物学试题库 微生物学试题（一） 一、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释 1.Gram positive bacteria 2.parasporal crystal 3 ,colony 4, life cycle 5,capsule6,endospore 二、简答题 1，试述微生物与当代人类实践的重要关系？ 2，简述革兰氏染色的机制？ 3.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？ 三、填空(每空1分,共15分) 1.真核微生物核糖体类型为 _______ 。 2.大肠杆菌长为2.0μm,宽为0.5μm,其大小表示为_____ 。 3.研究细菌遗传、代谢性能常采用_____ 时期的细胞。 4.酵母菌细胞壁的主要成份_____和_______。 5.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称________ 。 6.微生物细胞的主要组成元素是______，_____，_______和_______。 7.食用菌是由 ______和 ____ 组成。 8.用物理或化学方法杀死物品上大部分微生物的过程称 ______ 。 9.细菌细胞的碳、氮营养比为______。 10.根瘤菌可与_________共生固氮 四、学名互译 1.A.niger 2.B.subtilis 3. B.thuringiensis 4. A.oryzae 微生物学试题（一）答案： 一，1，革兰氏阳性菌：细菌经革兰氏染色染色后最终染成紫色的菌 2，伴胞晶体：少数芽孢杆菌，在形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形，方形，或不规则形的碱溶性蛋白质晶体称为半胞晶体 3，菌落：当单个细菌细胞或者一小堆同种细胞接种到固体培养基表面，当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下时，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。4，生命周期：指的是上一代生物个体经过一系列的生长，发育阶段而产生下一代个体的全部过程。 5，荚膜：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质 6，芽孢：某些细菌在其生长发育的后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低，抗逆性强的休眠构造。 二，1，①在微生物与工业发展的关系上，通过食品罐藏防腐，酿造技术的改造，纯种厌氧发酵的建立，液体深层通气搅拌大规模培养技术的创建以及代谢调控发酵技术的发明，使得古老的酿造技术迅速发展成工业发酵新技术； ②微生物在当代农业生产中具有十分显著的作用，例如，以菌治害虫和以菌治植病的生物防治技术；以菌增肥效和以菌促生长的微生物增产技术；以菌做饲料和以菌当蔬菜的单细胞蛋白和食用菌生产技术；以及以菌产沼气等生物能源技术。 ③微生物与环境保护的关系越来越受到当代全人类广泛的重视。微生物是占地球面积70%以上的海洋和其他水体中光合生产力的基础；是一切食物链的重要环节；是污水处理中的关键角色；是生态农业中最重要的一环；是自然界重要元素循环的首要推动者；以及是环境污染和监测的重要指示生物；等等。 ④微生物与在食品上的应用。调味品，发酵食品，酸乳，蔬菜加工。 ⑤微生物在医药方面的应用。抗菌素，维生素。 ⑥微生物在能源生产方面也有重要的作用。2，G+细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使得网孔缩小再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫和碘的复合物牢牢留在壁内，使得其保持紫色。反之，革兰氏阴性细菌因其细胞壁较薄，外膜层内酯含量高，肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时，再经沙黄等红色燃料复染，就使革兰氏阴性细菌呈现红色。而革兰氏阳性细菌则保留最初的紫色。3. 微生物的五大共性：（一）体积小，面积大 （二）吸收多，转化快 （三）生长旺，繁殖快 （四）适应强，易变异 （五）分布广，种类多 其中最基本的是微生物的多样性，原因是：微生物因其体积小，重量轻和数量多等原因，可以到处传播以至达到“无孔不入”的地步。不论在动，植物体内外，还是土壤，河流，空气，平原，高山，深海，污水，垃圾，海底淤泥，冰川，盐湖，沙漠，甚至油井，酸性矿水和岩层下，都有大量与其相适应的各类微生物在活动着。 三．填空 1. 80S 2. 0.5μm x2.0μm3对数生长 4.葡聚糖和甘露聚糖。 5.温和噬菌体6蛋白质，核酸，类脂和碳水化合物 7. 营养菌丝,生殖菌丝豆科植物共生固氮 8 灭菌。9. 6/1 10.豆科植物 四．1.黑曲霉 2. 枯草芽孢杆菌 3. 苏云金芽孢杆菌4. 米曲霉 微生物学试题（二） 是非题（共10分。只需注明“对”或“错”） 1.大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。 2.大肠杆菌属低等原核生物，所以其遗传物质只是一条松散的环状双链DNA，不存在DNA高级结构。 3.当菌体生长、氧吸收和糖利用的比速度下降时，青霉素的合成达到最高值。 4.初生F’菌株和次生F’菌株都属于部分二倍体。 5.分批培养时，细菌首先经历一个适应期，此期间细胞处于代谢活动的低潮，所以细胞数目并不增加。 6.渗透酶( permease)属于诱导酶，而其它种类的酶往往属于组成酶。 7.恒化培养与恒浊培养的区别在于前者的培养物群体始终处于对数生长期。 8.将HR病毒的外壳蛋白与TMV病毒的RNA混合，去感染烟草，则会出现TMV型病灶。若在感染前，用TMV抗体处理，则会钝化病毒，不出现TMV型病灶。 9.霉菌的基因重组常发生于准性生殖时，较少出现在有性生殖过程中。 10.营养物跨膜的主动运输必需依靠载体和能量，而被动扩散不需要载体和能量。 二填充题（30分） 1 突变率10-10表示_ _ _ _ a_ _ _ 。 2 我们常采用_ _ a_ _ _ 浓度的NaCl 或0.1M_ _ _ b_ _ _ 来稀释菌液或清洗菌体细胞。因为_ _ c_ _ _ 。 3 在有机物为基质的生物氧化反应中，以氧为电子传递最终受体的方式称_ _ _ _ a_ _ _ _ ；以无机氧化物为最终电子受体的称_ _ b_ _ ；以有机物为最终电子受体的称_ _ _ _ c_ _ _ _ 。 4 常见的菌种保藏方法有_ _ _ _ a_ _ _ _ 、_ _ _ b_ _ _ 和_ _ _ c_ _ _ 等，其中_ _ _ d_ _ 方法保藏菌种的时间最长久。
第一模块微生物学基础知识 第一章微生物概述 一. 什么是微生物 微生物是一类肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能观察到的微小生物的总称。 微生物具有形体微小、结构简单；繁殖迅速、容易变异；种类繁多、分布广泛等特点。 二. 微生物的分类： 根据微生物有无细胞基本结构、分化程度、化学组成等特点，可分为三大类。1. 非细胞型微生物无细胞结构，无产生能量的酶系统，由单一核酸（DNA/RNA）和蛋白质衣壳组成，必须在活细胞内增殖。病毒属于此类微生物。 2. 原核细胞型微生物细胞核分化程度低，只有DNA盘绕而成的拟核，无核仁和核膜。这类微生物包括细菌、衣原体、支原体、立克次体、螺旋体和放线菌。 3. 真核细胞型微生物细胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色体，能进行有丝分裂。如真菌、藻类等。 三. 微生物的作用及危害 1. 微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。 2. 微生物的危害 微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。 从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。
第二章微生物的类群和形态结构 一. 细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂方式无性繁殖的原核微生物，分布广泛。 1. 细菌的形态与结构 观察细菌最常用的仪器是光学显微镜，其大小可以用测微尺在显微镜下测量，一般以微米为单位。细菌按其形态不同，主要分为球菌、杆菌和螺形菌三类。 （1）球菌多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形。由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。 （2）杆菌形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。 （3）螺形菌菌体弯曲，呈弧形或螺旋形。如幽门螺杆菌。 细菌虽小，仍具有一定的细胞结构和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各种细菌都有，是细菌的基本结构。 2. 细菌的繁殖 二分裂繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近的细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成横隔壁，这样便产生两个子细胞。 细菌生长速度很快，一般约20min分裂一次。若按此速度计算，细菌群体将庞大到难以想象的程度。但事实上由于细菌繁殖中营养物质的逐渐消耗，有害代谢产物的逐渐积累，细菌不可能始终保持高速度的无限繁殖。经过一段时间后，细菌繁殖速度逐渐减慢，死亡菌数增多，活菌增长率随之下降并趋于停滞。 3. 细菌的菌落 单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。 二. 真菌
微生物的大小测定 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解显微镜测定微生物大小的原理。 2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微 尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 【实验原理】 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 1.目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。 图1 目镜测微尺 测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校
正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2.镜台测微尺 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。 图2 镜台测微尺 校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 【实验材料】 1.菌株 酵母菌液， 枯草芽孢杆菌斜面培养物
微生物制药的一般工艺流程 微生物制药技术 工业微生物技术是可持续发展的一个重要支撑，是解决资源危机、生态环境危机和改造传统产业的根本技术依托。工业微生物的发展使现代生物技术渗透到包括医药、农业、能源、化工、环保等几乎所有的工业领域，并扮演着重要角色。欧美日等国已不同程度地制定了今后几十年内用生物过程取代化学过程的战略计划，可以看出工业微生物技术在未来社会发展过程中重要地位。 微生物制药技术是工业微生物技术的最主要组成部分。微生物药物的利用是从人们熟知的抗生素开始的，抗生素一般定义为：是一种在低浓度下有选择地抑制或影响其他生物机能的微生物产物及其衍生物。(有人曾建议将动植物来源的具有同样生理活性的这类物质如鱼素、蒜素、黄连素等也归于抗生素的范畴，但多数学者认为传统概念的抗生素仍应只限于微生物的次级代谢产物。)近年来，由于基础生命科学的发展和各种新的生物技术的应用，报道的微生物产生的除了抗感染、抗肿瘤以外的其他生物活性物质日益增多，如特异性的酶抑制剂、免疫调节剂、受体拮抗剂和抗氧化剂等，其活性已超出了抑制某些微生物生命活动的范围。但这些物质均为微生物次级代谢产物，其在生物合成机制、筛选研究程序及生产工艺等方面和抗生素都有共同的特
点，但把它们通称为抗生素显然是不恰当的，于是不少学者就把微生物产生的这些具有生理活性（或称药理活性）的次级代谢产物统称为微生物药物。微生物药物的生产技术就是微生物制药技术。可以认为包括五个方面的内容： 第一方面菌种的获得 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 分离思路新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。具体分离操作从以下几个方面展开。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。
微生物检验（完整版） 名解 微生物：是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称 种：亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征 微生物学：生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学 抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质 细菌素：是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质 条件致病菌：正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病 消毒：指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌：指杀灭物体上所有的微生物的方法 防腐：指防止或抑制微生物生长繁殖的方法 无菌：指没有货的微生物的存在 质粒：是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制 突变：是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代 基因转移：外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程 基因重组：供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程 病毒：是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的
非细胞型微生物 复制周期：病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程 缺陷病毒：是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒 顿挫感染：病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象 干扰现象：两种病毒感染同一种细胞时可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 人工自动免疫：是将疫苗等免疫原接种于人体刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答使机体获得特异性免疫力 人工被动免疫：是指注射含某种病毒特异性中和抗体的免疫血清等一系列细胞因子是机体立即获得特异性免疫 干扰素：是由病毒或干扰素诱生剂作用于中性粒细胞成纤维细胞或免疫细胞产生的一种糖蛋白 致病性：一定种类的病原微生物在一定的条件下能在特殊的宿主体内引起特定疾病的能力半数致死量：在规定时间内通过一定途径能使一定体重或年龄的某种动物半数死亡或感染需要的最小病原体数量或毒素量 急性感染：发作突然病程较短一般是数天或数周 局部感染：病原体侵入机体后局限就在一定部位生长繁殖引起病变的一种感染类型 毒血症：致病菌侵入宿主体后只在机体局部生长繁殖病菌不进入血液循环但其产生的外毒素入血引起特殊的毒性症状 败血症：致病菌侵入血流后在其中大量繁殖并产生毒性产物引起全身性毒性症状 内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流并在其中大量繁殖崩解后释放出大量毒素也可有病灶
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法摘要：本文使用了目镜测微尺和镜台测微尺来测量野生酵母的细胞大小，得到的结果是宽在5.78~11之间，长在8.25~20之间。然后用血细胞计数板对酵母菌进行计数，并绘制其生长曲线，有四个时期，分别是延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。 关键词：细胞大小血细胞计数板酵母菌生长曲线 前言 生产生活中利用微生物时，需要了解微生物的一些基本物理属性，如菌体的大小形状等。本实验利用显微测微尺对野生酵母进行测量，并用血球计数板对酵母菌进行其生长曲线的测定，了解去生长规律。通过此综合性实验加深对无菌操作的印象，并将其掌握。 1实验材料与仪器 1．1实验材料与试剂 麦芽汁培养基、生理盐水、果汁（自制）、活化的酵母菌、酒精 1．2实验仪器 锥形瓶、试管、接种环、移液枪、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、血细胞计数板、吸水纸、酒精灯 2实验方法 2．1预准备 2.1.1培养基的制备 麦芽汁培养基（130.1g/L）200ml*4瓶 麦芽汁琼脂培养基（145.1g/L）5ml*2支试管150ml*1瓶 生理盐水9ml*20支 （制备后高压蒸汽灭菌121℃，20min） 2.1.2酵母分离纯化 平板划线分离：先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释, 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少, 并逐步分散开
来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
微生物大小及数量的测定 一、实验目的： 1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法 2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细 胞大小的感性认识 3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法 二、实验器材 1、菌种： 枯草芽孢杆菌、酿酒酵母 2、溶液和试剂 香柏油、二甲苯、美兰染液 3、仪器和其他用品 目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数 板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪 三、实验原理 1、测微尺： 微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括 目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。 镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为0.01mm，即10μm。刻线外有一直径为φ3，粗线为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久
用而不受损伤。。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜 测微尺每一格的相对长度。 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻 度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度 也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 球菌用直径表示大小，杆菌用长和宽来表示大小 2、显微镜计数： 显微镜计数是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载 玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。目前国内外常用的 计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞 计数板较厚，不能用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数，
实验一微生物的形态和结构观察 一、实验目的 1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法； 2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤； 3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。 《 二、基本原理 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，
可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。 光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。 《 三、仪器和药品 仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。 草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。 革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。