食品中苯甲酸、山梨酸与糖精钠的测定
高效液相色谱法 2、1原理 不同样品经提取后,将提取液过滤,经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性,外标峰面积定量。 2、2试剂与材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯,实验用水符合GB/T 6682要求。 2、2、1 甲醇:色谱纯。 2、2、2 乙酸铵溶液:称取1、54g乙酸铵,加水溶解并稀释至1000mL,经微孔滤膜过滤。 2、2、3 亚铁氰化钾溶液:称取106g亚铁氰化钾[K 4Fe(CN) 6 ·3H 2 O]加水至1000mL。 2、2、4 乙酸锌溶液:称取220g乙酸锌[Zn(CH 3COO) 2 ·2H 2 O]溶于少量水中,加入 30mL冰醋酸,加水稀释至1000mL。 2、2、5 氨水(1+1):氨水与水等体积混合。 2、2、6 正己烷。 2、2、7 pH4、4乙酸盐缓冲溶液: a)乙酸钠溶液:称取6、80g乙酸钠(CH 3COONa·3H 2 O),用水溶解后定容至1000mL。 b)乙酸溶液:称取4、3mL冰乙酸,用水稀释至1000mL。 将上述两种溶液按体积比37:63混合,即得pH4、4乙酸盐缓冲溶液。 2、2、8 pH7、2磷酸盐缓冲溶液: a)称取23、88g磷酸氢二钠(Na 2HPO 4 ·12H 2 O),用水溶解后定容至1000mL。 b)称取9、07g磷酸二氢钾(KH 2PO 4 ),用水溶解后定容至1000mL。 将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pH7、2磷酸盐缓冲液。 2、2、9 标准溶液的配制: a)苯甲酸标准储备液:准确称取0、2360g苯甲酸钠,加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1、00mg。 b)山梨酸标准储备液:准确称取0、2680g山梨酸钾,加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含山梨酸1、00mg。 c)糖精钠标准储备液:准确称取0、1702g糖精钠(C 6H 4 CONNaSO 2 )(120℃烘干
验证性试验 实验十二 苯甲酸钠的含量测定 一、实验目的 1.掌握双相滴定法测定药物含量的原理。 2.掌握苯甲酸钠含量测定的方法与操作。 二、仪器与试药 1.仪器 Mettler AL204电子天平 分液漏斗 规格：250mL 塞锥形瓶 规格：250mL 酸式滴定管 规格：25mL 量筒 烧杯 2.试药 苯甲酸钠原料 乙醚 甲基橙指示液 盐酸滴定液 (0.5mol/L) 蒸馏水 三、实验原理 苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 COO Na + H C l COOH +N aC l 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b =9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。 四、实验内容 取本品1.5g ，精密称定，置分液漏斗中，加水约25mL ，乙醚50mL 与甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5mL 洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20mL ，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1mL 的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg 的C 7H 5O 2Na 。 本品按干燥品计算，含C 7H 5O 2Na 不得少于99.0％ 计算：苯甲酸钠%= V:供试品消耗盐酸滴定液的体积（mL ）； F ：盐酸滴定液浓度校正因数； T ：滴定度； W: 供试品取样量（g ）； 五、注意事项 1.滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 2.在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。 六、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5mL 水洗涤的目的是什么? 七、参考文献 《中国药典》2010年版二部，321，化学工业出版社。 V T F 100%W ???
高效液相色谱法测定酱油中苯甲酸的含量 摘要：本文采用高效液相色谱法测定酱油中防腐剂苯甲酸的含量。根据苯甲酸 的性质选择分离分离色谱柱为 C18(4.6mm×250mm,粒径5μm)柱，流动相为乙酸铵-甲醇（91：9），流速1mL/min，柱温30℃。当波长为230 nm时测得苯甲酸标 准溶液的浓度与峰面积的线性关系良好，线性回归方程为y=3063.46746x＋0.4971，r2 = 0.9998。一般实验要求加标回收率为90％-110％，苯甲酸检出限量为1g/kg。 实验测得加标回收率为96％-98％，三个样品的苯甲酸含量分别为0.39g/kg、 0.50g/kg、0.81g/kg，均符合食品安全国家标准。本实验方法简单快捷，准确度， 灵敏度也均达到国家相关分析要求，适用于测定酱油中苯甲酸的测定。 关键词：高效液相色谱；酱油；防腐剂；苯甲酸 为了减少防腐剂对人类带来的负面影响，对防腐剂进行一定的分析研究是很有必要的。 针对同一防腐剂的检测，不同的检测技术其特异性和快速性等也各有不同。国家食品检测标 准GB/T5009.29-2003《食品中山梨酸、苯甲酸的测定》介绍了三种检测苯甲酸的方法，分别 是气相色谱法、高效液相色谱法和薄层色谱法。此外据网上报道，可用于检测酱油中苯甲酸 含量的方法还有紫外分光光度法、毛细管电泳法等。因高效液相色谱法精确度高、简单、快速，是现阶段测定苯甲酸含量的首选。现重点介绍高效液相色谱法测定酱油中的苯甲酸。 实验主要试剂及设备： 甲醇（GR）；乙酸铵（GR）；苯甲酸钠标准品（GR）；乙酸锌（AR）；亚铁氰化钾（AR）；氨水（≥99.0％）。 高效液相色谱仪（LC-20ADRF）；电子分析天平（BSM--120.4）；超声波清洗仪 （SG5200HDT）；高速离心机（TGL-16G-A）。 色谱条件： 以C18柱（4.6mm×250mm,粒径5μm）为色谱柱；以A相1.54mg/mL乙酸铵溶液+B相甲 醇溶液（91:9）为流动相；柱温：30℃；进样量：10μL；流速：1.0 mL/min；检测波长为 230nm；检测器为紫外吸收检测器。 一、样品分析 1.样品中苯甲酸含量的测定 精确称取酱油2.0g，置于具塞塑料离心管中，样品称取质量为2.0135g。样品称量后，加 水至30mL，再加1mL亚铁氰化钾溶液（10.6％）和1mL乙酸锌溶液（21.9％），混匀。用 （1+1）氨水调pH至中性，再用超纯水定容至40mL。盖好管塞，在高速离心机中离心至沉 淀完全，清液经微孔滤膜（4.5um）过滤，滤液在超声波清洗仪超声后注入色谱进样瓶中， 按色谱条件中所述上机检测、分析。 酱油样品中苯甲酸含量的计算公式： 式中： y--酱油样品中苯甲酸组分含量，单位为克每千克(g/kg)； c--由苯甲酸溶液标准曲线得出的样液中苯甲酸的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）； v--样品定容体积，单位为毫升（mL）； m--样品质量，单位为克（g）。 按照相关实验要求，同一实验室内两次独立测定结果的绝对差值应不超过算术平均值的10%，计算结果保留两位有效数字。 2.重复性实验 准确称取酱油样品5份于5支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别是2.0129g、 2.0036g、2.0437g、2.0152g、2.0082g。按上处前处理方法处理制得样品进样溶液，将制得样 液注入色谱进样瓶中，将样品放入液相色谱仪依次进样测定，检测实验的重复性。 3.加标回收实验 准确称取4份酱油样品于4支具塞塑料离心管中，样品称取质量分别为2.0736g、
紫外-可见分光光度计法测定饮料中苯甲酸钠的含量 一、实验目的 1. 了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV-2501的操作。 2. 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 3. 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和 用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之 一，根据GB2760- 1996规定，碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸(钠)在225nm 处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求岀样品中苯甲酸钠的含量。 三、仪器和试剂 1. 紫外可见分光光度计UV-2501 (日本岛津)，1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 2. NaOH 溶液(0.1mol/L ) 3. 苯甲酸钠标准溶液的配制 (1) 苯甲酸钠标准贮备液(1.000g/L ):准确称量经过干燥的苯甲酸钠 1.000g (105 C干燥处理2h)于1000mL 容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 (2) 苯甲酸钠标准溶液(100.0mg/L ):准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中，加入蒸馏水 稀释定容。 (3) 系列标准溶液的配制：分别准确移取苯甲酸钠标准溶液 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL和5.00mL 于5个50mL容量瓶中，各加入0.1mol/L NaOH溶液1.00mL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为 2. 0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L 和10.0mg/L 的苯甲酸钠系列标准溶液。 4. 雪碧(500mL ) 5. 蒸馏水 四、实验步骤 1.吸收曲线的绘制 (2)吸收曲线的测定 用某一浓度较高的标准液如4号或5号溶液，于210nm~300nm波长范围内扫描，即的苯甲酸钠的吸收 曲线。 (3)由吸收曲线上找岀最大吸收波长X nax。 2. 工作(标准或校正)曲线的绘制 按溶液由稀到浓的顺序分别测定他们的吸光度A，然后以浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标作图，求岀 线性方程和相关系数。
食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
高效液相色谱法 ２.1原理 不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定,根据保留时间定性，外标峰面积定量。 ２。２试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/Ｔ 6６82要求。 2.2。１甲醇：色谱纯。 2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.5４g乙酸铵，加水溶解并稀释至１00０mＬ,经微孔滤膜过滤。 2。2。３亚铁氰化钾溶液:称取10６g亚铁氰化钾[Ｋ 4Ｆe（CN） 6 ·3Ｈ ２ Ｏ］加 水至1000mＬ。 ２。2.4 乙酸锌溶液：称取2２0g乙酸锌[Zn(ＣH 3CＯＯ) 2 ·2Ｈ 2 O］溶于少量水 中,加入30mＬ冰醋酸,加水稀释至100０mL。2。２．5 氨水(1+１）：氨水与水等体积混合. 2。2。6 正己烷. 2.2．7 pH4。4乙酸盐缓冲溶液: a）乙酸钠溶液:称取6．80ｇ乙酸钠（CH 3COONa·３H ２ Ｏ），用水溶解后定容至1 ０00mL。 b）乙酸溶液：称取４。3mL冰乙酸，用水稀释至１0０0mL。 将上述两种溶液按体积比37：63混合，即得pＨ4．4乙酸盐缓冲溶液. 2．2.８ pＨ7.2磷酸盐缓冲溶液: a）称取2３．88g磷酸氢二钠(Na 2ＨPO 4 ·12Ｈ ２ Ｏ)，用水溶解后定容至1０ ００mＬ。 b）称取９.07g磷酸二氢钾（ＫH 2PO 4 ），用水溶解后定容至1０00mL。 将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合,即得pＨ7。２磷酸盐缓冲液. 2.2。9 标准溶液的配制: a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.２360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200ｍL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1．00mg。
实验三紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂—苯甲酸 1 实验试剂与仪器 试剂 苯甲酸（AR），雪碧汽水 仪器 日立UV-3010紫外-可见光谱仪，1cm石英比色皿 2 实验原理与方法 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。我国规定了苯甲酸（盐）在碳酸饮料中最大使用量为0.2g/kg。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有强吸收由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧中苯甲酸，含有人工合成色素、甜味剂等，但一般在紫外区无吸收，故不干扰测定，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。 3 实验步骤 苯甲酸标准储备液配制 称取0.1000g苯甲酸于100mL容量瓶中，加适量蒸馏水定容，配制成1mg/mL溶液，吸取此液5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，每毫升溶液相当于苯甲酸100ug。标准曲线绘制 取苯甲酸标准储备液、、、、，分别置于50mL容量瓶中，用蒸馏水溶液稀释至刻度。以水为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为200~350nm）， 找出λ max ，然后在λ max 处测定五个标准溶液的吸光度A。 样品处理和测定 雪碧饮料除二氧化碳后，准确移取于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在λ max 处测定吸光度。 4 实验结果
实验一紫外分光光度法测定苯甲酸 一、实验目的 学习、了解紫外分光光度法原理 了解紫外分光光度计的结构和使用方法 二、实验原理 当辐射能（光）通过吸光物质时，物质的分子对辐射能选择性的吸收而得到的光谱称为分子吸收光谱。分子吸收光谱的产生与物质的分子结构、物质所在状态、溶剂和溶液的PH等因素有关。分子吸收光谱的强度与吸光物质的浓度有关。表示物质对光的吸收程度，通常采用“吸光度”这一概念来量度。 根据朗伯－比尔定律，在一定的条件下，吸光物质的吸光度A 与该物质的浓度C和液层厚度成正比。即A＝ LC 因此，只要选择一定的波长测定溶液的吸光度，即可求出该溶液浓度，这就是紫外－可见分光光度计的基本原理。 在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长为225nm。因此，采用紫外分光光度计测定苯甲酸在225nm处的吸收度就能进行定量分析。 三、仪器与主要试剂 TU-1810紫外可见分光光度计1cm石英比色皿 0.1M氢氧化钠溶液 苯甲酸(AR) 四、实验步骤 1、苯甲酸标准溶液的制备 称取苯甲酸(105℃烘干)100mg,用0.1M氢氧化钠溶液100ml溶解后,转入1000ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度.此溶液1ml含0.1mg 苯甲酸. 2、制作苯甲酸吸收曲线,选择最大吸收波长 ①移取苯甲酸标准溶液4.00ml于50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠溶液定容,摇匀,此溶液1ml含苯甲酸8ug. 以氘灯为光源,用0.01M氢氧化钠溶液作为参比,改变测量波长(从210-240nm)测量8ug/ml苯甲酸的吸光度. ②以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制苯甲酸的紫外吸收曲线,并找出最大的吸收波长 (是否是225nm). 3﹑样品的测定 ①取10.00ml苯甲酸样品,放入50ml容量瓶中,用0.01M氢氧化钠
碳酸饮料中苯甲酸钠含量的测定与分析 [实验日期]：年月日——月日[实验操作人]： [实验地点]： [实验目的]： 1.学习使用双相滴定法进行饮料中苯甲酸钠的测定操作 2.学习使用紫外—可见分光光度计，并将测定结果与双相滴定法进行比较。 3.体会化学分析方法和仪器分析方法在低含量测定中的优缺点 [实验原理]： 本实验采用双相滴定法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。本实验选做紫外-可见分光光度法测定碳酸饮料中苯甲酸钠的含量，并将结果与双相滴定法进行对照苯甲酸钠的测定可以使用HCl滴定，但因为生成的苯甲酸常温下溶解度很小，几乎不溶于水，由此造成滴定终点的pH突越不够明显，另外游离的苯甲酸附着在容器和液面表面会影响观察滴定结果，并在一定程度上吸附少量的指示剂，不利于终点判断。而苯甲酸在常温下难溶于水（0.34g/100ml），在空气中微挥发，有吸湿性，溶于热水，也溶于乙醇、氯仿等有机溶剂。苯甲酸钠常温易溶于水（53.0g/100ml，PH≈8）。综合考虑，在本实验中采用乙醚来吸收水相中的游离苯甲酸，将苯甲酸提取入乙醇溶液中，之后在乙醇溶液中使用0.01mol/L的标准NaOH溶液以PP为指示剂滴定碳酸饮料样品至显粉红色，根据滴定消耗的NaOH标准溶液的体积计算碳酸饮料中苯甲酸钠的含量。1注：选作部分相关内容见后。 [实验仪器]： 50ml酸式滴定管，50ml碱式滴定管，250ml锥形瓶×3，500ml分液漏斗，1000ml 1 根据最新GB2760- 2003国家卫生标准规定,碳酸饮料中苯甲酸钠的允许最大使用量为0.2g/kg。
烧杯，250ml容量瓶×n，25ml移液管，10ml量筒，100ml量筒，玻璃棒，表面皿，带橡胶塞的细口瓶×2，50ml具塞量筒×2，2ml吸量管，10ml移液管。 电子分析天平（0.0001g），紫外-可见分光光度计，电热恒温水浴锅（室温+5℃~99℃）。[实验试剂]： HCl溶液（1+1），40%NaOH溶液，草酸/邻苯二甲酸氢钾基准试剂，苯甲酸基准试剂，PP，无水硫酸钠(分析纯)，乙醚(分析纯)，NaCl(分析纯)，乙醇(分析纯)。 雪碧碳酸饮料一瓶(备用样品：美年达碳酸饮料一瓶)。 [实验内容]： (一)实验预准备： （1）准备除去CO2的去离子水：在1000ml烧杯中加入800ml去离子水并加热至沸腾，沸腾3~5min，冷却至室温备用。注意在加热过程中，在去离子 水沸腾前加盖表面皿，以减少热量损失并缩短加热时间，加热刚开始时 烧杯外侧凝结的水滴要及时用滤纸片擦掉，以免受热不均烧杯炸裂。加 热至近沸时注意防止暴沸，可以从烧杯尖嘴处深入玻璃棒轻轻搅动。 （2）准备4%的NaCl溶液：100ml去离子水中加入4.0gNaCl固体，溶解摇匀。 （3）准备HCl溶液（1+1）：按照体积比1:1的比例将25ml浓盐酸和25ml去离子水混合，摇匀。 (二)氢氧化钠标准溶液的配制和标定 （1）配置NaOH标准溶液：在10ml量筒中量取2.5ml饱和氢氧化钠溶液（20mol/L），用500ml水稀释，置于橡胶塞细口瓶中振荡摇匀，使用25ml 移液管量取上述溶液于250ml容量瓶中，加水稀释至刻度线，摇匀，转 移至带橡胶塞的磨口细口瓶中备用。
实验四 苯甲酸钠的含量测定 一、实验目的 1、掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作 二、实验原理 苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 C O O N a + HCl COOH + NaCl 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b =9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。含量（%）%100???=m F T V 三、实验仪器和试剂 1. 仪器： 分液漏斗、容量瓶、移液管、具塞锥形瓶、酸式滴定管、分析天平、烧杯、量筒、 2. 试剂： 苯甲酸钠、乙醚、甲基橙、盐酸(0.5mol/L)、蒸馏水 四、实验内容 取本品1.5g ，精密称定，置分液漏斗中，加水约25ml ，乙醚50ml 与甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml 洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20ml ，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1ml 的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg 的C 7H 5O 2Na 。 本品按干燥品计算，含C 7H 5O 2Na 不得少于99.0％。 五、实验结果与讨论
六、注意事项 1、滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 2、在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。 七、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5ml水洗涤的目的是什么?
紫外分光光度法测定饮料中的防腐剂—苯甲酸 一、目的要求 1．了解和熟悉紫外可见分光光度计。 2．掌握紫外可见分光光度法测定苯甲酸的方法和原理。 3．学习掌握用标准曲线定量分析的方法。 二、实验原理 为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一。我国规定了苯甲酸（盐）在碳酸饮料中最大使用量为0.2g/kg。苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有强吸收 由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实验测定雪碧中苯甲酸，含有人工合成色素、甜味剂等，但一般在紫外区无吸收，故不干扰测定，样品不用处理，苯甲酸（钠）在225nm处有最大吸收，可在225nm波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。 三、仪器与试剂 日立UV-3010紫外-可见光谱仪；1cm石英比色皿；苯甲酸（AR）；市售饮料 四、操作步骤 1.苯甲酸标准储备液配制： 称取0.1000g苯甲酸于100mL容量瓶中，加适量蒸馏水定容，配制成 1mg/mL溶液，吸取此液5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，每毫升溶液相当于苯甲酸100ug。
2.标准曲线绘制： 取苯甲酸标准储备液0. 00、1. 00、2. 00、4. 00、6.00mL，分别置于50mL容量瓶中，用蒸馏水溶液稀释至刻度。以水为对照液，测定其中5号标准溶液的紫外可见吸收光谱（测定波长范围为 200~350nm），找出λ 个标准溶液的吸光度A。 3.样品处理和测定： 雪碧饮料除二氧化碳后，准确移取2.5mL于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，在λ 五、结果与计算 从曲线上找出相应的苯甲酸浓度C x，按下列公式计算样品中苯甲酸含量。 w=C x×V 1/V2V 1样品定容后体积V2所取样品体积 六、提问 1.举例说明日常生活中遇到的哪些食品中有防腐剂？ 2.用什么方法从样品中把苯甲酸分离出来？
实验四、紫外-可见分光光度法测苯甲酸含量 一、实验目的 1．学会使用紫外-可见分光光度计，掌握标准对比法。 2．掌握标准对照法曲线的绘制和含量的计算。 二、实验原理 在碱性条件下，苯甲酸形成苯甲酸盐，对紫外光有选择性吸收，其吸收光谱的最大吸收波长在225nm。可采用紫外分光光度计测定物质在紫外光区的吸收光谱并进行定量分析。 三、实验器材 试药：0.01mol/L、0.1mol/L氢氧化钠、苯甲酸 仪器：量瓶、烧杯、紫外-可见分光光度计 四、实验步骤 1、苯甲酸标准储备液的制备 精确称取苯甲酸100mg，用0.1mol/L氢氧化钠溶液100ml溶解后，再用蒸馏水稀释1000ml。此溶液1ml含0.1mg苯甲酸。 2、苯甲酸吸收曲线的测量 吸取苯甲酸贮备液4.00ml，放入50ml容量瓶中，用0.1mol/L氢氧化钠溶液定容，摇匀。此溶液1ml含8μg苯甲酸。 测量条件光源：氢灯；参比液：0.01mol/L氢氧化钠；测量波长范围：210～240nm。 3、标准曲线的制备 取标准储备液适量，置于50mL容量瓶中，加0.01mol/L氢氧化钠稀释，分别得到浓度为4、8、12、16、20、24μg.L-1的溶液，取各溶液于“2项”曲线中的最大吸收波长处测吸收度A，得回归方程和相关系数R2。 4、标准对比法测定样品液苯甲酸的含量 取10.00ml样品液，放入50ml容量瓶中，用0.01mol/L氢氧化钠定容，摇匀。 在上述曲线中找出最大吸收波长，以此作定量分析的入射光。以0.01mol/L
氢氧化钠溶液为参比。在完全相同的条件下测出标准苯甲酸溶液和稀释好的样品液的吸光度值。 5、按“3项”所得回归方程计算样品液中苯甲酸的浓度。 五、数据处理 1）样品液中苯甲酸含量 试样溶液的吸光度为,从标准曲线上可查得c= mg/ml。 六、思考题 1、如果试液测得的吸光度不在标准曲线范围之内怎么办？ 2、从实验测出的吸光度求苯甲酸含量的根据是什么？如何求得？
食品添加剂中苯甲酸的检测 班级：姓名：学号： 摘要：近年来，食品安全已成为全社会共同关注热点。苯甲酸作为食品添加剂，在食品加工中起着重要的作用。但若过量添加,不仅能破坏维生素B1,还能使钙形成。我国GB2760–1996《食品添加剂使用卫生标准》规定其使用限量应＜0.1g/kg，许多因素都会导致其含量超标，控制苯甲酸的含量，实现对食品中外源性添加物质的有效检测,急需发展食品添加剂和非法添加物的高通量筛查技术及确证检测技术已经成为目前亟待解决的关键问题之一。其次，综述高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法、紫外分光光度法及薄层层析法等检测方法基本原理及其近几年在苯甲酸检测技术方面研究进展，最后展望这些检测方法在苯甲酸检测方面发展前景。 关键词：苯甲酸高效液相色谱法毛细管电泳法气相色谱法紫外分光光度法薄层层析法 一、分析食品添加剂中苯甲酸的危害 1、苯甲酸的性质 苯甲酸为无色、无味片状晶体。熔点 122.13℃，沸点249℃，相对密度1.2659（15／4℃）。微溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿、苯、二硫化碳、四氯化碳。在100℃时迅速升华，它的蒸汽有很强的刺激性，吸入后易引起咳嗽。微溶于水，易溶于乙醇、乙醚等有机溶剂。苯甲酸是弱酸，比脂肪酸强。它们的化学性质相似，都能形成盐、酯、酰卤、酰胺、酸酐等，都不易被氧化。苯甲酸的苯环上可发生亲电取代反应，主要得到间位取代产物。 最初苯甲酸是由安息香胶干馏或碱水水解制得，也可由马尿酸水解制得。工业上苯甲酸是在钴、锰等催化剂存在下用空气氧化甲苯制得；或由邻苯二甲酸酐水解脱羧制得。苯甲酸及其钠盐可用作乳胶、牙膏、果酱或其他食品的抑菌剂，也可作染色和印色的媒染剂。 2.苯甲酸对人体的危害 对皮肤有轻度刺激性。蒸气对上呼吸道、眼和皮肤产生刺激。 苯甲酸进入机体后，大部分在9~15小时内与甘氨酸化合成马尿酸而从尿中排出，剩余部分与葡萄糖醛酸结合而解毒。但由于苯甲酸钠有一定的毒性，目前已逐步被山梨酸钠替代。不良反应：口服可发生哮喘、荨麻疹和血管性水肿等变态反应。外涂可发生接触性皮炎。。较大剂量口服可引起水杨酸盐类样反应。此外，苯甲酸对环境有危害，对水体和大气可造成污染。遇明火、高热可燃。 二、食品中苯甲酸的来源
薄层色谱法测苯甲酸含量 一、原理 试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行概略定量。 二、试剂 1、异丙醇。 2、正丁醇。 3、石油醚:沸程30℃ -60℃. 4、乙醚:不含过氧化物。 5、氨水。 6、无水乙醇。 7、聚酰胺粉:200目。 8、盐酸(1十1):取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL, 9、氯化钠酸性溶液(40 g/L):于氯化钠溶液(40 g/L)中加少量盐酸(1+1)酸化。 10 、展开剂如下: （1）正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2). （2）异丙醇十氨水+无水乙醇(7+1+2), 11、苯甲酸标准溶液2.0mg/ml:准确称取0.2000 g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0 mg苯甲酸。 12、显色剂:溴甲酚紫一乙醇(50%)溶液(0. 4 g/L)，用氢氧化钠溶液(4 g/L)调至pH=8 三、仪器 1、吹风机。 2、层析缸。 3、玻璃板:10 cmX18 cm, 4、微量注射器:10μL,100μL 5、喷雾器。 四、分析步骤 1 试样提取 称取 2. 5 0g 事先混合均匀的试样，置于25m L带塞量筒中，加0.5 m L盐酸(1+1)酸化，用15,10 mL乙醚提取两次，每次振摇1 min，将上层醚提取液吸入另一个25 mL 带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3 mL氯化钠酸性溶液(40 g/L)洗涤两次，静止15 min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25 mL容量瓶中，加乙醚至刻度，混匀。吸取10. 0 mL乙醚提取液分两次置于10 mL带塞离心管中，在约40℃的水浴上挥干，加入0. 10 mL 乙醇溶解残渣，备用。 2 测定 2.1 聚酰胺粉板的制备:称取1.6 g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15 mL水，研磨3 min-5 min，立即倒人涂布器内制成10cmX18cm、厚度0.3 mm 的薄层板两块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。 2.2 点样:在薄层板下端2 cm的基线上，用微量注射器点1μL,2μL试样液，同时各点1 μL,2μL苯甲酸标准溶液。 2.3 展开与显色:将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂(10.1或10.2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10 cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背
实验二苯甲酸的重结晶及测熔点 ——10级班 1 一、实验目的： 1、了解重结晶原理，初步学会用重结晶方法提纯固体有机化合物； 2、掌握热过滤和抽滤操作。 二、基本原理： 1、重结晶的原理是利用固体混合物中各组分在某种溶剂中的溶解度不同，使它们相互分离，达到提纯精制的目的（把固体有机物溶解在热的溶剂中使之饱和，冷却时由于溶解度降低，有机物又重新析出晶体。——利用溶剂对被提纯物质及杂质的溶解度不同，使被提纯物质从过饱和溶液中析出。让杂质全部或大部分留在溶液中，从而达到提纯的目的）。 注意——重结晶只适宜杂质含量在5%以下的固体有机混合物的提纯。从反应粗产物直接重结晶是不适宜的，必须先采取其他方法初步提纯，然后再重结晶提纯。 2、溶剂的选择： 1）被提纯物质，高温下溶解度大，低温下溶解度小。 2）与被提纯的物质不发生化学反应。 3）杂质溶解度要么非常大要么非常小。 4）溶剂易挥发。（相对被提纯物质）
5）能形成较好的晶体。 6）无毒无害，价廉易得。 常用溶剂及其沸点： 3、苯甲酸在不同温度下的溶解度 三、实验试剂与仪器： 粗苯甲酸（本实验中的药品混有氯化钠和少量泥沙）、AgNO3溶液、蒸馏水、烧杯、铁架台（带铁圈）、酒精灯、普通漏斗、玻璃棒、坩埚钳、滤纸、石棉网、药匙、三脚架、试管、胶头滴管、火柴。 四、实验步骤： 1、热溶解 ①取约2g粗苯甲酸晶体置于烧杯中，加入在微沸状态下刚好溶解剂量的蒸馏水。 ②在三脚架上垫一石棉网，将烧杯放在石棉网上，点燃酒精灯加热，不时用玻璃棒搅 拌（注意：搅拌时玻璃棒不要触及烧杯内壁）。 ③待粗苯甲酸全部溶解，停止加热。
④冷却两分钟后加入活性炭2%-5%，再加热沸腾5分钟。 2、热过滤 ①将准备好的过滤器放在铁架台的铁圈上，过滤器下放一小烧杯。 ②将烧杯中的混合液在保温漏斗里趁热过滤。（过滤时可用坩埚钳夹住烧杯，避免烫 手），使滤液沿玻璃棒缓缓注入过滤器中。 3、冷却结晶 将滤液静置室温冷却，观察烧杯中晶体的析出。 4、抽滤洗涤 ①将析出苯甲酸晶体置于安装好的布氏漏斗进行减压过滤。 ②冷水洗涤2-3次，少量多次，最终形成滤饼。 5、室温干燥 五、注意事项： 1.加热后的烧杯不要直接放在实验台上，以免损坏实验台。 2.进行趁热过滤时，注意使烧杯保持适当的倾斜角度，同时注意安全，防止烫伤。 3.不要用手直接接触刚加热过的烧杯、铁架台。 4.注意活性炭的加入时间和热过滤时的速度。 5.抽滤时注意先接橡皮管，抽滤后先拔橡皮管 六、思考题： 1、该实验为什么在粗苯甲酸全溶后，还要加少量蒸馏水？ 答：因溶液过滤时溶液与环境的温差较大，易使苯甲酸晶体提前析出，滞留在过滤器中，故需在过滤前适当稀释。
实验九 苯甲酸钠的含量测定 一、实验目的1、掌握双相滴定法测定苯甲酸钠含量的原理和操作 二、实验原理 苯甲酸钠为有机酸的碱金属盐，显碱性，可用盐酸标准液滴定。 C O O N a + H C l C O O H + N a C l 在水溶液中滴定时，由于碱性较弱(Pk b =9.80)突跃不明显，故加入与水不相溶混的溶剂乙醚提除反应生成物苯甲酸，使反应定量完成，同时也避免了苯甲酸在瓶中析出影响终点的观察。含量（%）%100???=m F T V 三、实验仪器和试剂1. 仪器： 分液漏斗、容量瓶、移液管、具塞锥形瓶、酸式滴定管、分析天平、烧杯、量筒、 2. 试剂：乙醚、甲基橙、盐酸、 四、实验内容 取本品1.5g ，精密称定，置分液漏斗中，加水约25ml ，乙醚50ml 与甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液 (0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml 洗涤，洗涤液并入锥形瓶中，加乙醚20ml ，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显持续橙红色，即得，每1ml 的盐酸滴定液(0.5mol/L)相当于72.06mg 的C 7H 5O 2Na 。 本品按干燥品计算，含C 7H 5O 2Na 不得少于99.0％ 五、实验结果与讨论 六、注意事项 1、滴定时应充分振摇，使生成的苯甲酸转入乙醚层。 2、在振摇和分取水层时，应避免样品的损失，滴定前，应用乙醚检查分液漏斗是否严密。 七、思考题 1.乙醚为什么要分两次加入?第一次滴定 至水层显持续橙红色时，是否已达终点?为什么? 2.分取水层后乙醚层用5ml 水洗涤的目的是什么?
苯甲酸的红外光谱测定及谱图解析 —KBr晶体压片法制样 一、目的要求 (1)学习用红外吸收光谱进行化合物的定性分析， (2)掌握用压片法制作固体试样晶片的方法； (3)熟悉红外分光光度仪的工作原理及其使用方法。 二、实验原理 当一定频率（一定能量）的红外光照射分子时，如果分子某个基团的振动频率和外界红外辐射频率一致，二者就会产生共振。此时，光的能量通过分子偶极矩的变化传递给分子，这个基团就吸收一定频率的红外光，产生振动跃迁（由原来的基态跃迁到了较高的振动能级），从而产生红外吸收光谱。如果红外光的振 动频率和分子中各基团的振动频率不一致，该部分红外光就不会被吸收。用连续改变频率的红外光照射某试样，将分子吸收红外光的情况用仪器记录下来，就得到试样的红外吸收光谱图。由于振动能级的跃迁伴随有转动能级的跃迁，因此所得的红外光谱不是简单的吸收线，而是一个个吸收带。 在化合物分子中，具有相同化学键的原子基团，其基本振动频率吸收峰(简称基频峰)基本上出现在同一频率区域内，例如，CH3(CH2)5CH3、CH3(CH2)4C≡N和CH3(CH2)5CH=CH2等分子中都有-CH3，-CH2-基团，它们的伸缩振动基频峰都出现在同一频率区域内，即在＜3000cm-1波数附近，但又有所不同，这是因为同一类型原子基团，在不同化合物分子中所处的化学环境有所不同，使基频峰频率发生一定移动，例如C＝O基团的伸缩振动基频峰频率一般出现在1850～1860cm-1范围内，当它位于酸酐中时，C=O为1820～1750cm-1、在酯类中时，为1750～1725cm-1；在醛中时，为1740～1720cm-1；在酮类中时，为1725～17l0cm-l;在与苯环共轭时，如乙酞苯中C=O为1695～1680cm-1，在酰胺中时，C=O 为1650cm-1等。因此，掌握各种原子基团基频蜂的频率及其位移规律，就可应用红 外吸收光谱来确定有机化合物分子中存在的原子基团及其在分子结构中的相对 位置。苯甲酸分子中各原子基团的基频峰如下图：
苯甲酸、山梨酸的测定实训标准 14.1任务工单 14.1.1实训目的 （1）掌握苯甲酸、山梨酸的测定的基本原理； （2）学习色谱分析法。 14.1.2实训材料 乳粉样品 14.1.3实训仪器及工作条件 （1）高效液相色谱(HPLC)仪、分析天平、超声波水浴、滤膜:0.45um （2）色谱条件：色谱柱:C18,250mtm×46mm,5um、流动相:甲醇一磷酸盐缓冲溶液=1+4,045μm滤膜过滤、流速:1.2 mL/min、检测波长:227nm、柱温:室温、进样量:20uL 14.1.4实训试剂 （1）甲醇(CH3OH):色谱纯 （2）亚铁氰化钾溶液(92g/L):称取亚铁氰化钾[k4FeCN)6?3H2O]106g,用水溶解于1000mL容量瓶中,定容到刻度后混匀。 （3）乙酸锌溶液(183g/L):称取乙酸锌[Zn(CH3COO)2?2H2O]219g,加入32mL 乙酸,用水溶解于1000mL容量瓶中,定容到刻度后混匀。 （4）磷酸盐缓冲液(pH=6.7):分别称取2.5g磷酸二氢钾(KH2PO4)和2.5 g磷酸氢二钾(K2HPO4?3H2O)于1000mL容量瓶中,用水定容到刻度后混匀,用滤膜过滤后备用。 （5）氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称量4g氢氧化钠(NaOH),用水溶解于1000 mL 容量瓶中,定容到刻度后混匀。 （6）硫酸溶液(0.5mo1/L):移取30mL的浓硫酸(H2SO4)到500mL水中边搅拌边缓慢加入,冷却到室温后转移到1000mL容量瓶,定容到刻度后混匀。 （7）甲醇水溶液:体积分数为50%。 （8）苯甲酸和山梨酸标准贮备液:每毫升含苯甲酸、山梨酸各500ug。准确称取苯甲酸、山梨酸标准品各5.0mg,分别置于100mL容量瓶中,用甲醇溶解,并稀释至刻度。摇匀后,冷臧于冰箱中,有效期2个月。
实验一、酱油中苯甲酸的测定 GB5009. 28 — 2016 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 一、实验目的 1熟悉并能熟练使用高效液相色谱仪； 2了解并掌握高效液相色谱法测定食品中的苯甲酸含量的方法与原理； 二、仪器基本原理 高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵系统,样品溶液经进样器进入流动相, 被流动相载入色谱柱(固定相) 内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从柱内流出, 通 过检测器时, 样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。 三、仪器和试剂 1.仪器：高效液相色谱仪-安捷伦1100、离心机（转速>8000r/min）、超声波水浴振荡器、旋涡混合器、PH计、分析天平（感量为0.001g和0.0001g）、水相微孔滤膜（0.22μm）； 2.试剂（除特别说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定一级水）：氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、甲醇（色谱纯）、乙酸铵（色谱纯）、苯甲酸钠（≥99%） 3.试剂配制 3.1氨水溶液( 1+99 ):取氨水 1mL ,加到 99mL 水中,混匀。 3.2亚铁氰化钾溶液( 92g / L ):称取 106g 亚铁氰化钾,加入适量水溶解,用水定 容至 1000mL 。 3. 3 乙酸锌溶液( 183g / L ):称取 220g 乙酸锌溶于少量水中,加入 30 mL 冰乙 酸,用水定容至 1000mL 。 3. 4 乙酸铵溶液( 20 mmol/ L ):称取 1.54g 乙酸铵,加入适量水溶解,用水定容至 1000 mL,经0. 22 μ m 水相微孔滤膜过滤后备用。 3.5甲酸 - 乙酸铵溶液( 2mmol/ L 甲酸 +20mmol / L 乙酸铵):称取 1.54g 乙酸 铵,加入适量水溶解,再加入75.2μL甲酸,用水定容至1000mL,经0.22μm水相微孔滤膜过滤后备用。 3.6苯甲酸标准储备溶液( 1000mg / L ):准确称取苯甲酸钠0.118g(精确到 0.0001g ),用水溶解并分别定容至100mL于4℃贮存,保存期为6 个月。当使用苯甲酸 标准品时,需要用甲醇溶解并定容。 3.7苯甲酸混合标准中间溶液(200mg/L):准确吸取苯甲10.0mL于 50mL容量瓶中, 用水定容。于 4℃贮存,保存期为 3 个月。 3.8苯甲酸混合标准系列工作溶液:准确吸取苯甲酸混合标准中间溶液0mL、0. 05mL 、 0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL ,用水定容至10mL ,配制成质量
紫外可见分光光度计法测定食品中苯甲酸钠的含量 一、实验目的 1. 进一步了解和熟悉紫外-分光光度计的原理和结构，学习UV2550 的操作。 2. 掌握紫外分光光度法测定苯甲酸钠的吸收光谱图。 3. 掌握标准曲线法测定样品中苯甲酸钠的含量。 二、实验原理为了防止食品在储存、运输过程中发生腐蚀、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生标准允许使用的主要防腐剂之一，其使用量一般在0.1% 左右。 苯甲酸具有芳香结构，在波长225nm和272nm处有K吸收带和B吸收带。根据苯甲酸 (钠)在225nm 处有最大吸收，测得其吸光度即可用标准曲线法求出样品中苯甲酸钠的含量。 三、仪器和试剂 1. 紫外可见分光光度计UV2550 (日本岛津)，1.0cm石英比色皿，50ml容量瓶。 2. NaOH 溶液( 0.1mol/L ) 3. 苯甲酸钠标准溶液的配制 (1) 苯甲酸钠标准贮备液(1.000g/L ):准确称量经过干燥的苯甲酸钠I.OOOg (105C干燥处 理2h)于1000mL容量瓶中，用适量的蒸馏水溶解后定容。该贮备液可置于冰箱保存一段时间。 ⑵苯甲酸钠标准溶液(100.0mg/L ):准确移取苯甲酸钠储备液10.00mL于100mL容量瓶中， 加入蒸馏水稀释定容。 (3) 系列标准溶液的配制: 分别准确移取苯甲酸钠标准溶液 1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL 和5.00mL于5个50mL容量瓶中，各加入O.lmol/LNaOH溶液I.OOmL后，用蒸馏水稀释定容。得到浓度分别为 2.0 mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L 和10.0mg/L 的苯甲酸钠系列标准溶液。 4. 市售饮料的配制 准确移取市售饮料0.5ml于50mL容量瓶中，用超声脱气5min驱赶二氧化碳后，加入 0.1mol/LNaOH溶液1.00mL，用蒸馏水稀释定容。 5. 蒸馏水 四、实验步骤 1. 开机 (1)打开计算机，打印机。 (2)打开主机开关，双击软件图标UVProbe，点击"Connect ”与仪器联机，仪器开始自检， 通过后按“ OK”。 2. 吸收光谱的测定 (1)选择"Window”i" Spectrum ”，打开光谱模块。 ⑵选择“ Edit Method”，设定波长范围(从大到小)，扫描速度(Fast),采样间隔 (1.0)，扫描方式( Single )，Instrument Parameters (Absorbence ) 。 (3)样品池和空白池均放上 2.5mL 缓冲溶液，点击光度计按键条中的“ Baseline ”，启动基线校 正，点击确定。 注:在开始基线校正之前，确认样品或参比光束无任何障碍物，且样品室中没有样品。 (4)参比池中加入缓冲溶液，样品池中加入苯甲酸钠标准液，点击按键条中的“ Start ”，测定紫