收稿日期:2008-09-25基金项目:“948”重大项目(N o.2006242C08);国家环保总局重点项目(N o.2004BA525B11)作者简介:白锦荣(1974-),女,山西人,在读博士,主要从事园林植物遗传育种研究。
通讯作者:张启翔(1956-),男,湖北人,教授,博士生导师,主要从事园林植物种质资源和遗传育种研究。
月季SSR 2PCR 反应体系的建立和优化
白锦荣,潘会堂,张启翔
(北京林业大学园林学院,国家花卉工程技术研究中心,北京 100083)
摘要:采用L 16(54)正交设计和二因素完全随机试验,分析了月季SSR 2PCR 反应体系的主要成分Taq DNA 聚合酶、样本浓度、Mg 2+浓度、dNTP 浓度以及引物浓度对扩增结果的影响,建立了适合月季的SSR 反应体系。研究结果表明:在20μL 反应体系中,Taq DNA 聚合酶宜加入1.5U ,样本最适宜浓度为30～40ng ,Mg 2+的最适浓度为1～115mm ol/L ,
dNTP 最适浓度为012mm ol/L ,单引物的最适浓度均为1μm ol/L 。用建成的反应体系对19对引物筛选,对12个月季品
种扩增,3%的琼脂糖凝胶电泳检测,品种间DNA 谱带多态性丰富,证明该体系稳定可靠。
关键词:月季;SSR ;正交试验;反应体系
中图分类号:S685.12 文献标识码:A 文章编号:1000-7091(2009)03-0184-05
Optimization and Establishment of SSR Analysis System in R oses(Rosa spp.)
BAI Jin 2rong ,PAN Hui 2tang ,ZHANG Qi 2xiang
(C ollege of Landscape Architecture ,Beijing F orestry University ,National
Engineering Research Center for Floriculture ,Beijing 100083,China )
Abstract :Using orthog onal design ,five factors including concentration of tem plate 、Mg 2+、dNTP ,primers and Taq DNA polymerase were optimized to establish SSR analysis system in roses.The results showed that 30-40ng DNA tem 2plate ,1-1.5mm ol/L Mg 2+,0.2mm ol/L dNTP ,1μ
m ol/L each primer and 1.5U Taq DNA polymerase in 20μL reac 2tion system were the optimal option.Through the optimized reaction system ,SSR fragments of 12rose cultivars were ob 2tained and detected.P olym orphism between different cultivars was abundantly detected by 3%agarose gels ,which showed that the system established in this study was suitable and stable.
K ey w ords :R ose ;SSR ;Orthog onal design ;System optimization
简单重复序列(Sim ple sequence repeats ,SSR )或
微卫星DNA (Microsatellite DNA ),又称为短串联重复(Short tandem repeats ,STR ),是一类由几个(多为1～6个)碱基组成的基序(M otif )串联重复而成的DNA
序列,广泛分布于各类真核生物基因组的不同位置[1]。SSR 标记具有共显性、高度重复性、高度丰富的多态性等优点,成为分析遗传多样性[2-4]、构建遗传连锁图谱[5]、研究群体遗传学[6]和筛选目标性状分子标记[7,8]的主要工具。SSR 标记虽有诸多优点,但其应用于不同植物也会出现较大的差异,如易产生非特异性扩增、干扰因素多、反应体系中成分复杂等。
月季(Rosa spp.)是世界重要的花卉之一,目前全世界共有现代月季品种25000多个,由于SSR 标记能较好地反映物种的遗传结构和遗传多样性,成
为国际上评价月季的一种有效工具[9-11]。但是,国内应用分子标记技术对蔷薇属资源和月季品种评价的研究报道甚少,而利用SSR 分子标记的研究以及有关标准化、高效的月季SSR 反应体系及其优化方法的研究并未见报道。因此,本研究旨在对月季SSR 反应体系中各个成分的浓度、用量以及组合效应进行筛选试验,建立并优化月季SSR 2PCR 反应体系,为月季分子标记、亲本选择选配及基因定位研究奠定基础。
1 材料和方法
1.1 试验材料
供试的月季样品均取自国家花卉工程技术研究
中心小汤山苗圃,选取健康植株嫩叶,保存于硅胶中待用
。
华北农学报?2009,24(3):1842188
1.2 试剂和仪器本试验所用21对引物选自Essenlink (2003)设
计,由上海Invitrogen 生物技术有限公司合成,扩增反应在T echne T C 2512型PCR 仪上进行。Taq DNA 酶、dNTP 均为Promage 公司产品,2000bp Marker 为T AK ARA 公司产品。1.3 DNA 的提取
基因组DNA 的提取采用T iagen 植物基因组
DNA 提取试剂盒,并做适当调整,提取后用1%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计测定其质量和浓度。1.4 PCR 扩增反应
选择一个DNA 样品对所有21对引物[12]进行初筛,依照扩增条带强弱及杂带多少做1～9计分,分数越高,表示敏感性、特异性越好。随机选择6个DNA 样品对有扩增产物的引物进行复筛,选出具有
多态性的引物。根据公式:
η=12(121/2)n (n 为样品数,η为有多态性引物的选中概率),计算选中的有多态性引物的概率。本研究利用6个DNA 样品进行测试,则有多态性引物的选中概率为9814%[13]。PCR 反应扩增程序为:95℃预变性11min ;95℃变性
30s ,引物退火温度40s ,72℃延伸90s ,共26个循
环;72℃延伸45min ,4℃保存[14]。取715μL 扩增产
物,在3%琼脂糖凝胶中检测,然后用紫外凝胶成像系统观察照相。
本试验选择月季品种黑魔术DNA 为模板,分别对3对引物进行反应体系的优化。下面以引物Rh59为例进行说明。
1.5 PCR 反应体系的正交试验
采用L 16(54)正交设计,对Taq DNA 聚合酶、样本浓度、Mg 2+浓度、dNTP 浓度以及引物浓度进行筛选,方案如表1和表2。参照张春华等[15]方法进行数据处理以识别反应体系中关键影响因素;再设计二组2因素4水平完全随机试验[16](表3,4),逐个优化其他反应成分终浓度水平,以确定相对较优的因素组合。
试验各组合均为20μL 反应体系,除表中各变化因素外,每组合中还含有5×PCR Buffer 2μL ,加ddH 2O 补足至20μL 。试验采用3次重复,并设对照,以确定体系是否有污染。
表1 SSR 2PCR 体系的因素与水平
T ab.1 The factors and levels in SSR 2PCR system
水平Levels
因素Factors Taq 酶用量/U Am ount of Taq E
Mg 2+
浓度/(mm ol/L )Mg 2+concentration
dNTP 浓度/(mm ol/L )dNTP concentration
引物浓度/(μm ol/L )
C oncentration of primers
样本浓度/ng C oncentration of DNA
10.50.50.10.5202 1.0 1.00.2 1.0303 1.5 1.50.3 1.5404
2.0 2.0
0.4
2.050
表2 SSR 2PCR 正交组合设计
T ab.2 Orthogonal design for SSR 2PCR optimization
水平
Levels
因素Factors Taq 酶用量/U Am ount of Taq E
Mg 2+
浓度/(mm ol/L )Mg 2+concentration
dNTP 浓度/(mm ol/L )dNTP concentration
引物浓度/(μm ol/L )
C oncentration of primers
样本浓度/ng C oncentration of DNA
11111121222231333341444452123462214372341282432193134210324311133124123421313414231442314154324116
4
4
1
32
1.6 SSR 反应体系的验证
利用构建的SSR 2PCR 反应体系,3个现代月季
品种对19对引物进行筛选,并用3对引物对12个
现代月季品种进行扩增验证,方法同前。
3期白锦荣等:月季SSR 2PCR 反应体系的建立和优化185
2 结果与分析
2.1 DNA 提取结果
利用T iagen 植物基因组试剂盒提取不同月季品
种基因组DNA ,1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA ,条带清晰且没有降解(图1),说明提取的DNA 质量高,完整性好,可用于SSR 分析。紫外分光光度计检测,OD260/OD280值在1.75～1.84,样品稀释到50ng/μL ,置-20℃
保存
。图1 现代月季品种DNA 电泳检测结果
Fig.1 DNA electrophoresis of different rose cultivars
2.2 正交设计和完全随机试验优化月季SSR 反应
体系
2.2.1 正交设计分析确定关键因素 月季正交试验各组合(表2)及SSR 扩增效果如图2所示,M 为2000bp Marker ,第17泳道为对照,说明体系无污染。依照条带强弱及杂带多少为1～16泳道评分为1,6,6,2,3,4,1,1,9,8,5,5,7,2,5和4。其中第1个
组合由于5种成分浓度过低,扩增条带微弱,第2,
3,5,6组合有非特异性扩增,第4,7,8,14组合扩增
产物模糊不易观察,其余7个组合均能扩增出特异
带。但是9组合和10组合明显优于其他组合,背影无杂带,特异性条带清晰,但二者除Taq DNA 聚合酶浓度相同外,其余各组分浓度均处于不同水平。在引物Rh58和Rh60上也得到相似结果(结果未列出)。表明Taq DNA 聚合酶为影响月季SSR 2PCR 反应的关键因素,当其用量为1.5U 时SSR 的扩增效果最好,而其他反应成分的终浓度水平尚需进一步研究
。
图2 黑魔术PCR 反应组分正交试验
设计电泳检测结果
Fig.2 Orthogonal design of PCR reaction components
and electrophoresis results of B lack Magic
2.2.2 完全随机试验筛选最适Mg 2+和dNTP 浓度
利用2因素4水平完全随机试验设计优化PCR 反应体系中Mg 2+和dNTP 终浓度,因素水平设计见表3,扩增结果如图3所示。
表3 Mg 2+和dNTP 浓度2因素4水平完全随机设计
T
ab.3 Completely randomized design of tw o factors and four levels on concentrations of Mg 2+and dNTP
处理
T reatments
dNTP 浓度/(mm ol/L )dNTP concentration
Mg 2+浓度/(mm ol/L )Mg 2+concentration
处理T reatments
dNTP 浓度/(mm ol/L )dNTP concentration
Mg 2+浓度/(mm ol/L )Mg 2+concentration
10.10.590.30.520.1 1.0100.3 1.030.1 1.5110.3 1.540.1 2.0120.3 2.050.20.5130.40.560.
2 1.0140.4 1.070.2 1.5150.4 1.58
0.2
2.0
16
0.4
2.0
图3 Mg 2+和dNTP 浓度试验的SSR 反应
Fig.3 E ffects of different concentrations of Mg 2+and dNTP on SSR analysis system
在Taq DNA 聚合酶为115U 反应体系中,dNTP 是PCR 反应的重要底物,其浓度对SSR 反应影响较大。从电泳图中可以看出,dNTP 浓度为011mm ol/L 时,PCR 扩增产物的量相对较少;其余浓度下扩增产物无明显变化,条带清晰,但若浓度过高,与Taq DNA 酶竞争Mg 2+,从而影响Taq DNA 酶的活性,扩增产物反而又减少,当浓度为012mm ol/L 时产物浓
度最高,故选择012mm ol/L 为最适浓度。
Mg 2+影响DNA 聚合酶的活性、扩增的真实性及产物的特异性,随着Mg 2+浓度的升高,条带清晰而增多。试验中4个Mg 2+浓度分别015,110,115,210
186 华 北 农 学 报24卷
mm ol/L,其中当浓度为110mm ol/L和115mm ol/L,扩增带谱均清晰而稳定,扩增效果较好;Mg2+浓度为210mm ol/L时,出现非特异性扩增,表明Mg2+终浓度应以110～115mm ol/L为宜。21213 完全随机试验筛选最适引物浓度和DNA用量 进一步利用2因素4水平完全随机试验设计优化引物终浓度和DNA用量(表4)。
表4 引物浓度和DNA2因素4水平完全随机设计
T ab.4 Completely randomized design of tw o factors and four levels on primer and DNA
处理
T reatments 引物浓度/(μm ol/L)
C oncentration of
primers
样本浓度/ng
C oncentration
of DNA
处理
T reatments
引物浓度/(μm ol/L)
C oncentration of
primers
样本浓度/ng
C oncentration
of DNA
10.5209 1.5
20
20.53010 1.530
30.54011 1.540
40.55012 1.550
5 1.02013 2.020
6 1.03014 2.030
7 1.04015 2.040
8 1.05016 2.050 在20μL反应体系中,引物与样本DNA浓度对
SSR反应的影响见图4,由图4可以看出,引物浓度
在015μm ol/L扩增产物较弱,而浓度在110～115
μm ol/L时扩增产物比较清晰,当引物浓度为210μm ol/L,扩增条带模糊,背景不清晰,易形成引物二聚体,从而影响扩增效率,故可确定在20μL反应体系中,最适引物浓度为115μm ol/L。
图4 引物和模板浓度试验的SSR反应
Fig.4 E ffects of different concentrations of
primers and template on SSR analysis system
适宜的样本量是保证特异性扩增的前提,样本量过多会降低特异性扩增效率,增加非特异性产物。本实验设计了4个样本DNA浓度,分别为20,30
, 40,50ng,比较了不同样本浓度在一定引物浓度下的SSR2PCR扩增结果。由图4可以看出,样本浓度在20～50ng均能产生扩增产物
,在带的亮度强弱上,不同样本浓度有较大的差异。样本浓度为20ng 时带较弱,而样本浓度为30,40ng时所扩增带的亮度明显增强,说明该样本浓度扩增产物较多。因此,确定最终样本浓度为30～40ng。
2.2.4 SSR反应体系的验证 利用优化后的20μL SSR反应体系:Taq DNA聚合酶115U,DNA用量30 ng,Mg2+115mm ol/L,dNTP012mm ol/L,引物115μm ol/L对黑魔术等3个品种分别对19对引物进行SSR扩增筛选,检测结果如图5所示:条带清晰,扩增强,不同引物间特异性高,100～500
bp间等位数1～7条不等,引物13,14,15,17,18条带扩增多态性丰富,引物1,5扩增谱带清晰,均可作为核心引物进行品种遗传多样性分析。
图5 黑魔术筛选引物的SSR反应
Fig.5 Selecting different primers of B lack Magic
on SSR analysis system
图6 引物Rh59对12个月季品种的扩增产物
Fig.6 DNA lands of12R.spp amplified by primer Rh59利用所优化体系对同一引物不同品种进行扩增,结果如图6所示,每份材料样品均扩增出清晰的目的片段,其条带既无缺失,也没有非特异性条带。不同品种间表现出明显的多态性差异,其中材料1, 2,9,11为丰花月季类群,材料3,4,5,6,7,8,12为杂种香水类群,而材料10为材料6和7的杂交后代,由于SSR分子标记是共显性标记,因而在鉴定杂种后代的真实性方面具有重要意义。以上结果表明利用优化后的体系能够有效区别杂种香水月季类群、丰花月季类群及种间杂交后代。同时根据3对引物的扩增结果,说明该反应体系稳定,具有可重复性,适用于月季品种的多态性评价。
3期白锦荣等:月季SSR2PCR反应体系的建立和优化187
3 讨论与结论
由于SSR 反应体系所含组分比较多,各组分的
反应参数均可能影响扩增的敏感性、特异性和产量,所以确定合适的反应参数是SSR 分析的前提[17-19]。影响SSR 反应的主要因子为Taq DNA 酶、模板浓度、Mg 2+浓度、dNTP 浓度和引物浓度。研究发现,各因子对SSR 反应体系的影响是相辅相成的,有主次之分,但没有绝对差别,如Tag DNA 酶浓度为115U 时,各反应体系均可产生谱带,但其扩增产物的量及清晰度有差异,因此利用正交设计结合完全随机试验逐步筛选其他成分的最佳终浓度水平。李银霞[16]实行多因素联合优化的正交试验设计,利用正交表的均衡分散性和整齐可比性,有效地解决理论上需要进行的试验次数与实际可行的试验次数的矛盾。孙伟[19]利用正交设计研究SSR 2PCR 扩增条件时,发现由于试验的影响因素较多,在一次正交试验中不可能研究全部因素,可先找出主次、先后矛盾,分批进行。因此,本试验利用正交试验识别SSR 反应体系中的主要因素并确定出最适用量,再结合较少因素的完全随机试验逐步筛选其他成分的最佳终浓度水平。
SSR 分子标记在植物种质资源遗传多样性和基因分子标记等遗传育种领域中已广泛应用。本试验建立的月季SSR 反应体系,可为研究月季种质资源和遗传育种提供参考。但本研究因限于引物和被测试验材料的数量(19对引物,12个品种),获得的信息量较少,只是初步优化了月季SSR 检测体系,获得更多月季种质资源多态性信息,需增加引物和供试材料的数量作进一步的研究。同时,由于本试验目的在于建立和优化反应体系,检测方法采用3%琼脂糖凝胶电泳,在进一步获得品种间多态性信息时,采用变性聚丙烯凝胶电泳将得到更多谱带,便于分析基因组间差异信息[20]。
利用正交设计结合二因素的完全随机试验设计优化月季SSR 反应体系是一种有效、适用而且简便的方法,能较好地识别SSR 反应体系中的关键影响因素,并优化反应条件。
本研究构建的适宜月季遗传分析的SSR 反应体系为:在20μL 反应体系中Taq DNA 聚合酶和DNA 最适用量分别为115U 和30～40ng ,Mg 2+、dNTP 和引物最适终浓度分别为110～115mm ol/L 、012mm ol/L 和115μm ol/L 。
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188 华 北 农 学 报24卷
月季品种分类 分类概述 被子植物中的单子叶植物蔷薇科中三杰——玫瑰、月季和蔷薇，其实都是蔷薇属植物。在汉语中人们习惯把花朵直径大、单生的品种称为月季，小朵丛生的称为蔷薇，可提炼香精的称玫瑰。但在英语中它们均可以统称为rose。Rose依目前正式登记的品种，大约有三万左右。其实，蔷薇属下的200多个大品种在国外都被称作rose，台湾都被称作玫瑰。 从月季花的各个部分深入认识月季花。 花：花生于茎顶，单生或丛生。有单瓣、复瓣和重瓣之别，花色丰富，花形多样。 果：月季的果实为球形或梨形，成熟前为绿色，成熟果实为橘红色。 叶：叶互生，为奇数羽状复叶;小叶3-7枚，卵形或长圆形。 >>更多
月季花有很多别称。月季花的别名包括四季花、月月红、胜春、斗雪红、月贵花、月记、月月开、长春花、月月花、艳雪红、绸春花、月季红、勒泡、月光花、四香春和月七花。 主要种类 月季花种类主要有：食用玫瑰、藤本月季（CI系）、大花香水月季（切花月季主要为大花香水月季）（HT系）、丰花月季（聚花月季）（F/FI系）、微型月季（Min系）、树状月季、壮花月季（Gr 系）、灌木月季（sh系）、地被月季（Gc系）等。 藤本月季（CI系） 绿化新秀——藤本月季为蔷薇亚科蔷薇属藤性灌木，植株较高大。每年从基部抽生粗壮新枝，于二年生藤枝先端长出较粗壮的侧生枝。属四季开花习性，但也只以晚春或初夏二季花的数量最多，攀援生长型，根系发达，抗性极强，枝条萌发迅速，长势强壮，一株年萌发主枝7～8个，每个主枝又呈开放性分枝，年最高长势可达5米，具有很强的抗病害能力。管理粗放、耐修剪、花型丰富、四季开花不断（也有一部分是1季开花或2季开花型），花色艳丽、奔放、花期持久、香气浓郁。花色有朱红、大红、鲜红、粉红、金黄、橙黄、复色、洁白等，二年生节间发芽，全身开花、花头众多，可形成花球、花柱、花墙、花海、花瀑布、拱门形、走廊形等景观。 品种有：
植物组织培养技术论文—月季组织培养技术 系别：生命科学学院 专业：生物技术及应用 姓名：曹胜华 学号：200930771015
[摘要]月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。 [关键词] 月季组培 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 一.月季组织培养的研究进展 月季是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。别名长春花、月月红、斗雪红、瘦客等，蔷薇科蔷薇属植物，其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小。其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一[1]。月季的花色可编制成完美的连续色谱。月季是重要的花卉，世界的销售额多年来稳居各类花)卉的第一或第二。月季的一大优点是分布极广，适应性良好，栽培容易。月季是四季常青花卉，花期长，花色多，芳香馥郁，由于其特殊的情感内涵和商品价值[2]，被广泛应用于园林、庭院装饰，并可制成月季盆景，作切花、花篮、花束等。此外，月季花可提取香料，根、叶、花均可人药，具有活血消肿、消炎解毒等功效。当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。 月季原产我国，早在汉代就有历史记载。2 0 0年前，月季植入西方和各国的蔷薇结缘，繁育出成千上万新月季品种，现代月季( 分为茶香月季 HT、聚花月季 F、壮花月季 Gr|、攀缘月季 CI、微型月季 Mi n、以及中国月季 Ch等 9大系。 ) 也随之推广到除热带和寒带外的世界各地。目前世界各地广为栽培的月季，是以中国月季为主要亲本，经以长期杂交育种而选育成功的。月季在观赏植物中的地位是很高的，全世界各国人民都普遍喜爱月季，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。月季的用途很广( 如用藤本月季布置长廊、拱门；树状月季装饰主干道等)。 国外月季花卉工厂化育苗开展较早，在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。我们国家的组织培养技术与国外相比差距不大，但是产业化起步较晚。在加快科学技术转化为生产力的今天，植物组培技术广泛应用于月季花卉的繁殖育种．必将取得巨大的经济效益、社会效益和生态效益。月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，快速繁殖优良品种。在短期内繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的遗传特性和表型特性与母株完全相同，完全保持了母株的优良特性。月季花组
月季的植物组织培养综述 摘要： 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。前言： 为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。 关键词：月季、MS培养基、激素等。 综述： 培养基 基本培养基 众多培养基中以MS 培养基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。对MS 培养基的成分及物理性能进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞分裂素 6 一苄氨基嘌呤( 6 - BA) 和生长素萘乙 D 6 7 B 0 2) 酸 ( NAA) 。 激素 不同激素对诱导愈伤组织的影响诱导培养基以ＭＳ为基本培养基，附加适量的细胞分裂素和生长素。生长素增加至0.1mg/L时，细胞分裂素浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响。最适的侧芽诱导培养基为MS+细胞分裂素0.5-3.0mg/L和生长素0.01-1.00mg/L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。 不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。用NAA 诱导生根和提高移栽成活率效果最好，浓度为100ppm 为宜，现在IAA 诱导生根和高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在1mg/L 以下,超过时对生根的促进作用已不显著,反而大幅度降低移栽成活率。NAA 和IBA对月季的诱导生根都有较好的效果,在1/2MS培养基附加NAA或IBA0.1-1.5mg/kg均可诱导不定根的产生,生根63.3%-93.3%。 糖浓度的影响 不同类型的月季，其组培需求的碳源和糖浓度有所不同。月季组培最常用的碳源是蔗糖，在丰花月季的组织培养中，初代培养的蔗糖含量为5%，继代培养的蔗糖含量为3%时培养效果
月季组织培养技术研究 摘要：以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA）和生长素(NAA)， 以及用不同外植体部位筛选出最适合月季腋芽萌发的培养基和最佳外植体部位。 实验结果表明：诱导侧芽萌发以MS+6-BA2.0mg/L培养基效果最好，外植体部位 以中部枝条发芽率最佳,为80%。 关键词：月季；组织培养；快速繁殖 Abstract: Use MS as basic medium ,with different concentration of cytokinin and auxin,a nd use different part of the stem as explant for tissue culture to select the suitable medium and best explants site for the induction of Rosa chinensis. The results showed that MS +6B A2.0mg / L is the suitable medium for bud germination, and the middle part of the stem ist he best explant. Keywords: Rosa chinensis, tissue culture, rapid propagation 月季（Rosa chinensis）是蔷薇科落叶或半长绿灌木，其花色艳丽、香味浓郁，是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。由于其分布极广、适应性良好、栽培容易等优点，加之月季四季常青、花期长、花色多等特点，使得在园林和路带绿化以及庭院居室的盆栽美化和切花等方面都得到广泛的应用。月季在观赏植物中具有很高的地位。月季花型大、美丽、幽雅、高贵，深爱各国人民喜爱，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。被誉为“花中皇后”之美称，深受人们喜爱。 月季通常采用扦插和嫁接繁殖，一些名贵品种扦插不易生根，主要是靠芽接繁殖[1]。而芽接速度慢，因而造成优良品种苗木供不应求。应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期，达到快速繁殖优良品种的目的。近年来随着生物技术的不断发展与更新，用植物组织培养的方法快速繁殖各种花木技术得到了普遍重视和广泛应用，关于月季的离体培养、根诱导及移栽问题，以有了不少报道[1、2、8、9、10]。由于受基因影响，不同品种之间的组织培养特性表现出一定的差异[2]。因此讨论不同品种组培快繁的培养条件，特别是培养基中适宜的不同激素配比仍具有重要价值，另外选择适合接种的外植体不同部位也会影响其发芽率。本实验以月月红月季品种为材料进行了侧芽的诱导和筛选出适合月季组织培养最佳外植体部位的组织培养特性研究，试图找出适合月季品种的组培快繁的最佳激素配比的培养基和最适合培养的外植体部位。 1 材料与方法
月季欧月品种分类 吧友“白沙恋人”整理 【一日散】: 忧郁男孩、碧奇公主、遗产、提名教堂、香织装饰、皇宫、夏日终曲、蓝丝带、红桃女王、圣埃泽布嘉、圣埃泽布嘉、深蓝之夜、粉和平、白菲儿、牧羊女、你的眼睛、马克安东尼夏邦、帕特奥斯汀、威基伍德、腮红门廊、克莱尔、英国的玛丽、柴可夫斯基、亚伯拉罕、高威、慷慨的园丁、亚历山大、摩纳哥公主、权杖之岛、安吉拉夫人、月亮女神、麦克米兰护士、德尔伯特、莫林纽斯、奇逸盛典、肯特公主、大天使加百列、碧池公主、萤火虫之地、门兹、宋夏、情书、青空、夏日终曲 【耐开】: 永远系列、阳台系列、浪漫宝贝、庞巴度玫瑰、SB2000、第一夫人、珊瑚果冻、金丝雀、藤宝贝、紫袍玉带、真宙、杰夫汉密尔顿、浪漫古董、红色达芬奇、浪漫比克、科莫、可爱多、达西、葵、奶龙、蒙特卡洛、智慧女神、双人芭蕾、法国礼服、红苹果、夏洛特、切朱、浪漫橙色、苏维尔西尼、甜梦、杰乔伊、皇家胭脂、甜腻的奶油、世霸、托马斯、莫奈、艾拉绒球、门廊绒球、灌小伊甸园、浪漫珊瑚心、四爱、大地主、红龙、浪漫宝贝、奶油龙沙、纽曼姐妹、拿铁咖啡、青茶、卡特琳娜、面纱、浪漫玫瑰、火龙果、教主、拉米、紫精灵、蜂蜜焦糖、美声、红双喜、格陵兰、草地浪漫、芒果浪漫、新星、绿冰、草莓杏仁饼、奇卡门廊、英伦节拍、冷美人、蜜桃雪山、贾博士、春雨、惊喜、紫雾泡泡、可爱绿、超级绿、冥王星、胡里奥 【开花机器】: 柯斯特、金丝雀、SB2000、城堡、帕特、台丝、艾玛、教堂、城堡、护士、魔力妞、夏洛特夫人、莫里斯、亚伯、苏玫、玛丽玫瑰、肯特公主、银禧庆典、麦金塔、权杖之岛、仁慈的赫敏、卡特琳娜、遗产、纽曼姐妹、门兹、图图、小圣、葡萄园之歌、宝藏、人间天堂、忧郁男孩、葡萄冰山、深蓝夜、棠马术、爱慕、第戎、粉妆楼、娜荷玛、红龙、浪漫宝贝、浪漫比克、皇家胭脂、红达、波提、皮诺拉、古董蕾丝、浪漫蕾丝、贞德、浪漫伊甸园、萤火虫之地、艾拉绒球、天方夜谭、安吉拉、莫里斯，黑影，托马斯、大游行、灌小伊、绿冰、马车、美咲、京、马萨德医生、宜家、本杰明布里顿、安布里奇、世霸、无条件的爱、玫瑰国度的天使、粉达、【耐晒欧月】 朱丽叶、红龙、茶花女、大地主、钢琴、红色达芬奇、音乐馆、焦糖古董、粉天鹅、海蒂克拉姆、玛丽玫瑰、尚塔尔、谢莉尔、莫奈、苏韦尔西尼、星斗、四爱、红苹果、温柔珊瑚心、遥远的鼓声、火龙果、教主、林肯先生、杰乔伊、英伦节拍、真宙、玫瑰国度的天使、狂欢派对、无条件的爱, 娜希玛、庵、甜蜜回音、摩纳哥公爵、羊脂香水、黄色舞裙、马萨德医生、幻彩、可爱粉底、女人遗产、永泰尔莫、京、灌小伊、洗礼者、草莓杏仁饼、新星、仙王座， 【直立不垂头欧月】 瑞典女王、尚塔尔、音乐馆、门兹、海蒂克拉姆、美咲、雷士特玫瑰、肯特公主、苏韦尔西尼、四爱、金丝雀、卡特琳娜、莫奈、切朱、杰乔伊、惑心、凯特、纽曼姐妹、梦幻花园、桃灼蓝天、温柔珊瑚心、珊瑚果冻、银禧庆典、红龙、安布里奇、世霸、浪漫比克、浪漫宝贝、仙王座、灌小伊、林肯先生、红双喜、蜜桃雪山、仙容、流星雨、狂欢派对、印象派、科莫、阿尼克、米兰达、甜蜜回音 【大花类】： 亚伯、庆典、奥赛罗、玛格丽特王妃、伊夫琳、肯特、图图、草莓山、珊瑚果冻、杰乔伊、门兹、仙王座、粉和平、黄和平、焦糖古董、马蒂诺风琴、摩纳哥公主、浪漫古董、金奖章、彩云、绯扇、牡丹月季、回眸,彩云，朝云，香云。摩纳哥公主。亚力克红。坦尼克。白圣诞。阿班斯，十全十美。红双喜。天堂。蓝河。古龙。我的选择。芝加哥和平。我亲爱的。爱与和平。莱茵黄金，俄州黄金。瓦伦西亚。 【一季类】： 粉龙沙、白龙、棠马术、炼金、伯爵、哈迪、贾博士、紫袍、磨坊、主教、银约翰、布拉邦、美人脸、一季藤小伊 【藤本】： 红龙、大游行、苔丝、甜梦、奥赛罗、庆典、托马斯、朝圣、王妃、夏夫人、亚伯、风采、海格瑞、棠马术、炼金、御用马车、银约翰、布拉邦、藤小伊、粉龙沙、白龙、河马、自由精神、我的心、粉伍德、光谱、麻吉婶婶、莫里斯 【地载大货】:粉龙，粉龙、白龙、红龙，自由，天路，欢笑格鲁吉亚，大游行，藤宝贝，安吉拉，苔丝，海格瑞，御用马车、甜梦、托马斯、藤小伊 【盆栽小藤类】:
月季植物组织培养实验报告 姓名：张恒玉 （天津师范大学10生乙10517085） 摘要：月季（Floribunda roses）为蔷薇科蔷薇属木本植物,其花姿优美，花 型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象，把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选，使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。 关键词：月季组织培养 Rose Plant Tissue Culture Lab Report Name: ZhangHengyu （Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences 300387） Abstract:Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors available, easy to trim the tree, planting small difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant improvement potential applications. Keywords: Rose tissue culture 1 月季介绍
一、选题依据 1、论文题目及研究领域 （1）论文题目：月季茎段组织培养技术研究 （2）研究领域：组织培养在月季繁殖上的应用 2、论文研究的理论意义和应用价值 月季在我国应用非常广泛，因此繁殖方法也非常多，但是常规繁殖技术很难对其品种进行更新。虽然自l875年人工杂交技术产生后，经过长期的杂交和选择，获得了许多理想品种，但月季育种目前存在着以下几个问题：（1)传统杂交方法具有局限性。表现在基因资源有限，染色体数目及倍性差异使远缘杂交难以成功；生长一致性、开花同时性等多基因控制性状难以改良等。此外月季作为多年生灌木，育种所需时间较长。（2）只注重对外观性状的改良，而忽视了对内在性状的改良。在过去的育种史中，育种家们只注意芽形、花形、花径、瓣数和茎长等外观性状的改良，并且选择的标准也趋于一致，造成资源流失，而内在性状，如生活力、瓶插寿命以及对病虫害的抵抗能力等未得到相应的提高。（3)遗传背景相对狭窄。据统计蔷薇属的100多个物种中只有8个种对现代月季做出过突出贡献，因此这种近亲杂交现象严重影响月季的生活力[1]。 90年代发展起来的以组织培养为基础的转基因技术无疑为月季育种提供了一条新途径。这种方法不但使品种在外源基因所控制的性状上发生改变，其性状保持相对稳定，还可利用来自其他生物类型的基因，创造更优良的品种。目前，月季的组织培养已有了较深入的研究，基因的分离、克隆以及载体构建等技术在重要的农作物及模式植物上已积累了较多的经验，皆可应用于月季的基因工程育种中[2]。运用这项技术不断培育出新品种以满足人们对月季求新求异的需求。 3、目前研究的概况和发展趋势 月季传统的栽培方法是用嫁接和扦插法进行繁殖，但繁殖速度较慢。自20世纪60年代组培技术在生产中应用以来，许多研究者在月季的组培方面做了大量的研究工作，在月季组培苗的利用方面也取得了很大的进展，对加速新品种的推广和运用起到了积极作用。我国的研究者从20世纪80年代以后便开始进行切花月季组培种苗的生产，在组培的各大领域取得了很好的成绩。 目前，植物组织培养已经向基因的分离、克隆以及载体构建方向发展。在当前再生体系不够完善仍然是制约月季转基因的主要因素，直接再生不定芽途径虽然再生高，需时短，适应范围广，但转化困难；胚性愈伤组织或次级体细胞胚易于转化，但体细胞胚再生体系的建立相对困难，需要在诱导出初级体细胞胚后经过长时间的继代和选择，目前具备该再生体系的品种还非常有限。植株再生是进行遗传转化的必要前提，只有具备了成熟的再生体系才能有效的进行基因转化。现在组织培养技术在很大程度上仍是已经验为基础的，广泛开展月季组培的研究仍是解决问题的最佳途径，在我国尤其如此。随着经验的累积，月季再生体系将不断完善，为转基因提供前提条件。此外，人们对环保的日益重视，对新奇花朵的需求日益增加，以组织培养为基础的技术必将在月季育种中发挥重要作用[3]。 二、论文研究的内容
月季花有哪些品种月季花品种都有哪些月季花有哪些品种月季花品种都有哪些【导读】月季花被称为花中皇后，又称月月红，月季花品种有很多，市面上常见的几种类型有茶香杂种月季，大花月季，丰花月季，微型月季，蔓性月季。不同颜色的月季花品种有白色，橙色，黄色，蓝色，黑红色，绿色，粉色，复色等颜色。在生活中我们常常看到不同颜色的月季花，到底月季花品种都有哪些呢,接下来就为大家做一个详细的介绍。 月季花被称为花中皇后，又称月月红，是常绿、半常绿低矮灌木，四季开花, 一般为红色,或粉色、偶有白色和黄色,可作为观赏植物，也可作为药用植物，亦称月季。 月季的品种分类 现代月季起始于公元1789年由中国月季引入英国之后，随之香水玫瑰(R. odorata Sweet)也引入英国，后又传入法国，在法国先用法国蔷薇(R. gallica L.)和突厥蔷薇(R. damascena Mill.)杂交，以后又将香水玫瑰杂交，19世纪在欧洲 普遍栽培花香、花大而又多次开花的大月季品种，其后又传入美洲。进入20世纪后，欧美各国园艺学家纷纷利用各种蔷薇反复杂交，至今全球已登记的月季品种多达万余个。园艺学家和植物学家共同公认，将繁多的月季品种，按其性状习性划分为以下五大类: 茶香杂种月季(Hybrida Tea Roses)，即杂种香水月季(简称HT系)，植株直立，株高中等，约1~米，一年多次开花，花单生或多数集生成伞房花序，也有连 续开花直到低温出现时停止的。花型中等，花心高出花瓣，香气浓、淡不一，但都带有茶香味，品种很多，花色也很丰富，与中国古老月季关系较近。 大花月季(Grandiflora Roses)，即壮花月季(简称Gr系)，植株高大，直立粗壮，可高达3米。一年多次开花或连续开花至低温降临，花单生或呈伞房花序，花
最全的全世界各种月季花品种大全，附月季花图片 直立灌木，可做藤本栽培，是新型的蓝紫色灌木型园林庭院装饰玫瑰 品种，也适合做花柱栽培。此品种适合多种气候类型的环 境，抗病性比较优秀，在澳大利亚依然表现十分优秀，开 花多为大集群开放，效果十分震撼，是近年来最优秀的蓝 波浪式的花瓣边缘，有着强烈的水果的香味。开花性非常优秀的丰花品种，耐 大集群的开放模式。 被全世界广大月季爱好者种植，并且经久不衰，直到今天在全球花友排行榜上依 金黄色粉红色调，温和的香料的香味，花开花量大，成集 2007 大奖，炎热对其花型开花量无明显影响，是 的优良大花品种，独特的色彩，优良的抗性，一流的群体效果得以立足，也是近年来推出
薰衣草淡紫色或者紫色混合，红色的边缘，淡紫色花心，强烈的玫瑰，柑橘，香料的混合香味的大花月季品种，植 株生长速度快，分枝性开花性优越，耐热性好，开花性非 常优秀，非常抗病以及大集群的开放模式加上不寻常的色 年间，薰衣草色调月季唯一获 年美国推出，淡 紫色或者紫色混合，红色花边，强烈的柑橘玫瑰香味，花 朵中等，大型集群开放。四季开花性好，植株强健，抗病 性极强，耐热性好。该花是花园里十分优秀的品种，耐修 剪，植株长势快，株型丰满花量巨大，不同寻常的颜色跟 特殊的香料香味使他获得很多玫瑰大家，是花园里最值得 种植的丰花品种之一，盆栽最好选择大盆，注意经常修剪 鲑鱼的粉红色，温和的香味，株型中等，分枝性非常好，开花性非常优秀，是非常完美的老月季之一。此品种刺非常少，几乎接近无刺，是在国外备受推崇的老月季品种之 一，而更多证据表明这是一款应该划分在中国月季类别里 的品种，此类品种丰花性，耐热性，开花量都是十分优秀 的，株型丰满，无论是盆栽还是园林都能应用，其温和的
目录 摘要〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃4 前言〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃4 综述〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃5 1．外植体〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃5 1.1取材部位 1.2取材时间 1.3取材大小 2. 消毒〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃8 3. 接种方式〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃8 4.培养基〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃9 4.1基本培养基 4.2激素 4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响 4.2.2不同激素对继代培养的影响 4.2.3不同激素对生根培养的影响 4.3糖浓度的影响 4.4无机盐 4.5琼脂 5.培养基的配臵〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃13 6.培养条件〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃14 7．防褐化〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃14
技术路线与实验设计〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃15 参考文献〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃17
月季病虫害防治 常见病害－白粉病 1病原及症状：白粉病菌属于子束菌亚门、白粉菌目、单束叉丝壳属。闭束壳内含1个子束，无色椭圆形，内含8个子束孢子，为单胞无色。无性分生孢子。该病主要危害嫩稍幼叶和花。染病部位出现白色粉状物，是这一病害胡明显症状。初期叶片上产生退绿黄斑，以后叶背面出现白斑，并逐渐扩大成不规则状。严重时白斑互相连接成片。嫩梢卷曲，皱缩。花蕾表面布满白粉，花朵畸形。叶柄及皮刺上白粉层较厚，很难剥离，引起植株落叶，花蕾枯僵而不能开放。 2发病规律：病菌主要以闭束壳在病叶病蕾上越冬。次春雨后放射出子束孢子，先侵染根，产生的分生孢子由气流传播，并重复侵染。5-9月为发病盛期，至10月不再发病。天气干旱的年份及长势衰弱的植株发病严重。 3防治方法：A 秋冬清除病叶病蕾，早春剪除病芽、病枝、病叶，集中深埋或烧毁。改善栽培条件，增加通风透光，少施氮肥，多施磷钾肥。B发芽前喷施5硫合剂；发病初期，喷施25％粉锈宁可湿性粉剂1500倍液；或喷施70％甲基托布津可湿性粉剂1000倍液；或喷施15％粉锈宁可湿性粉剂1000倍；可喷施0.02-0.03％高锰酸钾溶液。 常见病害－黑斑病 1 病原及症状：该病菌属于半知菌亚门，黑盘孢目、放线孢属。分生孢子长卵形或椭圆形，双胞无色，分隔处微缢缩，可断裂成2个细胞。该病害为世界性病害，非常普遍。对主季危害极为严重。叶面、花朵、新梢均有发生。初发时叶片上呈大小不等的黑斑，病斑角质层下有辐射壮褐色菌丝线和小黑点（分生孢子盘）。后扩大并呈黄褐色或暗紫色，最后变为灰褐色，严重时新梢枯死，整株下部叶片全部脱落，变为光杆状。 2 发病规律：黑斑病菌以菌丝体或分生孢子盘在病残体上越冬借助雨水飞溅传播，昆虫
实验——月季的花药培养 1． 1个子房内共有4个胚珠，则完成受精作用需要的花粉粒个数、最终形成的种子数及果实数依次为…（） A．8、4、1 B.4、4、1 C．4、4、4 D.8、1、1 2．关于被子植物花粉的形成，说法正确的是（） A．花粉是花粉母细胞经有丝分裂形成的 B．花粉的发育要经历四分体期、单核期和双核期 C．花粉发育经历的四分体时期与减数第一次分裂的四分体时期含义相同 D．花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是一系列减数分裂的过程 3．菊花的组织培养和月季的花药培养都是利用组织培养技术，关于两者的叙述下列说法中正确的选项有() C．①②④ D．①②③④ 4．下列关于月季花药培养的叙述中，错误的是（） A．材料的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率 B．选择花蕾通常选择完全未开放的花蕾 C．选取材料时一定要进行消毒 D．培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株 5．在花药培养过程中，需要对培育出来的植株作进一步的鉴定和筛选，目的是看其（）A．是否有染色体丢失 B．是否有基因突变 C．是否出现染色体倍性变化 D．是由哪种形式形成的 6．花药培养中材料消毒主要有以下几步，顺序正确的是（）
①将花蕾在酒精中浸泡约30 s ②放入氯化汞溶液中2～4 min ③无菌水清洗，然后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分④用无菌水冲洗3～5次 A．①②③④B．①③②④ C．③①④②D．②③①④ 7．下列关于月季花药培养的叙述中，错误的是() A．材料的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率 B．选择花药时常用的方法是醋酸洋红法 C．选取材料时一定要进行消毒 D．培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株 8．根据植物组织培养和生物有效成分的提取的知识回答下列问题： （1）菊花的组织培养常用的培养基是，原理是。 （2）月季的花药离体培养，从花粉粒的选择上看，应选择期的花粉粒为宜。 （3）从茶籽中提取茶油一般最好采用法，工业上提取胡萝卜素一般采用萃取法，鉴定该色素的方法是法。 9．根据生物技术实践的有关知识，回答下列问题： （1）欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入制成选择培养基进行分离。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是。 （2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是。 （3）在月季花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感，一般来说，在期，花药培养成功率高。 （4）在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰精油，要求不含任何添加剂和化学原料，其提取方法主要是；玫瑰精油的提取过程中向获得的乳化液中加入NaCl，增加盐浓度的目的是。（5）某兴趣小组将豆腐块灭菌，接种微生物后培养2天，加入适量食盐，经密封放置10 天后制的豆腐乳。在保质期内，豆腐乳放置时间越长，蛋白质含量越低，其原因是豆腐中蛋白质被微生物产生的分解。最终使含量增加，因此保质期内豆腐乳放置越久风味越佳。10．利用植物组织培养可培育无病毒植株和大量生产细胞产物，请回答以下相关问题。（1）诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低的主要影响因素是__________和培养基的组成。利用月季的花药离体培养产生单倍体时，一般来说，在期花药培养的成功率最高。为了选择该期的花药，通常选择的花蕾。确定花粉发育时期最常用的方法有法，但是对于花粉细胞核不易着色的植物，需采用法，该法能将花粉细胞核染成色。 （2）若要进行兰花无病毒植株的培育，从外植体到无病毒植株试管苗，要人为控制细胞的____________和过程。 （3）进行组织培养需配制MS培养基，在该培养基中常需要添加、等激素。欲利于根的分化，植物激素的用量比例应为。
植物组织培养论文 —月季组织培养技术 植物组织培养论文 植物组织培养是一门专业性、操作性和实践性很强的技术类课程,近年来国内各农林院校的农学、园艺、林学和综合性院校、师范院校的生物和生物技术等本、专科专业都相继开设了植物组织培养课程。实验教学是《植物组织培养》课程教学的中心和关键环节。本文从五方面就河池学院近几年《植物组织培养》实验课程教学改革模式进行了探讨和总结。 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。 一.月季组织培养的研究进展 月季是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。别名长春花、月月红、
斗雪红、瘦客等，蔷薇科蔷薇属植物，其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小。其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一[1]。月季的花色可编制成完美的连续色谱。月季是重要的花卉，世界的销售额多年来稳居各类花)卉的第一或第二。月季的一大优点是分布极广，适应性良好，栽培容易。月季是四季常青花卉，花期长，花色多，芳香馥郁，由于其特殊的情感内涵和商品价值[2]，被广泛应用于园林、庭院装饰，并可制成月季盆景，作切花、花篮、花束等。此外，月季花可提取香料，根、叶、花均可人药，具有活血消肿、消炎解毒等功效。当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。 月季原产我国，早在汉代就有历史记载。2 0 0年前，月季植入西方和各国的蔷薇结缘，繁育出成千上万新月季品种，现代月季( 分为茶香月季 HT、聚花月季 F、壮花月季 Gr|、攀缘月季 CI、微型月季 Mi n、以及中国月季 Ch等 9大系。 ) 也随之推广到除热带和寒带外的世界各地。目前世界各地广为栽培的月季，是以中国月季为主要亲本，经以长期杂交育种而选育成功的。月季在观赏植物中的地位是很高的，全世界各国人民都普遍喜爱月季，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。月季的用途很广( 如用藤本月季布置长廊、拱门；树状月季装饰主干道等)。 国外月季花卉工厂化育苗开展较早，在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。我们国家的组织培养技术与国外相比差距不大，但是产业化起步较晚。在加快科学技术转化为生产力的今天，植物组培技术广泛应用于月季花卉的繁殖育种．必将取得巨大的经济效益、社会效益和生态效益。月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，快速繁殖优良品种。在短期内繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的遗传特性和表型特性与母株完全相同，完全保持了母株的优良特性。月季花组培繁殖可以周年生产，不受季节限制，并且耐贮藏不易烂苗，可脱离培养基长途运输，实现了苗木运输“微型化”。二.月季组织培养技术 （一）.外殖体的选择、消毒及接种 外殖体一般选取生长健壮的当年生枝条的饱满而未萌发的侧芽。取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用7 0 ％酒精表面消毒3 0 ～ 4 0 S，再用0.1 ％H g C 1 溶液灭菌5 ～ 1 0min，最后用无菌水冲洗3 ～ 5 次。芽的快速繁殖与供试材料的基因型有关，同时还与外殖体的取材部位有关，来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快[5]。李青等分别选取一年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽作为外殖体，相同条件下培养发现越冬芽的成活率较高，且从接种到萌动时间较短，生长快，在后代繁殖中植株健壮。于冰沁在外殖体的接种中采用了垂直接种，斜向上4 5 度接种，水平接种和反转接种4种方式，发现垂直接种和斜向上 45 度接种是最佳的接种方式，腋芽再生芽数多，且生长健壮，这可能与植物的生长极性有关。
看叶片，给月季把脉-----《花木盆景·花卉园艺》2005年第10期 邓必忠 随着城市的绿化铺天盖地，城市森林大幅崛起，众多花草树木都要与月季朝夕相伴。一些植物所寄生的害虫和月季自身的虫害席卷包裹，大大地威胁着月季的生存。有些食杂性很强的昆虫（近亲），已开始蚕食月季，其趋势一发不可收拾。当务之急，要追溯月季害虫的“家史”，展示“脸谱”，曝光行为，从而抓住机遇，切中要害，达到钳制虫害，降低虫率，给月季一个良好的生态小环境。 月季主要害虫简历 白蝇（小白蛾）：粉虱类，刺吸性害虫。成虫全身发白，有翅，体长3mm，善飞翔。若虫浅绿色，纺锤形，体长0.3mm，爬行快。 谷雨时节，成虫成群迁移到月季植株上，产卵于嫩叶背面。一周后，若虫孵化开始危害叶背、虫多口密，在叶背吮吸叶汁后，叶面斑白点点，点点连片。十天半月内，叶组织坏死，叶白失水，萎缩殆尽。武汉地区，气温越高，成虫越活跃，气温徒降，成虫又成群离去。蛹留守越冬。 白蝇
蓟马：蓟马类，刺吸性害虫。成虫黑色，角触角暗黄色，复眼较大，翅窄，周围有细而长的毛，体长约１．５ｍｍ左右。若虫初卵时体长０．３ｍｍ，浇黄色。用１０倍放大镜看，蛹浅黄色，纺锤形，身体横向有三条褐带。 立夏时节，若虫在嫩叶背叶肉内吮吸为害，还不时排泄褐色物质。受害叶背，花蕾萼叶背均不同程度褐变。叶面失去光泽，叶片扭曲伸展不平。武汉地区，从立夏到白露时节均有受害症状。寒露时节，嫩叶背的产卵处，点点凸凸，卵在叶肉内越冬。 乌桕白轮蚧：蚧虫类，刺吸性害虫。雄成虫介壳长形，长约１ｍｍ，白色，蜡质状；雌成虫介壳椭圆或圆形，圆径大的约３ｍｍ，小的约１ｍｍ，白色，蜡质状，身体中部凸出。 立夏时节，成虫成群聚集在植株中部的枝条接踵点上，或疙疙瘩瘩里装身，交配。若虫从雌虫体内爬出后，窜至周边枝条吮吸为害。受害枝条干燥发白，皮下形成层坏死，再也无力回天了。武汉地区，从立夏到冬至时节，虫害不断。一般药物很难杀灭，成虫自身保护性强。一株受害，不易向另一株传播。冬至以后，成虫、蛹、若虫都可在老枝皮缝中越冬。
最全的全世界各种月季花品种大全，附月季花图片效果图序号名称简介 蓝色狂想亮紫或灰蓝色灌木香料的香味株型中大型直立灌木可做藤本栽培，是新型的蓝紫色灌木型园林庭院装饰玫 品种，也适合做花柱栽培。此品种适合多种气候类型的境，抗病性比较优秀，在澳大利亚依然表现十分优秀，花多为大集群开放，效果十分震撼，是近年来最优秀的蓝紫色大型灌木品种之一！ 安琪儿薰衣草淡紫色或深紫色或紫红色混合，波浪式的花瓣边缘，2有着强烈的水果的香味。开花性非常优秀的丰花品种，耐热，喜欢干燥的环境。丰花性非常好，大集群的开放模式。此品种在1971年获得ARS大奖，被全世界广大月季爱好者种植，并且经久不衰，直到今天在全球花友排行榜上依然名列前茅，是最优秀的一类品种之一，非常经典。 一击致富金黄色粉红色调，温和的香料的香味，花开花量大，成集3群开放，株型强壮挺拔的大花月季，非常抗病，该品在2007年获得AARS大奖，炎热对其花型开花量无明显影响，是现代灌木月季风靡下难得的优良大花品种，独特的色彩，优良的抗性，一流的群体效果得以立足，也是近年来推出的最优秀金黄色庭院大花品种之一。 蓝色伊甸园薰衣草淡紫色或者紫色混合，红色的边缘，淡紫色花心，4
强烈的玫瑰，柑橘，香料的混合香味的大花月季品种，植株生长速度快，分枝性开花性优越，耐热性好，开花性非常优秀，非常抗病以及大集群的开放模式加上不寻常的色彩使得她是在此之前的20年间，薰衣草色调月季唯一获得过AARS奖项。 年美国推出，淡2004，丰花月季，蓝色伊甸园Blue Eden 紫色或者紫色混合，红色花边，强烈的柑橘玫瑰香味，花朵中等，大型集群开放。四季开花性好，植株强健，抗病性极强，耐热性好。该花是花园里十分优秀的品种，耐修剪，植株长势快，株型丰满花量巨大，不同寻常的颜色跟特殊的香料香味使他获得很多玫瑰大家，是花园里最值得种植的丰花品种之一，盆栽最好选择大盆，注意经常修剪控制株型 粉红格鲁斯5鲑鱼的粉红色，温和的香味，株型中等，分枝性非常好， 开花性非常优秀，是非常完美的老月季之一。此品种刺亚 常少，几乎接近无刺，是在国外备受推崇的老月季品种 一，而更多证据表明这是一款应该划分在中国月季类别的品种，此类品种丰花性，耐热性，开花量都是十分优秀的，株型丰满，无论是盆栽还是园林都能应用，其温和的颜色加上温和的香味在众多的月季是叫人最难忘的。 奥斯汀月季培育:David Austin 1995年6 铜色花色:花型:重瓣株形:中灌木，矮藤本耐寒性:耐寒香味:茶香味，强烈 品种特性:颜色出众
专题3 植物组织培养技术 课题2 月季花的组织培养 备课时间：主备人：武爱玲课型：新授课 上课时间：审核：生物组班级： 一、学习目的 1、说明植物组织培养的基本原理； 2、学习并进行植物组织培养的基本技术， 3、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化。 二、重点和难点 1.教学重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术 2.教学难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术 第一课时问题生成课 一、创设情景，导入课题。(2ˊ) 二、自主学习 ★基础知识： 1．被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育要经历、和等阶段。花粉是由花粉母细胞经过而形成的，因此花粉是。 2．产生花粉植物的两种途径 通过花药培养产生花粉植株的两种途径： 思考：（1）花药培养产生花粉植株的两种途径的差别主要取决于什么？ （2）什么是体细胞胚？ （3）单倍体性细胞产生的花粉胚，也可发育成为单倍体植株，这和植物的体细胞克隆有区别吗？ 3．影响花药培养的因素 诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低，受多种因素影响，其中与 是主要的影响因素；也是提高诱导成功率的重要因素；另外亲本植株的生长条件、以及等对诱导成功率都有一定影响。 思考：（1）为什么选择合适的花粉发育期是诱导花药培养成功率的重要因素？ （2）为什么花药的培养要选择完全未开放的花蕾？ 4．实验操作 （1）材料的选取 选择花药时，一般要通过来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的方法有和。 （2）材料的消毒 材料消毒过程中用的0.1%的氯化汞溶液,实验完毕应如何处理? （3）接种和培养 剥离花药时，应注意哪些问题？花药培养过程中应注意哪些问题？ 【疑难点拨】 1．为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 2．植物组织培养技术与花药培养技术有何区别？ 相同之处：培养基的配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。 不同之处：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花北培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药的培养难度加大。 三、评价预习，各组学科长评价，老师评价。 四、共性问题，除上述问题还有什么生成问题。 第二课时问题解决课 花药中的花粉花药中的花粉 丛芽 丛芽 移栽脱分化 脱分化 态度决定成败！