基因工程期末考试重点知识整理
基因工程 第一章基因工程概述 1、基因工程的概念(基因工程基本技术路线PPT) 基因工程（Gene Engineering）,是指在基因水平上的遗传工程,它是用人为方法将大分子(DNA)提取出来,在离体条件下用适当的工具酶进行切割后,把它与作为载体的DNA分子连接起来,然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中,以让外源遗传物质在其中“安家落户”,进行正常的复制和表达,从而获得新物种的一种崭新的育种技术. 2、基因工程的历史 基因工程准备阶段：1972，第一个重组DNA分子的构建，构建人：Paul Berg 及其同事PPT 基因工程诞生：1973，Cohen & Boyer首次完成重组质粒DNA对大肠杆菌的转化 基因工程发展阶段的几个重要事件： 一系列新的基因工程操作技术的出现； 各种表达克隆载体的成功构建； 一系列转基因菌株、转基因植物、转基因动物等的出现 3、基因工程的内容（P9） 4、基因克隆的通用策略（P12）(基因组文库(鸟枪法)+分子杂交筛选)
第二章分子克隆工具酶 5、限制性核酸内切酶的概念、特点、命名、分类(问答) 概念：一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列，并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶，主要存在于细菌体内 特点（参加PPT） 命名：依次取宿主属名第一字母，种名头两个字母，菌株号，然后加上序号。如：从Haemophilus influenze Rd中提取到的第三种限制型核酸内切酶被命名为Hind Ⅲ，Hin指来源于流感嗜血杆菌，d表示来菌株Rd，Ⅲ表示序号。 分类：依据酶的亚单位组成、识别序列的种类以及是否需要辅助因子可分为：Ⅰ型酶、Ⅱ型（Ⅱs型）酶和Ⅲ型酶。 真核细胞中有4中DNA聚合酶：α，β，γ，线粒体DNA聚合酶 原核生物中3中DNA聚合酶：Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ
牛的牛小肠碱性磷酸酶()酶联免疫分析（） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中类牛小肠碱性磷酸酶()的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛的牛小肠碱性磷酸酶()水平。用纯化的牛的牛小肠碱性磷酸酶()抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类牛小肠碱性磷酸酶()，再与标记的类牛小肠碱性磷酸酶()抗体结合，形成抗体抗原酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物显色。在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的类牛小肠碱性磷酸酶()呈正相关。用酶标仪在波长下测定吸光度（值），通过标准曲线计算样品中牛的牛小肠碱性磷酸酶()浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成孔配置孔配置保存 说明书份份 封板膜片（）片（） 密封袋个个 酶标包被板××℃保存 标准品：×瓶×瓶℃保存标准品稀释液×瓶×瓶℃保存酶标试剂×瓶×瓶℃保存 样品稀释液×瓶×瓶℃保存 显色剂液×瓶×瓶℃保存 显色剂液×瓶×瓶℃保存 终止液×瓶×瓶℃保存 浓缩洗涤液（×倍）×瓶（×倍）×瓶℃保存 样本处理及要求： . 血清：室温血液自然凝固分钟，离心分钟左右（转分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 . 血浆：应根据标本的要求选择或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合分钟后，离心分钟左右（转分）。 仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 . 尿液：用无菌管收集，离心分钟左右（转分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 . 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心分钟左右（转分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用（）稀释细胞悬液，细胞浓度达到万左右。通过反复冻
血液生化检查各指标及对 应正常值列表 Prepared on 22 November 2020
血液生化检查各指标及对应正常值列表 （二氧化碳结合力） 2O～30 mmol/L （一氧化碳定性）（—） （a羟丁酸脱氨酶） 90～22O IU/L （磷酸肌酶激酶） 25～170 mmol/L （乳酸脱氢酶） 40～100 mmol/L （激肌酸激酶同功酶） 0～16 （血清白/球蛋白）～2-3g （高密度脂蛋白〕～ mmol/L （低密度低蛋白）～ mmol/L （极低密度脂蛋白） 1～3 mmol/L （C反应蛋白）（—） （免疫球蛋白）～ mg/ml （免疫球蛋白） 9～23 mg/ml （免疫球蛋白）～ ml （铁蛋白） 20～200 ng/ml （蛋白电脉） 3～ % （蛋白电脉）～ % （蛋白电脉）～ % （蛋白电脉）～ % （纤维蛋白原） 2～4g/L （） 44～133 µmol/L
（肌酐清除率） 80～120 ml/分 （血糖）～ mmol/L （血淀粉酶） 40～160 U （补体）～L （抗链O） 1:400以下 （类风湿因子）（—） （肥达氏反应）（—） （外裴氏反应）（—） （癌胚抗原）＜5mg 血生化 项目结果 ----------参考值---------- 谷丙转氨酶-ALT 0 ～ 40 U 尿素～ 7 mmol/L 血肌酐 40 ～ 130 umol/L 血尿酸 180 ～ 410 umol/L 胆固醇～ mmol/L 甘油三脂～ mmol/L 葡萄糖～ mmol/L 总胆红素 3 ～ 24 umol/L 项目谷丙转氨酶-ALT 临床意义正常时，谷-丙主要存在于组织细胞内，以肝细胞含量最多，心肌细胞中含量其次，只有极少量释放血中。所以血清中此酶活力很低。当、心肌病变、
1.如何区分重组DNA和空载体自连： （一）检测方法 （1）双抗性筛选：具有四环素和氨苄青霉素两种抗生素抗性基因作为选择标记，一种抗性标记用来正选择转化子，另一种通过插入失活而可以鉴定重组子。Ori位于Amp+和tet+这两个基因之间，在四环素平板上出现的菌落一定是获得了质粒的转化子，在此基础上，如果四环素抗性转化子对氨苄青霉素敏感，则说明在载体中有外源片段的插入而使氨苄青霉素抗性失活，即重组子；若对氨苄青霉素有抗性，则此转化子的质粒是空载体。 （2)抗生素插入失活法：如BamHI可以从四环素位点切开，使该基因不能表达，但仍能表达氨苄抗性基因，对四环素是敏感的。筛选重组pBR322 按照以下方法进行，将转化细胞培养于氨苄培养基中，只有转化细胞可以生长形成克隆，影印到四环素培养基上，不能在该培养基上生长的菌落可能就是目的克隆。 （3）限制性内切酶法：外源片段通过特定的酶切位点插入到载体上，因此，可以通过这些限制性酶酶切重组质粒，电泳分析插入片段长度是否正确。（抗生素+酶切检测+测序） （4）蓝白斑筛选：多克隆位点存在于编码β-半乳糖苷酶的N端的DNA序列中，与pUC载体一起使用的宿主菌携带编码β-半乳糖苷酶的C端序列的基因片段。通过α互补机制，两个片段在体内相互弥补，产生一个有活性的β-半乳糖苷酶。以X-gal作为指示剂。若通过插入外源DNA到多克隆位点中而打断了β-半乳糖苷酶的部分基因，不能产生有活性的β-半乳糖苷酶，X-gal不会反应，重组子菌落为白色，而自连空载体转化的菌落则是蓝色的。 （5）PCR法：如果已知插入DNA片段的某些序列，就可以通过PCR的方法进行鉴定 （6）菌落原位杂交：把菌落或噬菌斑转移到硝酸纤维素膜上，然后溶菌，变性并固定DNA，最后用标记的DNA或RNA探针进行杂交来检测这些被转移的菌落或噬菌斑。 （7）测序法：若通过前面这些方法鉴定之后还是有疑虑，不知道是否阳性者确为真阳性而不是空载体自连，可以将其送到生物公司进行测序以最终确定之。 （8）基因产物检测法：如果使用的是表达载体，那么就可以通过鉴定基因产物的方法鉴定正确的克隆。 （二）避免方法： （1）. 碱性磷酸酶处理载体在DNA重组实验中，用碱性磷酸酶对载体DNA的5’末端除磷，可以防止载体自连，提高重组率 （2）. 噬菌体包装蛋白包装下限的限制：选用λ噬菌体或者柯氏载体，含有cos位点，包装35~51kb的片段，空载体片段太小，不会被包装 （3）. 利用某些基因(改基因存在时质粒不能在一定的菌株中存在,而此被基因为外源DNA取代时则能存在)等预防措施. 2.如何在大肠杆菌中高效表达外源基因： 涉及三个方面： （1）强化蛋白质的生物合成（重组质粒的拷贝数，转录水平和翻译速率）； （2）抑制蛋白质产物降解； （3)恢复维持蛋白质特异性空间结构。 （一）．强化蛋白质的生物合成 1）启动子：影响表达效率的主要因素之一是启动子的强度。 高水平表达的最佳启动子必须具备的条件： （1）它必须是一种强启动子，能够使克隆基因的蛋白质产物的表达量占细胞总蛋白的10％-30％； （2）这种启动子应该是诱导型的，能通过简单的方式使用廉价的诱导物而得以诱导。 2）终止子：有效的转录终止子的必要性： （1）转录产物越长，所需时间就多，外源基因本身的转录效率下降； （2）转录通读进入质粒功能区，可能干扰质粒的复制和其他生物功能，甚至导致重组质粒的不稳定性； （3）转录终止子能增强mRNA分子的稳定从而大大提高了蛋白质产物的水平； （4）转录产物过长影响翻译效率。 3）核糖体结合位点（RBS）的结构要素：外源基因在大肠杆菌中的高效表达不仅取决于转录启动频率，而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始效率密切相关。大肠杆菌mRNA的翻译起始效率主要由其5‵端的结构序列所决定，即核糖体结合位点（RBS），它包括4个结构要素： （1）起始密码子上游的6-8个核苷酸序列UAAGGAGG,即Shine-Dalgarno (SD)序列； （2）起始密码子AUG； （3）SD与起始密码子之间的距离及碱基组成；
碱性磷酸酶米氏常数的测定 [目的与要求] 通过碱性磷酸酶米氏常数的测定，了解其测定方法及意义。学会运用标准曲线测定酶的活性，加深对酶促反应动力学的理解。 [原理] 在环境的温度、pH和酶的浓度一定时。酶促反应速度与底物浓度之间的关系表现在反应开始时。酶促反应的速度(V)随底物浓度(S)的增加而迅速增加。若继续增加底物浓度，反应速度的增加率将减少。当底物浓度增加到某种程度时，反应速度会达到一个极限值，即最大反应速度(V max)，如图37所示。 底物浓度与酶促反应速度的这种关系可用Michaelis-Menten方程式表示。 V = V max[S]/(K m+[S]) 上式中V max为最大反应速度，[S]为底物浓度，K m为米氏常数(Michaelis constant)，而其中V则表示反应的起始速度。当V= V max/2时，K m =[S]。所以米氏常数是反应速度等于最大反应速度一半时底物的浓度。因此K m的单位以摩尔浓度(mol／L)表示。 K m是酶的最重要的特征性常数，测定K m值是研究酶动力学的一种重要方法，大多数酶的K m值在0.01-100(mmol/L)间。 酶促反应的最大速度V max实际上不易准确测定，K m值也就不易准确测出。林-贝(1ineweaver - Burk)根据Michaelis-Menten方程，推导出如下方程式，即： 1/V = （K m +[S]）/ V max[S]或1/V = K m/ V max·（1/[S]）+1/ V max 此式为直线方程，以不同的底物浓度1/[S]为横坐标，以1/V为纵坐标，并将各点连成 一直线，向纵轴方向延长，此线与横轴相交的负截距为-1/ K m，由此可以正确求得该酶的K m 值，如图38所示。 图37 底物浓度对反应速度的影响图38 Lineweaver-Burk作图法 本实验以碱性磷酸酶为例，测定不同底物浓度的酶活性，再根据Lineweaver-Burk法作图，计算其K m值。 可以作为碱性磷酸酶底物的物质很多，底物反应的酶对于不同的底物有不同的K m值。本实验以磷酸苯二钠为底物，由碱性磷酸酶催化水解，生成游离酚和磷酸盐。酚在碱性条件下与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化，生成红色的醌衍生物，颜色深浅和酚的含量成正比。根据吸光度的大小可以计算出酶的活性，也可以从标准曲线上查知酚的含量，进而算出酶活性的大小。反应式如下：
碱性磷酸酶偏高的原因 当受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、、继发性肝癌、性等时，过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。 有何影响 碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、、、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、、、时，血清碱性磷酸酶亦可升高，所以对人体的危害是比较大的。 酸性磷酸酶（acid phosphatase，ACP）主要存在于，定位于溶酶体内。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。ACP测定主要用于前列腺癌的辅助诊断。
(1)前列腺癌：尤其是转移癌ACP明显升高。PAP对的诊断较ACP敏感，二者对晚期前列腺的诊断、疗效观察及预后监测价值更大。 (2)血液病：白血病、、匹克病、、溶血性贫血等ACP活性亦增高。 (3)非恶性前列腺疾病：前列腺炎、前列腺肥大、前列腺梗死等ACP活性也增高。 (4)骨疾病：变形性骨炎、成骨不全、软骨病、骨肉瘤、及某些非前列腺恶性肿瘤的骨转移，ACP活性也可升高。[1] (5)其他：，急、慢性肾炎、尿潴留等ACP活性可增高。 是一种糖酵解酶。存在于机体所有组织细胞的胞质内，其中以肾脏含量较高。是能催化乳酸脱氢生成的酶，几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性，所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2，〉LDH1。如有释放入血则LDH1〉LDH2，利用此指标可以观察诊断心肌疾病。乳酸脱氢酶大于300，属于增高，600，高出1倍，有参考价值。如果排除急性心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后，首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断，但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义，最好做进一步检查，防患于未然。 糖的吸收途径： 小肠绒毛吸收小肠内葡萄糖的方式为二级。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛内的钠离子浓度，因而两者之间存在钠离子浓度差的，通过该钠离子的浓度差，葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛；
血液生化检查各指标及对应正常值列表 ALT （谷丙转氨酶）0～4O IU/L CO2Cp （二氧化碳结合力）2O～30 mmol/L AST （谷草转氨酶）0～45 IU/L CO （一氧化碳定性）（-） TP （总蛋白）60～80 g/L HBDH （a羟丁酸脱氨酶）90～22O IU/L ALB （白蛋白）35～55 g/L CPK （磷酸肌酶激酶）25～170 mmol/L ALP （碱性磷酸酶）40～160 IU/L LDW （乳酸脱氢酶）40～100 mmol/L GGT （丫.谷氨酪转肽酶）0～50 IU/L CPK-MB （激肌酸激酶同功酶）0～16 TBIL （总胆红素）1.7～17.1μmol/L A/G （血清白/球蛋白）3.5～5.5/2-3g DBIt （直接胆红素）0～6.0 μmol/L HDL （高密度脂蛋白〕1.14～1.91 mmol/L Crea （肌酐）44～133 µmol/L VLDL （低密度低蛋白）0.11～0.34 mmol/L Ua （尿酸）90～360 µmol/L LDL （极低密度脂蛋白）1～3 mmol/L UREA （尿素氮）1.8～7.1 mmol/L CRP （C反应蛋白）（-） GLU （血糖）3.61～6.11 mmol/L IgA （免疫球蛋白）0.9～4.5 mg/ml TG （甘油三脂）0.56～1.7 mmol/L IgG （免疫球蛋白）9～23 mg/ml GHO （胆固醇）2.84～5.68 mmol/L IgM （免疫球蛋白）0.8～2.2 ml Mg （血清镁）0.8～1.2 mmol/L SF （铁蛋白）20～200 ng/ml K （血清钾）3.5～5.5 mmol/L α（蛋白电脉）3～4.9 % Na （血清钠）135～145 mmol/L β（蛋白电脉）3.1～9.6 % Cl（血清氯）96～108 mmol/L γ（蛋白电脉）6.6～13.7 % Ca （血清钙）2.2~2.7 mmol/L δ（蛋白电脉）9.5～20.3 % P （血清磷）0.97～1.61 mmol/L Fdg （纤维蛋白原）2～4g/L
常见化验指标的正常值及临床意义 为了方便朋友们查询医院常见化验指标的正常值，特此整理如下：（如有与下列正常值有差异者，请以所在医院的正常值为准） 谷丙转氨酶(ALT) 正常值 3.00-40.00 u/l 临床意义： (1)ALT活性在下列疾病可见升高 a.肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等 b.心血管疾病:心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等 c.骨骼肌疾病:多发性肌炎、肌营养不良等 (2)一些药物和毒物可引起ALT活性升高,如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等 谷草转氨酶(AST) 正常值3.00-40.00 u/l 临床意义： (1)AST在心肌细胞内含量较多,当心肌梗死时,血清中AST活性增高,在发病后6-12小时之显著增高,在48小时达到高峰,约在3-5天恢复正常 (2)疟疾、流行性出血热、传染性单核细胞增多症、多发性肌炎、肌营养不良、急性胰腺炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST活性轻度增高 (3)肝炎时,AST和ALT均可明显增高,可高与正常值上限10-30倍,这在其它疾病时少见.在黄疸期间,AST和ALT即可见增高,有助于早期诊断,由于肝中AST含量增高,往往AST>ALT,但由于ALT清除率较慢,所以不久以后即ALT>AST.恢复期一般ALT恢复较慢,持续ALT、AST 增高,往往说明有慢性肝炎.AST/ALT比值如<1,则有可能是慢性迁延性肝炎.如酶活性增高,且AST/ALT比值>1,则很有可能是慢活肝.。 r_谷氨酰转移酶(r_GT) 正常值 11.00-61.00 u/l 临床意义: 人体各器官中r_GT的含量按下列顺序排列:肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑.肾脏中含量较高,但肾脏疾病时,血液中的该酶活性增高不明显.肾单位病变时,r_GT经尿排出,检验尿中酶活性可能有助于诊断肾脏疾病,r_GT主要诊断肝胆疾病.显著增高常见于:原发行肝癌、胰腺癌、阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、胰头癌、肝外胆管癌等.轻度或中度增高见于:传染性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、急慢性胰腺炎、胆石症等 碱性磷酸酶(ALP) 正常值 53.00-140.00 u/l 临床意义： (1)碱性磷酸酶活性增高可见于下列疾病: a.生理性增高:妊娠期、儿童生长发育期、射入性血糖增多及紫外线照射后 b.肝胆疾病:阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌、肝脓肿
碱性磷酸酶测定 一、试剂配制 1、甲苯 2、pH9.8氯化铵-氢氧化铵缓冲液：称取20g纯氯化铵，溶于 少量水（我配200ml，用一百多毫升水溶40g氯化铵）， 然后加入浓氨水润洗烧杯和定容至100ml，用pH试纸测 pH，pH为10即可，不用刻意调pH。（氨水很臭，需要带 口罩在通风橱配） 3、8%铁氰化钾溶液（只能用一周，放冰箱保存）：取8g铁氰 化钾，用水定容至100ml。 4、2%4-氨基安替比林（只能用一周，放冰箱保存）：取2g4- 氨基安替比林，用水定容至100ml。 5、0.5%磷酸苯二钠溶液（用pH9.4硼酸缓冲液配） （1）先配制pH9.4硼酸盐缓冲液：称取4.768g硼砂（十 水合四硼酸钠）和0.44g纯氢氧化钠，用蒸馏水定容至 1000ml。（硼砂需要用电炉加热配制，硼砂用称量纸称量， 氢氧化钠需要用烧杯称量,基本不用配pH，pH试纸测为9） （2）称取5.05g磷酸苯二钠，用pH9.4硼酸缓冲液定容 至1000ml。 6、酚标准溶液： 酚溶液：称取1g苯酚用水溶至1L，保存于暗色瓶中。（苯酚还是需要水浴加热，详细配法看脲酶测定，但由于1g很难准确称量，
并在我配完发现天平托盘上结了一层苯酚，但测量后不影响标线的准确程度，R值为三个9） 酚工作液：取10ml原液用水稀释至1L(1ml中含0.01mg/mL) 二、测定过程 1、称取5g过1mm筛的土样于绿色塑料瓶（每个样需要3个 重复，前两个重复和第三个重复分开放，第三个重复为 无基质重复，每天做两个无土样重复，此重复加甲苯、 磷酸苯二钠溶液），加5滴甲苯（用滴管加5滴），盖盖 盖子后用震荡机低速震荡15min（我选择160的速度）， 然后给第三个重复加入20ml蒸馏水，给前两个重复加入 20ml磷酸苯二钠，盖上盖子后充分摇匀后在37摄氏度恒 温箱培养2小时。 2、培养结束后过滤，过滤后取5ml滤液加入50ml容量瓶（用 5ml枪加，由于过滤液体没那么多，每加一个样用两遍蒸 馏水润洗枪），加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢 氧化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾 溶液（用1ml枪加），每加一种都要充分摇匀。立即显色， 立即定容。 3、标准液是吸取1,3,5,7,9,11,13ml氮的工作液，移至50ml容 量瓶，加水加水至大概20ml，再加0.25ml氯化铵-氢氧 化铵缓冲液，0.5ml4-氨基安替比林液，0.5ml铁氰化钾溶 液。（和第二条同步）
医院常见化验指标的正常值及临床意义 一、谷丙转氨酶(ALT) 临床意义： (1)ALT活性在下列疾病可见升高 a.肝胆疾病:传染性肝炎、肝癌、肝硬化活动期、中毒性肝炎、脂肪肝、胆管炎和胆囊炎等 b.心血管疾病:心肌梗死、心肌炎、心力衰竭时的肝脏淤血、脑出血等 c.骨骼肌疾病:多发性肌炎、肌营养不良等 (2)一些药物和毒物可引起ALT活性升高,如氯丙嗪、异烟肼、奎宁、水杨酸制剂及酒精、铅、汞、四氯化碳或有机磷等 二、谷草转氨酶(AST) 临床意义： (1)AST在心肌细胞内含量较多,当心肌梗死时,血清中AST活性增高,在发病后6-12小时之显著增高,在48小时达到高峰,约在3-5天恢复正常 (2)疟疾、流行性出血热、传染性单核细胞增多症、多发性肌炎、肌营养不良、急性胰腺炎、胸膜炎、肾炎及肺炎等也可引起血清AST 活性轻度增高
(3)肝炎时,AST和ALT均可明显增高,可高与正常值上限10-30倍,这在其它疾病时少见.在黄疸期间,AST和ALT即可见增高,有助于早期诊断,由于肝中AST含量增高,往往AST>ALT,但由于ALT清除率较慢,所以不久以后即ALT>AST.恢复期一般ALT恢复较慢,持续ALT、AST增高,往往说明有慢性肝炎.AST/ALT比值如<1,则有可能是慢性迁延性肝炎.如酶活性增高,且AST/ALT比值>1,则很有可能是慢活肝.。 三、r_谷氨酰转移酶(r_GT) 临床意义: 人体各器官中r_GT的含量按下列顺序排列:肾、前列腺、胰、肝、盲肠和脑.肾脏中含量较高,但肾脏疾病时,血液中的该酶活性增高不明显.肾单位病变时,r_GT经尿排出,检验尿中酶活性可能有助于诊断肾脏疾病,r_GT主要诊断肝胆疾病.显著增高常见于:原发行肝癌、胰腺癌、阻塞性黄疸、胆汁性肝硬化、胰头癌、肝外胆管癌等.轻度或中度增高见于:传染性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、急慢性胰腺炎、胆石症等 四、碱性磷酸酶(ALP) 临床意义： (1)碱性磷酸酶活性增高可见于下列疾病: a.生理性增高:妊娠期、儿童生长发育期、射入性血糖增多及紫外线照射后
碱性磷酸酶(ALP或AKP) 正常范围（连续监测法） 女性，1-12岁小于500U/L；大于15岁，40-150U/L； 男性，1-12岁小于500U/L；12-15岁，小于750U/L；大于15岁，40-150U/L。 中性粒细胞碱性磷酸酶染色 碱性磷酸酶是广泛分布于人体各脏器器官中，其中以肝脏为最多其次为肾脏，骨骼、肠、和胎盘等组织。这种酶能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P 末端转换成5’-OH末端。但它不是单一的酶，而是一组同功酶。目前已发现有AKP1 、AKP2 、AKP3 、AKP4 、AKP5 与AKP6 六种同功酶。其中第1 、2 、6 种均来自肝脏，第3 种来自骨细胞，第 4 种产生于胎盘及癌细胞，而第 5 种则来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨软骨细胞，少量来自肝。 化学特征 碱性磷酸酶名字 alkaline phosphatase (ALP 或AKP) 碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱磷酸化。磷酸酶的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶，可以利用能量分子，如A TP，将磷酸基团加到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有最大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其最适pH是8.0，而对来源于牛的ALP则是8.5。 ALP是一种含锌的糖蛋白，在碱性环境中（最适Ph为10左右）可以水解各种天然及人工合成的磷酸单酯化合物底物。 碱性磷酸酶偏高的原因 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等。 有何影响 碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查。它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折愈合期、骨软化症。佝偻病、骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进
收稿日期：2016-04-30 修订日期: xxxx 基金项目：国家自然科学基金委项目（21373101）、吉林省教育厅“十三五”科研项目（2016137）、吉林化工学院博士启动基金（2016002）资助。作者简介：任重远，原吉林大学博士生；现工作于吉林化工学院讲师 *通讯联系人E-mail: yqwu@https://www.doczj.com/doc/3f14095537.html, 组织非特异性碱性磷酸酶活力的原位红外光谱检测 任重远1, 3，Saida Mebarek 2，René Buchet 2，吴玉清3* 1 吉林化工学院生物与食品工程学院，吉林，132022 2 Laboratory ODMB UMR 5246, UniversitéLyon I, Villeurbanne France 69622 3 吉林大学超分子结构与材料国家重点实验室，长春，130012 摘要 本文以孵育17天的小鸡胚胎中，富含组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)的细胞外微结构——基质囊泡(MVs)作为研究模型，利用焦磷酸盐(PP i )作为TNAP 酶的天然底物，在近生理条件下，以红外(IR)光谱为监测工具，原位检测MVs 水解PP i 的反应过程，根据红外谱图特征吸收峰的变化，计算TNAP 酶活力值。 关键词：基质囊泡；生物底物；IR 光谱；原位检测；酶活力 中图分类号：O657.3 文献标识码：A 文章编号： 组织非特异性碱性磷酸酶(TNAP)是人体骨骼矿化形成的生物标志物，其酶活力的高低能够直接反映矿化形成能力的强弱。目前，测试TNAP 酶活力的主要方法是利用其外源性荧光底物——4-硝基苯磷酸(p -NPP)、在碱性条件下(pH=10.4)监测405 nm 处荧光强度来检测TNAP 的酶活力值。但是，这种测试条件与人体生理环境下的pH 值相距甚远。因此，开发一种在生理条件下、以生理化合物作为检测底物的快速、经济的检测碱性磷酸酶活性的方法，将作为热点研究。在骨骼中，具有矿化能力的成骨细胞、成牙细胞以及肥大的软骨细胞等，能够将含有高TNAP 活性表达的基质囊泡（MVs ）释放至细胞外环境中，并从而引发矿化形成[1]；MVs 是细胞外微观结构，能够为无机磷酸离子及钙离子提供沉积位点，是矿化产物羟磷灰石（HA ）晶体形成的场所，因此MVs 也可视为新骨骼产生矿化的基本单位[2]。本文选择孵育17天的小鸡胚胎中所提取并纯化的细胞外微结构——基质囊泡(MVs)，并将其作为研究模型，红外光谱技术为检测工具，利用焦磷酸盐(PP i )作为TNAP 酶的天然底物，在近生理条件下，监测MVs 水解PP i 的反应过程。同时，根据红外谱图特征吸收峰的变化，计算TNAP 酶活力值。 PP i 作为TNAP 酶的底物，水解过程中产生2个无机磷酸盐(P i )分子，因此，我们首先对反应过程中的反应物(PP i )及产物(P i )进行红外表征。实验结果显示，在红外指纹区(1300-900 cm -1)，相同浓度(50 mM)的PP i 与无 P i 的红外光谱谱图存在明显的差异，而且它们相互之间不发生重叠。PP i 在1107 cm -1位置存在一个明显特征峰，而P i 在1076及990 cm -1分别存在两处明显的吸收峰，这是由于磷酸盐分子中HPO 42-反对称伸缩振动与对称伸缩振动所引起的[3]。 在37 °C ，pH 8.0反应条件下，利用红外光谱技术对MVs 水解PP i 过程实时监测，每隔5min 红外扫描一次，并持续60分钟。红外光谱检测结果显示，4000-1300 cm -1的光谱范围在整个水解过程中并未明显特征峰的变化。然而，在1300-900 cm -1的红外区域内却发生了明显的特征峰的变化(Fig.1)。 Fig. 1 Difference IR spectra of MVs with PP i (spectrum recorded at the indicated time minus that recorded immediately). Significant variation in the intensity of
碱性磷酸酶偏高的原因 当肝脏受到损伤或者障碍时经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。[1] 碱性磷酸酶偏高的原因可以分为生理性原因和病理性原因，具体讨论如下： 1、生理性原因儿童骨骼发育期、孕妇、骨折愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很活跃，所以检测时值会偏高。 2、病理性原因当人体患有阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时，肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起血清中的碱性磷酸酶偏高。 3、骨骼有病时，例如佝偻病、骨上肿瘤、软骨病等。 4、其他不是很常见的疾病，例如肾病、严重性贫血、甲状腺机能不全、白血病等[2]。 有何影响 心肌梗死、巨幼细胞性贫血及溶血性疾病后，首先要考虑恶性肿瘤。虽不是恶性肿瘤唯一的诊断，但确实对肿瘤诊断有重要的临床意义，最好做进一步检查，防患于未然。 糖的吸收途径：
小肠绒毛上皮细胞吸收小肠内葡萄糖的方式为二级主动运输。小肠内钠离子浓度高于小肠绒毛上皮细胞内的钠离子浓度，因而两者之间存在钠离子浓度差的梯度，通过该钠离子的浓度梯度差，葡萄糖和钠离子可以从小肠内通过离子通道进入小肠绒毛上皮细胞；随着钠离子的不断流入，造成钠离子浓度梯度逐渐减小，为了维持钠离子内外的浓度梯度差以便于吸收葡萄糖，此时，小肠绒毛上皮细胞内钠离子--钾离子泵打开，消耗ATP，使小肠绒毛上皮细胞内的钠离子流回小肠中，再次形成运输葡糖糖所需要的钠离子浓度梯度。依次循环。 食物中的淀粉经唾液中的α淀粉酶作用，催化淀粉中α-1，4-糖苷键的水解，产物是葡萄糖、麦芽糖、麦芽寡糖及糊精。由于食物在口腔中停留时间短，淀粉的主要消化部位在小肠。小肠中含有胰腺分泌的α淀粉酶，催化淀粉水解成麦芽糖、麦芽三糖、α糊精和少量葡萄糖。在小肠黏膜刷状缘上，含有α糊精酶，此酶催化α极限糊精的α-1，4-糖苷键及α-1，6-糖苷键水解，使α-糊精水解成葡萄糖；刷状缘上还有麦芽糖酶可将麦芽三糖及麦芽糖水解为葡萄糖。小肠黏膜还有蔗糖酶和乳糖酶，前者将蔗糖分解成葡萄糖和果糖，后者将乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。 糖被消化成单糖后的主要吸收部位是小肠上段，己糖尤其是葡萄糖被小肠上皮细胞摄取是一个依赖Na+的耗能的主动摄取过程，有特定的载体参与：在小肠上皮细胞刷状缘上，存在着与细胞膜结合的Na+-葡萄糖联合转运体，当Na+经转运体顺浓度梯度进入小肠上皮细胞时，葡萄糖随Na+一起被移入细胞内，这时对葡萄糖而言是逆浓度梯度转运。这个过程的能量是由Na+的浓度梯度（化学势能）提供的，它足以将葡萄糖从低浓度转运到高浓度。当小肠上皮细胞内的葡萄糖浓度增高到一定程度，葡萄糖经小肠上皮细胞基底面单向葡萄糖转运体（unidirectional glucose transporter）顺浓度梯度被动扩散到血液中。小肠上皮细胞内增多的Na+通过钠钾泵(Na+-K+ ATP酶)，利用ATP提供的能量，从基底面被泵出小肠上皮细胞外,进入血液，从而降低小肠上皮细胞内Na+浓度，维持刷状缘两侧Na+的浓度梯度,使葡萄糖能不断地被转运。
碱性磷酸酶偏低是怎么回事 碱性磷酸酶偏高有正常的生理原因和不正常的病理原因，而碱性磷酸酶偏低一般为病理性原因。如果检测到自身碱性磷酸酶偏低，一般如果数值接近正常参考值没多大问题，但数值大大低于碱性磷酸酶正常值的时候就应该引起注意，及时到医院就诊。那碱性磷酸酶偏低到底是怎么回事？ 碱性磷酸酶偏低的原因 1、贫血引起的碱性磷酸酶偏低。 2、有可能是孕妇缺乏营养引起的，也有可能是由于疾病所致，常见的骨质流失是造成孕妇碱性磷酸酶偏低的最重要的病理性因素。 3、重症慢性肾炎引起的碱性磷酸酶偏低。 4、病毒性感染时其活性在正常范围或略低引起的碱性磷酸酶偏低。 5、营养不良、呆小症，维生素C缺乏症坏血病、乳糜泻、恶病质，遗传性低磷酸酶血症引起的碱性磷酸酶偏低。 6、除了以上几种情况之外，如果孕妇患有维生素c缺乏症、坏血病、乳糜泻和恶病质的时候，会影响碱性磷酸酶指数。 准妈妈碱性磷酸酶偏低怎么办 1、如果是因为营养不良和贫血造成的，则应该调整孕妇的饮食结构，多吃动物的肝脏，促进身体对铁质的吸收，多吃新鲜的蔬菜，通过补充叶酸，促进红血球的生成，达到辅助造血的功能。为了避免孕妇碱性磷酸酶由于缺乏营养造成偏低。孕妇要适量的多食用一些高钙食物比如说像豆类食品、奶类食品、一些水果和瘦肉。除此之外，还应该多吃含有丰富蛋白质的食物，比如牛奶、鱼虾、豆制品等等。妊娠期是一个特殊时期，一定要多加强营养，补充微量元素，可以让体内的胎儿更好的成长。 2、如果是因为肝功能导致碱性磷酸酶偏低，您应该在医生的指导下做出相应的药物服用，以安全地度过妊娠期，肝病不是一朝一夕就能治疗好的，孕期服药更是容易对宝贝的发育产生影响，建议您一定要谨遵医嘱，不要冲动行事。 3、保持好的心态是治疗的关键，碱性磷酸酶指数偏低是很多孕妇都有的现象，您不必过于担心和过度服药。焦虑和烦闷不仅不能治疗碱性磷酸酶偏低，还会让自己的身体机能下降，影响宝贝的发育。所以，在积极乐观的情绪下正常饮食、规律作息。
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骨代谢生化指标在乳腺癌骨转移中的意义 作者：李淑兰， 李靖若， LI Shu-lan， LI Jing-ruo 作者单位：450052,郑州大学第一附属医院乳腺外科 刊名： 中国实用医刊 英文刊名：Chinese Journal of Practical Medicine 年，卷(期)：2013,40(12) 参考文献(20条) 1.Mundy GR Metastasis to bone:causes,consequences and therapeutic opportunities 2002(08) 2.Chen C An approach to the relevance between variations in hormone secretion and the incidence of hyperplasia of mammary glands and mammary cancer 2004 3.Berruti A;Dogliotti L;Gorzegno G Differential patterns of bone turnover in relation to bone pain and disease extent in bone in cancer patients with skeletal metastases 1999(8pt1) 4.Pratap J;Javed A;Languino LR The Runx2 osteogenic transcription factor regulates matrix metalloproteinase 9 in bone metastatic cancer cells and controls cell invasion[外文期刊] 2005(19) 5.Halleen JM;Alatalo SL;Janckila AJ Tartrate-resistant acid phosphatase 5 b is a specific and sensitive marker of bone resorption[外文期刊] 2003(2A) 6.Halleen JM;Alatalo SL;Suominen H Tartrate-resistant acid phosphatase 5b:a novel serum marker of bone resorption 2000(07) 7.Takahashi S Evaluation of cancer-induced bone diseases by bone metabolic marker 2006(04) 8.章火祥;谢鑫友;于小妹血清工型胶原吡啶交联终肽、骨钙素在肿瘤骨转移中的应用[期刊论文]-国际检验医学杂志 2008(11) 9.Maemura M;Iino Y;Yokoe T Serum concentration of pyridinoline cross-linked carboxyterminal telopeptide of type Ⅰcollagen in patients with metastatic breast cancer 2000(06) 10.Izumi M;Nakanishi Y;Takayama K Diagnostic value of boneturnover metabolites in the diagnosis of bone metastases in patients with lung carcinoma 2001(08) 11.Pectasides D;Farmakis D;Nikolaou M Diagnostic value of bone remodeling markers in the diagnosis of bone metastases in patients with breast cancer[外文期刊] 2005(01) 12.Bricon TL;Cay-Bellile C;Cottu P Lectin affinity electrophoresis of serum alkaline phosphatase in metastasized breast cancer 2010(01) 13.Jukkola A;Bloigu R;Holli K Postoperative PINP in serum reflects metastatic potential and poor survival in node-positive breast cancer[外文期刊] 2001(4B) 14.王抒;张军宁;乔田奎血清Ⅰ型前胶原氨基端前肽、Ⅰ型前胶原羧基端前肽、Ⅰ型胶原羧基端肽在骨转移性癌诊断中的应用[期刊论文]-中国临床医学 2011(18) 15.Tu Q;Zhang J;Fix A Targeted overexpression of BSP in osteoclasts promotes bone metastasis of breast cancer cells [外文期刊] 2009(01) 16.Zhang JH;Tang J;Wang J Over-expression of bone sialoprotein enhances bone metastasis of human breast cancer cells in a mouse model[外文期刊] 2003(04) 17.Gordon JA;Sodek J;Hunter GK Bone sialoprotein stimulates focal adhesion-related signaling pathways:role in migration and survival of breast and prostate cancer cells[外文期刊] 2009(06) 18.Bellahcène A;Bonjean K;Fohr B Bone sialoprotein mediates human endothelial cell attachment and migration and promotes angiogenesis[外文期刊] 2000(08) 19.Tang Y;Nakada MT;Kesavan P Extracelluar mtrix metalloproteinase inducer stimulates tumor angiogenesis by elevating vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinases[外文期刊] 2005(08) 20.Wright LM;Maloney W;Yu X Stromal cell-derived factor-1binding to its chemokine receptor CXCR4 on precursor cells promotes the chemotactic recruitment,development and survival of human osteoclasts[外文期刊] 2005(05)