HUVEC 人脐静脉血管内皮细胞General Information:
Culture Method:
具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，
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注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象
发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需
细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由客户自行承担。
3. 用75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量
从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养过夜，隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常，请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活力，请拍下照片及
4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留6~8mL 维持细胞正常培养，待细胞
汇合度90%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传
代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部
沟通交流
告知细胞的
本课题为安徽省自然科学基金安科医药专项资助项目(01043708)作者单位:230001 合肥 安徽省立医院普外科 安徽医科大学2001级硕士研究生(傅斌生) 人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定 余继海 许戈良 汪 建 荚卫东 傅斌生 [摘 要] 目的 探讨新生儿脐静脉内皮细胞的培养及鉴定方法,建立血管内皮细胞培养模型,为体外研究血管内皮细胞提供实验手段。方法 采用胶原酶 灌流消化法培养人脐静脉内皮细胞,当原代培养细胞80%以上汇合后,用胰蛋白酶消化传代;根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术(F M 术)免疫荧光检查对细胞进行鉴定。结果 种植在培养瓶中的内皮细胞12小时贴壁生长,48~72小时生长最快,7~10天汇合。内皮细胞呈接触抑制生长、呈鹅卵石样外观,FM 术检测CD31和V -R-Ag 均为阳性表达。结论 消化酶灌注脐静脉消化内皮细胞是获取血管内皮细胞的一种好方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型。 [关键词] 内皮细胞;培养 C ulture and identif ication of human endothelial cells derived f rom umbilical veins Y u Jihai ,Xu Geliang,W ang J ian,et al A nhui Prouincial H osp ital,H ef ei 230001 [Abstract] Objective T o extablish the methods of culturing human endothelial cells (EC)and identifing the cells ac cording to t he antigens expressed and their morpholog ical aspect.Methods A fter digestion w ith t ype collagenase at 37!for 10minutes,the cells were centrifuged,and the cell pellet was resuspended in DEM E medium containing fetal bovine serum (10%vol/vol),seeded on gelatin(0.1%w t/vol)procoated dishes at aconcentr at ion of 10,000per square centimeter.T he medium was changed 1days later when the cells w er e attached and every 2days,until the cells reached confluence.Phase con trast microscopy and flow cy tometry with specific antisera against von willebrand factor and CD31were used to obser ve and i dentify the culturedcells.Results At confuluence (7~9days),the cultured cells had a cobbestone appear ance wit h a strict monolayer grow th and contact inhibition.T he mean fluorescence intensity of the cells was similar w ith both antibodies for the cultured cells vs controls.C onclusion T he cultured cells are endothelial cells,and the method of identification is practical and convenient. [Key words] Endot helial cells;Culture 我们采用胶原酶 灌流消化法成功培养人脐静脉内皮细胞,根据细胞生长特点、形态特征、细胞表型和分泌蛋白流式细胞术免疫荧光检查对细胞进行鉴定,从而构建体外研究血管内皮细胞的模型,现报告如下。 材料与方法 一、材料与培养用液的配制 CK 型倒置显微镜(日本Olympus Tokyo 公司),流式细胞仪(Coulter 公司),BB 5060型CO 2培养箱(美国Heraeus),Cryfuge500S 型低温离心机,胎牛血清(FBS,100ml/瓶,H yclone 公司),人血管内皮生长因子(VEGF,10 g/支,Pepro Tech 公司),CD31PE 购自Becton Dickison 公司(编号:340297)。 培养用液:(1)PBS 液:Nacl 8.5g 、Kcl 0.2g 、NaH 2PO 4H 2O 2g 、KH 2PO 40.2g 溶于1000三蒸水中,120!灭菌20m in,分装备用。(2)胶原酶(Gibco 公司,10mg/支)和胰蛋白酶(上海华美公司)分别溶于100ml PBS 中,浓度分别为0.1%和0.25%,抽滤消毒备用。(3)DMEM 培养基(购自BRL-Gibco 生命技术公司):按照说明书操作,将一袋干粉溶于1000ml 三蒸水中,抽滤消毒,加入胎牛血清终浓度为10%,4!贮存备用。 二、方法 1.内皮细胞原代培养:无菌获取新生儿脐带,立即用生理盐水冲洗血迹,剪去钳痕和血肿部位,再用PBS 液冲净脐静脉内血迹。将脐带一端用丝线结扎固定,用注射器向脐静脉另一端内注满0.1%胶原酶液,止血钳钳夹后放入水浴锅内孵育15min 。取出脐带松开血管钳释放酶细胞混合液于离心管中,再用PBS 液冲洗脐静脉后一并收集于离心管中,1000rpm ?8min 。弃去上清液,转移至35cm 2 培养瓶(Falcon 公司)中,加入DM EM 培养液(内含10%胎牛血清,青霉
血管内皮细胞体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈"鹅卵石样"镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。 c．注入0.1%胶原酶（1型）溶液，待血管内残留的D-Hanks液流尽后，用注射器封注另一端针头，继续注入胶原酶溶液，致血管充盈，放入37℃无菌的D-Hanks液中，消化15min 后取出。 d．收集血管内酶溶液，并且注入含20%小牛血清的M199培养液（pH 7.2）冲洗血管收集合并于同一容器内，以1000r/min离心7～10min。 e．去上清液，加入20%小牛血清的M199培养液重新悬浮细胞备用。 f．其它大血管如牛主动脉，猪主动脉等，可在无菌下分离，然后用线结扎血管各分支，再依上述步骤分离EC。 2.2.2 酶消化法小血管内皮细胞的分离 2.2.2.1 兔主动脉，大鼠主动脉因血管较小，分支极细，不能采用上述方法消化。 a．将动物主动脉取出后放D-Hanks中，将血管外的脂肪细组织分离干净，用丝线结扎血管一端，然后用探针顶住该端，将整条血管翻转，使内膜翻在外面。将另一端折入腔内0.5cm，并用丝线结扎紧，以防外膜外露及避免酶液进入外膜腔内。 b．用D-Hanks液清洗干净外翻的内膜面，然后血管浸泡在含0.1%胶原酶溶液的小瓶内，盖上瓶盖在37℃水浴中轻轻摇荡消化，使EC离散下来，消化15～20min后，见酶液稍有混
人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养 1.将15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的PBS 溶液中储存。 （注：4℃下最多贮存24 小时，室温下不超过6 小时，否则废弃） 2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS 溶液冲洗3-5 次，将污 血冲洗干净为止。 3.用手术钳夹紧脐带下端，加入15m l的胶原酶（1m g/ml）室温下消化15-20 分钟，并不时上下摇动脐带。 4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50 m l无菌离心管中，用无 菌的PBS 溶液冲洗脐带2-3 次。 5.将收集液离心（2000 转/分）3 分钟。 6.倒去上清，加入10m l M199培养基（加入10U/m l的bF G F），用弯管吹散细 胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。 （注：每个培养瓶中加入3-4ml 无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，最少2 小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。） 7.培养24 小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS 溶液清洗2-3 次，洗掉红细 胞和死细胞，加入10 m l新鲜的M199培养基。 8.以后每2 天换一次培养基（每次换掉2/3 的培养基）。 9.一般培养5-7 天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。 10.倒掉培养基，用无菌的PBS溶液清洗2-3 次，加入2-3m l消化液（0.25%胰酶 +0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下观察，一旦细胞变圆，即加入2-3 倍的——————————————————————————————————————————————
人脐静脉内皮细胞的体外分离培养及鉴定 作者：秦明春，王若光，秦莉花，刘小丽，李春梅，刘惠萍，叶赞 【摘要】目的探讨人脐静脉内皮细胞的原代培养方法，提高体外分离培养血管内皮细胞的成功率。建立血管内皮细胞培养模型，为体外研究血管内皮细胞提供实验基础。方法取2根脐带（至少20 cm）冲净淤血，采用加工穿刺针固定脐静脉灌注消化液, 一根用0.2％胶原酶Ⅱ，另一根用0.1％胶原酶Ⅰ和0.25％胰酶等比混合消化液，比较两种酶的消化效果。收集细胞并用含有10 ng/mL的VEGF的培养基中培养，观察细胞的生长及传代。并在倒置显微镜下观察细胞的形态学特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。用流式细胞术观察细胞周期。结果两种消化酶方法均获得了相当数量的人脐静脉内皮细胞，胶原酶Ⅱ的消化效果稍优于混合消化酶，且比较理想的消化时间均为13 min，细胞接种后4～5 h开始贴壁生长，1周左右可生长成单层，光镜下呈多角形，“铺路石”样排列，免疫组织化学法可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应。细胞周期显示约有50.6%的细胞处于G0/G1期。结论胶原酶Ⅱ和胶原酶Ⅰ与胰酶等比混合消化液灌注法是获得脐静脉内皮细胞的一种可取方法，而胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，成功率高，可靠性大，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。 【关键词】人脐静脉内皮细胞；细胞培养；流式细胞术；细胞周期；分离；鉴定 Cultivation and in vitro identification of endothelial cells from human umbilical vein 〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕Ｏｂｊｅｃｔｉｖ ｅTo explore the primary culture method of human vascular endothelial cells(ECs) from umbilical vein, enhance the succes s rate of separating and culturing ECs in vitro, establish the model of human vascular ECs, and provide an experimental method for research of ECs. Methods The umbilical veins in human umbilical cords, 20 cm long, were fixed and filled the digestive fluids, 0.2% collagenenaseⅡin one cord and t he complex enzyme of 0.25% trypsin and 0.1% collagenaseⅠin an other, and the digestive results were compared. All the cells were collected and cultured in fluid with 10 mg/mL VE GF, their procreation and generation were observed, the morph ologic characteristics of ECs were observed with light micros copy and immunohistochemistry under inverted microscope, and t he cell cycle was observed by flow cytometer. Results Enough
匡堂绽述；Ｑ堕生！旦筮！！鲞箜！！翅丛型垫尘曼塑塑ｉ坐丛！：墅Ｐ！Ｑ塑：！生：！！：盟！：！！ ［１１］［１２］［１３］［１４］［１５］ＶａｎＩｔａｌｉｉｅＣＭ，ＡｎｄｅｒｓｏｎＪＭ．Ｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｇｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｏｆｔｉｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎｐｏｒｅｓ［Ｊ］．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（Ｂｅｔｈｅｓｄａ），２００４，１９（６）：３３１－３３８． ＡｎｇｅｌｏｗＳ，ＡｈｌｓｔｒｏｍＲ，ＹｕＡＳ．ＢｉｏｌｏｇｙｏｆｅｌａｕｄｉｎｓＪＩ．ＡｍＪ ＰｈｙｓｉｏｌＲｅｎａｌＰｈｙｓｉｏｌ，２００８，２９５（４）：８６７－８７６． ＡｒｒｉｅｔａＭＣ．ＢｉｓｔｒｉｔｚＬ．ＭｅｄｄｉｎｇｓＪＢ．Ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓｉｎｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｒ－ ｍｅａｂｉｌｉｔｙｌＪ１．Ｇｕｔ，２００６，５５（１０）：１５１２．１５２０． ＶａｌｌＩｔａｌｌｉｅＣＭ．ＡｎｄｅｒｓｏｎＪＭ．Ｃｌａｕｄｉｎｓａｎｄｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｐａｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｒａｉｌｓ．Ⅳ，ｒｔｌＪＩ．ＡｎｎｕＲｅｖＰｈｙｓｉｏｌ，２００６，６８（３）：４０３－４２９． ＢａｌｋｏｖｅｔｚＤＦ．Ｔｉｇｈｔｉｕｎｃｔｉｏｎｃｌａｕｄｉｎｓａｎｄｔｈｅｋｉｄｎｅｙｉｎｓｉｅｋｎｅｓ６ ａｎｄｉｎｈｅａｌｔｈ【Ｊ】．ＢｉⅢ?ｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ，２００８．７（４）：１０１６． ＷｉｌｌＣ。Ｆｎｍ，ｌｍＭ，Ｍｔｉｌｌｅｌ＂Ｄ．Ｃｌａｎｄｉｎｔｉｇｈｔｉｕ／Ｒｍｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓ：ｎｏｖｅｌａ８． ｐｅａｓ ｉｎｐａｒａｅｅｌｈｌａｒｔｒａｎｓｐｏｒｔ［Ｊ］．ＰｅｔｉｔＤｉａｌＩｎｌ，２００８，２８（６）：５７７－５８４． ＮｉｔｔａＴ。ＨａｔｓＭ，ＧｏｔｏｈＳ。ｅｔａ１．Ｓｉｚｅ．ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｌｏｏｓｅｎｉｎｇｏｆｔｈｅ ｂｋｘＭ—ｂｒａｉｎｂａｒｒｉｅｒｉｎｃｌａｕｄｉｎ－５．ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｉｃｅＪｆ．ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ， ２００３．１６ｌ（３）：６５３－６６０． ＨｏｕＪ，ＧｏｍｅｓＡＳ，ＰａｕｌＤＬ。ｅｔａ／．Ｓｔｕｄｙｏｆｃｌａｎｄｉｎｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ眦～ ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ｛Ｊ１．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，２００６，２８ｌ（４７）：３６１１７．３６１２３． ＶａｎＩｔａｌｌｉｅＣＭ，ＨｏｌｍｅｓＪ，ＢｒｉｄｇｅｓＡ．ｅｔ ａ１．ＴｈｅｄｅｎｓｉｔｙｏｆｓｎｌｕＵ ｔｉｇｈｔｉｕｎｃｔｉｏｎｐｏｒｅｓｖａｒｉｅｓａｍｏｎｇｃｅｌｌｔｙｐｅｓａｎｄｉｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙｅｘ． ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｌａｕｄｉｎ－２［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＳｃｉ，２００８。１２１（Ｐｔ３）：２９８－３０５． ＳｉｍｏｎＤＢ，ＬｕＹ，ＣｈｏａｔｅＫＡ，ｅｔａ１．Ｐａｒａｃｅｌｌｉｎ—１．ａｒｅｎａｌｔｉｇｈｔｉｕｎｅ． ｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒｐａｒａｅｅｌｌｕｌａｒＭ９２＋ｒｅｓｏｒｐｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ， １９９９。２８５（５４“）：１０３一１０６． ＳｏｎＳ，ＫｏｊｉｍａＴ，ＤｅｃａｅｎｓＣ，ｅｔａ１．Ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｆｔｉｓｈｔｉｕｎｃｔｉｏｎ ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｌａｕｄｉｎ－２ ｐｒｅｖｅｎｔｓ ｂｉｌｅｃａｎａｌｉｃｕｌａｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｉｎＷＩＦ—Ｂ９ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＨｉｓｔｅｃｈｅｍＣｅｌｌＢｉｏｌ，２００９，１３ｌ（３）：４１１４２４． ＤｅｃａｅｎｓＣ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｚＰ，Ｂｏ血ｈａｕｄＣ．ｅｔａ１．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｈｅ． ｐａｔｉｏｃｅｌｌｐｏｌａｒｉｔｙｉｎｔｈｅｒａｔｈｅｐａｔｏｎｍ—ｈｕｍａｎｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｈｙｂｒｉｄ ＷＩＦ—Ｂ９．Ａｂｉｐｈａｓｉｃｐｈｅｎｏｍｅｎｏｎ ｇｏｉｎｇ ｆｒｏｍａ ｓｉｍｐｌｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｐｏ． １ａｒｉｚｅｄｐｈｅｎｏｔｙｐｅｔｏａｎｈｅｐａｔｉｃｐｏｌａｒｉｚｅｄｏｎｅ［Ｊ］．ＪＣｅｌｌＳＣｉ，１９９６， ［１６］ ［１７］ ［１８］ ［１９］ ［２０］ ［２１］ ［２２］ ［２３］ ［２４］ ［２５］ ?２７５３? １０９（Ｐｔ６）：１６２３－１６３５． ＤｅｃａｅｎｓＣ。ＤｕｒａｎｄＭ。Ｇｌ＇ＯＳｓｅＢ，ｅｔ ａ／．骶ｉｃｈｉｌｔｉｖｉｔｒｏｍｏｄｅＩｓｃｏｕｌｄ ｂｅｂｅｓｔｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｐｏｌａｒｉｔｙ？［Ｊ］．ＢｉｏｌＣｅｌｌ，２００８， １００（７）：３８７－３９８． Ｈａｄｊ．ＲａｂｉａＳ，ＢａｈｉａＬ，Ｖａｂ№Ｐ，ｅｆａ／．Ｃｌａｕｄｉｎ．Ｉｇｅｎｅｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎｎｅｏｎａｔａｌｓｃｌｅｍｓｉｎｇｅｈｏｌａｎｇｉｔｉｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｉｃｈｔｈｙｏｓｉｓ：ａｔｉｇｈｔ ｊｕｎｃｔｉｏｎｄｉｓｅａｓｅ【Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ。２００４，１２７（５）；１３８６一１３９０． ＴａｍｏｒａＡ。ＫｉｔａｎｏＹ．ＨａｔａＭ．ｅｔ ａ１．Ｍｅｇａｉｎｔｅｓｔｉｎｅ ｉｎｃｌａｕｄｉａ—１５一 ｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００８，１３４（２）：５２３－５３４． ＺｈａｏＪ，ｄｅＶｅｒａＪ。ＮａｒａｓｈｉｍａＳ，ｅｔａ１．Ｒ—ｓｐｏｎｄｉｎｌ．ａｎｏｖｅｌｉｎｔｅｓｔ／． ｎｏｔｒｏｐｈｉｅｍｉｔｏｇｅｎ，ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｃｏｌｉｔｉｓｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ。２００７，１３２（４）：１３３１．１３４３． ＪｏＶＯＶＢ，ＶａｎＩｔｌｌｉｅＣＭ，ＳｈａｈｅｅｎＮＪ，一ａ１．Ｃｌａｎｄｉｎ—ｌ８：ａｄｏｍｉｎａｎｔ ｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎＢａｒｒｅｔｔ’ｓｅｓｏｐｈａｇｕｓａｎｄｌｉｋｅｌｙｃｏｎｔｒｉｂｕｔｏｒ ｔｏｉｔｓａｃｉｄｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ［Ｊ］．ＡｍＪＰｈ【ｙｓｉｏｌＧａｓｔｍｉｎｔｅｓｔＬｉｖｅｒＰｈｓｉｏｌ。 ２００７．２９３（６）：１１０６．１１１３． ＦａｓａｎｏＡ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ，ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ，ａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆｚｏｎｕｌｉｎ—ｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｂａｒｒｉｅｒｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ：ｌｉｖｉｎｇｌｉｆｅｏｎｔｈｅ ｅｄｇｅｏｆｔｈｅｗａｌｌ［Ｊ］．ＡｍＪＰａｔｈｏｌ。２００８。１７３（５）：１２４３?１２５２． ＶａｌｌＩｔａｌｌｉｅＣＭ．ＢｔｔｓＬ．ＳｍｅｄｌｅｙＪＧ．村ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｃｌａｕｄｉｎ． ｂｉｎｄｉｎｇｄｏｍａｉｎｏｆＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｆｆｒｉｎｇｅｎｓｅｎｔｅｒｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．ＪＢｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００８，２８３（１）：２６８－２７４． ＴｓｕｋｉｔａＳ．ＦｕｒｕｓｅＭ．Ｃｌａｕｄｉｎ．ｂａｓｅｄｂａｒｒｉｅｒｉｎｓｉｍｐｌｅａｎｄｓｔｒａ！ｉｆｉｅｄ ｃｅｌｌｕｌａｒｓｈｅｅｔｓ【Ｊ］．ＣｕｒｒＯｐｉｎＣｅｌｌＢｉ０１．２００２．１４（５）：５３ｌ－５３６． Ｆｕ兀ｌｓｅＭ，ＨａｔａＭ，ＦｕｍｓｅＫ，ｅｔａ／．Ｃｌａｎｄｉｎ—ｈａｓｅｄｔｉｇｈｔｊｔｉｌｌ（－ｔｉｏｎｓ瓣 ｃｒｏｃｉａｌｆｏｒｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｅｐｉｄｅｒｍａｌｔｍｒｔｉｅｒ：ａＩｅｔＫｓｏｎｆｒｍｎｃｌａｕｄｉｎ．１．ｄｅ－ ｆｉｃｉｅｎｔｎｆｉｃｅＩＪ】．ＪＣｅｌｌＢｉｏｌ，２０１１２，１５６（６）：１０９９一１１１１． ＮｌｅｓｓｅｎＣＭ．Ｔｉｇｈｔｊｕｎｃｔｉｏｎｓ／ａ，ｔｈｅｒｅｎｓｉｕｎｃｔｉｏｎｓ：ｂａｓｉｃｓｌｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄｆｕｎｏｔｉｏｎ【ＪＩ．ＪＩｎｖｅｓｔＤｅｒｍａｔｏｌ，２００７．１２７（１１）：２５２５．２５３２． 收稿Ｕ期：２００９旬３－２３修同日期：２００９－０７－０２血管内皮祖细胞治疗缺血性心脏病的研究进展 陈闽荔’，张金莲△（综述），吕建国（审校） （天津市胸科医院心内科，天津３０００５１） 中圈分类号：Ｒ５４１文献标识码：Ａ文章编号：１００６－２０８４（２００９）１８－２７５３－０４ 摘要：内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞，是一类能够迁移、增殖，并分化为成熟血管内皮细胞 的前体细胞，属于干细胞群体，参与人胚胎血管生成及出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程，还可在一定条件下分化为心肌细胞。近年来的研究表明其与冠心病发生、发展及治疗的关系密切，为冠心病治疗提供了新思路。本文就内皮祖细胞的生物学特性及其在缺血性心脏病中的临床研究现状予以综述。 关键词：内皮祖细胞；缺血性心脏病；治疗；细胞移植 Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ａｂｏｕｔＥｎｄｏｔｈｅｌｌａｌＰｒｏｇｅｎｉｔｏｒＣｅｌｉｓｉｎＴｒｅａｔｉｎｇｌｓｃｈｅｍｉｃＨｅａｒｔＤｉｓｅａｓｅＣＨＥＮＭｉｎ．１ｉ．ＺＨＡＮＧＪｉｎ?ｌｉａｎ，ＬＶＪｉａｎ－ｇｕＤ．（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＣｈｅｓｔＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＴ／ａ彬ｎ，‰ｎｊｉｎ３０００５１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｉｓｔｈｅｐｍｃｅｌｌｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ．ｗｈｉｃｈＣａｌｌｍｉｇｒａｔｅ，ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ ａｎｄｄｉｆｉｅｒｅｎｔｉａｔｅｔｈｅｐｒｏｃｅｌｌｏｆｍａｔｕｒｅｔＩｒｅｓｓｅｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｅｅｌＩｓ．Ｔｈｅｙｂｅｌｏｎｇｔｏｓｔｅｍｃｅｌｌｓ．ｗｈｉｃｈｐａｒｔｉｃｉｐａｔｅｎｏｔｏｎｌｙｔｈｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｖａｓｅｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ。ｂｕｔａｌｓｏｔｈｅｖａｓｃｕｌａｒｎｅｏｇｅｎｅｓｉｓａｆｔｅｒｂｅｍａｎｄｒｅｐａｉｒｐｒｏｃｅｓｓａｆｔｅｒｅｎｄｏ．ｔｈｅｌｉａｌｉｎｊｕｒｙ．Ｔｈｅｒｅｃｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｅｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｈａｔｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓｓｈｏｕｌ‘ＪｂｅｒｅｌａｔｅｄｔｏＣｏｍｎａｒｙ ｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅｃｌｏｓｅｌｙａｂｏｕｔｉｔｓｇｅｎｅｓｉｓ．ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｔｈｅｒａｐｙ．ＥＰＣｐｒｅｏｖｉｄｅｓ ａ ｎｅｗｉｄｅａｓｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｃｏｒｏｎａｒｙｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｅｄｔｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｆｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌｓｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ；Ｉｓｅｈｅｍｉｅｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ；Ｔｈｅｒａｐｙ：Ｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ 缺血性心脏病（ｉｓｅｈｅｍｉｃｈｅａｒｔｄｉｓｅａｓｅ，ＩＨＤ）是由 于冠状动脉循环改变引起冠状动脉血流和心肌需求 之间不平衡而导致的心肌损害，在急性缺血时，心肌 细胞在短时间内大量凝固性坏死；慢性长期血供不 足使心肌组织发生营养障碍和萎缩，残余的心肌细 胞无法莺建坏死的组织，心脏功能随着时间进行性 恶化，其中最常见的原因是冠心病，约占９０％。ＩＨＤ 是严重危害居民健康的多发病和常见病，是慢性心 力衰竭的主要原因，传统的治疗手段主要是重建血供，而不能修复损伤和坏死心肌。近几年兴起的干细胞移植治疗ＩＨＤ不仅可以再生血管，而且可以再生心肌，使人们看到了新的希望。血管内皮前体细胞或血管内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉ－ｔｏｒｃｅｌｌ。ＥＰＣ）是成熟血管内皮细胞的前体细胞，能够特异性归巢于血管新生组织并分化为血管内皮细胞，属于干细胞群体，既可自我更新 又能定向分化为成熟的血管内皮细胞，参与血管再 生和损伤血管的再内皮化，还可在一定条件下分化 为心肌细胞，具有重要的生理和病理意义，也为缺血 性心脏疾病的治疗提供了新策略…。 １ＥＰＣ概述 １．１ＥＰＣ的来源胚胎期第１３～１５天，胚外造血 启动，卵黄囊的胚外中胚层的一些间充质细胞逐渐 聚集成条索或团块状，形成血岛。这些细胞团结构 进一步出现腔隙化改变，聚集在细胞群中央的细胞…㈨㈨………州 万方数据
血管内皮细胞（endothelial cell, EC）体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈“鹅卵石样”镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。
毛细血管（二） 毛细血管（capillary）是管径最细，分布最广的血管。它们分支并互相吻合成网（图8－8）。各器官和组织内毛细血管网的疏密程度差别很大，代谢旺盛的组织和器官如骨骼肌、心肌、肺、肾和许多腺体，毛细血管网很密；代高血压较低的组织如骨、肌腱和韧带等，毛细血管网则较稀疏。 图8-8 人胃粘膜血管铸型扫描电镜像示毛细血管网 （一）毛细血管的结构 毛细血管管径一般为6～8μm，血窦较大，直径右达40μm。毛细血管管壁主要由一层内皮细胞和基膜组成。细的毛细血管横切面由一个内皮细胞围成，较粗的毛细血管由2～3个内皮细胞围成。内皮细胞基膜外有少许结缔组织。在内皮细胞与基膜之间散在有一种扁而有突起的细胞，细胞突起紧贴在内皮细胞基底面，称为周细胞（pericyte）（图8－9，8－10）。周细胞的功能尚不清楚，有人认为它们主要起机械性支持作用；也有人认为它们是未分化的细胞，在血管生长或再生时可分化为平滑肌纤维和成纤维细胞。 图8-9 毛细血管扫描电镜像示周细胞 P 周细胞胞体 1、2周细胞突起
图8-10 毛细血管电镜像 左图连续毛细血管，中图有孔毛细血管，右图毛细血管扫描电镜像示内皮孔 E 内皮细胞，P周细胞，↑内皮细胞孔 (二)毛细血管的分类 光镜下观察，各种组织和器官中的毛细血管结构相似，但在电镜下，根据内皮细胞等的结构特点，可以将毛细血管分为三型。 1．连续毛细血管连续毛细血管（continuous capillary）的特点为内皮细胞相互连续，细胞间有紧密连接等连接结构，基膜完整，细胞质中有许多吞饮小泡。连续毛细血管分布于结缔组织、肌组织、肺和中枢神经系统等处。肺和中枢神经系统内的毛细血管内皮细胞甚薄，含吞饮小泡较少（图8－10）。 2．有孔毛细血管有孔毛细血管（fenestrated capillary）的特点是，内皮细胞不含核的部分很薄，有许多贯穿细胞的孔，孔的直径一般为60～80nm（图8－10）。许多器官的毛细血管的孔有隔膜封闭，隔膜厚4～6nm，较一般的细胞膜薄。内皮细胞基底面有连续的基板。此型血管主要存在于胃肠粘膜、某些内分泌腺和肾血管球等处。肾血管球的内皮细胞的孔没有隔膜。 3．血窦血窦（sinusoid）或称窦状毛细血管（sinusoid capillary），管腔较大，形状不规则，主要分布于肝、脾、骨髓和一些内分泌腺中。血窦内皮细胞之间常有较大的间隙，故又称不连续毛细血管（discontinuous capillary）。不同器官内的血窦结构常有较大差别，某些内分泌腺的血窦，内皮细胞有孔，有连续的基板；有些器官如肝的血窦，内皮细胞有孔，细胞间隙较宽，基板不连续或不存在。脾血窦又不同于一般血窦，其内皮细胞呈杆状，细胞间的间隙也较大。 （三）毛细血管与物质交换 毛细管是血液与周围组织进行物质交换的主要部位。人体毛细血管的总面积很大，体重60kg的人，毛细血管的总面积可达6000m2。毛细血管管壁很薄，并与周围的细胞相距很近，这些特点是进行物质交换的有利条件。 物质透过毛细血管壁的能力称毛细血管通透性（capillary permeability）。毛细血管结构与通透性关系的研究表明，内皮细胞的孔能透过液体和大分子物质，吞饮小泡能输送液体，细胞间隙则因间隙宽度和细胞连接紧密程度的差别，其通透性有所不同。基板能透过较小的分子，但能阻挡一些大分子物质。另外一些物质，如O2、CO2和脂溶性物质等，可直接透过内皮细胞的胞膜和胞质。
?１１４? ?综述? ！随废匡堂！Ｑ塑生！！旦箜垫鲞笙１２期￡！型型丛型丝些：旦竺：２Ｑ塑：！！！：垫：盥垒！兰血管内皮祖细胞与冠心病的研究进展 严卓综述李结华审校 （安徽医科大学第一附属医院干部心内科，合肥２３００２２） 冠心病（ＣＨＤ）是现代社会严莺威胁人类健康的主要疾病之一，其病死率极高。内皮细胞的损伤与ＣＨＤ的发生发展关系密切。血管内皮祖细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＥＰＣｓ）作为内皮细胞的前体细胞，在组织缺血及血管损伤时动员入血，参与微血管的生成及血管内皮的修复，在冠心病发生及发展过程中起着非常莺要的作用。现就｜ＩＩＬ管内皮祖细胞的生物学特性、与冠心病相互关系的研究进展及目前存在的问题综述如下。 ｌＥＰＣｓ的定义及其生物学特性 １．１ＥＰＣｓ的起源与分化：血管祖细胞是指能产生成熟的、有功能的血管壁细胞和前体细胞群，主要包括内皮祖细胞（ＥＰＣｓ）、平滑肌祖细胞（ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｓ，ＳＭＰＣ）、造血干细胞（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｅｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＨＳＣ）、间充质干细胞（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＭＳＣ）和其他来源的前体细胞‘“。ＥＰＣｓ是一群在胚胎发育过程中，发源于中胚层、发源部位邻近并具有发育和分化为外周血细胞和血管壁细胞功能的细胞群‘“。１９９７年，Ａｓａｈａｒａ等报道ｆ自成人体内分离纯化的ＣＤ３４＋的造血祖细胞可在体外培养分化成内皮细胞表型．表达内皮细胞标记并整合进缺血部位的新生皿管中，这些细胞即为ＥＰＣｓ。在体外，ＥＰＣｓ能吸收乙酰化低密度脂蛋白，结合荆豆凝集素（ｕｌｅｘｅｕｒｏｐｅａｓｌｅｃｔｉｎ）形成毛细血管管腔样结构；在体内，ＥＰＣｓ能募集、归巢到血管损伤区，分化为内皮细胞，促进血管再生。 １．２ＥＰＣｓ的分离、表面标记和体外诱导分化：ＥＰＣｓ主要集中在骨髓，同时在外周血及胎肝、脐带血中亦有存在。日前，用于ＥＰＣｓ的体外分离纯化的方法有两种。包括密度梯度离心法和免疫磁珠分选法。对于ＥＰＣｓ的表型特征尚存在诸多争议：最初内皮祖细胞被定义为既有造血细胞的标记如ＣＤ３４，又有内皮细胞的标记如血管内皮生长因子受体一２（ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ一２，ＶＥＧＦＲ一２）的一群幼稚细胞，随着细胞的分化，幼稚细胞的特征（ＣＤ３４）会逐渐消失。取而代之的是内皮细胞的表型特征。骨髓中的ＥＰＣｓ进入外周血后会逐渐丧失ＣＤｌ３３抗原而ＣＤ３４和ＶＥＧＦＲ一２表犁仍可呈阳性，而且还表现出血管内皮细胞钙粘素、ＣＤ３１、血管性血友病因子（ｖＷＦ）、内皮一氧化氮合酶（ｅＮＯＳ）及Ｅ选择素以及结合乙酰化低密度脂蛋白胆固醇的阳性特征。随后进一步的研究发现，ＣＤｌ３３在成熟内皮细胞以及单核细胞不表达，由此可见，ＣＤｌ３３＋／ＶＥＧＦＲ＋的细胞町能更能反映内皮祖细胞，但至今的研究尚未发现ＥＰＣｓ失去ＣＤｌ３３标志的准确时间和机制。，同时有研究证明．造血千细胞以外的其他细胞群也有分化为内皮细胞，并形成内皮样结构的能力，如脂肪组织来源的于细胞，以及神经干细胞在特定环境下能分化为内皮细胞，并拥有促进血管新，圭的潜能…。所以，目前尚难定义一种“真正”的内皮祖细胞。 有研究发现｜４１，ＥＰＣｓ有迟发性高增殖能力，体外培养时ＥＰＣｓ的扩增能力是１０００倍，而成熟的内皮细胞仅为２０倍。成熟微血管内皮细胞在体外能很快进入增殖期。但４～６周后增殖活力即逐渐下降。与此相反，外周血、胎肝、骨髓来源的ＥＰＣｓ细胞在１５—２０ｄ后形成迅速生长的鹅卵石样内皮细胞层，并能稳定传代３０次以上，其增殖潜能是脐静脉内皮细胞的ｌｏ倍。ＥＰＣｓ在ＶＥＧＦ、粒细胞集落刺激因子（Ｇ—ＣＳＦ）等趋化因子的作用下能归巢到缺血组织参与新生血管形成。ＥＰＣｓ作为血管内皮的前体细胞。也具有与成熟血管内皮细胞相似的特性，如能表达内皮系特异性抗原，能摄入乙酰化低密度脂蛋白并能与荆豆凝集素反应，在体外培养７～１０ｄ的内皮祖细胞成纺锤形内皮细胞样并町成典型的铺路石样形态特征，能分泌维持正常血管功能的活性物质，作为组织工程再生内皮化的种子细胞具有良好的血液相容性．能分泌抗血栓形成的生物活性物质。 １．３ＥＰＣｓ的动员、迁移、归巢：ＥＰＣｓ在骨髓分化完成后，经过动员经血液循环到达损伤部位并分化为成熟的内皮细胞，参与损伤部位内皮的修复和新生血管的生成，这一过程被称为ＥＰＣｓ的动员，确切机制尚不清楚。研究表明，如ＶＥＧＦ、Ｇ—ＣＳＦ、粒一巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ—ＣＳＦ）、干细胞因子（ＳＣＦ）和基质细胞衍牛因子一ｌ（ＳＤＦ一１）等细胞因子在ＥＰＣｓ的动员、归巢和分化中发挥重要的作用Ｈ１。ＥＰＣｓ的分化与粘附分子、粘附后细胞间的相互作用及微环境有密切关系。有研究指出，Ｃ一反庇蛋白可抑制ＥＰＣｓ的分化。用Ｃ一反应蛋白处理ＥＰＣｓ，可通过抑制ｅＮＯＳｍＲＮＡ的表达，显著抑制ＥＰＣｓ的分化，并加速其凋亡冲Ｊ。基质细胞衍生因子ＳＤＦ—ＩＯａ与ＥＰＣＳ表面的趋化子受体ＣＸＣＲ一４结合，在ＥＰＣｓ的归巢中也发挥重要作用“。血管紧张素Ⅱ受体阻断剂能增加２型糖尿病患者循环中再生ＥＰＣｓ数目，可能有助于保护心血管系统。“，另外，体内缺血、血管损伤可动员骨髓中的ＥＰＣｓ，使其向外周循环迁移，并分化为成熟内皮细胞，促进形成新牛血管，缓解组织缺血和修复血管损伤。Ｓｈｉｎｔａｎｉ等的研究也支持这个结论。 １．４ＥＰＣｓ的功能和病理生理意义：胚胎血管有丽个过程发育，即血管发生和血管生成。血管发生是指中胚层衍生的血管母细胞在发育胚胎中形成原始血管网，血管生成是指从已存在的血管中生长出新的毛细血管。最初的学者认为成人血管仅由血管新生来维持和修复，但ＥＰＣｓ的发现提示在成人也存在血管发生。有研究证实，在新生血管中有约２５％的内皮细胞有ＥＰＣｓ增殖分化而来一ｊ。同时有研究指出，ＥＰＣｓ不仅参与生理性血管形成，而且在多种病理状态下也能被动员入外周循环，增强代偿性血管重建并参与肿瘤血管的生成，如在非小细胞肺癌中发现（＇Ｄ１３３（＋）ＥＰＣｓ参与其血管生成，促进肿瘤生长。 ２ＥＰｃｓ与冠心病 ２．１冠心病患者内皮细胞的变化：研究证实¨…，冠心病发生 万方数据
血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展 摘要：血管内皮细胞（VEC）功能与心血管疾病的发生和发展密切相关, 本文综述了血管内皮细胞合成与释放的一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ等多种生物活性物质及VEC功能紊乱与心血管疾病的关系，研究VEC功能与心血管疾病形成之间的相互关系将为心血管疾病的治疗提供新思路、新策略。 关键词：血管内皮细胞；一氧化氮；内皮素；血管紧张素Ⅱ；心血管疾病 现已证明VEC除了完成血液和组织液的代谢交换以外，还是机体最大的内分泌腺【1】，可以产生和分泌十余种生物活性物质，具有维持正常的血管张力、血液的正常状态和动态平衡等作用，并通过其屏障和分泌功能，影响着炎症反应的发生、发展，参与调节机体的免疫应答。VEC功能紊乱在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化（AS）等心血管疾病的发病过程中具有重要意义。 1血管内皮细胞功能【2】 VEC的功能极其重要和复杂。1维持血管内膜的光滑，防止血小板及白细胞粘附，防止有害物质侵入血管壁。2具有半透膜的作用，维持血液、组织液中物质的交换。3合成并释放多种生物活性物质，如一氧化氮（NO），PGI2,，内皮素（ET）等，调节血管张力，维持正常血压。4合成致栓及抗栓物质，维持其动态平衡，如肝素，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及血管性假血友病因子（vWF）等。5 合成胶
原基底膜及血管平滑肌保护层。6合成血管生长因子及血管紧张素转化酶（AEC）。7影响血管壁对脂蛋白等物质的代谢。 2血管内皮细胞功能的标志物质【3~5】 2.1 一氧化氮(NO)。NO由血管EC释放，EC以L一精氨酸和分子氧作为底物，在NO合酶作用下生成NO 继之进入邻近的平滑肌细胞，激活鸟苷酸环化酶分解GTP使c—GMP增加，导致血管平滑肌舒张。NO还有抑制血管平滑肌增殖、抗血小板聚集和抗血栓形成作用【 3.5】。基础状态下，EC作为血藏感受器，转化血液切变力的机械信号为化学剌激，促使NO释放，维持血管张力和血流量相对恒定。乙酰胆碱、5_羟色胺、P物质，缓激肽、凝血酶、腺苷、TXA2、组胺{细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子以及内毒素，都能促使NO释放。 2．2 PGI2。EC通过环氧化酶及前列环素合成酶途径代谢花生四烯酸产生PGI2，再通过第二信使cAMP发挥生物学效应。凝血酶、缓激肽、组胺，腺苷、高密度脂蛋白、TXA2、白三烯、血小板生长因子、组织缺氧和血流动力学应激等，促使EC释放PGI2。PGI2和NO 协同扩张血管，防止血小板聚集和抗血栓形成【5】。 2．3ET1988年Yanagisawa【6】从猪主动脉EC中分离提纯出21 个氨基酸组成的多肽,称内皮素。ET 受体中B型主要分布在EC,激活后可使EC释放NO、PGI2,但其舒血管效应常被A型受体兴奋所致平滑肌细胞强烈而持久的收缩所掩盖。有实验表明,给大鼠持续滴注ET1 后血液浓缩,微动脉和微静脉收缩,微循环血流量减少,血栓形成;
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