内皮抑素
内皮抑素(endostatin) 是目前作用最强、实验效果最好的肿瘤血管生
成抑制剂,近年来倍受关注,目前在美国已进行Ⅰ期和Ⅱ期临床试验,并有
可能成为新一代抗肿瘤药物。
1 内皮抑素的结构特点
内皮抑素是1997 年O’Reilly 等[1]从培养的小鼠内皮细胞瘤( EOMA) 上清中分离纯化的一种内源性血管生成抑制剂,为20 kd 分子量蛋白质。氨基酸序列分析显示:内皮抑素为胶原18 分子C 末端部分,共184 个氨基酸。在体液(血清、尿液) 中也可分离出天然内皮抑素分子。内皮抑素是胶原18 的降解产物,降解过程至少包括两步酶解,参与酶解的可能有弹性蛋白酶、
组织蛋白酶L 和基质金属蛋白酶[2] 。进一步晶体结构分析发现:内皮抑素结构表面有一由11 个精氨酸残基组成的碱性区域,为肝素结合位点,这解
释了内皮抑素对
肝素的高亲和力特性,也可能是通过该区域与血管生成因子竞争结合
肝素,起到抑制血管生成作用。但也有研究表明内皮抑素与血管壁的结合不
依赖于肝素结合位点,且与FGF - 2 无竞争性抑制作用[3] 。此外,在内皮
抑素序列中发现由其N 端第1 ,3 ,11 位3 个组氨酸及第76 位的天冬氨
酸残基组成的锌离子结合位点,锌与内皮抑素的N 端环绕形成一个二聚体
结构。最初认为内皮抑素与锌离子结合对其抗血管生成活性很重要,但后来通过基因修饰方法去除锌离子结合位点的研究表明,内皮抑素抑制内皮细
胞的迁移及肿瘤的生长并不依赖锌离子结合位点[4] 。
2 内皮抑素的生物学功能
2. 1 内皮抑素对血管内皮细胞的抑制作用内皮抑素能特异性抑制血管内皮细胞在bFGF 诱导下的增殖,抑制内皮细胞的迁移,诱导内皮细胞凋亡,但对非内皮细胞,如平滑肌细胞、3T3 成纤维细胞、Lewis 肺癌细胞等
均无抑制作用[5] 。Kim 等[6] 研究也证明,内皮抑素能抑制人脐静脉内皮细胞穿透人工基底膜的能力,且与抑制效果呈剂量依赖关系。
2. 2 内皮抑素对血管生成的抑制作用目前,多种实验都能证实内皮
抑素对生长的血管产生抑制作用,而对静止的血管组织不起作用。
O’Reilly 等[1] 通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM) 实验,用大肠杆菌或杆状病
毒表达的内皮抑素均显示出对鸡胚血管生成有明显抑制作用,且未见毒性
反应。Bloch 等[7]研究证明内皮抑素并不影响小鼠伤口愈合、伤口收缩、伤口感染及伤口上皮再生,但能减少肉芽组织的形成。Yin 等[8]将携带内
皮抑素基因的重组慢病毒注入由TNF 诱导的小鼠初期类风湿性关节炎的关
节内,结果显示内皮抑素可抑制关
节内血管生成及血管翳的形成,减缓类风湿性关节炎的进展。说明内皮抑素不仅可以抑制肿瘤血管新生,对病理性血管性炎症也有抑制作用。
2. 3 内皮抑素对肿瘤生长和转移的抑制作用国内外许多学者利用重组内皮抑素蛋白或通过内皮抑素基因治疗实验表明,内皮抑素对多种实体
瘤的生长和转移都能产生抑制作用。Bohen 用鼠重组内皮抑素几乎完全抑制小鼠Lewis 肺癌、黑素瘤、纤维素瘤、血管内皮瘤、肾细胞癌等原发灶肿瘤的生长,治疗6 周期后肿瘤进入休眠期,停药后肿瘤无复发,且未见转移灶发生,不产生耐药性。同时在细胞水平,也有实验证明内皮抑素能抑制肿瘤细胞在人工基底膜凝胶中的迁移[6] 。Perletti 等利用二甲基苯并蒽(DMBA) 诱发的大鼠乳腺癌动物模型, 连续4 周每天皮下注射内皮抑素
20mg/ kg ,使肿瘤停药后4 周仍处于休眠状态,表明内皮抑素对原发肿瘤也有明显抑制作用。
3 内皮抑素的作用机制
目前,内皮抑素抗血管生成治疗已经取得惊人的效果,但其作用机制尚未完全阐明,
其可能的作用机制主要有:
①通过下调β- 连环素(β- catenin) 的转录活性,抑制周期蛋白D1 的表达,引起内皮细胞G1 期阻滞[9] ;
②下调抗凋亡蛋白Bcl - 2 和Bcl - XL 的表达,诱导内皮细胞凋亡
[5] ;
③与基质金属蛋白酶2 前体蛋白(pro - MMP2) 结合形成稳定复合体,阻止pro - MMP2 的激活,并抑制MMP2 和MMP1 的催化活性,从而抑制内皮细胞的迁移[6] ;
④与原肌球蛋白结合,破坏微丝结构的完整性,使细胞运动功能丧失,
诱导凋亡[10] ;
⑤抑制c - myc 表达而抑制内皮细胞迁移;
⑥通过肝素结合位点与内皮细胞表面的接头蛋白Shb 受体的SH2 区域结合,激活酪氨酸激酶信号转导系统,导致内皮细胞G1期阻滞, 诱导内皮细胞凋亡;
⑦整合素α5β1 在调节bFGF 诱导的血管生成中起重要作用,内皮抑素可以和整合素α5β1 直接结合,影响内皮细胞同细胞外基质的黏附,抑制内皮细胞的迁移和生长[11] ;
⑧抑制VEGF 受体KDR/ Flk - 1 酪氨酸磷酸化,从而抑制VEGF 与内皮细胞的结合,抑制VEGF 诱导的细胞外信号调节激酶ERK活性[12] 。
4 内皮抑素抗肿瘤血管生成治疗的研究
4. 1 直接使用重组内皮抑素蛋白
目前重组内皮抑素基因工程表达系统主要有大肠杆菌表达系统、酵母表达系统、哺乳动物细胞表达系统等。大肠杆菌表达系统表达量高,但产物
多以包涵体形式存在,不可溶解,难以复性,造成应用不便,虽然经过蛋白重新折叠可溶,但此过程会损失大量蛋白。哺乳动物细胞的表达产物活性高,但是表达量低,难以纯化。而用酵母表达产量高,易于纯化,活性高,特别是毕赤酵母表达系统被广泛地应用于内皮抑素的表达,目前美国用于I期临床试验的内皮抑素就是毕赤酵母的表达产物。O’Reilly 等[1]利用大肠杆菌表达的内皮抑素注入荷瘤小鼠体内,2. 5 mg/ kg 使Lewis 肺癌移植瘤体积缩小53 % ,10 mg/ kg 则瘤体体积缩小97 % ,增至20 mg/ kg ,原发瘤几乎完全萎缩,而0. 3 mg/ (kg·d) 的内皮抑素就能完全抑制Lewis 肺癌转移灶的生长。
4. 2 通过载体转导内皮抑素基因
通过适当载体转导内皮抑素基因,使其在体内长期、稳定表达生物活性高的内皮抑素,有效地弥补了蛋白治疗的不足。已证实质粒、脂质体、腺病毒、逆转录病毒、腺相关病毒及慢病毒等都是有效的载体。相对非病毒载体,应用病毒载体转染后可获得更高的内皮抑素血浆浓度。Feld2man 等[13]将表达内皮抑素的腺病毒重组体经尾静脉注入MC38 腺癌小鼠体内,小鼠血浆内皮抑素浓度高达1 770 ng/ ml ,使相对不易感染腺病毒的MC38 腺癌抑制率仍达40 %。
4. 3 其他治疗方法
Joki 等[14] 将内皮抑素基因转导到某些细胞内,再将这种可分泌内
皮抑素的细胞用藻酸盐包裹成微胶囊,注入大脑内后细胞可抵御机体排斥
和组织中酶的消化,持续分泌一定有效浓度的内皮抑素,并有效地抑制了神经胶质瘤的生长。同样,通过微量泵持续给药的方法也能使体内内皮抑素的浓度保持稳定,抑瘤效果明显强于间断给药。国内学者徐根兴等[15]利用青春双歧杆菌作载体,将内皮抑素基因导入双歧杆菌后注入肿瘤小鼠尾静脉内,检验发现只在实体瘤中存在青春双歧杆菌,而其他正常组织未见青春双歧杆菌,同时也高效地抑制了肿瘤的生长和血管新生。而且他们还用转人内皮抑素基因双歧杆菌制成口服制剂,经多例晚期实体肿瘤志愿者临床试验
证明,其对肝癌、胃癌、肠癌、肺癌等实体肿瘤的治疗有较好的抑瘤效果。
5 问题与展望
内皮抑素从发现到进入目前Ⅱ期临床试验,短短数年时间,取得的进展令世人倍受鼓舞。实验表明内皮抑素特异性抑制血管内皮细胞作用肯定,对多种依赖血管生成的实体瘤都有抑制作用,且无耐药性和明显毒副作用,为肿瘤的临床治疗开辟了一条新路。随着内皮抑素作用机制的完全阐明,及如何大规模的生产、纯化高效有活性的重组内皮抑素蛋白,如何延长内皮抑素在体内的半衰期,如何选择安全高效的合适载体来进行基因治疗,如何正确地选择适应症和治疗对象等这一系列问题的解决,相信内皮抑素对肿瘤的
抗血管生成治疗将有更大的应用前景。
内皮抑素 内皮抑素(endostatin) 是目前作用最强、实验效果最好的肿瘤血管生 成抑制剂,近年来倍受关注,目前在美国已进行Ⅰ期和Ⅱ期临床试验,并有 可能成为新一代抗肿瘤药物。 1 内皮抑素的结构特点 内皮抑素是1997 年O’Reilly 等[1]从培养的小鼠内皮细胞瘤( EOMA) 上清中分离纯化的一种内源性血管生成抑制剂,为20 kd 分子量蛋白质。氨基酸序列分析显示:内皮抑素为胶原18 分子C 末端部分,共184 个氨基酸。在体液(血清、尿液) 中也可分离出天然内皮抑素分子。内皮抑素是胶原18 的降解产物,降解过程至少包括两步酶解,参与酶解的可能有弹性蛋白酶、 组织蛋白酶L 和基质金属蛋白酶[2] 。进一步晶体结构分析发现:内皮抑素结构表面有一由11 个精氨酸残基组成的碱性区域,为肝素结合位点,这解 释了内皮抑素对 肝素的高亲和力特性,也可能是通过该区域与血管生成因子竞争结合 肝素,起到抑制血管生成作用。但也有研究表明内皮抑素与血管壁的结合不 依赖于肝素结合位点,且与FGF - 2 无竞争性抑制作用[3] 。此外,在内皮 抑素序列中发现由其N 端第1 ,3 ,11 位3 个组氨酸及第76 位的天冬氨 酸残基组成的锌离子结合位点,锌与内皮抑素的N 端环绕形成一个二聚体 结构。最初认为内皮抑素与锌离子结合对其抗血管生成活性很重要,但后来通过基因修饰方法去除锌离子结合位点的研究表明,内皮抑素抑制内皮细 胞的迁移及肿瘤的生长并不依赖锌离子结合位点[4] 。 2 内皮抑素的生物学功能 2. 1 内皮抑素对血管内皮细胞的抑制作用内皮抑素能特异性抑制血管内皮细胞在bFGF 诱导下的增殖,抑制内皮细胞的迁移,诱导内皮细胞凋亡,但对非内皮细胞,如平滑肌细胞、3T3 成纤维细胞、Lewis 肺癌细胞等 均无抑制作用[5] 。Kim 等[6] 研究也证明,内皮抑素能抑制人脐静脉内皮细胞穿透人工基底膜的能力,且与抑制效果呈剂量依赖关系。 2. 2 内皮抑素对血管生成的抑制作用目前,多种实验都能证实内皮 抑素对生长的血管产生抑制作用,而对静止的血管组织不起作用。 O’Reilly 等[1] 通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM) 实验,用大肠杆菌或杆状病 毒表达的内皮抑素均显示出对鸡胚血管生成有明显抑制作用,且未见毒性 反应。Bloch 等[7]研究证明内皮抑素并不影响小鼠伤口愈合、伤口收缩、伤口感染及伤口上皮再生,但能减少肉芽组织的形成。Yin 等[8]将携带内 皮抑素基因的重组慢病毒注入由TNF 诱导的小鼠初期类风湿性关节炎的关 节内,结果显示内皮抑素可抑制关
外科分子生物学 Molecular Biology of Surgery 外科学发展历史，强调分子生物学对外科学发展的重要性以引起学习兴趣 History of Surgery 解剖外科学 Anatomy Surgery 病理外科学 Pathological Surgery 病理生理外科学 Patho-physiological Surg 细胞分子生物学外科学 Cell Molecular Biology of Surgery (CMBS) 外科细胞分子学定义和研究范围 Cell Molecular Surgery 从现代细胞分子生物学角度，以细胞分子生物学技术为手段研究外科疾病的病因、发病机制、诊断、治疗和预防 The science study on the etiology, mechanisms, diagnosis , treatment and prevention of the diseases using cell biology and molecular biology 问题 ? 肿瘤的发病机理是什么? ? 什么是基因重组药物? ? 什么是基因治疗? ? 同样是胃癌病人,为何化疗敏感性差异很大? 第一节 基因的结构与功能 Structure & Function of Gene 概念 基因:编码一条多肽链或一个RNA分子所必需的全部DNA序列。就是一个转录单位. Gene：DNA Fragment for coding a peptide molecule ( a trancript unit )
外显子 exon 内含子 intron 增强子 enhancer 启动子 promoter、沉寂子(silencer) 前导序列 5’ untranslated regions 5’UTR 终止序列 3’ untranslated regions 3’UTR 基因按其功能可分为： 结构基因：可被转录成mRNA，进而翻译成多肽链，构成各种结构蛋白质、酶和激素等。 调控基因:指某些可调节控制结构基因表达的基因 Classification of genes as its function: Structural gene Regular gene 基因组（genome）：细胞内所有的基因总和 结构基因（structural gene)：与成熟mRNA的5’和3’对应的基因区域基因表达gene expression：基因产生功能分子的过程 transcript into RNA and/or translate into protein 转录Transcription ：以DNA为模板合成mRNA的过程 翻译Translation：以mRNA为模板合成多肽链的过程 DNA复制Replication Gene Expression Transcription: RNA synthesis using a DNA-dependent RNA polymerase Translation: RNA directs Polypeptide synthesis 基因表达调控Regulation of Gene Expression 基因组水平：基因组结构改变 Genome: Genomic DNA structural change 转录水平:转录激活、转录延长
恩度(重组人血管内皮抑制素注射液) 【药品名称】 商品名称：恩度 通用名称：重组人血管内皮抑制素注射液 英文名称：Recombinant Human Endostatin Injection 【成份】 主要成分：重组人血管内皮抑制素，来源：大肠杆菌工程菌发酵产品，辅料：醋酸钠，冰醋酸，甘露醇。 【适应症】 本品联合NP化疗方案用于治疗初治或复治的Ⅲ/Ⅳ期非小细胞肺癌患者。 【用法用量】 本品为静脉给药，临用时将本品加入250～500 毫升生理盐水中，匀速静脉点滴，滴注时间3～4小时。与NP化疗方案联合给药时，本品在治疗周期的第1～14日，每天给药一次，每次7.5 毫克/m2（1.2x105U/m2），连续给药14天，休息一周，再继续下一周期治疗。通常可进行2～4个周期的治疗。临床推荐医师在患者能耐受的情况下可适当延长本品的使用时间。 【不良反应】 在Ⅰ～Ⅲ期临床研究中，共有470例晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者使用了本品，常见的药物不良反应（＞1/100,＜1/10）主要有心脏不良反应，少见的药物不良反应（＞1/1000,＜1/100）主要有消化系统反应、皮肤及附件的过敏反应。1.心脏反应：用药初期少数患者可出现轻度疲乏、胸闷、心慌，绝大多数不良反应经对症处理后可以好转，不影响继续用药，极个别病例因上述症状持续存在而停止用药。发生心脏不良反应的患者共有30例（6.38％），
主要表现为用药后第2～7天内发生心肌缺血，心脏不良反应均为Ⅰ、Ⅱ度或轻 【禁忌】 心、肾功能不全者慎用。 【注意事项】 1.过敏体质或对蛋白类生物制品有过敏史者慎用； 2.有严重心脏病或病史者，包括：有记录的充血性心力衰竭病史、高危性不能控制的心率失常、需药物治疗的心绞痛、临床明确诊断心瓣膜疾病、心电图严重心肌梗塞病史以及顽固性高血压者慎用。本品临床使用过程中应定期进行心电检测，出现心脏不良反应者应进行心电监护； 3.本品为无色澄明液体，如遇有浑浊、沉淀等异常现象，则不得使用。包装瓶有损坏、过期失效不能使用。【孕妇及哺乳期妇女用药】本品尚未在孕妇及哺乳期妇女中使用，也未进行动物生殖毒性研究，需要时应在医师严密观察下使用。【儿童用药】本品尚无儿童患者用药研究资料，确实需要用药时，应在医生指导下使用。【老年用药】对有严重心脏病史的老年肿瘤患者，应在医师严密观察下应用。 【特殊人群用药】 儿童注意事项： 本品尚无儿童患者用药研究资料，确实需要用药时，应在医生指导下使用。 妊娠与哺乳期注意事项： 本品尚未在孕妇及哺乳期妇女中使用，也未进行动物生殖毒性研究，需要时应在医师严密观察下应用。 老人注意事项： 对有严重心脏病史的老年肿瘤患者，应在医师严密观察下应用。 【药物相互作用】
血管内皮抑制素(Endostatin)和衍 生物(中国商品名:恩度) (一)血管内皮抑制素的发现 1997年，Folkman等首先报道从小鼠血管内皮细胞瘤中得到一种具有抑制血管生成的因子，经N端氨基酸序列测定表明，该物质为ⅩⅧ型胶原C-末端的184个氨基酸片段，被命名为血管内皮抑制素(Endostatin，ES)。人体血液循环中有极微量Endostatin存在。O’Reilly等(1997年)利用重组后并纯化的Endostatin进行体外试验，证明Endostatin对牛毛细血管内皮细胞、牛肺主动脉内皮细胞有特异的抑制增殖作用，而对非血管内皮细胞系细胞、平滑肌细胞等则无增殖抑制作用。随后又进行了体内药效学试验，证明Endostatin可抑制鸡胚绒毛尿囊膜毛细血管的生长，对接种Lewis肺癌、T 241纤维肉瘤和B16F10黑素瘤的小鼠具有明显的肿瘤抑制作用。免疫组化的实践表明，Endostatin能阻断血管生成。Michael等(1997年)实验显示，血管内皮抑制素是通过抑制肿瘤新生血管的形成从而对原发和转移瘤均表现极强的特异的抑瘤活性;并且动物实验中发现反复使用内皮抑制素也不会产生耐药性。
Entre Med公司于1998年10月至2000年7月在美国的3个癌症中心进行了重组人血管内皮抑制素的Ⅰ期临床试验。我国山东先声麦得津生物工程有限公司首家开发了Endostatin(Jia等，2006年)，商品名为“恩度”。与国外产品不同的是，Entre Med公司采用的是酵母菌作为表达载体，而恩度是采用大肠埃希菌，且在ES母体上添加了9个氨基酸的新型Endostatin，不仅使ES稳定性提高，半衰期延长，而且生物活性增加，纯度> 99.9%，蛋白性质稳定，可以在室温放置1年仍然保持活性，而国外的同类产品则需-80℃冷冻保存。 (二)血管内皮抑制素的作用原理 Hajitou等(2002年)研究显示，Endostatin能下调VEGF mRNA和蛋白表达，作用于VEGF的受体KDR/Flk-1，从而抑制VEGF 介导的内皮细胞迁移和血管生成。Endostatin还与bFGF竞争结合，干扰其信号传导通路。 基质金属蛋白酶MMP-2在血管生成中发挥重要作用，Endostatin能结合MMP-2 的催化活性区，阻断其作用。 Endostatin能结合于Tropomyosin，破坏微丝的完整性，抑制内皮细胞的迁移，诱导其凋亡，发挥抗肿瘤作用。 Endostatin能抑制Wnt信号通路，促进α-catenin的降解，抑制内皮细胞移动，导致内皮细胞停滞在G1期，减少内皮细胞在S期的比例，从而引起细胞周期停滞。
. 精品 重组人血管内皮抑制素的注意事项 来源： 百济药房药讯 作者：百济动态 浏览：99 发布时间：2012-9-1 7:18:00 药品图片 药品名称 及通用名 生产厂家及规格 价格及优惠 恩度 重组人血管内皮抑制素注射液 山东先声麦得津生物制药有限公司 规格：15mg/3ml/支(2.4×105 U/支）/支 百济会员价：950元 导读：重组人血管内皮抑制素在2004年8月，III 期临床研究获得满意的试验结果，历时9年、耗资1亿的国家一类新药重组人血管内皮抑制素(ENDOSTAR)终于研发成功，标志着我国在血管抑制剂类抗肿瘤药物研发领域已经走在世界前列。 重组人血管内皮抑制素是麦得津生物工程股份有限公司和清华大学联合研制成功的新药，公司科研主力由留学美国的博士团队组成。通过创造性地对Endostatin 进行改构，成功攻克了Endostatin 蛋白复性这一世界性技术难题，不仅稳定性提高，半衰期延长。2004年8月，III 期临床研究获得满意的试验结果，历时9年、耗资1亿的国家一类新药重组人血管内皮抑制素(ENDOSTAR )终于研发成功，标志着我国在血管抑制剂类抗肿瘤药物研发领域已经走在世界前列。 重组人血管内皮抑制素的注意事项： 1.过敏体质或对蛋白类生物制品有过敏史者慎用； 2.有严重心脏病或病史者，包括：有记录的充血性心力衰竭病史、高危性不能控制的心率失常、需药物治疗的心绞痛、临床明确诊断心瓣膜疾病、心电图严重心肌梗塞病史以及顽固性高血压者慎用。重组人血管内皮抑制素临床使用过程中应定期进行心电检测，出现心脏不良反应者应进行心电监护； 3. 重组人血管内皮抑制素为无色澄明液体，如遇有浑浊、沉淀等异常现象，则不得使用。包装瓶有损坏、过期失效不能使用。 百济药师温馨提醒：重组人血管内皮抑制素用法用量： 重组人血管内皮抑制素为静脉给药，临用时将重组人血管内皮抑制素加入250～500 ml 生理盐水中，匀速静脉点滴，滴注时间3～4小时。与NP 化疗方案联合给药时，重组人血管内皮抑制素在治疗周期的第1～14日，每天给药一次，每次7.5 mg /m2（1.2×105U/m2），连续给药14天，休息一周，再继续下一周期治疗。通常可进行2～4个周期的治疗。医师在患者能耐受的情况下可适当延长重组人血管内皮抑制素的使用时间。
重组人内皮抑制素抑制血管内皮细胞迁移研究 发表时间：2009-06-05T14:04:42.013Z 来源：《中外健康文摘》2009年1月第1期供稿作者：张海青 [导读] 癌症是危害人类健康的重大疾病，为继心脑血管疾病后的我国第二大疾病。 【摘要】获得rhEndostatin后，我们从体外研究其生物学活性并对它进行客观评价。在体外，rhEndostatin对内皮细胞HMEC、HUVEC 迁移都有明显的抑制作用。 【关键词】重组人内皮抑制素酵母抑制作用 癌症是危害人类健康的重大疾病，为继心脑血管疾病后的我国第二大疾病。目前治疗癌症的方法放疗、化疗、手术对患者毒副作用比较大，不能改善生存条件，因而研究开发有效的、毒性低的新抗癌药势在必行。以往肿瘤治疗均以肿瘤细胞为靶，但肿瘤细胞基因具有不稳定性，易突变，因此对化疗药物容易产生耐药性，常招致治疗失败。RhEndostatin作为血管抑制剂是以血管内皮细胞为靶向，内皮细胞具有相对稳定性，不易产生耐药性，因而抗血管生成剂必将在治疗肿瘤方面有广阔的前景。本文从体外初步研究rhEndostatin的体外生物学活性并对它进行客观评价，为将来的人体临床实验奠定了理论基础。 应用细胞株进行药物筛选和评价是新药开发研究的一个重要手段。我们将通过rhEndostatin对迁移行为的影响来评价其体外生物学活性。我们选用具有代表性的2种血管内皮细胞来进行 rhEndostatin体外生物学活性研究。它们的名称、类别、种属、类型、培养基、特征如下表1： 表1. 细胞介绍 Table 1. Cell introduction 内皮 HMEC 血管内皮细胞人源贴壁 DMEM +10%FBS 传代 细胞 HUVEC 脐静脉内皮细胞人源贴壁 ECM +5%FBS+ECGS 原代 1 实验原理 内皮细胞有迁移特性，在迁移膜上表面的内皮细胞可以通过迁移膜上8 μm的小孔迁移到迁移膜下表面并贴壁生长。文献报道血管抑制剂药物——rhEndostatin有抑制内皮细胞迁移的作用。去除迁移膜上表面的细胞，通过固定染色可以在显微镜下数出已迁移膜下表面的细胞。根据rhEndostatin抑制迁移细胞数量的多少来评价其生物学活性。 2 试剂与材料 细胞培养基：高糖DMEM 培养基，购自美国GIBCO BRL公司产品；ECM、FBS、ECGS、P/O Solution，均购自美国Sciencell公司； 图5 rhEndostatin抑制HMEC和HUVEC显微镜下观察照片 Fig.5 Effect of rhEndostatin on HMEC and HUVEC migration A：HMEC（NS）；B：HMEC（1000μg/ml）；C：HUVEC （NS）；D：HUVEC（1000μg/ml） 5 小结 EC50为160.8μg/ml；对内皮细胞HMEC、HUVEC迁移都有明显的抑制作用，其EC50分别是10.5、1.7μg/ml，二者有显著差异 （P<0.01）。 参考文献 [1] Wang YS, Eichler W, Friedrichs U, et al. Impact of endostatin on bFGF-induced proliferation, migration, and matrix metalloproteinase- 2 expression/se cre tion of bo vine choroidal endothelial cells. Curr Eye Res. 2005 ,30(6):479-89. [2] Delaney CE, Weagant BT, Addison CL. The in hib i to ry effects of endostatin on endothelial cells are mod u lat ed by extracellular matrix. Exp Cell Res. 2006,312(13):2476-89. [3] 李风琴, 周玲,苏黎红等. 重组人血管内皮抑制素对荷瘤裸小鼠的治疗作用. 山东生物医学工程,2002,2. [4] Sim BK.Angiostatin and endostatin: en dot he lial cell-specific endogenous inhibitors of angiogenesis and tumor growth. Angiogenesis. 1998;2(1):37-48. [5] Liang ZH, Wu PH, Li L, et al. Inhibition of tumor growth in xenografted nude mice with adenovirus-mediated endostatin gene comparison with recombinant endostatin protein. Chin Med J (Engl). 2004 ,17(12):1809-14. [6] 周志伟,万德森,林素暇等。血管生成抑制剂YH-16联合氟尿嘧啶抑制结直肠癌肝转移的研究.中华胃肠外科杂志, 2006,9（2）: 161-164.
重组人血管内皮抑制素的注意事项 导读：重组人血管内皮抑制素在 2004年8月，山期临床研究获得满意的试验结果，历时 9年、耗资1亿的国家一类新药重组人血管内皮抑制素 (ENDOSTAR)终于研发成功，标志着 我国在血管抑制剂类抗肿瘤药物研发领域已经走在世界前列。 重组人血管内皮抑制素是麦得津生物工程股份有限公司和清华大学联合研制成功的新 药，公司科研主力由留学美国的博士团队组成。通过创造性地对 Endostatin 进行改构，成功 攻克了 Endostatin 蛋白复性这一世界性技术难题，不仅稳定性提高，半衰期延长。 2004年8 月，111期临床研究获得满意的试验结果，历时 9年、耗资1亿的国家一类新药重组人血管 内皮抑制素(ENDOSTAR )终于研发成功，标志着我国在血管抑制剂类抗肿瘤药物研发领域已 经走在世界前 列。 重组人血管内皮抑制素的注意事项: 1.过敏体质或对蛋白类生物制品有过敏史者慎用; 2.有严重心脏病或病史者，包括：有记录的充血性心力衰竭病史、高危性不能控制的心率失 常、需药物治疗的心绞痛、临床明确诊断心瓣膜疾病、心电图严重心肌梗塞病史以及顽固性 高血压者慎用。重组人血管内皮抑制素临床使用过程中应定期进行心电检测， 出现心脏不良 反应者应进行心电监护； 3.重组人血管内皮抑制素为无色澄明液体，如遇有浑浊、沉淀等异常现象，则不得使用。 包装瓶有损坏、过期失效不能使用。 百济药师温馨提醒：重组人血管内皮抑制素用法用量： 重组人血管内皮抑制素为静脉给药，临用时将重组人血管内皮抑制素加入 250?500 ml 生 理盐水中，匀速静脉点滴，滴注时间 3?4小时。与NP 化疗方案联合给药时，重组人血管 内皮抑制素在治疗周期的第 1?14日，每天给药一次，每次 7.5 mg /m2 (1.2 >105U/m2 ), 连续给药14天，休息一周，再继续下一周期治疗。 通常可进行2?4个周期的治疗。医师在 患者能耐受的情况下可适当延长重组人血管内皮抑制素的使用时间。 来源： 百济药房药讯 作者：百济动态 浏览：99 发布时间：2012-9-1 7:18:00 药品图片药通名名及 通用名 生产厂家及规格 价格及优惠 恩度 重组人血管 内皮抑制素 I 注射液 山东先声麦得津生 物制药有限公司 规格：15mg/3ml/ 支 (2.4 W5 U/支)/支 百济会员价：950 元